ПРОЕКТ «2.6.12.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
ПРОЕКТ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
«2.6.12. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ
НЕСТЕРИЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ:
ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ АЭРОБОВ»
Разработана на основе Европейской Фармакопеи
Введена в действие с
2011 года
приказом Министерства здравоохранения Республики Беларусь
от
2010 года №
взамен статьи ГФ РБ, том 1, стр. 163
«2.6.12. Микробиологические испытания
нестерильной
продукции:
суммарное
количество жизнеспособных аэробов»
от 01.01.2007 г.
1. ВВЕДЕНИЕ
Испытания, описанные ниже, позволяют осуществлять количественное
определение мезофильных бактерий и грибов, способных расти в аэробных
условиях.
Испытания предназначены в первую очередь для определения
соответствия требованиям спецификации по микробиологической чистоте, как
субстанций, так и лекарственных средств. В случае использования методик для
таких целей следуют инструкциям, приведенным ниже, включая количество
образцов, которое следует взять, и интерпретацию результатов, в соответствии с
тем, как изложено далее.
Эти методы не применимы к продуктам, содержащим живые
микроорганизмы в качестве активных ингредиентов.
Альтернативные микробиологические методики, включая автоматические
методы, могут использоваться в том случае, если доказана их эквивалентность
фармакопейным методикам.
2. ОБЩИЕ ОПЕРАЦИИ
Выполняют испытания в условиях, позволяющих избежать случайную
контаминацию
испытуемого
продукта.
Меры
предосторожности,
Общая фармакопейная статья
1
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
предпринимаемые для предотвращения контаминации, не должны влиять ни на
один из микроорганизмов, обнаруживаемых в ходе испытания.
Если испытуемый продукт обладает антимикробным действием, оно должно
быть подходящим образом нейтрализовано. Если для этой цели используют
инактиваторы, должна быть продемонстрирована их эффективность и
нетоксичность в отношении микроорганизмов.
Если для приготовления образца используются поверхностно-активные
вещества, должна быть продемонстрирована их нетоксичность и их
совместимость с применяемыми инактиваторами.
3. МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА
Суммарное количество жизнеспособных аэробов определяют методом
мембранной фильтрации или методом чашечного подсчета в соответствии с
указаниями частной статьи. Метод наиболее вероятного числа (НВЧ) обычно
является наименее точным методом микробиологических подсчетов, однако он
может оказаться наиболее подходящим для некоторых групп продуктов с очень
низкой бионагрузкой.
Выбор метода основывается на таких факторах, как природа продукта и
требуемый предел содержания микроорганизмов. Выбранный метод должен
позволять проводить испытания образца подходящего размера для возможности
вынесения заключения о соответствии спецификации. Пригодность выбранного
метода должна быть доказана.
4. РОСТОВЫЕ СВОЙСТВА СРЕД, ПРИГОДНОСТЬ МЕТОДА ПОДСЧЕТА И
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ КОНТРОЛИ
4-1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Возможность обнаружения микроорганизмов в испытании в присутствии
испытуемого продукта должна быть доказана.
При внесении в процедуру испытания или в продукт изменений, способных
повлиять на проведение испытания, должна быть подтверждена пригодность.
4-2. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТЕСТ-ШТАММОВ
Используют стабильные стандартизованные суспензии тест-штаммов или
готовят их как указано ниже. Используется техника сохранения эталонного банка
культур микроорганизмов таким образом, чтобы живые микроорганизмы,
использованные для инокуляции, были удалены не более чем на 5 пересевов от
оригинального контрольного банка культур микроорганизмов. Выращивают
каждый бактериальный или грибковый тест-штамм отдельно как указано в
таблице 2.6.12.-1.
Для приготовления испытуемой суспензии используют забуференный
раствор натрия хлорида и пептона рН 7,0 или фосфатный буферный раствор рН
7,2; для суспендирования спор A. brasiliensis в буфер может быть прибавлен
полисорбат 80 в количестве 0,05%. Суспензии используют в течение 2 ч или, при
условии хранения при температуре от 2°С до 8°С, в течение 24 ч. В качестве
альтернативы приготовлению и последующему разведению свежей суспензии
вегетативных клеток A. brasiliensis или B. subtilis готовят стабильную суспензию
спор и затем необходимый объем приготовленной суспензии используют для
Общая фармакопейная статья
2
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
инокуляции. Стабильная суспензия спор может храниться при температуре от 2°С
до 8°С в течение валидированного периода времени.
4-3. ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ КОНТРОЛЬ
Для проверки условий испытания проводят отрицательный контроль с
использованием выбранного разбавителя вместо испытуемого образца. Не
должно наблюдаться роста микроорганизмов. Отрицательный контроль проводят
также при испытании продуктов как указано в разделе 5. Неудавшийся
отрицательный контроль требует проведения расследования.
4-4. РОСТОВЫЕ СВОЙСТВА СРЕД
Испытания проводят на каждой серии готовой среды и на каждой серии
среды, приготовленной из дегидратированной среды или из указанных
ингредиентов.
Инокулируют порции/чашки с бульоном на основе гидролизата казеина и
соевых бобов и с агаризованной средой на основе гидролизата казеина и соевых
бобов небольшим количеством (не более 100 КОЕ) микроорганизмов, указанных в
таблице 2.6.12.-1, используя отдельные порции/чашки среды для каждого вида.
Инокулируют чашки с декстрозным агаром Сабуро небольшим количеством (не
более 100 КОЕ) микроорганизмов, указанных в таблице 2.6.12.-1, используя
отдельные чашки со средой для каждого вида. Инкубируют в условиях, указанных
в таблице 2.6.12.-1.
Рост, обнаруживаемый на каждой твердой среде, не должен отличаться от
значения, найденного для стандартизованного инокулята, более чем в 2 раза. Для
свежеприготовленного инокулята рост микроорганизмов сопоставим с ростом,
который был ранее получен с использованием ранее испытанной и утвержденной
серией среды. Жидкая среда пригодна, если обнаруживается отчетливо заметный
рост микроорганизмов в сравнении с ростом, который был ранее получен с
использованием ранее испытанной и утвержденной серией среды.
#
Допускается использование альтернативных питательных сред (2.6.13),
например, жидкой среды №1 (мясо-пептонный бульон) и агаризованной среды №1
— для приготовления тест-штаммов и определения общего количества аэробов
(ОКА); жидкой среды №2 и агаризованной среды №2 — для приготовления тестштаммов и определения общего количества грибов (ОКГ).#
Таблица 2.6.12.-1
Приготовление и использование тест-микроорганизмов.
Микроорганизм
Приготовление
тест-штамма
Активация роста
Общее
количество
аэробов
Staphylococcus
aureus:
ATCC 6538
NCIMB 9518
CIP 4.83
NBRC 13276
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
или бульон на
основе
гидролизата
Общая фармакопейная статья
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
и бульон на
основе
гидролизата
Общее
количество
грибов и
плесени
–
Пригодность метода
подсчета в присутствии
продукта
Общее
Общее
количество
количество
аэробов
грибов и
плесени
Агаризованная
–
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых
бобов/НВЧ
бульон на
основе
3
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
казеина и
соевых бобов
30—35°С
18—24 ч
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
Pseudomonas
aeruginosa:
ATCC 9027
NCIMB 8626
CIP 82.118
NBRC 13275
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
или бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
30—35°С
18—24 ч
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
и бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
–
Bacillus subtilis:
ATCC 6633
NCIMB 8054
CIP 52.62
NBRC 3134
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
или бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
30—35°С
18—24 ч
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
и бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
–
Candida
albicans:
ATCC 10231
NCIMB 3179
CIP 48.72
NBRC 1594
Декстрозный
агар Сабуро
или
декстрозный
бульон Сабуро
20—25°С
2—3 дня
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 5 дней
Декстрозный
агар Сабуро
≤100 КОЕ
20—25°С
≤ 5 дней
Aspergillus
brasiliensis:
ATCC 16404
NCIMB 149007
CIP 1431.83
NBRC 9455
Декстрозный
агар Сабуро
или
картофельнодекстрозный
бульон
20—25°С
5—7 дней или
до получения
хорошей
споруляции
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 5 дней
Декстрозный
агар Сабуро
≤100 КОЕ
20—25°С
≤ 5 дней
Общая фармакопейная статья
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых
бобов/НВЧ
бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых
бобов/НВЧ
бульон на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 3 дней
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 5 дней
НВЧ: не
применяется
Агаризованная
среда на
основе
гидролизата
казеина и
соевых бобов
≤100 КОЕ
30—35°С
≤ 5 дней
НВЧ: не
применяется
–
–
Декстрозный
агар Сабуро
≤100 КОЕ
20—25°С
≤ 5 дней
Декстрозный
агар Сабуро
≤100 КОЕ
20—25°С
≤ 5 дней
4
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
4-5. ПРИГОДНОСТЬ МЕТОДА ПОДСЧЕТА В ПРИСУТСТВИИ ПРОДУКТА
4-5-1. Приготовление образца. Способ приготовления образца зависит от
физических свойств испытуемого продукта. В случае если ни один из описанных
способов не является удовлетворительным, должен быть разработан
альтернативный способ.
Водорастворимые продукты. Растворяют или разводят (обычно в
соотношении 1:10) испытуемый продукт в забуференном растворе натрия
хлорида и пептона рН 7,0, в фосфатном буферном растворе рН 7,2 или в бульоне
на основе гидролизата казеина и соевых бобов. При необходимости доводят до
рН 6—8. Дальнейшие разведения, при необходимости, готовят с помощью этого
же разбавителя.
Нерастворимые в воде продукты, не относящиеся к жирам.
Суспендируют (обычно в соотношении 1:10) испытуемый продукт в забуференном
растворе натрия хлорида и пептона рН 7,0, в фосфатном буферном растворе рН
7,2 или в бульоне на основе гидролизата казеина и соевых бобов. Для получения
суспензии плохо смачиваемых веществ может быть добавлено поверхностноактивное вещество, например 1 г/л полисорбата 80. При необходимости доводят
до рН 6—8. Дальнейшие разведения, при необходимости, готовят с помощью
этого же разбавителя.
Жиры. Испытуемый продукт растворяют в изопропилмиристате,
стерилизованном с помощью фильтрации, или смешивают с минимальным
необходимым количеством стерильного полисорбата 80 или иного не
ингибирующего стерильного поверхностно-активного вещества, нагретого при
необходимости до температуры не выше 40°С или, в исключительных случаях, не
выше 45°С. Аккуратно перемешивают и при необходимости поддерживают
температуру в водяной бане. Прибавляют предварительно подогретый до нужной
температуры выбранный разбавитель до получения разведения испытуемого
продукта 1:10. Аккуратно перемешивают, поддерживая температуру в течение
минимального времени, необходимого для образования эмульсии. Дальнейшие
серийные десятикратные разведения могут быть приготовлены с использованием
выбранного разбавителя, содержащего подходящую концентрацию полисорбата
80 или иного не ингибирующего стерильного поверхностно-активного вещества.
Жидкости или твердые вещества в форме аэрозоля. Испытуемый продукт
асептически переносят на мембранный фильтр или помещают в стерильный
контейнер для дальнейшего отбора проб. Используют либо полный объем
аэрозоля, либо определенное количество доз из каждого испытуемого
контейнера.
Трансдермальные пластыри. С трансдермальных пластырей удаляют
защитное покрытие и помещают их в стерильные пластмассовые или стеклянные
лотки клейкой поверхностью вверх. Клейкую поверхность накрывают стерильным
пористым материалом, например, марлей, для предотвращения слипания
пластырей, и переносят их в подходящий объем выбранного разбавителя,
содержащего инактиваторы, такие как полисорбат 80 и/или лецитин. Энергично
встряхивают в течение не менее 30 мин.
4-5-2. Инокуляция и разведение. К приготовленному как описано выше (45-1) образцу и к контролю (не содержащему испытуемого продукта) прибавляют
достаточный объем микробной суспензии до получения инокулята, содержащего
не более 100 КОЕ. Объем суспензии инокулята не должен превышать 1% объема
разведенного продукта.
Общая фармакопейная статья
5
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
Для демонстрации приемлемой микробной открываемости испытуемого
продукта для испытания должен быть использован минимально возможный
фактор разведения. Если это невозможно из-за антимикробного действия или
плохой растворимости, должны быть разработаны иные подходящие методики.
Если ингибирование роста образцом невозможно предотвратить, аликвота
микробной суспензии может прибавляться после нейтрализации, разведения или
фильтрации.
4-5-3. Нейтрализация/устранение антимикробного действия. Количество
микроорганизмов, обнаруженных в приготовленном образце, разведенном как
указано в 4-5-2 и инкубированного в соответствии с процедурой, описанной в 4-54, сравнивают с количеством микроорганизмов, обнаруженных в контроле.
Если рост ингибируется (уменьшение на коэффициент более 2), изменяют
процедуру точного подсчета для подтверждения достоверности полученных
результатов. Изменения процедуры могут включать, например, (1) увеличение
объема разбавителя или питательной среды, (2) включение специфического или
общего нейтрализующего агента в разбавитель, (3) мембранную фильтрацию или
(4) комбинацию перечисленных способов.
Нейтрализующие агенты. Нейтрализующие агенты могут быть
использованы для нейтрализации активности антимикробных агентов (таблица
2.6.12.-2). Они могут прибавляться в выбранный разбавитель или в среду,
желательно перед стерилизацией. Если они используются, их эффективность и
отсутствие токсичного действия на микроорганизмы должны подтверждаться
контрольным испытанием, проводимым с нейтрализующим агентом и без
испытуемого продукта.
Таблица 2.6.12.-2
Общие нейтрализующие агенты для мешающих веществ.
Мешающее вещество
Возможный метод нейтрализации
Глутаровый альдегид,
Натрия гидросульфит (натрия
ртутьсодержащие вещества
бисульфит)
Фенольные вещества, спирт,
Разведение
альдегиды, сорбат
Альдегиды
Глицин
Четвертичные аммониевые
Лецитин
соединения (ЧАС),
парагидроксибензоаты (парабены),
бис-бигуаниды
ЧАС, йод, парабены
Полисорбат
Ртутьсодержащие вещества
Тиогликолят
Ртутьсодержащие вещества, галогены, Тиосульфат
альдегиды
ЭДТА (эдетат)
Ионы Mg2+ и Са2+
Если невозможно подобрать подходящий метод нейтрализации, можно
сделать заключение, что невозможность изолирования инокулированного
микроорганизма обуславливается бактерицидным действием продукта. Такая
информация указывает на то, что продукт не может быть контаминирован данным
видом микроорганизма. Однако, возможно, что продукт ингибирует только
некоторые специфицированные для него микроорганизмы, но не ингибирует иные,
не включенные в этот список штаммы или для которых эти штаммы не являются
Общая фармакопейная статья
6
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
характерными. Поэтому проводят испытание с большим коэффициентом
разведения, допускающим микробный рост и специфические критерии
приемлемости.
4-5-4. Обнаружение микроорганизмов в присутствии испытуемого
продукта. Проводят отдельные испытания для каждого перечисленного
микроорганизма. Подсчитывают только микроорганизмы прибавленного тестштамма.
4-5-4-1. Мембранная фильтрация. Используют мембранные фильтры с
номинальным размером пор, не превышающим 0,45 мкм. Тип фильтрующего
материала выбирают таким образом, чтобы компоненты испытуемого образца не
влияли на эффективность удерживания бактерий. Для каждого перечисленного
микроорганизма используют один мембранный фильтр.
Подходящее количество испытуемого образца, приготовленного как
описано в 4-5-1—4-5-3 (желательно, содержащего 1 г испытуемого продукта или
менее, если ожидают большое количество КОЕ) переносят на мембранный
фильтр, немедленно фильтруют и промывают мембранный фильтр подходящим
количеством разбавителя.
Для определения общего количества аэробов (ОКА, TAMC — total aerobic
microbial count) мембранный фильтр переносят на поверхность агаризованной
среды на основе гидролизата казеина и соевых бобов. Для определения общего
количества грибов (ОКГ, TYMC — total combined yeasts/moulds count) мембранный
фильтр переносят на декстрозный агар Сабуро. Чашки инкубируют, как указано в
таблице 2.6.12.-1. Проводят подсчет.
4-5-4-2. Методы чашечного подсчета. Проводят метод чашечного
подсчета не менее чем в двух повторностях на каждой среде и используют
среднее значение.
4-5-4-2-1. Метод глубинного посева.
На чашку Петри диаметром 9 см прибавляют 1 мл испытуемого образца,
приготовленного как описано в 4-5-1—4-5-3, и 15—20 мл агаризованной среды на
основе гидролизата казеина и соевых бобов или декстрозного агара Сабуро с
температурой не более 45°С. Если используются большие чашки Петри,
соответственно увеличивают количество агаризованной среды. Для каждого
микроорганизма, перечисленного в таблице 2.6.12.-1, используют не менее 2
чашек Петри. Инкубируют чашки как указано в таблице 2.6.12.-1. Рассчитывают
среднее арифметическое значение числа колоний и определяют КОЕ в
первоначальном инокуляте.
4-5-4-2-2. Метод поверхностного посева.
На чашку Петри диаметром 9 см прибавляют 15—20 мл агаризованной
среды на основе гидролизата казеина и соевых бобов или декстрозного агара
Сабуро с температурой около 45°С и выдерживают до затвердевания. Если
используются большие чашки Петри, соответственно увеличивают количество
агаризованной среды. Чашки высушивают, например, в ламинаре или в
инкубаторе. Для каждого микроорганизма, перечисленного в таблице 2.6.12.-1,
используют не менее 2 чашек Петри. Наносят измеренный объем не менее 0,1 мл
испытуемого образца, приготовленного как описано в 4-5-1—4-5-3, на поверхность
среды. Инкубируют и проводят расчет как описано в 4-5-4-2-1.
4-5-4-3. Метод наиболее вероятного числа (НВЧ). Точность и
правильность метода НВЧ меньше, чем у метода мембранной фильтрации и
метода чашечного подсчета. Ненадежные результаты получаются главным
образом при подсчете грибов. По этой причине метод НВЧ используют только для
Общая фармакопейная статья
7
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
расчета общего количества аэробов (ОКА) в случае, если иные методы не
доступны. Если данный метод указан, его проводят следующим образом.
Готовят серии из не менее 3 серийных десятикратных разведений
испытуемого продукта, как описано в 4-5-1—4-5-3. Из каждого уровня разведений
используют 3 аликвоты по 1 г или 1 мл для инокулирования 3 пробирок с 9—10 мл
бульона на основе гидролизата казеина и соевых бобов. При необходимости в
среду может быть добавлено поверхностно-активное вещество, например,
полисорбат 80 или инактиватор антимикробного действия. Таким образом, если
приготовлено 3 уровня разведений, инокулируют 9 пробирок.
Пробирки инкубируют при температуре 30—35°С в течение не более 3
дней. Если получение результатов осложнено или они не точные вследствие
природы испытуемого продукта, пересевают в аналогичный бульон или на
агаризованную среду на основе гидролизата казеина и соевых бобов, инкубируют
при той же температуре в течение 1—2 дней и используют полученные
результаты. Определяют наиболее вероятное число микроорганизмов в грамме
или миллилитре испытуемого продукта по таблице 2.6.12.-3.
Таблица 2.6.12.-3
Значения наиболее вероятного числа микроорганизмов.
Наблюдаемые комбинации количества
НВЧ в
пробирок, в которых наблюдается рост в
Пределы при
грамме или
каждой серии пробирок
уровне
миллилитре
Количество граммов или миллилитров
значимости
испытуемого
испытуемого продукта в пробирке
95%
продукта
0,1
0,01
0,001
0
0
0
<3
0—9,4
0
0
1
3
0,1—9,5
0
1
0
3
0,1—10
0
1
1
6,1
1,2—17
0
2
0
6,2
1,2—17
0
3
0
9,4
3,5—35
1
0
0
3,6
0,2—17
1
0
1
7,2
1,2—17
1
0
2
11
4—35
1
1
0
7,4
1,3—20
1
1
1
11
4—35
1
2
0
11
4—35
1
2
1
15
5—38
1
3
0
16
5—38
2
0
0
9,2
1,5—35
2
0
1
14
4—35
2
0
2
20
5—38
2
1
0
15
4—38
2
1
1
20
5—38
2
1
2
27
9—94
2
2
0
21
5—40
2
2
1
28
9—94
2
2
2
35
9—94
2
3
0
29
9—94
Общая фармакопейная статья
8
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
0
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
1
0
1
2
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
3
36
23
38
64
43
75
120
160
93
150
210
290
240
460
1100
> 1100
9—94
5—94
9—104
16—181
9—181
17—199
30—360
30—380
18—360
30—380
30—400
90—990
40—990
90—1980
200—4000
4-6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
При проверке пригодности метода мембранной фильтрации или метода
чашечного подсчета должно быть получено среднее значение любого из тесторганизмов, не отличающееся на коэффициент более чем 2 от значения
контроля, описанного в 4-5-2 при отсутствии испытуемого продукта. При проверке
пригодности метода НВЧ, рассчитанное значение инокулята должно укладываться
в пределы при уровне значимости 95% от результата, полученного в контроле.
Если указанные выше критерии не могут быть достигнуты для одного или
нескольких организмов, испытываемых любым из описанных методов, для
испытуемого образца применяют метод и условия испытания, наиболее близкие к
требуемым критериям.
5. ИСПЫТАНИЕ ПРОДУКТОВ
5-1. КОЛИЧЕСТВА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИСПЫТАНИЙ
Если иного не указано в частной статье, используют 10 г или 10 мл
испытуемого продукта, отобранного с указанными выше предосторожностями. Для
жидкостей или твердых веществ в форме аэрозоля, используют 10 контейнеров.
Для трансдермальных пластырей используют 10 пластырей.
Количество, необходимое для испытания, может быть уменьшено для
фармацевтических субстанций, содержание которых в готовой форме будет
составлять: количество в дозированной единице (например, таблетка, капсула,
форма для инъекции) менее или равно 1 мг или количество в грамме или
миллилитре (для недозированных лекарственных средств) менее 1 мг. В таких
случаях количество испытуемого образца должно быть не менее чем количество,
содержащееся в 10 дозированных единицах или 10 г или 10 мл продукта.
Для веществ, используемых в качестве фармацевтических субстанций,
количество которых ограничено или объем серии очень мал (например, менее
1000 мл или 1000 г), количество, необходимое для испытания, должно составлять
1% от размера серии, если не подтверждена возможность использования
меньшего количества.
Общая фармакопейная статья
9
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
Для продуктов, общее количество в серии которых менее 200 единиц
(например, образцы, используемые для клинических исследований) размер
образца может быть уменьшен до 2 единиц, или 1 единицы, если объем серии
менее 100 единиц.
Образец (образцы) отбирают случайным образом из in bulk продукта или из
доступных контейнеров лекарственного средства. Для получения требуемого
количества, смешивают содержимое достаточного числа контейнеров для
формирования образца для анализа.
5-2. ИСПЫТАНИЕ ПРОДУКТА
5-2-1. Мембранная фильтрация.
Используют аппарат для фильтрования, позволяющий переносить фильтр
на среду. Для приготовления образца используют метод, который был установлен
пригодным, как указано в разделе 4, и переносят подходящее количество на
каждый из двух мембранных фильтров и немедленно фильтруют. Допускается
промывка фильтра после фильтрования.
Для определения общего количества аэробов (ОКА) один из мембранных
фильтров переносят на поверхность агаризованной среды на основе гидролизата
казеина и соевых бобов. Для определения общего количества грибов (ОКГ)
переносят другой мембранный фильтр на поверхность декстрозного агара
Сабуро. Чашки с агаризованной средой на основе гидролизата казеина и соевых
бобов инкубируют при температуре 30—35°С в течение 3—5 дней, а чашки с
декстрозным агаром Сабуро при температуре 20—25°С в течение 5—7 дней.
Рассчитывают содержание КОЕ в грамме или миллилитре испытуемого продукта.
При испытании трансдермальных пластырей 10% объема раствора,
приготовленного как указано в 4-5-1, фильтруют по отдельности через каждый из
двух стерильных мембранных фильтров. Для определения общего количества
аэробов (ОКА) один из мембранных фильтров переносят на поверхность
агаризованной среды на основе гидролизата казеина и соевых бобов. Для
определения общего количества грибов (ОКГ) переносят другой мембранный
фильтр на поверхность декстрозного агара Сабуро.
5-2-2. Методы чашечного подсчета.
5-2-2-1. Метод глубинного посева.
Для приготовления образца используют метод, который был найден
пригодным, как указано в разделе 4. Для каждой среды готовят не менее двух
чашек Петри для каждого уровня разведений. Чашки с агаризованной средой на
основе гидролизата казеина и соевых бобов инкубируют при температуре 30—
35°С в течение 3—5 дней, а чашки с декстрозным агаром Сабуро при температуре
20—25°С в течение 5—7 дней. Отбирают чашки, соответствующие данному
уровню разведения с максимальным количеством колоний менее 250 для
определения общего количества аэробов (ОКА) и менее 50 для определения
общего количества грибов (ОКГ). Рассчитывают среднее арифметическое
значение числа колоний и определяют КОЕ в грамме или миллилитре
испытуемого продукта.
5-2-2-2. Метод поверхностного посева.
Для приготовления образца используют метод, который был найден
пригодным, как указано в разделе 4. Для каждой среды готовят не менее двух
чашек Петри для каждого уровня разведений. Инкубацию и расчет числа КОЕ
проводят как указано для метода глубинного посева.
5-2-3. Метод наиболее вероятного числа.
Общая фармакопейная статья
10
2.6.12. Микробиологические испытания нестерильной продукции: общее
количество жизнеспособных аэробов
Для приготовления образца используют метод, который был найден
пригодным, как указано в разделе 4. Все пробирки инкубируют при температуре
30—35°С в течение 3—5 дней. При необходимости пересевают, используя
подходящий способ. Для каждого уровня разведения записывают число пробирок,
в которых обнаруживается микробный рост. Определяют наиболее вероятное
число микроорганизмов в грамме или миллилитре испытуемого продукта в
соответствии с таблицей 2.6.12.-3.
#
Частные статьи должны содержать сведения о наличии антимикробного
действия продукта и рекомендации по его устранению.#
5-3. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Общее количество аэробов (ОКА) считается равным числу КОЕ,
найденному с использованием агаризованной среды на основе гидролизата
казеина и соевых бобов; если на этой среде обнаруживаются колонии грибов, они
рассчитываются как часть общего количества аэробов (ОКА). Общее количество
грибов (ОКГ) считается равным числу КОЕ, найденному с использованием
декстрозного агара Сабуро; если на этой среде обнаруживаются колонии
бактерий, они рассчитываются как часть общего количества грибов (ОКГ). Если
из-за микробного роста ожидается превышение предельных значений общего
количества грибов (ОКГ), допускается использование декстрозного агара Сабуро,
содержащего антибиотики. Если расчеты производят с использованием метода
НВЧ, полученное значение рассматривается как общее количество аэробов
(ОКА).
Допустимые критерии приемлемости микробиологической чистоты
интерпретируют следующим образом:
– 101 КОЕ: максимально допустимое число = 20;
– 102 КОЕ: максимально допустимое число = 200;
– 103 КОЕ: максимально допустимое число = 2000 и так далее.
Рекомендуемые растворы и питательные среды описаны в общей статье
2.6.13.
Общая фармакопейная статья
11