Диссертация Адамчика Р.А
реклама
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «МОРДОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени Н.П. ОГАРЁВА» На правах рукописи АДАМЧИК Руслан Александрович ОБОСНОВАНИЕ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАРОДОНТИТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ТЕЧЕНИЯ Специальность: 14.03.03 – патологическая физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор А.П. Власов Научный консультант: доктор биологических наук профессор В.А. Трофимов Саранск, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ .......................................................................................................... 5 ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................... 10 ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ......................... 30 ГЛАВА 3 РОЛЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО ПАРОДОНТИТА ................ 38 3.1. Исследование распространенности полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов при пародонтите ..................................... 38 3.2. Изучение особенностей полиморфизма С47Т гена SOD2 в зависимости от тяжести заболевания ..................................................... 42 ГЛАВА 4 ДИНАМИКА СОСТОЯНИЯ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА И ЛИПИДМОДИФИЦИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕКСИДОЛА В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАРОДОНТИТА У ПАЦИЕНТОВ БЕЗ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ ........................ 45 4.1. Генетические особенности кодирования антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести первой контрольной и третьей основной групп ..................... 45 4.2. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов первой контрольной группы .................................................................... 45 Норма.......................................................................................................... 46 4.3. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов первой контрольной группы ................................... 49 4.4. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола.................. 53 Норма.......................................................................................................... 54 4.5. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола ................................................................................................... 56 ГЛАВА 5 ............................................................................................................ 60 ДИНАМИКА СОСТОЯНИЯ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА И ЛИПИДМОДИФИЦИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕКСИДОЛА В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАРОДОНТИТА У ПАЦИЕНТОВ С ГЕНЕТИЧЕСКИМИ ОСОБЕННОСТЯМИ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ ......................... 60 2 5.1. Генетические особенности кодирования антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести второй контрольной и четвертой основной групп.................. 61 5.2. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов первой контрольной группы .................................................................... 61 Норма.......................................................................................................... 62 5.3. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов второй контрольной группы ................................... 65 5.4. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола.................. 69 Норма.......................................................................................................... 70 5.5. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов четвертой основной группы на фоне применения мексидола ................................................................................................... 72 ОБСУЖДЕНИЕ ................................................................................................. 78 ВЫВОДЫ ........................................................................................................... 90 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ........................................................... 91 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................ 92 3 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Ig А - Иммуноглобулин А АСЗ - Антиоксидантная система защиты АФК - Активные формы кислорода БАВ - Биологически активные вещества ВЗП - Воспалительные заболевания пародонта МДА - Малоновый диальдегид НЖК - Ненасыщенные жирные кислоты ПБ - Патогенные бактерии ПМ - Патогенные микроорганизмы ПОЛ – Перекисное окисление липидов СР - Свободные радикалы СРО - Свободнорадикальное окисление СЭИ - Синдрома эндогенной интоксикации ФКС - Фагоцитарная клеточная система ФЛА2- Фосфолипаза А2 ХГП - Хронический генерализованный пародонтит ЭА – экспрессивная активность 4 ВВЕДЕНИЕ Актуальность Заболеваемость пародонтитом в России неуклонно растет. Между тем до настоящего времени терапия этой патологии не может считаться достаточно эффективной, что и обусловливает длительность лечения и высокую степень рецидивов (Жулев Е.Н., 2003; Цепов Л.М, 2006). Не вызывает сомнения факт, что одной из причин указанного являются неполные знания патогенеза заболевания (Гажва С.И. и др., 2011; Захаркин А.Г., 2013). В настоящее время многими исследованиями показано, что одним из ведущих механизмов острого или хронического воспаления является свободно-радикальный процесс перекисного окисления липидов, активизация которого на фоне истощения антиоксидантного потенциала приводит к мембранодестабилизирующим явлениям – одному из основных триггеров развития и прогрессирования патологии (Владимиров Ю.А., 2002; Грудянов А. И. и др., 2002; Ипатова О.М., 2005; Власов А.П. и др., 2012). Хронический пародонтит не является исключением. В литературе встречаются многочисленные работы, указывающие на высокую значимость свободно-радикальных реакций в патогенезе этой тяжелой патологии пародонта (Трегубов И.Д., 2000; Цепов Л.М., 2006; Fernandes L.A., 2009). На основе комплексной этих знаний предложены многочисленные схемы терапии, необходимым компонентов которых являются препараты антиоксидантного типа действия. Применение такого рода схем патогенетической терапии привело к значительным успехам в лечении хронического пародонта, на что указывают клинико-лабораторные данные (Адамчик А.В. и др., 2003; Брагина С.Ю., 2005; Гасанова З.М., 2011). Положительные результаты лечения подтвердили высокую значимость процессов перекисного окисления липидов в патогенезе патологии. Однако 5 успехи комплексной терапии с антиоксидантами хронического пародонтита не могут считаться полностью удовлетворительными. При применении антиоксидантов коррекция процессов перекисного окисления липидов в плазме крови, слюне и тканях пародонта корригируется не полностью (Прытков В.А., 2010; Захаркин А.Г., 2012). Безусловно, это в первую очередь связано с эффективностью антиоксидантов. На сегодняшний день медицина не располагает антиоксидантами, которые могли бы снижать интенсивность перекисного окисления липидов до физиологической нормы (Власов А.П. и др., 2012). Но с другой стороны, научные данные последних лет свидетельствуют о том, что развитие и прогрессирование заболевания во многом связано с полиморфизмом генов (Максимовский Ю.М. и др., 2006; Царев В.Н. и др., 2011; Сафанова А.В. и др. 2011). Изучение молекулярных механизмов на генетическом уровне позволит глубже вскрыть патогенез пародонтита, что вооружит медиков знаниями, которые позволят пересмотреть патогенетические схемы терапии (Зорина О.А., Борискина О.А., 2012). Одним из недостаточно изученных вопросов в этом разделе является установление связи свободно-радикальных реакций перекисного окисления липидов с полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов. Этому важному вопросу патологической физиологии и посвящена настоящая работа. Цель работы. Определение сопряженности оксидативного стресса в ассоциации с полиморфизмом воспалительным процессом генов антиоксидантных пародонта, на основе ферментов с чего выделение патогенетических вариантов течения хронического пародонтита и разработка целесообразных схем его терапии. Основные задачи: 1. Определить частоту встречаемости полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатион-Sтрансферазы у больных хроническим пародонтитом. 6 2. Установить сопряженность полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов с выраженностью перекисного окисления липидов плазмы крови, слюны и воспалительным процессом в ткани пародонта. 3. На основе данных полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов и интенсивности перекисного окисления липидов выделить патогенетические группы больных хроническим пародонтитом. 4. Установить патогенетические эффекты антиоксиданта мексидола в лечении хронического пародонтита в зависимости от вариантов его течения. Научная новизна Впервые изучена частота встречаемости патологических аллелей генов супероксиддисмутазы (SOD2), каталазы и глутатион-S-трансферазы в геномах больных хроническим генерализованным пародонтитом и определен их вклад в развитие патологического процесса в ткани пародонта. Показана ассоциация с риском развития пародонтита полиморфизма Ala16Val гена SOD2. У больных хроническим пародонтитом установлена сопряженность полиморфизма Ala16Val гена SOD2 с интенсивностью перекисного окисления липидов плазмы крови и слюны. Впервые на основе данных по полиморфизму генов антиоксидантных ферментов (на примере митохондриальной супероксиддисмутазы) и интенсивности перекисного окисления липидов плазмы крови выделены две группы больных хроническим пародонтитом: первая – с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканевых структурах пародонта; вторая – со сравнительно большей толерантностью тканей пародонта к липопероксидации. Установлена клинико-лабораторная эффективность антиоксидантной терапии мексидолом в группе больных с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканевых структурах пародонта. 7 Выявлена сравнительно низкая клинико-лабораторная результативность антиоксидантной терапии в группе больных с высокой толерантностью тканей пародонта к липопероксидации. Практическая значимость Разделение больных хроническим генерализованным пародонтитом на две группы в зависимости от маркерного полиморфизма гена SOD2 и интенсивности перекисного окисления липидов плазмы крови и слюны позволяет разработать принципиально новую стратегию в лечении этой патологии на основе антиоксидантной терапии. Положения диссертации, выносимые на защиту 1. Высокий риск развития хронического пародонтита обусловлен наличием полиморфизма Ala16Val гена SOD2 и ассоциированного с ним высокого уровня пероксидации липидов плазмы крови и слюны. 3. В зависимости от наличия генетического полиморфизма антиоксидантных ферментов больные хроническим генерализованным пародонтитом делятся на две группы: первая предрасположенностью; вторая – с меньшей группа с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканях пародонта. 3. В основе эффективности антиоксиданта мексидола при хроническом пародонтите лежит его способность быстро и результативно корригировать явления перекисного окисления липидов, особенно у больных пародонтитом с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканевых структурах пародонта. Внедрение в практику Разработанные диссертационные положения включены в программу обучения студентов на кафедре патологии Медицинского института Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева, внедрены в работу Республиканской стоматологической поликлинике МЗ РМ. 8 Апробация работы Основные результаты работы доложены и обсуждены на Огаревских чтениях – научно-практической конференции Мордовского университета (Саранск, 2012–2015), IV Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2003), VII Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2006), VII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2006), научной конференции молодых ученых Медицинского института Мордовского университета (Саранск, 2005, 2014). Публикации По теме диссертации опубликованы 10 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК 9 ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Воспалительные изменения пародонта в последнее время является актуальной проблемой стоматологии. Современное состояние данной проблемы вытекает из высокой распространенности их среди населения, увеличения интенсивности и выраженности течения воспалительного процесса, формирования хронического очага одонтогенной инфекции, а так же неблагоприятным его влиянием на организм (Гильмияров Э. М., 1997; Адамчик А.В., 2000; Дмитриева Л. А., 2001, 2003; Аболмасов Н.Г., 2003; Янушевич О.О., 2010; Бондаренко Н.Н., 2012). По сложности и распространенности данная патология сопоставима и за рубежом и в России (Григорьян А.С. и др., 2004; Грудянов А. И., Безрукова И.В., 2002; Цепов А.В. и др., 2010), уступая лидерство лишь кариесу (Аболмасов Н. Г. и др., 2003; Янушевич О.О., 2008, 2010). По данным ВОЗ, воспалительные заболевания пародонта (ВЗП) выявляются у 90-95% взрослого населения (Грудянов А. И., Безрукова И.В., 2002). Самой распространенной и патологией пародонта, а также тяжелой является хронический генерализованный пародонтит (ХГП), он протекает длительно – годами, с периодами ремиссий и обострений, что приводит к существенному нарушению функций зубочелюстной системы из-за разрушения костной ткани и выпадения зубов (Данилевский Н.Ф., Борисенко А.В., 2000; Цепов Л.М. и др., 2001; Безрукова И.В., 2002; Лукиных Л.М., 2004; Лукиных Л.М., Круглова Н.В., 2012). Высокая склонность к прогрессированию, распространенность воспалений пародонта, трудности в достижении устойчивой ремиссии, их полиэтиологичность, а также увеличение распространенности у лиц молодого возраста с атрофическими и тяжелыми деструктивными изменениями пародонта, низкая доступность пародонтологической помощи 10 большей массе населения создают актуальность данной проблемы (Грудянов А. И., Безрукова И.В., 2002; Цепов Л.М., 2006; Акулович А.В., 2009). Профилактика заболеваний пародонта составляет важный аспект стоматологии. Результаты многочисленных исследований доказывают, что даже легкая степень заболеваний пародонта у детей при отсутствии должной профилактики и лечения у взрослых переходит в довольно тяжелую форму и в последующем требует терапевтического, хирургического и ортопедического лечения (Безрукова И.В., 2002; Казарина Л.Н., 2012). Существует не одна классификация заболеваний пародонта, которые отражают различные принципы систематизации клинико-морфологических проявлений и уровень знаний в области этиопатогенеза заболеваний пародонта (Данилевский Н.Ф. и др., 1993). Широкая распространенность ВЗП, прогрессирующее течение заболевания, ведущее к потере зубов, неудовлетворительная эффективность лечения и профилактики обусловливают значимость и важность изучения этиопатогенеза ХГП, поиска новых эффективных методов профилактики и лечения (Цепов Л.М., 2006; Гажва С.И., 2012; Rizzo A., 2010). Знание этиологии и факторов риска развития пародонтита позволяет их своевременно устранить и предотвратить ВЗП (Казарина Л.Н., Вдовина Л.В., 2012). Одноко, до сих пор нет единого взгляда на этиопатогенез пародонтита, и нет стандартизированного алгоритма диагностики и лечения (Цепов Л.М., 2006; Гажва С.И., 2010). Возникновение и развитие ХГП связано с бактериальными токсинами зубного налета, которые создают благоприятный фон для нервных, гормональных, иммунных нарушений и других общих прооявлений (Аболмасов Н.Н., 2003). Клиника проявлений пародонтита весьма разнообразна и определяется остротой процесса и степенью воспалительных изменений. Острый процесс встречается не часто и бывает локализованным, развиваясь под влиянием инфекций, а также из-за механического раздражения тканей искусственными 11 протезами – коронками, которые вызывают нарушение целостности зубодесневого соединения (Цепов Л.М., 1997; Адамчик А.В. и др., 2000). Особенность течения клинических проявлений ХГП имеет значение для выбора метода терапии (Данилевский Н.Ф. и др., 1993). Пародонтит - воспалительное заболевание характеризуется нарушением целостности околозубных тканей, является полиэтиологическим заболеванием (Дмитриева Л.А. и др., 2011). В основе этиопатогенетического пускового фактора является микробный фактор (Курякина Н.В., 2005; Гажва С.И., 2010; Leonardo M.R. et al., 2002). Общесоматическая патология, стрессы, несостоятельность факторов иммунной защиты способствуют активации процессов деструкции пародонтальных тканей (Григорьян А.С. и др., 2004; Цепов А.В. и др., 2010; Беспалова Н.А. и др., 2012; Mullary B. H., Dace B., Shelburne C. E., 2000). Продукты жизнедеятельности (токсины и ферменты) микроорганизмов оказывают не только прямое повреждающее действие на ткани, но и опосредованно инициируют эндогенные механизмы в развитии воспаления (Улитовский С.Б., 2000). Активная микрофлора при взаимодействии с тканями пародонта, способствует выделению цитокинов, что способствует повышению сосудисто-тканевой проницаемости, развитию нарушений антиоксидантной системы защиты (АСЗ) и другим изменениям метаболизма (Петрович Ю.А. и др., 2000). В ротовой полости человека слизистая оболочка даже при нормальной жизнедеятельности подвергается интенсивной бактериальной агрессии. Развитие острых и хронических процессов воспаления в ротовой полости позволяет предотвратить лишь мощная система защитных механизмов: секреция слюны, продукция лизоцима, наличие резидентной микрофлоры, секреторных иммуноглобулинов класса А, протеолитических ферментов слюны и других факторов. Дисбаланс защитных механизмов организма и воздействия эндотоксинов и агрессивных факторов микроорганизмов 12 является пусковым механизмом воспаления в десне (Адамчик А.В. и др., 2000; Брагина С.Ю., 2005). Иммунный ответ человеческого организма на наличие и проявление пародонтопатогенов складывается на взаимодействии не одной системы, в частности слизисто-секреторной, гуморальной, иммунорегуляторной, комплементарной и нейтрофильной (Dr. Michal Straka, 2000). Первичным барьером на пути инвазии и колонизации патогенных бактерий (ПБ) служит система слизисто-секреторной защиты вместе с эпителием. В настоящее время предполагают, что в инактивации ПБ на поверхности слизистой ротовой полости ведущую роль играют секреторные иммуноглобулины А (Ig А). Так, у больных ХГП выявляется в слюне увеличение показателей Ig А. Все же механизмы регуляции их активности и взаимодействия с сывороточными и секреторными Ig А не известны. Считают, что главным механизмом слизисто-секреторной системы защиты является препятствие прикрепления на поверхности клеток адгезивных элементов ПБ – пили, фимбрий и др. В результате микроорганизмы с более активной адгезивной системой прикрепляются к поверхностной мембране клеток эпителиалия, а другие микробы уже прикрепляются к первым и колонизируют (Dr. Michal Str., 2000). Фагоцитарная клеточная система (ФКС) является важным механизмом уничтожения ПБ пародонта. Фагоциты поглощают и ликвидируют микроорганизмы при помощи протеолитических ферментов и оксидантов. Из фагоцитов освобождаются различные медиаторы воспаления, которые определенным образом управляют течением воспаления и процессами восстановления (Dr. Michal, 2000). Нарушение микробиоценоза в ротовой полости способствует развитию и поддержанию в пародонте патологических процессов, в том числе и воспалительного характера с размножением патогенных микроорганизмов (ПМ) в пародонтальных карманаx и повышением их агрессивных свойств (образование ферментов и токсинов) 13 (Адамчик А.В. и др., 2000; Дмитриева Л.А., 2003; Брагина С.Ю., 2005; Курякина Н.В., 2005; Гажва С.И., 2010). При одинаковом качественном и количественном составе повреждающий эффект микрофлоры определяется состоянием как местной так и общей тканевой защиты человека (Григорьян А.С. и др., 2004). Если они сильны, то повреждающий эффект ПМ либо совсем не реализуется, либо сводится к минимемальному, ограничиваясь гингивитом. Если данные механизмы не способны в должной степени нейтрализовать повреждающий эффект ПМ и патологический процесс распространяется на структуры пародонта располагающиеся более глубоко (Григорьян А.С. и др., 2002; Гажва С.И., 2003; Курякина Н.В., 2005; Tolker-Nielsen T., Molin S., 2000). В развитии генерализованного пародонтита следует считать нарушения трофики (метаболизма обстоятельством, и морфологии) связанным с пародонта ухудшением особо важным микроциркуляции как функционального так и органического характера, дисбалансом гормональной и нервной регуляции, барьерных и иммунокомпетентных систем (Сухова Т.В., 2000; Сухова Т.В., Петрович Ю.А., 2000; Иванов В.С., 2001). В результате нарушения трофики пародонта возникает гипоксия его тканей, которая запускает активацию процессов свободнорадикального окисления (СРО), данный процесс является одним из механизмов адаптации организма на снижение концентрации кислорода в тканях. Практически гипоксия выступает в роли универсального промежуточного этапа почти любых патологических процессов, являясь краеугольной проблой соматической патологии (Виноградов В.М., 1985; Ефуни С.Н., Шпектор В.А., 1991; Логинова Н.К., 1999; Улитовский С.Б., 2000; Brar S.S. et al., 1999). В результате активации СРО при развитии гипоксии происходит образование активных форм кислорода (АФК) (супероксиданион, гидроксилрадикал) (Murad F., 2003). Действие свободных радикалов (СР) в организме контролируется как эндогенными, так и экзогенными антиоксидантами, а также ферментными антиоксидантными системами. 14 Эндогенная АСЗ организма противостоит повреждающему действию СР (Воронина Т.А. и др., 2000, 2001, 2003). С возрастом и из-за разных отягчающих факторов АСЗ становится не способной адекватно реагировать, производя необходимое количество антиоксидантных комплексов. Это ведет к дисбалансу в системе СРО и АСЗ в пользу первого составляющего (Терехина Н.А., 2005; Betteridge D.J., 2000; Bowie A., 2000; Zhang R. et al., 2002; Wentworth P. et al., 2002). При срыве в АСЗ свободнорадикальное окисление развивается в пародонте лавинообразно. Повышается уровень перекисного окисления фосфолипидов клеточных мембран с деструкцией последних и гибелью клеток пародонта с высвобождением эндогенных токсинов. Все это ведет к нарушению клеточного деления и накоплению продуктов перекисной денатурации белков и липидов (Воскресенский О.Н., 1991). Активация СРО в эпителиальном пласте и более глубоких слоях пародонта может служить фактором, угнетающем резистентность пародонта к патологическим воздействиям, что ведет к практически беспрепятственному распространению воспалительного процесса (Киселева Е.А., 2011; Kendall H.K. et al., 2000; Lappin D.f. et al., 2000; Shibata K. et al., 2001). Относительную гиподинамия, недостаточность антиоксидантная АСЗ обусловливают недостаточность с стресс, интоксикацией прооксидантами, это приводит к распространению продуктов СРО из мягких тканей зубочелюстной системы в костную ткань, индуцирует деструкцию коллагеновых волокон и резорбцию альвеолярного отростка (Slomiani B.L., Slomiani A., 2002). Усиление свободнорадикального окисления и накопление продуктов перекисного окисления с их широким диапазоном повреждающего действия определяют значение и место данного патологического процесса в формировании и развития хронического генерализованного пародонтита (Цепов Л.М., 2006). 15 Липиды составляют основу биомембран. При воспалении на здоровые ткани пародонта начинают действовать продукты распада клеток, в качестве которых чаще всего выступают обломки липидных молекул, которые становятся активными участниками окислительного процесса и представляют собой агрессивные органические радикалы (Ерюхин И.А., 1989; Звяговская И.Н., 1991). Взаимодействуя с клеточными мембранами эти радикалы разрушают составляющие основу их молекул. В результате пораженные биомембраны становятся не в состоянии адекватно выполнять свои функции, что отрицательно сказывается на морфофункциональной организации клеток (Коган А.Х., 1999; Matsuda N., 2007). Клеточные мембраны состоят из двух слоев фосфолипидов, которые распределены в ней неодинаково, так внешний монослой сотоит в основном насыщенными сфингомиелином и фосфатидилхолином, а внутренний бислой представлен больше ненасыщенными фосфатидилсерином, фосфатидилэтаноламином, фосфатидилинозитом (Eastmon S.J. et al., 1992; Boesze-Battaglia K., 1994). Такое распределение фосфолипидного состава играет важное значение в слиянии монослоев. Полифосфоинозитиды, выполняющие рецепторную функцию, локализованы в плазматических мембранах; сфингомиелин концентрируется в ядерном матриксе, клеточных мембранах и хроматине (Hincheta de Boschero M.G., 1992; Vaziri C., 1992). Перекисное окисление липидов (ПОЛ) является нормальным метаболическим звеном в биохимических процессах организма: биосинтезе простогландинов, окислительном фосфорилировании, нуклеиновых кислот и иммунных реакциях (Demling R.H., La Londe C., 1990; Bolen E.J., Sando J.J., 1992; Epand R.M., 1992). В результате активации процессов ПОЛ идет утилизация ненасыщенных жирных кислот (НЖК) и замене одних липидов другими. В норме в результате ПОЛ уменьшается доля легкоокисляемых полиненасыщенных липидов и растет содержание трудноокисляемых липидов (Бурлакова Е.Б. и др., 1988), в условиях патологии же данный процесс идет наоборот. В результате этих процессов изменяются физико16 химические свойства клеточных мембран (мембранный биопотенциал, микровязкость, полярность внутренних областей мембраны), идет реорганизация бислойных биомембран, преображаются межмолекулярные взаимодействия, появляются зоны неспецифической ионной проницаемости, включающие утечки ионов Са через перекисные каналы и обратимое ингибирование кальция-АТФ-азы за счет изменения подвижности молекул фосфолипидов в микроокружении фермента (Жуков Н.А. и др., 1989; Андарханов Б.В. и др., 1990; Капелько В.И., 2003). При повышении концентрации ионов Са2+ в клетке при окислении ее компонентов как правило происходит активация ФЛА2, в результате образуются лизофосфолипиды и неэстерифицированная полиненасыщенная жирная кислота, последняя выходит из липидного бислоя мембран в окружающую водную среду (Бурлакова Е.Б. и др., 1992; Жданов Г.Г., Нодель М.Л., 1995; Владимиров Ю.А., 1998; Евстигнеева Р.П. и др., 1998). СРО является универсальным патофизиологическим процессом при развитии большинства патологических состояний (Fukuhara K. et al., 1999; Tokyay R. et al., 1999). В норме ПОЛ останавливается на стадии инициирования процессов пероксидации липидов или на стадии образования гидроперекисей липидов (Авдеев М.Г., 2003; Власов А.П. и др., 2003; Cederbaum A.I. et al., 1992; Goode H.F., 1995). Механизм ПОЛ является свободно-радикальным с участием ненасыщенных HC=CH – связей ацильных цепей фосфолипидов (Lucovic L. et al., 1991). Первичные продукты липопероксидации (гидропероксиды липидов, триеновые и диеновые коньюгаты, перэфиры, эпоксиды, диацилпероксиды, перкислоты и α-гидроксигидропероксиды и др.) являются нестойкими соединениями, метаболических превращений, способными это включаться позволяет в рассматривать систему данные модификации мембран как обратимыми (Панасенко О.М., 1993). Вторичные (промежуточные) продукты образуются в результате дальнейшего превращения первичных (ТБК-реактивные продукты). Основным вторичным 17 продуктом ПОЛ выступает малоновый диальдегид. На поздних этапах ПОЛ наблюдается накопление конечных продуктов (шиффовы основания) (Толкач А.Б. и др., 2000; Lucovic L. et al., 1991). Продукты ПОЛ помимо первичных являются высокотоксичными соединениями с их повреждающим действием на клеточные и субклеточные структуры (Дубикайтис А.Ю. и др., 1994), они способствуют разрыхлению липидной гидрофобной области бислоя мембран, за счет чего белковые компоненты мембран становятся доступными для действия протеолитических ферментов, разрушают антиоксидантные компоненты (витамины, убихинон и стероидные гормоны) (Трофимов В.А., 1999; Тарасова Т.В., 2004). На фоне ХГП нарушения липидного метаболизма помимо повышения активности ПОЛ происходит активация фосфолипазной системы и подавление естественной АСЗ (Владимиров Ю.А., 1998; Тарасова Т.В., 1998; Власов А.П. и др., 2000; Parks D.A. et al., 1982; Kuminoto F. et al., 1987; Halliwell B., 1996; Dabrowski A. et al., 1999).. Фосфолипазы являются липолитическими ферментами, которые гидролизуют фосфолипиды, составляющие основу липидного бислоя биологических мембран. У человека имеется три изоформы ФЛА2 (I тип – панкреатическая; II тип – синовиальная; III – цитозольная) основная функция – обновление фосфолипидов биомембран. Запуская цикл арахидоновой кислоты, ФЛА2 участвует в межклеточных взаимодействиях и передачи сигнала в клетку (Тимушева Ю.Т. и др., 1998; Власов А.П. и др., 1999; Северина И.С., 2002; Eguchi H. et al., 1994; Zaman W. et al., 1994; Karine G. et al., 2002). Патологическое увеличение активности ее определяется при острых процессах в крови, органах и тканях. Продукты липопереокисления вызывают активацию ФЛА2, в тоже время активная ФЛА2 выступает мощным усилителем процессов ПОЛ на биомембраны (Литвинко Н.М., Лукк М.В., 1999; Klonowski H. еt al., 1993). Состав липидов мембран под воздействием фосфолипаз изменяться в довольно широком диапазоне (Stubbs Ch.B., Smith A.D., 1984; Genu B., 1992; Rack М. et al., 1992). 18 В результате повышения арахидоновая кислота, которая тромбоксаны, лейкотриены и активности превращается липоксины, ФЛА2 в высвобождается простагландины и гидроксиэйкозотетраеновую кислоту. Данные соединения являются биологически активными веществами (БАВ) и могут выступать в качестве медиаторов воспаления (Семенов В.Л., 1989; Евгина С.А. и др., 1992; Гавриленко Г.А., Демин В.В., 1998; Евстигнеева Р.П. и др., 1998; Кармалита Е.Г. и др., 2002; Bulkley G.B., 1983; Irvine R.F. et al., 1984). ФЛА2 так же принимает участие в образовании лизофосфатидилхолина алкильного типа, который превращается в фактор активации тромбоцитов, и при воспалительных процессах является медиатором межклеточного взаимодействия (Губергриц Н.Б. и др., 2000; Eguchi H. еt al., 1994). Данные литературных источников показывают, что при болезнях пародонта мембранодеструктивные процессы изучены недостаточно полно. Зачастую это единичные и разрозненные сведения об отдельных процессах метаболизма тканей пародонта и состояния антиоксидантной защиты (Воскресенский О.Н., Ткаченко Е.К., 1991; Голиков А.П. и др., 2002). В десне при ХГП выявляется уменьшается сниженая активность активность супероксиддисмутазы каталазы, и цитохромоксидазы, глутатионпероксидазы, но повышается уровень сульфгидрильных групп, что свидетельствует о распаде белка. Достоверная корреляция была выявлена между содержанием продуктов СРО в десневой и глубиной жидкости пародонтальных карманов. Содержание малонового диальдегида (МДА) возрастает в зависимости от тяжести заболевания в крови десны, что указывает на активацию СРО при пародонтите и может служить обоснованием антиоксидантотерапии (Лемецкая Т.И., Сухова Т.В., 2000; Сухова Т.В., 2000; Ланкин В.З., 2002). При хроническом пародонтите повышается уровень лизоформ фосфолипидов и свободных жирных кислот не только в плазме, но и форменных элементах крови. Выявлено, что выраженность изменений 19 липидного состава форменных элементов и плазмы крови при хроническом пародонтите сопряжена со степенью тяжести заболевания. При тяжелой степени расстройства липидного обмена на организменном уровне максимальны (Захаркин А.Г., Прытков В.А., 2008). При генерализованном пародонтите в результате развития патологического процесса, происходит неконтролируемое образование АФК, что на фоне гиперактивности процессов ПОЛ и фосфолипазной ферментной системы при недостаточности компенсирующих сил ведет к окислительному стрессу (Дубинина Е.Е., 2001; Ytrehus K., 1991; Chen J.W. et al., 1993; Redl H. et al., 1993; Singh S., 1997). АФК взаимодействуют почти со всеми биологическими молекулами, изменяют их структуру и функциональную активность (Власов А.П. и др., 2000; Дубинина Е. Е., 2001; Зиновьева В.Н., 2002; Волчегорский И.А., 2004). Окисляя фосфолипиды и белки клеточных мембран, нарушая их целостность, АФК инактивируют мембранные и клеточные ферменты (Голиков А.П. и др., 2003). Помимо этого АФК могут ингибировать ферментное составляющее звено АСЗ, изменяют ее структуру (Величковский Б.Т., 2001). В организме в ходе эволюции сформировались антиокислительные механизмы для поддержания определенного уровня окисления, что направлено на защиту от повреждающего и разрушающего воздействия продуктов свободнорадикального окисления (Петросян Э.А. и др., 2005; Сазонтова Т.Г., 2007). Антиокислительная система организма представлена неферментной и ферментной подсистемами (Нагоев Б.С., 2003; Султанов Г.А. и др., 2004). Неферментная составляющая АОС включает низкомолекулярные водои жирорастворимые антиоксиданты, которые в свою очередь подразделяются на 3 группы: низкомолекулярные вещества синтезируюмые самим организмом (мочевая кислота, глутатион, цистеин, стероидные гормоны, цистин, металлотионеины, SH-группы белков); природные – естественные соединения и ряд микроэлементов поступающие в организм с пищей 20 (ретинол и каротиноиды, токоферол, флавоноиды, аскорбиновая и никотиновая кислоты, убихинон, селен, цинк, медь, магний, марганец, кальций); некоторые белки, которые способны связывать ионы металлов переменной валентности (альбумин, трансферрин, карнозин, церулоплазмин, ферритин) (Величковский Б.Т., 2001; Квинн П.Дж., 2004; Frei B., 1989). Роль ферментов АСЗ состоит в нейтрализации и утилизации определенных форм свободных радикалов до малоактивных соединений: молекулярного кислорода, воды и ряда органических соединений (Никифорова Н.В., 2003). К ферментой подсистеме организма относятся: супер-оксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза, тиоредоксинпероксидаза и миелопероксидаза, которые работают как в цитозоле, содержащем в активном центре фермента медь и цинк, так и в матриксе митохондрий, где имеется Mn-супероксиддисмутаза, (Васильков В.Г. и др., 2001; Зенков Н.К. и др., 2001; Владимиров Ю.А., 2002; Zhang P. et al., 1997). Многокомпонентная система АСЗ клеток обладает высокой взаимосвязью и синхронизацией всех ее компонентов, что обеспечивает высокий уровень эффективности поддержания физиологических процессов СРО (Голиков А.П. и др., 2003; Сазонтова Т.Г., 2007). При ХГП, как и при многих патологических состояниях, наблюдается нарушение равновесия в системе окисления и АЗС, что сопряжено с накоплением окислительных повреждений и развитием окислительного стресса (Петросян Э.А. и др., 2005; Меньщикова Е.Б. и др., 2008). ПОЛ является одним из важных механизмов модификации липидного компонента клеток, и оказывает существенное влияние на функциональную активность различных клеточных составляющих (Андреенко Г.В., 1986; Гринштейн Ю.И., 1994; Барабой В.Л, 1997; Голиков П.П. и др., 2000; Азизова О.А. и др., 2002). Таким образом, вполне логичным является особый интерес ученых к изучению влияния физических и фармакологических способов воздействия на липидный метаболизм, 21 и структурно-метаболическое состояние тканей пародонта при его патологическом поражении (Власов А.П. и др., 2008). Лечение ХГП является достаточно сложной проблемой современной медицины, что вытекает из широкого разнообразия его проявления, как непосредственном в сложном комплексе взаимодействии тканей пародонта, так и общем организменном проявлении, связанном с реактивностью организма в условиях данной патологии. Лечение требует комплексно подхода, включающего как общее, так и местное воздействие на непосредственный очаг поражения в пародонте и организм пациента в целом (Безрукова И.В., 2001). Однако, патологические процессы в пародонте, как правило, развиваются не на пустом месте, а на фоне каких-либо общих заболеваний. В свою очередь заболевания пародонта также оказывают влияние на различные функциональные возможности организма, в том числе и на механизмы естественной защиты (Максимовский Ю.М., 2000). Лечение стоматологов хронического представляет генерализованного определенные пародонтита трудности, так как для при традиционной терапии данной патологии локальные изменения и нарушения гомеостаза на организменном уровне корригируются медленно и неполно. В целом лечение пациентов следует направлять не только на устранение патологии в тканях пародонта, возобновление их функционального статуса, а также на активацию защитных сил организма, нормализацию гомеостаза, реабилитацию общего состояния больного. Таким образом, разработка и изучение новых методов лечения ХГП остается актуальной, несмотря на большое разнообразие методов, и схем комплексного воздействия на патологию (Баровский Е.В., 2003; Орехова Л.Ю. и др., 2007; Цепов Л.М., 2006; Кучумова Е.Д. и др., 2008; Лепилин А.В. и др., 2010; Гажва С.И., 2012; Fernandes L.A. et al., 2009). В настоящее время лечение ХГП включает: 1) этиотропную терапию, которая направлена на устранение причинны развития патологии; 2) патогенетическую терапию с использованием методов и средств воздействия 22 на различные звенья воспалительно-деструктивного процесса в пародонте, включая и симптоматическую; использование средств, 3) терапию, усиливающих предусматривающую защитно-приспособительные механизмы больного; 4) восстановительную терапию (реабилитация) (Адамчик А.В., 2000, 2001; Брагина С.Ю., 2005). При лечении ХГП независимости от тяжести течения обязательным компонентом должно являться устранение пародонтального кармана с применением всевозможных хирургических методик. Наиболее распространенными являются лоскутная операция, кюретаж и «открытый» кюретаж, данные методы основаны на удаление микробного налета, вегетирующего в кармане, зубного камня, грануляций и тяжей эпителия, иными словами на вычищении патологических полостей, образовавшихся между десной и зубом (Лемецкая Т.И., 1998). В настоящее время активно изучается полиморфизм генов при различных патологических состояниях в организме. В норме ген c-fos экспрессируется в малых и недектируемых количествах, при этом он способен быстро активироваться в ответ на внешние воздействия (Healy S., 2013). Установлено, что изменение экспрессивной активности (ЭА) гена c-fos может выявляться у больных с атеросклерозом, воспалением дыхательных путей, ишемической болезнью сердца (McKay S., 2001; Patino W.D., 2005; Saliques S., 2011). Имеются представления о распространенности полиморфизмов rs2239615, rs7101 в группах доноров и больных с эндотоксикозом, а также ЭА гена c-fos, которые лежат в основе хронизации воспалительных заболеваний и развития эндотоксикоза. Выявлена ассоциация аллеля С с предрасположенностью к развитию эндотоксикоза (OR>1). В частности при эндотоксикозе в клетках крови больных отмечается повышенный уровень экспрессии гена (Трофимов В.А., 2014). Обнаружен феномен ассоциации значений индекса гигиены OHI-S с полиморфными сайтами в генах интерлейкинов. Полиморфизм −607 C → A в регуляторном участке гена IL18 локализован в сайте связывания фактора 23 транскрипции CRE B (cAMP response-element binding protein), и в десневой жидкости содержание интерлейкина 18 увеличивается соответственно степени тяжести воспаленых изменений пародонта и снижается до исходного уровня после излечения (Сафонова А.В., 2011; Zhang N., 2014). Данные литературы позволяют рассматривать генетическую предрасположенность к дезорганизации соединительной ткани как фактор риска развития пародонтита, а также показывают, что в сублингвальных биопленках чаще обнаруживаются патогенные бактерии Aggregatibacter actinomycetemcomitans и Porphyromonas gingivalis, у носителей определенных генотипов пародонтит может протекать в тяжелой форме, сочетаться с определенными соматическими заболеваниями и состояниями (Царев В.Н., 2010; Зорина О.А.2012; Атрушкевич В.Г., 2011; Ferreira S.B., 2008; Laine M.L., 2010; Cantore S., 2014). Одними из универсальных мембран при ХГП механизмов повреждения являются свободно-радикальные клеточных процессы липопереокисления (Петросян Э.А. и др., 1998; Адамчик А.В. и др., 2000; Захаркин А.Г.и др., 2012; Tokyay R. et al., 1999), следовательно, фармакологическая коррекция функциональных нарушений в клетках может быть произведена и метаболических через управление интенсивностью ПОЛ (Евстигнеева Р.П. и др.,1998; Адамчик А.В. и др., 2000; Брагина С.Ю., 2005; Захаркин А.Г., 2006). Важнейшими ферментами организма, во многом определяющими эффективность являются работы каталаза, антиоксидантной и детоксикационнойсистем супероксиддисмутаза и глутатионS-трансфераза. Марганцевая супероксиддисмутаза (Mn SOD), кодируется геном SOD2 и играет важную роль в ингибировании ПОЛ. Наиболее значимой мутацией в гене SOD2 является замена (С47Т), что приводит к снижению активности фермента и связана окислительному с стрессу. повышенной Для больных восприимчевостью с пародонтитом тканей к характерно увеличение степени гетерозиготности (по сравнению с теоретически 24 ожидаемым). Выявлен вклад мутантного аллеля С гена SOD2 в формирование патологического фенотипа при пародонтите (Сафонова А.В., 2011). Нарушения каталазной активности связывают с развитием ишемической болезни сердца, астмы, диабета, ревматоидного артрита и др. Наиболее значимая мутация (-262 C/T) в гене каталазы (САТ) влияет на ЭА гена. Риск развития пародонтита повышается при наличии в геномах людей мутаций в генах ферментов АСЗ и детоксикационной систем. Изменение активности ферментов АСЗ, которые участвуют в обезвреживании и утилизации генотоксических соединений, и определяет риск повреждения ключевых биомолекул (нуклеиновых кислот, белков, липидов), а также степень деструктивных процессов, приводящих к повреждению клеток и нарушению их функциональной активности при парадонтите (Царев В.Н., 2002; Сафонова А.В., 2011; Трофимов В.А., 2014). При разработке новых методов лечения ХГП особого внимания заслуживают лекарственные средства с антиоксидантным типом действия, так как именно они обладают способностью устранять неполадки в липидном спектре биомембран, развивающиеся на фоне гиперактивации процессов ПОЛ в условиях данной патологии (Лукьянова Л.Д., 2000; Новиков В.Е., 2002; Новиков В.Е., 2003; Смирнов Л.Д., 2003; Тарасова Т.В., 2004; Успенская М.Н. и др., 2012; Urano S. et al., 1992; Burton G.W. et al., 1994; Sogawa S. et al., 1994). Антиоксиданты способны предупреждать активацию СРО, замедляя скорость, и частично устраняя повреждения, связанные с избытком свободных радикалов, обладают иммуностимулирующим свойством (Карпова Е.Л., 2002; Зайцев В.Г. и др., 2003). Помимо этого антиоксиданты обладают антигипоксическим, противовоспалительным, антитоксическим эффектом. Многие препараты антиоксидантного класса активируют репаративные процессы, оказывая положительное влияние на синтез белков и нуклеиновых кислот (Ланкин В.З., 2002; Gutteridge J.M., 2000). Данные свойства препаратов с антиоксидантным типом действия в последнее время 25 все шире используются в лечении различных заболеваниях (Schiller H.I. et al., 1993). Они применяются в комплексном лечении трофических язв нижних конечностей, остеомиелита, язвенной болезни желудка и 12- перстной кишки, ожоговой болезни, ревматизма и других патологических состояниях (Абдулхаков Р.А., 1986; Кочнев О.С., 1990; Нурмухаметова Э.Б., 1993; Измайлов Г.А. и др., 1995; Резник В.С. и др., 1996; Hinder R.A. et al., 1988; Szelenyi J., Brune K., 1988). В схему комплексного лечения воспалений пародонта многие ученые также предлагают включать следующие препараты, обладающие антиоксидантным эффектом: витамины С, А, Е, Р, группы В, препараты шиповника, коэнзим Q10, галавит, вилон, лизобакт, дезоксинат,гепон, дибунол, декарис, ликопид, имудон, мексидол, полиоксидоний, сукцинат натрия, тактивин, траумель-С, цитофлавин, элеутерококк и другие препараты (Захаркин А.Г., 2009; Лукиных Л.М., 2012; Прытков В.А., 2012). Установлено, что антиоксидантным действием обладают препараты, изготовленные на основе солей янтарная кислота, в связи с ее влиянием на транспорт медиаторных аминокислот и способностью восстановливать активность основного окислительно-восстановительного компонента митохондриальной дыхательной цепи – цитохромоксидазы (Галенок В.А., Диккер В.Е., 1985; Ливанов Г.А. и др., 2001; Власова В.П. и др., 2006). На ее основе создан реамберин, который по мимо янтарной кислоты содержит также сбалансированный состав микроэлементов (хлорид калия, хлорид магния, хлорид натрия) (Дрогомирецкая Е.И. и др., 2002; Корнилов Н.Н. и др., 2002). В связи, с чем данный препарат обладает помимо антиоксидантного еще и дезинтоксикационным и антигипоксическим действием, корригирует энергетический потенциал клеток, способствует утилизации глюкозы и жирных кислот клетками различных тканей организма, восстанавливает газовый состав и кислотно-основной баланс крови (Тищенко М.С. и др., 2002; Федин А.И., 2002; Акимова О.А., 2005; Афанасьев В.В., 2005; Власова В.П. и др., 2006). 26 Антиоксидант комплексного типа действия - «Цитофлавин», содержит янтарную кислоту, никотинамид, инозин, натрия гидроксид, рибофлавина мононуклеотид, N-метилглюкамин, способен сокращать сроки лечения больных с острыми легочными нагноениями и улучшать качество их лечения (Бельских А.Н., 2007), снижать гепатотоксические проявление лекарственной терапии туберкулеза легких (Суханов Д.С., 2008), при распространенном перитоните способен корригировать синдром системного воспалительного ответа в послеоперационном периоде (Горбачев Н.Б., 2009). Изучены некоторые аспекты клинического применения цитофлавина при пародонтите (Гасанова З.М., 2011) Препарат «Ремаксол» содержит в своем составе активные компоненты – янтарную кислоту, никотинамид, рибоксин, метионин; электролиты – натрия хлорид, калия хлорид, магния хлорид и сольстабилизирующий агент N-метилглюкамин. Данный препарат используется при хронических поражениях печени с гепатопротекторной активностью, установлена его активность при лечении ряда заболеваний, протекающих с развитием выраженного синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ) (Суханов Д.С., 2008; Егорова Н.В., 2009; Сивак К.В. и др., 2010; Сологуб Т.В. и др., 2010). Антиоксидантным эффектом обладает ксимедон, что выражается в его мембраностабилизирующем действии (Абдулхаков Р.А., 1986; Тарасова Т.В, 198; Слабнов Ю.Д. и др., 2000). Положительное действие препарата отмечено на тканевом сосудистом русле, что проявляется ликвидацией пареза венул, спазма артериол, стазов, ускорение кровотока, нормализация соотношений свертывающей и антикоагулянтной систем, и имеет важное значение при ряде патологических состояний (Измайлов С.Г. и др., 2001). Так в качестве антиоксиданта использование ксимедона экспериментально обосновано при перитоните и остеомиелите (Резник В.С.,1996; Тарасова Т.В, 198; Нурмухаметова Э.Б., 1993). Многочисленные исследования свойств производных 3-оксипиридина в условиях различных патологических состояниях позволили выявить, что 27 данные вещества могут выступать потенциальными защитными агентами на фоне действия различных повреждающих факторов на организм и проявляют эффективность в качестве фото-, радио-, гепато- и геропротекторов, в связи с чем могут рассматриваться в качестве универсальных препаратов антиоксидантной фармакотерапии (Смирнов Л.Д., 2003; Корокин М.В. и др., 2009). На основе 3-оксипиридинов разработаны и внедрены в клиническую практику лекарственные средства, такие как эмоксипин и мексидол (мексикор). Их синтез осуществлен из производных гидроксипиридина и эстрогенов путем придания структуре витамина В6 (пиридоксол) антиоксидантных свойств за счет экранирования алкильными группами фенольного гидроксила. Препараты мексидол и эмоксипин широко применяются в медицинской практике. Эффекты мексидола и эмоксипина определяются их механизмом действия (Иванов И.В., Яснецов В.В., 2000; Смирнов Л.Д., 2003). Использование эмоксипина способствует коррекции выраженности СЭИ, процессов ПОЛ и фосфолипазной активности плазмы крови, однако наиболее выраженные данные эффекты препарата отмечаются лишь на конечном этапе лечения и охватывает не весь спектр возникших проявлений нарушений гомеостаза (Прытков В.А., 2010). Установлено, что применение антиоксиданта мексикора в период ремиссии при средней степени тяжести пародонтита уменьшает вероятность обострения заболевания, что связано с профилактикой формирования толерантности тканей пародонта к повреждающим агентам, и препятствует рецидивированию заболевания. (Прытков В.А., 2010; Захаркин А.Г., 2012). При ХГП апликации на десны, а так же ультрафонофорез мексидола способствуют улучшению общего самочувствия и прекращению кровоточивости десен. За счет своего транквилизирующего эффекта возможно использование мексидола для премедикации стоматологических больных с патологией сердечно-сосудистой системы, так как обладает анксиолитическим действием, не сопровождающимся 28 миорелаксацией, повышает адаптацию и эмоциональный статус (справочник Видаль, 2012). Препарат в виде 5% раствора 2 мл внутримышечно за 10 минут до начала лечения устраняет чувство тревоги, страха, напряжения (Ларенцова Л.И. и др., 2002; Тургенева Л.Б. и др., 2002). Обнаружено, что производные 3оксипиридина (эмоксипин, мексидол) при хроническом пародонтите обладают липидмодифицирующей способностью. При их включении в комплексную терапию отмечается восстановление липидного состава плазмы крови (Прытков В.А., 2010). Положительная активность мексидола на ряд патогенетических звеньев изученной патологии основывается на его способности не только уменьшать интенсивность процессов перекисного окисления липидов, но и снижать активность фосфолипазы А2. (Брагина С.Ю., 2005; Захаркин А.Г., 2006). Мексидолотерапия в сочетании с традиционным способом лечения хронического эффективность купированию генерализованного лечения. ПОЛ и пародонтита Положительные фосфолипазной позволяет эффекты активности повысить мексидола при по хроническом генерализованном пародонтите позволяют в значительной степени улучшить состояние трофики, микроциркуляции, уменьшить выраженность эндогенной интоксикации, что и явилось основой улучшения результатов лечения больных (Захаркин А.Г., 2010). Исследованиями установлено, что стихание воспалительных явлений в пародонте в процессе терапии хронического пародонтита на фоне использования в комплексной схеме лечения антиоксидантов сопровождается довольно быстрой коррекцией трофических изменений его тканей (Прытков В.А., 2007; Захаркин А.Г., 2012). Основным фармакодинамическим механизмом данного эффекта считается его способность корригировать функцию тромбоцитов и эритроцитов (Власов А.П. и др., 2006; Захаркин А.Г. и др., 2006; Прытков В.А., 2013), а также липидный метаболизм в целом (Захаркин А.Г., 2008; Власов А.П. и др., 2008). 29 С учетом того, что хронический генерализованный пародонтит протекает с периодами обострений и ремиссий, нося рецидивирующий характер, то для данной категории пациентов весьма актуальным становится стремление к уменьшению количества рецидивов и удлинению временного промежутка их появления. С данной целью представляется целесообразным дальнейшее исследование патогенетических механизмов антиоксидантной терапии в профилактике и лечении ХГП, а также их влияния на липидный метаболизм и структурно-функциональное состояние клеток и тканей при развитии данного патологического процесса. Недостаточное освещение в научной литературе вклада полиморфизмов генов в развитие пародонтита нуждается в подробном изучении у пациентов различной тяжести ХГП. Выявление различия в частотах аллелей могут отражать наличие популяционных особенностей, а также различий в критериях формирования групп обследуемых. Данной проблеме современной патофизиологии и посвящена настоящая работа. 30 ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В основу данного исследования положены клинические наблюдения 72 больных (30 мужчин и 42 женщины) хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести в возрасте от 30 до 50 лет с давностью заболевания от 5 до 12 лет, проходившие лечение в Республиканской стоматологической поликлинике г. Саранска. Для решения поставленных задач пациенты были распределены на четыре группы, сопоставимые по возрастному и гендерному составу и по тяжести заболевания. Пациенты проходили комплексное обследование при обращении в клинику, в процессе лечения и по окончанию терапии: стоматологическое, клинико-лабораторное, рентгенологическое, биохимическое и функциональное. Нами был разработан следующий дизайн исследования (табл. 1). Первая и вторая группа больных (n=18) – контрольные. Пациенты получали традиционную включала закладывание противовоспалительную взвеси хлоргексидина терапию, с которая метрогилом в патологические зубодесневые карманы после проведения профессиональной гигиены (снятие зубных отложений), проведение ротовых ванночек с диоксидином или димексидом, повязки с противовоспалительными мазями (бутадионовая, метрогил противовоспалительное дента, лечение холисал, включало лингезин). антимикробные Общее препараты (флагил, клиостом, метрогил), НПВС (индометацин), десенсибилизирующие препараты (диазолин), витаминотерапию (А, С, Р). По показаниям проводился кюретаж, избирательное пришлифовывание зубов. 31 Группы Контрольная (I) Контрольная (II) Количес тво Длительность пациент наблюдения ов 18 18 10 суток 10 суток Генотип (SOD2 С47Т) Таблица 1 Обследования традиционная противовоспали тельная терапия СС ТТ Основная (III) 18 10 суток СС Основная (IV) 18 10 суток ТТ Терапия Оценка состояния тканей пародонта по клиническим индексам; определение первичных и вторичных продуктов ПОЛ, активности фосфолипазы А2, супероксиддисму тазы плазмы крови и слюны; генетический анализ. Традиционная терапия + внутримышечн ые инъекции 5% раствора мексидола (2 мл) Традиционная терапия + внутримышечн ые инъекции 5% раствора мексидола (2 мл) Третьи и четвертая группа (n=18) – основные. В дополнение к традиционной терапии больные дополнительно ежедневно в течение 10 дней получали внутримышечные инъекции 5% раствора препарата (2 мл). Проведение генетического скрининга у 70 здоровых доноров и 72 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом наглядно показало вклад мутантного аллеля 32 С гена SOD2 в формирование патологического фенотипа при пародонтите. Поэтому критерием отбора пациентов в группы было наличие (II и IV группы) или отсутствие (I и III группы) полиморфизма С47Т в гене SOD2 и его гомозиготное состояние. В ходе генетического обследования было выявлено 12 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом, у которых ген SOD2 был в гетерозиготном состоянии (СТ), они не участвовали в дальнейшем исследовании. Кроме того, проводили исследование особенностей полиморфизма гена каталазы – 262 C/T и двух генов глутатион S-трансферазы и их роль в формировании патологического фенотипа. Никто из больных в период исследования не получал никакого систематического лечения по поводу общего заболевания и не подвергался какому-либо терапевтическому воздействию. При этом больные соблюдали обычную гигиену зубов и полости рта. Получено информированное согласие каждого пациента на проведение данного исследования. В работе использованы следующие методы исследования. Оценка состояния тканей пародонта по клиническим индексам (Калинкин А. И., 1997) Степень воспаления десны определяли с помощью папиллярномаргинально-альвеолярного индекса – РМА (Parma, 1960), который вычисляется путем сложения оценок состояния десны у каждого зуба в процентах по формуле: Сумма показателей х 100% РМА = Для оценки 3 х число зубов выраженности воспаления использовали индекс кровоточивости десневой борозды - SBI (Muhleman, 1971): Сумма показателей х 100% число зубов SBI = Состояние гигиены полости рта, динамику образования налета и зубного камня определяли с помощью индекса 33 гигиены апроксимальных (контактных) поверхностей зубов – Approximal plaque index – API (Lange, 1997): Сумма показателей х 100% число зубов API = Пародонтальный индекс. Пародонтальный индекс (ПИ) дает возможность учесть наличие гингивита и других симптомов патологии пародонта: подвижность зубов, глубина клинического кармана и др. Используют следующие оценки: нет изменений и воспаления – 0; легкий гингивит (воспаление десны не охватывает зуб со всех сторон) – 1; гингивит без повреждения прикрепленного эпителия (клинический карман не определяется) – 2; гингивит с образованием клинического кармана, нарушения функции нет, зуб неподвижен – 6; выраженная деструкция всех тканей пародонта, зуб подвижен, может быть смещен – 8. Оценивают состояние пародонта каждого имеющегося зуба – от 0 до 8 с учетом степени воспаления десны, подвижности зуба и глубины клинического кармана. В сомнительных случаях ставят наивысшую из возможных оценок. При возможности рентгенологического исследования пародонта вводят оценку «4», при которой ведущим признаком служит состояние костной ткани, проявляющееся исчезновением замыкающих кортикальных пластинок на вершинах альвеолярного отростка. Рентгенологическое исследование особенно важно для диагностики начальной степени развития патологии пародонта. Для расчета индекса полученные оценки складывают и делят на число имеющихся зубов по формуле: ПИ= Сумма оценок каждого зуба / Число зубов Значения индекса следующие: 0,1–1,0 – начальная и легкая степень патологии пародонта; 1,5–4,0 – среднетяжелая степень патологии пародонта; 4,0–4,8 – тяжелая степень патологии пародонта. Определения активности фосфолипазы А2. Активность фосфолипазы А2 оценивали в среде, содержащей 10 ммоль трис-HCL-буфер (pH 8,0), 150 ммоль тритон Х-100, 10 ммоль CaCl2 и субстрат (1,2 ммоль). В качестве 34 субстрата использовали фосфатидилхолины яичного желтка. Регистрацию каталитической деятельности фермента проводили на установке, состоящей из иономера ЭВ-74, электродной системы (электрод сравнения ЭВЛ-IМ, измерительный электрод ЭСЛ-43-07), ультра-термостата и микробюретки. Активность ФЛА2 оценивали титрометрическим методом с помощью нейтрализации 0.02 М NaOH карбоксильных групп, выделяющихся свободных жирных кислот. Расчет проводили по калибровочной кривой, построенной по палмитиновой кислоте и выражали в мкмоль/с/г белка. Методика определения вторичных продуктов ПОЛ при спонтанном ПОЛ (Егоров Д.Ю., Козлов А.В., 1987). Интенсивность ПОЛ определяли по накоплению малонового диальдегида в реакции с 2тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Для этого к 1 мл плазмы крови добавляли 3 мл 1% фосфорной кислоты, содержащей 0,5 ммоль ЭДТА и 1 мл 0,5% раствора ТБК. Затем образцы охлаждали и приливали 4 мл н-бутанола, тщательно встряхивали и центрифугировали 15 мин при 1500 g. В верхней бутанольной фазе регистрировали спектр поглощения в области 515-550 нм. Определяли оптическую плотность при 532 нм, используя в качестве базовых точки спектра при 515 и 550 нм. Концентрацию ТБК-реактивных продуктов выражали в нмоль МДА на 1 грамм белка. Содержание ТБК-реагирующих продуктов выражали в нмоль/г белка. Определение диеновых конъюгатов. Спектрофотометрический метод определения продуктов ПОЛ основан на том, что диеновые коньюгаты обладают характерным поглощением при длине волны 232-233 нм (Ганстон Ф.Д., 1986). Определение активности супероксиддисмутазы. К 0,5 мл плазмы крови приливали 3 мл фосфатного буфера (рН 7,4) и гомогенизировали до появления однородной суспензии. После центрифугирования при 5000 об/мин в течение 15 минут отбирали 0,5 мл супернатанта и вносили в центрифужную пробирку, содержащую 1 мл хлороформно-спиртовой смеси (2:1, по объему). Полученную смесь охлаждали, тщательно перемешивали и 35 для удаления гемоглобина центрифугировали. Водно-спиртовой слой, содержащий фермент отбирали и добавляли несколько капель насыщенного раствора КН2РО4. Ферментный препарат получали разбавлением полученной фазы в 20 раз. В состав реакционной среды входили нитросиний тетразолий (57 мкмоль), НАД*Н (98,5 мкмоль), феназинметасульфат (16 мкмоль) и 0,2 мл ферментного препарата. Нитросиний тетразолий используется как индикатор, способный акцептировать электроны и восстанавливаться до формазана, имеющего максимум поглощения при 560 нм. Восстановленная форма биформазана окрашена от синего до черного цвета. Нитросиний тетразолий быстро восстанавливают в присутствии феназинметасульфата флавопротеиновые ферменты. Феназинметасульфат используется в реакциях определения активности ферментов как переносчик электронов между ферментами и молекулярным Феназинметасульфат кислородом восстанавливается или солями неэнзиматически тетразолия. NADH или NADPH и используется для стыковки дегидрогеназ с другими акцепторами электронов, например, солями тетразолия (Гуревич В.С. и др., 1990). Реакция протекала 10 минут в 0,5 моль фосфатном буфере (рН 8,3) с ЭДТА (0,1 ммоль) при 25о С в аэробных условиях (Гуревич В.С. и др., 1990). В контрольную пробу ферментный препарат не вносили. Активность СОД рассчитывали по формуле: А = Т% / (100% - T%), где А - активность фермента в условных единицах, рассчитанная на 1 мг белка, Т% - процент торможения реакции восстановления нитросинего тетразолия в пробе за минуту. Генетический анализ. ДНК выделяли из ядросодержащих клеток крови человека по методу Boodram. Генотипы исследуемых аллельных вариантов генов определяли при помощи ПЦР с использованием TagMan зондов комплементарных полиморфной последовательности ДНК (Синтол). Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики, с использованием критерия t Стьюдента. Вычисляли среднюю 36 арифметическую выборочной совокупности (М), ошибку средней арифметической (m). В каждой группе определяли достоверность различия (р) по отношению к исходному (до лечения) или контрольному значению, корреляционные связи между различными показателями по коэффициенту корреляции (r). При попарном сравнивании частот аллеей и генотипов в группе больных и контроля использовали критерий χ 2(р) для таблиц сопряженности 2х2 с поправкой Иэйтса на непрерывность. Силу ассоциации оценивали в значениях (OR).Вычисления Использован показателей показателя производили текстовый отражена на CRU редактор на соотношения 199 Microsoft MHz Word графиках, построенных программы электронных таблиц Microsoft Excel 2007. 37 шансов OddsRatio “Pentium-MMX”. 2007. Динамика с использованием ГЛАВА 3 РОЛЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО ПАРОДОНТИТА 3.1. Исследование распространенности полиморфизмов генов антиоксидантных ферментов при пародонтите Изучение молекулярных механизмов пародонтита на генетическом уровне позволит глубже понять вклад отдельных белков и кодирующих их генов в развитие и формирование воспалительного процесса тканей пародонта, хронизацию и переход воспаления на системный организменный уровень (Максимовский Ю.М., 2006; Царев В.Н. и др., 2002; Грудянов А.И. и др., 2002). В ряде работ исследованы полиморфизмы генов цитокинов, коллагенов, выявлены ассоциации между степенью тяжести заболеваний пародонта и носительством патологических аллелей исследуемых генов (Сафонова А.В и др., 2011; Царев В.Н. и др., 2010; Зорина О.А. и др., 2012; Laine M.L. et al., 2010). Одним из ведущих механизмов тканевой деструкции, связанным с повышенной гибелью клеток, причем как путем некроза, так и апоптоза, выступают свободнорадикальные процессы, в число которых входит перекисное окисление липидов, продукты которого обладают цитотоксическим действием. Источником образования свободных радикалов при воспалении являются активные формы кислорода, представленные несколькими формами (супероксиданион радикал кислорода, перекись водорода, гидроксильный радикал и другие), которые обладают высокой реакционной биомолекулами. способностью и взаимодействуют Хемомодифицирующая 38 активность, с различными достигающая максимума у гидроксильного радикала, является причиной цитотоксического действия активных форм кислорода и последующей гибели клеток, деструкции ткани и развития воспаления. В организме контроль над активностью свободнорадикальных процессов осуществляет многокомпонентная антиоксидантная система. Наиболее важными ферментами антиоксидантной системы являются супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионтрансфераза, глутатионпероксидаза и другие, катализирующие реакции обезвреживания и утилизации различных форм активного кислорода и липоперекисей. Исходя из того, что в патогенезе пародонтита ведущую роль в гибели клеток и повреждении ткани пародонта играют свободные радикалы и другие экзо- и эндотоксины, оказывающие цитотоксическое действие нами изучена распространенность значимых полиморфизмов генов супероксиддисмутазы (мутация Ala16Val), каталазы (мутация 262С/Т), глутатион S-трансферазы (мутации Ile105Val и Ala114Val) у больных с пародонтитом и определён их вклад в развитие заболевания. Распределение частот аллелей и генотипов по полиморфным маркерам генов в исследуемых группах соответствовало распределению ХардиВайнберга (табл. 3.1). Марганцевая супероксиддисмутаза (Mn SOD), кодируемая геном SOD2, играет важную роль в ингибировании свободнорадикальных процессов, обеспечивая дисмутацию супероксид анион радикала кислорода в митохондриях и вовлекается в патогенез онкологических, сердечнососудистых, нейродегенеративных и некоторых других заболеваний. Наиболее значимой мутацией в гене SOD2 является замена (С47Т), приводящая к снижению активности фермента повреждаемостью тканей при окислительном стрессе. 39 и повышенной Таблица 3.1. Частота встречаемости аллелей и генотипов по изучаемым полиморфизмам Выборка 1 Ген/ полиморфизм 2 Частота генотипов, % Частота аллелей 3 4 5 6 7 СС СТ ТТ С Т 55,36 21,43 23,21 (n=31) (n=12) (n=13) 37,5 25,0 37,5 (n=18) (n=12) (n=18) АА GA GG 50,0 32,86 17,14 (n=35) (n=23) (n=12) 58,2 41,8 (n=28) (n=23) GG Доноры (n=56) Больные SOD2 Доноры пародонтитом ген каталазы -262 C/T (n=56) Больные пародонтитом (n=60) Больные пародонтитом 8 9 4 1,42) 0,56 0,44 A G 0,66 0,34 GА АА G А 46,7 40 13,3 (n=24) (n=8) 0,71 0,36 трансферазы (n=28) P1/Ile105Val(31 42,6 48,9 8,5 (n=20) (n=23) (n=4) СС СТ ТТ 80 20 0 трансферазы (n=48) (n=12) (n=0) P1/Ala114Val 76,6 16,6 6,7 (341C>T) (n=46) (n=10) (n=4) ген глутатион S- 3A>G) ген глутатион что S- 1,13 (0,89- 0,23 (n=60) Показано, 0,34 0,77 (n=47) Доноры 0,66 0 (n=51) Доноры аллель (95%) С47Т (n=48) Больные χ 0,95 пародонтитом (n=70) OR 2 0,17 0,30 3 0,27 0,5 (0,660,38) 0,03 5 0,93 (0,94- 0,67 0,33 С Т 0,90 0,10 0,03 0,93) 4 0,04 6 1,06 (1,011,11) частота встречаемости 0,85 0,15 0,45 патологического аллеля полиморфизма С47Т (Ala16Val) гена SOD2 в группе больных пародонтитом на 40 % выше показателей контрольной выборки. Для больных с пародонтитом также характерно увеличение степени гетерозиготности. 40 Результаты нашего исследования наглядно подтверждают вклад мутантного аллеля С гена SOD2 в формирование патологического фенотипа при пародонтите (табл. 3.1). Каталаза – главный антиоксидантный фермент, участвующий в разложении пероксида водорода. Нарушения каталазной активности связывают с развитием ишемической болезни сердца, астмы, диабета, ревматоидного артрита и других. Наиболее значимая мутация (-262 C/T) в гене каталазы (САТ) влияет на ЭА гена. Изучение частоты аллелей и генотипов полиморфизма – 262 C/T гена каталазы в выборках здоровых людей и больных пародонтитом приведены в таблице 3.1. У больных пародонтитом по изучаемому полиморфизму гена каталазы доминирует гетерозиготный генотип (GA). Участие мутантного аллеля С гена каталазы в формирование патологического фенотипа при пародонтите не подтверждено. Ген GSTP1 кодирует p1-глутатион S-трансферазу, участвующую в детоксикации канцерогенов, липидов, продуктов свободнорадикальных реакций. Полиморфизмы Ile105Val (313A>G) и 341C>T гена GSTP1 обуславливают продукцию фермента с пониженной активностью. Полученные полиморфизмов нами данные о частотах распространенности гена GSTP1 свидетельствуют об относительно низкой распространённости полиморфизма Ile105Val (313A>G) и достоверном значимом возрастании частот встречаемости полиморфизма Ala114Val 341C>T в выборках обследуемых, и указывают не только на возможное участие полиморфизма Ala114Val 341C>T в патогенезе пародонтита, но и на наличие внутрипопуляционных особенностей. Таким образом, при пародонтите усиливаются свободнорадикальные процессы, наблюдаемые по интенсификации процессов перекисного окисления липидов, возрастает фосфолипазная активность и понижается активность супероксидисмутазы в крови. Полученные данные, свидетельствующие о важной роли в реализации патогенеза заболевания 41 свободнорадикального механизма, обуславливающего высокий риск повреждения клеточных мембран и развития деструктивных процессов и гибели клеток, являются основанием для исследования генетической составляющей, связанной с наличием полиморфизмов в генах ферментов, влияющих на эффективность антиоксидантной защиты в организме больных. Показано, что риск развития пародонтита повышается при наличии в геномах людей мутаций в гене SOD2. При этом в геномах больных с пародонтитом выявлена повышенная частота встречаемости патологических аллелей генов как супероксиддисмутазы, так и глутатион S-трансферазы. Показана ассоциация с риском развития пародонтита в первую очередь мутации Ala16Val гена супероксиддисмутазы и Ala114Val гена глутатион Sтрансферазы. Изменение активности ферментов, участвующих в обезвреживании и утилизации генотоксических соединений, включая активные формы кисолорода и липоперекиси, определяет риск повреждения ключевых биомолекул (нуклеиновых кислот, белков, липидов) и степень деструктивных процессов, приводящих функциональной к активности повреждению при клеток пародонтите. В и нарушению случае их патогенеза пародонтита генетическая составляющая заболевания может быть связана с изменением активности антиоксидантных ферментов, и формирования пародонтогенного патологического фенотипа. 3.2. Изучение особенностей полиморфизма С47Т гена SOD2 в зависимости от тяжести заболевания На основе данных по полиморфизму генов антиоксидантных ферментов и интенсивности перекисного окисления липидов плазмы крови выделены группы больных хроническим пародонтитом, имеющие и не имеющие полиморфизм С47Т гена SOD2. 42 В исследуемой группе доноров частота аллеля С составила 66% и Т – 34%, в группе больных с пародонтитом – 56 % и 44%, соответственно. При этом распространенность гомозигот по патологическому аллелю Т составила 23,21 % в группе контроля и 25,0 % в группе больных пародонтитом. При этом отмечается значительный рост патологического аллеля в группе больных пародонтитом за счет нахождения его в гетерозиготном состоянии. На основании частот распределения аллелей гена SOD2 выборка больных пародонтитом в геноме которых не содержится патологический аллель Т составила 18 человек, в то время как выборка пациентов, содержащих аллель Т в гомозиготном состоянии составила 18 человек и в гетерозиготном состоянии 12 человек. Обнаружено, что у больных с хроническим генерализованным пародонтитом, имеющих генотип СС, уровень МДА был повышен на 48,44 % (р<0,05). При наличии патологического аллеля С47Т в крови пациентов, имеющих генотипы СТ и ТТ, содержание МДА последовательно возрастало и составляло 59,13 и 83,11 % (р<0,05) соответственно. Во время традиционного лечения пародонтита (через 5 суток) у пациентов, имеющих генотип СС, содержание ТБК-активных продуктов в плазме крови по сравнению с нормой сохранялось повышенным 42,33 % (р<0,05), а через 10 суток – на 37,33 % (р<0,05). В тоже время у пациентов с генотипами СТ и ТТ уровень МДА в крови поддерживался на более высоком уровне продолжительное время. Указанные факты подтверждают важную роль процессов перекисного окисления липидов в патогенезе хронического генерализованного пародонтита. При этом наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2 сопряжено с выраженными мембранодеструктивными процессами в ткани пародонта и пациенты носители патологического аллеля С47Т гена супероксиддисмутазы требуют более эффективной терапии. В группе больных, имеющих генотип СС, ткани толерантностью пародонта к характеризуются липопероксидации, 43 относительно менее высокой выраженными мембранодестабилизирующими явлениями в тканевых структурах пародонта и заболевание у них протекает в более легкой форме. Таким образом, разделение пациентов на две группы в зависимости от наличия или отсутствия патологического аллеля С47Т в гене SOD2, и как следствие, наличия или отсутствия генетической предрасположенности к перекисному окислению липидов целесообразно, поскольку отражает патогенетические особенности течения заболевания. 44 ГЛАВА 4 ДИНАМИКА СОСТОЯНИЯ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА И ЛИПИДМОДИФИЦИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕКСИДОЛА В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАРОДОНТИТА У ПАЦИЕНТОВ БЕЗ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ 4.1. Генетические особенности кодирования антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести первой контрольной и третьей основной групп После проведения генетического анализа на наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2 осуществляли отбор пациентов в группы первую контрольную и третью основную по признаку отсутствия полиморфизма данного гена. В данную группу были включены пациенты с хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести с генотипом СС гена SOD2, что свидетельствовало об отсутствии патологического аллеля данного гена. 4.2. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов первой контрольной группы С целью объективизации оценки состояния тканей пародонта у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести использовали общепринятые индексальные показатели, которые включали РМА – папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс; API – индекс гигиены апроксимальных поверхностей; SBI – индекс кровоточивости зубодесневой борозды; ПИ – пародонтальный индекс (табл. 4.1). 45 Таблица 4.1 Индексальные показателей состояния тканей пародонта на фоне группа хронического пародонтита средней степени тяжести Показатель PMA, % I API, % I SBI, % I ПИ, баллы I Сроки лечения Норма До лечения 5 сутки 10 сутки 1,21±0,02 27,58±2,08* 25,68±1,25* 17,68±0,90* 3,71±0,03 67,41±4,07* 60,66±3,40* 23,68±1,22* 3,62±0,09 58,23±4,65* 57,02±2,28* 25,77±1,61* 0,07±0,03 3,62±0,20* 3,36±0,19* 2,52±0,12* Примечание: *- достоверность по отношению к норме при P <0,05. Проведенные исследования показали, что все используемые индексы у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести существенно отличались от нормальных значений. Было выявлено, что на момент обращения данных пациентов в клинику до начала лечения показатель РМА превышал норму на 2179,34 % (р<0,05). Индекс гигиены апроксимальных поверхностей также существенно превосходил норму – на 1716,98 % (р<0,05) (рис. 4.1). 3000 2500 норма 2000 исход 1500 5 сутки 1000 10 сутки 500 0 РМА I API I Рис. 4.1. Динамика РМА и API при хроническом пародонтите средней степени тяжести (I – контрольная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05). 46 Индекс кровоточивости зубодесневой борозды достоверно превышал нормальные значения у данной группы пациентов на 1508,56 % (р<0,05). Пародонтальный индекс был выше нормы в 51,7 раз! На пятые сутки после начала мероприятий традиционной терапии пациентам с хроническим пародонтитом отмечалась положительная динамика, которая усиливалась к десятым суткам терапии. Так, через пять дней после начала лечения проксимально-маргинально-альвеолярный индекс снижался относительно исхода, но оставался выше нормы на 2022,31 % (р<0,05). Показатель API также оставался выше нормального на 1535,04% (р<0,05). Индекс кровоточивости был выше нормы на 1475,14 % (р<0,05) (рис. 4.2). 1800 1600 1400 1200 SBI I 1000 800 600 400 200 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 4.2. Динамика SBI при хроническом пародонтите средней степени тяжести (I – контрольная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05) Пародонтальный индекс на фоне традиционной терапии снижался относительно исходного, но оставался выше нормы на 4700,00 % (р<0,05) (рис. 4.3). 47 6000 5000 4000 ПИ I 3000 2000 1000 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 4.3. Пародонтальный индекс при хроническом пародонтите средней степени тяжести (I – контрольная группа; изменения показателя достоверны относительно нормы при р<0,05) Через десять суток после начала лечебных мероприятий все исследуемые показатели состояния тканей пародонта продолжали улучшаться относительно исхода. Так, показатель РМА был выше нормы на 1361,16 % (р<0,05), достоверно снижаясь относительно исхода. Индекс гигиены апроксимальных поверхностей был выше нормы только на 538,24 % (р<0,05). Индекс нормального на кровоточивости 611,88 % зубодесневой (р<0,05), но борозды достоверно был ниже выше исхода. Пародонтальный индекс на данном сроке терапии был выше нормального в 36 раз, достоверно снижаясь относительно исхода. Таким образом, на основании оценки индексальных показателей можно заключить, что применение традиционной терапии значительно улучшало состояние тканей пародонта, но все используемые индексы значительно отличались от нормальных даже на конечном этапе традиционной терапии. Данный факт выявляет необходимость исследования этиопатогенетических основ данных изменений, на основании чего разработки новых схем терапии с целью улучшения ее результатов. 48 4.3. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов первой контрольной группы Изучение маркеров интенсивности липопереокисления в слюне и плазме крови проводили по оценке содержания в них продуктов ПОЛ, также оценивали активность антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы (табл. 4.2). Таблица 4.2 Содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в слюне больных хроническим пародонтитом (M±m) группа Этапы лечения Норма МДА, мкмоль/л I 0,291±0,099 1,040±0,042* 0,733±0,028* 0,664±0,044* Супероксиддисмутаза, усл.ед./мг белка I 1,20±0,20 3,04±0,15* 2,23±0,09* 1,45±0,04* Показатель До лечения 5-е сутки 10-е сутки Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при (p<0,05) Проведенные исследования показали, что при хроническом пародонтите средней степени тяжести уровень вторичных продуктов ПОЛ в слюне возрастал на 257,39 % (р<0,05) по сравнению с нормой. Активность супероксиддисмутазы в слюне на момент обращения пациентов в клинику была повышена на 153,33 % (р<0,05) (рис. 4.4). 49 400 * 350 300 * * 250 * норма исход * 200 5-е сутки 150 * 10-е сутки 100 50 0 МДА I СОД I Рис. 4.4. Содержание МДА и активность СОД в слюне пациентов с хроническим пародонтитом (I – контрольная группа; * - достоверные изменения относительно нормы) На пятые сутки после начала традиционной терапии хронического пародонтита содержание малонового диальдегида, вторичного продукта ПОЛ, в слюне достоверно снижалось относительно исхода, но оставалось выше нормы на 151,89 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы на данном этапе динамического наблюдения также снижалась относительно исхода, оставаясь выше нормы на 85,83 % (р<0,05). К концу лечения содержание малонового диальдегида в слюне пациентов с хроническим пародонтитом было достоверно выше нормы на 122,18 % (р<0,05), но продолжало снижаться относительно исходного показателя. Уровень активности супероксиддисмутазы на фоне применения традиционной терапии продолжал снижаться, но оставался повышенным относительно нормы на 20,83 % (р<0,05). Изучение маркеров интенсивности ПОЛ в плазме крови, а также активности антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом повышение вывило активности существенную активизацию мембранодестабилизирующих 50 процессов ПОЛ, фосфолипаз на системном уровне при снижении активности собственных антиоксидантных ферментов. Так, при обращении в стоматологическую клинику у данной категории пациентов в плазме крови регистрировали увеличение содержания первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов по сравнению с нормой на 77,27 и 48,44 % (р<0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 в плазме крови возрастала на 88,24 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы достоверно снижалась относительно нормы на 14,58 % (р<0,05). Таблица 4.3 группа Содержание продуктов ПОЛ и активность фосфолипазы А2 в плазме крови больных хроническим пародонтитом (M±m) Показатель ДК, усл.ед./мг липидов I МДА, нмоль/г белка I Фосфолипаза А2, мкмоль/с/г белка I Супероксиддисмутаза, усл.ед./мг белка I Этапы лечения Норма До лечения 5-е сутки 10-е сутки 0,22±0,02 0,39±0,03* 0,34±0,03* 0,28±0,02* 2,25±0,11 3,34±0,13* 3,20±0,12* 3,09±0,10* 0,068±0,003 0,128±0,007* 0,108±0,005* 0,110±0,008* 2,95±0,15 2,52±0,09* 2,62±0,07* 2,74±0,13 Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при (p<0,05) На пятые сутки после начала терапии содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом снижалось относительно исхода но было достоверно выше нормы на 54,55 и 29,33 % (р<0,05) соответственно. Фосфолипазная активность на данном этапе наблюдения была выше нормы на 58,82 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы оставалась ниже нормального значения на 11,19 % (р<0,05) (рис. 4.5). 51 250 200 * * * 150 * * * * * * норма исход 5-е сутки 100 10-е сутки 50 0 ДК I МДА I ФЛ А2 I Рис. 4.5. Содержание ДК, МДА и ФЛ А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом (I – контрольная группа; * - достоверные изменения относительно нормы) На десятые стуки после начала лечебных мероприятий содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме крови оставалось повышенным относительно нормы на 27,27 и 37,33 % (р<0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 также была выше нормы на 61,76 % (р<0,05). Показатель активности супероксиддисмутазы на данном сроке терапии достигал нормального значения. В заключение данной группы наблюдений, следует отметить, что при хроническом пародонтите интенсификация основных средней степени тяжести происходит липидмодифицирующих факторов, определяющих нестабильность клеточных мембран. Данные изменения регистрируются как на местном (в слюне), так и на организменном уровнях (в плазме крови). Выявлено, что интенсификация ПОЛ и активизация фосфолипазы А2 сопровождается повышением активности супероксиддисмутазы в слюне и снижением ее активности в плазме крови, что вероятно, определяется истощением резервов синтеза данного фермента при больших количествах образования супероксидных анион-радикалов. 52 4.4. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола В третьей (основной) группе пациенты в комплексе с традиционными лечебными мероприятиями получали мексидол. Исследованиями было установлено, что на фоне применения мексидола состояние тканей пародонта улучшалось уже с пятых суток терапии как и в контрольной группе. Так, на данном сроке динамического наблюдения показатель РМА был сопоставим с контролем и достоверно снижался относительно исходного, превышая норму на 1824,79 % (р<0,05). Показатель API был достоверно ниже контрольного на 17,64 % (р<0,05), несколько превышая норму (рис. 4.6). 3000 2500 норма 2000 исход 1500 * * 5 сутки 1000 10 сутки * 500 0 РМА I РМА III API I API III Рис. 4.6. Динамика РМА и API на фоне включения мексидола в терапию хронического пародонтита (I – контрольная группа, III – основная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05; * достоверные изменения относительно контроля). Индекс кровоточивости SBI был ниже контрольного на 15,22 % (р<0,05), оставаясь выше нормы на 1235,36 % (р<0,05). Наиболее существенно изменялся относительно исхода пародонтальный индекс, 53 который на данном сроке наблюдения превосходил норму на 4271,43 % (р<0,05), достоверно от контроля не отличаясь. Таблица 4.4 Показатель группа Индексальные показателей состояния тканей пародонта на фоне хронического пародонтита средней степени тяжести Сроки лечения Норма До лечения I PMA, % III 1,21±0,02 III 3,71±0,03 III 3,62±0,09 III 0,07±0,03 17,68±0,90* 23,29±0,57* 14,28±0,73* 60,66±3,40* 23,68±1,22* 49,96±1,33* 17,51±0,82* 57,02±2,28* 25,77±1,61* 48,34±2,06* 21,09±0,99* 3,36±0,19* 2,52±0,12* 3,06±0,06* 1,72±0,08* 58,23±4,65* I ПИ, баллы 25,68±1,25* 67,41±4,07* I SBI, % 10 сутки 27,58±2,08* I API, % 5 сутки 3,62±0,20* Примечание: * – достоверность по отношению к норме при P <0,05; жирный шрифт – достоверность по отношению к контролю при P <0,05. На конечном этапе динамического наблюдения (10-е стуки) все исследуемые показатели продолжали снижаться, приближаясь к норме. Так, индекс РМА был ниже контрольного на 19,22 % (р<0,05), оставаясь выше нормы. Показатель API снижался относительно контроля на 26,06 % (р<0,05). Индекс кровоточивости уменьшался относительно контроля на 18,16 % (р<0,05) (рис. 4.7). 54 1800 1600 1400 SBI I 1200 * SBI III 1000 800 600 * 400 200 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 4.7. Динамика SBI на фоне включения мексидола в терапию хронического пародонтита (I – контрольная группа, III – основная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05; * - достоверные изменения относительно контроля) Пародонтальный индекс на десятые сутки применения мексидола был достоверно ниже контрольного на 31,75 % (р<0,05) (рис. 4.8). 6000 5000 4000 ПИ I 3000 ПИ III 2000 * 1000 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 4.8. Пародонтальный индекс на фоне применения мексидола (I – контрольная группа, III – основная группа; изменения показателя достоверны относительно нормы при р<0,05. * - достоверные изменения относительно контроля) 55 Таким образом, применение мексидола в комплексной терапии хронического пародонтита средней степени тяжести показало положительный лечебный эффект, что проявилось более выраженным улучшением состояния тканей пародонта. 4.5. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола Исследование выраженности основных липидмодифицирующих факторов в слюне и плазме крови у пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола показало следующие результаты (табл. 4.5). Установлено, что использование мексидола в терапии хронического пародонтита способствовало снижению интенсивности процессов перексиного окисления в слюне пациентов. Так, было зарегистрировано уменьшение содержания малонового диальдегида в слюне на десятые сутки терапии. Данный показатель был ниже контрольного на 30,12 % (р<0,05) (рис.4.9). 400 350 300 норма 250 200 исход * 150 * 100 5-е сутки 10-е сутки 50 0 МДА I МДА III СОД I СОД III Рис. 4.9. Содержание МДА и активность СОД в слюне пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (I – контрольная группа, III – основная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) 56 Активность супероксиддисмутазы слюны у данной группы пациентов на пятые сутки терапии мексидолом была также сопоставима с данными контрольной группы исследования, оставаясь выше нормы на 70,0 % (р<0,05). На десятые сутки терапии данный показатель был ниже контроля на 12,41 % (р<0,05), достигая нормальных цифр. Таблица 4.5 группа Содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в слюне больных хроническим пародонтитом (M±m) Показатель Этапы лечения Норма До лечения 5-е сутки 10-е сутки 0,733±0,028* 0,664±0,044* III 0,654±0,010* 0,464±0,016* I 2,23±0,09* 1,45±0,04* 2,04±0,03* 1,27±0,15 I МДА, мкмоль/л 0,291±0,099 Супероксиддисмутаза (усл.ед./мг белка) 1,040±0,042* 1,20±0,20 3,04±0,15* III Примечание: * – достоверность по отношению к норме при P <0,05; жирный шрифт – достоверность по отношению к контролю при P <0,05. Изучение интенсивности процессов ПОЛ в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола показало, что на пятые сутки терапии содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида было сопоставимо с данными контрольной группы исследования. Уровни первичных и вторичных продуктов ПОЛ снижались относительно исхода (рис. 4.10). 57 250 200 150 норма * * 5-е сутки * 100 исход 10-е сутки 50 0 ДК I ДК III МДА I МДА III ФЛ А2 I ФЛ А2 III Рис. 4.10. Содержание ДК, МДА и ФЛ А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (I – контрольная группа, III – основная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) Активность фосфолипазы А2 на пятые сутки применения мексидола также снижалась относительно исхода, оставаясь выше нормы на 38,24 % (р<0,05), как и в контрольной группе исследования. Показатель активности СОД на данном сроке наблюдения был выше контроля на 12,21 % (р<0,05) и достигал нормальных значений. На десятые сутки использования мексидола в комплексной терапии хронического пародонтита было зарегистрировано снижение содержания первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме крови относительно контрольных данных на 25,0 и 17,48 % (р<0,05) соответственно. 58 Таблица 4.6 Показатель группа Содержание продуктов ПОЛ и активность фосфолипазы А2 в плазме крови больных хроническим пародонтитом (M±m) Этапы лечения Норма До лечения 5-е сутки 10-е сутки 0,34±0,03* 0,28±0,02* III 0,30±0,01* 0,21±0,01 I 3,20±0,12* 3,09±0,10* III 2,87±0,13* 2,55±0,11 I 0,108±0,005* 0,110±0,008* III 0,094±0,004* 0,078±0,003 I 2,62±0,07* 2,74±0,13 2,94±0,09 2,91±0,11 I ДК, усл.ед./мг липидов МДА, нмоль/г белка Фосфолипаза А2 (мкмоль/с/г белка) Супероксиддисмутаза (усл.ед./мг белка) 0,22±0,02 0,39±0,03* 2,25±0,11 0,068±0,003 3,34±0,13* 0,128±0,007* 2,95±0,15 2,52±0,09* III Примечание: * – достоверность по отношению к норме при P <0,05; жирный шрифт – достоверность по отношению к контролю при P <0,05. Следует отметить, что данные показатели статистически значимых отличий от нормы. Активность фосфолипазы А2 на данном сроке терапии достигала нормальных значений и была ниже таковой в контроле на 29,09 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы на данном этапе наблюдения была сопоставима с нормой и контролем (рис. 4.11). 59 120 * 100 80 СОД I 60 СОД III 40 20 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 4.11. Активность СОД в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (I – контрольная группа, III – основная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) Таким образом, использование мексидола в терапии хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести показало положительный эффект препарата в коррекции выраженности основных мембранодестабилизирующих факторов, который регистрировался к концу терапии. Следует отметить, что при применении мексидола показатели интенсивности ПОЛ, фосфолипазной активности и активности антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы на конечном этапе наблюдения достигали нормальных цифр. 60 ГЛАВА 5 ДИНАМИКА СОСТОЯНИЯ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА И ЛИПИДМОДИФИЦИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕКСИДОЛА В ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАРОДОНТИТА У ПАЦИЕНТОВ С ГЕНЕТИЧЕСКИМИ ОСОБЕННОСТЯМИ КОДИРОВАНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ 5.1. Генетические особенности кодирования антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести второй контрольной и четвертой основной групп После проведения генетического анализа на наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2 осуществляли отбор пациентов в группы вторую контрольную и четвертую основную по признаку наличия полиморфизма данного гена. В данную группу были включены пациенты с хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести с генотипом ТТ гена SOD2, что свидетельствовало наличии патологического аллеля данного гена в гомозиготном состоянии. 5.2. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов первой контрольной группы Во второй группе пациентов с хроническим пародонтитом, имеющих генетические особенности кодирования антиоксидантных ферментов, исследовали состояние тканей пародонта и динамику индексальных показателей на фоне традиционной терапии (табл. 5.1). 61 Таблица 5.1 Индексальные показателей состояния тканей пародонта на фоне хронического пародонтита средней степени тяжести группа Сроки лечения Норма PMA, % II 1,21±0,02 30,27±2,10* 25,83±1,19* 22,18±1,11* API, % II 3,71±0,03 71,69±4,03* 58,54±4,00* 33,46±1,41* SBI, % II 3,62±0,09 61,97±4,60* 53,31±2,10* 28,10±1,43* ПИ, баллы II 0,07±0,03 3,94±0,20* 3,48±0,23* 2,79±0,12* Показатель До лечения 5 сутки 10 сутки Примечание: *- достоверность по отношению к норме при P <0,05. Проведенные исследования показали, что все используемые индексы у пациентов с хроническим пародонтитом средней степени тяжести существенно отличались от нормальных значений и превосходили таковые у пациентов с наиболее распространенным генотипом. Было выявлено, что на момент обращения данных пациентов в клинику до начала лечения показатель РМА превышал норму на 2401,65 % (р<0,05). Индекс гигиены апроксимальных поверхностей также существенно превосходил норму – на 1836,35 % (р<0,05) (рис. 5.1). 3000 2500 норма 2000 исход 1500 5 сутки 1000 10 сутки 500 0 РМА II API II Рис. 5.1. Динамика РМА и API при хроническом пародонтите средней степени тяжести (II – контрольная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05). 62 Индекс кровоточивости зубодесневой борозды достоверно превышал нормальные значения у данной группы пациентов на 1611,88 % (р<0,05). Пародонтальный индекс был выше нормы в 56,3 раз! На пятые сутки после начала мероприятий традиционной терапии пациентам с хроническим состояние тканей пародонта несколько улучшалось. Так, через пять дней после начала лечения проксимальномаргинально-альвеолярный индекс снижался относительно исхода, но оставался выше нормы на 2034,71 % (р<0,05). Показатель API также оставался выше нормального на 1577,90 % (р<0,05). Индекс кровоточивости был выше нормы на 1372,65 % (р<0,05) (рис. 5.2). 2000 1800 1600 1400 SBI II 1200 1000 800 600 400 200 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 5.2. Динамика SBI при хроническом пародонтите средней степени тяжести (II – контрольная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05) Пародонтальный индекс на фоне традиционной терапии снижался относительно исходного, но оставался выше нормы на 4871,43 % (р<0,05) (рис. 5.3). 63 7000 6000 5000 4000 ПИ II 3000 2000 1000 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 5.5. Пародонтальный индекс при хроническом пародонтите средней степени тяжести (II – контрольная группа; изменения показателя достоверны относительно нормы при р<0,05) Через десять суток после начала лечебных мероприятий все исследуемые показатели состояния тканей пародонта продолжали улучшаться относительно исхода. Так, показатель РМА был выше нормы на 1733,06 % (р<0,05), достоверно снижаясь относительно исхода. Индекс гигиены апроксимальных поверхностей был выше нормы на 801,89 % (р<0,05). Индекс нормального на кровоточивости 676,24 % зубодесневой (р<0,05), но борозды достоверно был ниже выше исхода. Пародонтальный индекс на данном сроке терапии был выше нормального в 39,9 раз (р<0,05), достоверно снижаясь относительно исхода. Таким образом, на основании оценки индексальных показателей можно заключить, что применение традиционной терапии значительно улучшало состояние тканей пародонта, но все используемые индексы значительно отличались от нормальных даже на конечном этапе традиционной терапии. Кроме того, следует отметить, что при сравнении тяжести течения по изменению индексальных характеристик состояния тканей пародонта результатов данной группы и первой контрольной в данном случае 64 установлено более выраженное поражение тканей пародонта и меньшая эффективность традиционной терапии в его коррекции. 5.3. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов второй контрольной группы Изучение маркеров интенсивности липопереокисления в слюне и плазме крови проводили по оценке содержания в них продуктов ПОЛ, также оценивали активность антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы (табл. 5.2). Таблица 5.2 Содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в слюне больных хроническим пародонтитом (M±m) группа Этапы лечения Норма МДА, мкмоль/л II 0,291±0,099 1,18±0,05* 1,02±0,03* 0,79±0,04* Супероксиддисмутаза (усл.ед./мг белка) II 1,20±0,20 1,31±0,15 1,47±0,07 1,42±0,12 Показатель До лечения 5-е сутки 10-е сутки Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при (p<0,05) Проведенные исследования показали, что при хроническом пародонтите средней степени тяжести уровень вторичных продуктов ПОЛ в слюне возрастал на 305,50 % (р<0,05) по сравнению с нормой. Активность супероксиддисмутазы в слюне на момент обращения пациентов в клинику была повышена на 9.17 % (р>0,05) (рис. 5.4). 65 450 * 400 * 350 300 * норма 250 исход 200 5-е сутки 150 10-е сутки 100 50 0 МДА II СОД II Рис. 5.5. Содержание МДА и активность СОД в слюне пациентов с хроническим пародонтитом (II – контрольная группа; * - достоверные изменения относительно нормы) На пятые сутки после начала традиционной терапии хронического пародонтита содержание малонового диальдегида, вторичного продукта ПОЛ, в слюне достоверно снижалось относительно исхода, но оставалось выше нормы на 250.52 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы на данном этапе динамического наблюдения возрастала относительно исхода, оставаясь в пределах нормальных значений. К концу лечения содержание малонового диальдегида в слюне пациентов с хроническим пародонтитом было достоверно выше нормы на 171,48 % (р<0,05), но продолжало снижаться относительно исходного показателя. Уровень активности супероксиддисмутазы на фоне применения традиционной терапии снижался без статистически значимых отличий от нормы. Изучение маркеров интенсивности ПОЛ в плазме крови, а также активности антиоксидантных ферментов у пациентов с хроническим пародонтитом повышение вывило активности существенную активизацию мембранодестабилизирующих 66 процессов ПОЛ, фосфолипаз на системном уровне при снижении активности собственных антиоксидантных ферментов. Так, при обращении в стоматологическую клинику у данной категории пациентов в плазме крови регистрировали увеличение содержания первичных и вторичных продуктов перекисного окисления липидов по сравнению с нормой на 140,91 и 83,11 % (р<0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 (р<0,05). Активность в плазме крови возрастала на 155,88 % супероксиддисмутазы достоверно снижалась относительно нормы на 33,22 % (р<0,05). Таблица 5.3 Содержание продуктов ПОЛ и активность фосфолипазы А2 в плазме крови больных хроническим пародонтитом (M±m) группа Этапы лечения Норма ДК, усл.ед./мг липидов II 0,22±0,02 0,53±0,03* 0,48±0,03* 0,39±0,02* МДА, нмоль/г белка II 2,25±0,11 4,12±0,11* 4,05±0,10* 3,60±0,09* Фосфолипаза А2, мкмоль/с/г белка II 0,068±0,003 0,174±0,008* 0,174±0,004* 0,147±0,008* Супероксиддисмутаза, усл.ед./мг белка II 2,95±0,15 1,97±0,08* 1,99±0,09* 2,31±0,12* Показатель До лечения 5-е сутки 10-е сутки Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при (p<0,05) На пятые сутки после начала терапии содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом снижалось относительно исхода но было достоверно выше нормы на 118,18 и 80,00 % (р<0,05) соответственно. Фосфолипазная активность на данном этапе наблюдения была выше нормы 67 на 155,88 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы оставалась ниже нормального значения на 32,54 % (р<0,05) (рис. 5.5). 300 * 250 * * * 200 * * * * норма * исход 150 5-е сутки 10-е сутки 100 50 0 ДК II МДА II ФЛ А2 I Рис. 5.5. Содержание ДК, МДА и ФЛ А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом (II – контрольная группа; * - достоверные изменения относительно нормы) На десятые стуки после начала лечебных мероприятий содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме крови оставалось повышенным относительно нормы на 77,27 и 60,00 % (р<0,05) соответственно. Активность фосфолипазы А2 также была выше нормы на 116,18 % (р<0,05). Показатель активности супероксиддисмутазы на данном сроке оставался на 21,69 % (р<0,05) ниже нормального значения. В заключение данной серии наблюдений, следует отметить, что при хроническом пародонтите интенсификация основных средней степени тяжести происходит липидмодифицирующих факторов, определяющих нестабильность клеточных мембран. Данные изменения регистрируются как на местном (в слюне), так и на организменном уровнях (в плазме крови). Выявлено, что в отличие от первой контрольной группы у пациентов с генетическими особенностями кодирования антиоксидантных ферментов интенсификация ПОЛ и активизация фосфолипазы А2 не 68 сопровождается повышением активности супероксиддисмутазы в слюне, что вероятно связано с генетическим дефектом и неспособностью организма к повышению активности данного фермента как реакции компенсации. В плазме крови регистрировали не только существенное снижение активности супероксиддисмутазы, но и более выраженную интенсификацию процессов ПОЛ и фосфолипазных систем. 5.4. Динамическая оценка состояния тканей пародонта у пациентов третьей основной группы на фоне применения мексидола В четвертой традиционными (основной) лечебными группе пациенты мероприятиями в комплексе получали с мексидол. Исследованиями было установлено, что на фоне применения мексидола состояние тканей пародонта существенно улучшалось по сравнению с результатами второй контрольной группы. Так, на данном сроке динамического наблюдения показатель РМА достоверно снижался относительно контрольного на 29,04 % (р<0,05) и превышал норму на 1514,88 % (р<0,05). Показатель API был достоверно ниже контрольного на 29,77 % (р<0,05), достоверно превышая норму на 108,09 (рис. 5.6). 3000 2500 2000 * 1500 * * 1000 * норма исход 5 сутки 10 сутки 500 0 РМА II РМА IV API II API IV Рис. 5.6. Динамика РМА и API на фоне включения мексидола в терапию хронического пародонтита (II – контрольная группа, IV – основная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05; * достоверные изменения относительно контроля). 69 Индекс кровоточивости SBI был ниже контрольного на 24,65 % (р<0,05), оставаясь выше нормы на 1009,67 % (р<0,05). Пародонтальный индекс существенно изменялся относительно контроля, снижаясь на 35,92 % (р<0,05) и на данном сроке наблюдения превосходил норму на 3085,71 % (р<0,05). Таблица 5.4 Индексальные показателей состояния тканей пародонта на фоне Показатель группа хронического пародонтита средней степени тяжести Сроки лечения Норма До лечения 5 сутки 10 сутки 25,83±1,19* 22,18±1,11* IV 18,33±0,69* 15,95±0,69* II 58,54±4,00* 33,46±1,41* IV 41,11±1,15* 20,49±0,85* II 53,31±2,10* 28,10±1,43* IV 40,17±2,17* 18,55±1,15* II 3,48±0,23* 2,79±0,12* 2,23±0,05* 1,55±0,10* II PMA, % 1,21±0,02 API, % 3,71±0,03 SBI, % ПИ, баллы 3,62±0,09 0,07±0,03 30,27±2,10* 71,69±4,03* 61,97±4,60* 3,94±0,20* IV Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при p<0,05; жирный шрифт – достоверность отличия по отношению к контролю при p<0,05. На конечном этапе динамического наблюдения (10-е стуки) все исследуемые показатели уменьшались относительно контроля, но были выше таковых в норме. Так, индекс РМА был ниже контрольного на 28,09 % (р<0,05), оставаясь выше нормы. Показатель API снижался относительно 70 контроля на 38,76 % (р<0,05). Индекс кровоточивости уменьшался относительно контроля на 33,99 % (р<0,05) (рис. 5.7). 2000 1800 1600 1400 SBI II 1200 SBI IV 1000 * 800 600 400 * 200 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 5.7. Динамика SBI на фоне включения мексидола в терапию хронического пародонтита (II – контрольная группа, IV – основная группа; изменения всех показателей относительно нормы достоверны при р<0,05; * - достоверные изменения относительно контроля) Пародонтальный индекс на десятые сутки применения мексидола был достоверно ниже контрольного на 44,44 % (р<0,05) (рис. 5.8). 6000 5000 4000 ПИ II 3000 ПИ IV * 2000 * 1000 0 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 5.8. Пародонтальный индекс на фоне применения мексидола (II – контрольная группа, IV – основная группа; изменения показателя достоверны относительно нормы при р<0,05. * - достоверные изменения относительно контроля) 71 Таким образом, применение мексидола в комплексной терапии хронического пародонтита средней степени тяжести у пациентов с генетическими особенностями кодирования антиоксидантных ферментов способствовало существенному улучшению состояния пародонта относительно результатов контрольной группы. Положительный лечебный эффект препарата регистрировался уже к пятым суткам его использования. 5.5. Состояние липидмодифицирующих факторов слюны и плазмы крови у пациентов четвертой основной группы на фоне применения мексидола Исследование выраженности основных липидмодифицирующих факторов в слюне и плазме крови у пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола показало следующие результаты (табл. 5.5). Показатель МДА, мкмоль/л Супероксиддисмутаза (усл.ед./мг белка) группа Таблица 5.5 Содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в слюне больных хроническим пародонтитом (M±m) Этапы лечения Норма До лечения 5-е сутки 10-е сутки 1,02±0,03* 0,79±0,04* IV 0,76±0,01* 0,43±0,02* II 1,47±0,07 1,42±0,12 1,19±0,03 1,32±0,17 II 0,291±0,099 1,18±0,05* 1,20±0,20 1,31±0,15 IV Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при p<0,05; жирный шрифт – достоверность отличия по отношению к контролю при p<0,05. 72 Установлено, что использование мексидола в терапии хронического пародонтита способствовало снижению интенсивности процессов перекисного окисления в слюне пациентов. Так, было зарегистрировано уменьшение содержания малонового диальдегида в слюне на пятые и десятые сутки терапии. Данный показатель был ниже контрольного на 25,49 и 45,57 % (р<0,05) соответственно (рис.5.9). 450 400 350 300 * норма 250 * исход 200 5-е сутки 150 10-е сутки 100 50 0 МДА II МДА IV СОД II СОД IV Рис. 5.9. Содержание МДА и активность СОД в слюне пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (II – контрольная группа, IV – основная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) Активность супероксиддисмутазы слюны у данной группы пациентов на пятые и десятые сутки терапии мексидолом была сопоставима с результатами контрольной группы исследования и статистически значимо от нормы не отличалась. Изучение интенсивности процессов ПОЛ в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола показало, что на пятые сутки терапии содержание диеновых конъюгатов было ниже контроля на 27,08 % (р<0,05) и выше нормы на 59,09 % (р<0,05). Показатель малонового диальдегида был ниже контроля на 30,37 % (р<0,05) (рис. 5.10). 73 Показатель малонового диальдегида на данном этапе наблюдения достигал нормальных значений. 300 250 200 норма * 150 исход * * * * 5-е сутки 10-е сутки 100 50 0 ДК II ДК IV МДА II МДА IV ФЛ А2 II ФЛ А2 IV Рис. 5.10. Содержание ДК, МДА и ФЛ А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (II – контрольная группа, III – опытная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) Активность фосфолипазы А2 на пятые сутки применения мексидола также снижалась относительно контроля на 39,08 % (р<0,05), оставаясь выше нормы на 55,88 % (р<0,05). Показатель активности супероксиддисмутазы в плазме крови пациентов данной группы на пятые сутки применения мексидола в терапии хронического генерализованного пародонтита был выше контрольного на 19,60 % (р<0,05), оставаясь ниже нормы на 19,32 % (р<0,05). 74 Показатель группа Таблица 5.6 Содержание продуктов ПОЛ и активность фосфолипазы А2 в плазме крови больных хроническим пародонтитом (M±m) Этапы лечения Норма До лечения 5-е сутки 10-е сутки 0,48±0,03* 0,39±0,02* III 0,35±0,02* 0,26±0,01 I 4,05±0,10* 3,60±0,09* III 2,82±0,13* 2,62±0,10 I 0,174±0,004* 0,147±0,008* III 0,106±0,004* 0,079±0,003 I 1,99±0,09* 2,31±0,12* 2,38±0,10* 2,76±0,07 I ДК, усл.ед./мг липидов МДА, нмоль/г белка Фосфолипаза А2, мкмоль/с/г белка Супероксиддисмутаза, усл.ед./мг белка 0,22±0,02 0,53±0,03* 2,25±0,11 0,068±0,003 4,12±0,11* 0,174±0,008* 2,95±0,15 1,97±0,08* III Примечание: * – достоверность отличия по отношению к норме при p<0,05; жирный шрифт – достоверность отличия по отношению к контролю при p<0,05. На десятые сутки использования мексидола в комплексной терапии хронического пародонтита было зарегистрировано снижение содержания первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме крови относительно контрольных данных на 33,33 и 27,22 % (р<0,05) соответственно. Следует отметить, что данные показатели были сопоставимы с нормой. Активность фосфолипазы А2 на данном сроке терапии была ниже контрольной на 46,26 % (р<0,05). Активность супероксиддисмутазы на данном этапе наблюдения была в пределах нормы и достоверно выше контроля на 19,48 % (р<0,05) (рис. 5.11). 75 120 * 100 * 80 СОД II 60 СОД IV 40 20 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 5.11. Активность СОД в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом на фоне применения мексидола (II – контрольная группа, IV – основная группа; * - достоверные изменения относительно контроля) Таким образом, использование мексидола в терапии хронического пародонтита средней степени тяжести у пациентов с генетическими особенностями кодирования антиоксидантных ферментов показало высокую эффективность препарата в коррекции выраженности основных мембранодестабилизирующих факторов. Отметим, что результаты четвертой основной группы были достоверно лучше таковых во второй контрольной уже с пятых суток применения препарата. В заключение данной серии клинических наблюдений следует отметить, что наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2, в особенности при гомозиготном состоянии патологического аллеля является фактором существенно утяжеляющем течение патологического процесса. Отметим, что у данных пациентов отмечались значительные патологические изменения состояния тканей пародонта, о чем свидетельствовал рост индексальных показателей. Исследованиями была установлена значительная интенсификация процессов ПОЛ в слюне и плазме крови данных пациентов, 76 а также их недостаточное снижение на фоне применения традиционной терапии. Данные явления, вероятно, и определяют высокую активность мембранодеструктивных процессов в тканях пародонта, утяжеление течения пародонтита и недостаточную эффективность лечебных мероприятий в отсутствии специфической патогенетической терапии. Показано, что применение мексидола для лечения хронического генерализованного пародонтита у данной группы пациентов существенно изменяло интенсивность процессов ПОЛ в организме, что приводило к быстрому и достоверному улучшению состояния тканей пародонта, что является дополнительным подтверждением выдвинутой гипотезы о значимости полиморфизма С47Т в гене SOD2 в патогенезе хронического генерализованного пародонтита. 77 ОБСУЖДЕНИЕ Проблема хронического генерализованного пародонтита в настоящее время бесспорно склонностью пародонта, к является актуальной, прогрессированию, трудностью в что определяется распространенностью достижении устойчивой высокой воспалений ремиссии, их полиэтиологичностью, а также увеличением распространенности ее у лиц молодого возраста с атрофическими и тяжелыми деструктивными изменениями пародонта, низкой доступностью пародонтологической помощи большей массе населения (Грудянов А. И., Безрукова И.В., 2002; Цепов Л.М., 2006; Акулович А.В., 2009). По сложности и распространенности данная патология сопоставима и за рубежом и в России (Григорьян А.С. и др., 2004; Грудянов А. И., Безрукова И.В., 2002; Цепов А.В. и др., 2010), уступая лидерство лишь кариесу (Аболмасов Н. Г. и др., 2003; Янушевич О.О., 2008, 2010). Особою роль в патогенезе хронического пародонтита как одного из ведущих механизмов играет свободно-радикальный процесс перекисного окисления липидов, активизация которого на фоне истощения антиоксидантного потенциала приводит к мембранодестабилизирующим явлениям – одному из основных триггеров развития и прогрессирования патологии (Владимиров Ю.А., 2002; Грудянов А. И. и др., 2002; Ипатова О.М., 2005; Власов А.П. и др., 2012). Но с другой стороны, научные данные последних лет свидетельствуют о том, что развитие и прогрессирование заболевания во многом связано с полиморфизмом генов (Максимовский Ю.М. и др., 2006; Царев В.Н. и др., 2011; Сафанова А.В. и др. 2011). Изучение молекулярных механизмов на генетическом уровне позволит глубже вскрыть патогенез пародонтита, что вооружит медиков знаниями, которые позволят пересмотреть патогенетические схемы терапии (Зорина О.А., Борискина О.А., 2012). 78 Целью данного исследования явилось определение сопряженности оксидативного стресса антиоксидантных в ассоциации ферментов с полиморфизмом (супероксиддисмутазы (СОД), генов каталазы, глутатионтрансферазы) с воспалительным процессом пародонта, на основе чего выделение патогенетических вариантов течения хронического пародонтита и разработки целесообразных схем лечения. Для решения поставленных задач были проведены клинические исследования 72 больных (30 мужчин и 42 женщины) хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести в возрасте от 30 до 50 лет с давностью заболевания от 5 до 12 лет, проходившие лечение в Республиканской стоматологической поликлинике г. Саранска. В зависимости от генотипа и схемы терапии пациенты были распределены на четыре группы, сопоставимые по возрастному и гендерному составу и по тяжести заболевания. Пациенты проходили комплексное обследование и генетический скрининг на предмет полиморфизма генов супероксиддисмутазы (мутация Ala16Val), каталазы (мутация 262С/Т), глутатион S-трансферазы (мутации Ile105Val и Ala114Val) при обращении в клинику, в процессе лечения и по окончанию терапии: стоматологическое, клинико-лабораторное, рентгенологическое, биохимическое и функциональное. Для установления роли исследуемых генов хроническом в формировании патологического фенотипа при генерализованном пародонтите генетический скрининг проходили 70 здоровых доноров. Проведенные исследования показали, что частота встречаемости патологического аллеля полиморфизма С47Т (Ala16Val) гена SOD2 в группе больных пародонтитом на 40 % выше показателей контрольной выборки. Для больных с пародонтитом также характерно увеличение степени гетерозиготности. Марганцевая супероксиддисмутаза (Mn SOD), кодируемая геном SOD2, играет важную роль в ингибировании свободнорадикальных процессов, обеспечивая дисмутацию супероксид анион радикала кислорода в митохондриях и вовлекается в патогенез онкологических, сердечно79 сосудистых, нейродегенеративных и некоторых других заболеваний. Наиболее значимой мутацией в гене SOD2 является замена (С47Т), приводящая к снижению активности фермента и повышенной повреждаемостью тканей при окислительном стрессе (Rosenblum J., 1996). Результаты нашего исследования достоверно подтверждают вклад мутантного аллеля С гена SOD2 в формирование патологического фенотипа при пародонтите. Каталаза – главный антиоксидантный фермент, участвующий в разложении пероксида водорода. Нарушения каталазной активности связывают с развитием ишемической болезни сердца, астмы, диабета, ревматоидного артрита и других. Наиболее значимая мутация (-262 C/T) в гене каталазы (САТ) влияет на ЭА гена (Goth L. et al., 2012). Изучение частоты аллелей и генотипов полиморфизма – 262 C/T гена каталазы в выборках здоровых людей и больных пародонтитом показало, что по изучаемому полиморфизму гена каталазы доминирует гетерозиготный генотип (GA). Участие мутантного аллеля С гена каталазы в формирование патологического фенотипа при пародонтите не подтверждено. Ген GSTP1 кодирует p1-глутатион S-трансферазу, участвующую в детоксикации канцерогенов, липидов, продуктов свободнорадикальных реакций. Полиморфизмы Ile105Val (313A>G) и 341C>T гена GSTP1 обуславливают продукцию фермента с пониженной активностью (Sharma A. et al., 2014). Полученные полиморфизмов нами данные о частотах распространенности гена GSTP1 свидетельствуют об относительно низкой распространённости полиморфизма Ile105Val (313A>G) и достоверном значимом возрастании частот встречаемости полиморфизма Ala114Val 341C>T в выборках обследуемых, и указывают не только на возможное участие полиморфизма Ala114Val 341C>T в патогенезе пародонтита, но и на наличие внутрипопуляционных особенностей. 80 Таким образом, при пародонтите усиливаются свободнорадикальные процессы, наблюдаемые по интенсификации процессов перекисного окисления липидов, возрастает фосфолипазная активность и понижается активность супероксидисмутазы в крови. Полученные данные, свидетельствующие о важной роли в реализации патогенеза заболевания свободнорадикального механизма, обуславливающего высокий риск повреждения клеточных мембран и развития деструктивных процессов и гибели клеток, являются основанием для исследования генетической составляющей, связанной с наличием полиморфизмов в генах ферментов, влияющих на эффективность антиоксидантной защиты в организме больных. Показано, что риск развития пародонтита повышается при наличии в геномах людей мутаций в гене SOD2. При этом в геномах больных с пародонтитом выявлена повышенная частота встречаемости патологических аллелей генов как супероксиддисмутазы, так и глутатион S-трансферазы. Показана ассоциация с риском развития пародонтита в первую очередь мутации Ala16Val гена супероксиддисмутазы и Ala114Val гена глутатион Sтрансферазы. Изменение активности ферментов, участвующих в обезвреживании и утилизации генотоксических соединений, включая активные формы кисолорода и липоперекиси, определяет риск повреждения ключевых биомолекул (нуклеиновых кислот, белков, липидов) и степень деструктивных процессов, приводящих функциональной к активности повреждению при клеток пародонтите. В и нарушению случае их патогенеза пародонтита генетическая составляющая заболевания может быть связана с изменением активности антиоксидантных ферментов, и формирования пародонтогенного патологического фенотипа. Учитывая полученные данные, критерием отбора пациентов в группы было наличие (II и IV группы) или отсутствие (I и III группы) полиморфизма С47Т в гене SOD2 и его гомозиготное состояние. 81 Проведение контрольных серий клинических исследований подтвердило наличие двух патогенетических вариантов течения хронического генерализованного пародонтита в зависимости от генотипа. На основе данных по полиморфизму генов антиоксидантных ферментов и интенсивности перекисного окисления липидов плазмы крови выделены группы больных хроническим пародонтитом, имеющие и не имеющие полиморфизм С47Т гена SOD2. На основании частот распределения аллелей гена SOD2 выборка больных пародонтитом в геноме которых не содержится патологический аллель Т составила 18 человек, в то время как выборка пациентов, содержащих аллель Т в гомозиготном состоянии составила 18 человек и в гетерозиготном состоянии 12 человек. Обнаружено, что у больных с хроническим генерализованным пародонтитом, имеющих генотип СС, уровень МДА был повышен 48,44 % (р<0,05). При наличии патологического аллеля С47Т в крови пациентов, имеющих генотипы СТ и ТТ, содержание МДА последовательно возрастало и составляло 59,13 и 83,11 % (р<0,05) соответственно. Во время традиционного лечения пародонтита (через 5 суток) у пациентов, имеющих генотип СС, содержание ТБК-активных продуктов в плазме крови по сравнению с нормой сохранялось повышенным 42,33 % (р<0,05), а через 10 суток – на 37,33 % (р<0,05). В тоже время у пациентов с генотипами СТ и ТТ уровень МДА в крови поддерживался на более высоком уровне продолжительное время (рис. 1). 250 * 200 * 150 * * * * МДА I 100 МДА II 50 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 1. Содержание МДА в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом в зависимости от генотипа (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) 82 Следует отметить, что показатель активности фосфолипазы А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом при генотипе СС был ниже на всех сроках динамического наблюдения, чем у пациентов, имеющих гомозиготное состояние мутантного аллеля С47Т гена SOD2 (рис. 2). 300 * * 250 * 200 * * * ФЛ А2 I 150 ФЛ А2 II 100 50 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 2. Активность фосфолипазы А2 в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом в зависимости от генотипа (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) Исследование активности супеоксиддисмутазы в плазме крови у больных с хроническим пародонтитом подтвердило ее зависимость от полиморфизма в гене SOD2 и наличия мутантного аллеля. У пациентов с генотипом СС на момент поступления в клинику в плазме крови регистрировали некоторое снижение активности СОД (на 14,58 % (р<0,05)), при генотипе ТТ на момент обращения пациентов в клинику активность данного антиоксидантного фермента была ниже нормы на 33,22 % (р<0,05). На фоне традиционной терапии у пациентов с нормальным генотипом регистрировалось восстановление активности СОД к десятым суткам, при наличии мутантного аллеля снижение СОД было более выраженным и стойким, нормальных значений данный показатель не достигал даже к концу лечения (рис. 3). 83 120 100 * * * * 80 * * СОД I 60 СОД II 40 20 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 3. Показатель активности СОД в плазме крови пациентов с хроническим пародонтитом в зависимости от генотипа (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) При исследовании интенсивности процессов перекисного окисления и активности супероксиддисмутазы в слюне пациентов также выявлены специфические особенности данных процессов в зависимости от генотипа пациентов. При наличии генотипа СС гена SOD2 в слюне регистрировали увеличение содержания малонового диальдегида относительно нормы на 257,39 % (р<0,05) на момент обращения пациентов в клинику. При наличии генотипа ТТ данный показатель превышал норму на 305,50 % (р<0,05). Кроме того у пациентов, имеющих мутантный аллель С47Т, регистрировали более медленное снижение содержания малонового диальдегида в слюне на фоне традиционной терапии (рис. 4). 84 450 * 400 * * 350 300 * * * 250 МДА I 200 МДА II 150 100 50 0 норма исход 5-е сутки 10-е сутки Рис. 4. Содержание МДА в слюне пациентов с хроническим пародонтитом в зависимости от генотипа (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) Исследование активности супероксиддисмутазы в слюне показало ее повышение у пациентов с генотипом СС на 153,33 % (р<0,05) при обращении в стационар. В дальнейшем зарегистрировано снижение активности данного фермента на фоне традиционной терапии. При наличии мутантного аллеля С47Т повышение активности СОД в слюне при хроническом генерализованном пародонтите не регистрировалось, что, вероятно, связано с отсутствием компенсаторных возможностей синтеза данного фермента. Оценка индексальных показателей состояния тканей пародонта у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом при обращении в клинику выявила следующие результаты (рис. 5). 3000 2500 * * * * 2000 * 1500 * норма I II 1000 500 0 PMA API SBI Рис. 5. Индексы РМА, API и SBI при хроническом пародонтите средней степени тяжести при обращении в клинику (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) 85 В дальнейшем на фоне применения папиллярно-маргинально-альвеолярный традиционной терапии индекс гигиены индекс, апроксимальных поверхностей зубов и индекс кровоточивости снижались, но нормальных значений не достигали. В первой контрольной группе положительная динамика на фоне лечения была более значительной. Пародонтальный индекс у пациентов с генотипом СС был выше нормы в 51,7 раз, с генотипом ТТ – в 56,3 раз! На фоне традиционного лечения данный показатель также снижался (рис. 6). 7000 * 6000 * 5000 * * 4000 * ПИ I ПИ II * 3000 2000 1000 0 100 норма исход 5 сутки 10 сутки Рис. 6. Пародонтальный индекс при хроническом пародонтите средней степени тяжести (I – контрольная группа (генотип СС); II – контрольная группа (генотип ТТ); * - достоверные изменения относительно нормы) Таким образом, проведенные исследования показали сопряженность состояния тканей пародонта при хроническом генерализованном пародонтите и особенностей генотипа пациентов, в частности, наличия патологического аллеля в гене SOD 2. Наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2 сопряжено с выраженными мембранодеструктивными процессами в ткани пародонта, и пациенты носители патологического аллеля С47Т гена супероксиддисмутазы требуют более эффективной терапии. В группе больных, имеющих генотип 86 СС, ткани толерантностью пародонта к характеризуются липопероксидации, относительно менее высокой выраженными мембранодестабилизирующими явлениями в тканевых структурах пародонта и заболевание у них протекает в более легкой форме. Таким образом, разделение пациентов на две группы в зависимости от наличия или отсутствия патологического аллеля С47Т в гене SOD2, и как следствие, наличия или отсутствия генетической предрасположенности к перекисному окислению липидов целесообразно, поскольку отражает патогенетические особенности течения заболевания. В третьей и четвертой (основных) группах пациенты в комплексе с традиционными лечебными мероприятиями получали мексидол. Применение мексидола в комплексной терапии хронического пародонтита средней степени тяжести показало положительный лечебный эффект, что проявилось более выраженным улучшением состояния тканей пародонта. Отметим, что положительный эффект мексидола в четвертой контрольной группе был более выражен, чем в третьей группе пациентов с генотипом СС. Пародонтальный индекс у пациентов третьей контрольной группы на фоне применения мексидола снижался относительно контрольного к концу терапии на 31,75 % (р<0,05), в четвертой контрольной группе данный показатель уменьшался по сравнению с контролем на 44,44 % (р<0,05). В абсолютных числах данный показатель в третьей и четвертой группах на конечном этапе терапии был сопоставим. Высокая клинико-лабораторная эффективность антиоксидантной терапии мексидолом в группе больных, имеющих патологический генотип ТТ, была сопряжена с ее способностью быстро и значимо корригировать интенсивность перекисного окисления липидов, что подтвердилось при исследовании содержания вторичных продуктов ПОЛ в слюне и плазме крови. Так, при использовании мексидола регистрировалось снижение уровня МДА в слюне пациентов с генотипом ТТ на 45,57 % (р<0,05) к концу терапии, у пациентов с генотипом СС данный показатель был ниже 87 контрольного на 30,12 % (р<0,05). В плазме крови уровень малонового диальдегида при генотипе ТТ снижался относительно контроля на 27,22 % (р<0,05), при генотипе СС – на 17,48 % (р<0,05). Таким образом, наибольший эффект применения мексидола комплексной терапии хронического генерализованного в пародонтита регистрировался в четвертой основной группе пациентов, имеющих генотип ТТ, определяющий предрасположенность мембранодестабилизирующих хроническим явлений. генерализованным определяющим высокую липопероксидации, В третьей пародонтитом толерантность эффективность к развитию группе с тканей антиоксидантной больных генотипом СС, пародонта терапии к была сравнительно меньше. В заключение следует отметить, что наличие полиморфизма С47Т в гене SOD2, в особенности при гомозиготном состоянии патологического аллеля является фактором существенно утяжеляющем течение патологического процесса. Отметим, что у данных пациентов отмечались сравнительно более значимые патологические явления состояния тканей пародонта. Исследованиями была установлена значительная интенсификация процессов ПОЛ в слюне и плазме крови данных пациентов, а также их недостаточное снижение на фоне применения традиционной терапии. Данные явления доказывают высокую активность мембранодеструктивных процессов в тканях пародонта, утяжеление течения пародонтита и недостаточную эффективность стандартизированных лечебных мероприятий в отсутствии специфической патогенетической терапии. Показано, что включение антиоксиданта мексидола в комплексную терапию хронического генерализованного пародонтита у данной группы пациентов существенно изменяло интенсивность процессов ПОЛ в организме, приводило к уменьшению явлений хронического воспаления, быстрому и достоверному улучшению состояния тканей пародонта, что является дополнительным подтверждением 88 выдвинутой гипотезы о значимости полиморфизма С47Т в гене SOD2 в патогенезе хронического генерализованного пародонтита и необходимости подбора терапии в зависимости от патогенетических вариантов течения заболевания. 89 ВЫВОДЫ 1. Интенсивность перекисного окисления липидов плазмы крови и слюны, выраженность воспалительного процесса в тканях пародонта при хроническом пародонтите сопряжены с полиморфизмом Ala16Val гена антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы (SOD2). 2. Больные хроническим генерализованным пародонтитом на основе данных наличия полиморфизма гена SOD2 и интенсивности перекисного окисления липидов распределяются на две группы: с большой (44 % больных) и меньшей (56 % больных) предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканях пародонта. 3. Значительная клинико-лабораторная эффективность антиоксидантной терапии мексидолом отмечается в группе больных с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканевых структурах пародонта, что сопряжено с ее высокой способностью быстро и значимо корригировать интенсивность перекисного окисления липидов (уровень молекулярных продуктов ПОЛ в плазме крови снижается более чем на 30,2 %, в слюне – на 45,5 %). 4. В группе больных хроническим генерализованным пародонтитом с высокой толерантностью тканей пародонта к липопероксидации клиниколабораторная эффективность антиоксидантной терапии сравнительно низкая (уровень молекулярных продуктов в плазме крови снижается не более чем на 17,5 %, в слюне – на 30,1 %). 90 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Больных хроническим пародонтитом рекомендуется обследование на предмет встречаемости полиморфизма гена антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы. Разделение больных хроническим генерализованным пародонтитом на две группы в зависимости от полиморфизма гена SOD2 и интенсивности перекисного окисления липидов плазмы крови и слюны позволяет рекомендовать применение антиоксидантов в группе больных с большой предрасположенностью к развитию мембранодестабилизирующих явлений в тканевых структурах пародонта. 91 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ Абдулхаков 1. Р.А. Наблюдение противоязвенного эффекта ксимедона у ожоговых больных / Р.А. Абдулхаков, Г.А. Измайлов // Ксимедон: Науч. сб. материалов эксперим. и клинич. испытаний. – Казань. – 1986. – С. 108-110. Аболмасов Н.Н. Стратегия и тактика профилактики заболеваний 2. пародонта / Н.Н. Аболмасов // Стоматология. – 2003. – № 4. – С. 34-39. Авдеев М.Г. Патогенетические механизмы инициации синдрома 3. системного воспалительного ответа (обзор литературы) / Авдеев М.Г., Шубич М.Г. // Клиническая лабораторная диагностика. – 2003. – № 6. – С. 3– 10. Адамчик А.В. Антибактериальная терапия в пародонтологии / 4. Адамчик А.В., Брагина С.Ю., Харченко С.Д. // Некоторые вопросы теоретической и клинической медицины. Межвузовский сборник научных трудов. - Вып. 1. - Саранск. - 2000. - С. 22-25. Адамчик А.В. Применение иммунотерапии в комплексном 5. лечении пародонтита / Адамчик А.В., Брагина С.Ю., Харченко С.Д., Сиднева О.В. // Материалы научной конференции “Актуальные проблемы современного здравоохранения и медицины”. - Саранск, 2001. - Вып. II. - С. 166-168. 6. Адамчик А.В. Современные подходы к консервативному лечению пародонтита / Адамчик А.В., Брагина С.Ю., Харченко С.Д. // Материалы Всероссийской «Современные проблемы научно-практической и перспективы конференции развития валеологии, коррекционной педагогики и реабилитологии». – Пенза. – 2000. – С. 13-15. 7. Адамчик А.В. Современные представления об этиопатогенезе заболеваний пародонта / Адамчик А.В., Брагина С.Ю., Харченко С.Д. // Некоторые вопросы теоретической и клинической медицины. Межвузовский сборник научных трудов. – Вып. 1. – Саранск. – 2000. – С. 17-20. 92 8. Азизова О.А. Влияние окисленных ЛПНП на гемолитическую резистентность эритроцитов / Азизова О.А., Пирязев А.П., Никитина Н.А. // Бюл. экспер. биол. и медицины. – 2002. – Т. 134. – № 8. – С. 160-162. 9. Акимова О.А. Патофизиологическое обоснование использования антиоксидантов для восстановления функции почек при экспериментальном перитоните / Акимова О.А. // Автореф. дис… канд. мед. наук. – Москва. – 2005. – С. 15-17. 10. Акулович А.В. Адгезивные системы в стоматологии / Акулович А.В. // Пародонтология. – 2009. – № 2 (51). – С. 26-33. 11. Андарханов Б.В. Некоторые современные представления о биологической значимости перекисного окисления липидов и системах его регуляции / Андарханов Б.В., Лунина Е.А., Ленская Е.Г. // Вопр. мед. химии. – 1990. – № 3. – C. 130. 12. Андреенко Г.В. Роль липидов в регуляции функциональной активности тромбоцитов / Андреенко Г.В., Суворова Л.А. // Успехи современной биологии. – 1986. – Вып. 3. – С. 436-448. 13. Атрушкевич В.Г. Полиморфизм гена VDR и пародонтит / В.Г. Атрушкевич, М.С. Зяблицкая // [Электронный ресурс]. 2011. – Режим доступа: http://www.stomport.ru/articlepro_show_id_337. 14. Афанасьев В.В. Клиническая фармакология реамберина (очерк) / Афанасьев В.В. // Пособие для врачей. – Санкт-Петербург. – 2005. – 44 с. 15. Барабой В.Л. Окислительный и антиокислительный гомеостаз в норме и патологии / Барабой В.Л., Сутковой Д.А. – Киев: Наукова думка. – 1997. – 420 с. 16. Баровский Е.В. Терапевтическая стоматология / Баровский Е.В. – М., 2003. – 777с. 17. Безрукова И.В. Агрессивные формы пародонтита / Безрукова И.В., Грудянов А.И. – М., 2002. – 126 с. 93 18. Безрукова И.В. Клиника, диагностика и лечение быстропрогрессирующего пародонтита / Безрукова И.В. // Новое в стоматологии. – 2001. – № 5. – С. 65-69. 19. Бельских А.Н. Применение антиоксиданта цитофлавина в сочетании с экстракорпоральной гемокоррекцией у больных с острыми легочными нагноениями / Бельских А.Н., Фуфаев Е.Е. // Вестн. интенсив. терапии. – 2007. – № 2. – С. 75-79. 20. Беспалова Н.А. Планирование – главный шаг к достижению успеха пародонтологического лечения / Беспалова Н.А., Рунова Н.Б., Воробьева А.В. и др. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С.28-29. 21. Бондаренко Н.Н. Оценка уровня диагностики и лечения пациентов с заболеваниями пародонта в стоматологических клиниках Нижегородской области / Бондаренко Н.Н., Балахонцева Е.В. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С.22. 22. Брагина С.Ю. Клинико-лабораторная оценка эффективности мексидола в терапии хронического генерализованного пародонтита / Брагина С.Ю. // Автореф. дисс. ...канд. мед. наук. – М. – 2005. – 16 с. 23. препаратов Брагина С.Ю. Некоторые антиоксидантного действия фармакологические в терапии эффекты хронического генерализованного пародонтита / Брагина С.Ю., Тарасова Т.В., Харченко С.Д., Адамчик Р.А. // Материалы Х научной конференции молодых ученых Мордовского госуниверситета «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте». - Саранск, 2005. - Вып. 3. - С. 3 – 6. 24. Бурлакова Е.Б. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов / Бурлакова Е.Б., Крашанов С.А., Храпова Н.Г. – Черниголовка. – 1992. – 56 с. 25. Бурлакова Е.Б. О взаимосвязи антиоксидантов и окисляемости субстратов в липидах природного происхождения / Бурлакова Е.Б., Сторожок Н.М., Храпова М.Г. // Биофизика. – Т. XXXІІІ. – Вып. 5. – 1988. – С. 781–786. 94 26. Васильков В.Г. Роль нарушения антиоксидантного статуса ор- ганизма в формировании синдрома эндогенной интоксикации у больных в токсической и терминальной стадиях острого перитонита / Васильков В.Г., Шикунова Л.Г., Келина Н.Ю. и др. // Анестезиология и реаниматология. – 2001. – № 6. – С. 31-34. 27. Величковский Б.Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Величковский Б.Т. // Вестн. РАМН. – 2001. – № 6. – С. 45-52. 28. Виноградов В.М. Гипоксия как фармакологическая проблема / Виноградов В.М., Урюпов О.Ю. // Фармакол. и токскол. – 1985. – Т. 48. – № 4. – С. 9-20. 29. Владимиров Ю.А. Нарушение барьерных свойств внутренней и наружной мембран митохондрий, некроз и апоптоз / Владимиров Ю.А. // Биол. мембраны. – 2002. – Т. 19. – № 5. – С. 356-377. 30. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Владимиров Ю.А. // Вестник РАМН. – 1998. – № 7. – С. 43-51. 31. Власов А.П. Активность фосфолипазы А2, ПОЛ и их фармакокоррекция при эндотоксикозе / Власов А.П., Костин Я.В., Тарасова Т.В. и др. // International Journal on Immunorehabilitation. - 1999. - N 12. - С. 101. 32. Власов перекисного А.П. окисления Изменения липидов активности при фосфолипазы эндотоксикозе в А2 и условиях экспериментального перитонита / Власов А.П., Трофимов В.А., Тарасова Т.В. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. – 2000. – № 1.– Т. 128. – С. 3133. 33. Власов А.П. Липидмодифицирующий компонент в патогенетической терапии / Власов А.П., Крылов В.Г., Тарасова Т.В. и др. – Москва: Наука. – 2008. – 374 с. 95 34. Власов А.П. Модификация обмена липидов при панкреатите под влиянием мексидола / Власов А.П., Трофимов В.А., Березин В.А. и др. // Эксперим. и клин. фармакология. - 2003.- №1.- С.40-45. 35. Власов А.П. О влиянии антиоксидантов на выраженность эндотоксикоза при экспериментальном перитоните / Власов А.П., Тарасова Т.В., Судакова Г.Ю. и др. // Эксперим. и клин. фармакология. – 2000. – Т. 63. – № 6. – С. 58-61. 36. Власов А.П. Роль нарушений липидного гомеостаза в патогенезе перитонита / Власов А.П., Трофимов В.А., Аширов Р.З. – Саранск: Изд-во Мордов. ун-та. – 2000. – 208 с. 37. Власов А.П. Фармакомодуляция функционального состояния эритроцитов и тромбоцитов при хроническом генерализованном пародонтите / А.П. Власов, А.Г. Захаркин, В.А. Трофимов // Вестник новых медицинских технологий. - 2006. - Т. XIII. - № 4. - С. 112-113. 38. Власова В.П. Реамберин и верапамил в коррекции тромбоцитарной активности при остром панкреатите / Власова В.П., Сернова Г.В., Наумова Е.А. и др. // Технические и естественные науки: проблемы, теория, эксперимент. Межвузовский сборник научных трудов. – Вып. VI. – Саранск: РНИИЦ. – 2006. – С. 103-105. 39. Волчегорский И.А. Определение содержания продуктов перекисного окисления липидов в липопротеинах с помощью систем преципитации / Волчегорский И.А., Харченкова Н.В. // Клин. лаб. диагностика. – 2004. – № 2. – С. 37-39. 40. Воронина Т.А. Актуальные направления применения антиоксиданта мексидола / Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М. // Труды нац. научно-практ. конф. с междун. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека". - Смоленск, 2001. - С. 191-193. 41. Воронина Т.А. Антиоксидант мексидол. Основные нейропсихотропные эффекты и механизм действия / Воронина Т.А. // Психофармакология и биологическая наркология. - 2001.- №1.- C. 2-12. 96 42. Воронина Т.А. Механизм действия и обоснование применения препарата мексидол в неврологии / Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., Горейнова И.И. // Материалы науч.-практ. конф. по неврологии. - М., 2000.- С.18. 43. Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол, основные эффекты, механизм действия, применение / Воронина Т.А. – М.: Изд-во НИИ Фармакологии РАМН, 2003. – 20 с. 44. патогенезе Воскресенский О.Н. Роль перекисного окисления липидов в пародонтита / Воскресенский О.Н., Ткаченко Е.К. // Стоматология. - 1991. - №4. - С. 5-10. 45. Гавриленко Г.А. Применение комплекса антиоксидантов для лечения эндотоксикоза при реконструктивных операциях на артериях нижних конечностей / Гавриленко Г.А., Демин В.В. // Вестн. хирургии. – 1998. – Т. 157. – № 2. – С. 60-63. 46. Гажва С.И. Оптимизация консервативного лечения хронических генерализованных пародонтитов легкой и средней степени тяжести с использованием различных антибактериальных препаратов / Гажва С.И., Воронина А.И. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С. 22. 47. Гажва С.И. Распространенность и интенсивность воспалительных заболеваний пародонта (обзор литературы) / Гажва С.И., Гулуев Р.С. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С. 13-14. 48. Гажва С.И. Сравнительная оценка эффективности антибактериальных средств, используемых для лечения воспалительных заболеваний пародонта / Гажва С.И., Воронина А.И. // Обозрение. Стоматология. – 2010. - № 2. – С.14. 49. Гажва С.И. Хирургические методы лечения заболеваний пародонта / Гажва С.И. – Нижний Новгород: НГМА. – 2003. – 105 с. 50. Галенок В.А. Гипоксия и углеводный обмен / Галенок В.А., Диккер В.Е. – Новосибирск: Наука. – 1985. – 194 с. 97 51. Гасанова З.М. Фармакологические эффекты цитофлавина при хроническом пародонтите / Гасанова З.М. // Автореферат дисс. на соискание уч. ст. к. м. н. – Купавна, 2011. – 20 с. 52. Гильмияров Э.М. Показатели гомеостаза полости рта у жителей экологически неблагополучных регионов / Гильмияров Э.М. – Автореф. Дисс. канд. мед. наук. – Уфа, 1997. – 22 с. 53. Гланц С. Медико-биологическая статистика /Пер. сангл. //Подред. И.Е. Бузикашвили и Д.В. Самойлова. – М.: Практика, 1999. -460 с. 54. Голиков А.П. Влияние мексидола на окислительный стресс при церебральных вариантах гипертонического криза / Голиков А.П., Голиков П.П., Давыдов Б.В. и др. // Кардиология. - 2002. - Т.42. - №3. - С.25-29. 55. Голиков А.П. Свободнорадикальное окисление и сердечно- сосудистая патология: коррекция антиоксидантами / Голиков А.П., Бойцов С.А., Михин В.П. и др. // Лечащий врач. – 2003. – № 4. – 70-74. 56. Голиков П.П. Оксид азота и перекисное окисление липидов как факторы эндогенной интоксикации при неотложных состояниях / Голиков П.П., Николаева Н.Ю., Гавриленко И.А. и др. // Пат. физиол. и эксперим. терапия. – 2000. – № 2. – С. 6-9. 57. системного Горбачев Н.Б. воспалительного Фармакологическая ответа в коррекция послеоперационном синдрома периоде распространенного перитонита / Горбачев Н.Б. // Автореф. дис… канд. мед. наук. – Санкт-Петербург. – 2009. – 22 с. 58. Григорьян А.С. Болезни пародонта / Григорьян А.С., Грудянов А.И., Рабухина Н.А., Фролова О.А.. – М., 2004. – 320 с. 59. Григорьян А.С. Морфогенез ранних стадий воспалительных заболеваний пародонта / Григорьян А.С., Фролова О.А., Иванова Е.В. // Стоматология. – 2002. – № 1. – С. 19-25. 60. Гринштейн Ю.И. Роль свободнорадикального окисления в системной мембранодеструкции у больных с уремической интоксикацией / 98 Гринштейн Ю.И. // Тез. междунар. симпозиума «Эндогенные интоксикации». – 1994. – С. 24-25. 61. Грудянов А.И. Агрессивные формы пародонтита / Грудянов А.И., Безрукова И.В. – М., 2002. – 126 с. 62. Грудянов лабораторная А.И., оценка Безрукова И.В., эффективности Ерохин лечения А.И. Клинико- пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом // Пародонтология. 2002.- №4.-С. 1317. 63. Губергриц Н.Б. Клиническая панкреатология / Губергриц Н.Б., Христич Т.Н. - Донецк: Лебедь, 2000. - 416 с. 64. Данилевский Н.Ф. Заболевания пародонта / Данилевский Н.Ф., Магид Е.А., Мухин Н.А., Миликевич В.Ю. – Москва. – 1993. – С. 182-185. 65. Дмитриева Л.А. Влияние системной энзимотерапии на заживление пародонтального дефекта в эксперименте / Дмитриева Л.А., Зайратьянц О.В., Немерюк Д.А. // Обозрение. Стоматология. – 2011. - № 2. – С.20-22. 66. Дмитриева Л.А. Современные аспекты клинической пародонтологии / Л.А. Дмитриева. – М.: «МЕД пресс», 2001. – 127 с. 67. Дмитриева Л.А. Терапевтическая стоматология / Л.А. Дмитриева. – М., 2003. – 894с. 68. Дрогомирецкая Е.И. Клиническая эффективность реамберина у больных с механической желтухой и бактериальным холангитом / Дрогомирецкая Е.И., Балашов В.К., Кокая А.А. и др. // Реамберин: реальность и перспективы: Сборник научных статей. – Санкт-Петербург. – 2002. – 168 с. 69. Дубикайтис А.Ю. Активность свободно-радикального окисления липидов и состояние антиоксидантной системы у больных ИБС в ходе операции реваскуляризации миокарда / Дубикайтис А.Ю., Конюхова С.Г., Ковалёв В.А. и др. // Анест. и реаним. – 1994. – № 1. – С. 10–13. 99 70. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Дубинина Е.Е. // Вопр. мед. химии. – 2001. – Т. 47. – № 6. – С. 561581. 71. Евгина С.А. Перекисное окисление липопротеидов крови человека, индуцированное гипохлорит-анионом / Евгина С.А., Панасенко О.М., Сергиенко В.И. и др. // Биологические мембраны. – 1992. – Т. 9. – № 9. – С. 946-953. 72. Евстигнеева Р.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран / Евстигнеева Р.П., Волков И.М., Чудинова В.В. // Биол. мембраны. – 1998. – Т. 15. – № 2. – С. 119-136. 73. Егорова мембранопротекторной Н.В. и Патофизиологическое антикоагулянтной терапии обоснование респираторного дистресс-синдрома при эндотоксикозе / Егорова Н.В. // Дис... канд. мед. наук. – Н. Новгород. – 2009. – 137 с. 74. Ерюхин И.А. Воспаление как общебиологическая реакция / Ерюхин И.А., Белый В.Я., Вагнер В.К. – Л.: Наука. – 1989. – 261 с. 75. Ефуни С.Н. Гипоксические состояния и их классификация / Ефуни С.Н., Шпектор В.А. //Анест. и реаним. – 1991. – № 1. – С. 3-12. 76. Жданов Г.Г. Проблема гипоксии у реанимационных больных в свете свободнорадикальной теории / Жданов Г.Г., Нодель М.Л. // Анестезиология и реаниматология. – 1995. – № 1. – С. 53-61. 77. Жуков Н.А. Механизмы активации и роль перекисного окисления липидов при обострении хронического панкреатита / Жуков Н.А., Жукова Е.Н., Климова С.К. // Терапевт. архив. – 1989. – Т. 61 - № 2. – С. 15-18. 78. Зайцев В.Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия / В.Г. Зайцев, О.В. Островский, В.И. Закревский фармакология.- 2003.- №4.- С.66-70. 100 // Эксперим. и клин. 79. Захаркин А.Г. антиоксиданты в коррекции функциональной активности эритроцитов и тромбоцитов при хроническом пародонтите / Захаркин А.Г. // Автореф. дисс. …канд. мед. наук. – Купавна, 2007. – 20 с. 80. Захаркин А.Г. Антиоксиданты в терапии хронического пародонтита. / Захаркин А.Г. - Краснодар: Изд-во КГМУ, 2009. - 148 с. 81. Захаркин А.Г. Липидмодулирующий эффект терапии при хроническом генерализованном пародонтите / Захаркин А.Г., Прытков В.А. // Материалы IX Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации». - М.: Изд-во РУДН, 2008. - С.529530. 82. Захаркин А.Г. Мексидол в терапии хронического генерализованного пародонтита / Захаркин А.Г., Брагина С.Ю., Адамчик Р.А. // Тезисы докладов VII Международной конференции «Биоантиоксидант». М.: Изд-во РУДН, 2006. - С. 137-138. 83. Захаркин формировании А.Г. Нарушения молекулярных липидного механизмов метаболизма патогенеза в хронического пародонтита. / Автореф. дисс. …докт. мед. наук. – Москва, 2012. – 48 с. 84. Захаркин А.Г. Оценка эффективности мексидолотерапии при хроническом генерализованном пародонтите / Захаркин А.Г. А.Г., Адамчик А.В., Власов А.П. и др. // Кубанский научный медицинский вестник. - 2006. № 3-4 (84-85). - С. 36-38. 85. Захаркин А.Г. Оптимизация схем комплексной терапии пародонтита / Захаркин А.Г., Прытков В.А., Харченко С.Д. // Технические и естественные науки: проблемы, теория, практика: межвуз. сб. науч. тр. Вып. XII. - Саранск: РНИИЦ, 2010. - С. 137-139. 86. Захаркин А.Г. Роль антиоксидантного компонента в терапии хронического генерализованного пародонтита / Захаркин А.Г., Прытков В.А., Брагина С.Ю., Власов А.П. // вестник. - 2009. - № 2. - С. 76-79. 101 Кубанский научный медицинский 87. Захаркин А.Г. Современные схемы терапии в пародонтологии / Захаркин А.Г., Прытков В.А. //Технические и естественные науки: проблемы, теория, практика: межвуз. сб. науч. тр. Вып. 8. – Саранск: Изд-во. Мордов. ун-та, 2008. – С. 171-172. 88. Звяговская И.Н. Состояние микроциркуляторного гемостаза человека и процессы перекисного окисления липидов / Звяговская И.Н. // Всесоюзная конференция "Физиология и патология гемостаза": Тез. докл. – Полтава. – 1991. – С. 77–78. 89. Зенков Н.К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологические аспекты / Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. – Москва. – МАИК «Наука/Интерпериодика». – 2001. – 343 с. 90. Зиновьева В.Н. Свободнорадикальное окисление ДНК и его биомаркер окисленный гуанозин (8-oxodG) / Зиновьева В.Н., Островский О.В. // Вопр. мед. химии. – 2002. – Т. 48. – № 5. – С. 419-431. 91. Зорина О.А. Взаимосвязь полиморфизма генов некоторых коллагенов с развитием заболеваний пародонта / О.А. Зорина, О.А. Борискина // TheScientific&EducationalBulletin "Health&EducationalMillennium" №5. – 2012 – т. 14 – с. 1 – 3. 92. Иванов В.С. Заболевания пародонта / Иванов В.С.. – М.: Медицинское информационное агентство, 2001. – 300 с. 93. Иванов И.В. Влияние семакса и мексидола на течение острого панкреатита у крыс / Иванов И.В., Яснецов В.В. // Эксперим. и клин. фармакол.- 2000.- Т.63.- №1.- С.41-44. 94. Измайлов Г.А. Эффективность применения отечественного препарата ксимедон в хирургической практике / Г.А. Измайлов, С.Г. Измайлов, В.Ю. Терещенко и др. – Казань: Казанский госмедуниверситет. – 1995. – 18 с. 95. Измайлов С.Г. Ксимедон в клинической практике / Измайлов С.Г., Измайлов Г.А., Аверьянов М.Ю., Резник В.С. – Н. Новгород: Изд-во НГМА. – 2001. – С.36-42. 102 96. Казарина Л.Н. Современные аспекты профилактики заболеваний пародонта / Казарина Л.Н., Вдовина Л.В. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С.20-21. 97. Капелько В.И. Активные формы кислорода, антиоксиданты и профилактика заболеваний сердца / Капелько В.И. // Русский медицинский журнал.- 2003.- Т.11, №21.- С.1185-1188. 98. Кармалита Е.Г. Активность фосфолипазы А2 различной локализации в липосомах / Кармалита Е.Г., Серебров В.Ю., Новицкий С.В. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2002. – Т. 134. – № 9. – С. 291-294. 99. Карпова Е.Л. Сравнительная стресс-протекторная эффективность растительных адаптогенов и синтетических пептидов / Карпова Е.Л. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук.- Смоленск, 2002. - 24с. 100. Квинн П.Дж. Соответствует ли распределение α-токоферола в мембранах его предполагаемым функциям? / Квинн П.Дж. // Биохимия. – 2004. – Т. 69. – № 1. – С. 74-84. 101. Киселева Е.А. Комплексное лечение хронического пародонтита в зависимости от степени иммунных нарушений / Киселева Е.А. // Клиническая стоматология. – 2011. – №4. – С. 68-73. 102. Коган А.Х. Фагоцитзависимые кислородные свободнорадикальные механизмы аутоагрессии в патогенезе внутренних болезней / Коган А.Х. // Вестник РАМН. – 1999. – № 2. – С. 3–10. 103. Корнилов Н.Н. Экспериментальное изучение и клиническая апробация 1,5 % раствора реамберина при ортопедических операциях на коленном суставе / Корнилов Н.Н., Новоселов К.А., Орлов Ю.Н. // Реамберин: реальность и перспективы. Сборник научных статей. – СанктПетербург. – 2002. – 169 с. 104. Корокин М.В. Эндотелиопротективные, кардиопротективные и коронаролитические эффекты производных 3-оксипиридина / Корокин М.В., 103 Пашин Е.Н., Бобраков К.Е. и др. // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2009. - №4. – С.11-20. Кочнев О.С. Ксимедон как стимулятор репаративной регенерации 105. в хирургической практике / О.С. Кочнев, С.Г. Измайлов // Казан. мед. журн. – 1990. – № 5. – С. 373-375. Курякина Н.В. Заболевания пародонта / Курякина Н.В. – М.: Мед. 106. книга. – НГМА, 2005. – 43 с. Кучумова Е.Д. Применение новых противовоспалительных 107. средств в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при заболеваниях пародонта / Кучумова Е.Д., Леонтьев А.А., Калинина О.В. и др. // Пародонтология. – 2008. – № 1. – С. 83-88. 108. Ланкин В.З. Биоантиоксиданты - универсальное лекарство? / Ланкин В.З. - Тезисы VI международной конф. "Биоантиоксидант". - М. 2002. - С. 341-343. 109. Ларенцова О.И. Премедикация антиоксидантом мексидолом на фоне антигомотоксической терапии у больных пародонтитом/ Ларенцова О.И., Максимовский Ю.М., Воронина Т.А. и др. // Стоматология. - 2002.№2.- С.20-22. 110. Лемецкая Т.И. Клинико-экспериментальное обоснование классификации болезней пародонта и патогенетические принципы лечебнопрофилактической помощи больным с патологией пародонта / Лемецкая Т.И. // Автореф. дис… докт. мед. наук. – Москва. – 1998. – 62 с. 111. Лемецкая Т.И. Мексидол - новый отечественный антиоксидантный и нейротропный препарат в комплексной терапии пародонтита / Лемецкая Т.И., Сухова Т.В. - Труды VI съезда Стоматологической Ассоциации России. - М., 2000. - С.223-226. 112. Лепилин А.В. Применение стоматологического комплекса КАП «Пародонтолог» при лечении заболеваний пародонта / Лепилин А.В., Райгородский Ю.М., Островская Л.Ю. и др. // Обозрение. Стоматология. – 2010. - № 2. – С.17-19. 104 113. Ливанов Г.А. Коррекция свободнорадикальных процессов препаратом янтарной кислоты (Реамберином) в интенсивной терапии острых отравлений нейротропными ядами / Ливанов Г.А., Куценко С.А., Батоцыренов Б.В. и др. // Анестезиология и реаниматология. – 2001. – № 4. – С. 28-31. 114. Литвинко Н.М. Эндогенные фосфолипазы А2: структура и функция / Литвинко Н.М., Кисель М.А. – Минск. – 1991. – 116 с. 115. Логинова Н.К. Микроциркуляция в тканях пародонта / Логинова Н.К., Кречина Е.К. // Стоматология. – 1999. – № 1. – С. 25-28. 116. Лукиных Л.М. Болезни полости рта / Лукиных Л.М.. – Н. Новгород: Изд-во НГМА. – 2004. – 508 с. 117. Лукиных Л.М. Галоидсодержащие антисептики в отношении микробиоценозов корневых каналов / Лукиных Л.М., Кокунова А.С. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С.53-54. 118. Лукиных Л.М. Значение консервативной терапии в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта / Лукиных Л.М., Круглова Н.В. // Обозрение. Стоматология. – 2012. - № 1. – С.14-16. 119. Лукк М.В. Влияние антигипоксантов на перекисное окисление липидов и антиоксидантную систему при острой гипоксии / Лукк М.В. // Дисс. …канд. мед. наук. – Санкт-Петербург. – 1999. – 157 с. 120. Лукьянова Л.Д. Современные проблемы гипоксии / Лукьянова Л.Д. // Вестник РАМН.- 2000.- №9.- С.3-12. 121. Максимовский Ю.М. Клинические аспекты применения иммуномодулятора Имудон в комплексном лечении заболеваний пародонта / Максимовский Ю.М., Чиркова Т.Д. // Стоматология для всех. – 2000. – № 2. 122. Максимовский Ю.М. Новое понимание патогенеза болезней пародонта в свете работ о роли распознающих рецепторов / Ю.М. Максимовский [и др.] // Стоматология для всех. - 2006. - № 2. - С. 24-29. 105 123. Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания / Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З. и др. // Новосибирск. – АРТА. – 2008. – 284 с. 124. Нагоев Б.С. Роль системы антиоксидантной защиты организма в патогенезе острых вирусных гепатитов / Нагоев Б.С., Иванова М.Р. // Терапевт. арх. – 2003. – Т. 75. – № 11. – С. 15-17. 125. Никифорова Н.В. Антиоксиданты в злокачественных опухолях человека и экспериментальных животных / Никифорова Н.В., Берман А.Е. // Биомед. химия. – 2003. – Т. 49 – № 3. – С. 250-262. 126. Новиков В.Е. Влияние мексидола на течение посттравматической эпилепсии / Новиков В.Е., Маслова Н.Н. // Эксперим. и клин. фармакология.2003.- №4.- С.9-11. 127. Новиков В.Е. Клиническая фармакодинамика мексидола / Новиков В.Е., Маслова Н.Н., Тургенева Л.Б. и др. // Сборник. тезисов 2 Съезда Рос. науч. общ. фармакологов. - М., 2003.- С.57. 128. В.Е., Новиков В.Е. Фармакология и биохимия гипоксии / Новиков Катунина Н.П. // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии.- 2002.- Т.1.- С.73-87. 129. Нурмухаметова Э.Б. Клинико-экспериментальное обоснование применения ксимедона при ревматизме / Нурмухаметова Э.Б. // Автореф. дис… канд. мед. наук – Казань. – 1993. – 18 с. 130. Орехова Л.Ю. Использование адгезивного бальзама «Асепта» при лечении воспалительных заболеваний пародонта / Орехова Л.Ю., Тэц В.В., Улитовский С.Б. и др. // Пародонтология. – 2007. – № 3 (44). – С. 3-7. 131. Панасенко О.М. Свободнорадикальная модификация липопротеинов крови и атеросклероз/ Панасенко О.М., Сергиенко В.И. // Биологические мембраны. – 1993. – Т. 10. – № 4. – С. 34–381. 132. Петрович Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита смешанной слюны и крови при хроническом 106 генерализованном пародонтите / Петрович Ю.А., Пузин М.Н., Сухова Т.В. // Российский стоматологический журнал. - 2000.- №3. - С.11 -13. 133. Петросян Э.А. Влияние комплексного применения натрия гипохлорита и α-токоферола на состояние про- и антиоксидантной систем крови при экспериментальном перитоните / Петросян Э.А., Сергиенко В.И., Сухинин А.А. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. – 2005. – Т. 139. – № 4. – С. 391-394. 134. Петросян Э.А. Окислительные методы в комбинированном лечении желчного перитонита / Петросян Э.А., Оноприев В.И., Дубинкин О.В. и др. // Вестник интенсивной терапии. – 1998. – № 4. – С. 63-64. 135. Петросян Э.А. Состояние про- и антиоксидантной систем крови при экспериментальном желчном перитоните / Петросян Э.А., Сергиенко В.И., Сухинин А.А. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. – 2005. – Т. 139. – № 1. – С. 19-21. 136. Прытков В.А. Липидрегулирующий эффект производных 3- оксипиридина при хроническом пародонтите. / Прытков В.А. // Автореферат дисс. на соискание уч. ст. к. м. н. – Купавна, 2010. – 24 с. 137. Прытков В.А. Производные 3-оксипиридина в модификация липидного метаболизма при хроническом пародонтите / Прытков В.А. // Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицины. Сборник научных работ. Саранск: Референт, 2007. – С. 64-66. 138. Прытков В.А. Структурно-функциональное состояние гемоглобина при хроническом генерализованном пародонтите / Прытков В.А., Кульченко А.А., Власов А.П., Трофимов В.А., Тарасова Т.В. // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 3; URL: www.science-education.ru/109-8828. 139. Прытков В.А. Эффективность антиоксидантной терапии при хроническом пародонтите / Прытков В.А., Кульченко А.А., Захаркин И.А. //Социально-гуманитарные и естественно-научные исследования: теория и 107 практика взаимодействия: межвузовский сборник научных трудов. - Вып. 3. Саранск. - 2012. - С. 319-321. 140. Резник В.С. Ксимедон – стимулятор процессов остеогенеза / В.С. Резник, В.Ю. Терещенко, Измайлов С.Г. и др. // Тез. докл. III Рос. науч. конгр. «Человек и лекарство». – Москва. – 1996. – С. 193. 141. Сазонтова Т.Г. Значение баланса прооксидантов и антиоксидантов – равнозначных участников метаболизма / Сазонтова Т.Г., Архипенко Ю.В. // Патол. физиология и эксперим. терапия. – 2007. – № 3. – С. 2-18. 142. Сафонова А.В. Ассоциация аллелей генов цитокинов со степенью тяжести воспалительных заболеваний пародонта у человека / А. В. Сафонова, А. Н. Петрин, С. Д. Арутюнов и др. // ActaNaturae. - 2011. - Т. 3, № 1 (8). С. 123 – 129. Царев В.Н. Полиморфизм генов ИЛ1α и ИЛ1β и бактериальная инвазия у больных хроническим генерализованным пародонтитом / В. Н. Царев, Е. Н. Николаева // Стоматология. – 2010. - № 6. С. 19 – 23. 143. Северина И.С. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах его физиологических эффектов / Северина И.С. // Вопр. мед. химии. – 2002. – Т. 48. – № 1. – С. 4-30. 144. Семенов В.Л. Перекисное окисление липидов как механизм биоэнергетической регуляции при воспалении органов / Семенов В.Л. // Патол. физиология и эксперим. терапия. – 1989. – № 2. – С. 17-19. 145. Сивак К.В. Детоксикационные свойства ремаксола при полиорганной недостаточности на фоне тяжелого отравления этанолом / Сивак К.В., Саватеева-Любимова Т.Н., Петров А.Ю., Коваленко А.Л. // Эксперим. и клин. фармакология. – 2010. – Т. 73. – № 12. – С. 39-43. 146. Слабнов Ю.Д. Применение системного иммуномодулятора ксимедона при деструктивном легочном туберкулезе / Слабнов Ю.Д., Визель А.А., Черепнев Г.В. и др. // Проблемы туберкулеза. – 2000. – № 3. – С.28-32. 108 147. Смирнов Л.Д. Антиоксиданты гетероароматического ряда. Структура, активность, медицинское применение / Смирнов Л.Д. // Сборник тезисов 2-го Съезда Росс. науч. общ. фармакологов. - М., 2003.- С.171. 148. Сологуб Т.В. Гепатопротекторная активность ремаксола при хронических поражениях печени (материалы многоцентрового рандомизированного плацебо-контролируемого исследования) / Сологуб Т.В., Горячева Л.Г., Суханов Д.С. и др. // Клин. медицина. – 2010. – № 1. – С.62-66. 149. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. 2013 / М.: АстраФармСервис, 2012. – 1640 с. 150. Султанов Г.А. Антиоксиданты и их применение в медицинской практике / Султанов Г.А., Азимов Э.Х., Ибишов К.Г. // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. – 2004. – Т. 163. – № 4. – С. 94-96. 151. Суханов Д.С. Лекарственные поражения печени у больных туберкулезом легких и гепатопротекторная терапия / Суханов Д.С. // Автореф. дис… канд. мед. наук. – Санкт-Петербург. – 2008. – 19 с. 152. Сухова Т.В. Интенсификация свободнорадикального окисления и нарушение антиоксидантной защиты как критерии тяжести пародонтита и терапии мексидолом / Сухова Т.В., Петрович Ю.А. - Тез. докл. конф. "Стоматология 2000. Современные аспекты профилактики и лечения стоматологических заболеваний". - М., 2000. - С. 57. 153. Сухова Т.В. Особенности свободнорадикального окисления, антиоксидантной защиты и состояния нервной системы у больных хроническим генерализованным пародонтитом / Сухова Т.В. - Автореф. дисс. … канд. биол. наук. - М., 2000. -23с. 154. Тарасова Т.В. Влияние витамина Е, димефосфона и ксимедона на активность фосфолипазы А2 и ПОЛ кишечника, печени и плазмы крови при экспериментальном перитоните / Т.В. Тарасова // Автореф. дис… канд. биол. наук. – Саранск. – 1998. – 24 с. 109 155. Тарасова Т.В. Разработка патогенетического подхода к терапии системного липидного дистресс-синдрома при экспериментальном перитоните на основе препаратов с антиоксидантным действием / Тарасова Т.В. // Автореф. …дисс. докт. биол. наук. – Купавна. – 2004. – 40 с. 156. Терехина Н.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная система / Терехина Н.А., Петрович Ю.А. - Пермь, 2005. 69с. 157. Тимушева Ю.Т. Роль структуры мембран в активации митохондриальных фосфолипаз / Тимушева Ю.Т., Маренинова О.А., Вагина О.Н. и др. // Биол. мемб. – 1998. – Т. 15. – № 1. – С. 36-41. 158. Тищенко М.С. Применение реамберина в клинике инфекционных болезней / Тищенко М.С., Серебряков М.Ю., Беляева В.А. и др. // Реамберин: реальность и перспективы: Сборник научных статей. – Санкт-Петербург. – 2002. – 168 с. 159. Толкач А.Б. Нарушения метаболизма пуринов у больных перитонитом, осложнившимся сепсисом / Толкач А.Б., Рейс Б.А., Долгих В.Т. [и др.] // Анест. и реаним. – 2000. – № 3. – С. 38–41. 160. Трофимов В.А. Распространенность полиморфизмов гена c-fos и его экспрессивная активность в норме и при эндотоксикозе / Трофимов В.А., Лопухова Е.Н., Власов А.П. // Фундаментальные исследования. - № 12-4. – 2014. – С. 770 – 773. 161. Трофимов В.А. Роль нарушений липидного обмена в патогенезе острого перитонита в эксперименте / Трофимов В.А. // Автореф. дисс. …докт. биол. наук. – М. – 1999. – 32 с. 162. Тургенева Л.Б. Влияние мексидола на течение хронического генерализованного пародонтита / Тургенева Л.Б., Новиков В.Е., Смирнов Л.Д. // Матер. 3 Всерос. конф. "Гипоксия, механизмы, адаптация, коррекция".- М., 2002.- С.126-127. 110 163. Улитовский С.Б. Роль гигиены полости рта в развитии заболеваний пародонта / Улитовский С.Б. // Пародонтология. – 2000. – № 3. – С. 21–23. 164. Улитовский С.Б. Циркулярная зависимость развития заболеваний пародонта / Улитовский С.Б. // Новое в стоматологии. – 2000. – № 4. – С. 5559. 165. Успенская М.Н. Недостаточная эффективность стандартного лечения в коррекции иммунометаболических нарушений при хроническом катаральном генерализованном гингивите, генерализованном пародонтите и одонтогенном остеомиелите челюстно-лицевой области / Успенская М.Н., Лунев М.А., Ирышкова О.В. и др. // Фундаментальные исследования. – 2012. – №7. – С. 204-207. 166. Федин А.И. Оксидантный стресс и применение антиоксидантов в неврологии / Федин А.И. // Атмосфера. – 2002. – № 1. – С. 15-18. 167. Царев В.Н. Перспективы применения молекулярно-генетических методов исследований в диагностикепародонтита / В.Н. Царев [и др.] // Российский стоматологический журнал. - № 5. -2002. - С. 6-9. 168. Царев В.Н. Полиморфизм генов ИЛ1α и ИЛ1β и бактериальная инвазия у больных хроническим генерализованным пародонтитом / В. Н. Царев, Е. Н. Николаева // Стоматология (6). – 2010 – с. 19 – 23. 169. Цепов А.В. Хронический генерализованный пародонтит: ремарки к современным представлениям / Цепов А.В., Михеева Е.А., Голева Н.А. и др. // Пародонтология. – 2010. – № 1 (54) – С. 3-7. 170. Цепов Л.М. Заболевания пародонта: взгляд на проблему / Цепов Л.М.. – М.: «МЕДпресс-информ». – 2006. – 192 с. 171. Цепов Л.М. Клиника, диагностика и лечение основных заболеваний пародонта / Цепов Л.М., Николаев А.И. – Смоленск. – 1997. – С. 54. 111 172. Цепов Л.М. Нерешенные вопросы этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта / Цепов Л.М., Морозов В.Г., Николаев А.И. // Пародонтология. – 2001. – С. 1-2, с. 19-20, с. 28-31. 173. Янушевич О.О. Заболевания пародонта. Современный взгляд на клинико-диагностические и лечебные аспекты / О.О. Янушевич. – М.: Изд-во ГЕОТАР-Медиа, 2010. – 160с. 174. Янушевич О.О. Стоматологическая заболеваемость населения России / О.О. Янушевич. – М.: МГМСУ, 2008. – 228 с. 175. Betteridge D.J. What is oxidative stress? / Betteridge D.J. // Metabolism. – 2000. – Vol. 49. – Suppl. 1. – P. 3–8. 176. Boesze-Battaglia K. Collagen-induced changes in platelet membrane lipid asymmetry / Boesze-Battaglia K., Schimmell R.J. // Biophys. J. – 1994. – Vol. 66. – № 2 (Pt. 2). – P. 60. 177. Bolen E.J. Effect of phospholipid unsarutacion on protein kinase C activation / Bolen E.J., Sando J.J. // Biochemistry. – 1992. – Vol. 31. – № 25. – P. 5945–5951. 178. Boodram L.-L. Extraction of genomic DNA from whole blood / Protocol Online - Your Lab's Reference Book – online database of research protocols in a variety of life science fields [Electronic resource]. – 1999-2006. – Mode of access: http://www.protocol-online.org/prot/Protocols/Extraction-of- genomic-DNA-from-whole-blood-3171.html 179. Bowie A. Oxidative stress and nuclear factor-kappaB activation: a reassessment of the evidence in the light of recent discoveries / Bowie A., O'Neill L.A. // Biochem. Pharmacol. – 2000. – Vol. 59. – P. 13-23. 180. Brar S.S. Requirement for reactive oxygen species in serum-induced and platelet-derived growth factor-induced growth of airway smooth muscle / S.S. Brar, T.P. Kennedy, A.R. Whorton et al. // J. Biol. Chem. – 1999. – Vol. 274. – № 28. – P. 20017-20026. 181. Bulkley G.B. The role of oxygen free radicals in human disease process / Bulkley G.B. // Surgery. – 1983. – Vol. 94. – № 3. – P. 407-411. 112 182. Burton G.W. Biological antioxidants / G.W. Burton, D.O. Foster, B. Perly // Phil. Trans. Roy. Soc. London. – 1994. – № 1152. – P. 567-576. 183. Cantore S. Cytokine gene polymorphisms associate with microbiogical agents in periodontal disease: our experience / S. Cantore, R. Mirgaldi, A. Ballini, M. F. Coscia, S. Scacco, F. Papa, F. Inchingolo, G. Dipalma, Medical Sciences. – 2014 – Vol. 11 – P. D. De Vito // International Journal of 674 – 679. 184. Cederbaum A.I. Inhibition of rat liver microsomal lipid peroxidation by boldine / Cederbaum A.I., Kukielka E., Speisky H. // Biochem. Pharmacol. – 1992. – Vol. 44. – № 9. – P. 1765–1772. 185. Chen J.W. Effect of hydroxyl radical on Na+, K+-ATP-ase activity of the brain microsomal membranes / Chen J.W., Zhang L., Lian X., Hwang F. // Cell. Biol. Int. Rep. – 1993. – № 9. – P. 927-936. 186. Chinenov Y. Close encounters of many kinds: Fos-Jun interactions that mediate transcription regulatory specificity / Y.Chinenov, and T. K. Kerppola // Oncogene. – 2001. – Vol. 20, No. 19. – P. 2438-2452. 187. Demling R.H. Early postburn lipid peroxidation: effect of ibuprofen and allopurinol / Demling R.H., La Londe C.// Surgery. – 1990. – Vol. 107. – P. 85–90. 188. Dr. Michal Straka. Новое в стоматологии // Straka Dr. Michal – 2000. – № 4. – P. 49-55. 189. Eastmon S.J. Influence of phospholipid assymetry on fusion between large unilamellar vesicles / Eastmon S.J., Hope M.J., Wong K.F. et al. // Biochem. – 1992. – Vol. 31. – № 17. – P. 4262–4268. 190. Eguchi H. Binding and metabolism of platelet – activating factor (PAF) by isolated rat tupe pneumonocytes. / Eguchi H., Frenkel R.A., Johnston J.M. // Arch. Biochem. and Biophys. – 1994. – Vol. 308. – №. 2. – P. 426–431. 191. Epand R.M. Lipid vesicles which can bind to protein kinase C and activity the enzyme in the presence of EGTA / Epand R.M., Staffor A.R., Lester D.S. // Eur. J. Biochem. – 1992. – Vol. 2. – P. 327–332. 113 192. Fernandes L.A. Treatment of experimental periodontal disease by photodynamic therapy in immunosuppressed rats / Fernandes L.A. // J. Clin. Periodontol. – 2009. – Vol. 36. – № 3. – P. 219-228. 193. Frei B. Ascorbate is an outstanding antioxidant in human blood plasma / Frei B. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1989. – Vol. 86. – № 8. – P. 6377-6381. 194. Ferreira polymorphism at S.B. position An 3954 Interleukin-1β and red (IL-1β) complex single-nucleotide periodontopathogens independently and additively modulate the levels of IL-1β in diseased periodontal tissues / S.B. Ferreira, A.P. F. Trombone, C.E. Repeke, C.R. Cardoso, W. Martins, C.F. Santos, P.C. Trevilatto, M. J. A´vila-Campos, A. P. Campanelli, J.S. Silva, G.P. Garlet // INFECTION AND IMMUNITY № 8. – 2008 – Vol. 76 – P. 3725 – 3734. 195. Fukuhara K. The degree of hepatic regeneration after partial hepatectomy in rats with peritonitis and role of lipid peroxidation. / Fukuhara K., Suzuki V., Unpo M. et al. // Free Radic. Biol. Med. – 1999. – Vol. 26.–№7-8.–P. 881 – 886. 196. Genu B. Synergistik activation of phospholipase D by protein kinase C and G-protein-mediated pathways in streptoly / Genu B. – 1992. – Vol. 284. – № 2. – P. 531-538. 197. Goode H.F. Decreased antioxidant status and increased lipid piroxides in patients with septic shock and secondary organ dysfunction / Goode H.F., Cowlei H.C., Walker B.E. et al. // Crit. Care. Med. – 1995. – Vol. 23. – P. 646–651. 198. Goth L. Effects of rs769217 and rs1001179 polymorphisms of catalase gene on blood catalase, carbohydrate and lipid biomarkers in diabetes mellitus / L. Goth, T. Nagy, Z. Kosa et al. // Free Radic Res. – 2012. – Vol. 46 (10). – P. 1249– 1257. 114 199. Gutteridge J.M. Free radical and antioxidants in the year 2000. A historical look to the future / J.M. Gutteridge, B. Halliwell // Ann. N.Y. Acad. Sci. – 2000. – Vol. 899. – P. 136-147. 200. Halliwell B. Antioxidants in human health and disease / Halliwell B. // Ann. Rev. Nutr. – 1996. – Vol. 16. – P. 33-50. 201. Halliwell B. Mechanism involved in the generation of free radicals / Halliwell B. // Pathol. Biol. (Paris). – 1996. – Vol. 44. – P. 6-13. 202. Healy S. Immediate early response genes and cell transformation / S. Healy, P. Khan, J. R. Davie // Pharmacology & Therapeutics – 2013. – Vol. 137. – P. 64–77. 203. Hincheta polyphosphoinositide de Boschero, M.G. Phosphatidic acid and metabolism in rod other segments. Differential role of soluble and peripheral proteins / M.G. Hincheta de Boschero, N.M. Giusto // Biochem. et biophys. acta. Lipids and Lipid Metab. – 1992. – Vol. 1127. – № 2. – P. 105–115. 204. Hinder R.A. Damage to the gastric mucosa by free radicals / R.A. Hinder, C. Von Ritter, L. Svensson, H. Stein // S. Afr. Med. J. – 1988. – Vol. 74 (Suppl. 2). – P. 36-37. 205. Irvine R.F. Phosphatidylinositol -4,5 -bisphosphate phosphodiesterase and phosphomonoesterase activities of the rat brain. A some properties and possible control mechanisms / Irvine R.F., Lether A.J., Dawson R.M.C. // Biochem. J. – 1984. – № 218. – P. 77-185. 206. Karine G. Evidence for a physiological role for membrane rafts in human platelets / Karine G., Wolkers Willem F., Tsvetkova Nelly M. et al. // J. Cell. Physiol. – 2002. – Vol. 190. – № 1. – S. 117-128. 207. Kendall H.K. Nitric oxide synthase type II is synthesized by human gingival tissue and cultured human gingival fibroblasts / Kendall H.K., Haase H.R., Li H.et al. // J. Periodontal Res. - 2000. - Vol. 35. - №4. - P. 194-200. 115 208. Klonowski H. Mechanisms of free radical induced damage to pancreatic acinar cells / Klonowski H., Schulz H.U., Niederau C. // Digestion. – 1993. – Vol. 54. – № 5 – P. 286-289. 209. Kuminoto F. Inhibition of lipid peroxidation improves survival rate of endotoxemic rats / Kuminoto F., Morito T., Ogavo R., Fwijita T. // Circ. Shock. – 1987. – Vol. 21. – № 1. – P. 15-22. 210. Laine M.L. Gene polymorphisms in chronic periodontitis / M.L. Laine, B.G. Loos, W. Crielaard // International Journal of Dentistry. – 2010 – P. 1 – 22. 211. Lappin D.F. Inducible nitric oxide synthase expression in periodontitis / Lappin D.F., Kjeldsen M., Sander L. et al. // J. Periodontal Res. - 2000. - Vol. 35. - №6. - P. 369-373. 212. Leonardo M.R. EM evaluation of bacterial biofilm and microorganisms on the apical external root surface of human teeth / Leonardo M.R., Rossi M.A., Silva L.A., Bonifacio K.C. // J. Endod. - 2002. - № 28. - Р. 815818. 213. Lucovic L. Protection of infarcted reperfussed hearts by an alpha- tocoferol analogue unconnected with inhibition of lipid peroxidation / Lucovic L., Petty M., Boekenius F. et al.// 3-rd Iht. Symp. Lipid Metab. Normoxicand Ishemie Heart (Sept. 9-10, 1991, Rotterdam). – Rotterdam. – 1991. – P. 58. 214. Matsuda N. Vascular biology in sepsis: pathophysiological and therapeutic significance of vascular dysfunction / Matsuda N., Hattory Y. // J. Smooth. Muscle Res. – 2007. – Vol. 43. – № 4. – P. 117-137. 215. McKay S. Pro-inflammatory cytokines induce c-fos expression followed by IL-6 release in human airway smooth muscle cells / S. McKay, M. M. G. Bromhaar, J. C. de Jongste, et al. // Mediators of Inflammation – 2001 – V. 10. – P. 135–142. 216. Mullary B.H. Prevalence of periodontal pathogenes in localized and generalized forms of early-onset periodontitis / Mullary B.H., Dace B., Shelburne C.E. // J. Periodontol. Res. – 2000. – Vol. 35. – P. 232-241. 116 217. Murad F. Nitric oxide – biogeneration, regulation and relevance to human diseases / Murad F. // Frontiers bioscience. – 2003. – Vol. 8. – P. 264– 278. 218. Parks D.A. Ischemic injury in the cat small intenstine: role of superoxide radicals / D.A. Parks, G.B. Bulkley, D.N. Granger et al. // Gastroenterology. – 1982. – Vol. 82. – P. 9-15. 219. Patino W.D. Circulating transcriptome reveals markers of atherosclerosis / W. D. Patino, O. Y. Mian, Ju-G. Kang, et al. // PNAS – 2005. – Vol. 102, №. 9. – P. 3423–3428. 220. Rack M. Sepia officialis. Two forms of phosphotidilinositol-specific phospholipase C from retinal tissue of the cuttlefish sepia оfficinalis: (Vortr). / Rack M., Xhonneux B., Stieve H. // Hersttag. Ges. Biol. Chem. Hoppe-Seyler. – 1992. – Vоl. 373. – №. 9. – P. 812-813. 221. Redl H. Involvement of oxygen radicals in shock related cell injury / Redl H., Gasser H., Schlag G. // Brit. Med. Bull. – 1993. – Vol. 49. – № 3. – P. 556-565. 222. Rizzo A. Effect of metronidazole and modulation of cytokine production on human periodontal ligament cells / Rizzo A. // International Immunopharmacology. – 2010. – Vol. 10. – № 7. – P. 744-750. 223. Rosenblum J. On signal sequence polymorphisms and diseases of distribution / J. Rosenblum, N. Gilula // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1996. – № 9. – P. 4471–4473. 224. Saliques S. Smoking and FOS expression from blood leukocyte transcripts in patients with coronary artery disease / S. Saliques, J-R Teyssier, C. Vergely et al. // Atherosclerosis – 2011. – Vol. 219. – P. 931–936. 225. Schiller H.I. Antioxidant therapy / H.I. Schiller, P.M. Relly, G.P. Bulkley // Crit. Care Med. – 1993. – Vol. 21. – P. 92-102. 226. Sharma A. Genetic polymorphism of glutathione S-transferase P1 (GSTP1) in Delhi population and comparison with other global populations /A. 117 Sharma, A. Pandey, S. Sharma, I. Chatterjee, R. Mehrotra, A. Sehgal, J. K. Sharma //Meta Gene. –2014. №2. – P.134-142. 227. Shibata K. Nitric oxide synthase activity in neutrophils from patients with localized aggressive periodontitis / Shibata K., Warbington M.L., Gordon B.J. et al. // J. Periodontol. - 2001. - Vol. 72. - №8. - P. 1052-1058. 228. Singh S. Nitric oxide, the biological mediator of the decade: fact or fiction / Singh S., Evans T.W. // Eur. Respir. J. – 1997. – Vol. 10. – P. 699-707. 229. Slomiani B.L. Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide interferes with salivary mucin synthesis through inducible nitric oxide synthase activation by ERK and p38 kinase / Slomiani B.L., Slomiani A. // Biochem Biophys. Res. Commun. - 2002. - Vol. 297. - № 5. - P. 1149-1153. 230. Sogawa S. Protective effects of hydroxychalcones on free radical- induced cell damage / S. Sogawa, G. Nihro, H. Veda et al. // Biol. and Pharm. Bull. – 1994. – Vol. 17. – № 2. – P. 251-256. 231. Stubbs Ch. B. The modification of mammalian membrane polyunsaturated fatty acid composition in rotation to membrane fluidity and function / Stubbs Ch. B., Smith A.D. // Biochim. Biophys. Acta. – 1984. – Vol. 779. – № 1. – P. 89-134. 232. Szelenyi J. Possible role of oxigen free radicals in etyhanolinductol gastric mucosal damage in rats / J. Szelenyi, K. Brune // Dig Dis Sci. - 1988. – Vol. 33. – № 7. – P. 865-871. 233. Tokyay R. Prostaglandin synthetase ingibition reduced earli liver oxidant stress / Tokyay R., Kaya E., Gur E.S. et al. // Surg. Today. – 1999. – Vol. 29. – № 1. – P. 42–46. 234. Tolker-Nielsen T. Spatial organization of microbial biofilm communites / Tolker-Nielsen T., Molin S. // Microb. Ecol. - 2000. - № 40. - P. 7584. 235. Urano S. Vitamin E: inhibition of retinol-induced hemolysis and membrane-stabilizing behavior / S. Urano, Y. Inomori, T. Sugawara et al. // J. Biol. Chem. – 1992. – Vol. 267. – № 26. – P. 18365-18370. 118 236. Wentworth P. Evidence for antibody–catalyzed ozone formation in bacterial killing and inflammation / Wentworth P., McDunn J.E., Wentworth A.D. et al. // Science. – 2002. – Vol. 298. – № 5601. – P. 2195–2199. 237. Ytrehus K. Lipid peroxidation and membrane damage of the heart / K. Ytrehus, A.C. Hegstad // Acta Physiol. Scand. – 1991. – Vol. 142. – Suppl. 599. – P. 81-91. 238. Zaman W. Phosphatidic acid induces the release of β-glucuronidase but not lactoferrin from electropermeabilized human neutrophils / Zaman W., Mitsuyama T., Hatakenaka M. et al. // J. Biochem. – 1994. – Vol. 115. – № 2. – P. 238-244. 239. Zhang N. Analysis of Interleukin-8 gene variants reveals their relative importance as genetic susceptibility factors for chronic periodontitis in the Han population / N. Zhang, Y. Xu, B. Zhang, T. Zhang, H. Yang, B. Zhang, Z. Feng, D. Zhong // PLOS ONE. – 2014 – Vol. 9 – P. 1 – 9. 240. Zhang P. Thioredoxin peroxidase is a novel inhibitor of apoptosis with a mechanism distinct from that of Bcl-2 / Zhang P., Liu B., Kang S.W. et al. // J. Biol. Chem. – 1997. – Vol. 272. – P. 30615-30618. 241. Zhang R. Myeloperoxidase functions as a major enzymatic catalyst for intiation of lipid peroxidation at sites of inflammation / Zhang R., Brennan M.L., Shen Z. et al. // J. Biol. Chem. – 2002. – Vol. 277. – P. 46116–46122. 119
