Цитокины и воспаление

Ц И Т ОиК И Н Ы воспаление Cytokines & Inflammation Том 13, № 1, 2014 Материалы Юбилейной научно-практической конференции «СОВРЕМЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИММУНОФАРМАКОЛОГИИ, БИОТЕХНОЛОГИИ И ЦИТОКИНОВОЙ РЕГУЛЯЦИИ», посвященной 40-летию ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России Санкт-Петербург 25–27 июня 2014 г. Министерство Здравоохранения России, Федеральное медико-биологическое агентство РФ, Комитет Здравоохранения правительства Санкт-Петербурга, Северо-Западное отделение Российской Академии медицинских наук, Российское Цитокиновое общество, Российское научное общество иммунологов, Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов Дорогие друзья и коллеги! 40 лет назад в Ленинграде был образован Всесоюзный НИИ особо чистых биопрепаратов, сегодняшний ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России. С 1981 года институт располагается на Пудожской улице, 7, где находятся научно-исследовательские лаборатории и производственный участок для выпуска иммунобиологических препаратов. В середине 90-х годов институт успешно сотрудничал в международных проектах МНТЦ, АФГИР и др., что обеспечивало выполнение передовых научных разработок и по лучение современного исследовательского и технологического оборудования для фунда ментальных и прикладных исследований в области иммунологии и биотехнологии. В 1998 году в институте было создано лицензированное производство, где на основе соб ственных разработок был начат выпуск лекарственных препаратов рекомбинантных белков и синтетических пептидов, что позволило укрепить финансово-экономическую стабильность института. За высокие достижения в научно-исследовательской деятельности в области биотехно логии и молекулярной биологии в 1997 году институту был присвоен статус Государствен ного научного центра. 27 апреля 2005 года распоряжением Правительства РФ институт был внесен в перечень унитарных предприятий, подведомственных Федеральному медико-биологическому агентству, и вошел в состав ФМБА России как Федеральное государственное унитарное предприятие «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых био препаратов» (ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России). Результатом деятельности института является разработка и внедрение в медицинскую практику целого ряда генно-инженерных и пептидных препаратов, отмеченных наградами разных уровней: · за разработку технологии производства высокоочищенного лейкоцитарного интерферона «Интерлок» коллектив научных сотрудников в 1980 году был награжден Государственными наградами: орденом «Знак Почета» и тремя медалями; · за высокие достижения в научно-исследовательской деятельности по результатам 1985 года институт был отмечен Почетным знаменем как победитель в соревновании среди научных подразделений отрасли; · за разработку и внедрение рекомбинантного лекарственного препарата «Беталейкин» четырем сотрудникам института — Кетлинскому С.А., Симбирцеву А.С., Ищенко А.М. и Свентицкому Е.Н. — была присвоена премия Правительства РФ в области науки и техники за 2006 год; · за разработку технологии получения производных хитина и препаратов на их основе для применения в сельском хозяйстве, медицине, биотехнологии сотруднику института, начальнику производственно-технического отдела Антонову С.Ф. в группе авторов присвоена премия Правительства РФ в области науки и техники за 2013 год. В этом году ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России исполняется 40 лет. Мы подводим итоги, строим планы на будущее. Уверен, что Юбилейная научно-практическая конференция «СОВРЕМЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИММУНОФАРМАКОЛОГИИ, БИОТЕХНОЛОГИИ И ЦИТОКИНОВОЙ РЕГУЛЯЦИИ», посвященная этой дате, будет способствовать успешному обмену опытом между биотехнологами, иммунологами, фармакологами и клиницистами по использованию новых технологий, применению инновационных лекарственных препаратов для улучшения оказания медицинской помощи в нашей стране. Директор ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России профессор А.С. Симбирцев ТЕЗИСЫ Влияние введения аутологичных эритроцитов на аутоиммунную гемолитическую анемию у мышей него отдела гениталий, что, в совокупности с нарушением факторов локального иммунитета, приводит к нестабильности клеточного генома и создает фон для развития неопластического процесса. Цель исследования — определение уровней цитокинов цервикальной слизи и периферической крови у пациенток с хро ническим цервицитом, ассоциированным с ВПЧ высокого риска. Материалы и методы. Проведено изучение уровней IFNα, IFNγ, IL-2, IL-4, IL-8, IL-10, TNFα в цервикальной слизи и пе риферической крови у 40 пациенток с хроническим цервицитом, у которых предварительно методом ПЦР был обнаружен ВПЧ высокого риска. Контрольную группу составили 40 жен щин без клинико-морфологических изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии с наличием ВПЧ высокого риска. Средний возраст обследуемых женщин — 30,2 ± 0,44 года. Для определения уровней цитокинов были использованы соответствующие тест-системы производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург). Статистическую обработку проводили с использованием программы «Statistica 6.0». Результаты и обсуждение. Проведенный анализ уровней цитокинов у пациенток с хроническим цервицитом по сравнению с контрольной группой установил повышение уровней IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4 в цервикальной слизи и высокое содержание IFNγ, IL-2, IL-8, IL-10, TNFα в периферической крови. Полученные однонаправленные изменения уровней IFNγ и IL-2 могут свидетельствовать о напряженности противовирусного иммунитета. Локальное и системное повышение уровня IFNγ может быть связано с его продукцией активированными лимфоцитами и вирус-трансформированными цервикальными клеткам, что может привести к персистенции инфекции. Повышенный уровень IL-2, с одной стороны, стимулирует синтез других цитокинов, продуцируемых Т-клетками, в частности IFNγ и TNFα, что нашло отражение в изменении цитокинового профиля у пациенток исследуемой группы. С другой сторо ны, IL-2 может активировать Т-регуляторные клетки, которые обладают выраженным иммуносупрессивным действием, в том числе через IL-4 и IFNγ. IL-4, IL-10 и TNFα в условиях вирусной инфекции как напрямую, так и опосредованно могут выполнять функции супрессорных факторов, обусловливая истощение и дисрегуляцию иммунной системы, и тем самым создавать благоприятные условия для прогрессии заболевания. При этом необходимо отметить, что гиперпродукция TNFα является одним из основных механизмов активации инфекционного процесса при его переходе из латентного состояния в фазу клинических проявлений. Нарушение выработки прои противовоспалительных медиаторов на местном уровне, опосредованное компонентами вируса и хроническим воспалительным процессом, может способствовать персистенции ВПЧ и привести к прогрессии заболевания. Н.Н. Абишева, Л.В. Бедулева, И.В. Меньшиков Удмуртский государственный университет, г. Ижевск Ранее на экспериментальной модели аутоиммунной гемолитической анемии у мышей, вызванной введением эритроцитов крыс, нами было показано, что механизмом индукции и развития аутоиммунной реакции в данной модели является нарушение равновесия в идиотип-антиидиотипических взаимодействиях между антиидиотипом аутоклона и идиотипом к эритроцитам крыс при его активации. Есть основания полагать, что важную роль в предотвращении развития аутоиммунных заболеваний играет ревматоидный фактор (РФ). РФ сдерживает экспансию лимфоцитов против антигена-индуктора аутоиммунного заболевания через идиотипические взаимодействия с ними. Однако как работает механизм идиотипической регуляции аутореактивных антиэритроцитарных лимфоцитов, остается до конца не ясным. Одним из подходов для изучения механизмов идиотипической регуляции является исследование поведения идиотипических и антиидиотипических лимфоцитов при их избирательной активации. Целью работы стало исследование влияния введения аутологичных эритроцитов на аутоиммунную гемолитическую анемию у мышей, индуцированную введением эритроцитов крысы. Мышей ли нии CBA иммунизировали эритроцитами крысы однократно, внутрибрюшинно. Опытной группе на 10-й день вводили аутологичные эритроциты внутрибрюшинно. Кровь для анализа забирали каждые 5 дней, определяли количество эритроцитов в крови, уровень антител к эритроцитам крысы методом гемагглютинации, уровень аутоантител к эритроцитам мыши — непрямым методом Кумбса, уровень РФ — методом агглютинации таннизированных нагруженных гомологичным IgG эритроцитов. Обнаружено, что у мышей, которым вводили аутоэритроциты, не развивается анемия. Уровень аутоантител к эритроцитам у мышей, получивших аутоантиген, достоверно ниже, чем у контрольных животных. Таким образом, введение аутоантигена предотвращает развитие аутоиммунной реакции против эритроцитов у мышей. Выявлено, что уровень антител к эритроцитам крысы и РФ у опытных животных изменяется в ходе иммунного ответа реципрокно, тогда как у контрольных животных, развивших анемию, реципрокность нарушена. Учитывая, что проявлением нормального регуляторного взаимодействия лимфоцитов, связанных в идиотипических взаи модействиях, является реципрокный характер изменения их активности, можно предполагать, что аутоиммунная реакция против эритроцитов в модели анемии является следствием нарушения идиотипической регуляции иммунного ответа против эритроцитов крысы, осуществляемой ревматоидным фак тором. Иммунизация аутоэритроцитами может восстанавливать идиотипический регуляторный контроль и предотвращать развитие аутоиммунной гемолитической анемии. Экспрессия рецепторов к IL-1β при атопическом дерматите А.А. Альшевская, Ф.Ф. Васильев, Ю.А. Лопатникова, О.Л. Круглеева, В.М. Непомнящих, С.В. Сенников Уровни цитокинов в цервикальной слизи и периферической крови при ВПЧ-аcсоциированном хроническом цервиците НИИ Клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, М.А. Зотова, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, Е.А. Мезенцева, К.В. Никушкина, А.Н. Ахматова Интерлейкин 1 (IL-1β), являясь мощным воспалительным цитокином, играет центральную роль в патогенезе атопиче ского дерматита (АД). Его высвобождение клетками эпидермиса при активации является основным событием, способст вующим развитию и поддержанию воспалительных процессов в коже. Однако для реализации биологических эффектов IL-1 клетками иммунной системы на них должно экспресси- ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск Вирусы папилломы человека (ВПЧ) могут инициировать и поддерживать хронические воспалительные процессы ниж- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 85 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы роваться достаточное количество специфических рецепторов — IL-1R1. Мембраносвязанные рецепторы IL-1 2-го типа не способны к передаче сигнала в клетку, однако от их наличия и плотности экспрессии на клетке также во многом зави сит эффективность действия цитокина: как посредством связывания и ингибирования IL-1, так и за счет «ко-рецепторной конкуренции» с рецепторами 1-го типа. Цель работы — определить процент клеток, несущих рецепторы к IL-1β, и уровень экспрессии мембраносвязанных рецепторов к TNFα на субпопуляциях иммунокомпетентных клеток периферической крови условно-здоровых доноров и больных АД. Материалы и методы. Объектом исследования являлись мо нонуклеарные клетки периферической крови условно-здоровых доноров и больных АД. Для определения фенотипа МНК использовали антитела anti-hCD3-APC, anti-hCD19-PЕCy7, anti-hCD14-FITC («eBioscience»), а также anti-hTNFRI-PЕ и anti-hTNFRII-PЕ («R&D Systems»). Для определения числа рецепторов на клетках использовали Quantibrite PE Beads («Becton Dickinson»). Результаты и обсуждение. При сравнении показателей экс прессии рецепторов между субпопуляциями Т-, В-лимфоцитов и моноцитов было установлено, что популяцией с наибольшим процентом IL-1R1+-клеток у здоровых доноров являются моноциты. У больных АД этот процент значительно ниже, однако плотность экспрессии рецепторов как 1-го, так и 2-го типов на них достоверно выше по сравнению со здоровыми донорами. Также по количеству рецепторов Т- и В-лимфоциты больных АД экспрессируют достоверно более низкое количество рецепторов 1-го типа к IL-1 по сравнению с условноздоровыми донорами. При сравнении показателей больных, находившихся в состоянии обострения и вышедших в фазу клинического улучшения, было установлено, что среди Т-лим фоцитов больных АД в состоянии обострения достоверно меньший процент IL-1R1-позитивных клеток. В ходе работы показано, что изменения в рецепторном аппарате IL-1 при атопическом дерматите затрагивают клетки разных субпопуляций иммунокомпетентных клеток, при этом изменения по проценту позитивных клеток и количеству рецепторов на поверхности клеток не являются однонаправленным, что свидетельствует о различной вовлеченности клеток в иммунопатологические процессы и важности оценки не только относительного содержания позитивных клеток, но и плотности экспрессии рецепторов. ром 20–30 нм. Суспензия наночастиц остается устойчивой в водной среде длительное время (не менее года) при объемной концентрации наночастиц в водной среде до 6 %. С целью отбора соединений для включения в системы доставки разработана панель синтетических антимикробных пептидов SINP-45, SINP-58, SIDP-34, SIDP-35. Пептиды получили твердофазным методом на метилбензгидриламинополимере с использованием Boc-технологии. Исследована ингибирующая активность пептидов в отношении коллекционных и госпитальных штаммов Staphylococcus aureus. Был выбран пептид SINP-58, обладавший наибольшей противомикробной активностью. В ходе работы были наработаны опытные образцы трех препаратов на основе биодеградируемых полимерных наноразмерных частиц, содержащих в качестве активного начала ванкомицина гидрохлорид, тиоуреидоиминометилпиридиния перхлорат и противомикробный пептид SINP-58. Показано, что полученные образцы обладают высокой противомикробной активностью в отношении коллекционных и госпитальных штаммов микроорганизмов (Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis), в том числе и к метициллин-устойчивым штаммам золотистого стафилококка. Изучены физико-химические свойства и стабильность образцов при хранении в тесте «ускоренного старения». Стабильность образцов препаратов соответствует предъявляемым требованиям. Таким образом, предложена перспективная стабильная наноразмерная система доставки антибиотиков и антимикроб ных пептидов для терапии туберкулеза легких и пневмоний, вызванных антибиотикоустойчивыми штаммами бактерий. Некоторые аспекты цитокиновой регуляции у больных хроническим гепатитом С на фоне противовирусной терапии Г.З. Арипходжаева Ташкентский педиатрический медицинский институт, г. Ташкент, Республика Узбекистан Актуальность. На современном этапе проблема противови русной терапии (ПВТ) хронического гепатита С (ХГС) является одной из наиболее актуальной для практической инфек ционной гепатологии. При этом стабильных положительных результатов лечения при применении ПВТ удается достичь не более чем у 20–25 % больных. Влияние на продукцию межклеточных медиаторов рассматривается как один из возможных путей позитивного терапевтического эффекта IFNα при HCV-инфекции. Целью исследования явилось изучение динамики сывороточных концентраций IL-1β, IL-4, IL-8, TNFα у больных ХГС на фоне ПВТ альфа-интерфероном и взаимосвязи этих показателей с характером ответа на ПВТ. Материалы и методы. Под наблюдением находились 57 больных с ХГС. Все больные получали ПВТ, включавшую Альтевир (интерферон альфа-2b) и рибавирин в дозах, рекомендуемых производителем. Уровни цитокинов IL-1β, IL-4, IL-8, TNFα определяли методом ИФА с использованием наборов ООО «Цитокин» и «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург). Результаты наших исследований показали что, что у 18 больных (31,6 %) на 12–24 неделях лечения РНК-HCV переставала обнаруживаться в крови и не обнаруживалась в течение последующих 12 месяцев наблюдения. К 12 неделе ле чения у 11 больных (19,3 %) не наблюдалась динамика в вирусной нагрузке, что было расценено как отсутствие вирусологического ответа на проводимую терапию. Из-за развившихся побочных эффектов противовирусной терапии 28 больных (49,1 %) не смогли довести курс лечения до логического конца, теряя при этом шанс на выздоровление. Далее нас интересовала динамика про- и противовоспалительных цитокинов в группах обследованных больных с положительным и отрицательным ответом на ПВТ. До начала ПВТ отмечалось снижение по отношению к контролю показателей IL-1β, IL-8 (4,32 ± 0,35; 32,24 ± 1,97 и 2,25 ± 0,22; 10,75 ± 0,95 пг/мл, Разработка системы доставки антибиотиков и антимикробных пептидов на основе биодеградируемых наноразмерных частиц С.Ф. Антонов, Е.В. Черняева, М.П. Смирнова, И.В. Ларионов, В.В. Слепой-Савчук, Н.В. Конторина, И.В. Дубинина ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург Перспективным направлением в области создания адрес ных систем доставки антибиотиков и антимикробных пептидов является использование наноразмерных частиц на основе способных к биодеструкции полимеров. Наночастицы, вслед ствие своего малого размера, обладают повышенной способностью преодолевать различные биологические барьеры. При наличии определенных функциональных групп в молекуле биополимера полученные на его основе наночастицы могут связываться с различными лекарственными веществами и выступать в качестве средств их доставки к определенным тканям. Целью настоящей работы явилась разработка новых систем доставки антибиотиков и антимикробных пептидов на основе биодеградируемых наноразмерных частиц, предназначенных для терапии туберкулеза легких и пневмоний, вызванных антибиотикоустойчивыми штаммами бактерий. Разработана оригинальная технология получения наночастиц на основе нестехиометричного полиэлектролитного комплекса хитозан/ПВП, позволяющая в процессе ионотропного желирования получать наночастицы со средним разме- Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 86 Том 13 № 1 2014 Тезисы соответственно) на фоне повышения по отношению к контро лю уровней показателей TNFα и IL-4 (5,83 ± 0,27; 2,35 ± 0,17 и 10,08 ± 1,18; 4,08 ± 0,43 пг/мл, соответственно). После завершения курса ПВТ, независимо от результатов лечения, досто верных изменений в показателях цитокинов как по отношению к контролю, так и по отношению к показателям до начала ПВТ не наблюдалось. Однако обращает на себя внимание появление более выраженной тенденции в изменениях уровней цитокинов в направлении к контрольным показателям в группе больных с положительным ответом на ПВТ. Так, уровень TNF по отношению к контролю (5,83 ± 0,27 пг/мл) и к показа телям до лечения (10,08 ± 1,18 пг/мл) в группе с положительном ответом на ПВТ составлял 7,85 ± 0,39, в группе с отрицательным ответом на ПВТ — 9,86 ± 0,78 пг/мл. Таким образом, в группах обследованных больных ХГС степень выраженности изменений в уровнях про- и противовоспалительных цитокинов достоверно не взаимосвязана с вариантом ответа на ПВТ. универсального антигенного препарата для обнаружения специфических противотуляремийных антител. Тест-системы на основе ЛПС обладают высокой чувствительностью и специфичностью и могут быть с успехом использованы в качестве быстрых скрининговых методов диагностики туляремии. Вместе с тем, диагностическая значимость иммуноглобулинов к белковым антигенам F. tularensis нуждается в дальнейших исследованиях. Диагностическая ценность различных антигенов возбудителя туляремии при инфекционном и вакцинальном процессах в дот-иммуноанализе и иммунохроматографии Введение. При развитии хронического вирусного гепатита С (ХВГС) цитокины и хемокины играют важнейшую роль в процессах воспаления и фиброгенеза. Оценка содержания цито кинов/хемокинов у больных ХВГС дает информацию об иммунопатогенезе заболевания, его течении и прогнозе. Цель — определение содержания в крови больных ХВГС цитокинов/ хемокинов: IFNα, IFNγ, IFNλ, TNFα, ССL2/MCP-1, CCL3/ MIP-1α, CCL4/MIP-1β, CCL5/RANTES, ССL8/MCP-2, CCL20/ MIP-3α, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL11/ITAC. Материалы и методы. В плазме крови больных ХВГС (n = 73), не получавших терапию, и здоровых доноров (n = 37) измеря ли концентрацию цитокинов/хемокинов на приборе «Luminex MAGРIX» (Luminex, USA) с использованием тест-систем «Milliplex MAP» (Millipore, USA). Данные обрабатывали с применением программы «GraphPad Prizm 6». Результаты и обсуждение. У пациентов с ХВГС по сравнению с контрольной группой выявлено повышенное содержание TNFα (р < 0,0001), участвующего в том числе в цитотоксических реакциях и процессах фиброгенеза. Уровни хемокинов ССL2/MCP-1, CCL4/MIP-1β, ССL8/MCP-2 у больных ХВГС, приводящих к миграции в печень, в основном, неспецифических клеток иммунной системы, достоверно возрастали (р < 0,05), как и CCL20/MIP-3α (р = 0,02). У пациентов с ХВГС увеличивалась концентрация всех лигандов CXCR3, привлекающих в очаг воспаления активированные Т- и В-лимфоциты: CXCL9/MIG (р = 0,001), CXCL10/IP-10 и CXCL11/ITAC (р < 0,0001). Уровни изученных интерферонов IFNα, IFNγ, IFNλ не отличались в исследуемых группах. Выводы. В плазме крови больных ХВГС выявлен повышен ный уровень содержания TNFα и хемокинов, свидетельству ющий о неспецифической активации иммунной системы, приводящей к хронизации и длительной персистенции вируса гепатита С. Уровень содержания цитокинов и хемокинов в плазме крови больных хроническим вирусным гепатитом C Н.А. Арсентьева 1, А.В. Семенов 1, В.В. Басина 2, Н.Е. Любимова 1, Е.В. Эсауленко 2, А.А. Тотолян 1 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; ГБОУ ВПО Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет Минздрава России, Санкт-Петербург 1 2 Н.В. Аронова, Н.В. Павлович Ростовский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону Широкое распространение природных очагов туляремии на территории РФ и их периодическая активизация определяет актуальность совершенствования лабораторной диагностики инфекции. В настоящее время диагностика туляремии у человека базируется на иммунологических методах, направленных на выявление специфических антител против анти генных эпитопов O-цепи липополисахарида (ЛПС) F. tularensis. Роль других антигенов туляремийного микроба в иммунном ответе хозяина изучена недостаточно. В последние годы в практику иммунологических исследований включены совре менные быстрые и наглядные методы дот-иммуноанализа и иммунохроматографии. Целью работы являлась оценка диагностической значимости различных антигенов туляремийного микроба (ЛПС, очищенные препараты белков FopA, TUL4, Cat, GroEs) с использованием экспериментальных тест-систем для дот-иммуноанализа и иммунохроматографии, любезно предоставленных доктором А.В. Ракиным (Институт гигиены и медицинской микробиологии им. Макса фон Петтенкофера, Мюнхен, Германия). Исследовали сыворотки, полученные от людей, первично вакцинированных живой туляремийной вакциной (n = 10), ревакцинированных (n = 50), а также больных туляремией (n = 8). В предварительных экспериментах (РНГА с коммерческим антигенным туляремийным эритроцитарным диагностикумом) установлено, что противотуляремийные сыворотки содержали специфические антитела в различных титрах (1/80–1/10 000). Результаты проведенного дот-иммуноанализа показали, что во всех исследуемых сыворотках (100 % проб) присутствуют специфические антитела, взаимодействующие с препаратом ЛПС F. tularensis. Данные иммунохроматографического теста (ИХ-теста) подтвердили, что из всех изученных антигенов только ЛПС позволял обнаруживать противотуляремийные антитела в сыворотках как от вакцинированных (ревакцинированных), так и от больных туляремией людей. Следует особо подчеркнуть, что для визуализации реакции антиген-антитело в ИХ-тесте требовалось не более 5–10 минут. Не столь однозначные результаты получены при изучении очищенных белковых антигенов F. tularensis. Например, антитела к специфичным белкам FopA и TUL4 были выявлены в 70 и 72 % проб, а к Cat и GroEs — лишь в 42 и 37 %, соответственно. К сожалению, ни один из апробированных белковых антигенов не может служить надежным маркером инфекционного или вакцинального процессов. Таким образом, полученные данные доказывают несомненную диагностическую ценность ЛПС F. tularensis в качестве Особенности полиморфизма генов цитокинов IL-4, IL-10, IL-17 в патогенезе хронической аутоиммунной крапивницы Н.И. Баранова, Л.А. Ащина, С.В. Коженкова, М.В. Осипова ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава России, г. Пенза До настоящего времени хроническая аутоиммунная кра пивница (ХАК) остается наиболее сложной для диагностики и лечения формой заболевания. Патогенетические механизмы с участием генов цитокинов при ХАК совершенно не изучены, что создает большие трудности для понимания вопросов патогенеза данного заболевания. Известно, что мутации в генах цитокинов могут приводить к серьезным нарушениям иммунитета. Накапливается все больше данных о выявлении функционального полиморфизма генов цитокинов, связанного с заменами единичных нуклеотидов (Single nucleotide polymorphism (SNP)), вызывающих количественные изменения функ ционирования соответствующих генов, в отличие от мутаций, Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 87 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы временные периоды: до лечения (А1, В1), через 6 (А2, В2) и 12 месяцев (А3, В3) после окончания специального лечения. Уровень содержания цитокинов (IFNα, IFNγ) в цервикальной слизи определяли твердофазным ИФА. Результаты и обсуждение. При изучении уровней интерферонов цервикальной слизи в динамике у женщин МРШМ с положительным терапевтическим эффектом было отмечено снижение IFNα и повышение IFNγ как через 6, так и через 12 месяцев после окончания специального лечения. В группе женщин МРШМ с отрицательным терапевтическим эффектом было зарегистрировано прогрессирующее снижение IFNγ как через 6, так и через 12 месяцев после лечения. А повышенный через 6 месяцев уровень IFNα через 12 месяцев не претерпевал существенных изменений. Таким образом, повышение уровня IFNα при одновременном снижении IFNγ уже через 6 месяцев после окончания специального лечения может свидетельствовать о прогрессировании неопластического процесса и может быть применено в качестве маркера неизлеченности РШМ, отражающего неэффективность применяемых методов специального лечения полностью выключающих функции кодируемых ими белков. Обладая значительной вариабельностью, цитокины характеризуются наличием однонуклеотидных полиморфизмов, ассоциированных с изменением синтеза биохимических продуктов у больных с различными аллергическими заболеваниями. Наиболее важными в патогенезе ХАК являются IL-4, IL-10 и IL-17. В работе представлены предварительные результаты. Цель исследования — изучение генотипов и частоты встречаемости аллелей генов цитокинов IL-4 (С 589Т), IL-10 (G 592CA), IL-10 (G 1082А), IL-17 (G-197А) у больных ХАК. Материалы и методы. Были обследованы 37 пациентов с ХАК в возрасте 47 ± 12 лет. Полиморфизм генов IL-4 (С 589Т), IL-10 (2 мутации: (G 592CA) и (G 1082А)), IL-17 (G-197А) анализировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Материалом для исследования служили образцы периферической крови. Были рассчитаны абсолютные и относительные величины встречаемости генотипов, со ответствующих нормальной гомозиготе, гетерозиготе и мутант ной гомозиготе. При анализе IL-4 (С 589Т) у больных ХАК у 6 (16,2 %) из них встречался гетерозиготный генотип СТ, но чаще наблюдали нормозиготный генотип СС, который был по лучен у 25 пациентов (67,6 %). Мутантная гомозигота ТТ была определена у 6 (16,2 %) пациентов, что косвенно может свидетельствовать о второстепенной роли изучаемого цитокина у больных ХАК. Самые высокие показатели по гетерозиготе были получены по IL-17 (G-197А), где она обнаруживалась у 15 пациентов (40,5 %). Данные по нормозиготе соответствовали 46 % (17 пациентов), мутантная гомозигота была получена у 5 пациентов (13,5 %). Также высокие результаты по опреде ляемости гетерозиготы СА были получены на IL-10 (аллель G 592CA), которые были определены у 13 (35,1 %) пациентов ХАК. Нормозигота СС была получена у 23 (62,2 %), мутантная гомозигота АА была выявлена у 1 (2,7 %) пациента. Аналогичные результаты по гетерозиготе GA на другую аллель IL-10 (G 1082А) были следующие: 12 (32,4 %) пациентов были поло жительны по гетерозиготе, 16 (43,3 %) пациентов имели нормозиготный тип, мутантная гомозигота АА была выявлена у 9 (24,3 %) пациентов ХАК. Таким образом, предварительные результаты исследований свидетельствуют о более частой встречаемости гетерозигот по IL-17 (G 197А), а также мутаций IL-10 (G 1082А) и (G 592CA) у больных ХАК. Физиологический ревматоидный фактор в разнонаправленных эффектах циклоспорина А на иммунный ответ Л.В. Бедулева, П.В. Иванов ФГБОУ ВПО «Удмуртский государственный университет», г. Ижевск Многие чужеродные антигены несут сходные детерминанты с аутоантигенами. Развитие иммунного ответа против таких антигенов может привести к аутоиммунному заболеванию или сформировать эффективную защиту с сохранением толерант ности к аутоантигенам. Результат определяется балансом между экспансией аутореактивных эффекторных клеток и активностью регуляторных лимфоцитов. Ранее мы показали, что устойчивость к развитию аутоиммунных заболеваний ассоциирована с продукцией ревматоидного фактора (РФ), выявляемого методом агглютинации таннизированных нагруженных гомологичным IgG эритроцитов. Данная популяция РФ сдерживает экспансию аутореактивных лимфоцитов, вступая в идиотипические взаимодействия с ними. Если РФ является ключевым фактором супрессии иммунного ответа, то его участие должно обнаруживаться при экспериментальных услови ях, ведущих к формированию устойчивости к аутоиммунному заболеванию. Для проверки гипотезы была выбрана модель коллаген-индуцированного артрита крыс, а для моделирования устойчивости к артриту — иммуносупрессант циклоспорин А (цсА). Введение цсА в дозе 25 мг/кг течение 5 дней после иммунизации нативным бычьим коллагеном (нБК) подавило продукцию антител к коллагену и предотвратило развитие артрита у крыс Wistar. Крысы слабо отвечали и на реиммунизацию нБК, выполненную через 9 недель после примирования, однако интенсивность иммунного ответа на новый для них антиген — альбумин человека — не отличалась от таковой у конт рольных крыс. Данный факт свидетельствует о том, что предъявление цсА в период индукции иммунного ответа против нБК вызывает устойчивую специфическую супрессию продукции антител к коллагену. В то же время, цсА не подавил продукцию РФ. У крыс, получавших цсА после иммунизации нБК, продукция РФ достоверно выше, чем у устойчивых к артриту крыс. У крыс, развивших артрит, продукции РФ не наблюдалась. Циклоспорин А был также введен артритным крысам в стадию ремиссии. Введение цсА или цсА вместе с нБК обост ряло болезнь. У всех крыс с признаками усиления артрита был выявлен низкий уровень исследуемого РФ. Устойчивость к рецидиву наблюдалась только у крыс, иммунизированных нБК, и была ассоциирована с продукцией РФ, либо сохранением относительно высокого уровня РФ, который был достигнут при ремиссии. Таким образом, супрессия продукции антител к нБК, вызванная цсА, а также возникающая при этом устойчивость к развитию артрита у крыс ассоциированы с интенсивной про Возможность использования интерферонового статуса цервикальной слизи в прогнозе лечения рака шейки матки И.Л. Батурина, М.А. Зотова, О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, К.В. Никушкина, Е.А. Мезенцева ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск В настоящее время установлено, что развитие неопластического процесса возникает на фоне снижения иммунной ре активности организма. Современные исследования доказали, что основными регуляторами молекулярного механизма взаи модействия опухоли и иммунной системы являются цитокины. Особое значение в генезе вирусиндуцированных опухолей придается системе защиты интерферонов IFNα и IFNγ. Цель исследования — изучение уровней IFNα и IFNγ цер викальной слизи у пациенток с местнораспространенными формами рака шейки матки (МРШМ), ассоциированного с вирусом папилломы человека (ВПЧ), до лечения, через 6 и 12 месяцев после лечения. Материалы и методы. Проведено иммунологическое обследование 80 женщин в возрасте от 20 до 49 лет с гистологически верифицированным диагнозом МРШМ: IIb, IIIa, IIIb стадии, у которых предварительно методом ПЦР была выявлена папилломавирусная инфекция. Для решения поставленных задач все пациентки с МРШМ ретроспективно, через 12 месяцев после окончания специального лечения, были разделены на 2 группы: группа А (n = 40) с положительной и группа В (n = 40) с отрицательной динамикой течения заболевания. В каждой группе больных анализ уровня концентрации IFNα и IFNγ цервикальной слизи проводили 3-кратно через условные Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 88 Том 13 № 1 2014 Тезисы дукцией ревматоидного фактора. Индуцированное цсА, обострение артрита у крыс, находившихся в состоянии ремиссии, наоборот, ассоциировано со снижением уровня ревмато идного фактора. Полученные факты не противоречат гипотезе о регуляторной роли ревматоидного фактора в отношении аутореактивных лимфоцитов. 30 % (Меркулов В.Н., 2001). Осложнениями посттравматиче ского периода является развитие инфекционно-воспалительных процессов, наибольшую опасность которых представляет посттравматический остеомиелит, составляющий до 6,5 % всех осложнений (Зулкаржев Л.А., 2003). Учитывая ведущую роль иммунной системы в формировании противоинфекционной резистентности, особенности реакции иммунной системы на травму имеют большую диагностическую и прогностическую значимость. Обследованы 20 детей от 5 до 15 лет со скелетной множест венной и сочетанной травмой. Всем им была оказана специализированная помощь, клинико-лабораторное обследование. Иммунный статус оценивали по состоянию клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Содержание субпопуляций лимфоцитов определяли с помощью моноклональных антител, уровни сывороточных иммуноглобулинов (Ig) — методом радиальной иммунодиффузии, ЦИК — в реакции преципитации 4,16 % ПЭГ, метаболическую активность фагоцитов — в NBT-тесте. Результаты и обсуждение. Первичной реакцией иммунной системы на травму было снижение СD4+- и увеличение В-лим фоцитов с маркерами СD19+; увеличение IgМ, IgА, уровня ЦИК, изменение метаболической активности фагоцитов. Вы раженные изменения регистрировались на 3-и–5-е сутки: ко личество лейкоцитов в периферической крови увеличивалось до 8,8 ± 1,2 × 109/л, отмечалась лимфопения разной степени выраженности, ЛИИ составлял 3,2 ± 0,6; уровень ЭИ достигал 88 %. Снижалось содержание СD4+-лимфоцитов (36 ± 2,0 %), увеличивался уровень СD19+-лимфоцитов (32,1 ± 4,3 %). Уровни сывороточных IgМ и IgА были высокими. Значительно снижался резервный потенциал фагоцитоза (коэффициента стимуляции — 1,2 ± 0,3). Повышенные уровни ЭИ, ЛИИ, ЦИК часто сочетались с тяжелой травмой, сопровождавшейся деструкцией тканей, наличием гематомы. Изменения иммунного статуса отражали снижение противоинфекционной резистент ности, что может быть предиктором осложненного течения посттравматического периода. Все пациенты получали традиционную терапию: антибиотики, анальгетики, гемостатики. 10 пациентов с выраженной лимфопенией, высоким уровнем ЭИ, значительным снижением фагоцитарной активности и содержания СD4+-лимфоцитов получали иммунокоррекцию цитокинами. Ронколейкин вводили в дозе 0,25 г внутривенно медленно на 250,0–300,0 мл физиологического раствора, 1 раз в сутки, через 48–72 ч, трехкратно. Эффективность комплексной терапии с использованием иммунокоррекции подтверж далась улучшением клинико-лабораторных показателей: быстрее купировался болевой синдром, улучшалось общее состояние больных, уменьшалась гипертермия, нормализова лись лейкоцитарная формула и показатели иммунограммы. Иммунокорригирующая терапия в лечении хронического полипозного риносинусита Е.В. Безрукова 1, А.С. Симбирцев 2, Н.М. Хмельницкая 1 ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург; 2 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург 1 Хронический полипозный риносинусит представляет собой заболевание, этиология и патогенез которого остаются спорными и требуют дальнейшего изучения. В настоящее время накапливаются данные о том, что эпителий слизистой оболоч ки носа и околоносовых пазух является активным участником иммунологического ответа. Сами эпителиальные клетки могут принимать участие в функциональной регуляции Т-клеток, присутствующих в слизистой оболочке. В связи с этим особенно актуальным является поиск препаратов, действующих непосредственно на уровне эпителия и корректирующих иммунные нарушения. Цель работы — оценить клинико-морфологические изменения, возникающие в результате комплексного лечения больных хроническим полипозным риносинуситом с применением иммукорригирующих препаратов. Проведено обследование и лечение 33 пациентов, страдавших хроническим полипозным риносинуситом: 1-я группа (n = 16), пациентам которой в ткань полипа вводили в одном шприце препараты интераль 1 млн МЕ и бестим по 0,1 мг, в течение 5 дней, затем выполняли эндоскопическую полипотомию. Пациентам 2-й группы (n = 17) в полипозную ткань вводили препарат интераль 1 млн МЕ, затем выполняли эндоско пическую полипотомию. Удаленный во время операции материал обрабатывали по стандартной гистологической методике. При введении препарата интераль в полипозную ткань у пациентов отмечался подъем температуры до 37,5–37,7 °С, чувство ломоты в теле. Данное состояние продолжалось в течение полутора-двух часов и проходило самостоятельно. При комбинированном введении в полипозную ткань препаратов интераль и бестим повышения температуры и изменения об щего состояния не отмечалось. При морфологическом изучении в 1-й группе больных, в полипы которых вводили комби нацию иммунокорригирующих препаратов, в операционном материале отмечалось уменьшение эозинофильной инфильтрации, уменьшение отека стромы и слизи, усиление фиброзирования. Во 2-й группе в операционном материале определялось усиление фиброза и уменьшение отека стромы. Введение в полипозную ткань комбинации иммунокорри гирующих препаратов интераль и бестим не вызывает повы шения температуры, легче переносится пациентами, способствует уменьшению эозинофильной инфильтрации и отека стромы полипозной ткани, усилению его фиброзирования. Полученные результаты могут свидетельствовать об эффективности предложенного комплексного лечения хронического полипозного риносинусита, особенно при применении комбинации интераля и бестима. Характер функциональной активности естественных киллеров людй пожилого и старчевкого возраста А.Л. Бурмистрова, П.С. Садовников, Ю.Ю. Филиппова, А.В. Евдокимов ФГБОУ ВПО «Челябинский государственный университет», г. Челябинск Естественные киллеры (ЕК) — маленькие гранулярные лимфоциты, играющие ключевую роль в иммунной защите против вирусных, бактериальных инфекций и развития опухолей, с помощью эффекторных функций, включая цитоки нопродукцию и цитотоксичность. Дизайн исследования. Исследована цитотоксичность и продукция цитокинов IL-2, IL-6, IL-10, IL-18, IL-1β, TNFα, IFNγ ЕК периферической крови 48 человек пожилого и старческого возраста (средний возраст — 82,2 ± 5,7 года), которые проживали в «Челябинском геронтологическом центре» и страдали возраст-ассоциированными заболеваниями. Из исследования были исключены пациенты с сахарным диабетом, ожирением, онкологическими заболеваниями, болезнью Паркинсона и Альцгеймера, синдромом Дауна, врожденными нарушениями ЦНС. Статус здоровья оценивали в соответствии с SENIEUR Посттравматическая дисфункция иммунной системы у детей с множественной и сочетанной травмой опорно-двигательного аппарата Р.А. Беловолова 1, И.В. Богданов 2, В.Ю. Мурадян 2, О.И. Васина 2, О.В. Высочина 2 Ростовский государственный медицинский университет; 2 МБУЗ «Городская больница № 20», г. Ростов-на-Дону 1 В структуре детского травматизма множественная и сочетанная травма опорно-двигательного аппарата составляет 2,5 %, изолированная травма длинных трубчатых костей достигает Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 89 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Protocol. Все обследованные в зависимости от качества жизни составляли 2 группы: пациенты отделений «милосердие» («М») (требовался постоянный уход) и «активное долголетие» («АД») (согласно внутренним инструкциям учреждения). Контрольная группа («К») сформирована случайным образом среди штатных доноров крови ОГУП «Челябинская областная стан ция переливания крови». ЕК выделены методом негативной селекции при помощи магнитных частиц Dynabeads®. ЕК инкубировали в среде RPMI с активатором IL-2 (1 000 МЕ/мл). Цитотоксическую активность определяли на ЕК-чувствительной линии эритролейкемических лимфобластоидных клеток K-562, в тесте восстановления 3-(4,5-диметилтиазол-2ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида. Уровни цитокинов в среде культивирования определяли через 21 ч твердофазным иммуноферментным методом. Статистическую обработку проводили с помощью метода ковариационного анализа и теста Краскела — Уоллеса. Результаты и обсуждение. Показаны только статистически значимые отличия: 1. У пациентов групп «М» и «АД» из периферической крови выделялось большее количество ЕК, чем в группе «К». 2. Цитотоксическая активность ЕК групп «М» и «АД» снижена по сравнению с группой «К», но не имела различий между собой. 3. Независимо от принадлежности индивидуумов к группе обследования («АД», «М», «К») обнаружен общий паттерн активной продукции цитокинов IL-6, IL-10, IL-1β, TNFα. 4. В зависимости от качества жизни установлены различия в продукции цитокинов IFNγ, IL-2, IL-18. В группе «АД» снижены уровни IFNγ и IL-2 по сравнению с группой «М», IL-18 по сравнению со всеми группами. гии. Под влиянием кинерета содержание диеновых конъюгатов в сыворотке крови крыс достоверно снизилось в 1,4, триеновых — в 1,6, тетраеновых — в 1,3, оксидиеновых конъюгатов — в 1,4 раза. Применение метформина достоверно снижало лишь содержание триеновых конъюгатов в сыворотке крови крыс в 1,2 раза по сравнению с показателем контрольной патологии. Под действием ралейкина уровень ТБК-АП в сыворотке крови животных достоверно снизился в 2,6, концентрация НЭЖК — в 1,8 раза по сравнению с соответствующими показателями в крови животных контрольной патологии. Под действием кинерета уровень ТБК-АП в сыворотке крови крыс достоверно снизился в 2,5, концентрация НЭЖК — в 1,9 раза. Все показатели достоверно не отличались от соответствующих показателей группы интактного контроля. Под влиянием метформина содержание ТБК-АП достоверно снизилось в 2 раза, ВГ и концентрация НЭЖК — в среднем, в 1,4 раза. Содержание ВГ в гомогенате печени животных под влиянием ралейкина выросло в 1,7 раза, на фоне кинерета — в 1,6 раза по сравнению с показателем контрольной патологии. Метформин не проявил достоверного влияния на этот показатель. Таким образом, в условиях стрептозоцинового диабета у крыс ралейкин проявил выраженный антиоксидантный эффект, снижая концентрацию первичных и вторичных продук тов перекисного окисления липидов и увеличивая активность антиоксидантной системы животных. По нормализующему влиянию на вышеуказанные показатели ралейкин не уступал препарату кинерет и превышал метформин. Сочетание антиоксидантных и гипогликемических свойств свидетельствует о перспективности применения препаратов на основе блокатора IL-1 анакинры в комплексной терапии СД и 1-го и 2-го типов. Экспериментальное изучение антиоксидантных свойств ралейкина на модели стрептозотоцинового диабета у крыс Иммунологические показания к вакцинопрофилактике пневмококковой инфекции у курящих лиц, работающих в условиях воздействия промышленных аэрозолей фиброгенного действия И.П. Бухтиярова 1, С.М. Дроговоз 1, Е.Г. Щекина 1, А.С. Симбирцев 2, А.М. Ищенко 2 Т.В. Бушуева, А.К. Лабзова, Ю.В. Грибова Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина; 2 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, г. Санкт-Петербург, Россия 1 ФБУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Роспотребнадзора, Екатеринбург В структуре эндокринных заболеваний сахарный диабет (СД) занимает одно из первых мест. Известно, что главными причинами, которые приводят к СД, являются аутовоспалительные процессы в островках Лангерганса поджелудочной железы, которые стимулируются глюкозой, свободными жирными кислотами, лептином, возникают вследствие оксидатив ного стресса. Последние исследования показали, что IL-1β играет ключевую роль в патогенезе болезни и, следовательно, является одной из главных терапевтических мишеней при его лечении, которое может быть достигнуто нейтрализацией или блокадой рецептора IL-1Ra. Целью настоящей работы являлось изучение антиоксидантного действия рекомбинантного препарата IL-1Ra в условиях стрептозотоцинового диабета у крыс. В исследовании проведено сравнение действия препаратов «Ралейкин» (ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России), «Кинерет» (Амген) на основе рекомбинантных белков IL-Ra (МНН — анакинры), а качестве референс-препарата был ис пользован метформин. Достоверное увеличение концентрации первичных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) — диеновых, триеновых, тетраеновых и оксидиеновых конъюгатов — в сыворотке крови животных группы контрольной патологии в 1,7, 2,1, 1,6 и 1,7 раза, соответственно, по сравнению с группой интактного контроля свидетельствовало об интенсификации процессов ПОЛ. Кроме того, в сыворотке крови крыс данной группы наблюдалось повышение содержа ния ТБК-АП (в 2,7 раза) и НЭЖК (в 2,2 раза), снижение кон центрации ВГ (в 2,1 раза), что подтверждает ослабление системы антиоксидантной защиты в условиях модельного диабета. На фоне ралейкина содержание диеновых конъюгатов в сыворотке крови крыс снизилось в 1,5, триеновых — в 1,7, тетраеновых — в 1,3, оксидиеновых конъюгатов — в 1,5 раза по сравнению с соответствующими показателями контрольной патоло- Ц И Т О иК И Н В развитых странах заболеваемость пневмониями составляет от 3,6 до 16 на 1 000 человек. Пациенты в возрасте от 40 до 59 лет составляют 38,4–55,7 % заболевших, старше 60 лет — от 31 до 60 %. Среди больных пневмонией мужчины составля ют, по данным многих авторов, от 52 до 56 %, тогда как женщины — от 44 до 48 %. В настоящее время во всем мире пневмонии занимают 4–5-е место в структуре причин смерти, а среди инфекционных болезней — 1-е место. Болезни органов дыхания в структуре профессиональной заболеваемости в Свердловской области составляют 70 %. Одним из факторов, негативно действующих на иммунную резистентность дыхательных путей, являются промышленные аэрозоли фиброгенного действия. Другим важным фактором является курение: выкуривание до 15–20 сигарет в день ведет к нарушению мукоцилиарного клиренса, повышению хемотаксиса макрофагов и нейтрофилов, их активации, разрушению эластической ткани, снижению эффективности механической защиты бронхов и легких. Цель и задачи — на основании изучения анамнеза, объективных данных и показателей иммунного ответа у курящих лиц, включенных в группу риска развития пылевой патологии легких, работающих в условиях воздействия промышленных аэрозолей фиброгенного действия, обосновать проведение мероприятий специфической профилактики пневмонии. Материалы и методы. Проведено исследование секреторного иммунитета ротовой жидкости у 250 рабочих. Определяли концентрацию секреторного иммуноглобулина IgА. У лиц с высокой и низкой концентрацией этого компонента забирали кровь для определения факторов гуморального иммунитета и фагоцитоза. Количество В-лимфоцитов определяли на проточном Ы ВОСПАЛЕНИЕ 90 Том 13 № 1 2014 Тезисы лезом, а также учитывать при выборе оптимальной тактики лечения, в том числе с использованием иммуномодуляторов. цитометре EPICS XL с применением моноклональных антител. Концентрацию иммуноглобулинов определяли с приме нением реагентов «Вектор-Бест» с помощью ИФА. Для вакцинации применяли 23-валентную вакцину (23-ППВ). Результаты и обсуждение. В сравниваемых группах отмече но достоверное снижение кислородзависимого метаболизма в нейтрофилах (НСТ-тест), по сравнению со здоровыми лицами, но у курящих показатель был достоверно выше (3,9 ± 0,07 против 1,33 ± 0,0614 %). Было выявлено напряжение секреторного иммунитета полости рта, выраженное в достоверном повышении секреторного иммуноглобулина IgА (429,5 ± 35,9 против 183,7 ± 81,44 мг/мл) и снижении иммуноглобулина IgА сыворотки крови у 11 % среди курящих и у 24 % некурящих. У 80 % курящих респираторные заболевания развивались бо лее 3-х раз в год. Влияние IL-10 на иммунный ответ субпопуляций В-лимфоцитов в системе in vitro М.В. Гаврилова, Е.В. Сидорова ФГБУ «НИИ вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова» РАМН, г. Москва B-лимфоциты делятся на популяции B-1, B-2 и MZ-B клеток. Основной функцией В клеток является образование антител (АТ). Наряду с этим В-клетки участвуют в презентации антигенов (АГ), фагоцитозе и секреции цитокинов. В послед ние годы выяснилось, что, помимо перечисленных, В-клетки обладают еще и регуляторными функциями, обусловленными, в частности, секрецией цитокина IL-10. Основную роль в этом играют В-1 лимфоциты. Иммунорегуляторные свойства IL-10 обусловлены его способностью угнетать презентацию АГ, продукцию провоспалительных цитокинов, пролиферацию Т-лимфоцитов и т. д. Вместе с тем, влияние IL-10 на гуморальный иммунный ответ разных субпопуляций В-лимфоцитов изучено недостаточно. Очевидно, что исследования такого рода удобно проводить in vitro. Ранее нами была разработана модельная система, позволяющая использовать относительно небольшие количества В-1 лимфоцитов для изучения их взаимодействия с другими клетками. В этой системе для создания необходимой клеточной плотности в культурах в качестве клеток «филлеров» используются спленоциты xid-мышей CBA/N, не имеющих В-1 клеток. В настоящей работе такая модельная система использовалась для изучения влияния IL-10 на иммунный ответ В-1 и В-2 клеток мышей СВА на Т-зависимый АГ (ТЗ-АГ). В-1 лимфоциты выделяли из перитонеальной полости, а В-2 — из селезенки мышей линии СВА методом иммуномагнитной сепарации и смешивали их в соотношении 1:9 со спле ноцитами мышей линии CBA/N. В качестве ТЗ-АГ использовали водорастворимый АГ бараньих эритроцитов (ВРАБЭ). АГ вносили в культуры в дозе 25 мкг/мл. Смеси клеток инкубировали в полной среде RPMI 1640 с 10 % ЭТС и всеми необходимыми добавками в СО2-инкубаторе при 37 °С в течение 4-х дней с АГ или без него, IL-10 (50 нг/мл) добавляли в культуры, содержащие ВРАБЭ. Функциональную активность В-лимфоцитов оценивали по числу АТ- и иммуноглобулинобразующих клеток (АОК и ИГОК, соответственно) в культурах методом клеточного иммуноферментного анализа (ELISPOT). Внесение ВРАБЭ в культуру спленоцитов мышей CBA/N, а также в культуры, содержащие В-1 или В-2 лимфоциты мышей СВА, индуцировало иммунный ответ: число АОК возрастало с 65 до 975/106; с 705 до 1 985/106 и с 565 до 1 700/106, а число ИГОК — с 775 до 6 580/106; с 9 900 до 28 700/106 и с 1 475 до 18 133/106, соответственно. Добавление к культурам IL-10 в большинстве случаев снижало иммунный ответ на ВРАБЭ. Так, в культуре спленоцитов мышей линии CBA/N число АОК уменьшалось, в среднем, на 50 %, а число ИГОК — на 40 %. В модельной системе, содержащей В-1 или В-2 лимфоциты, количества АОК и ИГОК под влиянием IL-10 снижались на 25–28 и 33–23 %, соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что IL-10 угнетает специфический и поликлональный иммунный ответ В-1 и В-2 лимфоцитов на ТЗ-АГ. Показатели функционального состояния системы фагоцитов в динамике развития экспериментального туберкулезного остита М.Л. Витовская, Т.И. Виноградова, Н.В. Заболотных, Р.А. Щеголева Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии Минздрава России Актуальность. Доказано и не вызывает сомнения участие мононуклеарно-макрофагальной системы в формировании иммунного ответа у больных туберкулезом органов дыхания, при котором состояние иммунитета во многом определяет те чение, успешность лечебных мероприятий и исход заболевания. Однако при других локализациях туберкулеза, в том чис ле и костно-суставном, роль системы фагоцитов до настоящего времени остается недостаточно выясненной. Цель — изучение динамики показателей состояния пери тонеальных макрофагов (пМф) и нейтрофильных гранулоцитов (Нф) при туберкулезном остите у кроликов. Материал и методы. Работа выполнена на 17 кроликах-самцах породы «шиншилла», на 14 из которых моделировали туберкулезный остит путем инокуляции M. tuberculosis Erdman в дистальный эпиметафиз бедренной кости. Состояние фагоцитов изучали через 1, 2 и 3 месяца после заражения в сравнении с интактными кроликами: активность Нф определяли по НСТ-тесту, пМф — по реакции фагоцитоза в отношении опсонизированных дрожжей рода Saccharomyces cerevisiae. Статистическую обработку проводили по параметрическому t-критерию Стьюдента — Фишера. Результаты и обсуждение. Анализ изученных параметров состояния пМф и Нф показал однонаправленный характер нарушений функции этих клеток: она снижается по мере прогрессирования туберкулезного остита. Так, на ранних стадиях развития инфекции (через 1 и 2 месяца после заражения) имелась лишь тенденция к снижению отдельных параметров фагоцитоза: фагоцитарного числа (ФЧ) — в 1,6 раза и индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ) — в 1,2 раза по сравнению с интактными кроликами. Через 3 месяца после заражения выявлено достоверное подавление эффективности фагоцитоза пМф: фагоцитарная активность (ФА) уменьшилась в 1,8 раза (р < 0,05), ФЧ — в 1,5 раза, показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) и ИЗФ — в 5,7 и 2 раза, соответственно (р < 0,05). Функциональная несостоятельность Нф усугублялась в ходе развития заболевания: через 1 месяц после заражения — в виде тенденции к уменьшению величины показателя, через 2 месяца — выраженное угнетение (57,4 % от уровня интактного контроля, р < 0,01), сохранявшееся вплоть до завершения эксперимента. Сопоставление этих данных с морфологической картиной структурных изменений в эпиметафизе бедренной кости показало, что степень ингибиции функциональной активности фагоцитов отражает распространенность экссудативно-некротического процесса в очагах специфического поражения костной ткани. Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют высказать предположение о целесообразности включения показателей состояния системы фагоцитов в комплексное обследование больных костно-суставным туберку- Спонтанная и индуцированная продукция внутриклеточных цитокинов в ранние сроки беременности в зависимости от ее исхода И.А. Газиева, Г.Н. Чистякова, И.И. Ремизова ФГБУ «НИИ ОММ» Минздрава России, Екатеринбург В последние годы механизмы нарушения цитокинового ба ланса Th1/Th2 рассматриваются в качестве причин гестаци онных осложнений и репродуктивных потерь. Оценка способности иммунокомпетентных клеток к секреции регулятор- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 91 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Цель исследования — определение содержания некоторых цитокинов в ротовой жидкости у онкогематологических больных для оценки состояния локального иммунитета. Материалы и методы. Материалом для исследования служи ла ротовая жидкость 20 онкогематологических пациентов с ОФК (опытная группа). В группу сравнения включили 29 онко гематологических больных, у которых ОФК исключен в ходе обследования. Контрольную группу составили 9 практически здоровых людей с санацией ротовой полости. Диагноз ОФК верифицировали на основании клинических симптомов и результатов микологических исследований. Продукцию цитокинов IL-17, IL-10, IFNγ, MCP-1 определяли с помощью коммерческих ИФА тест-систем (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская область). Полученные результаты статистически обрабатывали с помощью программной системы «Statistica for Windows» (версия 6.0). Различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05. Установлено, что содержание в ротовой жидкости цитокинов IL-17, IL-10 и IFNγ во всех трех группах достоверно не отли чалось. Однако уровень IFNγ у пациентов, страдавших гемобластозами, имел четкую тенденцию к снижению по сравнению со здоровыми людьми (33,8 ± 5,4 vs 45,7 ± 12,2 пг/мл). Установлено, что концентрация MCP-1 в ротовой жидко сти больных онкогематологическими заболеваниями без ОФК достоверно выше, чем у здоровых людей с санацией ротовой полости (177 ± 51 vs 44 ± 12 пг/мл, р < 0,05). Однако концентрация MCP-1 у онкогематологических больных с ОФК была ниже по сравнению с пациентами, у которых гемобластоз не сопровождался микотической инфекцией (123 ± 21 vs 177 ± 26 пг/мл, р < 0,05). Возможно, недостаточная продукция этого важнейшего макрофагального хемокина у больных опытной группы является одной из причин развития кандидоза полости рта. А высокий локальный синтез MCP-1 может являться фактором устойчивости против микотической инфекции онкогематоло гических больных. Полученные данные свидетельствуют о необходимости изучения других факторов локального иммунитета, значимых для устойчивости к орофарингеальному кандидозу. ных пептидов в экспериментальных условиях, моделирующих влияние дополнительных стрессовых факторов, позволяет определить функциональный резерв непосредственных уча стников иммунного ответа. Целью настоящего исследования явилось выявление особенностей спонтанной и индуцированной продукции внутриклеточных цитокинов в ранние сроки беременности, прервавшейся в первом триместре. Проведен анализ результатов клинического, лабораторного и функцио нального обследования 150 женщин, из них 38 женщин, беременность которых закончилась ранними репродуктивными потерями (прерыванием до 13 недель беременности по типу неразвивающейся или раннего выкидыша, основная группа). Группу сравнения составили 112 женщин, беременность которых протекала без осложнений и закончилась рождением живых доношенных детей. Критериями исключения являлись многоплодная беременность; беременность, наступившая в ре зультате ВРТ; хромосомная патология и врожденные пороки развития плода. Внутриклеточную продукцию IFNγ и IL-4 Т-хелперами оценивали методом проточной лазерной цито флуориметрии, данные представляли в формате медиана (ниж ний квартиль–верхний квартиль). Установлено, что в ранние сроки беременности, прервавшейся в первом триместре, имеет место увеличение общей численности CD4+-клеток, спонтанно синтезирующих IL-4: количество CD4+IL-4+-лимфоцитов превышало аналогичный показатель группы сравнения в 2 раза (0,14 (0,06–0,45) × 109/л против 0,07 (0,04–0,14) × 109/л, p = 0,042). Уровень индуцированного ответа Т-клеток в группе с ранними репродуктивными потерями был существенно выше такового у женщин, беременность которых протекала без осложнений: доля IFNγ+-лимфоцитов в условиях стимуляции увеличивалась в 1,2 раза (15,82 (11,75–25,21) против 13,05 (8,7–18,64) %, p = 0,007), а абсолютная численность IFNγ-позитивных клеток — в 1,5 раза (0,41 (0,29–0,71) × 109/л против 0,28 (0,17–0,42) × 109/л, p = 0,002). Та же направленность изменений зарегистрирована в основной группе и в отношении индуцированной внутриклеточной продукции IL-4: относительное содержание Т-хелперов, синтезирующих IL-4, увеличивалось в 1,3 раза (8,46 (5,88–27,42) против 6,39 (4,02–11,37) %, p = 0,021), общее количество CD4+IL-4+-клеток — в 1,5 раза (0,23 (0,14–0,58) × 109/л против 0,15 (0,09–0,24) × 109/л, p = 0,008). Анализ результатов проведенных исследований показал, что индуцированное дополнительным стимулом усиление продукции Т-хелперами внутриклеточного IFNγ, сопровождающееся повышением внутриклеточного синтеза IL-4, является фактором риска прерывания беременности в I триместре. Таким образом, определение спонтанного и стимулированного внутриклеточного синтеза цитокинов Т-хелперами в ранние сроки беременности представляет собой дополнительный инструмент прогнозирования ранних репродуктивных потерь, не связанных с хромосомными аномалиями плода. Работа поддержана Грантом РФФИ и РФФИ-Урал № 13-04-96080. Модуляция белком теплового шока HSP-70 церебропротекторного действия рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина 1 в зависимости от режима применения при острой церебральной ишемии Р.Д. Дейко 1, С.Ю. Штрыголь 1, Е.Г. Щекина 1, А.М. Ищенко 2, А.С. Симбирцев 2 1 В последнее время закономерно возрастает интерес к белкам теплового шока, образование которых усиливается в ус ловиях гипертермии или других стрессирующих факторов, с позиции их защитной роли при патологиях центральной нервной системы (ЦНС). В эксперименте показаны церебропротекторные свойства белка теплового шока HSP-70 при паркинсонизме (Лапшина К.В. и др., 2013). Известны церебро протекторные свойства рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина 1 (IL-1Ra) при острой церебральной ишемии, черепно-мозговой травме, гипобарической гипоксии, острой алкогольной интоксикации (Щокіна К.Г. та співавт., 2010, 2011, Ищенко А.М. и др., 2013). Возникает вопрос о характере взаимодействия HSP-70 и IL-1Ra. С другой стороны, поскольку повышенное образование белков теплового шока и цитокинов инициируется фактором, повреждающим ЦНС, для обо снования режима рационального применения важно оценить зависимость церебропротекторного эффекта от времени введения HSP-70 и IL-1Ra относительно повреждающего фактора, что и составило цель данной работы. Опыты выполнены на рандомбредных белых крысах на модели острой церебральной ишемии в переднемозговом бассейне (перевязка обеих общих сонных артерий под пропофоло- Некоторые особенности локального иммунитета у онкогематологических больных с орофарингеальным кандидозом Е.Ю. Данилова, Н.В. Шабашова, Е.В. Фролова, Л.В. Филиппова, А.Е. Учеваткина ГБОУ ВПО «Северо-западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург Орофарингеальный кандидоз (ОФК) — оппортунистиче ская инфекция, вызываемая Candida spp. Известно, что чувствительность к патогенному действию этих грибов заметно варьирует, причем это относится как к практически здоровым, так и людям с иммунодефицитами: ВИЧ-инфицированным, больным с онкогематологическими заболеваниями и реципиентам трансплантатов. Одной из возможных причин разной восприимчивости к грибам рода Candida, в частности, у онкогематологических больных, могут быть индивидуальные различия локального иммунитета, зависящие от генетических факторов. Иммунологические особенности локальной защиты при гемобластозах изучены недостаточно. Ц И Т О иК И Н Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина; 2 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия Ы ВОСПАЛЕНИЕ 92 Том 13 № 1 2014 Тезисы вым наркозом). HSP-70 в дозе 0,02 мг/кг вводили интраназально в виде водного раствора, IL-1Ra — в дозе 15 мг/кг подкожно. Для сравнения использованы известные церебропротекторы мексидол (100 мг/кг) и пирацетам (400 мг/кг), вводимые вну трибрюшинно. Препараты применяли в двух режимах: профилактическом (за 30 мин до ишемии) и лечебном (по выходе животных из наркоза). Регистрировали выживаемость в тече ние 4 дней. HSP-70 в профилактическом режиме проявил тенденцию к повышению выживаемости до 40 %, в лечебном — достоверно увеличил ее до 60 % против 10 в группе контроле. Но сочетание HSP-70 с IL-1Ra, который per se обеспечил выживаемость 71,4 %, достоверно устраняло защитный эффект предварительного введения (14,3 %). В лечебном режиме сочетание HSP-70 с IL-1Ra, напротив, повысило показатель до 83,3 %. Для цере бропротекторов с другими механизмами действия время введения не имело значения: при профилактическом и лечебном режиме выживаемость проявляла тенденцию к увеличению соответственно до 20 и 30 % в случае пирацетама и до 30 и 40 % на фоне мексидола, соответственно. Таким образом, экзогенный HSP-70 в малой дозе 20 мкг/кг обладает церебропротекторными свойствами, отчетливо про являющимися при введении после начала острой церебральной ишемии, когда HSP-70 не препятствует проявлению ана логичных свойств IL-1Ra. Однако повышение уровня HSP-70 до начала ишемии устраняет защитный эффект IL-1Ra. Выяс нение причин такого взаимодействия будет предметом дальнейших исследований. нению с нелеченным контролем понизился на 18,8 %, LTB4 — на 26,5 %, соответственно. Антиэкссудативная активность мази «СКД» составила 30,4, мази «Вундехил» — 24,8 %. Таким образом, результаты эксперимента свидетельствуют о наличии у мази «СКД» противовоспалительного эффекта, который реализуется путем ингибирования продукции IL-1β, циклооксигеназного и липооксигеназного звена воспалительной реакции и уменьшения активности процессов СРО. Очевидно, это обусловлено синергетическим воздействием компонентов мази. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности дальнейших доклинических исследований новой комплексной мази «СКД» как перспективного противовоспалительного средства. Разработка флуоресцентного липосомального препарата и его биодоступность при аэрозольном введении экспериментальным животным Т.С. Егорова 1, Е.В. Черняева 1, В.В. Зарубаев 2, А.В. Слита 2, Ю.Н. Толпаров 1, В.Л. Искрицкий 1 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург; ФГБУ НИИ гриппа Минздрава России, Санкт-Петербург 1 2 Наиболее распространенным способом трансмембранного переноса лекарственных препаратов является использование полиэлектролитных и липосомальных систем. Преимущество аэрозольного способа введения препарата в альвеолы связано с отсутствием в этой области мукозального барьера, ослабленным комплексом tight junction и, соответственно, увеличенным парацеллюлярным транспортом. Целью данной работы являлось создание флуоресцентного липосомалного препара та для транспорта siRNA в эукариотическую клетку и оценка эффективности аэрозольного способа введения препарата. Материалы и методы. Липосомы готовили из фосфатидил холина, холестерина, а также флуоресцентно-меченного ли пида Dil (dioctadecyl-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, Invitrogen, США). Оптимальным оказался способ приготовле ния липосом методом регидратации тонкой липидной пленки с последующей обработкой ультразвуком. В результате были получены липосомы диаметром 90–110 нм, размер которых определяли методом светорассеяния. Проникновение липосом в клетки MDCK наблюдали с помощью люминесцентного мик роскопа «ЛЮМАМ И3» (ЛОМО). Концентрацию меченных Dil липидов в препарате, в сыворотке крови и бронхоальвеолярном лаваже (БХЛ) мышей определяли с помощью спектрофлуо рофотометра «Shimadzu RF-1501» (Япония). Тканевое распре деление липосом после распыления препарата в малой аэрозольной камере (МАК) проводили, наблюдая тонкие срезы органов под люминесцентным микроскопом «Leica» (Германия). Результаты и обсуждение. Концентрация Dil в сыворотке крови и БХЛ мышей после экспозиции в атмосфере аэрозоля флуоресцентно-меченных липосом составила 4,7 ± 1,1 нг/мл сразу после аэрозольного получения препарата и 3,1 ± 0,9 нг/мл через 30 мин. Сразу после аэрозольной обработки животных наблюдали интенсивное свечение флуоресцентной метки в легких мышей и менее интенсивное в пищеводе. Через 3 ч интенсивность свечения в легких снижалась, оставаясь достаточно высокой, что свидетельствует о длительной задержке липосом в легких. Только спустя 3 ч после окончания экспозиции животных в МАК специфическое свечение метки отмечали в отдельных гепатоцитах и почечных клубочках. В других органах, включая сердце, специфического свечения метки не было выявлено. Полученные результаты демонстрируют возможность применения разработанной методики приготовления препарата, осуществляющего интенсивную трансфекцию клеток, наблюдения его поступления в организм и распределение в органах экспериментальных животных при использовании малой аэрозольной камеры. Преимущественное и продолжительное распределение препарата в легких свидетельствует о перспективности его аэрозольного применения. Влияние комплексной мази «СКД» на цитокиновый ответ в условиях каррагенинового у крыс Л.В. Деримедведь 1, Е.В. Цулун 1, Т.В. Горбачь 2, И.В. Чурилова 3, А.М. Ищенко 3 1 Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина; Харьковская национальный медицинский университет, г. Харьков, Украина; 3 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия 2 Актуальность. Проблема фармакологической коррекции воспалительных реакций является актуальной задачей современной медицины. Несмотря на большой ассортимент противовоспалительных средств, на фармацевтическом рынке мало препаратов растительного происхождения, обладающих противовоспалительным эффектом и применяющихся в виде мазей. Цель работы — изучение влияния комплексной мази «СКД» на основе солодки голой, коэнзима Q10 и дегидрокверцетина на уровень IL-1β в условиях экспериментального отека у крыс. Материалы и методы. Исследования поведены на модели каррагенинового отека у крыс. Исследовали антиэкссудативную активность мази, интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО); уровень IL-1β, простагландина Е2 (PGE2) и лейкотриена В4 (LTB4) через 12 ч после введения флогогена. В качестве препарата сравнения использовали комплексную фитомазь «Вундехил», которую, как и «СКД», применяли накожно за 1 ч до введения флогогена (профилактический режим). Результаты и обсуждение. Установлено, что субплантарное введение каррагенина приводит к активации процессов СРО: содержание ТБК-активных продуктов выросло на 24 %, СОДподобная активность выросла на 19 %, уровень IL-1β увеличился на 32 %, уровень PGE2 вырос на 64 %, а LTB4 — на 52,5 %. Применение мази «СКД» в профилактическом режиме привело к уменьшению уровня IL-1β на 17,2 %, ТБК-АП — на 12,8 %; СОД-подобная активность увеличилась на 12 %. При применении препарата сравнения мази «Вундехил» уровень IL-1β понизился на 10,3 %, ТБК-АП — на 9,6 %; СОД-подобная активность практически не изменилась. Измерение уровней PGE2 и LTB4 в крови экспериментальных животных через 12 ч после введения каррагенина показало, что профилактическое при менение мази «СКД» уменьшило продуцирование обоих метаболитов арахидоновой кислоты на 29,4 и 38,3 %, соответственно. При применении мази «Вундехил» уровень PGE2 по срав- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 93 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Динамика уровней интерлейкина 4 и IFNγ у детей на фоне одного курса иммунотерапии пыльцевыми аллергенами кающих инфекционных и асептических хронических заболе ваний, в том числе терминальной стадии хронической почечной недостаточности (ТПН). Цель работы — проведение сравнительного анализа диаг ностической эффективности отдельных показателей в отношении развития системного воспаления у пациентов с ТПН, получавших разные виды заместительной почечной терапии. Материалы и методы. В исследование были включены 3 группы пациентов с ТПН, причиной развития которой у всех явился хронический гломерулонефрит. 1-я группа — пациенты, получавшие заместительную терапию программным гемодиализом (n = 22, средний возраст — 42,2 ± 12,4 года); 2-я группа — пациенты с хронической дисфунк цией трансплантата (n = 23, средний возраст — 42,0 ± 9,4 года) и 3-я группа — пациенты с нормально функционирующим почечным аллотрансплантатом (n = 24, средний возраст — 43,5 ± 9,1 года). Контрольную группу составили доноры крови (n = 50, средний возраст — 34,1 ± 10,4 года). В плазме крови иммунохемилюминесцентным методом («Immulite», «Siemens», США) определяли следующие показатели: C-реактивный белок (CRP), интерлейкин (IL)-6, IL-8, IL-10, фактор некроза опухоли α (TNFα), D-димеры, кортизол, миоглобин, тропонин I. На основании этих маркеров по оригинальной методике вы числяли интегральный критерий — Шкалу ХрСВ — ранжированный в пределах 0–8 баллов. Наличие ≥ 3 баллов харак теризует развитие ХрСВ. Результаты и обсуждение. Развитие ХрСВ выявлено только в группах пациентов с хронической дисфункцией транс плантата (43,5 %) и получавших заместительную терапию программным гемодиализом (81,8 %). При этом попытка выбрать один оптимальный параметр для диагностики ХрСВ не увен чалась успехом. Согласно данным ROC-анализа, диагностическая эффективность отдельных показателей была различной как относительно друг друга, так и при разных методах заместительной терапии. В группе диализных пациентов наибольшей диагностической ценностью обладал CRP (AUC = 0,891), у пациентов с хронической дисфункцией трансплантата — IL-8 (AUC = 0,896). Таким образом, хроническое системное воспаление является сложным многофакторным процессом, что делает необходимым использование для его диагностики интегрального показателя (Шкалы ХрСВ), а отдельные маркеры могут быть применены только в качестве скрининговых показателей для мониторинга этого процесса. Ю.Н. Емелина, И.В. Вахлова Уральский государственный медицинский университет, Екатеринбург; Областная детская клиническая больница № 1, Екатеринбург В последнее время уделяется большое внимание изучению цитокинового профиля при аллергических заболеваниях (АЗ), а особенно — дисбалансу цитокинов Th1 (IFNγ и др.) и Th2 (IL-4 и др.) лимфоцитов. В то же время имеются противоречивые данные, полученные при исследовании цитокинового профиля на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии (АСИТ). Цель — изучение динамики показателей IL-4 и IFNγ в зависимости от препарата, используемого для проведения иммунотерапии. Материалы и методы. Под наблюдением находились 63 человека, имевших проявления респираторной аллергии на пыльцу деревьев, в возрасте 9,7 ± 0,4 года. Стаж поллиноза до начала наблюдения составил 5,0 ± 0 лет. 88,9 % детей имели сочетание аллергического риноконъюнктивита с поражением нижних отделов дыхательной системы: 22,2 % — в виде гиперреактивности дыхательных путей, 66,7 % — бронхиаль ной астмы (БА). Преобладало среднетяжелое персистирующее течение АР — 60,3 %; у 1/5 части детей (19,1 %) отмечено тяжелое течение АР. При анализе степени тяжести БА выявлено преобладание легкого интермиттирующего и легкого персистирующего течения — 27,0 и 33,3 %, соответственно. Твердофазным ИФА с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» у детей в сыворотке крови исследовали уровни IL-4 и IFNγ исходно, во время поллинации на фоне одного курса АСИТ и через 6 месяцев после цветения деревьев (к концу первого года наблюдения). В основной группе выде лилось 3 подгруппы детей, получавших иммунотерапию пре паратами «Фосталь», «Сталораль» и водно-солевым экстрактом. Группу контроля составили дети с проявлениями поллиноза, вызванного пыльцой деревьев, не получавшие иммунотерапии. Результаты и обсуждение. Исходно у всех детей были выявле ны высокие уровни IL-4 — 30,3 ± 3,5 и IFNγ — 818,8 ± 36,6 пг/мл. К концу первого года наблюдения при проведении АСИТ отмечалась нормализация уровня IL-4 в основной группе, в отличие от контроля: 3,8 ± 0,8 и 9,4 ± 2,8 пг/мл, р < 0,05. Динамика уровня IFN выявила его нормализацию в основной группе (3,7 ± 1,7 пг/мл) в отличие от группы контроля (118,9 ± 67,2 пг/мл), р < 0,05. Таким образом, установлено, что при проведении аллергенспецифической иммунотерапии к концу первого года наблюдения вероятность нормализации IL-4 повышалась в 3 раза (OR = 3,4; ДИ95 % = 1,1÷11,3), а уровня IFNγ — в 6 раз (OR = 6,4; ДИ95 % = 1,6÷24,7). Наибольшая вероятность нормализации IL-4 и IFNγ к концу первого года наблюдения отмечена при использовании сублингвального препарата «Сталораль пыльцы березы» (OR = 5,7; ДИ95 % = 1,4÷23,5 и OR = 16,3; ДИ95 % = 1,7÷152,8, соответственно) и «Фосталь аллерген пыльцы деревьев» (OR = 2,1; ДИ95 % = 0,5÷8,8 и OR = 11,7; ДИ95 % = 1,2÷111,0, соответственно). Влияние беталейкина и бестима на регрессию туберкулезного воспаления в легких при экспериментальном лекарственно устойчивом туберкулезе Н.В. Заболотных, Т.И. Виноградова, М.Л. Витовская ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Минздрава России, Санкт-Петербург Введение. Полноценность регрессии туберкулезного воспаления в легких в результате терапии имеет определяющее значение для прогноза заболевания, поскольку остаточные изменения часто приводят к хронизации патологического процесса. Цель работы — оценка влияния беталейкина и бестима при их включении в комплексную терапию лекарственно устойчивого туберкулеза у мышей на регрессию туберкулезного воспаления в легких. Материалы и методы. Исследовали срезы легких 228 белых нелинейных мышей, инфицированных штаммом № 5419 СПбНИИФ с лекарственной устойчивостью к изониазиду, рифампицину, стрептомицину, этионамиду (мутации в генах rpoB:Asp516→Tyr и katG:Ser315→Thr [1]). Беталейкин (0,1 мкг/кг, 5 инъекций) и бестим (1 мкг/кг, 10 инъекций) применяли на фоне противотуберкулезных препаратов (ПТП), 8 недель в высших терапевтических дозах (изониазид, амикацин, этамбутол и левофлоксацин). Иммунный статус оценивали по фагоцитозу перитонеальными макрофагами (пМф) кле- Диагностическая эффективность отдельных показателей в отношении развития системного воспаления у пациентов с терминальной почечной недостаточностью, получавших разные виды заместительной терапии Ю.А. Журавлева 1, Л.В. Соломатина 1, 2 Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург; 2 ГБУЗ СО «Свердловская областная клиническая больница № 1», Екатеринбург 1 Актуальность. Хроническое системное воспаление (ХрСВ) является важным звеном патогенеза наиболее тяжело проте- Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 94 Том 13 № 1 2014 Тезисы точной взвеси дрожжей. Результаты обработаны статистически с использованием U-критерия Вилкоксона — Манна — Уитни и метода Фишера. Результаты и обсуждение. Комплексная терапия ПТП, вызвав снижение тяжести течения лекарственно устойчивого туберкулеза, отчетливо уменьшила и распространенность специфического воспаления в ткани легких. В то же время в легочной ткани отмечалась высокая активность экссудации и альтерации, слабая выраженность лимфогистиоцитарной инфильтрации. Лечение ПТП не обеспечило также и нормализации фагоцитоза пМф, существенно угнетенного в ходе развития лекарственно устойчивого туберкулеза. Беталейкин и бестим на фоне ПТП способствовали достоверному снижению показателей тяжести течения инфекции, уменьшению высеваемости MБТ из гомогенатов легочной ткани (в 2,3 и 4,8 раза, соответственно, р < 0,01), а также нормализации всех показателей поглотительной и переваривающей функции пМф. Под их влиянием отмечено дальнейшее снижение распространенности специфического воспаления, исчезновение его альтеративного и экссудативного компонентов. Параллельно зафиксирована активация местного иммунитета легочной ткани: изменение клеточного состава гранулем с преимущественно эпителиоидного на преимущественно лимфоидный и усиление лимфогистиоцитарной инфильтрации. На интактных мышах при длительных (23, 28 и 58 дней введения) курсах многокомпонентных схем ПТП выявлена отчетливая ингибиция фагоцитоза макрофагов, в значительной мере определяющих течение процессов репарации тканей. Таким образом, беталейкин и бестим отчетливо ускорили инволюцию туберкулезного воспаления в легких, по-видимому, вследствие их иммуномодулирующего эффекта и активации продуктивного компонента специфического воспаления. Полученные результаты служат обоснованием для широкого применения во фтизиатрии беталейкина и бестима, особенно в условиях ежегодного увеличения числа больных туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью, при котором проводится массированная противотуберкулезная терапия, подавляющая иммунный ответ. Цель исследования — определение концентрации C-реактивного белка, альбумина и активности щелочной фосфатазы в содержимом корневых каналов зубов при хроническом апикальном периодонтите. Материалы и методы. Проведено исследование содержимого 58 корневых каналов зубов у 49 пациентов с ХАП. Определяли концентрацию C-реактивного белка при помощи иммуноферментного метода, уровень альбумина — в реакции с бромкрезоловым зеленым, а для выявления активности щелочной фосфатазы использовали кинетический метод (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская область). Для статистической оценки полученных данных использовали парный и непарный варианты t-критерия Стьюдента. Результаты и обсуждение. В содержимом корневых каналов при ХАП концентрация C-реактивного белка составила 0,063 ± 0,006 мг/л, что со всей очевидностью не способствует активации фагоцитоза и системы комплемента на бактериальные патогены. Концентрация же альбумина составила 148,69 ± 43,89 г/л, что может быть связано с диффузией бел ковых компонентов из локального кровотока. Активность щелочной фосфатазы достоверно превышала нормативные по казатели и составила 5,52 ± 0,07 log10 числа Ед/л. Проведенное исследование выявило, что одним из факторов хронизации ХАП является раскоординированность про- и противовоспалительных процессов иммунной системы, что способствует персистенции патогенной микрофлоры корневых каналов зубов. Иммунологические особенности содержимого корневых каналов зубов при хроническом апикальном периодонтите Исследуемые олигопептиды (LQGV, AQGV, VLPALP) яв ляются продуктами катаболизма молекулы хорионического гонадотропина (ХГ) и обладают структурным родством к β-субъединице гормона. В работах Khan N.A. и Benner R. (2011) продемонстрировано, что эти олигопептиды оказывают выраженные противовоспалительные и противошоковые эффекты, а также блокируют развитие аутоиммунного диабета. Однако их роль в регуляции интерлейкин 17 продуцирующих лимфо цитов (Th17) не изучена, в то время как эта субпопуляция иг рает важную роль в развитии воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Таким образом, целью работы являлась оценка роли олигопептидов (LQGV, AQGV, VLPALP) в регуляции дифференцировки Th17. Объектами исследования являлись сепарированные CD4+лимфоциты периферической крови человека (женщины, n = 8). Синтетические олигопептиды LQGV, AQGV, LAGV (ООО «HИЛ АТГ Сервис ген») применяли в эффективной концент рации 1 мкг/мл [Khan N.A., Benner R., 2011]. CD4+-лимфоциты инкубировали с олигопептидами (72 ч; 37 °С; 5 % СО2), индукция формирования Th17 осуществлялась стандартно [Acosta-Rodrigiez E.V. et al., 2007]. Количество Th17 оценивали как процент CD4+-лимфоцитов, экспрессирующих ROR-γt и IL-17А. В супернатантах оценивали уровень IL-17A иммуноферментным методом (антитела и набор «eBioscience», США). Статистическую обработку проводили с использованием tкритерия Стьюдента. Установлено, что олигопептиды (LQGV, AQGV, VLPALP) снижали количество CD4+-лимфоцитов, экспрессирующих мастер-регулятор Th17 ROR-γt. Кроме того, они достоверно угнетали уровень дубль-позитивных ROR-γt+IL-17А+-лим фоцитов. В супернатантах культур CD4+-лимфоцитов параллельно исследовали концентрацию IL-17A. Установлено, что исследуемые олигопептиды (LQGV, AQGV, VLPALP) снижали Олигопептиды, родственные хорионическому гонадотропину (LQGV, AQGV, VLPALP), как перспективные инструменты направленной модуляции Th17 С.А. Заморина 1, О.Л. Горбунова 1, О.А. Логинова 2 ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, г. Пермь; 2 Пермский государственный национальный исследовательский университет, г. Пермь 1 И.И. Задорина, А.П. Годовалов, Л.А. Мозговая, Л.П. Быкова ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь В последнее время возросло число иммунологических исследований патогенеза периодонтитов, так как в воспалительный процесс вовлекаются факторы специфического и неспецифического иммунитета, которые обусловливают клинико-рентгенологическую картину хронического апикального периодонтита (ХАП) (Волкова М.Н., 2009). Доминируют в кор невых каналах зуба при ХАП анаэробные бактерии, патогенный потенциал которых варьирует и может управляться им мунными факторами. Неадекватный иммунный ответ определяет такие патологические процессы в периодонте как разрушение соединительной и деструкцию костной тканей. Известна корреляция между концентрацией эндотоксинов бактерий и уровнем белковых реактантов острой фазы воспаления. Так, C-реактивный белок способен прикрепляться к поверхностным структурам различных микроорганизмов. Основная функция его заключается в активации фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов (опсонизация) и бактериолитической активности системы комплемента. Наряду с этим, изменение концентрации альбумина в биологических жидкостях указывает на состояние и степень проницаемости гисто-гематических барьеров, а активность щелочной фосфатазы отражает процессы ремоделирования костной ткани. Высокий уровень активности последней связывают с противовоспалительной активностью клеток иммунной системы. Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 95 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы уровень IL-17A, подавляя, таким образом, функциональную активность Th17. Важно отметить, что ХГ, как ранее нами показано, оказывал аналогичные депрессивные эффекты на формирование Th17 [Заморина С.А., Ширшев С.В., 2013]. Полученные результаты раскрывают ранее неизвестные депрессивные эффекты продуктов катаболизма молекулы ХГ в отношении дифференцировки Th17. Очевидно, что направленная модуляция Th17 имеет огромный терапевтический потенциал, а применение олигопептидов имеет преимущества, связанные с эндогенностью и доступностью этих агентов. Таким образом, продемонстрированный Th17-угнетающий эффект олигопептидов, родственных ХГ (LQGV, AQGV, VLPALP), позволяет рассматривать их как потенциальные терапевтические агенты для лечения заболеваний, ассоциированных с повышенной активностью Th17. Работа поддержана грантом РФФИ, № 13-04-96024. рапии ронколейкином и лайффероном способствует повышению эффективности и улучшению переносимости полихимио терапии, а также коррекции ряда показателей иммунного статуса. Выявление генома вируса герпеса 6-го типа в образцах костного мозга у детей с острым лейкозом В.В. Зотова, В.Н. Смирнова, Г.Э. Плужникова, Г.Э. Бортникова, С.А. Раецкая, М.П. Дитор, О.С. Селезнева, К.С. Асланян ГБУ РО «Областная детская больница», г. Ростов-на-Дону В настоящее время большое внимание уделяется изучению патогенетической роли ВГЧ 6-го типа в развитии лимфопролиферативных процессов. В литературе представлены противоречивые результаты о возможной связи ВГЧ-6 и развития острого лейкоза (ОЛ) у детей. Опубликованы данные о корреляции выявления герпесвирусов (ГВ) и развития острых лейкозов и лимфом (Hermouet S. et al., 2003; Morrisette G. et al., 2010 и др.), Были обследованы 42 ребенка с первично диагностированным ОЛ (15 девочек и 27 мальчиков в возрасте от 6 мес. до 14 лет). У 34 пациентов диагностирован B-клеточный острый лимфолейкоз (ОЛЛ) (B-ОЛЛ) (у 25 человек — В2-ОЛЛ, у 8 — В2-ОЛЛ с коэкспрессией миелоидных маркеров, по одному ребенку с В1- и В3-вариантами В-ОЛЛ). У двух человек выявлен T-клеточный ОЛЛ (Т-ОЛЛ) (Т1). У 6 человек диагностирован острый миелолейкоз (ОМЛ) (у 3 человек — М1-М0, у 2 — М1, у 1 больной — М5). Методом ПЦР в образцах костного мозга и крови определяли ДНК герпесвирусов ВГЧ-6, цитомегаловируса (ЦМВ), ВПГ, вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ). Было установлено, что у 66,7 % больных ОЛ были выявлены ГВ в образцах костного мозга, крови и соскобе из ротоглотки. У 20 % больных ОЛЛ ГВ зарегистрированы в образцах костного мозга. При этом у 75 % обнаружен геном ВГЧ-6. У такого же числа больных обнаружена ДНК ВЭБ. Сочетанная инфекция (ВГЧ-6+ВЭБ) выявлена у 37,5 % больных ОЛЛ (В2- и В3-ОЛЛ с коэкспрессией миелоидных маркеров). ДНК ЦМВ и ДНК ВПГ не были выявлены ни в одном случае ОЛЛ. У 55,5 % больных ДНК ГВ обнаружена у больных ОЛЛ в образцах крови и у 66,7 % пациентов в соскобах из ротоглотки. У больных Т-ОЛЛ лишь в одном случае был выявлен ВПГ-6 в соскобе из ротоглотки. У пациентов с ОМЛ из всех больных только у пациента с вариантом М0-М1 и коэкспрессией CD19 (неблагоприятный прогностический признак) и нарушениями кариотипа (48 XX, inv16 (p13; q22), +21,+22) были выявлены геномы ВПГ-6 и ВЭБ в костном мозге и крови. Определенный интерес представляют исследования, проведенные у больного с хроническим ювенильным миеломоноцитанным лейкозом. У больного в 1 месяц выявлена внутриутробная ЦМВ инфекция. Спустя год присоединилась инфекция, вызванная ВГЧ-6 и ВЭБ, генерализованная форма. Через 3 месяца у него выявлены ВГЧ-6, ВЭБ в костном мозге, крови и диагностирован ЮММЛ (бластоз 24 %). Проведенное исследование показывает, что у больных ОЛЛ детей в высоком проценте случаев выявляется ВГЧ-6 и ВЭБ. Вместе с тем необходимо обратить внимание на тот факт, что частота выявления ДНК ГВ в костном мозге ниже, чем в крови и соскобах из ротоглотки, что может быть обусловлено раз личной степенью реактивации ГВИ и наличием высокого бластоза в костном мозге. В исследованиях Andre-Garnier E. et al., (2013) показано, что HHV-6 может инфицировать незрелые (СD34+) клетки и лимфоциты (CD3+), но не лимфобласты. Эти исследования подтверждают Faten et al. (2013), отметившие более частое выявление ДНК ГВ у больных лейкемией в период ремиссии по сравнению с дебютом заболевания. Ответить на поставленные вопросы поможет исследование поверхностных маркеров В-лейкозных клеток, инфицированных герпесвирусом. Высокая частота выявления ВГЧ-6 и ВЭБ (роль которого признана в возникновении В-лимфом) может предполагать их патогенетическую роль в возникновении вирусных острых лейкозов и лимфом. Эффективность применения цитокиновых препаратов при полихимиотерапии больных с рецидивами и рефрактерной лимфомой Ходжкина Е.Ю. Златник, И.Б. Лысенко, Т.А. Снежко, Н.Д. Ушакова, И.А. Новикова, А.В. Бахтин ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону Основным методом лечения лимфомы Ходжкина (ЛХ) яв ляется полихимиотерапия (ПХТ), повышение эффективности которой, особенно при лечении рефрактерных форм и рецидивов, продолжает оставаться актуальной задачей. Препараты рекомбинантных цитокинов ронколейкин (IL-2) и лайфферон (IFNα) в силу своего антипролиферативного и иммуномодулирующего действия нашли применение в лечении многих заболеваний, в частности, ряда онкогематологических. Целью данной работы явилась оценка клинической эффективности и динамики показателей иммунного статуса при применении ронколейкина и лайфферона в комплексном лечении больных с рецидивами и рефрактерной ЛХ. Под наблюдением находились 60 больных с ранними рецидивами и рефрактерной ЛХ в возрасте от 22 до 58 лет. Больные были разделены на 2 группы (основную и контрольную), в обеих получали стандартную ПХТ II линии (схемы DHAP, CEMP). Больным основной группы выполняли экстракорпо ральную иммунотерапию (инкубация аутолейкоцитов, полученных методом лейкоцитафереза, с 5 тыс. МЕ/мл ронколейкина и 10 тыс. МЕ/мл лайфферона 180 мин при 37 °С с последующей реинфузией). Ее проводили в ходе 4, 6 курсов ПХТ у первично-резистентных больных и 2, 4 курсов ПХТ при раннем рецидиве. До начала лечения и по окончании 1-го и 2-го курсов оценивали иммунный статус методом проточной цитофлуориметрии с помощью BD CantoII и панели моноклональных антител к T-, B-, NK-клеткам (CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+, CD16+CD56+), для оценки апоптоза/некроза применяли аннексиновый тест. Оценку эффективности лечения проводили после 4 курсов терапии. У всех больных основной группы улучшилась переносимость ПХТ, купированы клинико-лабораторные признаки интоксикации; реже, чем в контрольной группе, наблюдались проявления гематологической токсичности (10 % против 46,6). Изучение динамики иммунного статуса больных показало бо лее благоприятные изменения у больных основной группы: после 1-го курса количество СD3+СD4+-лимфоцитов возросло с 36,25 ± 5,1 до 49,8 ± 3,15 % (p < 0,05), тогда как в контрольной группе этот показатель после лечения был статистически значимо ниже, чем в основной группе (38,8 ± 3,84 %). В конт рольной группе отмечено 2-кратное возрастание апоптотической гибели лимфоцитов крови (с 14,6 ± 3,0 до 29,0 ± 4,37 %; p < 0,05), у больных основной группы подобных изменений не выявлено. Таким образом, включение в комплекс противоопухолевого лечения больных с ранними рецидивами и резистентным те чением лимфомы Ходжкина экстракорпоральной иммуноте Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 96 Том 13 № 1 2014 Тезисы Изучение влияния синтетического пептидного активного центра GM-CSF на регенерацию эпителия при лечении эрозии шейки матки и иммунологии. При этом очень важно знать спектр их актив ности и наличие дополнительных свойств. Целью настоящего исследования явилось изучение выявленных антибактериальных, иммунотропных и репаративных эффектов синтетических пептидов активного центра GM-CSF в комбинации с супернатантами клеток CD34+45–. Предыдущие наши исследования показали, что синтезированные пептиды активного центра GM-CSF обладают иммуностимулирующей активностью, а именно стимулируют костномозговое кроветворение, пролиферацию и дифференцировку клеток предшественников гранулоцитомонопоэза. Дальнейшее изучение выявило наличие антибактериальных свойств исследуемых соединений. Антибактериальную активность синтетических пептидов, фракций супернатантов клеток периферической крови, различных дефенсинов (тромбодефенсин, интерцид, Zp1, Zp2, LL37, HNP, супернатанты клеток CD34+45–) изучали на модели бактерицидной активности, которую оценивали по общепринятой методике «Определение чувствительности микробов к антибиотикам методом диффузии в агаре с применением бумажных дисков». Исследования показали, что полученные синтетические пептиды ZP1 (химическая формула LYS-GLY-PRO-LEU-THR-NLENLE-ALA-SER-HIS-TYR-LYS-GLN-HIS-CYS-PRO) и ZP2 (химическая формула THR-NLE-NLE-ALA-SER-HISTYR-LYS-GLN-HIS-CYS-PRO), помимо основного эффекта (стимуляции костно-мозгового кроветворения), обладают рядом выраженных дополнительных свойств, а именно антибактериальной активностью в отношении грам-отрицательных и грам-положительных бактерий, сравнимых с известными стандартными дефенсинами и другими веществами, обладающими подобными свойствами. Дальнейшее изучение активности выделенных и синтезированных соединений на модели репарации кожной раны в эксперименте выявило их выраженное влияние на репаративно-пластические процессы в ране. Так, эти вещества, нанесенные на рану в гелевой основе, стимулировали практически в два раза скорость заживления ран, при этом не происходило образование рубца. Возможно, такой механизм репарации связан с их плейотропным действием на различные системы организма и выявленным выраженным антибактериальным эффектом. Важно отметить, что при комбинировании пептида из ак тивного центра GM-CSF с веществами, полученными из супернатантов CD34+45–-клеток предшественников гемопоэза, их антибактериальная активность значительно (более чем в 100 раз) возрастает. Эти же препараты и их комбинации в таких же дозах обладали выраженным репарационным действием и стимулировали лимфоциты в реакции бласттрансформации лимфоцитов in vitro. Полученные данные свидетельствуют не только о новых свойствах синтетических пептидов активного центра GM-CSF и веществ, полученных из супернатантов CD34+45–-клеток, но и расширяют наши представления о возможных механизмах действия данных выделенных и синтетических соединений. Исследования поддержаны грантом РФФИ 11–04–97102-р_повол жье_а и государственным контрактом № 02.512.11.2324. А.В. Зурочка 1, 2, Е.Б. Зуева 1, И.А. Гольцова 1, В.А. Зурочка 1, 2 2 1 ФБГУН «Институт иммунологии и физиологии» УрО РАН; ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный университет (Национальный исследовательский)» Лечение эрозии шейки матки относится к одной из серьезных проблем современной гинекологии. Это связано с тем, что после коагуляции эрозированной поверхности и прилегающих тканей формируется рана, заживление которой происходит длительное время (в среднем, в течение 21–24 сут) после криодеструкции тканей. Поэтому поиск средств, улучшающих ранозаживление и уменьшающих сроки репарации раны яв ляются очень актуальными и современными. Были изучены дозозависимые эффекты синтетического пептида активного центра GM-CSF (химическая формула — THR-NLE-NLE-ALA-SER-HIS-TYR-LYS-GLN-HIS-CYSPRO). Препарат разводили в физиологическом растворе в дозах 10, 20, 40 и 80 мкг/мл. Препарат по 1 мл вводили в полость влагалища на 1-е, 3-и, 5-е, 7-е, 9-е сутки после криодеструкции эрозии шейки матки. В эти же сроки, а также на 14-е и 210-е сутки проводили цитологическое исследование шейки матки и кольпоскопию. Было пролечено 75 женщин после криодест рукции шейки матки. Контролем служили 25 женщин, находившихся на стандартной терапии. Исследования показали, что введение препарата GM-CSF во всех изучаемых дозах оказывало выраженное репарационное действие на раневой процесс в шейке матки. Максимальный эффект был получен в дозе 80 мкг/мл при пятикратном применении препарата. При этом, если в контроле на стандарт ной терапии отторжение струпа наступало на 14–15 сутки, эпителизация раны — на 21–24 сутки после криодеструкции, то при применении препарата отторжение струпа наступало на 7-е сутки, а эпителизация раны — на 14-е сутки после операции. Одновременно при цитологическом исследовании наблюдалось значительное уменьшение бактериального обсе менения содержимого цервикальной слизи и секрета влага лища. При этом отмечено снижение выделений влагалища и шейки матки. Клинически женщины отмечали значительное улучшение состояния в динамике лечения и качества жизни после операции. По-видимому, данные эффекты связаны с антибактериальными, иммуностимулирующими и репарационными свойствами пептида активного центра GM-CSF. Таким образом, синтетический пептид активного центра GM-CSF при его клиническом применении оказывает выраженное репарационное действие не только на экспериментальные гнойные раны, но и на раны слизистых оболочек. В настоящее время проводятся исследования по изучению механизмов репарационных эффектов данного препарата на основе изу чения цитокинового профиля в секрете цервикальной слизи и влагалища, характера микробного обсеменения влагалища и шейки матки и количественных изменений клеток иммунной системы цервикальной слизи и секрета шейки матки в дина мике репарационного процесса. Внутриклеточная продукция перфорина и гранзима B клетками памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов при угрозе прерывания беременности Препараты с комбинированными свойствами — новое направление в иммунотерапии и репаративной медицине Н.И. Иваненкова, Н.Ю. Борзова, Н.Ю. Сотникова, Л.В. Кадырова А.В. Зурочка 1, 2, В.А. Зурочка 1, 2, Е.Г. Костоломова 3, М.А. Добрынина 1, Е.Б. Зуева 1, И.А. Гольцова 1, Ю.Г. Суховей 3 ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново ФБГУН Институт иммунологии и физиологии УрО РАН; 2 ГБОУ ВПО «Южно-уральский государственный университет (Национальный исследовательский)»; 3 Тюменский филиал учреждения РАМН НИИ клинической иммунологии СО РАМН 1 Невынашивание беременности является актуальной проблемой практического акушерства и гинекологии, т. к. почти каждая пятая беременность завершается самопроизвольным абортом, несмотря на достигнутые успехи в вопросах диагно стики, профилактики, лечения во время и вне беременности. Чаще всего беременность прерывается до 12 недель (от 50 до 63,3 %). Невынашивание беременности в I триместре беремен Выявление и синтез новых химических пептидных соединений, обладающих комбинированными свойствами, является одной из приоритетных задач современной микробиологии Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 97 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы стрирована супрессия антиген-индуцированной дегрануляции тучных клеток агонистами никотиновых рецепторов. Таким образом, вопрос неясен. Целью данной работы являлось изучение роли ацетилхолиновых рецепторов в регуляции функциональной активности тучных клеток человека и мыши in vitro при действии на клетки таких либераторов гистамина как лиганды Fcε- и Fcγ-рецепторов. Материалы и методы. Использовали нормальные перитонеальные тучные клетки интактных мышей и перевиваемые тучные клетки человека линии HMC-1, имеющие функционально неполноценный Fcε-рецептор и нормально функцио нирующие Fcγ-рецепторы. Дегрануляцию вызывали следующими лигандами Fcε- и Fcγ-рецепторов: тучных клеток мышей — антителами к IgE мыши, тучных клеток человека ли нии HMC-1 — агрегированным IgG человека (аIgG). Негативным контролем служила обработка клеток раствором Хенкса. Степень дегрануляции оценивали по выбросу гистамина количественным микрометодом Шора. Для изучения влияния холинергических агентов на дегрануляцию тучных клеток использовали карбахол — синтетический аналог ацетилхолина, не гидролизуемый холинэстеразами, холиномиметик, агонист М- и Н-холинорецепторов, а также бензогексоний — блокатор Н-холинорецепторов. Результаты и обсуждение. Карбахол, сам по себе, не вызывал дегрануляцию тучных клеток мышей и тучных клеток челове ка линии HMC-1 ни в одной из использованных концентраций (10–7–10–4 М). В случае, если тучные клетки мышей и человека предобрабатывали карбахолом, после чего стимулировали либераторами гистамина (aIgG или анти-IgE, соответственно), дегрануляция в ответ на лиганды Fc-рецепторов достоверно снижалась. Если же тучные клетки мышей или человека сна чала обрабатывали бензогексонием для блокады никотиновых холинорецепторов, затем инкубировали с карбахолом, после чего стимулировали антителами к IgE или aIgG, то ингибиру ющее действие карбахола достоверно падало, и уровень дегрануляции становился, в среднем, выше положительного контроля (выше уровня, обеспечиваемого лигандами Fc-рецепторов). Полученные данные говорят о том, что у мышей и человека ацетилхолиновые рецепторы никотинового типа используются тучными клетками для контроля и модерации дегрануляции, которая может возникнуть как IgE-зависимым путем через Fcε-рецепторы под действием аллергенов, так и IgE-не зависимым путем, через Fcγ-рецепторы, под действием IgGсодержащих иммунных комплексов, моделью которых в нашем исследовании служил агрегированный IgG. ности рассматривается не только как важнейшая составляющая и неотъемлемый элемент естественного отбора, но и как первое проявление серьезных патологических изменений, ко торые в 30 % случаев могут в дальнейшем стать причиной привычного невынашивания беременности. В последние годы одной из важных причин прерывания беременности являются иммунологические факторы, которые вызывают патологические реакции. Известно, что цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) осуществляют цитолитическое действие в отношении разнообразных клеток-мишеней после образования цитолитического иммунного синапса и направленного выделения перфорина и гранзима B. Наиболее мощными продуцентами перфорина и гранзима B в популяции ЦТЛ являются эффек торные клетки памяти (центральные, претерминально- и терминально-дифференцированные). Цель исследования — вы явление особенностей содержания клеток памяти, внутриклеточно продуцирующих гранзим B и перфорин в популяции ЦТЛ (CD8+) при угрозе прерывания беременности в ранние сроки. Были обследованы 59 женщин в I триместре беременности, из них 12 беременных женщин — контрольная группа, не имевших признаков угрозы прерывания на момент обследования. В 1-ю подгруппу основной группы были включены женщины со спорадической угрозой прерывания (17 человек), во 2-ю — женщины с привычным невынашиванием беременности (30 человек). Методом трехцветной проточной цитофлуориметрии оценивали уровень центральных (Tcm), претерминальных (Tem) и терминально-дифференцированных (Temra) клеток памяти, продуцирующих перфорин (Perf+) и гранзим B (GrB+) в популяции периферических CD8+-Т-лимфоцитов. Анализ полученных данных показал, что значительных различий в сравниваемых группах в содержании GrB-позитивных Tcm, Tem и Temra, а также Perf-позитивных Tcm и Tem в популяции CD8+-лимфоцитов выявлено не было. Однако уровень Perf+ Temra в популяции CD8+ лимфоцитов имел тен денцию к повышению в группе женщин со спорадической угрозой прерывания беременности и был достоверно выше в группе женщин с привычным невынашиванием беременности по сравнению с контрольной группой, и не имел достоверных различий между подгруппами основной группы. В группе женщин с привычным невынашиванием был выявлен поло жительный коэффициент корреляции между содержанием терминаль-дифференцированных Т-лимфоцитов и уровнем GrB+ Temra в популяции ЦТЛ, что не отмечалось в 1-й под группе основной группы. Таким образом, при угрозе прерыва ния беременности возрастает цитолитическая активность CD8+ ЦТЛ, обусловленная ростом уровня клеток, продуцирующих Perf, которая может способствовать поражению тканей плаценты и плода. Максимально выраженный рост данной фракции в пуле терминально-дифференцированных CD8+лимфоцитов свидетельствует о значимости феномена «имму нологической памяти» в патогенезе привычного невынашивания беременности. Выявление аутосенсибилизации к антигенам тромбоцитов у больных хроническим лимфолейкозом методом проточной цитофлуориметрии Н.В. Исаева, Г.А. Зайцева, Е.В. Бутина, Т.П. Загоскина ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России, г. Киров Выброс гистамина из тучных клеток в ответ на стимуляцию лигандами Fcε- и Fcγ-рецепторов сдерживается ацетилхолином через холинорецепторы никотинового типа Актуальность. При хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) развитие тромбоцитопении может усиливаться аутоиммунным механизмом разрушения клеток. Антитела при аутоиммунной тромбоцитопении вырабатываются против неизмененных тромбоцитарных антигенов. Вопросы, связанные с лабораторной диагностикой иммунных тромбоцитопений, требуют дальнейшей разработки. Целью работы было установление влияния антитромбоцитарной аутосенсибилизации, определяемой методом проточной цитофлуориметрии, на выраженность тромбоцитопении у больных ХЛЛ. Материалы и методы. Под наблюдением находились 39 больных ХЛЛ в дебюте заболевания и 9 — при его рецидивировании. Все исследования у больных выполнены до начала лечения. Содержание антитромбоцитарных антител определяли с применением лазерного проточного цитофлуориметра «EPICS® XL» («Beckman Coulter»); при оценке их индивидуального уровня учитывали, что превышением допустимого значения является связывание более чем 3 % тромбоцитов крови больного с FITC-конъюгированными моноклональными Н.А. Иванова 1, О.Н. Власова 1, П.Г. Назаров 1, 2, 3, В.Б. Климович 4, М.П. Самойлович 4 ФГБУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» СЗО РАМН; 2 Санкт-Петербургский государственный университет; 3 Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени И.П. Павлова; 4 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий Минздрава России, Санкт-Петербург 1 Известно, что влияние холинергических агентов на тучные клетки видоспецифично. Ацетилхолин и агонисты M1-холинорецепторов ингибируют высвобождение гистамина из ТК слизистой оболочки дыхательных путей человека. У крыс и кроликов агонисты М-холинорецепторов, напротив, индуцируют дегрануляцию тучных клеток. У крыс также продемон- Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 98 Том 13 № 1 2014 Тезисы антителами к иммуноглобулину IgG человека при инкубации тромбоцитов с аутологичной сывороткой. Результаты и обсуждение. Варьирование содержания антитромбоцитарных антител в сыворотке первичных больных ХЛЛ составило 0,5–44,4 %, у больных с рецидивированием лейкозного процесса — 0,07–32,0 %. При сравнении этих групп больных существенного отличия по содержанию антител не было обнаружено (1,39 (0,71; 3,61) % и 3,39 (1,56; 7,33) %, соответственно). Однако повышение уровня антител в сыворотке чаще встречалось в группе больных с рецидивированием лейкозного процесса, чем среди первичных больных ХЛЛ (55,6 против 30,8 %). Полученные результаты совпадают с литературными данными о более частом возникновении антитромбоцитарной аутосенсибилизации у больных с развернутой клинико-гематологической картиной. Ранее нами была показана значимая обратная связь между числом тромбоцитов в крови и выраженностью лимфоидной инфильтрации костного мозга больных ХЛЛ на этапе манифестации (r =–0,39, р < 0,01). У 12 первичных больных с повышенным содержанием аутоиммунных антитромбоцитарных антител число тромбоцитов было значимо ниже, чем у 27 таких больных, имевших нормальный уровень антитромбоцитарных антител (135 (92; 212,5) × 109/л против 182 (154; 230) × 109/л, p < 0,01). В случае прикрепления IgG к поверхностной мембране тромбоцитов клетки подвергаются ускоренному повреждению в ретикуло-эндотелиальной системе, что приводит к снижению их численности в крови; в то же время значимая корреляционая связь между содержанием аутоиммунных антитромбоцитарных антител и числом тромбоцитов в периферической крови не была установлена. Таким образом, при манифестации хронического лимфолейкоза влияние антитромбоцитарной аутосенсибилизации на понижение числа тромбоцитов в крови менее выражено, чем степень лимфоидной инфильтрации костного мозга. в периферической крови. В то же время было выявлено, что уровень экспрессии молекулы CD3 в пределах популяции CD3+CD19– у больных с аутосенсибилизацией оказался более низким, чем у больных без антител (4,4 ± 0,27 против 5,78 ± 0,29 у. е., p < 0,001), что может быть расценено как приз нак понижения функциональных свойств Т-лимфоцитов. В обеих подгруппах концентрация иммуноглобулинов класса IgG была существенно выше принятых нормативов (p < 0,001), а IgA — ниже (p < 0,01); между выделенными подгруппами больных по уровням IgG и IgA отличие не зарегистрировано. У больных с аутосенсибилизацией отмечено значимо более высокое содержание IgM в сыворотке крови, чем у больных без антител (1,65 ± 0,32 и 1,01 ± 0,14 г/л, соответственно, p < 0,05). Таким образом, антитромбоцитарная аутосенсибилизация больных хроническим лимфолейкозом на этапе манифеста ции заболевания сопровождается снижением функциональной активности Т-лимфоидной популяции периферической крови и отклонениями в гуморальном звене иммунитета. Место цитокинов в иммунном статусе детей с неврологическими нарушениями С.П. Каплина, Н.В. Скрипченко ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций» ФМБА России, Санкт-Петербург Цитокины занимают важное место в иммунных реакциях организма. Так, интерлейкин 1 (IL-1β) способствует продукции гепатоцитами белков острой фазы воспаления, интерлейкин 4 (IL-4) усиливает пролиферацию В-клеток, интерлейкин 6 (IL-6) усиливает продукцию кортикотропина, индуцируя лихорадку, а также дифференцировку и продукцию антител. Дефицит Т-хелперов приводит к локальным инфекциям (стоматитам, конъюнктивитам и поражениям кожи), а их избыток вызывает запуск аллергических реакций. При эпи-приступах повышается уровень интерлейкинов, и по их уровню можно судить о декомпенсации процесса. Цель — оценка роли цитокинов у детей с неврологической патологией. Материалы и методы. Обследованы 279 детей с последствиями перинатального поражения ЦНС и 76 здоровых детей группы сравнения (ГС), в возрасте от 3 месяцев до 6 лет, про живающих в домах ребенка № 12 и 13 Санкт-Петербурга. Оп ределение уровня цитокинов IL-1β, IL-4, IL-6, IFNγ, TNFα в сыворотке крови проводили с помощью ИФА. Результаты и обсуждение. В ходе проведенного исследова ния установлено, что в группе детей с эпилепсией (n = 60) имело место достоверное увеличение уровня потенциально нейро токсичных медиаторов, высокие концентрации провоспалительных цитокинов в крови: IL-1 — 58,5 ± 0,54 (ГС — 19,06 ± 1,51 р < 0,05); IL-4 — 70,0 ± 15,3 (ГС — 19,8 ± 3,7 р<0,05); IL-6 — 45,8 ± 14,3 (ГС — 18,5 ± 3,01 р < 0,05), уровень TNFα при этом не повышался (3,3 ± 0,9), в ГС — 2,8±0,8. В группе пациентов с синдромом Дауна, задержкой психомоторного развития и минимальной церебральной дисфункции (n=74) концентрация интерлейкинов в крови не повышалась: IL-1 — 9,72 ± 1,4, IL-4 — 19,7 ± 1,71, IL-6 — 26,3 ± 5,41. По данным литературы, высокие концентрации провоспалительных цитокинов в крови (TNF, IL-1 и IL-2) являются причиной многих локальных и системных изменений в нервной системе. В группе детей с перинатальным поражением ЦНС (n = 83) отмечена активация IL-4 (67,02 ± 12,19), IL-6 (40,4 ± 6,07) и IFNγ (92,9 ± 10,2, в ГС — 37,3 ± 4,8 р < 0,05), клинически для них характерны аллергические реакции. В группе с тяжелыми органическими нарушениями (n = 62 в т. ч. ДЦП, n = 27) имел место их дисбаланс: IL-1 — 14,68 ± 3,4; IL-4 — 28,6 ± 4,4; IL-6 — 51,6 ± 12,4; IFNγ — 59,1 ± 13,8, что может наблюдаться при длительно текущих воспалительных, аутоимунных и других процессах, сопровождающихся активацией клеток иммунной системы. Таким образом, данное исследование позволило определить роль цитокинов в иммунных реакциях у детей с различной неврологической патологией и выделить группы детей, сходные по состоянию цитокинового статуса. Показатели иммунореактивности больных хроническим лимфолейкозом при антитромбоцитарной аутосенсибилизации Н.В. Исаева, Г.А. Зайцева, Е.В. Бутина ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России, г. Киров Актуальность. Причину антитромбоцитарной аутосенсибилизации при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) связывают с нарушением толерантности иммунной системы к собственным антигенам. В литературе не освещена взаимосвязь результатов лабораторных тестов обнаружения фиксированных IgG на мембране тромбоцитов с показателями иммунологической защиты при этом онкогематологическом заболевании. Целью работы было определение особенностей иммунореактивности больных ХЛЛ на этапе манифестации заболевания при наличии антитромбоцитарной аутосенсибилизации. Материалы и методы. Обследованы 39 больных ХЛЛ в дебюте заболевания. С использованием проточной цитофлуориметрии проводили определение содержания Т-лимфоцитов, их субпопуляций, натуральных киллеров, CD19+CD5+-лимфоцитов; измеряли степень экспрессии молекул CD3, CD4, CD8 и CD45 в пределах лимфоидных популяций и субпопуляций по показателю средней интенсивности иммунофлуоресценции. Концентрации IgG, IgA и IgM оценивали в иммуноферментном тесте. Определение антитромбоцитарных антител выполняли методом цитометрии. Результаты и обсуждение. Сравнивали показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета у первичных больных ХЛЛ с лабораторными признаками аутосенсибилизации к антигенам тромбоцитов и без таковой. По содержанию Т-лимфоцитов, их субпопуляций (Т-хелперов и Т-супрессорных/ цитотоксических), лимфоцитов с функцией натуральных киллеров (иммунофенотипы: CD3 –CD8+, CD3–CD(16+56)+ и CD3+СD(16+56)+), поздних активированных Т-лимфоцитов (CD3+HLA-DR+) между этими больными различий не установлено; кроме того, отсутствовало отличие в индексе иммунорегуляции и в содержании лимфоцитов с фенотипом CD19+CD5+ Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 99 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Роль цитокинов в иммунных реакциях при вакцинации детей с неврологическими нарушениями С.П. Каплина, Н.В. Скрипченко ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций» ФМБА России, Санкт-Петербург Интерлейкины являются важными факторами иммунопатогенеза воспалительных, инфекционных, аутоиммунных и аллергических заболеваний, но их роль в поствакцинальном процессе обсуждается до настоящего времени. Цель исследования — изучение показателей цитокинового статуса при введении различных вакцин против дифтерии и кори у детей с поражением центральной нервной системы (ЦНС). Материалы и методы. Обследованы 279 детей с различными последствиями перинатального поражения ЦНС и 76 здоровых детей группы сравнения (ГС), в возрасте от 3 месяцев до 6 лет, проживающих в домах ребенка № 12 и 13 Санкт-Петербурга. Все они были привиты против дифтерии и кори. Проводили определение уровней цитокинов IL-1β, IL-4, IL-6, IFNγ, TNFα в сыворотке крови с помощью ИФА до вакцинации, на 14-й и 30-й дни после прививки. Результаты и обсуждение. В группе детей с перинатальным поражением ЦНС (n = 83) до вакцинации отмечена активация IL-4 — 67,02 ± 12,19, (в ГС — 19,8 ± 3,7, р < 0,05); IL-6 — 40,4 ± 6,07 (в ГС 18,5 ± 3,01, р < 0,05) и IFNγ — 92,9 ± 10,2 (в ГС — 37,3 ± 4,8, р < 0,05). В данной группе выявлено повышение IL-6 к 14-му дню вакцинального периода до 65,1 ± 8,6 (в ГС —6,5 ± 0,6), к 30-му дню до 92,3 ± 8,8 (в ГС — 8,4 ± 0,5). Сильные вакцинальные реакции дали 11 (13,3 %) детей, в том числе 1 — фебриль ные судороги. Заболели в поствакцинальном периоде 19 (22,9 %) детей. В группе с синдромом Дауна, задержкой психомоторного развития и минимальной церебральной дисфункцией (n = 74) концентрация цитокинов в крови до прививки не повышалась: IL-1 — 9,72 ± 1,4; IL-4 0151 19,7 ± 1,71; IL-6 — 26,3 ± 5,41. К 14-му и 30-му дням вакцинального периода отмечено снижение показателей IL-1 до 3,6 ± 1,7; IL-4 — до 15,1 ± 5,5, уровень IL-6 не изменился. Вакцинальных реакций в группе было 6 (8,1 %), заболели респираторными инфекциями 15 (20,3 %) детей. В группе детей с тяжелыми органическими нарушениями (n = 62, в т. ч. ДЦП, n = 27) до вакцинации отмечен дисбаланс цитокинов: IL-1 — 14,68 ± 3,4; IL-4 — 28,6 ± 4,4; IL-6 — 51,6 ± 12,4; IFNγ — 59,1 ± 13,8. В поствакцинальном периоде выявлено повышение уровня IL-6 до 80,1 ± 14,6, снижение IFNγ до 18,1 ± 2,5 (р < 0,05), остальные показатели оставались на довакцинальном уровне. Сильных вакцинальных реакций в группе отмечено 6 (9,7 %), ОРИ — почти у половины детей (28, 45,2 %). В группе детей с эпилепсией (n = 60) выявлены высокие концентрации цитокинов до вакцинации: IL-1 — 58,5 ± 0,54; IL-4 — 70,0 ± 15,3; IL-6 — 45,8 ± 14,3, IFNγ — до 39,6 ± 7,6, уровень которых значительно изменялся на 30-й день вакцинального периода: отмечен низкий уровень IL-1 — до 0,72 ± 0,09 (р < 0,05), IFNγ — до 14,2 ± 0,98 и высокий уровень IL-4 — до 475,5 ± 90,5 (р < 0,05) и IL-6 — до 147,7 ± 27,9 (р < 0,05). Сильных вакцинальных реакций — 11 (18,3 %), заболели 5 (8,3 %) детей. Таким образом, изменение уровня цитокинов в поствакцинальном периоде соотносится с течением вакцинального процесса, процентом сильных вакцинальных реакций и числом развития респираторных инфекций, что необходимо учитывать для прогноза течения вакцинального периода у детей с различными неврологическими нарушениями. Изучение антикомплементарной ингибирующей активности моноклональных антител В.Е. Картузова, А.В. Трофимов, А.М. Ищенко ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург Целью работы было получение моноклональных антител (МАТ), блокирующих активацию альтернативного пути комплемента (АПК) и разработка метода оценки их ингибирующей активности. Мыши Balb/C были иммунизированы препаратами сыворотки человека, содержащими компоненты Ц И Т О иК И Н комплемента и продукты их активации. С использованием различных методов скрининга была получена панель из 19 МАТ, взаимодействующих с С3, С5 компонентами и фактором D (FD) системы комплемента, которые являются ключевыми при активации АПК. Для оценки блокирующего действия антител в ряды ячеек иммунологического планшета последовательно вносили разведенные с шагом два тестируемые антитела, нормальную пулированную сыворотку человека и активатор АПК зимозан. Разведения антител подбирали в диапазоне от четырехкратного молярного избытка по отношению к концентрации соответствующего антигена (С3, С5, FD) в сыворотке до 64-кратного недостатка. Планшет инкубировали 60 мин при 37 °С, после чего активацию останавливали добавлением ингибиторов. О степени активации комплемента судили по образованию в пробах анафилатоксинов С3а и С5а — продуктов расщепления С3 и С5 компонентов под действием соответствующих конвертаз. Концентрацию анафилатоксинов определяли посредством специфического ИФА, полагая, что 100 %-ной активации соответствуют уровни С3а и С5а, измеряемые в контрольных пробах в отсутствие ингибирующих антител. Эффективность ингибирования АПК зависела от концентрации внесенных специфических МАТ, и могла быть выражена в процентах ингибирования активации, которые рассчитывались для каждого анафилатоксина отдельно по формуле: ПИ (С5а,С3а) = (А-В)/А × 100 %, где: ПИ (С5а,С3а) — процент ингибирования, рассчитанный для анафилатоксинов С3а или С5а; А — концентрация анафилатоксина в образце, не содержащем специфических МАТ, мкг/мл; В — концентрация анафилатоксина в образце, содержащем тестируемые МАТ, мкг/мл. Среди исследованных МАТ были найдены 2 типа анти-С5 антител и 4 типа анти-С3 антител, для которых ПИ ≥ 90 % достигался при соотношениях АТ/АГ от 4 до 1. Анти-FD антитела подавляли активность АПК в эквимолярном соотношении. Наибольший интерес представляли выявленные анти-С3 МАТ, ингибирующее действие которых (ПИ ≥ 90 %), достига лось при существенном молярном недостатке по отношении к антигену: 1/16. Эти результаты указывают на то, что антитела распознают и блокируют ключевую детерминанту, которая экспонируется лишь на доле молекул С3, определяющих инициацию сборки активных конвертирующих ферментов комплемента. Полученные МАТ с высоким ингибирующим потенциалом могут быть использованы при создании терапевтических антител для лечения патологий, связанных с неконтролируемой активацией комплемента. Разработка двухкомпонентной системы «Витафлор-П» для получения пробиотического продукта на пилотируемом космическом корабле А.И. Кобатов 1, В.И. Евстигнеев 2, Е.А. Гуреева 3, Н.Б. Вербицкая 1, О.В. Добролеж 1 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург; 2 ОАО «Биопрепарат», г. Москва; 3 Российская космическая корпорация «Энергия» имени С.П. Королева, г. Королев 1 В период 2007–2013 гг. в рамках космических экспериментов «Биоэмульсия» и «Лактолен» на Российском сегменте МКС было проведено 3 долгосрочных и 12 краткосрочных экспе риментов. Изучено влияние факторов космического полета (ФКП) на производственные штаммы БАД «Витафлор». Показано, что ФКП не оказывают существенного влияния на размеры, морфологию и пробиотический потенциал (антагонистическую и ферментативную активность, устойчивость к антибиотикам, хранению в не оптимальных условиях и т. д.) штаммов L. acidophilus Д№75 и Д№76. На первой стадии экспериментов работы выполнялись в сменном биореакторе закрытого типа, входящем в комплект аппаратуры «Биоэмульсия». Была отработана стадия выра Ы ВОСПАЛЕНИЕ 100 Том 13 № 1 2014 Тезисы щивания штаммов Д№75 и Д№76 на борту МКС в жидких средах, в том числе, в питьевом молоке. Показано, что в условиях космического полета формируется симбиотическая культура лактобацилл с типичными для «Витафлора» свойствами и структурой популяции. В дальнейшем в гибридизаторах аппаратуры «Рекомб-К» был отработан полный цикл культивирования штаммов Д№75 и Д№76 в питьевом молоке, включавший стадии регидратации сублимированного посевного материала, внесения его в питательную среду и выращивания. В условиях космического полета получен кисломолочный продукт «Витафлор», лактобациллы которого находятся в физиологически активном состоянии, а пробиотический потенциал полностью отвечает требованиям, предъявляемым к пробиотическим пищевым продуктам (ГОСТ Р 52349-2005). Результаты исследования позволили приступить к разработке простой малостадийной технологии получения на борту МКС кисломолочной формы пробиотика «Витафлор» силами экипажа. Для снижения стартовой загрузки и гарантированного длительного хранения компоненты продукта будут поставляться на борт в сухом виде. С этой целью разработана и апробирована в земных условиях двухкомпонентная система «Витафлор-П» (патент на изобретение РФ № 2487547), состоящая из сублимационно-высушенного питьевого молока и инокулята в виде пористой таблетки. В настоящее время в рамках КЭ «Пробиовита» сотрудниками ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России совместно со специалистами РКК «Энергия» и ОАО «Биопрепарат» проводятся работы по масштабированию предлагаемой технологии и ее апробации в условиях косми ческого полета. Конечной целью работы является получение на борту пилотируемого космического корабля пробиотического продукта для поддержания здоровья космонавтов при длительных космических экспедициях. Особенности содержания цитокина TGFβ1 у женщин с угрожающими преждевременными родами в 22–27 недель, родившими впоследствии детей с внутриутробной инфекцией А.В. Колобова 1, Н.Ю. Сотникова 1, 2, Н.Ю. Борзова 1, 2 ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Иваново; 2 ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново 1 Невынашивание беременности, приводящее к преждевременным родам (ПР), является одной из ведущих проблем современного акушерства, так как определяет высокий уровень заболеваемости новорожденных и перинатальной смерт ности. Показано, что в патогенезе преждевременного прерывания беременности инфекционный фактор занимает важное место. Одним из основных противовоспалительных цитокинов является трансформирующий ростовой фактор β1 (TGFβ1), основная функция которого заключается в угнетении выработки цитокинов Т-хелперами и активированными макрофагами. Кроме того, защитное действие TGFβ1 заключается в снижении продукции простагландинов клетками человеческого амниона. Цель работы состояла в установлении особенностей содержания цитокина TGFβ1 у женщин с угрожающими преждевременными родами в 22–27 недель, родившими впоследствии детей с внутриутробной инфекцией. Материалы и методы. В акушерской клинике Ив НИИ М и Д им. В.Н. Городкова Минздрава России были обследованы 52 женщины с угрожающими преждевременными родами в сроки гестации 22–27 недель. Для исследования проводили однократный забор венозной крови, в сыворотке которой содержание TGFβ1 определяли иммуноферментным методом с использованием коммерческого набора «eBioscience» («Bender MedSystems», Austria) в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя, этим же методом выявлялись антитела классов IgМ, IgА и IgG к возбудителям основных инфекций: хламидиям трахоматис, микоплазме хоминис, уреаплазме уреалитикум, вирусу простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирусу (ЦМВ), вирусу Эпштейна — Барр (ВЭБ). У всех пациенток был прослежен исход беременности и оценено состояние новорожденного. Результаты и обсуждение. Установлено, что частота выявления маркеров активной ВЭБ-инфекции у пациенток составила 8,0 %, ВПГ — 16,0 %, хламидийной инфекции — 20,0 %, маркеров микоплазмы хоминис — 26 %, уреаплазмы уреалитикум — 29 %. Из 52 пациенток завершили беременность преждевременными родами 16 женщин, своевременными родами — 36. Оценено сывороточное содержание TGFβ1 в зависимости от характера перинатальной патологии новорож денного (перинатальные поражения ЦНС, конъюгационная желтуха, респираторный дистресс-синдром, инфекционно-воспалительные заболевания). Выявлены достоверные различия в сывороточном содержании противовоспалительного цито кина TGFβ1 между группой женщин с угрозой прерывания беременности в 22–27 недель, родивших здоровых детей и теми пациентками, кто родил детей с внутриутробной инфекцией (90 331 ± 23 828,1 и 27 736,5 ± 14 232,3 пг/мл, соответственно, р < 0,05). Снижение содержания противовоспалительного цитокина TGFβ1 у данной категории женщин может свидетельствовать об угнетении противоинфекционного иммунитета и является важным патогенетическим звеном в реализации внутриутробной инфекции. Антигенстимулированная продукция IFNγ как показатель антигенспецифической T-клеточной активации при инфекционных заболеваниях С.И. Котелева 1, Е.А. Кукушкина 1, И.М. Федорова 1, И.В. Капустин 1, Н.Н. Зверева 2 ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, г. Москва; 2 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова, г. Москва 1 Целью данной работы была апробация метода антигенстимулированной активации Т-лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе, вызванным вирусом Эпштейна — Барр. Ранее его использовали при нескольких острых инфекциях для мониторинга появления в крови пациента Т-лимфоцитов, активирующихся в присутствии этиологически значимого инфекционного антигена (M. pneumoniae, B. pertussis, ВПГ-1). Исследованы лимфоциты крови 15 пациентов в возрасте 3–14 лет, госпитализированных с серологически подтверж денным диагнозом «инфекционный мононуклеоз» (ИМ), и 10 пациентов с мононуклеозоподобными заболеваниями (лакунарная ангина, сочетанная с ОРВИ). Все больные обследованы на 5–14-й день заболевания. Для 24-часовой антигенной стимуляции лимфоцитов ис пользовали полистероловые планшеты с сорбированным очищенным VCA или EBNA из ИФА-наборов фирмы «ВекторБест» (Новосибирская область), предназначенных для выявления IgМ-антител к антигенам вируса Эпштейна — Барр. Параллельно данные пробы лимфоцитов стимулировали митогенами (ФГА) или бактериальными антигенами (M. pneumo niae). Активацию Т-лимфоцитов (CD3+ и отдельно CD3+CD8+) регистрировали методом проточной цитофлуориметрии по увеличению экспрессии маркера активации CD69 на их поверхности, а также по сопровождающей этот процесс секреции IFNγ в культуральную среду. VCA-стимуляция Т-лимфоцитов приводила к повышению экспрессии CD69 на CD3+CD8+у больных ИМ. У пациентов 6–14 лет она повышалась на 14,5±3,6 %, у пациентов 3–5 лет — на 6,9 ± 1,8 %, у больных контрольной группы — на 1,4 ± 0,5 %, т. е. активации лимфоцитов антигеном не происходило. В контрольной пробе с бактериальным антигеном стиму ляции не наблюдалось. Выраженность стимуляции лимфоцитов митогеном сильно варьировала. У 3 больных ИМ в ука занные сроки заболевания Т-лимфоциты отвечали не только на стимуляцию VCA, но и на стимуляцию нуклеарным антигеном. Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 101 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Повышение экспрессии маркера активации CD69 после 24-часовой антигенной стимуляции выше 4 % во всех случаях сопровождалось повышением концентрации IFNγ в куль туральной жидкости. У больных ИМ 6 лет и старше это повышение составляло 458 ± 194 пг/мл, у больных ИМ 3–5 лет — 104 ± 78. В контрольной группе, где антигенстимулированной активации не происходило, уровень IFNγ не увеличивался более, чем на 30 пг/мл. Полученные результаты показывают, что использованный нами метод оценки антигенной стимуляции Т-лимфоцитов может быть использован для изучения динамики появления в крови больных ИМ Т-клеток, активирующихся в присутствии капсидного и нуклеарного антигенов вируса Эпштейна — Барр, в сопоставлении с серологическими показателями. Изменение иммунологических показателей у женщин с бесплодием при «малых» формах наружного генитальногоэндометриоза после иммуномодулирующей терапии А.К. Красильникова, А.И. Малышкина, Н.Ю. Сотникова, Ю.С. Анциферова, С.В. Романова ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново В патогенезе наружного генитального эндометриоза, характеризующегося ростом эктопического эндометрия в перитонеальной полости и приводящего к развитию бесплодия, важную роль отводят нарушению функции фагоцитов. Одним из немногих иммуномодуляторов с доказанным активи рующим воздействием на фагоциты является Ликопид. Показано, что входящий в его состав глюкозаминилмурамилдипептид стимулирует фагоциты через NOD2-рецепторы. Мы предположили, что использование этого препарата может оказать положительное влияние на функцию моноцитов крови у женщин с бесплодием и эндометриозом. Целью работы было оценить влияние иммуномодулятора Ликопид на иммунологические показатели женщин с бесплодием и «малыми» формами наружного генитального эндометриоза. Материалы и методы. Были обследованы 39 пациенток с эн дометриозом 1–2-й стадии и бесплодием до и через 1 месяц после проведения лапароскопии. Все женщины получали Ликопид по 10 мг в сутки в течение первых десяти дней после операционного периода per os. 20 здоровых фертильных составили контрольную группу. Иммунологическое обследование включало определение в периферической крови уровня TLR2+, IL-1β+, TNFα+-моноцитов методом проточной цитометрии, уровня экспрессии мРНК NOD2 и RAGE методом ПЦР и сывороточного содержания RAGE с помощью ИФА. Результаты и обсуждение. Пациентки с эндометриозом характеризовались высоким содержанием в крови TLR2+- и TNFα+моноцитов, повышенным содержанием в сыворотке RAGE и усилением экспрессии моноцитами мРНК RAGE при сниженной внутриклеточной продукции моноцитами по сравнению с контрольными значениями. Иммуномодулирующая терапия в раннем послеоперационном периоде приводила к нормали зации содержания IL-1β моноцитов у пациенток основной группы. Данные изменения могут оказать позитивное влияние на состояние репродуктивной функции женщин, поскольку IL-1β непосредственно участвует в регуляции репродуктивных про цессов. Применение препарата «Бестим» при хронической обструктивной болезни легких у лошадей О.В. Крячко, О.В. Романова, Е.А. Шевченко Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, Санкт-Петербург В связи с особенностями течения воспалительной реакции у лошадей (экссудативно-инфильтративный тип), сезонностью Ц И Т О иК И Н рецидивов хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), а также риском возникновения тяжелых деструктивных поражений легких применение препаратов иммуностимулирующего действия в период рецидива и ремиссии являются клинически оправданными. Исследования проводили на помесных лошадях верхового и верхово-упряжного типа, были сформированы 2 группы по 6 голов по принципу аналогов. Основным критерием отбора лошадей в группы было наличие подтвержденной эндоскопически ХОБЛ продолжительностью не менее 2 лет. Лошади 1-й группы (опыт) получали препарат «Бестим» в дозе 500 мкг/гол однократно в сутки путем выпойки из шприца в течение 5 дней подряд. Лошади 2-й группы (контроль) препа рат не получали. Оценку клинического состояния и взятие проб крови осуществляли до начала эксперимента, через 14 суток после курса применения препарата и через 30 дней после начала опыта. Основные гематологические исследования выполнены на автоматическом гематологическом анализаторе «Micros 60-OT». Подсчет лейкограммы проводили традиционным методом. В результате проведенных исследований было отмечено улучшение клинического состояния больных лошадей уже после трехкратного применения препарата. Сухой отрывистый стенотический кашель, возникавший у животных по утрам, на фоне применения Бестима переходил во влажный, продолжительный с разжижением и отхождением мокроты. Изменения клинического состояния нашли отражение в положительной динамике изученных гематологических показателей: у лошадей опытной группы наблюдали снижение уровня лейкоцитов в 2,68 раза по сравнению с началом эксперимента уже на 14-е сутки после применения препарата «Бестим». Положительная динамика индекса иммунореактивности (ИИР) наметилась у животных, получавших препарат, также на 14-е сутки: ИИР увеличился в 3,99 раза по сравнению с первоначальным значением. Интересен полученный факт стабильного высокого уровня ИИР на всем протяжении эксперимента у лошадей опытной группы. В крови лошадей опытной группы через 14 суток после применения препарата общее содержание гемоглобина возросло в 1,18 раза, превысив максимально допустимый физиологический уровень. На 30-е сутки после проведенного лечения уровень гемоглобина, его средняя концентрация и содер жание в эритроците в крови лошадей опытной группы нахо дились в пределах физиологических значений. В целом, результаты проведенного эксперимента позволили выявить значительные положительные изменения основных гематологических показателей у лошадей опытной группы в отличие от контроля. В комплексе с отмеченным клиническим улучшением в группе животных, получавших Бестим, это позволяет сделать вывод о выраженной терапевтической эффективности испытуемого препарата. Роль аутоантител в развитии истинной акантолитической пузырчатки А.А. Кубанов 1, 2, Т.В. Абрамова 2 ФГБУ «Государственный научный центр косметологии и дерматовенерологии» Минздрава России, г. Москва; 2 ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России, г. Москва 1 Истинная акантолитическая пузырчатка — буллезный дерматоз, патогенетическую роль в развитии которого играют циркулирующие аутоантитела класса IgG, вызывающие разрушение десмосом. У генетически предрасположенных пациентов под воздействием экзогенных факторов инициируется распознавание собственных молекул, входящих в состав десмосом, антиген презентирующими клетками, которое приводит к активации Т- и В-клеток. В свою очередь, аутореактивные Т-клетки, продуцируя интерлейкины, активируют синтез В-клетками аутоантител класса IgG. Связывание аутоантител с белкамимишенями приводит к активации межклеточных протеаз, на Ы ВОСПАЛЕНИЕ 102 Том 13 № 1 2014 Тезисы рушению межклеточной адгезии, акантолизу кератиноцитов и формированию внутриэпителиальной щели и супрабазаль ной полости. Аутоантитела при акантолитической пузырчатке обладают высокой тканевой специфичностью и относятся к классу IgG, преимущественно IgG4, реже IgG1 и IgG2. Данные антитела не реагируют ни с одним из антигенов тканей других органов, кроме антигенов межклеточной субстанции эпителия и телец Гассаля тимуса. Клиническое разнообразие акантолитической пузырчатки определяется набором аутоантител. Так, при наличии антител только к десмоглеину 3 (Dsg3) у больного формируются пузыри на слизистых оболочках, кожные проявления отсутствуют. При наличии антител также и к Dsg1 наблюдается генерализация процесса с поражением кожи. При листовидной пузырчатке у больных присутствуют только антитела к Dsg1. Присоединение антител к Dsg1 и Dsg3 приводит к повреждению и разрушению десмосом. Показано, что антитела из сывороток больных, не связавшиеся с аффинной колонкой на основе рекомбинантного Dsg3, способны вызывать акантолиз. Это означает, что не все эпитопы, к которым формируются патогенные антитела при акантолитической пузырчатке, представлены в таких рекомби нантных белках или же о том, что в патогенез вовлечены ан титела не только против Dsg3. В настоящее время нет четкого представления о механизмах действия аутоантител при акантолитической пузырчатке. Дальнейшее изучение механизмов формирования аутоиммунных реакций и акантолиза может выявить мишени для разработки новых подходов к лечению истинной акантолитической пузырчатки. Селективная иммуносорбция в терапии истинной акантолитической пузырчатки А.А. Кубанов 1, 2, Т.В. Абрамова 2 ФГБУ «Государственный научный центр косметологии и дерматовенерологии» Минздрава России, г. Москва; 2 ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России, г. Москва 1 Истинная акантолитическая пузырчатка относится к группе аутоиммунных заболеваний кожи и слизистых оболочек, патоморфологической характеристикой которых являются интраэпидермальные пузыри, обусловленные акантолизом. Патогенетическую роль в развитии истинной акантолитической пузырчатки играют циркулирующие аутоантитела класса IgG, вызывающие разрушение десмосом. Основные звенья патогенеза истинной акантолитической пузырчатки в настоящее время трактуются с позиций ауто иммунной патологии, поэтому известные методы лечения истинной акантолитической пузырчатки направлены на иммуносупрессию. Все существующие терапевтические мероприятия сводятся к иммуносупрессивным воздействиям (системным глюко кортикостероидам), направленным на подавление синтеза аутоантител к белкам кератиноцитов. Однако длительное применение глюкокортикостероидных препаратов может приводить к развитию тяжелых, порой летальных осложнений. С целью снижения курсовых доз глюкокортикостероидных препаратов, частоты развития их побочных явлений разрабатываются другие патогенетически обоснованные ме тоды лечения больных истинной пузырчаткой, которые являются дополнением к базисной терапии. Одним из методов заместительной терапии является иммуносорбция (метод экстракорпоральной детоксикации), которая позволяет удалять из крови больного аффинные к используемому сорбенту иммуноглобулины, преимущественно IgG. Однако этот метод, наряду с патогенетически значимыми аутоантителами, удаляет и другие IgG, а также IgA, IgM и IgE. В свою очередь, удаление иммуноглобулинов, необходимых для защиты организма от бактериальных агентов, увеличивает риск развития инфекционных заболеваний. Разработка селективного иммуносорбента для специфического связывания патогенных аутоантител к десмоглеинам позволила бы избирательно удалять из плазмы крови больных истинной пузырчаткой патогенные аутоантитела, избегая повышения риска развития инфекци онных заболеваний. Однако этот метод в настоящее время в нашей стране не разработан. Использование селективной иммуносорбции в комплексной терапии истинной акантолитической пузырчатки явля ется перспективным направлением, так как позволит выявить новые пути в патогенетически обоснованном лечении больных истинной акантолитической пузырчаткой. Продукция провоспалительных цитокинов и изменение экспрессии молекул адгезии у беременных с гипертензивными нарушениями А.В. Кудряшова, И.А. Панова, Д.А. Хлипунова, Е.В. Смирнова ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново В настоящее время существует множество теорий формирования артериальной гипертензии у беременных, причем исследования последних лет подчеркивают важность иммунологических процессов в патогенезе данного состояния. Доказано, что гипертензивные расстройства у беременных сопровождаются развитием системного воспалительного ответа, активацией эндотелия сосудов и формированием эн дотелиальной дисфункции. Известно, что провоспалительные цитокины, выступая в качестве медиаторов воспаления, усиливают экспрессию адгезионных молекул как на клетках эндотелия, так и на лейкоцитах, тем самым способствуя их трансмиграции в периваскулярное пространство. Целью данного исследования было выявление особенно стей продукции провоспалительных цитокинов и экспрессии молекул адгезии периферическими фагоцитами у беременных с артериальной гипертензией. Материалы и методы. Проводили обследование 103 беременных женщин в 24–36 недель гестации. Из них у 38 имелась ПЭ (1-я группа), у 28 женщин — ПЭ на фоне хронической артериальной гипертензии (ХАГ) (2-я группа), у 37 женщин беременность протекала без гипертензивных расстройств (контрольная группа). В периферической венозной крови методом иммуноферментного анализа определяли уровни IL-8, IL-1β и его рецепторных антагонистов sIL-1Ra, sIL-1RII. Ме тодом многоцветной проточной цитофлуориметрии в популяциях моноцитов (CD14+CD45+) и нейтрофилов (CD14–CD45+) определяли содержание CD11b+ и CD11c+-клеток. Результаты и обсуждение. В группе женщин с ПЭ не было выявлено значительных изменений в сывороточном содер жании IL-8, IL-1β и его антагонистов sIL-1Ra, sIL-1RII. В то же время, уровень нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии CD11b и CD11c, у беременных данной группы было выше, чем в контрольной группе. У женщин с ПЭ, развившейся на фоне ХАГ, по сравнению с женщинами группы контроля, в сыворотке периферической крови содержание IL-1β, sIL-1Ra, IL-8 было достоверно выше. При этом повышение уровня sIL-1Ra у женщин 2-й группы происходило в меньшей степени, чем IL-1β. Изменение содержания фагоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у женщин с ПЭ на фоне ХАГ проявлялось в снижении CD11b+-нейтрофилов и CD11c+-моноцитов. Основным отличием группы женщин с ПЭ, развившейся на фоне ХАГ от группы женщин с ПЭ было достоверное повышение уровня sIL-1Ra и IL-8. По нашим данным, у женщин с ПЭ и с ПЭ на фоне ХАГ имеются значительные различия в процессах активации эндотелия сосудов и экспрессии молекул адгезии лейкоцитами. Вероятно, при ПЭ на фоне ХАГ процесс транссосудистой миграции лейкоцитов в большей степени определяется акти вацией клеток эндотелия, опосредованный повышением продукции IL-1β на фоне уменьшения содержания его антаго нистов, а при ПЭ — усилением адгезивных свойств лейкоцитов. Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 103 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Оценка жизнеспособности нейтрофилов при действии супернатантов нозокомиальных штаммов P. aeruginosa М.В. Кузнецова 1, 2, И.Л. Масленникова 1, И.В. Некрасова 1 Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, г. Пермь; 2 ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь 1 Нейтрофилы играют центральную роль во врожденном иммунитете и составляют первое звено в системе антимикробной защиты [Elbim C. et al., 2009; Gilroy D.W. et al., 2004]. Учитывая фенотипическую гетерогенность P. aeruginosa по продукции факторов патогенности — экзотоксинов, пигментов, гемолизинов [Van Delden C. et al., 1998], обладающих иммуномодулирующей активностью, в том числе, влиянием на основные функции нейтрофилов [Usher L.R. et al., 2002; Wagner et al., 2007], возможен различный исход воспалительного процесса. Цель работы — изучить жизнеспособность нейтрофилов человека при действии супернатантов нозокомиальных культур P. aeruginosa. Супернатанты нозокомиальных (n = 10) и референтного штаммов P. aeruginosa отбирали путем фильтрации (диаметр пор 0,2 мкм, «Хийу Калур», Эстония) после 20 ч культивирования при 37 °С в 96-луночном планшете на LB среде. Продукцию пиоцианина определяли согласно Deziel E. et al. (2001), экзополисахаридов — согласно Qin Z. et al. (2009). Объектами исследования являлись сепарированные нейтрофилы периферической крови человека (мужчины, n = 7). Апоптоз и выживаемость нейтрофилов определяли с использованием аннексина V/FITC в комбинации с йодидом пропидия (Beckman Coulter) после 30 мин воздействия супернатантов проточн ой цитометрией. Определение внутриклеточной кон центрации реактивных форм кислорода (ROS) нейтрофилов после воздействия супернатантов проводили согласно Loughman J.A. et al. (2011). Статистическую обработку проводили с использованием программы «Statistica 6.0». Установлено, что при воздействии супернатантов P. aeru ginosa доля жизнеспособных клеток AnV–/PI– существенно варьировала от 39,40 до 90,81 %. При этом число клеток AnV+/PI– («ранний» апоптоз) и AnV+/PI+ («поздний» апоптоз/ некроз) в большинстве вариантов статистически значимо не отличалось от уровня спонтанного апоптоза. Напротив, доля клеток AnV–/PI+ («неапоптотический»/«первичный» некроз) превышала контроль: значения варьировали от 3,54 до 35,22 %, медиана (квартили) составили 12,23 (6,60–15,99) %. Выявлена значимая связь в паре ROS/апоптоз, пиоцианин/апоптоз, что вполне ожидаемо, учитывая проапоптотическое действие пиоцианина. Показана умеренная положительная корреляция между уровнем апоптоза и содержанием экзополисаха ридов в супернатантах. Таким образом, влияние супернатантов на нейтрофилы, опосредованное прямым цитолитическим действием и/или индукцией апоптоза, различалось у исследованных нозоко миальных штаммов P. aeruginosa, обусловленное вкладом различных компонентов в составе их экзометаболитов. Полученные результаты свидетельствует о разном возможном течении/исходе воспаления в зависимости от штамма бактерий. Работа поддержана грантом РФФИ № 14-04-01300. и оценка изменения показателей популяционного профиля лимфоцитов периферической крови у больных хроническим бруцеллезом до, после и в отдаленные сроки после курса иммунотерапии Беталейкином. Материалы и методы. В исследование были включены боль ные с хроническим декомпенсированным бруцеллезом (n = 45), характеризующимся упорным течением с тяжелыми очаговыми проявлениями: остеомиелитом, спондилодисцитом, полиартритом, полилимфоаденитом, тромбоцитопенией; у женщин — сальпингоофоритом, бесплодием (первичным и вто ричным), самопроизвольными выкидышами, внутриутробной гибелью плода. Первично-хронический бруцеллез диагностирован у 39 (87 %) пациентов, вторично-хронический — у 6 (13 %). Возраст составлял от 18 до 51 года, средний возраст — 33,1 ± 8,8 года, в исследовании принимали участие 23 мужчины и 21 женщина. Диагноз бруцеллеза верифицирован в реакции агглюти нации и реакции Хаддлсона (РХ), и в тесте определения антигенсвязывающих лимфоцитов (АСЛ) бруцеллезной специфичности. Беталейкин применяли в дозе 500 нг п/к через день № 5 на фоне терапии ципрофлоксацином в течение 20–30 дней. Результаты и обсуждение. В ответ на введение беталейкина наблюдалось усиление очаговых проявлений, проявление новых, объективно не выявленных при первичном обследовании, повышение температуры до 38–39 °С через 1–2 часа после инъекции происходило у 44 больных. У 44/45 больных сразу после курса лечения наблюдалась негативация теста определения АСЛ, напротив, у больных с отрицательными или слабоположительными результатами РХ произошло значительное увеличение содержания специ фических антител. Через 3–5 месяцев после лечения у 44 больных АСЛ и РХ были отрицательными. В эти же сроки у всех больных наблюдалась полная нормализация показателей гемограммы (исчез лимфоцитоз, нормализовалась СОЭ). Исчезновение очаговой и общей симптоматики, нормализация показателей гемограммы, восстановление нормальной массы отмечены у 92,9 % больных. Рецидив — у 3 больных через 6, 10, 12 месяцев. После лечения в отдаленные сроки у больных сохранялись лишь симптомы вторичного артроза как остаточного проявления бруцеллеза. 2 молодые женщины с невына шиванием беременности родили здоровых детей. Относительное содержание лимфоцитов основных популяций (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD56+, CD95+, CD25+) после лечения нормализовалось (т. е. не отличалось от показателей здоровых лиц). Отрицательный результат антигенсвязывающих лимфо цитов сохранялся на протяжении 1–2 лет наблюдения. У 3 больных наблюдалось возобновление артралгии, но при отрицательных результатах определения антигенсвязывающих лимфоцитов и серологических реакций. Эффективность иммунотерапии с применением беталей кина у больных с тяжелым течением хронического бруцеллеза составила 93,3 % (достоверно относительно контрольной группы (с традиционной терапией), p < 0,001). Рекомбинантный интерлейкин 1β предупреждает побочные эффекты стандартной противовирусной терапии гепатита С Г.М. Курманова, Ш.С. Садыкова, Н.А. Акешова, А.Е. Мамутова Казахский национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова, г. Алматы, Республика Казахстан; Международный Казахско-Турецкий Университет имени Х.А. Ясави, г. Туркестан, Республика Казахстан Применение рекомбинантного интерлейкина 1β у больных хроническим бруцеллезом с тяжелыми очаговыми проявлениями Г.М. Курманова, А.А. Жанкин, Г.М. Баратова, А.Е. Мамутова Казахский национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова, г. Алматы, Республика Казахстан; Международный Казахско-Турецкий Университет имени Х.А. Ясави, г. Туркестан, Республика Казахстан Цель — изучение эффективности рекомбинантного интерлейкина 1β (беталейкина) в комплексном лечении хронического бруцеллеза с тяжелыми клиническими проявлениями Ц И Т О иК И Н Цель — изучение эффектов рекомбинантного интерлейкина 1β (беталейкина) при проведении противовирусной терапии хронического гепатита С пегилированным интерфероном и рибавирином. Материалы и методы. В исследование были включены 37 пациентов с тремя и более предикторами низкой эффективности стандартной противовирусной терапии (ПВТ), прогноз стойкого вирусологического ответа — менее 45 % (в среднем, Ы ВОСПАЛЕНИЕ 104 Том 13 № 1 2014 Тезисы 35 %). Среди оцениваемых предикторов: генотип вируса, вирус ная нагрузка, степень фиброза и генотип по IL28B (rs12979860); коинфекция В, инсулинорезистеность, избыточная масса тела. Из 37 больных моно-HCV была у 35 больных, HCV+HBV коинфекция — у 2 больных. 26 мужчин, 11 женщин (26/11), средний возраст — 38,1 ± 8,9 года. Генотип 1B — у 18/37; вирусная нагрузка выше 400 000 МЕ/мл — у 30/37; генотип TT/CT по IL28B — у 32/37; уровень фиброза F0 — у 3, F1 — у 9, F2 — у 14, F3 — у 6, F4 — у5. 8 больных не ответили на предшест вующие курсы ПВТ. Все пациенты получали курс беталейкина 5–8 нг/кг № 10 через день до начала ПВТ. 10/37 больных получали УДХК 12,5 мг/кг в течение всего курса ПВТ. Результаты и обсуждение. Гриппоподобный синдром развивался через 40–60 минут после введения беталейкина и был более выражен по сравнению с реакцией на пегинтерферон. У 51,4 % пациентов негативация ПЦР произошла после курса беталейкина до начала ПВТ. У 8,1 % пациентов отмечен полный биохимический вирусологический ответ после начала ПВТ, у 21 % — полный ранний вирусологический ответ. Отри цательный результат ПЦР к 12 неделе ПВТ зафиксирован у 83,8 % пациентов. Стойкий вирусологический ответ был по лучен у 32/37 (86,5 %); при генотипе 1B — у 14/18 (77,7 %); среди не ответивших на ПВТ — 7/8. Во всех случаях смешанной криоглобулинемии (8 больных) исчезновение ее проявлений наблюдалось в первые 3 месяца лечения. Артралгия наблюдалась у 18/37 больных в первые 2–3 месяца. Биохимический ответ выражался в нормализации показателей изначально повышенных трансаминаз и билирубина в динамике, либо нормальные показатели трансаминаз в процессе лечения снижались до нижнего порога нормы. Только у 2 пациентов в первые 3 месяца ПВТ наблюдалось снижение уровня гемоглобина ниже 100 г/л и тромбоцитопения ниже 50 тыс/мл. Эти пациенты получили второй курс беталейкина на фоне ПВТ без снижения дозы рибавирина и/или пегинтерферона с нормализацией всех показателей гемограммы. Умеренно выраженная депрессия наблюдалась у 2 паци ентов. Депрессию удалось контролировать изменением режи ма и психотерапией без медикаментозной коррекции. Потеря массы тела на 7–8 кг отмечалась у 2 больных. Таким образом, включение беталейкина в стандартную ПВТ позволило получить стойкий вирусологическй ответ в 86,5 % при прогнозе ниже 45 % и значительно повысить пере носимость ПВТ не только в отношении гематологических побочных эффектов, но в отношении снижения массы тела и развития депрессии. Изменение уровня цитокинов у женщин с плацентарной недостаточностью и генитальной инфекцией И.В. Курносенко, А.П. Сипок, Н.А. Филипова ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск Актуальность. Плацентарная недостаточность (ПН) как ведущая причина перинатальных потерь не теряет своей актуальности. Частота ПН, по данным различных авторов, составляет от 22 до 77 %. (Сидельникова В.М., 2004; Савельева Г.М. и др., 2010; Baptiste-Roberts K. et al., 2008). Ряд исследований подтверждает роль генитальной инфекции (ГИ) в генезе ПН (Стрижаков А.Н. и др., 2003; Долгушина Н.В., 2009; Кулаков В.И. и др., 2004; Baptiste-Roberts K. et al., 2008).Так как важную роль в реализации иммунитета играют цитокины, то исследование их уровней у беременных женщин с ПН в зависимости от наличия или отсутствия у них ГИ представляется практи чески значимым направлением в решении вопросов прогнозирования и профилактики ряда акушерских осложнений. Цель исследования — оценка уровней ряда цитокинов в периферической крови и цервикальной слизи у беременных женщин с ПН в зависимости от наличия или отсутствия у них ГИ. Материалы и методы. Методом сплошной выборки с 2009 по 2012 год было проведено проспективное рандомизированное обследование 1 562 беременных женщин. В исследование были включены 223 из них, которые составили 3 группы. 1-я группа (контрольная) — 30 практически здоровых женщин, 2-я (основная) — 163 пациентки с ПН и ГИ, 3-я группа (сравнения) — 30 женщин с ПН без ГИ. Для диагностики ПН при меняли инструментальные методы с постнатальным морфо логическим подтверждением. Для диагностики ГИ всем бере менным женщинам было проведено клинико-лабораторное обследование, бактериоскопическое и бактериологическое исследование, ПЦР-диагностика. В крови и цервикальном секрете определяли уровни IL-1β, IL-1Ra, IL-4, IL-8, IL-10, IL-17, IFNγ, TNFα. Результаты и обсуждение. У беременных женщин с ПН и ГИ наблюдались повышенные уровни ряда провоспалительных цитокинов как в периферической крови, так и в цервикальной слизи. В периферической крови достоверно нарастали кон центрации IL-8, IL-4, в цервикальной слизи — IL-4, имелась четкая тенденция к повышению IL-8. При этом наблюдалось достоверное уменьшение уровней IL-17, IL-10 и IFNγ в церви кальном секрете респондентов из основной группы по сравнению с двумя другими группами. У беременных женщин с плацентарной недостаточностью без генитальной инфекции достоверно высоким оказался уровень IL-8 и IFNγ в периферической крови по сравнению с двумя другими группами. В цервикальной слизи вместе с достоверным увеличением IFNγ отмечалось значительное снижение IL-1β. Перспективы создания вакцины против краснухи на основе штамма «Орлов-В» И.Н. Лаврентьева 1, Л.П. Сухобаевская 1, А.Б. Жебрун 1, В.З. Агрба 2, Л.А. Яковлева 2, Д.Д. Корал-Оглы 2, О.А. Шамсутдинова 2 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; 2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинской приматологиии» РАМН, г. Сочи 1 Достижение необходимого уровня охвата прививками всех подлежащих вакцинации против краснухи контингентов сдерживается отсутствием отечественной вакцины. Разработка такого препарата остается актуальной задачей отечественного здравоохранения. Однако эндемичный для России штамм «Орлов» был выделен в Ленинграде еще в 1969 г. и депонирован в ГКМВ как вакцинный. В 1995 г. штамм восстановлен до исходных показателей биологической активности, сертифицирован в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и получил наименование «Орлов-В». В работе использованы вирусологические (ПЦР), гистоло гические, иммунологические (РТГА, ИФА) методы исследова ния. Доклинические испытания штамма «Орлов-В» на обезьянах макака-резус проведены на базе ГУН «НИИ медицинской приматологии» РАМН, г. Адлер-Сочи в соответствии с действующим нормативным документом (СП 3.3.2.561–96). В ходе эксперимента установлена специфическая безопас ность штамма «Орлов-В» по тестам: 1. Остаточной нейровирулентности. Тест проведен на 10 обезьянах, зараженных интрацеребрально в дозе, равной 10 прививочным дозам для человека. Ни в одном случае в индикаторных зонах головного и спинного мозга обезьян не было выявлено вирусспецифи ческих поражений нейронов и глии. 2. Контроля тератогенных свойств вакцинного штамма. Тест проведен на 12 обезьянах макака-резус, иммунизированных препаратом из вак цинного штамма «Орлов-В» в первом триместре беременности. В трех случаях имела место неспецифическая гибель дете нышей из-за родовой травмы. Ни в одном их них не выявлено вирусспецифических поражений исследованных морфологически и гистологически органов и тканей погибших. В девяти случаях родились клинически здоровые детеныши. В сыворотках крови новорожденных ни в одном случае не выявлено IgM-антител к вирусу краснухи. Результаты доказывают от Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 105 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы сутствие тератогенных свойств вакцинного штамма «Орлов». Кроме того, специфическая безопасность подтверждается утратой контагиозности вакцинного штамма, установленной в серии экспериментов. В доклинических испытаниях установлена также высокая специфическая активность штамма «Орлов-В» (по критериям иммуногенной и протективной активности). Однократная им мунизация 20 животных сопровождалась 100 % сероконверсией. Напряженность иммунитета характеризовалась высокими показателями титров АТ в РТГА и ИФА. Протективность: иммунизация штаммом «Орлов-В» в 100 % случаев защитила животных от заражения патогенным штаммом вируса краснухи. Иммунологическая безопасность: изменение функциональной активности иммунокомпетентных клеток под влиянием вакцинации не отличалось более чем в 1,5 раза от исходных показателей, а их продолжительность не превышала 45 дней. Технологические основы производства вакцины разработаны с использованием в качестве производственной линии клеток диплоидной линии клеток эмбриона человека («М-22»). В экспериментах показана пригодность линии для производственных целей. Результаты свидетельствуют о возможности применения вакцины на основе штамма «Орлов». Целесообразность получения такой вакцины основана на использовании эндемичного для России штамма «Орлов» с поливалентной активностью сайта иммуногенности белка Е1, что важно в условиях популяционной изменчивости возбудителя в период вакцинопрофилактики инфекции. Особенности фагоцитарной активности нейтрофилов у женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников в протоколе экстракорпорального оплодотворения Ю.Ю. Лазарева 1, Н.В. Антропова 2 ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново; 2 ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Иваново 1 Фолликулярные кисты яичников при бесплодии диагно стируются в 7–10 % случаев. Эти образования в яичниках женщин, вступающих в протокол экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), являются неблагоприятным условием для начала процедуры. В последнее время большое количество исследований свидетельствует о роли врожденного иммунитета в формировании фолликулярных кист яичников, которые являются гормонпродуцирующими образованиями. Целью нашего исследования было выявление особенностей функциональной активности нейтрофилов у женщин с фолликулярными кистами яичников в зависимости от их тактики ведения в протоколе ЭКО. Были обследованы 69 женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников. В 1-ю группу включили 10 женщин, у которых фолликулярные кисты яичников были пролечены до начала протокола ЭКО, во 2-ю — 19 пациенток, у которых кисты были пунктированы до начала протокола ЭКО, в 3-ю — 38 женщин, которые вступили в протокол ЭКО с фолликулярными кистами. В зависимости от тактики ведения кист 3-ю группу разделили на две подгруппы: 1-ю — 17 женщин, у которых фолликулярные кисты подверглись регрессу в протоколе ЭКО, 2-ю подгруппу — 21 женщина, которые подверглись трансвагинальной пункции кист во время стимуляции суперовуляции из-за их увеличения. Группу контроля составили 6 женщин с бесплодием, у которых фолликулярные кисты при подготовке к программе и во время программы ЭКО не отмечались. Материалом служила периферическая кровь из локтевой вены, полученная на 16–17-й день цикла во время трансвагианальной пункции яичников. Оценку функ ционального состояния нейтрофилов в периферической крови у женщин определяли с помощью спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста. Результаты проведенного Ц И Т О иК И Н анализа показали, что различий в показателях спонтанного НСТ-теста в сравниваемых группах выявлено не было. Уровень стимулированной зимозаном НСТ-активности в 1-й и 2-й группах также не имел достоверных отличий от показателей контроля. В 3-й группе женщин с фолликулярными кистами, которые вступили в протокол ЭКО, индуцированная зимозаном НСТ-активность периферических нейтрофилов была минимальной, причем в независимости от увеличения или регрессии кисты яичника. Параллельно было отмечено резкое угнетение резерва функциональной активности нейтрофилов у женщин с регрессивными фолликулярными кистами, о чем свидетельствовали низкие значения индекса активации нейтрофилов в ответ на стимуляцию зимозаном. Полученные данные свидетельствуют о существующей взаимосвязи между наличием кисты и резервом функциональной (бактерицидной) активности нейтрофилов. Получение гидрофобного сорбента для финишной очистки рекомбинантных белков от липополисахаридов И.В. Ларионов, Н.В. Скворцов, А.Г. Болдырев, Т.П. Сушко, С.Ф. Антонов ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург Основным подходом в финишной очистке белков генно-ин женерного генеза от липополисахаридов (ЛПС) является аффинное связывание последнего с помощью высокоселектив ных сорбентов в рамках соответствующих хроматографических процессов. В настоящее время наиболее эффективными аффинными сорбентами к ЛПС являются сорбенты с иммобилизованным в качестве лиганда полимиксином Б (ПМ-Б). Амфифильные свойства ПМ-Б обусловлены наличием гидрофобных групп, чередующихся с положительно заряженными гидрофильными остатками диаминомасляной кислоты (ДАМК). Такая композиционная структура молекул ПМ-Б по зволяет им достаточно эффективно связываться с молекулами ЛПС. При этом, согласно расчетным данным, энергия взаи модействия в пределах комплекса ЛПС-ПМ-Б определяется преимущественно гидрофобными эффектами, которые в вандер-ваальсовом выражении обеспечивают около 95 % общей энергии взаимодействия. В соответствии с этим, при разработке новых квазиаффинных сорбентов к ЛПС задача сводится к подбору аффинанта, специфичного для гидрофобного фрагмента липида А-жирных кислот. Цель работы — разработка квазиаффинного сорбента на основе макропористой целлюлозной матрицы и гидрофобных лигандов. По существу, данная цель определяет две задачи: выбор лигандов, эффективно связывающих ЛПС в конкурентной среде, и подбор матрицы, обеспечивающей хорошие характеристики массопереноса и массообмена с очищаемой средой. Разработан процесс получения сорбента с гидрофобными лигандами С8-С10 на основе высокопроницаемой матрицы Сфероцелл. Выполнены процессы связывания ЛПС в модель ных средах, оценена емкость полученного сорбента в отноше нии ЛПС и уровень селективности связывания ЛПС сорбентом, определены параметры его элиминации. Количественные оценки ЛПС в белковых растворах производили с помощью Chromo-LAL теста. Полученные величины были сопоставлены с соответствующими характеристиками ЛПС-специфичного конвенциального сорбента Полимиксин-Б Сефарозы. Кон статировано превосходство первого по физико-химическим и эксплуатационным характеристикам. Таким образом, разработанный сорбент может быть использован для финишной очистки целевых белковых препаратов, полученных в процессе культивирования грам-отрицательных бактерий. При этом качество их очистки от липополисахаридов соответствует рекомендациям фармакопеи ВОЗ (ПДК ЛПС в препаратах инъекционного применения не должна превышать 0,05 ppm). Ы ВОСПАЛЕНИЕ 106 Том 13 № 1 2014 Тезисы Фармакодинамика реактивных метаболитов циклофосфана в эксперименте Е.А. Лебединская 1, О.В. Лебединская 1, Ф.В. Доненко 2, Н.К. Ахматова 3 ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь; 2 ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина»РАМН, г. Москва; 3 ФГБУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова» РАМН, г. Москва 1 Цель исследования — изучение влияния различных режимов введения циклофосфана (ЦФ) экспериментальным животным на содержание его реактивных метаболитов, а также оценка токсических свойств этого препарата. Содержание реактивных метаболитов ЦФ определяли в плазме крови у мышей по методу Friedman и Boger, модифицированному Alberts. ЦФ вводили мышам линии СВА массой 23–26 г внутрибрюшинно однократно, 2-кратно или 3-кратно с интервалом 72 ч в дозе 100 мг/кг массы тела. Определяли период полуэлиминации реактивных метаболитов ЦФ. Дина мику концентрации реактивных метаболитов оценивали в течение 6 ч через различные промежутки времени после введения ЦФ. Кроме того, определяли число лейкоцитов в периферической крови после каждого введения цитостатика. Общетоксическое действие ЦФ проявлялось в изменении числа лейкоцитов периферической крови. На 3–5-й день после введения ЦФ формируется выраженная лейкопения. При двукратном введении ЦФ лейкопения наблюдалась с 3 по 8-й день, а при трехкратном введении ЦФ возникала стойкая лей копения, которая держиалась более 10 суток. Однократное введение ЦФ сразу повышает концентрации реактивных ме таболитов ЦФ в плазме крови, которые достигают максимума через 10 минут после введения препарата и снижаются до ну ля через 3 ч. Максимум концентрации реактивных метаболитов наблюдался через 15 мин после двукратного введения ЦФ. Максимальная концентрация реактивных метаболитов при двукратном введении ЦФ была меньше, чем при однократном. Это связано с тем, что изначально ЦФ не обладает ни цитотоксической, ни алкилирующей активностью. Для появления реактивных метаболитов ЦФ нуждается в метаболической активации монооксигеназами печени. Однако при образовании реактивных метаболитов ЦФ они повреждают гепатоциты (в которых находятся монооксигеназы), и активность ферментных систем клеток печени снижается. Полное исчезновение реактивных метаболитов ЦФ в плазме крови экспериментальных мышей наблюдалось через 5 ч при любом режиме введения цитостатика. Таким образом, изучение фармакокинетики реактивных метаболитов ЦФ показывает, что препарат быстро метаболи зируется в печени и обладает выраженным кумулятивным эффектом. Установлено изменение фармакокинетики циклофосфана, снижение уровня его реактивных метаболитов и расширение пика их максимальной концентрации. Трехкратное введение циклофосфана оказывает общетоксическое действие, но не приводит к гибели животных. Продолжительность нарушений позволяет использовать данные режимы для соз дания модели индуцированной иммуносупрессии. Исследование свойств биоимплантатов для замещения костных дефектов О.В. Лебединская 1, А.Н. Копылов 2, М.В. Киселевский 2 ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь; 2 ГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина», г. Москва 1 Цель работы — исследование свойств образцов пористого материала на основе сверхвысокомолекулярного полиэтилена (СВМПЭ) и проверка их биосовместимости и иммуногенности. Образцы СВМПЭ исследовали на биосовместимость in vitro и in vivo. При исследовании in vivo образцы были подшиты 20 мышам подкожно и изучены через 2 месяца. Образцы, изъятые из подкожных карманов мышей, были покрыты соединительнотканной капсулой без каких-либо признаков воспаления или разрушения имплантов. In vitro исследовали индукцию гемолиза и цитотоксичность образцов. После инкубации с мезенхимальными стволовыми клетками (МСК) собаки в MTT-тесте показана умеренная степень цитотоксичности биоимпланта по отношению к МСК. Измерение оптической плотности надосадочной жидкости после центрифугирования коинкубированных с имплантом эритроцитов продемонстрировало незначительный уровень индукции гемолиза. На основании результатов исследования ортотопической трансплантации крысам (10 животных) образцов исследуемого материала выявлены его выраженные остеокондуктивные свойства. Это определяется структурными особенностями СВМПЭ: общая пористость образцов составляет 79 %, имеется большое количество открытых проходных пор размером более 100 мкм, при этом максимально представлены поры размером около 200 мкм. Через 60 суток с начала эксперимента наблюдалась значительная резорбция имплантата с формированием в его толще множественных участков неоостеогенеза. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования пористого сверхвысокомолекулярного поли этилена для создания имплантатов с целью замещения и репарации дефектов костей. Роль экспрессии TLR-2 в развитии генерализованной герпетической инфекции у новорожденных детей А.Ю. Левкович, А.А. Афонин, М.А. Левкович, Л.В. Кравченко, М.В. Демидова ФГБУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону Актуальность. Герпетическая инфекция (ВПГ-1, -2) является важнейшей проблемой современной педиатрии, что обусловлено тяжестью течения заболевания, склонностью к генерализации, высокой частотой поражения ЦНС, трудностью своевременной диагностики и терапии. Учитывая, что реализация инфекционного процесса определяется патогенностью возбудителей инфекции и эффективностью защитных сил организма, важная роль отводится состоянию иммунной системы. При этом реализация специфичности врожденной иммунной системы ложится на семейство TLR-рецепторов, связывание которых микробными продуктами приводит к продукции цитокинов, что в дальнейшем определяет характер, направление и интенсивность адаптивного иммунного ответа. Цель работы состояла в выявлении роли факторов врож денного иммунитета в развитии генерализованной герпетической инфекции у новорожденных детей. Материалы и методы. Изучены клинико-лабораторные данные 48 новорожденных в раннем неонатальном периоде. У 22 детей (основная группа) имела место генерализованная герпетическая инфекция. Контрольную группу составили 26 клинически здоровых новорожденных от матерей с физиологическим течением беременности. Диагноз внутриутробной герпетической инфекции выставляли на основании клинической картины заболевания, выявления ДНК ВПГ-1, -2 в крови и в моче, нарастания титров специфических IgG к ВПГ в динамике, обнаружения IgM в сыворотке крови у ребенка. Определение экспрессии TLR-2 (СD14+СD282+) на моноцитах проводили методом лазерной проточной цитофлуориметрии («Beckman Coulter»). Полиморфизм аллельных вариантов гена TLR-2 изучали методом ПЦР. Определение содержания IFNα в сыворотке крови проводили иммуноферментнм методом («BCM-Diagnostic», USA). Результаты и обсуждение. Развитие генерализованной гер петической инфекции у новорожденных детей сопровождалось значительными изменениями в иммунном статусе. Так, в основной группе по сравнению с контрольной выявлено достоверное снижение экспрессии TLR-2 (CD14+CD282+) на моноци- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 107 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы тах периферической крови (43,8 ± 8,3 против 76,2 ± 5,6 %). Проведенные исследования частоты полиморфизмов гена TLR-2 установили, что у новорожденных с генерализованной герпетической инфекцией частота генотипа Arg753Gln гена TLR-2 была достоверно выше в сравнении с контрольной группой (26,3 и 3,8 %, соответственно, р < 0,05). Была установлена взаи мосвязь между аллелем Arg/Gln гена TLR-2 и показателя ми неспецифической защиты организма. Оказалось, что у пациентов-носителей аллеля Gln в гетерозиготном состоянии уровень IFNα статистически значимо отличался от показателей группы без данного полиморфизма (0,49 ± 0,01 против 0,1 ± 0,01 пг/мл, р < 0,05). Таким образом, у детей при генерализованной герпетической инфекции имеет место снижение экспрессии TLR-2 на моноцитах, что приводит к снижению противовирусного иммунного ответа. Аллельные варианты гена TLR-2 в точке полиморфизма Arg753Gln могут являться генетическими маркерами риска развития генерализованной формы инфекции, вызванной ВПГ-1, -2 у новорожденных. Выявленные особенности факторов врожденного иммунитета объясняют высокую чувствительность новорожденных к герпетической инфекции и подтверждают их роль в развитии клинической картины заболевания. Роль IL-15 и гранзима при невынашивании беременности инфекционного генеза М.А. Левкович, В.А. Линде, Д.Д. Нефедова ФГБУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону Актуальность. К числу наиболее приоритетных направлений современной медицины относятся вопросы охраны репродуктивного здоровья женщины и ее потомства. Особое место при этом занимает важнейшая проблема практического акушерства — предупреждение преждевременного прерывания беременности. Невынашиванием завершаются не менее 15 %, а по некоторым данным — 25–30 % беременностей (Сидель никова В.М., 2007). На сегодняшний день, очевидно, что в исходе беременности важную роль играют иммунные взаимоот ношения между материнским организмом и плодом, однако причины нарушения механизмов, обеспечивающих физиологическое течение беременности и приводящих к акушерской патологии, до настоящего времени остаются недостаточно изученными. Цель работы — определение содержания IL-15 и гранзима в сыворотке крови и цервикальной слизи при невынашивании беременности инфекционного генеза. Материалы и методы. Были обследованы 76 женщин в сроке до 12 недель беременности. 1-ю группу (n = 52) составили беременные с невынашиванием беременности инфекционного генеза. В контрольную группу были включены 24 пациент ки с физиологическим течением беременности. Определение содержания IL-15 в сыворотке крови и цервикальной слизи и гранзима в сыворотке крови проводили иммуноферментным методом («BCM-Diagnostic», USA). Результаты и обсуждение. IL-15 — цитокин, участвующий в дифференцировке и пролиферации NK-клеток, контролирующий цитолитический потенциал, индуцирует продукцию IFNγ — ключевой молекулы в ремоделирования сосудов на ранних сроках беременности. В нашем исследовании в 1-й группе по сравнению с контрольной отмечалось достоверное повышение содержания IL-15 как в сыворотке крови, так и в цервикальной слизи (57,2 ± 8,1 против 31,2 ± 10,0 пг/мл и 47,3 ± 8,3 против 26,4 ± 9,1 пг/мл, соответственно, p < 0,05). Гранзим является сериновой протеазой, секретируемой CD8+-цитотоксическими Т-лимфоцитами и NK при взаимодействии с клетка ми-мишенями, активирует процессы апоптоза. Синтез гранзи ма является чувствительным индикатором цитотоксической функции (Shafer-Weaver K. и др., 2003). Анализ содержания гранзима обнаружил его значительное увеличение в 1-й группе по сравнению с контрольной (32,1 ± 8,9 против 11,5 ± 2,3 пг/мл, p < 0,05)). Выявлена корреляционная взаимосвязь между со- Ц И Т О иК И Н держанием IL-15 и уровнем гранзима (r = 0,68, p < 0,05), что подтверждает индукцию цитолитической активности NK-клеток. На основании выявленных патогенетических механизмов разработаны объективные диагностические иммунологические критерии невынашивания беременности, что позволит формировать группы риска данного осложнения беременности у пациенток с урогенитальной инфекцией. Морфологическая оценка модели катетер-ассоциированной инфекции на фоне действия низкомолекулярного катионного пептида варнерина В.В. Литвинов 1, Л.М. Лемкина 2, Г.Г. Фрейнд 1, В.П. Коробов 2 ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь; 2 ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, г. Пермь 1 Актуальность. Выраженная резистентность клеточных компонентов биопленок к классическим антибиотикам требует поиска новых, альтернативных широко используемым антибактериальным препаратам соединений, способных подавлять жизнеспособность клеточных компонентов биопленок. В специальных экспериментах были получены первые результаты относительно ингибирующего действия на формирование биопленок низкомолекулярного катионного пептида варнерина, синтезируемого бактериями Staphylococcus warneri KL-1 (Коробов В.П., 2009). Цель работы состояла в изучении низкомолекулярного катионного пептида варнерина на модели катетер-ассоциированной инфекции с последующей морфологической оценкой состояния тканей вокруг катетера. Материалы и методы. Исследования проводили на 40 белых беспородных мышах. Животным под эфирным наркозом под кожу спины имплантировали фрагмент пластикового катетера. Всем животным внутримышечно вводили циклофосфамид в дозе 200 мг/кг. На части фрагментов катетеров в течение двух суток перед имплантацией выращивали бактериальные плен ки Staphylococcus epidermidis 33. Использовали низкомоле кулярный катионный пептид варнерин 54-й серии с активностью 1/512 тысяч у. е. В зависимости от предварительной обработки отрезков катетеров и способа применения варнерина животные были разделены на пять групп. Животных выводили из эксперимента путем передозировки эфира в первые, вторые и третьи сутки, после чего проводили гистологическое исследование тканей. Результаты и обсуждение. Введение варнерина как в виде инъекций, так и при предварительной обработке им катетера при отсутствии бактериального обсеменения не оказывает влияния на клеточный состав инфильтрата вокруг катетера. Применение варнерина в виде инъекций при имплантации катетеров как с предварительно выращенными биопленками, так и при ежесуточном введении взвеси стафилококка в ткани ведет к уменьшению и исчезновению колоний микроорга низмов, а также к снижению выраженности воспалительной реакции. Имплантация катетеров, предварительно обработанных варнерином, не оказывает влияния на рост колоний микроорганизмов и характер клеточного инфильтрата, что сви детельствует о необходимости создания специальных форм препарата варнерина, адсорбированных на поверхности катетера. Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, грант 12-0401431. Аутоантитела и рецепторы к TNFα в патогенезе иммуноопосредованных заболеваний Ю.А. Лопатникова, А.А. Альшевская, Е.А. Голикова, В.М. Непомнящих, Н.С. Шкаруба, А.Э. Сизиков, С.В. Сенников ФГБУ «НИИ Клинической иммунологии» СО РАМН, г. Новосибирск Фактор некроза опухоли (TNFα) как плейотропный цитокин оказывает очень широкий спектр эффектов на клетки и, Ы ВОСПАЛЕНИЕ 108 Том 13 № 1 2014 Тезисы соответственно, участвует в патогенетических реакциях при иммуноопосредованных заболеваниях. Однако стоит учитывать, что конечный эффект цитокина на клетки зависит не только от концентрации самого медиатора в межклеточном пространстве, но и от содержания растворимых факторов, регулирующих его активность (рецепторов и аутоантител), а также от количества молекул мембраносвязанных рецепторов на клетках, которые обеспечивают реализацию его функциональной активности. Цель работы — изучение содержания аутоантител к TNFα, экспрессии мембраносвязанных рецепторов и содержания растворимых рецепторов TNFα в норме и при иммунопатологических состояниях. Материалы и методы. Материалом для исследования служила периферическая кровь здоровых доноров, больных ревматоидным артритом, бронхиальной астмой, атопическим дер матитом и туберкулезом легких. Аутоантитела выделяли из сыворотки периферической крови комплексом методов аффинной хроматографии. Количество мембраносвязанных рецепторов на субпопуляциях оценивали методом проточной цитометрии с использованием специфических антител и калибровочных бус «Quantibrite PE Beads» («Becton Dickinson»). Определение TNFα и растворимых рецепторов в сыворотке проводили методом ИФА. Результаты и обсуждение. Показано, что концентрация аутоантител к TNFα IgG2, IgG3 и IgG4 достоверно выше у больных ревматоидным артритом и бронхиальной астмой по сравнению со здоровыми донорами. При ответе на терапию у больных ревматоидным артритом снижается содержание аутоантител к TNFα IgG2 и IgG4, а при переходе от неконтролируемого к контролируемому течению бронхиальной астмы повышается содержание IgG1аутоантител к TNFα. Количественный анализ экспрессии мембраносвязанных рецепторов показал, что субпопуляции иммунокомпетентных клеток достоверно различаются не только по проценту клеток, экспрессирующих рецепторы TNFα, но и по количеству молекул рецепторов на мембранах. Также был получен ряд досто верных различий в уровне экспрессии рецепторов TNFα I и II типов между больными ревматоидным артритом, атопическим дерматитом, туберкулезом легких и условно-здоровыми донорами. Корреляционные взаимосвязи между компонентами системы цитокина (медиатором, растворимыми рецепторами и мембраносвязанными рецепторами) свидетельствуют о взаи мосвязи систем регуляции функциональной активности цитокина и нарушении этих взаимосвязей при патологических изменениях. Таким образом, было показано активное участие аутоантител к TNFα и мембраносвязанных рецепторов TNFα в патогенезе иммуноопосредованных заболеваний, что свидетельствует о необходимости изучения этих компонентов в диагностике, прогнозировании и оценки эффективности терапии. Распределение рецепторов CD11b и CD95 на нейтрофильных гранулоцитах периферической крови у здоровых доноров В.А. Маркова, И.И. Долгушин, С.В. Квятковская, Е.В. Плеханова Южно-Уральский государственный медицинский университет, г. Челябинск Гетерогенность функциональных возможностей нейтрофильных гранулоцитов, степень их зрелости определяются состоянием рецепторного аппарата. Специфическая мембранная рецепция отражает адгезивные, поглотительные, цитоли тические, апоптические способности нейтрофилов. Фагоцитарная и микробицидная активность нейтрофильных гранулоцитов находится в непосредственной зависимости от количества и плотности таких рецепторов как CD11b, CD64, CD16, CD32, CD95. Целью работы являлось определение распределения ре цепторов CD11b и CD95 в популяции интактных и активированных нейтрофильных гранулоцитов. Определение популяционного состава нейтрофилов проводили методом проточной цитофлуориметрии на лазерном проточном цитофлуориметре «Cytomics FC500» фирмы «Beckman Coulter». Тест основан на способности специфических моноклональных антител связываться с дискретными антигенными детерминантами, экспрессированными на поверхности нейтрофилов. Для окрашивания были использованы одноцветные реагенты CD11b-FITC и CD95-PE фирмы «Beckman Coulter», США. Для учета изменения рецепторного аппарата нейтрофила после активации цельную кровь смешивали с 1,5 мМ раствором форболового эфира (ФМА) и инкубировали при 37 °С в течение 30 мин. Использование двух разных флуорохромов позволило оценить количество клеток, несущих на своей поверхности рецепторы CD11b и CD95 на одной гистограмме, что позволило разделить все нейтрофильные гранулоциты на четыре популяции: нейтрофилы, экспрессирующие на своей поверхности оба рецептора (CD11b+CD95+); нейтрофилы, имеющие на своей поверхности только рецептор CD11b (CD11b+CD95–); нейтрофилы, имеющие на своей поверхности только рецептор CD95 (CD11b–CD95+); нейтрофилы, не имеющие на своей поверхности ни рецептора CD11b, ни рецептора CD95 (CD11b–CD95–). При изучении распределения рецепторов CD11b и CD95 на неактивированных нейтрофильных гранулоцитах было установлено, что максимальное количество клеток, около 80 %, на своей поверхности имели рецептор CD11b и не несли рецептор CD95. Менее 10 % приходилось на нейтрофилы, не имевшие на своей поверхности ни рецептора CD11b, ни рецептора CD95. Близок к этому был процент нейтрофилов, имевших на своей поверхности оба рецептора. При этом следует отметить, что неактивированые нейтрофильные гранулоциты, экспрес сирующие только рецептор CD95, представлены в цельной крови в количестве не более 1 %. После воздействия на нейтрофильные гранулоциты ФМА изменялось процентное соотношение всех четырех популяций клеток. Происходило снижение количества клеток CD11b+CD95– до 70 %. Также уменьшалось количество нейтрофилов CD11b+CD95+ и клеток CD11b–CD95– до 4 и 3 %, соответственно. После активации ФМА наблюдалось достоверное увеличение количества нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих на своей поверхности лишь рецептор CD95, с 0,5 до 20 %. Применение раневых гидрогелевых покрытий «Хитоксин-гель» с рецепторным антагонистом IL-1β для лечения послеоперационного ринита О.О. Машинец 1, Х.Т. Абдулкеримов 1, А.С. Симбирцев 2 ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Екатеринбург; 2 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург 1 Любое операционное воздействие, каким бы щадящим оно ни было, приводит к нанесению операционной травмы. Но, несмотря на существенный рост числа операций, выполняемых по поводу ринологической патологии, для лечения пос леоперационного ринита, который неизбежно в той или иной форме развивается после эндоназальных вмешательств в полости носа и околоносовых пазух, нет общепринятых рекомендаций. Целью нашего исследования явилось изучение клиникоиммунологической эффективности местного применения ра невых гидрогелевых покрытий «Хитоксин-гель» с рецептор ным антагонистом интерлейкина 1β (IL-1Ra), производства ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России для лечения послеоперационного ринита у пациентов, перенесших эндоназальные вмешательства. Под нашим наблюдением находились 62 пациента с дефор мацией носовой перегородки. В 1-ю группу (n = 29) вошли пациенты, которым было выполнено плановое оперативное вмешательство по поводу деформации носовой перегородки и использовалась традиционная схема послеоперационного ведения. Во 2-ю (n = 33) — пациенты, подвергшиеся плановой хирургической коррекции деформации носовой перегородки, у которых в послеоперационном периоде в дополнение к Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 109 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы общепринятой методике на первые сутки после операции на раневую поверхность слизистой оболочки полости носа выполнялась аппликация раневого гидрогелевого покрытия «Хитоксин-гель» с IL-1Ra, ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России. В носовой слизи и сыворотке периферической крови оценивали содержание интерлейкинов 1β, 6, 8. Выраженность реак тивных явлений в полости носа определяли при эндоскопи ческом исследовании по балльной системе. Степень выраженности симптомов оценивалась с использованием визуальноаналоговой шкалы. Наблюдение за оперированными показало, что операционная травма приводит к возрастанию синтеза провоспалительных цитокинов в месте ее нанесения, а применение раневых покрытий «Хитоксин-гель» с IL-1Ra в послеоперационном пе риоде у пациентов, перенесших эндоназальные вмешательства, способно корригировать содержание цитокинов в назальном секрете и значительно снижает выраженность симптомов и объективных проявлений посттравматического ринита. фибринозного посттравматического увеита. Этот тип иммунного ответа оказался наиболее редким и соответствовал наиболее тяжелому течению посттравматического периода со средней продолжительностью койко-дней, равной 17,3 ± 1,7 дня. Выводы. Компенсаторно-реактивный тип иммунного ответа с умеренной активацией TNFα и IL-1β на системном и локальном уровне был наиболее благоприятным в клиничес ком отношении. Гипо- и гиперреактивный иммунный ответы соответствовали более тяжелому течению увеита. Определение индекса воспалительной активности может служить прог ностическим критерием неблагоприятного течения посттрав матического увеита и показанием к назначению соответствующего лечения. Аутоиммунная реакция на липопротеины у крыс вызывает развитие признаков атеросклероза И.В. Меньшиков, К.В. Фомина, М.А. Брызгалова ФГБОУ ВПО «Удмуртский государственный университет», г. Ижевск Цитокиновый индекс активности воспаления при обострении хронического посттравматического увеита С.Р. Меджидова Национальный центр офтальмологии имени акад. Зарифы Алиевой, г. Баку Исследованию цитокинов при посттравматических увеитах посвящено большое число научных исследований, но нам представлялось интересным посредством оценки системной и местной продукции определенных цитокинов вывести неко торый критерий оценки активности воспалительного процесса при обострении хронического посттравматического увеита. Цель — проведение сравнительной оценки цитокиновой регуляции иммунного ответа при обострении хронического посттравматического увеита. Материалы и методы. Офтальмо-иммунологические иссле дования проводили при обострении хронического посттравматического увеита на 47 пациентах. Средний возраст — 35,0 ± 6,4 года. Мужчин было 29, женщин — 18. Определяли содержание провоспалительных (TNFα, IL-1β) и противовоспалительных цитокинов (IL-4) в сыворотке крови (СК) и слезной жидкости (СЖ), на основании чего рассчитывали цитокиновый индекс воспалительной активности (ИВА) по формуле: ИВА = Σ IL-1β + TNFα IL-4 За вариант нормы ИВА были взяты значения от 0,9 до 1,1 у. е. (Егоров В.В., Дутчин И.В., 2007). Интенсивность воспалительных реакций оценивали по балльной системе, усовершенствованной Левановой О.Г. (2010). Результаты и обсуждение. Были выявлены три варианта иммунного ответа. Первый вариант — компенсаторно-реактивный — был диагностирован нами у 22 пациентов (46,8 %). При этом значение ИВА как в СК, так и в СЖ соответствовало физиологической константе (от 0,9 до 1,1) на всех этапах обследования. Выраженность реактивной воспалительной реакции при этом была умеренной, соответствовала, в среднем, 5,1 балла. Воспалительный процесс хорошо поддавался адекватной терапии, средняя продолжительность острого периода — 10,1 ± 2,3 дня. Второй вариант — гиперреактивный — был зарегистрирован у 16 пациентов (34 %): значение ИВА в СК и в СЖ определялось выше 1,1 в течение всего пе риода наблюдения. Степень воспаления при этом была выраженной, соответствовала, в среднем, 8,3 балла. Воспалительный процесс требовал усиления противовоспалительной терапии, средняя продолжительность острого периода — 14,2 ± 2,4 дня. Третий вариант — гипореактивный — был зарегистрирован у 9 больных (19,2 %). При данном типе иммунного реагирования значение показателя ИВА как в СК, так и в СЖ регистрировалось менее 0,9. Но данная иммунная гипореактивность была неадекватна степени тяжести воспалительной реакции (9,5 баллов). В клиническом течении послеоперационного периода у этих больных отмечалась выраженная симптоматика Ц И Т О иК И Н Несмотря на многочисленные исследования, этиология и патогенез атеросклероза остаются неизвестными. В настоящее время показана вовлеченность аутоиммунных реакций в патогенез атеросклероза, в частности, для таких мишеней как белки теплового шока, бета-2 гликопротеин 1, окисленные и нативные липопротеины низкой плотности (ЛПНП). В наших предыдущих исследованиях, с целью проверки гипотезы о том, что аутоиммунная реакция на ЛПНП может вызвать развитие признаков атеросклероза, мы индуцировали аутоиммунную реакцию на ЛПНП у крыс путем иммунизации их гетерологичными ЛПНП. Иммунный ответ на иммунизацию у части животных сопровождался развитием признаков атеросклероза, в частности, увеличивался объем периваскулярного и эпикардиального жира, развивалась дислипопротеинемия и комплекс ранних признаков атеросклеротического повреждения стенки дуги аорты. Целью данной работы являлось выяснение причинно-следственных связей между развитием аутоиммунной реакции и признаков атеросклероза на экс периментальной модели атеросклероза у крыс, вызванного иммунизацией гетерологичными липопротеинами. Однократная иммунизация крыс ЛПНП человека привела к развитию аутоиммунной реакции против ЛПНП. Рост уровня аутоантител сопровождался развитием дислипопротеинемии, увели чением объема эпикардиальной и периваскулярной жировой ткани, накоплением лейкоцитов, очаговыми отложениями липидов в стенке аорты, разрушением интимы, утолщением медии. Выявлено, что сыворотка экспериментальных животных содержит аутоантитела не только к ЛПНП, но и к липопро теинам высокой плотности. Также обнаружено, что у крыс существенно ниже уровень общего холестерина в надпочеч никах по сравнению с контрольными животными. Таким об разом, иммунизация крыс ЛПНП привела к развитию у них комплекса морфологических, биохимических и гистологических изменений, подобных атеросклеротическим, особый ин терес среди которых представляют увеличение объема эпикардиальной и периваскулярной жировой ткани и дефицит общего холестерина в надпочечниках. Известно, что белая жировая ткань, окружающая сосуды, может приобретать провоспалительные свойства и стимулировать атерогенез в сосудистой стенке. Пролиферацию белой жировой ткани может индуцировать дефицит андрогенов. Авторы предлагают гипотезу о причинно-следственных связях между продукцией аутоантител к липопротеинам, и развитием признаков атеросклероза. Аутоантитела, связываясь с липопротеинами плазмы, нарушают нормальный обмен холестерином между липопротеинами плазмы и клетками надпочечников, вследствие этого может возникнуть дефицит холестерина в тканях надпочечников. Это может привести к снижению уровня про изводства стероидных гормонов, в т. ч. андрогенов, т. к. известно, что 80 % холестерина для стероидогенеза в надпочечниках поступает из липопротеинов плазмы. Дефицит андрогенов может привести к пролиферации белой жировой ткани и дальнейшему каскаду изменений, ведущих к атеросклеро- Ы ВОСПАЛЕНИЕ 110 Том 13 № 1 2014 Тезисы тическому повреждению сосудов. Данная гипотеза требует дальнейшей проверки. Прогностическая значимость определения цитокинового профиля в оценке эффективности биологической терапии у детей с воспалительными заболеваниями кишечника Л.В. Мирошкина 1, С.В. Петричук 1, Е.Г. Цимбалова 1, А.С. Потапов 1, А.П. Топтыгина 2, О.В. Курбатова 1, М.М. Венедиктова 1, И.В. Писарева 1, Т.Д. Измайлова 1, А.О. Анушенко 1 2 1 ФГБУ «Научный центр здоровья детей» РАМН, г. Москва; ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, г. Москва Включение блокаторов TNFα, в частности инфликсимаба, в терапию воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК) у детей позволило значительно увеличить долю пациентов, достигающих стабильной ремиссии в короткие сроки, однако у 30 % больных не наблюдается стойкого ответа на препарат. Причиной потери эффективности селективных антагонистов TNFα считается выработка специфических антител к препа рату, а также вовлечение TNFα-независимых путей патогенеза ВЗК. Персонифицированный подход в назначении био логической терапии у детей с ВЗК позволит существенно увеличить ее клиническую и экономическую эффективность. Целью настоящего исследования явился анализ прогно стической значимости определения цитокинового профиля в оценке эффективности биологической терапии у детей с ВЗК. В работе обследованы 70 детей с ВЗК (41 пациент с болезнью Крона и 29 пациентов с язвенным колитом) в возрасте от 10 до 18 лет, получавших инфликсимаб. Оценку эффективности терапии проводили через год лечения с использованием международных клинико-лабораторных и эндоскопических индексов воспалительной активности заболевания. Концентрацию циркулирующих цитокинов определяли в сыворотке крови количественным мультиплексным методом (FlowCytomix, BenderMedSystems GmbH, Germany) с помощью проточной цитофлуориметрии (Beckman Coulter FC 500) перед первым введением препарата. Контрольную группу составили 20 ус ловно здоровых детей. В результате исследования выявлено исходное повышение содержания как про-, так и противовоспалительных цитокинов TNFα, IFNγ, IL-2, IL-10, IL-8, IL-6, IL-4 — у пациентов со стойким положительным эффектом от инфликсимаба по сравнению с пациентами, имевшими нестабильный эффект от препарата и контрольной группой (p < 0,05). Содержание TGFβ было снижено у детей с ВЗК по сравнению с контрольной группой (p < 0,05), при этом в группе пациентов с нестабильным эффектом терапии концентрация цитокина была значимо ниже, чем у пациентов со стой ким эффектом инфликсимаба. ROC-анализ выявил высокую вероятность правильного прогноза эффективности биологической терапии (интервал AUC 0,8–0,9, p < 0,05) при определении исходного содержания цитокинов TNFα, IL-4, IFNγ, IL-12p70. Наибольшую прогностическую ценность имела оценка содержания TNFα до начала терапии. Снижение плазменной концентрации TNFα до значения менее чем 8,7 пг/мл с вероятностью 98 % соответствовало прогнозу минимального терапевтического ответа на инфликсимаб в течение года лечения. Олигопептид KND как возможный эндогенный прототип дельта-сон-индуцирующего пептида И.И. Михалева 1, В.Б. Войтенков 2, В.Т. Иванов 1, Б.О. Войтенков 3 ФГБУН Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, г. Москва; 2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций» ФМБА России, Санкт-Петербург; 3 ООО «Исследовательский центр КОМКОН», Санкт-Петербург 1 При поиске эндогенной структуры дельта-сон-индуцирующего пептида (ДСИП) синтезирован пептид Trp-Lys-Gly- Gly-Asn-Ala-Ser-Gly-Glu [K2,N5]DSIP (кратко — KND), проведены эксперименты для выявления его биологических свойств. Материалы и методы. Исследованы антиоксидантные свой ства пептида на крысах при гипоксии, противосудорожные эффекты KND, влияние KND и ДСИП на поведение в тестах с приподнятым крестообразным лабиринтом (ПКЛ) и открытым полем на фоне физического и эмоционального стресса. Пептиды вводили в дозе 100 мкг/кг внутрибрюшинно. Результаты и обсуждение. Введение пептида крысам, не подвергавшимся гипоксии, характеризовалось достоверным снижением содержания малонового диальдегида (МДА) в плазме крови на 29 % относительно уровня МДА у интактных животных. Введение KND перед гипоксией достоверно снижало содержание диеновых конъюгатов, шиффовых оснований и МДА в плазме крови на 23,4, 41,7 и 31,4 %, соответственно, ак тивность каталазы — на 20 %. При коразоловых судорогах у крыс через 3 ч после введения KND и ДСИП наблюдалось увеличение ЛП судорожного припадка на 31 ± 3,5 с и на 13 ± 3,2 с, при исходном ЛП в контроле 48 ± 3,9 с. После инъекций KND обнаружено также более чем двухкратное снижение смерт ности животных. В экспериментах с ПКЛ у крыс Вистар на фоне стресса KND достоверно увеличивал число и длительность свешиваний с открытых рукавов лабиринта по сравнению с контролем. Введение пептида KND в условиях эмоционального стресса приводило к достоверному увеличению количества и длительности выглядываний животных в открытые рукава приподнятого крестообразного лабиринта по сравнению с контролем. Проведенные исследования показали, что новый пептид обладает функционально сходной биологической активностью в сравнении с дельта-сон-индуцирующим пептидом, но при этом его антиоксидантные, противосудо рожные и поведенческие эффекты оказались более выраженными, чем соответствующие эффекты дельта-сон-индуцирующего пептида. Мембранный белок OmpT холерного вибриона как возможный компонент химической вакцины Б.Н. Мишанькин, И.А. Иванова, О.В. Дуванова, Л.В. Романова, Е.С. Шипко, Н.Д. Омельченко, И.А. Беспалова, Л.В. Судьина, А.В. Филиппенко Ростовский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону Существенным препятствием для усовершенствования химических вакцин против холеры является недостаточность сведений о природе протективных антигенов холерного ви бриона. Вместе с тем установлено, что протективные антигены, ответственные за формирование антибактериального иммунитета, локализованы, главным образом, в наружных мембранах возбудителя (Марков Е.Ю. и др., 1998, 2004). В формировании противохолерного иммунитета могут участвовать токсинкорегулируемые пили адгезии, белки наружной мем браны (Король В.В., Гофман Е.А., 1997; Анисимова Т.И. и др., 2002; Wu J.Y. et al., 2001; Beck N.A., 2004), отличные от холерного токсина энтеротоксины (Смирнова Н.И., 2000; Bina J. et al., 2003) и ряд ферментов (Джапаридзе М.Н. и др., 2002; Телесманич Н.Р. и др., 2001; 2004). О перспективности использования нативных поверхностных структур холерного вибриона, так называемых «теней», в качестве основы для конструирования химических бесклеточных вакцин свидетельствуют результаты зарубежных исследователей (Eko F.О. et al., 2003). Иркутскими авторами показан протективный эффект препаратов наружных мембран, полученных в результате разрушения и инактивации клеток вибриона Эльтор мочевиной по методу Lohia A. et al. (1984) с последующей обработкой трипсином (Марков Е.Ю. и др., 1995, 2004; Урбанович Л.Я. и др., 1999). Белок OmpT является одним из восьми белков наружных мембран холерного вибриона. Очищенный с помощью дифференциального центрифугирования и хроматографии на колонке с целлюлозой DE-52 белок имеет молекулярную массу около 40 кДа, наделен протеолитической активностью, Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 111 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы расщепляет протамин, фибрин, желатин, казеин, коллаген, активирует превращение плазминогена человека в плазмин. Не гидролизует плазмин-специфичный пептидный субстрат n-нитроанилид трипептида for-Ala-Phe-Lys pNa.HBr («Ренам», Россия). Чувствителен к фенилметилсульфонилфлуориду, но слабо реагирует на присутствие дитиотреитола, ЭДТА, p-хлормеркуриобензоата, ингибируется солями цинка и меди, мочевиной и SDS, что сближает его с сериновыми протеа зами. И хотя роль белка в биологии холерного вибриона остается до конца не понятной, тем не менее его синтез строго регулируется микробом в ответ на различные сигналы окру жающей среды (рН, температура). Кроме защиты от антимикробных белков и активации плазминогена, обеспечивающих известное преимущество вибрионам в условиях кишечника чувствительного хозяина, увеличение синтеза OmpT в при сутствии высоких концентраций NaCI, пониженной температуре и в минимальных средах позволяет предположить его вклад в выживаемость Vibrio cholerae во внешней среде. В составе мембранных пузырьков OmpT может принимать участие в транспорте различных бактериальных факторов (ферменты, токсины, ДНК и др.) в клетки хозяина во время колонизации кишечника. Из представителей рода Vibrio только штаммы V. cholerae cholerae, V. cholerae eltor и V. cholerae O139 реагировали в реакции преципитации в геле с антисы вороткой к OmpT белку из холерного вибриона. Изучение протективных свойств OmpT белка откроет новые перспективы для совершенствования специфической профилактики холеры. Helicobacter pylori — возможно, основной эндогенный индуцирующий фактор дисфункции молекул эндотелия у больных с различными вариантами течения ишемической болезни сердца А.В. Москалёв, О.Н. Павлов ФГБ ВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ, Санкт-Петербург В настоящее время установлено, что Helicobacter pylori является дополнительной причиной нарушения функциони рования эндотелия, сопровождающегося воспалением различной степени выраженности и повышенной экспрессией молекул межклеточной адгезии и селектинов при многих соматических заболеваниях. Цель исследования — выявление особенностей дисфункции молекул эндотелия у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) различной степени тяжести. Материалы и методы. Обследованы 150 больных с различным течением ишемической болезни сердца (ИБС). Определение sP-селектина, sVCAM-1, sICAM-1 проводили с помощью диагностических тест-систем фирмы «Bender MedSystems», гомоцистеина с помощью реагентов фирмы «Axis-Shield» (Норвегия). Результаты и обсуждение. Прогностическим критерием развития повторных коронарных событий у больных ИБС в периоде двухлетнего динамического наблюдения является повышение в периферической крови титров антител IgG к H. pylori, уровней гомоцистеина, VCAM-1 и sP-селектина. Прогнозирование возникновения неблагоприятного исхода у больных стабильной стенокардией напряжения сопряжено с повышением уровня sICAM-1. Для больных острым инфарктом миокарда (ОИМ) значимым прогностическим критерием является уровень sICAM-1, снижение которого и невосстанов ление до референтных значений повышает вероятность развития повторных коронарных событий в период после выписки из стационара. Развитие повторных коронарных событий у больных ИБС после выписки из стационара зависит от степени прогрессирования хеликобактериоза. Прогрессирующее H. pyloriассоциированное хроническое активное воспаление является неблагоприятным фактором развития повторных коронарных событий. Выраженность местного H. pylori-ассоциирован ного воспалительного процесса может считаться предикто- Ц И Т О иК И Н ром неблагоприятного течения ИБС. Кратное превышение порогового диагностического уровня конкретной тест-системы титра антител IgG к H. pylori, отражающее прогрессирующее H. pylori-ассоциированное хроническое активное воспаление является предиктором нестабильного течения ишемической болезни сердца с высоким риском развития острого коронарного синдрома. Профили TGFβ1 и особенности иммунопатогенеза эрозивно-язвенных поражений гастродуоденальной области у лиц с недифференцированной дисплазией соединительной ткани А.В. Москалёв, А.С. Рудой ФГБ ВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ, Санкт-Петербург Установлены особенности иммунопатогенеза эрозивно-язвенных поражений гастродуоденальной области (ГДО) у лиц с различной степенью выраженности недифференцированной дисплазии соединительной ткани (НДСТ). Однако наиболее выраженная динамика выявлена со стороны трансформирующего ростового фактора β (TGFβ). Это связано с тем, что TGFβ вовлечен в различные физиологические и патофизиологические процессы. Учитывая, что TGFβ1-изоформа активно уча ствует в процессах тканевой репарации, то ее профили могут быть использованы как фактор мониторинга ремиссии и ак тивной фазы заболевания у изучаемой категории больных. Цель работы — выявление возможных взаимосвязей про филей TGFβ1 в периферической крови у больных эрозивноязвенными заболеваниями гастродуоденальной области с сопутствующей дисплазией соединительной ткани в периоды ремиссии и активной фазы заболевания. Материалы и методы. Осуществлено комплексное обследование 78 больных язвенной болезнью и эрозивными гастродуоденитами (возраст — 22,4 ± 1,3 года) в фазе обострения и клинико-эндоскопической ремиссии. Уровни TGFβ1 определяли с помощью диагностических тест-систем фирмы «Bender MedSystems». Результаты и обсуждение. Установлены достоверные различия профилей TGFβ1 у лиц с язвенной (89,3 ± 2,1 пг/мл) патологией в сравнении с эрозивной (65,6 ± 2,8 пг/мл), что подтверждает установленную ранее лишь повышенную ак тивность метаболизма коллагенсодержащих структур соединительной ткани при язвенном дефекте. При этом уровни TGFβ1 были достоверно более низкими (в 3,1 раза) у обследу емых в фазе клинико-эндоскопической ремиссии, отражающей снижение активности фибрилло- и коллагеногенеза. Таким образом, профили TGFβ1 характеризущие активность иммуновоспалительных процессов, позволяют считать, что основным фактором иммунопатогенеза у данной категории больных лежит повышенная TGFβ1-активность, что может являться следствием дефицита фибрилллина-1, мутации которого определяют фенотипические проявления ряда на следственных расстройств соединительной ткани, что и является следствием хронизации эрозивно-язвенных процессов. Полиморфизм гена IL6 у больных В-клеточными опухолями лимфатической системы Е.Л. Назарова, В.Т. Демьянова, В.И. Шардаков, Т.П. Загоскина, Е.Н. Зотина ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России», Киров Ген IL6 человека расположен на 7 хромосоме и состоит из 4 экзонов и 5 интронов [Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., 2008]. Полиморфизм C-174G промоторной области гена IL6 приводит к функциональным изменениям, которые затрагивают транскрипцию гена и, соответственно, уровень IL-6 в сыворотке крови. IL-6 рассматривается как ключевой цитокин, с одной стороны, принимающий участие в развитии В-клеточных опухолей лимфатической системы (В-ОЛС), с другой — Ы ВОСПАЛЕНИЕ 112 Том 13 № 1 2014 Тезисы являющийся прогностическим маркером клинического течения этих заболеваний. Цель настоящего исследования состояла в оценке частоты распространения различных генотипов IL6 (C-174G) и уста новлении их связи с сывороточным уровнем IL-6 с учетом пола и возраста больных В-ОЛС. Обследованы две группы: 100 больных В-ОЛС и 30 здоровых лиц (группа сравнения), сопоставимых по гендерным и возрастным характеристикам. Геномное тестирование полиморфного участка гена IL6 проводили методом полимераз ной цепной реакции с аллель-специфичными праймерами и электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле. Концентрацию IL-6 определяли твердофазным иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест-систем. Для статистической обработки результатов использовали пакет программ «Statistica V.12» и «MS Office Excel 2003». Cтатистически значимыми считали различия при p < 0,05. Установлено, что у больных В-ОЛС, в целом, генотип GG гена IL6 встречался чаще, чем у здоровых лиц (26,0 vs 16,6 %, χ2 = 7,71, р = 0,0212; OR = 1,63; p < 0,05). Причем данная особенность наблюдалась только у мужчин (17,0 vs 9,9 %, χ2 = 6,53, р = 0,0387; OR = 1,68, p < 0,05). У женщин выявленные частоты генотипов гена IL6 (C-174G) не отличались от таковых в груп пе сравнения. Присутствие аллеля G в гетерозиготном состоянии данного гена в общей когорте пациентов с В-ОЛС было ассоциировано с более низким сывороточным уровнем IL-6 по сравнению с генотипом СС (Ме — 0,05 пг/мл vs 5,6 пг/мл, р = 0,0488), а у женщин — по сравнению с генотипом GG (Ме — 0 пг/мл vs 12 пг/мл, р = 0,0488). Таким образом, у больных В-клеточных опухолей лимфатической системы при носительстве генотипа GG гена IL6 (С-174G) риск развития данной группы гемобластозов выше, чем средний риск их возникновения в популяции. Причем отмечаются гендерные различия в частоте наблюдаемых генотипов исследованного гена. Присутствие мутантного аллеля G в гомозиготном или гетерозиготном состоянии корре лировало с уровнем секреции конечного продукта IL-6, приводя или к росту его сывороточной концентрации или к про дукции в минимально определяемом уровне. тодом проточной цитометрии. Контроль — 20 здоровых детей. Для уточнения дифференцированности влияний комбиниро ванной интерфероно- и иммунотерапии дети рандомизированы на 2 группы. 1-я группа получала: а) для коррекции интер феронового статуса — базисную системную и локальную терапию рекомбинантным α2 (вифероном) в течение 2,5 мес.; б) для элиминации герпесвирусов — инозин пранобекс (изопринозин) курсами. 2-я группа получала дополнительно для коррекции нарушений НГ глюкозоаминилмурамилдипептид (ликопид). Под влиянием комбинированной интерфероно- и иммунотерапии выявлено ремоделирование трансформиро ванного фенотипа НГ. В 1-й группе детей после лечения фено тип НГ характеризовался снижением CD64+НГ %, увеличением плотности экспрессии (MFI) CD16 и CD11b на мембране НГ. Во 2-й группе детей после лечения выявлено снижение CD64+НГ %, увеличение MFI CD16, снижение MFI CD32 и восстановление экспрессии CD11b. Достоверность отличий между 1-й и 2-й группами была по MFI CD32 (р < 0,05) и MFI CD11b (р < 0,05). У 1/3 детей сниженная экспрессия СD32 после лечения не восстановилась, что свидетельствует о возможном дефекте экспрессии СD32. Вероятно, при наличии дефектного функционирования CD32+НГ увеличение экспрессии CD16 и CD11b после лечения возникает компенсаторно и необходимо для осуществления фагоцитарной реакции и элиминации персистирующих патогенов. Учитывая то, что во 2-й группе детей нами ранее установлено более значимое улучшение киллинговой и переваривающей активности нейтрофильных гранулоцитов при наличии позитивных клинических эффектов по сравнению с 1-й группой детей, снижение до уровня здоровых экспрессии CD11b свидетельствует о су щественном восстановлении функционирования нейтрофильных гранулоцитов и уменьшении вирусной нагрузки. Влияние зрелых дендритных клеток, праймированных лизатом опухолевых клеток, больных раком яичника и IL-12 с IL-18 на стимуляцию цитотоксической активности мононуклеарных клеток in vitro И.А. Облеухова 1, В.В. Курилин 1, М.А. Гончаров 2, А.В. Тархов 2, С.Э. Красильников 3, С.В. Сенников 1 1 ФГБУ «НИИ клинической иммунологии» СО РАМН, г. Новосибирск; ГБУЗ города Новосибирска «Городская клиническая больница № 1»; 3 ГБУЗ НСО «Новосибирский областной онкологический диспансер», г. Новосибирск 2 Динамика изменений фенотипа и функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у иммунокомпрометированных детей с повторными ОРВИ, ассоциированными с герпесвирусными инфекциями, на фоне комбинированной интерфероно- и иммунотерапии И.В. Нестерова 1, С.В. Ковалева 2, Г.А. Чудилова 2, Л.В. Ломтатидзе 2, Е.И. Клещенко 2, О.Н. Шинкарева 2 ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов», г. Москва; ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Краснодар 1 2 Реабилитация детей с повторными острыми респираторными заболеваниями (ОРВИ) имеет ряд сложностей в связи с тем, что не всегда удается достичь позитивных клинико-иммунологических параллелей у иммунокомпрометированных детей, так называемого «трудного» контингента. Известно, что функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов (НГ), в частности, их вирусоцидная активность, находится в непосредственной зависимости от фенотипических особен ностей. Цель — выявление изменений фенотипа и функциональной активности НГ у детей с повторными ОРВИ, ассоции рованными с герпесвирусными инфекциями, на фоне комбинированной интерфероно- и иммунотерапии. Обследованы 27 детей 5–8 лет (14 мальчиков и 13 девочек) с высокой степенью частоты повторных ОРВИ, ассоциированных с рецидивирующими и/или персистирующими моно- и микст-герпес вирусными инфекциями (ВПГ-1, -2, ВЭБ, ЦМВ, ВГЧ 6), вне периода острых клинических проявлений. Исследован фенотип НГ периферической крови (CD11b, CD64, CD32, CD16) ме- Наряду с консервативным лечением рака яичников, который занимает первое место по частоте встречаемости среди гинекологических злокачественных опухолей, специфическая иммунотерапия является современным и перспективным способом лечения данной патологии. Одним из направлений иммунотерапии онкологических заболеваний является разработка клеточных технологий иммунотерапии, основанной на использовании дендритных клеток (ДК). Цель данного исследования заключалась в оценке эффективности индукции цитотоксической активности in vitro (в культуре мононуклеарных клеток) при использовании ДК и аутологичных опухолевых антигенов больных эпителиальным раком яичника. Материалы и методы. В работе использовали периферическую венозную кровь и биопсийный материал опухоли, полученный во время проведения операции по поводу удаления первичного очага опухоли у 27 больных раком яичника в возрасте 25–80 лет (средний возраст — 56,3 года). ДК получали методом адгезии на пластике. Дифференцировку моноцитов в незрелые ДК осуществляли под действием рчGM-CSF и рчIL-4 при концентрации клеток 1 млн/мл в течение 48 ч. Для получения праймированных лизатом ДК спустя 48 ч культивирования к незрелым ДК добавлялся опухолевый лизат (лизат аутологичных опухолевых клеток). В качестве фактора созревания через 24 ч вносили рчTNFα. Спустя сутки полу ченные ДК культивировали на протяжении пяти суток с неприлипшей фракцией МНК в соотношении 1:10 с добавлением рчIL-12 и рчIL-18. Эффективность индукции оценивали по цитотоксической активности МНК против аутологичных опу- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 113 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы холевых клеток, продукции IFNγ, IL-4 и количеству перфорин, гранзим В-содержащих лимфоцитов как общей популяции, так и среди CD8+-клеток. Результаты и обсуждение. Показана способность ДК, прай мированных лизатом опухолевых клеток, повышать цитоток сическую активность МНК в 2,2 раза по сравнению с конт рольной группой, где применялись ДК, не праймированные лизатом, увеличивать количество перфорин-позитивных лимфоцитов, и повышать уровень продукции IFNγ. Применение рекомбинантных цитокинов рчIL-12 совместно с рчIL-18 при сокультивировании мононуклеарных клеток больных раком яичника с дендритными клетками, нагруженными опухолевым лизатом, приводит к повышению цитотоксической активности, накоплению перфорина, гранзима В-лимфоцитами как общей популяции, так и CD8+-клетками, увеличению уровня продукции IFNγ в совместной культуре МНК и дендритными клетками, что свидетельствует об адъювантной роли используемых совместно рчIL-12 и рчIL-18 в формировании клеточных иммунных реакций in vitro. Изучение спектра цитокинов, индуцированных антигенами холерного вибриона, и их влияния на апоптогенную активность Н.Д. Омельченко, И.А. Иванова, А.К. Киселева, И.А. Беспалова, Е.П. Дорошенко, Л.В. Судьина, А.В. Филиппенко, Б.Н. Мишанькин Ростовский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону Цитокины, являясь частью сложнейшей цепи взаимосвязанных сигналов, регулируют продолжительность и амплитуду иммунного ответа, воспалительных реакций и поддерживают внутренний гомеостаз, в том числе и иммунологический. Они играют ключевую роль в регуляции всех иммунологических реакций, в том числе апоптотического процесса (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995; Потапнев М.П., 2002; Cox G., Austin R.C., 1997). Целью работы являлось изучение способности наиболее значимых антигенов холерного вибриона — холерного токсина (ХТ) и липополисахарида (ЛПС) индуцировать синтез ци токинов, регулирующих апоптоз. Выявление цитокинов осуществляли с помощью моноклональных антител к различным цитокинам («Pharmingen», USA; «Caltag», Canada). Проведенные исследования показали, что оба антигена индуцируют синтез IL-4, 5 и 6, характерных для Th2-типа иммунного ответа. ХТ, будучи суперантигеном, вызывает также секрецию TNFα и IL-1, не свойственных для этого типа иммунного ответа, что вызывает неадекватный иммунный процесс и формирование иммунопатологических реакций. ЛПС холерного вибриона индуцирует похожий с ХТ спектр цитокинов, но уровень их существенно выше, особенно у TNFα, IL-1 и IL-6, что вполне объяснимо, так как ЛПС всех грамотрицательных бактерий является самым мощным индуктором цитокинов. Установлено также, что ХТ in vivo ингибирует продукцию IL-2, обычно защищающего активированные клетки от выбора ими пути программированной гибели, что индуцирует так называемый «пассивный апоптоз», или «апоптоз по умолчанию», свойственный клеткам с высоким уровнем диффе ренциации. Снижение уровня синтеза IL-2 усугубляется тем, что одновременно наблюдается практически полное подавление рецепции IL-2 иммунокомпетентными клетками у животных, иммунизированных ХТ. Представленные результаты позволяют предположить, что способностью ЛПС и ХТ индуцировать синтез TNFα и IL-6 может быть обусловлен апоптогенный эффект этих анти генов. Апоптотическая активность ХТ может быть опосредована также вызываемой им блокадой синтеза IL-2. Что касается других цитокинов, синтез которых запускается холерный токсин и липополисахарида, то они могут в одних случаях выступать в роли защитников клетки от апоптоза, а в других — индуцировать его. Положительный эффект активации имеет место в тех случаях, когда клетка обеспечена всеми необходимыми для ее пролиферации и дифференцировки Ц И Т О иК И Н медиаторами и рецепторами. В случае отсутствия какого-нибудь сигнала или рецептора наступает апоптоз, как, например, при блокаде IL-2 и его рецепции. Цитокиновый профиль и уровень эритропоэтина в крови больных хронической почечной недостаточностью, находившихся на программном гемодиализе М.В. Осиков, Л.Ф. Телешева, Ю.И. Агеев ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск У больных хронической почечной недостаточностью (ХПН) весомую позицию в структуре осложнений и причин смертности занимают заболевания инфекционно-воспалительной природы и сердечно-сосудистые заболевания, ведущим фактором патогенеза которых выступает дисфункция иммунной системы. Изменение активности эффекторов врожденного и адаптивного иммунитета может быть связано с цитокиновым профилем и уровнем эритропоэтина (ЭПО) в сыворотке. Цель работы — исследование уровней некоторых цитокинов и ЭПО в крови у больных ХПН, находящихся на гемо диализе. Материалы и методы. После рандомизации в исследование включены 37 больных ХПН, находившихся на лечении в от делении диализа ГБУЗ Челябинская областная клиническая больница. От всех больных получено письменное информированное согласие. Группа контроля — 20 клинически здоровых добровольцев. В периферической крови до и после процедуры гемодиализа определяли уровни интерлейкина (IL)-1β, IL-2, IL-4, IL-10, интерферона гамма (IFNγ), фактор некроза опухолей (TNFα), ЭПО на планшетном фотометре «Personal lab» (Италия) при длине волны 450 нм с применением тестсистем фирмы «Вектор-Бест» (Новосибирская область). Результаты и обсуждение. Установлено, что у больных ХПН до процедуры гемодиализа значимо при сравнении с конт рольной группой изменяется концентрация в сыворотке IL-1β (4,82 ± 0,96 пг/мл; в контроле 2,41 ± 0,26 пг/мл; р < 0,05), IL-2 (3,53 ± 0,44 пг/мл; в контроле — 2,40 ± 0,15 пг/мл; р < 0,01), IFNγ (14,76 ± 1,28 пг/мл; в контроле — 10,06 ± 0,63 пг/мл; р < 0,001), TNFα (4,36 ± 0,48; в контроле — 1,40 ± 0,12 пг/мл; р < 0,001). Уровни IL-4, IL-10, ЭПО не имеют статистически значимых отличий от группы контроля. Следует отметить, что, несмотря на значимость различий с контрольной группой, концентрация IL-1β не выходит за пределы диапазона референсных зна чений для этого показателя; это позволяет учитывать только повышение IL-2, IFNγ, TNFα в сыворотке у больных ХПН. Процедура гемодиализа не оказывает значимого влияния на уровень исследуемых цитокинов и ЭПО в сыворотке, концентрации IL-2, IFNγ и TNFα остаются повышенными. Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать повышение продукции у больных ХПН провоспалительных цитокинов (TNFα, IFNγ), что может являться следствием и/или причиной активации фагоцитов в периферической крови, эскалации окислительного стресса, деструкции тканей, инициа ции и прогрессирования атеросклеротического процесса, а также фактором активации гибели клеток крови, в частности эффекторов адаптивного иммунитета, и изменения их количе ственного представительства в крови. Повышение концентра ции IL-2 в сыворотке у больных хронической почечной недостаточностью может рассматриваться как компенсаторный ответ организма на дефицит Т-клеточного звена иммунитета. Синтез цитокинов при гриппозной инфекции и эффект этиотропных противовирусных препаратов Т.П. Оспельникова 1, А.В. Слита 2, В.В. Полосков 1, С.А. Андреева 1 1 ФГБУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, г. Москва; 2 ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург Цель работы — исследование синтеза провоспалительных цитокинов после предобработки противовирусными препаратами инфицированных вирусом гриппа клеток ТНР1. Ы ВОСПАЛЕНИЕ 114 Том 13 № 1 2014 Тезисы Культура клеток. Использована суспензионная культура лимфобластоидных клеток ТНР1 (моноциты перифериче ской крови годовалого мальчика с острой моноцитарной лейкемией; получена из коллекции клеточных культур ФГБУ «НИИ гриппа»). Вирус гриппа A/Puerto Rico/8/1934 (H1N1) получен из коллекции вирусов ФГБУ «НИИ гриппа». Препараты: ридостин, кагоцел, циклоферон и ингавирин. Препараты вносили в неинфицированную культуру по профилактической схеме (за 2 ч до заражения вирусом). Пробы надосадочной жидкости собирали по мере роста клеток. С помощью наборов фирмы «Вектор-Бест», согласно инструкции, в супернатантах определяли цитокины IL-1β, TNFα, IFNγ. Количественное измерение оптической плотности и рас чет концентраций (пг/мл) выполнены на фотометре модели «Аnthos 2010» в программе ADAP+ (ЗАО «БиоХимМак», Россия). Синтез цитокинов оценивали в: 1) незараженных клетках (контроль); 2) клетках, зараженных вирусом; 3) незаражен ных клетках, обработанных противовирусными препаратами; 4) зараженных клетках, обработанных противовирусными препаратами перед заражением. Показано, что после инфицирования отмечается снижение в клетках выработки IL-1β в течение первого часа, однако, в последующем уровень этого регуляторного цитокина увеличивается. При синтезе IL-1β активируются 2 принципиально важных механизма регуляции клеточных сигнальных путей: транскрипционный фактор NF-κB и внутриклеточные белки, запуская синтез цитокинов. В зараженных клетках значительно снижается продукция IFNγ в течение первого часа контакта с вирусом, незначительное снижение сохраняется в течение 24 ч. Воздействие вируса на культуру клеток ТНР1 сопровождалось резким снижением синтеза TNFα в течение первого часа, с постепенным нарастанием содержания цитокина к 24-м часам. При профилактическом применении противовирусные препараты оказывают неоднозначное влияние на синтез цитокинов. Использованные препараты значительно увеличивали уровни TNFα, IL-1β и IFNγ, за исключением циклоферона, снижавшего синтез IFNγ в клетках ТНР1. Таким образом, у эффективных в клинике препаратов од ним из возможных механизмов действия может быть влияние на синтез цитокинов. Полиморфизм кластера генов IL-6 у больных множественной миеломой А.А. Павлова, Ю.В. Соколова, Л.Н. Бубнова, С.С. Бессмельцев, И.Е. Павлова ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии» ФМБА России, Санкт-Петербург Множественная миелома (ММ) — системная В-клеточная опухоль низкой степени злокачественности с сохраненной способностью к дифференциации от В-лимфоцита-предшественника до анаплазированной плазматической клетки. В патогенезе ММ задействован широкий спектр цитокинов: IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, TNF и др. Одним из основных цитокинов, стимулирующих пролиферацию злокачественных плазматических клеток при ММ, является IL-6. Установлена корреля тивная связь между уровнем IL-6, пролиферацией плазматических клеток и тяжестью течения заболевания. Кроме того, IL-6 — остеокласт-активирующий фактор, участвующий в поражении костной ткани при ММ. Учитывая, что одиночные нуклеотидные полиморфные варианты (SNP) в промоторной области генов цитокинов могут влиять на скорость их секре ции и биологическую активность, можно предположить, что изучение аллельных вариантов гена IL-6 позволит установить новые генетические факторы, определяющие развитие и прогноз течения множественной миеломы. В настоящей работе исследовали SNP промоторных регио нов гена IL6 (IL6 -174 G/C; IL6 nt565 G/A) у 25 больных ММ и у 40 здоровых лиц, являвшихся донорами крови, считавших себя и своих родителей русскими и не связанных кровным род- ством (контрольная группа), проживавших в Северо-Западном регионе России. Геномную ДНК выделяли из ядросодержащих клеток периферической крови с помощью коммерческого набора BOX 500 (Protrans); генотипирование проводили по средством PCR-SSP с использованием коммерческого набора «Cytokine genotyping Kit» (Invitrogen). Отклонения от распределения закона Харди — Вайнберга были рассчитаны методом хи-квадрат с поправкой Йейтса с помощью GraphPad QuickCalcs, значения при p < 0,05 считали статистически зна чимыми. Частоты генотипов в обследованных группах лиц со ответствовали равновесию Харди — Вайнберга. Полученные результаты позволили установить существенные различия между группой больных и контролем: для IL6 -174 частота аллелей G и С в контрольной группе — 0,470 и 0,530; тогда как в группе больных ММ частота аллеля G -0,660 существенно превалировала над частотой и аллеля C -0,340 (p < 0,05). Различия были выявлены и для IL6nt565 — частота аллелей G (0,520) и А (0,480) в контрольной группе прибли зительно одинакова, тогда как у больных ММ аллель G (0,680) выявлялся в 2 раза чаще аллеля А (0,320) (p < 0,05). Распределение генотипов в обследованных группах лиц оказалось следующим: IL6-174 G/C — 0,125 (GG), 0,700 (GC), 0,175 (CC) в контрольной группе и 0,520 (GG), 0,280 (GC), 0,200 (CC) у больных ММ; IL6nt565 G/A — у здоровых — 0,125 (GG), 0,800 (GA), 0,075 (AA); у больных — 0,520 (GG), 0,320 (GA), 0,160 (AA) (p < 0,05). Полученные в этой работе данные могут служить для дальнейших исследований роли полиморфизма кластера генов IL6 в патогенезе множественной миеломы, а также для определения их роли в развитии поражения костной ткани при этом заболевании. Уровень TNFα у пациентов с сенсоневральной тугоухостью Н.Н. Петрова, В.Н. Перевозчикова, Ю.А. Маслова ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург Введение. Актуальность исследования цитокинового про филя пациентов с сенсоневральной тугоухостью (СНТ) обус ловлена с одной стороны, значительной частотой этой патологии (Золотова Т.В., Панченко С.Н., 2010, Петрова Н.Н., 2010, и др.), и с другой — развитием современной концепции апоптоза как запрограммированной гибели клеток, контролируемой рядом сигнальных молекул. В литературе последних лет встречается все больше сообщений о том, что именно апоптоз является причиной гибели клеток спирального органа как при острой, так и при хронической СНТ вне зависимости от воздействующего фактора. Апоптоз представляет собой особый тип гибели клеток, при котором происходит ее самоуничтожение. Показано, что роль сигнальных молекул в этом процессе выполняют различные цитокины, в том числе фактор некроза опухолей (TNFα). Цель работы — изучение уровня TNFα в сыворотке крови пациентов, страдавших острой СНТ. Материалы и методы. Под наблюдением находились 60 па циентов, которые были разделены на 2 группы: основная (36 человек с диагнозом острая СНТ) и контрольная (24 отологически здоровых человека). Критерием исключения из исследо вания было наличие любых острых или обострения хрониче ских заболеваний. Средний возраст в основной группе составил 43,6 ± 5,6 года, в группе контроля 44 ± 8,5 года. В сыворотке крови пациентов, взятой натощак в утренние часы методом ИФА (тест-система ООО «Цитокин») определяли содержание TNFα, анализировали полученные результаты и сравнивали их с контрольной группой. Результаты и обсуждение. Уровень TNFα в сыворотке крови здоровых обследуемых составил 3,8 ± 1,4 пг/мл. У пациентов основной группы среднее значение исследуемого показателя составило 12,2 ± 4,2 пг/мл, что значительно (в 3,2 раза) пре вышало таковые у здоровых лиц. Высокий уровень исследуемого цитокина в крови, вероятно, может служить одной из Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 115 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы причин апоптоза клеток спирального органа, т. к. известно, что при воздействии TNFα на специфические клеточные рецепторы запускается сложная каскадная реакция, завершающаяся уничтожением клетки. Таким образом, для пациентов с острой сенсоневральной тугоухостью характерны изменения в цитокиновом профиле вне зависимости от степени тяжести заболевания и этиологического фактора. Эти изменения проявляются увеличением концентрации TNFα в сыворотке крови, что может рассматриваться как важное звено патогенетического механизма разви тия тугоухости. Содержание IL-6, IL-10 и C-реактивного белка при остром отравлении наркотиками тяжелой степени Л.П. Пивоварова, М.Е. Малышев, В.А. Лукин, О.Б. Арискина, И.В. Осипова, Т.Г. Хабирова ГБУ СПбНИИ СП имени И.И. Джанелидзе, Санкт-Петербург Актуальность. Смешанная гипоксия развивается при критических состояниях: шоке различной этиологии, острых экзогенных отравлениях, тяжелом сепсисе. Тяжелые острые отравления сопровождаются развитием гипоксической гипоксии вследствие нарушения внешнего дыхания, циркуля торной гипоксии — в результате расстройств общего и регио нарного кровообращения, микроциркуляции, и тканевой гипоксии, связанной с нарушениями кислотно-основного состояния, прямым угнетающим влиянием ядов на дыхательные ферменты. Цель исследования — исследование содержания IL-6, IL-10, C-реактивного белка (CRP) в крови пациентов с острыми отравлениями наркотиками в зависимости от тяжести гипоксии. Материалы и методы. Обследовали 60 человек с острыми отравлениями наркотическими веществами (ООНВ) опийной группы и комой II cтепени в возрасте 24,5 ± 5,1 лет; из них 29 человек умерли (49 %) на 4–7-е сутки после отравления. Уровень сознания по шкале комы Глазго: у выживших пациентов 6–8 баллов, у умерших — 5–7 баллов. Группу сравнения составили 35 здоровых волонтеров в возрасте 35,8 ± 5,9 года. Кровь для исследований забирали при поступлении па циентов в реанимационное отделение Городского центра по лечению острых отравлений и через 24 ч. Концентрации цитокинов IL-6, IL-10 в сыворотке крови определяли методом ИФА («Bender Systems», Austria), CRP — методом латексной агглютинации («Human», Germany). Степень гипоксии у пострадавших оценивали по уровню РаО2 в артериальной крови. Статистическая обработка результатов исследования проведена с использованием прикладных компьютерных программ «Statistica 6.0». Результаты и обсуждение. У всех пациентов с ООНВ при поступлении в стационар наблюдали нарушение уровня сознания (кома II степени), развитие смешанной гипоксии (РаО2= 60–75 мм рт. ст.). Одновременно у всех пациентов отмечали повышение содержания IL-6 (в 5–34 раз у выживших и в 50–100 раз у умерших), IL-10 (в 5–25 раз у выживших и в 80–400 раз — у умерших) и CRP (в 5–10 раз у выживших и в 5–20 раз у умерших). Через 24 ч у выживших пациентов наблюдали восстановление сознания до уровня 10–12 баллов по шкале Глазго, тогда как у пациентов с летальным исходом уровень нарушения сознания сохранялся. Также у умерших пациентов сохранялся уровень гипоксии, в то время как у выживших больных наблюдали постепенное восстановление напряжения кислорода в крови до 80–95 мм рт. ст. У пациентов обеих групп содержание IL-6 и IL-10 в крови в течение суток снижалось до уровня, в 2–5 раз превышающего норму. Содержание CRP в крови в течение одних суток после отравления повышалось в 3–40 раз. Выявлена корреляционная за висимость содержания IL-6 (r =–0,44) и CRP (r = 0,42) от уровня РаО2 в артериальной крови. Таким образом, острое отрав ление веществами опийной группы тяжелой степени характеризуется развитием гипоксии смешанного типа и системного воспаления. Маркерами системного воспаления являются высокие уровни в крови IL-6, IL-10, C-реактивного белка. Ц И Т О иК И Н Уровни IL-6, IL-10, IL-18 и C-реактивного белка в крови пострадавших с сочетанной травмой в зависимости от тяжести шока и исхода Л.П. Пивоварова, М.Е. Малышев, И.В. Осипова, О.Б. Арискина ГБУ СПбНИИ СП имени И.И. Джанелидзе, Санкт-Петербург Актуальность. Одной из основных причин летальных исходов у пострадавших с сочетанной травмой (СТ) является развитие тяжелого сепсиса, ассоциированного с повреждением тканей, инфекцией, генерализацией воспаления и полиорганной недостаточностью. Патогенетической основой этого про цесса является стадийная активация клеток крови и других тканей, секретирующих различные биологически активные вещества (Гусев Е.Ю. и др., 2007; Багненко С.Ф. и др., 2012), обусловливающие нарушение целостности гистогематических барьеров и развитие системного воспаления. Актуальность исследования обусловлена необходимостью поиска ранних мар керов развития тяжелого сепсиса при сочетанной травме. Цель — исследование содержания цитокинов и C-реак тивного белка (CRP) в крови пострадавших с сочетанной травмой различной степени тяжести и различным исходом. Материалы и методы. Обследовали 88 пострадавших с СТ (63 мужчины, 25 женщин; средний возраст — 34,8 (28,5; 43,5) года, из них 46 человек с шоком II степени, 42 человека с шоком III степени, из которых 13 и 45 % пострадавших с летальным исходом, соответственно. Тяжесть повреждения тканей пострадавших при поступлении оценивали по шкале Injury Severity Scale (ISS). Группу сравнения составили 35 здоровых волонтеров (средний возраст — 35,5 (28,3; 39,8) года. Из исследования исключали пострадавших с травмой, несовместимой с жизнью, и умерших в первые 48 ч после инцидента, а также пациентов с тяжелым ушибом головного мозга, гепати тами В и С, ВИЧ, эндокринными и аутоиммунными заболевания. Кровь для исследований забирали при поступлении пациентов в противошоковую операционную и через 24 ч после травмы. Концентрацию цитокинов IL-6, IL-10, IL-18 в сыворотке крови определяли методом ИФА («Bender Systems», Austria), CRP — полуколичественным методом латексной агглютинации («Human», Germany). Прогностическую ценность содержания цитокинов для прогноза тяжелого сепсиса оценивали с помощью анализа ROC кривых. Результаты и обсуждение. У всех пострадавших при поступлении содержание IL-6 возрастало в 20–50 раз по сравнению с нормой. (5; 2,7; 6,0 пг/мл), причем у умерших пострадавших этот показатель был в 1,5 раза выше, чем у выживших и достигал 253 пг/мл. Содержание IL-10 возрастало в 14–94 раза по сравнению с нормой (2,5; 2,0; 4,1 пг/мл) и в группе умерших пострадавших было в 6,7 раза выше, чем у выживших. Содержание IL-18 возрастало в 1,7–5,3 раза (норма — 99; 89; 121 пг/мл), у умерших пострадавших — двукратное повышение показателя (до 524 пг/мл) по сравнению с выжившими. Содержание CRP в крови возрастало только через сутки после поступления и было наиболее высоким у умерших пациентов с шоком III (96 мг/л). При поступлении количество баллов ISS положительно коррелировало с содержанием IL-6 (r = 0,42) и IL-10 (r = 0,47). С помощью анализа ROC кривых выявили прогностическую значимость для исхода тяжелой травмы содержания в крови IL-10 (r =0 ,46) при поступлении и CRP — через сутки после травмы. Таким образом, содержание IL-6 и IL-10 в крови пострадавших с сочетанной травмой в момент поступления отражает тяжесть травмы, свидетельствует о развитии системного воспаления и позволяет прогно зировать исход. Целесообразность использования ингарона в адъювантной химиотерапии больных аденокарциномой легкого С.А. Пыльцин, Е.Ю. Златник, С.А. Зинькович, Г.И. Закора ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский институт» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону IFNγ продуцируется активированными Т- и NК-лимфоцитами и обладает выраженными антипролиферативными свой- Ы ВОСПАЛЕНИЕ 116 Том 13 № 1 2014 Тезисы ствами. На его основе разработан рекомбинантный препарат ингарон, применяемый при ряде злокачественных опухолей. В связи с высокой заболеваемостью и тяжелым течением аденокарциномы легкого, проблема ее комплексного лечения, в частности, с использованием иммунотропных препаратов, является актуальной. Целью данной работы явилась оценка динамики иммунного статуса и клинической эффективности при применении ингарона в курсе адъювантной химиотерапии больных адено карциномой легкого. Под наблюдением находились 63 больных в возрасте 40–70 лет, прооперированные по поводу аденокарциномы легкого, стадии I–IIIA. В послеоперационном периоде больные основной группы (n = 33) получали 3 курса химиотерапии карбоплатином и этопозидом с включением ингарона в разовой дозе 500 тыс. МЕ/м2 во 2-й, 4-й и 6-й дни каждого курса; больные контрольной группы (n = 30) — аналогичную химиотерапию без ингарона. Оценку иммунного статуса проводили до начала адъювантной химиотерапии (через 21 день после операции) и через 3–5 дней после окончания каждого курса. В крови больных определяли процентное и абсолютное содержание лимфоцитов различных субпопуляций (CD2+, CD4+, CD8+, CD16+, CD56+, CD20+) с помощью непрямого иммунофлуоресцентного метода. Исходный иммунный статус больных основной и контрольной групп характеризовался угнетением клеточных факторов иммунитета: статистически значимым снижением содержания Т-лимфоцитов за счет СD4+-клеток, уровня NК-клеток; повышением процента СD8+-клеток; уровень В-лимфоцитов был в пределах нормы. В динамике лечения положительные изменения показателей иммунного статуса происходили толь ко у больных, получавших ингарон: у них отмечено повышение количества СD4+- и СD16+-клеток, статистически достоверное после 2–3-х курсов. Напротив, у больных контрольной группы наблюдалось 2,5–3-кратное снижение всех параметров клеточного иммунитета, выраженных в абсолютных значениях, которые были статистически достоверно ниже, чем в основной группе. После каждого курса отмеченные различия нарастали. Клинические наблюдения показали хорошую переносимость курсов адъювантного лечения с ингароном. В основной группе 3-х летняя бессобытийная выживаемость составила 84 против 65 % в контрольной группе (p = 0,066), т. е. выявлена выраженная тенденция к улучшению показателей бессобытийной выживаемости на 19 %. Итак, радикальное удаление аденокарциномы легкого даже при благополучном течении послеоперационного периода не приводит к коррекции вторичной иммунной недостаточности, проведение адъювантной химиотерапии вызывает ее углубление, а применение ингарона в комплексном лечении способствует коррекции иммунного статуса и повышению бес событийной продолжительности жизни. М-CSF и риск развития сердечно-сосудистых осложнений у больных эссенциальной артериальной гипертензией О.А. Радаева ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева», г. Саранск В ряде исследований показано, что анализ только признанных факторов, влияющих на развития осложнений при эссенциальной артериальной гипертензии (ЭАГ), составляет 50 % вероятности повышения рассчитанного риска. Обосновывается поиск новых значимых маркеров, определяющих прогрессирование заболевания. Цель исследования — оценка предикторной информативности изменения уровня М-CSF в отношении проградиентного течения ЭАГ. Материалы и методы. В течение 5 лет проводили комплекс ное (клинико-биохимическое, иммунологическое, инструментальное) обследование 100 женщин и 100 мужчин с ЭАГ II стадии, в последние два года определяли уровень М-CSF. М-CSF, VEGF-A иммуноферментным методом. Группу срав нения составили 100 относительно здоровых лиц. Результаты и обсуждение. У больных ЭАГ средний уровень М-CSF составил 389 (91,6) пг/мл, что достоверно выше при сравнении с контролем 190 (44) пг/мл (р < 0,01). На фоне приема ингибитора ангиотензин-превращающего фермента показатель был ниже, чем у пациентов, не принимавших гипотен зивные препараты или использовавших комбинации с β-адреноблокаторами (р < 0,01). У пациентов с наиболее выраженным повышением (IV квартиль изменения показателя — более 450 пг/мл), так же как и у лиц I квартиля (менее 310 пг/мл) только в 3 случаях из 50 в течение года развились сердечнососудистые ассоциированные состояния (инфаркт, инсульт и др.). Важно отметить, что наивысшее изменение в 70 % было зафиксировано у женщин и соотносилось с нарастанием сывороточного прогестерона в менопаузальном периоде (r = 0,78, р < 0,01), в первом квартиле регистрировалась обратная гендерная закономерность. Наибольшая частота развития ос ложнений (во II–III квартилях) отмечена у 20 пациентов из 100. Выявлен интервал изменения М-CSF от 310 до 450 пг/мл, соответствовавший выраженному риску развития повреждения органов-мишений на фоне повышенного артериального давления (АД). Логистический регрессионный анализ показал, что уровень М-CSF (зависимая переменная: сердечнососудистые события; независимые: возраст, пол, уровень АД, M-CSF) в данном интервале являлся независимым предиктором прогрессирования заболевания. Возможно, что при выраженном нарастании М-CSF реализуется его VEGF-индуцирующий эффект. Так, у пациентов с ЭАГ при четвертой степени повышения М-CSF без осложнений уровень VEGF-A значительно превышал его количество у больных с повреждением мишеней (р < 0,01). По экспериментальным данным (Tatsuma Okazaki, 2012), M-CSF индуцирует продукцию VEGF с помощью сигнального пути Akt, реализуя ангиогенные и кардио протективные свойства, но данный эффект характеризуется как дозозависимый, что, возможно, является одним из факторов, определяющих выявленные клинические проявления. Таким образом, полученные данные расширяют перспективы дальнейшего изучения M-CSF c целью последующего применения инновационных методов диагностики, лечения и профилактики повреждения органов-мишеней при эссенциальной артериальной гипертензии на уровне цитокиновой регуляции. Работа выполнена при поддержке гранта Президента РФ МК-4454. 2012.7 Моноклональные антитела. Если все так просто, то отчего так сложно? М.Б. Раев ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, г. Пермь Одной из наиболее актуальных проблем современных ис следований в области медико-биологических и биотехнологических наук часто является низкое качество используемых реагентов. Здесь и далее речь идет о качестве моноклональных антител (МА), недостойный уровень которого, с одной стороны, является причиной некорректных, а то и несостоявшихся экспериментальных работ, с другой — сложностью оценить это качество в условиях непрофильных лабораторий. Призыв к пользованию импортными реагентами хотелось бы заменить на призыв к пользованию современными методами производства, адресованный отечественным производителям. Использование в гибридомных технологиях выращивания клеток-продуцентов МА в пластиковых флаконах позволяет получать 0,1–0,2 мг/мл целевых иммуноглобулинов в услови ях достаточно длительного культивирования. При этом весьма велик риск контаминации на фоне низкой производительности. Масштабирование процесса за счет увеличения единичного объема многократно увеличивает этот риск, а увели чение количества единовременно используемых флаконов не может быть бесконечным по вполне понятным причинам. Страдает и экономическая сторона процесса. Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 117 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Технология, предусматривающая применение системы «miniPERM», позволяет существенным образом повысить эф фективность получения антител, в первую очередь, за счет возможности повышения концентрации иммуноглобулинов в среде роста до 1–2 мг/мл и сокращения времени культиви рования до 5 дней. Использование при культивировании клеток гибридомы бессывороточной среды позволяет свести процесс выделения и очистки антител до практически гомогенного состояния к одностадийному способу, предусматривающему однократную хроматографию на аффинном сорбенте, спе цифичном к IgG. Не составляет особого труда грамотно упаковать получаемые реагенты после предписанных процедур оценки качества и квалификации и предусмотреть надлежащие условия хранения и транспортировки. Итак, что же просто, а что — сложно? Просто наладить новое или адаптировать (модернизировать) имеющееся производство моноклонов, а сложно в современном технологическом мире приобрести реагенты достойного качества, по доступной цене, из отечественных источников. А еще странно, почему в условиях неуклонного роста спроса на МА и конъюгаты на их основе отсутствует надежная информация о создаваемых или планируемых к созданию качественных, стабильно надежных реагентов, выпускаемых российскими производителями. Работа выполнена при финансовой поддержке Программы Президиума РАН «Фундаментальные науки — медицине», проект 12-П-4-1004. Анализ цитокинового/хемокинового секретома клеток нейробластомы человека SH-SY5Y при действии липополисахарида Н.Ю. Роговская, Я.А. Дубровский, П.П. Бельтюков, А.С. Радилов, В.Р. Рембовский, В.Н. Бабаков ФГУП «Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России, п. Кузьмоловский, Ленинградская область В нейробиологических исследованиях по изучению нейрональной дифференцировки, метаболизма, нейротоксичности и функций, связанных с нейродегенеративными процессами, широкое распространение получила клеточная линия нейробластомы человека SH-SY5Y. Сепсис, возникающий в резуль тате гиперактивации системы врожденного иммунитета, приводит к массовому продуцированию провоспалительных цитокинов и хемокинов, что вызывает септический шок. Энцефа лопатии часто сопровождают сепсис, поэтому разработка клеточной модели необходима для понимания причин развития энцефалопатий и нейродегенеративных заболеваний. В клеточной модели in vitro для изучения нейровоспаления использовали анализ концентраций ключевых цитокинов и хемокинов в кондиционной среде клеток нейробластомы при действии липополисахарида из Salmonella typhosa (ЛПС). Клетки линии SH-SY5Y (ECACC) культивировали в 6-лу ночном планшете, промывали на следующий день после пассажа, добавляли среду, содержащую ЛПС (10, 100 нг/мл, 1 мкг/мл), и инкубировали 4 дня с ежедневным отбором не больших аликвот кондиционной среды. Концентрации 48 ци токинов, хемокинов и фактора роста в кондиционных средах были проанализированы с использованием многопараметрической иммунофлуоресцентной технологии Luminex xMAP («Bio-Plex 200», «Био-Рад Лаборатории») и наборов «Bio-Plex Pro Human Cytokine 27-plex» и «21-plex» («Био-Рад Лаборатории»). При действии ЛПС в кондиционной среде нейробластомы дозозависимым образом повышались концентрации цитокинов IL-6, IL-8, IL-15, IP-10, MCP-1, RANTES, VEGF. При действии ЛПС также происходила супрессия секреции ряда цитокинов и хемокинов в кондиционной среде по сравнению с контрольными клетками: IL-1α, IL-2, IL-2Rα, IL-3, IL-4, IL-9, IL-10, IL-12, IL-16, IL-17, IL-18, IFNα2, IFNγ, LIF, MCP-3, TRAIL, TNFβ, HGF, GROα, MIG, SCF, CTACK, NGFβ, PDGFββ, SCGFβ, SDF1α, MIF. Изменение концентрации изучаемых белков определяет гуморальную регуляцию воспаления, в том числе и нейро Ц И Т О иК И Н воспаления. Информация о взаимосвязях в цитокиновом профиле, секретируемом нейрональными клетками, может быть полезна для разработки клеточных моделей в области нейроиммунологии, нейротоксикологии и определения патогенеза нейродегенеративных заболеваний. Определение особенностей иммунологических механизмов хронического воспаления у больных бронхиальной астмой Л.В. Рябова ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск Хронический воспалительный процесс, формирующийся на ранних стадиях заболевания, связанный с дисбалансом цитокинов и других биологически активных веществ, приводит к разбалансировке всей иммунной системы. Повторные контакты с аллергенами ведут к развитию реакций поздней фазы хронического воспаления с нарушением соотношения воспалительных и противовоспалительных регуляторных механизмов, которые играют доминирующую роль в поддер жании воспаления. Таким образом, формируется патологи ческий круг. Цель исследования — сравнение уровней спонтанной продукции цитокинов IL-4, IL-10, IFNγ и IL-1β в бронхоальвео лярном лаваже (БАЛ) в группе больных бронхиальной астмой (БА) в период ремиссии со спонтанной продукцией тех же цитокинов в супернатантах цельной крови. Материалы и методы. Были обследованы 30 пациентов БА смешанной формы в период ремиссии в возрасте от 18 до 42 лет (средний возраст — 25 лет). У данной группы больных исследовали спонтанную продукцию IFNγ, IL-1β, IL-4 и IL-10 в супернатантах цельной крови и в бронхоальвеолярном лаваже при помощи тест-систем для иммуноферментного анализа «ИФА-IL1β», «ИФА-IFNγ», «ИФА-IL-4», «ИФА-IL-10» (ООО «Цитокин», Санкт-Петербург). Результаты и обсуждение. На первом этапе исследования был проведен анализ спонтанной продукции цитокинов в супернатантах цельной крови у больных БА легкой степени тяжести в стадии ремиссии. Спонтанная продукция ци токинов была представлена следующим образом: IFNγ — 567 ± 144 пг/мл, IL-1β — 481 ± 81,2 пг/мл, IL-4 — 59,2 ± 3,9 пг/мл, IL-10 — 40,2 ± 6,9 пг/мл. На втором этапе у той же группы больных была проведена диагностическая бронхоскопия с взятием бронхоальвеолярного лаважа. Полученные данные показали, что у всех обследуемых были выявлены признаки нейтрофильно-эозинофильного эндобронхита. Кроме того, в бронхоальвеолярном лаваже представлен также весь спектр исследуемых ранее цитокинов, но только в меньшем объеме. При этом их продукция по концентрации повторяла спонтанную продукцию в супернатанте крови: на первом месте представлен IFNγ — 105 ± 0,11 пг/мл, на втором — IL-1β — 15,9 ± 0,11, затем идет IL-4 — 7,31 ± 1,71 и в наименьшей концентрации определялся IL-10 — 2,71 ± 0,21. Таким образом, проведенное исследование показало, что даже в период клинической ремиссии бронхиальной астмы легкой степени тяжести при нормальных показателях функции внешнего дыхания и отсутствии клинических проявлений у всех больных данной группы были выявлены явления воспалительного эндобронхита нейтрофильно-эозинофильного характера, сочетающегося с дисбалансом про- и противовос палительных цитокинов. Значение лектинзависимого пути активации комплемента при угрожающих преждевременных родах Л.М. Салахова, А.И. Малышкина, Н.Ю. Сотникова, Н.В. Крошкина ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново В настоящее время в иммунологии репродукции обсужда ется проблема участия факторов врожденного иммунитета в Ы ВОСПАЛЕНИЕ 118 Том 13 № 1 2014 Тезисы репродуктивной функции человека. Исследования последних лет показали, что дисфункция факторов врожденного иммунитета, а именно чрезмерная активация системы комплемен та, может привести к прерыванию беременности. Поэтому для процессов репродукции большое значение имеет изучение механизмов регуляции активации системы комплемента. В нор ме клетки плаценты экспрессируют на своей поверхности три комплемент-ингибирующие молекулы: мембранный кофакторный белок (CD46), фактор, ускоряющий диссоциацию (CD55), и протектин (CD59), которые блокируют формирование и функ цию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Данные регуляторные факторы участвуют в контроле центрального звена активации комплемента, связанного с формированием и функционированием С3-конвертаз, а именно, CD46 снижает образование конвертаз C4b2a и C3bBb, а DAF ускоряет диссоциацию C3bBb c освобождением C3b. В связи с этим дефицит регуляторных белков MCP и DAF приводит к обширному отложению С3-компонента комплемента, притоку нейтрофилов и воспалению в развивающейся плаценте. Цель нашего исследования — выявление особенностей экспрессии рецепторов СD46 и CD55 в популяции моноцитов у женщин с угрозой пре рывания беременности в сроке 22–33 недели. Были обследованы 46 беременных женщин с клиническими признаками угрозы невынашивания беременности в сроке 22–33 недели, которые были поделены на 2 подгруппы: 1-ю подгруппу составили женщины, беременность которых завершилась своевременными родами (n = 27), 2-ю — преждевременными (n = 19). В группу контроля были включены 36 практически здоровых бере менных женщин в этом же сроке гестации с отсутствием сим птомов угрожающих преждевременных родов. Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь. Иммуноферментным методом определяли IgG, IgA и IgM к возбудителям урогенитальных инфекций. Экспрессию рецепторов СD46 и CD55 моноцитами периферической крови определяли методом проточной цитофлуориметрии на цитометре «FACSCanto II» (США) с использованием программы «FACSDiva». Анализ полученных нами данных показал, что у женщин в сроке 22–33 недели беременности при развитии угрожающих преждевременных родов уровень CD46- и CD55-позитивных моноцитов в периферической крови был достоверно ниже по сравнению с таковым при неосложненной беременности (p < 0,001 в обоих случаях). Также было выявлено снижение количества CD55+-моноцитов у женщин 2-й подгруппы по сравнению с аналогичными параметрами в 1-й (p < 0,001 и p = 0,03, соответственно). При исследовании инфекционных маркеров достоверных отличий между исследуемыми группами выявлено не было. Таким образом, при угрожающих преждевременных родах в сроке 22–33 недели происходило одновременное снижение экспрессии моноцитами белков CD46 и CD55, регулирующих активацию лектинового пути комплемента. Причем у женщин, беременность которых завершилась преждевременными родами, отмечалось значительное снижение количества CD55+-моноцитов по сравнению с беременными основной группы, родивших в срок. Лечение заболеваний пародонта с использованием беталейкина Н.Г. Саркисян 1, 2, Г.И. Ронь 2, И.А. Тузанкина 1 ФБГУН «Институт иммунологии и физиологии» УрО РАН, Екатеринбург; 2 ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Екатеринбург 1 Актуальность. Разработка новых отечественных лекарственных средств для местного лечения заболеваний пародон та с использованием иммунотропных веществ чрезвычайно важна. Цель работы — создание нового эффективного средства для местного лечения пародонтита с использованием беталейкина. Материалы и методы. В качестве мазевой основы был выбран кремний-органический глицерогидрогель, разработанный в Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН при участии Уральского государственного медицинского университета, который модифицировали добавлением беталейкина. Исследования проводили на белых беспородных мышах массой 30–40 г. Фармакологические исследования проведены на кафедре фармакологии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет». Кремний-органический глицерогидрогель состава Si(C3H7O3)4· 6C3H8O3· 24H2O (патент РФ 2255939, МКИ С07F7/04, А61К47/30, 2005 г.) проявляет высокую транскутанную и противоотечную активность, ранозаживляющий эффект, благоприятно влияет на процессы эпителизации, не токсичен. В предлагаемом средстве беталейкин используют в виде водного раствора, содержащего беталейкин в интервале зна чений (5,00÷10,00) ∙ 10–8 мас. %. Результаты и обсуждение. Качественный и количественный состав компонентов предлагаемого средства, обеспечивающий фармацевтическую и фармакологическую совместимость и, как следствие, высокий лечебный эффект, является результатом проведенных исследований по выявлению синергизма действия всех компонентов средства. Предложенный способ лечения воспалительных заболе ваний полости рта предполагает использование предлагаемо го средства один раз в день курсом 5–7 дней; при этом способ предусматривает возможность инстилляции в пародонтальные карманы при лечении пародонтита. Способ характеризу ется стойкой ремиссией и отсутствием резистентности организма. Выводы. 1. Предложено средство для местного лечения за болеваний кожи, мягких тканей и слизистой оболочки, содер жащее беталейкин на гидрофильной кремний-содержащей основе. 2. На примере заживления раны экспериментальных жи вотных показана выраженная ранозаживляющая и регенерирующая активность разрабатываемых средства. 3. Исследованы показатели эндогенной интоксикации: мо лекулы средней и низкой молекулярной массы. Установлено, что использование разрабатываемого средства способствуют менее выраженной эндогенной интоксикации у экспериментальных животных. Разработка противогриппозных препаратов на основе антисмысловых РНК Е.Н. Свентицкий 1, В.В. Зарубаев 2, А.В. Слита 2, О.И. Киселёв 2 2 1 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург; ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург Благодаря особенностям генетической организации, вирус гриппа способен быстро вырабатывать устойчивость к лекарственным препаратам. Поэтому поиск и разработка противо гриппозных средств возможно более широкого спектра действия является важной задачей. Целью настоящей работы была характеристика противовирусной активности антисмысловых siRNA и оптимизация способа их применения. Материалы и методы. Использовали изготовленные в Главной Исследовательской Лаборатории (GRL, США) синтетические РНК-дуплексы против консервативных участков генов М, NP, PA и РВ2 вируса гриппа в виде монопрепаратов или комбинации друг с другом. Для трансмембранного переноса дуплексов использовали различные синтетические полика тионы. Активность дуплексов оценивали при помощи транс фекции клеточной культуры MDCK комплексами РНК с поликатионным носителем и последующего анализа титра вирусов H1N1, H3N2 и H5N3. Протективную активность комплексов in vivo исследовали на модели летальной гриппозной пневмонии у мышей при внутрибрюшинном (ВБ), интраназальном (ИН) или интратрахеальном (ИТ) применении. Результаты и обсуждение. В опытах in vitro было показано, что из нескольких изученных поликатионов наибольшей трансфекционной активностью, сравнимой с влиянием липофектамина, обладал полиаллиламин (РАА). Из восьми имевшихся дуплексов максимальную антивирусную активность показали siRNA против генов М и РА. Комбинация этих дуплек- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 119 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы сов обладала большей активностью, чем каждый из них в отдельности, при концентрации, равной сумме концентраций в комбинации. Аналогичным образом проявляла себя указанная комбинация дуплексов при инактивации H1N1 in vivo, снижая смертность мышей на 75 % при ВБ введении оптимальных концентраций дуплексов. Такой же результат был достигнут при использовании противогриппозного референс-препарата Тамифлю. При этом максимальная эффективность siRNA проявлялась через 24 ч после инфицирования, менялась в зависимости от подтипов вируса, падала при позднем начале применения, составляя около 25 % от начальной величины через трое суток после заражения животных. ИН и ИТ введение комплексов siRNA с РАА приводило к геморрагическим отекам легких и значительному снижению уровня противовирус ной защиты. Возможно, это связано с деструктивным действием поликатиона в отношении слоя сурфактанта и других компонентов аэрогематического барьера. Таким образом, разработка противовирусных препаратов на основе siRNA является перспективным направлением создания новых высокоэффективных лекарственных средств. При оптимизации лекарственной формы и путей ее введения, дуплексные системы могут стать важным звеном комплексной этиотропной терапии гриппа. Повышение противовирусной активности интерферонов 1-го типа при усилении сигналинга клеточного рецептора Е.Н. Свентицкий, Ю.В. Тяготин, И.А. Помыткин ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург Jak-STAT каскад передачи сигнала рецептора интерферона 1-го типа регулируется обратимым фосфорилированием остатков тирозина в составе сигнальных белков каскада. Сти муляция рецептора интерфероном приводит к автофосфорилированию и активации тирозинкиназ Jak-1 и Tyk-2, которые фосфорилируют сигнальные Stat-белки и активируют транс крипцию интерферон-регулируемых генов. Известно, что внутриклеточные протеинтирозинфосфатазы (ПТФ) являются негативными регуляторами Jak-STAT каскада, дефосфорилируя и инактивируя киназы Jak-1 и Tyk-2, а также Stat-белки. Цель настоящей работы состояла в оценке влияния каскада ингибирования ПТФ в передаче сигнала рецептора интерферона 1-го типа и выявление роли этого каскада в повышении лекарственной эффективности интерферона. Материалы и методы. Активность ПТФ в клетках НерG2 оценивали по выделению неорганического фосфата из фосфотирозина с использованием набора фирмы Sigma. Содержание фосфорилированного белка Stat1 в клетках HepG2 опре деляли радиометрически по включению [32P] в состав фосфо рилированных остатков тирозина белка Stat1 в ответ на сти муляцию клеток интерфероном. Результаты и обсуждение. Стимуляция клеток интерфероном приводит к ингибированию внутриклеточных ПТФ при повышении концентрации интерферона до 5 пг/мл. Этот процесс, по-видимому, связан с действием внутриклеточной Н2О2. Показано, что каталаза, селективно разлагающая внутрикле точную Н2О2, подавляет стимулированное интерфероном ингибирование ПТФ в клетках НерG2. Показано также, что ма лонат —конкурентный ингибитор сукцинатдегидрогеназы митохондрий (СДМ) подавляет, а сукцинат — субстрат СДМ — усиливает вызванное интерфероном ингибирование ПТФ в клетках НерG2. Эти данные демонстрируют роль митохондрий как источника Н2О2. Как и ожидалось с учетом вышеизложенного, сукцинат дополнительно усиливал индуцированное интерфероном фосфорилирование в белке Stat1 и, соответственно, повышал противовирусный эффект интерферона в клетках НерG2 (эффект оценивали по выживаемости клеток в присутствии вируса везикулярного стоматита). Более того, сукцинат восстанавливал чувствительность клеток к интер ферону в условиях интерфероновой резистентности, вызванной дезоксихолиевой кислотой. Каталаза подавляла стимулированные сукцинатом эффекты. Ц И Т О иК И Н Таким образом, настоящее исследование показало наличие неизвестного ранее каскада усиления сигнала рецептора интер ферона, включающего ингибирование ПТФ и согласованное усиление фосфорилирования в каскаде Jak-Stat. Представлены свидетельства в пользу участия респираторной цепи митохондрий в качестве регулируемого интерфероном источника Н2О2. Полученные результаты могут быть использованы для повышения эффективности лекарственных средств и снижении резистентности к терапии вирусных инфекций интерферонами. Ассоциация генетических и экспрессионных маркеров в генах цитокинов с иммунопатологией О.А. Свитич 1, А.В. Власова 1, А.Р. Кинкулькина 1, Е.А. Семенова 1, Н.И. Рассказова 1, А.И. Алиева 2, Л.В. Ганковская 3 ФГБУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова» РАМН, г. Москва; 2 ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Махачкала; 3 ГБОУ ВПО РНИМУ имени Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва 1 Для анализа состояния здоровья человека в клинической практике наиболее часто используют показатели изменения уровней цитокинов при различных патологиях. Важное зна чение имеет определение полиморфных маркеров в генах про- и противовоспалительных цитокинов с восприимчивостью к различным инфекциям. Выявление прогностически значимых полиморфизмов позволит сформировать группы риска и заблаговременно проводить в них адекватную профилактику. Целями исследования явилась отработка условий прове дения ПЦР-РВ для определения уровня экспрессии генов цитокинов (IL4 и IL18) и полиморфных маркеров в генах цитокинов (TNFA, IL10, IFNG, TGFB). Материалом для исследований явилась венозная кровь (здоровых доноров и пациентов с пневмонией), из которой были выделены ДНК (набор «К-СОРБ Синтол», Россия) и мононуклеарные клетки (в градиенте плотности фиколл-пака, d = 1,077 г/см3), из которых выделяли РНК. На матрице РНК ставили реакцию обратной транскрипции и ПЦР-РВ на ампли фикаторе «RoterGene Q» («QIAGEN», Germany). На матрице ДНК также проводили реакцию ПЦР-РВ, используя амплификаторы ДТ («ДНК-технология», Россия). Праймеры и зонды ПЦР-РВ были смоделированы в программе «Vector NTI.8,0» на основе последовательностей мРНК исследуемых генов («GenBank») и синтезированы на фирме «Синтол» (Россия). Для реакционной смеси использовали Hot Start Taq DNA Polyme rase («СибЭнзим», Россия), набор реактивов для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I («Буфер Б», «Синтол», Россия). Достоверность данных проверяли при помощи критерия Фишера. Результатом работы явились условия для проведения ПЦР-РВ. Для определения уровня экспрессии гена IL4 — концентрация ионов Mg2+ 2,5 мМ, оптимальная температура отжига 60 °С, для IL18 — концентрация ионов Mg2+ 2,5 мМ, оптимальная температура отжига 64 °С. Для определения полиморфных маркеров в генах TNFA, IL10, IFNG, TGFB условия были следующими: Mg2+ 2,0 мМ, температура 94 °C (30 с), 61 °C (150 с), 72 °C (60 с) — для первой системы, 90 °C, 56 °C, 72 °C (по 30 с) — для второй, 94 °C (30 c), 62 °C (50 c) — для третьей и 95 °C (30 c), 65 °C (50 c) — для четвертой. Полученные данные указывают на протекционную роль генотипа GG полиморф ного маркера (-1082 G/A) IL10 и генотипа GA полиморфного маркера (-308 G/A) TNFA в отношении аутоиммунных заболеваний. Также следует отметить, что полиморфный маркер (-308 G/A) TNFA ассоциирован с развитием внутриутробного инфицирования и с пневмонией у новорожденных детей. Таким образом, на основании данного и других маркеров можно заключить, что в развитии таких серьезных инфекционных осложнений большую роль играют нарушения цитокиновой сети. В перспективе отработанные системы могут быть ис- Ы ВОСПАЛЕНИЕ 120 Том 13 № 1 2014 Тезисы пользованы для определения экспрессионных и генетических маркеров, связанных с нарушением цитокиновой сети при па тологических состояниях иммунной системы. Опыт применения препарата Ронколейкин® (рекомбинантного интерлейкина 2 человека) у больных эпилепсией Н.Б. Серебряная 1, Л.В. Липатова 2, Б.Г. Бутома 2, Н.А. Сивакова 2, А.В. Василенко 2, Т.В. Капустина 2 ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова»; 2 ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский психоневрологический институт имени В.М. Бехтерева» Минздрава России 1 В настоящее время накоплено большое число научных данных в пользу «цитокиновой» теории эпилепсии, в основу которой положено представление о существовании системного воспалительного процесса и нейровоспаления у больных эпилепсией (БЭ) (Vezzani A. и др., 2002; Lehtimaki A.K. и др., 2004; Huang Z. и др., 2009). Одним из важных направлений в эпилептологии является разработка патогенетического лечения БЭ, так как 20–25 % пациентов, несмотря на появление новых эффективных противоэпилептических препаратов, попрежнему, остаются фармакорезистентными. Цель исследования — оценка эффективности и безопасности применения препарата Ронколейкин® (ООО «Биотех»), являющегося структурным и функциональным аналогом эн догенного IL-2, центрального регуляторного цитокина иммунного ответa, восполняющего дефицит эндогенных регуляторных молекул и полностью воспроизводящего их эффекты, у БЭ. Ронколейкин® представляет собой рекомбинантный дрожжевой IL-2 человека, продуцентом которого является штамм непатогенных дрожжей-сахаромицетов Saccharomyces cerevisiae, идентичный по аминокислотной последовательности пептидному фрагменту эндогенного человеческого IL-2. Материалы и методы. 62 БЭ проведено иммунологическое обследование: оценивали уровни цитокинов IL-1β, IL-2, IL-1Rα (sIL-2R), IL-6, и вrain-derived neurotrophic factor (BDNF) в плазме крови, а у части больных (22 человек) — содержание цитокинов в ликворе. БЭ были разделены на 2 группы: 1-ю группу составили 32 пациента, которым был проведен курс лечения препаратом Ронколейкин®, в качестве курса дополнительной терапии на фоне регулярного приема анти эпилептических препаратов (АЭП), 2-ю группу — 30 БЭ, по лучавших только АЭП. Ронколейкин® вводили в виде раство ра подкожно по 1 мл в дозе 1,0 мг № 3 на 1-й, 3-й и 5-й день. Клиническую эффективность терапии оценивали по динамике частоты и тяжести эпилептических припадков по шкале «National Health Seizure Severity Scale-NHS-3» (O’Donog hue M.F. et al., 1996) и по шкале общего клинического впечатления «СGI» («Clinical Global Impression scale» (Guy W., 1976)). Статистическую обработку результатов проводили с приме нением критериев Стьюдента (t), Манна — Уитни (U). Результаты и обсуждение. Исходный статус БЭ характе ризовался наличием высоких концентраций IL-1β и IL-8 как в сыворотке, так и в ликворе: они были в 2,5 раза выше нормы и составили 306,5 ± 14,0 и 77,1 ± 17,3 пг/мл и 67 (0÷167) пг/мл для IL-1β; 490,1 ± 99,4 в плазме, 6,4 ± 2,5 пг/мл в ликворе для IL-8, соответственно, в то время как концентрация sIL-2R бы ла очень низкой в плазме крови (133,4 ± 83,1 пг/мл, при норме 420 ± 116, p < 0,0005) и не определялась (то есть была ниже 10 пг/мл, величины, характеризующей чувствительность используемых ИФА тест-систем) в ликворе пациентов. После проведения короткого курса терапии препаратом «Ронколейкин®» отмечено достоверное снижение уровня цитокина IL-8, хемоаттракционного цитокина, привлекающего и активирующего нейтрофильные гранулоциты — основную популяцию лейкоцитов, проникающих в ткань мозга при эпилепсии. Уровни цитокинов IL-1β, IL-2, IL-6 и sIL-2R достоверно не изменились. Некоторое повышение уровня TNFα отмечено в группе больных, получавших АЭП без Ронколейкина®. В 1-й группе БЭ достоверно снизилась только концентрация IL-8, хемо аттракционного цитокина, привлекающего и активирующего нейтрофильные гранулоциты — основную популяцию лейкоцитов, проникающих в ткань мозга при эпилепсии. После проведения курса терапии с включением рекомбинантного IL-2 человека или без него уровни цитокинов в обеих группах достоверно не изменились. Однако в 1-й группе продукция BDNF после лечения повысилась в 1,6 раза в сравнении со 2-й (P(U) < 0,01), в то время как во второй достоверных изменений этих показателей не отмечено. После лечения препаратом «Ронколейкин®» у 87,5 % (28 человек) БЭ отмечено значительное клиническое улучшение: уменьшение частоты и тяжести припадков, увеличение средней длительности межприступного интервала (24,7 ± 2,3 дня до лечения, 94,6 ± 3,7 дня после такового; р < 0,01). Во 2-й группе БЭ существенной динамики клинических параметров не отмечено. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о положительном влиянии Ронколейкина® на клинико-имму нологические показатели больных эпилепсией. Высокая им мунокорригирующая эффективность, прогнозируемость и селективность действия препаратов на основе IL-2 обусловлены наличием на клетках специфических рецепторов и су ществованием природных механизмов их элиминации. Лекарственный препарат «Ронколейкин®», являясь средством патогенетической иммуноориентированной терапии, позволяет повысить эффективность лечения больных эпилепсией за счет модуляции воспалительного процесса и увеличения продукции нейротропных факторов, необходимых для процессов нейропластичности и нейрогенеза. Изучение генетической стабильности биологических характеристик аттенуированных бактерий Bordetella pertussis — кандидатной живой коклюшной вакцины Е.Г. Сёмин, Л.Н. Синяшина, А.Ю. Медкова, Г.И. Каратаев ФГБУ «НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, г. Москва Иммунизацию против коклюша проводят коклюшными вакцинами, обеспечивающими защиту от тяжелых и летальных случаев заболевания более 85 % привитых детей. В нас тоящее время применяют цельноклеточные (корпускулярные, ККВ) коклюшные вакцины и бесклеточные (БКВ), вводимые подкожно или внутримышечно согласно национальному календарю прививок, начиная с 3-х месячного возраста, троекратно с последующей двукратной ревакцинацией. Эпидемио логические наблюдения за профилактической эффективностью коклюшных вакцин свидетельствуют о формировании более продолжительного поствакцинального иммунитета при введении ККВ по сравнению с БКВ. Тем не менее, иммуните та, сопоставимого с постинфекционным, не наблюдается. Перспективными и наиболее безопасными вакцинами, способными индуцировать иммунный ответ, сопоставимый с иммунитетом после перенесенного заболевания, являются живые коклюшные вакцины (ЖКВ). Эти вакцины предполагается вводить в организм новорожденных интраназально или аэрозольно, аналогично естественному пути заражения бактериями B. pertussis. Возможность разработки таких вакцин про демонстрирована рядом исследований. Нами сконструированы искусственно аттенуированные бак терии B. pertussis для кандидатной живой коклюшной вакцины интраназального применения. Искусственно аттенуированные бактерии B. pertussis KS-4 KmRCmR содержат две мутации: в опероне ptx и нокаутную мутацию в гене dnt. Бактерии B. pertussis KS-4 продуцируют коклюшный токсин (КТ) в иммуногенной нетоксичной форме и не проявляют активности дермонекротического токсина. Рекомбинантный КТ в от личие от нативного КТ не проявляет лейкоцитоз-стимулирующей, гистамин-сенсибилизирующей активности и эффекта кластер-образования на культуре клеток CHO. Живые и раз рушенные ультразвуком аттенуированные бактерии B. pertus- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 121 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы sis KS-4 не вызывали образования некроза при внутрикожном введении мышам сосункам, кроликам и морским свинкам, гибели мышей не было и при внутрибрюшинном введении. Интраназальное введение лабораторным животным живых бактерий B. pertussis KS-4 обеспечивало защитный эффект, срав нимый с введением отраслевого стандартного образца корпускулярной коклюшной вакцины. При пассажах на селективной питательной среде (75 пересевов), хранении при –20–70 °С и после лиофильного высушивания в сахарозо-желатинозной среде заданные параметры аттенуированных бактерий B. pertussis KS-4 не изменились, признаков диссоциации не обна ружено. При интраназальном введении этих бактерий лабо раторным животным с последующей их идентификацией наблюдали персистенцию микроорганизмов в легких мышей бо лее 2-х месяцев с сохранением структуры генома и иммунобиологических свойств. В течение всего срока не было выявлено увеличения содержания IL-4 и изменения спектра цитокинов, определенного как в сыворотке крови, так и в культурах спленоцитов вакцинированных мышей линии CBA. Развитие иммунного ответа и дифференцировка T-лимфоцитов проходили по Th1-типу. При посеве гомогенатов легких мышей все выросшие на селективной среде колонии бактерий (более 210) сохраняли оба маркера устойчивости к антибиотикам. Таким образом, изучение генетической стабильности аттенуированных бактерий B. pertussis KS-4 — кандидатной живой коклюшной вакцины — показало сохранность структуры мутантных генов ptx и dnt и заданных биологических характеристик. Генетический полиморфизм цитокиновой сети у больных псориазом и псориатическим артритом М.В. Смольникова, С.В. Смирнова ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера» СО РАМН, г. Красноярск Псориаз (Пс) — многофакторное заболевание (МФЗ) человека, актуальность его изучения обусловлена ростом заболеваемости, учащением случаев возникновения псориатического артрита (ПсА). Исследования в области иммунопатогенетики МФЗ направлены на поиски персонифицированных маркеров развития патологического процесса и его тяжелых форм. Наиболее перспективным направлением изучения па тогенетических механизмов развития Пс и ПсА является идентификация полиморфных генов иммунного ответа — генов цитокинов. Целью настоящего исследования стало изу чение распределения аллельных вариантов генов цитокинов TNFA G-308A, IL2 T-330G, IL4 С-590Т и IL10 С-597А у больных ПсА и Пс. Обследованы 96 больных псориазом, у 64 из них диагностирован ПсА, а также практически здоровые лица (группа контроля, n = 72), сопоставимые по полу и возрасту. Все обследованные являлись европеоидами в трех поколениях, жителями г. Красноярска. Генотипирование проведено методом ПЦР с последующим рестриктным анализом продуктов амп лификации (Bsp19I для TNFA, Bme 18I для IL4, Rsa I для IL10 («Сибэнзим», Новосибирск), MaeI для IL2 (NEB, Great Britain). Распределение генотипов и аллелей исследованных полиморфных локусов генов цитокинов во всех группах соответст вует распределению Харди — Вайнберга и характерно для европеоидных популяций: преобладают варианты TNFA G-308, IL2 T-330, IL4 С-590 и IL10 С-597. Различия в частоте распределения генотипов TNFA G-308А у больных Пс и ПсА в отличие от контроля были статистически недостоверны. У больных Пс частота генотипа IL2 GG-330 составила 21,4 % по срав нению с контролем (5,7 % (р = 0,03; OR 6,75; CI 1,3–27,2)). Пока зана ассоциация аллельного варианта IL4 С-590 с ПсА: его частота у больных ПсА составила 0,83, у больных ПС — 0,66 (р = 0,01; OR 2,57; CI (1,13-5,88). Показана тенденция к ассоциа ции аллельного варианта IL10 А-597 с псориазом (р = 0,06; OR 1,9; CI (0,93-4,03). Аллельные варианты исследованных генов ци Ц И Т О иК И Н токинов расположены в промоторных регионах и ассоцииро ваны с уровнем продукции соответствующих цитокинов лимфоцитами крови, тем самым участвуя в иммунном реагировании и характере течения псориатического артрита и псориаза в целом. Цитокины: полиморфизм генов и уровень продукции в формировании контроля над течением атопической бронхиальной астмы у детей М.В. Смольникова, С.В. Смирнова, О.С. Коноплева ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера» СО РАМН, г. Красноярск Бронхиальная астма (БА) относится к многофакторным за болеваниям, формирование которых определяется сложным взаимодействием ряда факторов. В развитии иммунного ответа одну из основных позиций занимают цитокины, регули рующие силу и продолжительность иммунных и воспалительных реакций. Поиск генетических маркеров, контролирующих звенья патогенеза атопической бронхиальной астмы (АБА), является одной из актуальных задач патогенетики. Наиболее перспективным является выявление ассоциации полиморфных локусов генов-кандидатов с риском развития тяжелых форм АБА у детей. Полиморфизм в промоторных регионах генов влияет на уровень продукции соответствующего белкового продукта, исходя из этого, целью данного исследования стало изучение распределения TNFA G-308A, IL4 С-590Т и IL10 С-597А у детей, больных АБА, с различным уровнем контроля над тече нием заболевания. Обследованы 110 детей, больных АБА: с контролируемым (КАБА, n = 59) и неконтролируемым течением заболевания (НАБА, n = 51), а также практически здоровые дети (группа контроля, n = 33). Больные и здоровые дети были сопоставимы по полу, возрасту, европеоидного происхождения. Средний возраст детей составил 13,6 ± 1,0 года. Генотипирование проведено методом ПЦР с последующим рестриктным анализом продуктов амплификации (Bsp19I для TNFA, Bme 18I для IL4, Rsa I для IL10 («Сибэнзим», Новосибирск)). Распределение аллельных вариантов генов цитокинов в исследованных группах соответствовало распределению Харди — Вайнберга и характерно для европеоидных популяций. Частота гомозиготного варианта GG-308 в группе КАБА составила 72,9 %, НАБА — 80,4 %, контроль — 75,8 % (р > 0,05). Отмечен повышенный уровень TNFα в сыворотке крови больных детей, наиболее выраженный в группе НАБА. Достоверных отличий между носителями различных генотипов TNFA в уровне TNFα не показано. Показана тенденция к ассоциации аллельного варианта Т-590 IL4, ассоциированного с повышенным уровнем IL-4, с неконтролируемым течением АБА у детей: в группе НАБА его частота составляла 0,28, тогда как в группе КАБА — 0,19 (р = 0,24; OR 1,68; CI 0,77-3,6). Распределение генотипов СС/СА/АА IL10-597 в группе НАБА, КАБА и контроле составило 63,6/30,3/6,1 %; 63,4/24,4/12,2 %; 54,6/45,4/0,0 %, соответственно (р > 0,05). При анализе общей группы АБА показаны статистически достоверные отличия уровней IL-4 и IL-10 у носителей различных генотипов: IL4 CC-590 медиана 5,6 пг/мл (Q25-Q75: 3,6–9,7) и IL4 CT+TT-590 7,2 (3,7–14,8), p = 0,043; IL10 CC-597 38,0 (22,1–50,4) и IL10 CA+AA-597 35,6 (19,1–42,6), р = 0,044. Таким образом, уровень IL-4 и полиморфизм IL4 C-590T можно считать диагностически значимым маркером атопической бронхиальной астмы с неконтролируемым течением. Аллельный вариант IL-10 А-597, характеризующий пониженную экспрессию IL-10, имеет тенденцию к ассоциации с атопической бронхиальной астмой с контролируемым течением у детей, предупреждая девиацию иммунного ответа в сторону Th2-клеток, является благоприятным фактором в формировании характера течения атопической бронхиальной астмы у детей. Ы ВОСПАЛЕНИЕ 122 Том 13 № 1 2014 Тезисы Особенности цитокинового спектра при экспериментальной сальмонеллезной инфекции на фоне воздействия тритерпеноида А.И. Смолягин, Ю.В. Филиппова, И.Н. Чайникова, Т.В. Панфилова, А.Д. Железнова, Б.А. Фролов ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России, Оренбург Ранее был установлен положительный эффект влияния милиацина (тритерпеноида растительного происхождения) на летальность, микробную обсемененность органов мышей при экспериментальной сальмонеллезной инфекции. Целью работы явилось исследование уровней спонтанной и индуцированной продукции про- и противовоспалительных цитокинов при экспериментальной сальмонеллезной инфекции на фоне применения милиацина. Исследования выполнены на 120 мышах-самцах (CBA × C57Bl6)F1, поставленных из питомника «Столбовая». Милиацин вводили трехкратно внутрибрюшинно с интервалами в 3 дня между введениями в разовой дозе 2 мг/кг. Заражение животных выполняли внутрибрюшинным введением штамма Salmonella enteritidis госпитального происхождения в дозе 2 × 106 бактерий на мышь, которое проводили через 24 ч после последнего введения тритерпеноида. Всего использовано 4 группы животных: 1-я (интактные); 2-я (зараженные); 3-я (зараженные после трехкратного введения растворителя для милиацина: твин 21 в конечной концентрации 1,6 × 10–7 моль/кг); 4-я (зараженные после введения ми лиацина). Продукцию цитокинов (IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17, IL-18, IFNγ) определяли в супернатантах нестимулированных и стимулированных КонА культур спленоцитов на 10-е сутки инфекции методом ИФА с помощью наборов фирмы «eBioscience». Достоверность различий (р < 0,05) определяли по непараметрическому критерию Манна — Уитни. У зараженных мышей (2-я группа) по сравнению с интактными (1-я группа) выявлено значительное увеличение спонтанной продукции IL-6 (575 %), IFNγ (407 %), IL-12 (261 %) и IL-18 (149 %). Предварительное введение растворителя перед заражением (3-я группа) значимо не отражалось на спонтанной продукции указанных цитокинов. Введение милиацина (4-я группа) увеличивало нестимулированную секрецию IL-12 (181 %) и IFNγ (143 %) по сравнению с аналогичными показа телями у зараженных мышей. Вместе с тем, милиацин оказывал стимулирующее воздействие на спонтанную продукцию и противовоспалительного цитокина IL-10 (184 % по отношению к зараженным животным). Исследование стимулирован ной продукции цитокинов выявило многократное повышение уровня IFNγ, IL-17, IL-12, IL-10 у мышей 2-й и 3-й групп относительно тех же показателей у интактных животных. Милиацин оказывал дифференцированное влияние на индуциро ванную продукцию цитокинов: стимулирующий эффект для IL-10, IL-12 и супрессирующий — в отношении IL-4, IL-6, IL-17 у мышей 4-й группы по сравнению с зараженными животными. Выявленные сдвиги цитокинового баланса свидетельствуют о том, что в основе механизмов защитного действия милиацина при инфекции, вызванной внутриклеточными патогенами, лежит активация Th-1-зависимого иммунного ответа, стимуляция продукции противовоспалительного цитокина IL-10 и ограничение секреции IL-17, одного из наиболее значимых патогенетических факторов воспаления. Роль системного воспаления в развитии хронической дисфункции почечного аллотрансплантата Л.В. Соломатина 1, 2, Ю.А. Журавлева 1, Е.В. Грозных 2, Е.Ю. Гусев 1 2 1 Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург; ГБУЗ СО «Свердловская областная клиническая больница № 1», Екатеринбург Актуальность. Основной причиной потери почечного аллотранспланта в отдаленные сроки является прогрессирующая хроническая дисфункция трансплантата (ХДТ). Общепринятыми причинами ХДТ являются наличие иммунной реакции «хозяин против трансплантата», а также потенцирующие эту реакцию иммунные и неиммунные механизмы. К числу по следних можно отнести хроническое системное воспаление (ХрСВ). Цель исследования — оценка роли ХрСВ в развитии хронической дисфункции трансплантированной почки с помощью нового метода его диагностики: шкалы ХрСВ. Материалы и методы. В исследование были включены 2 группы реципиентов почечного аллотрансплантата: 1-я группа — пациенты с хронической дисфункцией трансплантата (n = 23, средний возраст — 42,0 ± 9,4 года) и 2-я группа — пациенты с нормально функционирующим почечным аллотрансплантатом (n = 24, средний возраст — 43,5 ± 9,1 года). Контрольную группу составили доноры крови (n = 50, средний возраст — 34,1 ± 10,4 года). В плазме крови пациентов иммунохемилюминесцентным методом («Immulite», «Siemens», США) определяли следующие показатели: С-реактивный белок (CRP), интерлейкин (IL)-6, IL-8, IL-10, фактор некроза опухоли α (TNFα), D-димеры, кортизол, миоглобин, тропонин I. На основании этих маркеров по оригинальной методике вычисляли интегральный критерий — Шкалу ХрСВ — выстроенный от 0 до 8 баллов. Наличие ≥ 3 баллов характеризует развитие ХрСВ. Степень несовместимости донора и реципиента определяли по числу несовпадений из 6 определяемых антигенов комплекса HLA из трех локусов (А, В и DR). При оценке результатов ис пользовали параметр «число несовпадений антигенов HLA» (ЧН-HLA). Каждое аллельное несоответствие определяли как 1 балл индекса ЧН-HLA (всего до 6 баллов). Результаты и обсуждение. Развитие хронической дисфунк ции трансплантата в 43,5 % случаев сопровождалось наличием ХрСВ, в то время как у пациентов с нормальной функцией аллотрансплантата ХрСВ не выявлено. Результаты проведенного ROC-анализа показали, что диагностическая значимость шкалы ХрСВ была высокой (AUC = 0,81) и превосходила диагностическую значимость индекса ЧН-HLA (AUC = 0,58). Низкая эффективность последнего показателя, вероятно, связана с тем, что критическое несоответствие между донором и ре ципиентом по генам комплекса HLA в большей мере ответственно за острое отторжение трансплантата. Таким образом, хроническое системное воспаление является одним из ключевых кофакторов развития хронической дисфункции трансплантата, что делает целесообразным его диагностику у пациентов с трансплантированной почкой. Для этих целей может быть использована интегральная шкала ХрСВ. Особенности синтеза про- и противовоспалительных цитокинов клетками макрофагального ряда при невынашивании беременности Н.Ю. Сотникова, Н.В. Крошкина, Н.В. Батрак ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново В последние 20 лет получила распространение гипотеза о важной роли клеток врожденного иммунитета в обеспечении развития и защиты фетоплацентарного комплекса. Наличие большого количества макрофагов в децидуальной оболочке плаценты на протяжении всего гестационного периода поз воляет предположить, что маточные макрофаги вовлечены в широкий спектр гестационных процессов, включая импланта цию. Показано, что функциональная дифференцировка мак рофагов определяет характер продукции ими цитокинов. Однако роль поляризации макрофагов в формировании имму нологического равновесия в системе мать-плацента остается до конца не изученной. Целью нашего исследования было установление особенностей продукции про- и противовоспалительных цитокинов децидуальными макрофагами и моноцитами периферической крови на ранних сроках неосложненной беременности и привычном невынашивании. Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь и децидуальная оболочка плаценты. Проводили обследование 25 беременных женщин I триместра, имевших на момент обследования выраженные клинические признаки угрозы невынашивания беременности, 12 женщин с развившимся самопроизвольным выкидышем в сроке 7–12 недель. Группу контроля составили Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 123 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы 18 практически здоровых беременных женщин в I триместре, беременность которых протекала без осложнений. Обогащенную популяцию МНК получали методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколла–урографина. Внутриклеточную продукцию IL-1β, IL-10, IL-12, IL-6, IFNγ, TNFα, TGFβ фагоцитами определяли методом проточной цитофлуориметрии на цитометре «FACS CantoII» (США). Анализ полученных данных показал, что у женщин I триместра при развитии угрозы невынашивания беременности в периферической крови достоверно снижались количества IL-10+-, TGFβ+-моноцитов и повышались количества IL-1β+-, IL-6+-, IL-12+-, TNFα+-моноцитов по сравнению с аналогичными па раметрами контрольной группы. При раннем самопроизвольном выкидыше в децидуальной оболочке плаценты наблюдалось повышение числа макрофагов, продуцирующих IL-1β, IL-6, IL-12, IFNγ и снижение уровней IL-10-+ и TGFβ1+-мак рофагов по сравнению с показателями при неосложненной беременности ранних сроков. Полученные данные хорошо согласуются с общепринятой гипотезой, что для нормального поддержания беременности необходим пул «альтернативно» активированных макрофагов, продуцирующих противовос палительные цитокины. При развитии невынашивания беременности, вероятно, происходит сдвиг поляризации клеток макрофагального ряда в сторону «классически» активирован ных макрофагов/моноцитов, продуцирующих провоспалительные цитокины, что может приводить к неадекватной сти муляции реакций врожденного иммунитета, направленных на отторжение семиаллогенного плода. Анализ межгенных взаимодействий генов провоспалительных цитокинов IL1B, TNFA с полиморфизмом гена рецептора CARD15 у больных синдромом раздраженного кишечника Д.С. Сташкевич 1, А.Л. Бурмистрова 1, Е.Л. Иванова 2, А.С. Сарсенбаева 2 ФГБОУ ВПО «Челябинский государственный университет»; 2 ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск 1 В настоящее время считается, что синдром раздраженного кишечника (СРК) является полиэтиологическим и гетеро генным, в нем важную роль играет нарушение баланса био логически активных веществ, в том числе и цитокинов и ре цепторов пути активации цитокинового каскада. Цель — анализ межгенных взаимодействий генов провос палительных цитокинов IL1B, TNFA с полиморфизмом гена рецептора CARD15 у больных синдромом раздраженного ки шечника. Материалы и методы. В исследование были включены 76 человек русской этнической группы, с диагнозом СРК. Для диагностики заболевания использовали Римские критерии III (2007). Контрольную группу составляли потенциальные доноры костного мозга ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови»: 70 человек. Типирование SNPs в гене TNFA — ПДРФ — анализ ПДРФ: амплификация с последующей обработкой ампликонов эндонуклеазами рестрикции NcoI (37 °С в течение 16 ч) для положения -308 (G/A), TaiI для положения -863 (65 °С в течение 8 ч). Генотипирование SNP в точке +3953 IL1В — ПДРФ (праймеры ИХБиФМ СО РАН). Определение полиморфизма 3020insC NOD2/CARD15 — прямая ПЦР-амплификация (набор НПФ «Литех»). Детекция результатов — электрофорез в 8 % ПААГе, в 3 % агарозном геле с последующей визуализацией результатов в УФ-свете. Статистическая обработка: критерий χ2, критерий χ2 с поправкой Йейтса, критерий Фишера, OR с 95 % доверительным интервалом (CI). Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р ≤ 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 ≤ р ≤ 0,10) обсуждали тенденцию к различиям. Результаты и обсуждение. Составлены комбинации генотипов 3020insC NOD2/CARD15 с генотипами полиморфизмов -308 G/A TNFА, -863 C/A TNFА, +3953 IL1B. Установлено, что в группе больных снижена частота меж генной комбинации W/M (3020insC NOD2/CARD15) — C/A- Ц И Т О иК И Н 863 TNFA (10,5 против 25,7 %, χ2= 4,75, р = 0,029). Носительство такой комбинации может снижать вероятность развития СРК (OR = 0,17, 95 %CI 0,07÷0,44). В то же время повышена частота межгенной комбинации гомозиготных генотипов W/W (3020insC NOD2/CARD15) — C/C-863 TNFA (77, 6 против 62,8 %, χ2= 3,15 р = 0,076, тенденция). Однако такое изменение частоты не имело прогностического значения (OR = 2,05, 95 %CI 0,98÷4,26). Остальные комбинации не имели статисти чески значимых различий между исследуемыми выборками. Проведенное исследование вносит вклад в развитие представлений об участии генов воспалительного ответа в развитии синдрома раздраженного кишечника. Планируется продолжить работу с включением в исследование новых генов-кандидатов. Влияние интраокулярной имплантации монолитной нити из никелида титана на цитокиновый профиль влаги передней камеры глаза экспериментальных животных А.Н. Стеблюк 1, Н.В. Колесникова 2 Краснодарский филиал ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» имени акад. С.Н. Фёдорова Минздрава России; 2 ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Краснодар 1 Изучение показателей иммунологической реактивности при травмировании глаза различной этиологии позволяет обнаружить ее изменения как на системном, так и на локальном уровне, среди которых гиперпродукция провоспалительных цитокинов коррелирует с тяжестью течения посттравматического периода. При этом выявляемая разнонаправленность характера изменений цитокинового профиля на локальном и системном уровнях свидетельствует о преобладании роли местного иммунитета над системным при травмировании иммунологически привилегированного глаза. Изложенное обу словливает целесообразность экспериментальной оценки содержания во влаге передней камеры про- и противовоспалительных цитокинов для контроля эффективности и безопасности интраокулярной имплантации шовного монолитного материала из никелида титана (ТН-10). Цель исследования — изучение локального уровня содержания про- и противовоспалительных цитокинов у экспериментальных животных в динамике после интраокулярной им плантации монолитной нити сечением 45 мкм из сплава ТН-10 в качестве фиксационного устройства. Материалы и методы. Материалом для исследования явилась влага передней камеры глаза 5 кроликов (породы Шиншилла в возрасте до 2-х лет), взятая на 3-и, 7-е и 30-е сутки после интраокулярной имплантации монолитной нити из никелида титана (5 глаз), и 4 кроликов с интраокулярным исполь зованием традиционного шовного материала (группа сравнения), в которой оценивали содержание цитокинов (IL-1β, TNFα, IL-2, IL-10) иммуноферментным методом с использова нием тест-систем ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург) на анализаторе «ASCENT»(Финляндия). Результаты и обсуждение. Исследованиями показано, что оперативное вмешательство в области глаза экспериментальных кроликов с использованием традиционного шовного материала не отражается на локальном уровне содержания TNFα в динамике наблюдений (3, 7, 30 дней); концентрация IL-1β достоверно возрастает с 3-х суток наблюдения и сохраняется таковой до конца мониторинга; содержание IL-2 статистически значимо возрастает на 30-е сутки наблюдения; резко увеличенная концентрация IL-10 во влаге передней камеры глаза на 3-и сутки после оперативного вмешательства в последующем снижается до уровня такового у интактных животных. Между тем во все сроки наблюдения после интраокулярной имплантации монолитной нити из никелида титана кроликам основной опытной группы имело место сохранение на уровне исходного содержание IL-2, IL-10, TNFα за исключением достоверного снижения последних (IL-10, TNFα) в ранние сроки мониторинга (на 3-и сутки). При этом наблюдаемое в динами ке достоверное увеличение концентрации IL-1β было менее Ы ВОСПАЛЕНИЕ 124 Том 13 № 1 2014 Тезисы выраженным, чем при использовании традиционного шовного материала у оперированных кроликов. Анализ полученных данных, в целом, обосновывает целесообразность и предпочтение фиксационного устройства на основе никелида титана. Ревматоидный фактор — патологические или регуляторные антитела? Е.Ю. Столярова, Л.В. Бедулева, Н.Н. Абишева, Т.В. Храмова ФГБОУ ВПО «Удмуртский государственный университет», г. Ижевск Ревматоидный фактор (РФ) изначально был определен как аутоантитела против Fc-фрагментов IgG, появление которых ассоциировано с ревматоидным артритом. Позднее было пока зано, что РФ — гетерогенная по специфичности группа антител, способная взаимодействовать с разными антигенными де терминантами на молекуле IgG и продукция РФ не является уникальной для пациентов с ревматоидным артритом. РФ может быть обнаружен в сыворотке здоровых людей и в ходе нормального иммунного ответа. В связи с этим предполагается, что существуют два класса РФ (патологический и физио логический), отличающихся структурно и функционально. Целью работы было сравнение роли РФ, определяемого методом агглютинации танизированных нагруженных гомологичным IgG эритроцитов (РФ1), и РФ, выявляемого в тест-системе, где антигеном является IgG кролика (РФ2), в развитии экспериментально вызванных аутоиммунных заболеваний. Были выбраны широко используемые модели: коллаген-ин дуцированный артрит крыс, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит крыс и атеросклероз у крыс, вызванный иммунизацией липопротеинами низкой плотности человека. Выявлено, что у крыс, оказавшихся устойчивыми к разви тию аутоиммунных заболеваний, появлению антител к антигену предшествует продукция РФ1, либо РФ2, либо обеих попу ляций РФ. У заболевших животных продукции РФ в период индукции иммунного ответа не наблюдается. Обнаруженные факты позволяют предполагать, что обе исследованные популяции РФ участвуют в регуляции иммунного ответа и обеспечивают устойчивость крыс к развитию экспериментально вызванных аутоиммунных заболеваний. У некоторых забо левших артритом крыс в стадию развития клинических приз наков и интенсивной продукции антител к коллагену обнаружена продукция РФ2, что воспроизводит феномен высокого уровня РФ у больных артритом людей. Высокий уровень РФ2 в период развернутой клинической картины артрита может быть следствием нарушения регуляторной активности РФпродуцирующих лимфоцитов. Исследование показало, что в случае одновременной продукции исследованных популяций РФ временные максимумы образования РФ1 и РФ2 не совпа дают, кинетика исследуемых популяций РФ носит реципрокный характер. IgG кролика не вызывает торможение агглю тинации танизированных нагруженных IgG крысы эритроцитов, вызванной РФ1, а также не индуцирует продукцию РФ1 в течение 14 дней после иммунизации. Совокупность полученных фактов свидетельствует о том, что РФ1 и РФ2 — разные по специфичности популяции ревматоидного фактора, обла дающие свойством регулировать иммунный ответ против антигенов-индукторов аутоиммунных заболеваний. Влияние рецепторного антагониста интерлейкина 1 на показатели тиол-дисульфидной системы, окислительной модификации белков и энергетического метаболизма в тканях головного мозга крыс в условиях моделирования сахарного диабета и церебральной ишемии Э.В. Супрун 1, И.Ф. Беленичев 2, А.Ф. Пиминов 1, А.С. Супрун 1 Институт повышения квалификации специалистов фармации, Национальный фармацевтический университет, г. Харьков; 2 Запорожский медицинский университет, г. Запорожье, Украина 1 Цель — изучение влияние рецепторного антагониста ин терлейкина 1 (IL-1Ra) (7,5 мг/кг) на показатели тиол-дисуль- фидной системы (ТДС), окислительной модификации белков (ОМБ) и энергетического метаболизма в условиях моделиро вания аллоксанового сахарного диабета (СД) и фокального инсульта (ФИ) у крыс. Материалы и методы. Рецепторный антагонист интерлейки на 1 (IL-1Ra) получен в ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России. Исследования проводили на белых нелинейных крысах (180–200 г). Экспериментальный СД моделировали с помощью однократного подкожного введения водного раствора аллоксана моногидрата («Sigma», USA) в дозе 150 мг/кг. Клиническую картину ФИ воспроизводили по методу B.D. Waston на модели двухстороннего фотоиндуцированного тромбоза сосудов. IL-1Ra в дозе 7,5 мг/кг вводили внутримышечно 1 раз в сутки. Для биохимических исследований на 4-е сутки использованы фрагменты мозга, находившиеся в области среднемозговой артерии и гомогенизированные в жидком азоте. Для изучения активности ТДС в гомогенате головного мозга крыс определяли уровни восстановленных и окисленных тиолов и глутатиона, активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы, а также определяли уровень адениловых нуклео тидов (АТФ, АДФ, АМФ) и содержание продуктов окислительной модификации белка по уровню альдегидных (АФГ) и карбоксильных (КФГ) продуктов. Статистическую обработку данных производили с помощью пакета программы «Statistica 6.0», сравнительный анализ в группах проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа ANOVA для множественных сравнений. Результаты и обсуждение. Установлено, что постишемическое поражение ткани головного мозга экспериментальных животных на двух моделях сопровождалось дискордантными смещениями компонентов ТДС (повышением уровней окис ленных форм глутатиона и тиолов на фоне резкого снижения их восстановленных форм, а также снижение активности энзимов ТДС — глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы) и пула макроэргических фосфатов (снижением уровней АТФ и АДФ на фоне выраженного повышения показателей АМФ), а также увеличением в гомогенате мозга маркеров ОМБ — АФГ и КФГ. Обнаружены отличия в динамике изменений исследованных показателей в условиях аллоксанового СД и ФИ. Доказано, что курсовое введение IL-1Ra способствовало стабилизации тиол-дисульфидного равновесия, нормализации активности ферментов ТДС, а также показателей ОМБ и энергетического метаболизма в тканях головного мозга крыс с экспериментальными сахарным диабетом и фокальным инсультом. Особенности митопротективного эффекта рецепторного антагониста интерлейкина 1 при экспериментальном геморрагическом инсульте Э.В. Супрун 1, Л.А. Громов 2, И.Ф. Беленичев 3, А.М. Ищенко 4, А.С. Супрун 1 Институт повышения квалификации специалистов фармации Национального фармацевтического университета Минздрава Украины, г. Харьков, Украина; 2 Институт фармакологии и токсикологии АМН Украины, г. Киев, Украина; 3 Запорожский государственный медицинский университет, г. Запорожье, Украина; 4 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия 1 Цель — изучение на модели экспериментального гемор рагического инсульта у крыс влияния рецепторного антагониста интерлейкина 1 (IL-1Ra) (7,5 мг/кг) на динамику пока зателей активности митохондрий, окислительной модификации белков (ОМБ), энергетического и белкового обменов, процессов апоптоза и неврологических дефицитов в сравнении с тиотриазолином (50 мг/кг). Материалы и методы. IL-1Ra получен во ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России. Исследования проводили на белых нелинейных крысах (180–200 г.). Внутримозговое кровоизлияние (ВМК) вызывали введением аутокрови во внутреннюю капсулу головного мозга под этаминал-натриевым наркозом. IL-1Ra в дозе 7,5 мг/кг вводили внутримышечно сразу после выхода животных из наркоза и в дальнейшем 1 раз в сутки в те- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 125 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы чение 18 дней. По истечении острого периода ишемии (4 дня) и фазы восстановления (18 дней) в гомогенате мозга биохимическими методами определяли мембранный потенциал заряда митохондрий (МПЗМ) в присутствии сафронина-О, а также показатели ОМБ (по уровню альдегидных (АФГ) и карбоксильных (КФГ) продуктов), уровень адениловых нуклеотидов (АТФ, АДФ, АМФ). Оставшийся мозг фиксировали в 10 % жидкости Буэна (24 ч) и после стандартной обработки методами непрямой иммунофлуоресценции определяли содержание РНК в глиальных клетках и долю апоптотических клеток. Неврологический дефицит у животных оценивали по шкале Stroke-index McGrow на 4-е и 18-е сутки. Обучение УРПИ проводили по стандартной методике после завершения наблюдения в восстановительном периоде нарушений мозгового кровообращения на 18-е сутки. Результаты и обсуждение. Установлено, что развитие ВМК у экспериментальных животных сопровождалось дестабили зацией функциональной активности митохондрий, повышением уровней ранних и поздних маркеров ОМБ (АФГ и КФГ), энергетическим и белковым дефицитом и активацией процессов апоптоза, что привело в итоге к выраженным неврологи ческим дисфункциям. IL-1Ra в дозе 7,5 мг/кг при ВМК ока зывал выраженный многоуровневый митопротекторный эффект: торможение процессов прямой окислительной модификации белков способствовало стабилизации функциональной активности митохондрий, сохранению должного уровня энергетического обеспечения, белкового синтеза и модуляции апоптотической активности, что стабилизирует неврологический статус крыс в постишемическом периоде. Доказано, что курсовое введение IL-1Ra в дозе 7,5 мг/кг оказывает выраженный комплексный митопротективный эффект и в перспективе может использоваться для фармакологической защиты мозга при его повреждениях, в том числе при лечении геморрагического инсульта. Создание малогабаритной установки для исследования лекарственных аэрозолей Ю.Н. Толпаров, Т.С. Егорова ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург Аэрозольный способ введения лекарственных средств обеспечивает доставку препаратов в нижние дыхательные пути, его высокую биодоступность, быстроту развития как местного, так и системного лечебного эффекта, который наступает при меньшей дозе вводимого препарата. Целью данной работы было изготовление малой аэрозольной камеры (МАК) для введения подопытным животным (мышам) препаратов, имеющихся в малых количествах, определение параметров генерируемого аэрозоля и оценка его биодоступности. Основными задачами при создании МАК являлось поддержание постоянной концентрации распыляемого препарата в течение всей экспозиции животных в атмосфере аэрозоля, а также обеспе чение его одинаковой концентрации во всем объеме МАК. Материалы и методы. Для решения этих задач был выбран импульсный режим распыления, установленный в результате предварительного изучения фракционно-дисперсного состава (ФДС) аэрозоля и его поведения во времени (седиментация, аггрегация, изменение ФДС). Параметры аэрозоля определя ли с помощью счетчика аэрозольных частиц APS 3321 фирмы TSI (США). С помощью этой установки удалось выбрать импульсный режим распыления, компенсирующий понижение концентрации аэрозоля в течение 30-минутного нахождения животных в камере. При этом сохранялась концентрация аэрозоля на заданном уровне ± 10 %. Объем МАК составлял 12 лит ров при высоте 400 мм. Конструкция позволяла размещать 10 мышей в индивидуальных пластиковых контейнерах, закрепленных в отверстиях на боковых стенках камеры таким образом, чтобы в атмосфере аэрозоля находился только нос животного. Аэрозолирование исследуемого препарата проводили с помощью ультразвукового распылителя «OMRON NE-U22-E» (США) с производительностью 0,25 мл/мин. Для демонстрации возможности проведения аэрозольных иссле Ц И Т О иК И Н дований с помощью МАК в качестве распыляемого вещества был выбран препарат «РЕКСОД» (производство ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург), включающий рекомбинантный белок супероксиддисмутазу (СОД). Концентрацию СОД в препарате, сыворотке крови и в бронхоальвеолярном лаваже (БХЛ) животных определяли методом ИФА с использованием тест-системы производства ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург. Результаты и обсуждение. Полученный аэрозоль имел следующие характеристики: массовый медианный диаметр dmmd= 3,1 ± 0,1 мкм; максимальный диаметр частиц, масса которых составляет 95 %, d95%= 5,0 ± 0,1 мкм. Конструкция МАК, импульсный режим распыления препарата и подобранная продолжительность ингаляционного сеанса обеспечивала получение животными рассчитанной аспирационной дозы, что подтверждалось измерением концентрации СОД в крови и БХЛ животных (разброс составлял ± 20 %) при малом расходе распыляемого вещества. Таким образом, полученные данные показали возможность использования малой аэрозольной камеры для исследования аэрозолей лекарственных препаратов. Особенности местного синтеза цитокинов у детей с воспалительными заболеваниями кишечника А.П. Топтыгина 1, Е.Л. Семикина 2, Г.В. Бобылева 1, Л.В. Мирошкина 2, С.В. Петричук 2 1 ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, г. Москва; 2 ФГБУ «Научный центр здоровья детей» РАМН, г. Москва Группа воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК), включающая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, представляет серьезную проблему в детской гастроэн терологии. Выявление высоких концентраций провоспалительных цитокинов в биоптатах кишечника позволяет считать нарушение в местной продукции цитокинов одним из ключевых патогенетических механизмов развития ВЗК. Считают, что развитие хронического воспаления является результатом потери толерантности к собственной микробиоте кишечника. Дисбиоз кишечника рассматривается некоторыми исследователями как возможный этиологический предшественник ВЗК. Целью работы было исследование цитокинового профиля в копроэкстрактах, полученных от детей с ВЗК, по сравнению с детьми, страдающими дисбиозом кишечника. Были обследованы 52 ребенка (29 мальчиков и 23 девочки) в возрасте от 7 до 17 лет. Из них 17 детей с болезнью Крона (1-я группа), 17 детей с неспецифическим язвенным колитом (2-я группа) и 18 детей проходили обследование в связи с дис биозом кишечника и составили 3-ю (контрольную) группу. Содержание в сыворотке и водно-солевом копроэкстракте 13 цитокинов: IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17, TNFα, TGFβ и IFNγ оценивали на двулучевом лазерном автоматическом анализаторе («BioPlex Protein Assay System», «Био-Рад Лаборатории», США) с использованием коммерческих тест-систем (определяемый динамический диапазон — 0,2–3200 пг/мл). В сыворотке крови выявлено значимое увеличение IL-17 и снижение TGFβ (p < 0,01) в 1-й и 2-й группах по сравнению с контрольной. Другие исследованные цитокины не различались во всех трех группах. В водно-солевых копроэкстрактах не было обнаружено IL-7, что соответствует современным представлениям о синтезе этого цитокина стромальными клетками лимфоидных органов. Также практически не выявлялся IL-8, кроме трех детей 1-й группы и трех детей 2-й группы, зато количество этого цитокина превышало 800 пг/мл. У большинства детей всех трех групп IL-5 был на нижней границе определения, но встречались дети с высоким (200–900 пг/мл) содержанием этого цитокина, независимо от диагноза. Воз можно, это означает сопутствующую сенсибилизацию к пищевым аллергенам у этих детей. Все другие изученные цито кины в копроэкстрактах детей из 1-й и 2-й групп значимо Ы ВОСПАЛЕНИЕ 126 Том 13 № 1 2014 Тезисы (p < 0,01) превышали количество соответствующих цитокинов у детей из 3-й группы. Однако количество провоспали тельных цитокинов, таких как IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, TNFα и IFNγ было повышено в 10 и более раз. В то же время, количество противовоспалительных цитокинов IL-10 и TGFβ превышало показатели контрольной группы только в 3–5 раз, что говорит о сдвиге баланса в сторону провоспалительных цитокинов. IL-17 также был повышен в 4 раза в 1-й и 2-й группах по сравнению с 3-й (p < 0,01). Изменения в цитокиновом профиле сыворотки крови оказались менее выраженными, чем в копроэкстрактах. При этом определение цитокинов в копроэкстрактах является неинвазивным и легко воспроизводимым методом. Топический эффект рекомбинантного IL-1β на динамику условно-патогенной микрофлоры носа в острый период сочетанной травмы носа и головного мозга А.В. Тюменев 1, В.В. Павлов 2, Е.В. Шабалдина 1, А.В. Шабалдин 1, 3 ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Кемерово; 2 ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» Минздрава России, г. Новокузнецк; 3 ФГБУ «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний» СО РАМН, г. Кемерово 1 Частота сочетанных травм носа и головного мозга остается на высоком уровне. Доказано, что травмы, протекающие с поражением головного мозга, приводят к формированию иммунной недостаточности и к развитию травматической болезни. Транзиторный иммунопарез в лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистыми носа и глотки, будет приводить к активации резидуальной микрофлоры данного биотопа и к формированию инфекционно-аллергического воспаления. Пролонгация воспалительного процесса может быть звеном патогенеза хронического посттравматического ринита. Неод нократно предлагалась иммуномодулирующая терапия в острый период сочетанной травмы. Исходя из этого, целью на стоящего исследования было изучение особенностей динамики резидуальной микрофлоры назального биотопа в острый период закрытого перелома костей носа и сотрясения головного мозга при проведении превентивной топической терапии рекомбинантным IL-1β. Обследованы 156 пациентов с закрытым переломом костей носа и сотрясением головного мозга в острый период. До репозиции костей носа проводили посев на питательные среды отделяемого носа с последующей идентификацией микроорганизмов. Повторное бактериологическое исследование назальной микробиоты проводили на 10-е сутки после репозиции. В момент репозиции 88 пациентам (основная группа) на носовые турунды наносили мазь «Колегель», содержащую рекомбинантный IL-1β. В группе сравнения (68 пациентов) носовые турунды были без «Колегеля». Рандомизацию по применению «Колегеля» проводили по дню недели (четный — «Колегель», нечетный — без «Колегеля»). Достоверность изменения показателей считали при ошибке менее 5 %. Исследование показало, что в основной группе на 10-й день после репозиции костей носа общий уровень инфицирования условно-патогенной микрофлорой назального биотопа достоверно уменьшился по отношению к дооперационному (5,43 ± 0,52 против 7,50 ± 0,35 ср. лог. титр, p < 0,05), в то время как в группе сравнения этот показатель достоверно не изменился (5,96 ± 0,57 против 6,62 ± 0,23 ср. лог. титр, p > 0,05). В основной группе достоверно снизился средний логарифмический титр Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mitis, Staphylococcus haemolyticus, Corynebacterium hatmani, в то время как в группе сравнения положительная динамика отмечена для Corynebacterium hatmanii и Streptococcus mitis. Тем самым, топическое применения рекомбинантного IL-1β в острый период сочетанной травмы носа и головного мозга прерывает инфекционно-аллергическое воспаление и предот вращает развитие хронического ринита. Оценка цитокинового профиля у гематологических больных с инвазивным аспергиллезом Е.В. Фролова 1, О.В. Шадривова 1, Л.В. Филиппова 1, А.Е. Учеваткина 1, А.Г. Волкова 2, М.О. Попова 2, Л.С. Зубаровская 2, Т.С. Богомолова 1, Н.В. Васильева 1, Б.В. Афанасьев 2, Н.Н. Климко 1 ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург; 2 НИИ детской гематологии и трансплантологии имени Р.М. Горбачёвой, ГБОУ ВПО ПСПбГМУ имени И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург 1 Инвазивный аспергиллез (ИА) — тяжелая микотическая инфекция, осложняющая течение гематологических заболе ваний. Основными предрасполагающими факторами возник новения ИА являются иммунодефициты, возникающие на фоне цитостатической или иммуносупрессивной терапии. Иммунологические особенности ИА при различных гемобластозах изучены недостаточно. Цель исследования — изучение особенностей цитокинового профиля у различных категорий гематологических больных с ИА. Для постановки диагноза ИА использовали критерии EORTC/MSG, 2008. ИА развился после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) у 32 пациентов и у 46 — после применения высокодозной цитостати ческой полихимиотерапии (ПХТ). В группу сравнения вклю чили 29 больных, у которых ИА исключен в ходе обследования. В контрольную группу вошли 20 практически здоровых людей. Индуцированную продукцию цитокинов определяли с помощью коммерческих ИФА тест-систем (ООО «Цитокин», ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Полученные результаты статистически обрабатывали с помощью программной системы «Statistica for Windows» (версия 6.0). Различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05. Все пациенты с момента постановки диагноза получали антимикотическую терапию. Общая выживаемость в течение 12 месяцев у реципиентов ТГСК составила 39 %, у пациентов после ПХТ — 84 %. Способность клеток крови к продукции TNFα, IL-6 и G-CSF была достоверно ниже у гематологических больных с ИА по сравнению с показателями пациентов без микотической инфекции. Выработка IFNγ снижена у обеих групп больных ИА по сравнению с контрольными показателя ми и у реципиентов ТГСК относительно данных группы сравнения. Снижение уровней IL-17 и IL-10 установлено у всех обследованных гематологических больных, однако наиболее низкая продукция выявлена у пациентов с ИА. Особенностью функциональной активности клеток крови больных с ИА после алло-ТГСК явилась самая низкая продукция всех исследуемых цитокинов. Установлена прямая корреляционная связь между общей выживаемостью больных с ИА и уровнями TNFα и IFNγ (r = 0,42 и r = 0,38, р < 0,05). Полученные результаты подтверждают важное значение провоспалительных цитокинов в формировании защитного клеточного иммунного ответа к грибковой инфекции. Вероятно, способность клеток крови к продукции TNFα и IFNγ являются маркерами благоприятного течения инвазивного аспергиллеза у гематологических больных. Информативность нетрадиционного цитофлуориметрического анализа клеток крови при различных заболеваниях С.В. Хайдуков ФГБУН Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, г. Москва; ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Минздрава России, г. Москва В последнее десятилетие проточная цитофлуориметрия стала одним из основных методов для диагностики нарушений функционирования иммунной системы и мониторинга за состоянием пациентов при последующей терапии. Однако набор маркеров, применяемых в настоящее время, для данных видов исследований, достаточно ограничен. Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 127 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Появление современных анализаторов и новой реагентной базы значительно расширило возможности цитофлуори метрии. Так, внутриклеточное окрашивание цитокинов, продуцируемых Т-хелперами, позволило выявить ряд их субпопуляций, играющих важную роль в развитии иммунного ответа (Th1, Th2, Th9, Th17, Th22). Для диагностики и мониторинга за состоянием пациентов широкое применение получили такие маркеры как CD38, CD45RA и CD45RO. Не менее важным и информативным является определение функционального состояния других популяций клеток крови, таких как моноцитов и нейтрофилов. Использование CD64- и HLA-DR-антигенов позволяет быстро и достоверно судить о состоянии пациента при сепсисе. Перспективным направлением является определение репертуара vβ-субъедениц TcR для выявления клональности Т-клеток при лимфопролиферативных заболеваниях. Таким образом, использование новых возможностей метода проточной цитофлуориметрии значительно расширяет информативность исследований и сокращает время с момента забора исследуемого образца до получения конкретного результата. проводимой с использованием диагностического набора производства «НПО Биомед им. Мечникова» (г. Петрово-Дальнее). Чувствительность определения антител при помощи раз работанной системы выше, в среднем, в 2–4 раза, чем в рефе ренсной тест-системе. В контрольных сыворотках не было выявлено антител, что свидетельствует о корректном функ ционировании сконструированной аналитической системы. У детей в возрасте до 6 мес обнаружены антитела к B. pertussis в низких титрах (менее 1/40), вероятно, трансплацентарного происхождения, не детектируемые при помощи РА. Среди получивших ревакцинацию от коклюша выявлены дети, имевшие титр антител ниже протективного (1/160). Сконструированная дот-аналитическая система является более оперативной (2 против 24 ч), простой и наглядной в сравнении с повсеместно применяющейся в клинической практике реакцией агглютинации. Работа выполнена при частичной поддержке программы президиума РАН «Фундаментальные науки — медицине» 12-П-4-1004. Влияние этиотропной терапии на индукцию специфического иммунитета при экспериментальной туляремийной инфекции у белых мышей и морских свинок Система индивидуальной оценки напряженности иммунитета к коклюшу П.В. Храмцов, М.С. Бочкова, М.Б. Раев М.В. Цимбалистова, Н.В. Павлович ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, г. Пермь Ростовский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону Коклюш — острое инфекционное заболевание, вызываемое Bordetella pertussis (B. pertussis). Наибольшая заболеваемость коклюшем наблюдается у детей в возрасте от 1 до 7 лет. По этой причине большое значение имеет вакцинопрофилактика заболевания в первые месяцы жизни ребенка. Оценка эффективности мероприятий по иммунизации детей осуще ствляется на популяционном уровне по показателям охвата населения вакцинацией, уровня заболеваемости, напряженности коллективного иммунитета. Индивидуальный подход к оценке эффективности вакцинопрофилактики, учитывающий особенности иммунного ответа ребенка на конкретный антиген, реализуется в единичных случаях. Во многом это связано с недостаточным развитием системы клинических лабораторий, особенно в отдаленных регионах, низкой осведомленностью родителей о возможности таких исследований и несовершенством существующих методов серологической диагностики. Целью нашей работы являлась разработка системы индивидуального мониторинга напряженности поствакцинального иммунитета к коклюшу на основе диагностикума, представля ющего собой углеродные наночастицы, функционализиро ванные G-белком стрептококка. Такая система способна оперативно оценить результативность профилактических мер в каждом индивидуальном случае, и, при необходимости, скорректировать график последующей иммунизации. На диски из нитроцеллюлозной мембраны («Био-Рад Лаборатории», США) диаметром 5 мм сорбировали дотами из капель суспензию инактивированных клеток возбудителя ко клюша («Микроген», г. Пермь) в фосфатном буфере рН 7,25 (ФБ) в концентрации 10 МОЕ. Диски промывали в ФБ с твином (ФБТ) и инкубировали 30 мин с 10 разведениями сыворотки крови кратными двум, начиная с разведения 1/10. Для тестирования использовали сыворотки детей в возрасте от 2-х недель до 17 лет с различным прививочным анамнезом по АКДС. В качестве отрицательных контрольных образцов использовали сыворотки детей, в возрасте более 6 мес, не вакцинированных АКДС. После инкубации с сыворотками диски трехкратно промывали и помещали в раствор диагностикума в ФБТ на 15 мин. В качестве диагностикума использовали углеродные наночастицы, ковалентно функционализированные G-белком стрептококка, синтезированные по оригинальной методике. О наличии в сыворотке крови антител к B. per tussis свидетельствует темное окрашивание в зоне сорбции антигена, видимое невооруженным взглядом. Титр антител определяли по последней визуализируемой точке в ряду серийных разведений сыворотки. Параллельно титр антител в сыворотках крови определяли в реакции агглютинации (РА), Ц И Т О иК И Н Как известно, туляремийный микроб характеризуется природной устойчивостью к β-лактамным антибиотикам (пенициллины и цефалоспорины), макролидам, полимиксину, клиндамицину и линкомицину. Данные литературы по эффективности тетрациклинов при туляремийной инфекции противоречивы. В этой связи выбор средств для этиотропной терапии туляремии весьма ограничен: аминогликозиды, рифампицин и фторхинолоны. Вместе с тем, наиболее опти мальными для лечения любого инфекционного процесса являются препараты, которые наряду с высокой терапевтической активностью не препятствуют индукции специфического иммунитета. К сожалению, систематизированные сведения по влиянию антибактериальных препаратов на индукцию спе цифического протективного иммунитета при туляремии от сутствуют, что и определило цель настоящей работы. Для этого беспородных белых мышей (не менее 10 в группе) или морских свинок (не менее 6 в группе) заражали 1 000 DCL (103 м.кл.) эталонными вирулентными штаммами Francisella tularensis трех основных подвидов (subspp. tularensis, mediasiatica, holarctica) и через 24 ч проводили 7-дневный курс ле чения среднетерапевтическими дозами стрептомицина, гентамицина, амикацина, рифампицина, ципрофлоксацина, моксифлоксацина, левофлоксацина и доксициклина. Через 20–25 дней после окончания лечения выживших животных заражали повторно вирулентным штаммом F. tularensis subsp. holarctica 1 000 DCL. Протективный эффект оценивали по количеству выживших животных в течение 30 дней. Как установлено, этиотропная терапия туляремийной ин фекции изученными антибиотиками обеспечивала выживание 80–100 % лабораторных животных. Исключение составил доксициклин, который обладал не только слабой терапевтической активностью (10–30 % вы живших мышей), но и токсичностью для морских свинок (животные на фоне лечения антибиотиком погибали раньше, чем в контрольной группе). При анализе специфических антител в сыворотках вы живших после лечения животных зарегистрирован крайне низкий титр иммуноглобулинов (≤ 1/10). Более того, вне зависимости от использованного антибиотика от некоторых из них нам удалось выделить культуру возбудителя. При этом удивительным представляется тот факт, что при наличии в организме хозяина туляремийного микроба формирование противотуляремийного иммунитета не зарегистрировано, т. е. все препараты обладали выраженным иммуносупрессивным действием. Ы ВОСПАЛЕНИЕ 128 Том 13 № 1 2014 Тезисы Подтверждением этому могут служить результаты пов торного заражения животных, при котором белые мыши и морские свинки погибали от типичной туляремийной инфекции. Таким образом, на модели острой экспериментальной туляремии у белых мышей и морских свинок установлено, что антибиотики, регламентированные для экстренной профилактики и лечения туляремии, при своей высокой эффективности препятствуют формированию протективного противо туляремийного иммунитета. Цитокины в формировании атопического дерматита у детей с пищевой аллергией И.Н. Чайникова 1, Л.Ю. Попова 1, Д.С. Хотян 1, В.В. Суменко 1, Л.В. Фурсова 2 ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России, Оренбург; 2 ГАУЗ «ООКБ № 2», Оренбург 1 Формирование атопического дерматита (АД) у новорож денных с отягощенным генеалогическим анамнезом по атопии возможно уже в первые месяцы жизни. Роль цитокинов в формировании АД как осложненного течения пищевой ал лергии (ПА) окончательно не охарактеризована. Цель исследования — проспективная оценка риска формирования АД у детей с пищевой аллергией по уровню про- и противовоспалительных цитокинов, общего IgE в сыворотке пуповинной и венозной крови. В исследование включены 3 группы новорожденных детей: 1-я группа (n = 45) — дети с ПА, осложненной АД, 2-я группа (n = 40) — дети с ПА, рожденные от матерей с отягощенным аллергологическим анамнезом, 3-я группа (контрольная, n = 30) — здоровые дети от здоровых матерей. Уровень цитокинов (IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFNα, IFNγ) и общего IgE определяли ИФА с использованием наборов произ водства ООО «Цитокин», «Диаплюс». Математическую обра ботку полученных результатов проводили с использованием пакета программ «Statistiсa 6.0». В целях систематизации всей совокупности признаков и выявления параметров, определяющих риск развития АД, были определены отношения шансов (ОШ) с 95 % доверительным интервалом и проведен фак торный анализ. Установлено достоверное увеличение в сыворотке пуповинной и венозной крови уровней IL-4, IL-10, общего IgE у детей 1-й группы по сравнению со 2-й и 3-й группами (р < 0,001). Напротив, содержание IFNγ как в пуповинной, так и в венозной крови у детей 1-й группы было достоверно ниже по сравнению со 2-й и 3-й группами (р < 0,001). Значимых различий у детей 1-й и 2-й групп в содержании IL-6, IL-8 в сыворотке пуповинной и венозной крови не выявлено. Установлена прямая корреляционная зависимость между наличием отягощенного генеалогического анамнеза по атопии и содержанием в пуповинной и венозной крови IL-4 (r = 0,61, р < 0,001), IL-10 (r = 0,55, р < 0,001), общего IgE (r = 0,71, р < 0,001), обратная — с IFNγ (r =–0,64, р < 0,001). При оценке показателя ОШ и его доверительного интервала было установлено, что наиболее существенными в развитии АД у детей с ПА среди показателей пуповинной крови являются: IFNγ (ОШ 13,75 [14,42;13,08]), общий IgE (ОШ 6,06[6,53; 5,59]), IL-10 (ОШ 10,45[11,05; 9,85]), IL-4 (ОШ 7,78[8,30; 7,25]); в венозной крови — IFNγ (ОШ 2,85 [3,17; 2,52]). Проведенный факторный анализ показал, что среди трех совокупностей идентифицированных факторов, составляющих 39,3 % общей дисперсии, наибольший вес имел 1 фактор (собственное значение — 3,36; процент объясняемой дисперсии — 15,03), обратно коррелирующий с IFNγ и IFNα пуповинной крови. Альтернативную группу составили уровень общего IgE в сыворотке пуповинной и венозной крови. Таким образом, наиболее информативными для оценки риска развития атопического дерматита у детей с пищевой аллергией, рожденных от матерей с отягощенным аллергологическим анамнезом, являются уровни цитокинов Th1- (IFNγ) и Th2(IL-4, IL-10) типов, общего IgE, IFNα, определяемых в пуповинной крови и содержание общего IgE и IFNγ — в сыворотке венозной крови. Факторы риска летального исхода новорожденных с экстремально низкой массой тела Г.Н. Чистякова, И.И. Ремизова, И.А. Газиева, Б.Т. Чарипова ФГБУ «НИИ ОММ» Минздрава России, Екатеринбург Дети с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ), вес которых при рождении менее 1 000 г, составляют около 0,5 % от всех живорожденных. Доля выживших детей повышается с увеличением гестационного возраста: среди детей 22 недель гестации выживают до 2 %, 23 недель — до 13 %, 24 недель — до 35 %, 25 недель — до 56 %. Цель исследования — определение факторов риска ле тального исхода новорожденных с экстремально низкой массой тела в неонатальном периоде и младенческом возрасте. Проведено обследование 102 новорожденных с экстремально низкой массой тела (< 1 000 г), родившихся на 22–31 неделе беременности, из них 23 ребенка, умерших в период наблюдения и 79 младенцев, выписанных из стационара живыми. В пуповинной крови определяли содержание CD3+IFNγ+-, CD3+IL-4+-клеток, уровни сывороточных IL-4 и IFNγ, C-реактивного белка, гаптоглобина, лактоферрина, ферритина, церулоплазмина. Гемограмму периферической крови и концентрацию прокальцитонина оценивали на 1-е сутки жизни. Гестационный возраст детей с летальным исходом составил 25,95 ± 1,74 недели против 27,23 ± 1,79 недели в группе вы живших новорожденных (р = 0,003). Глубоко недоношенные новорожденные с летальным ис ходом имели более низкие антропометрические показатели (массу и длину тела, окружность головы и груди) при рожде нии. У всех обследованных детей наблюдалось гипоксическиишемическое поражение ЦНС в виде церебральной ишемии III степени. Не обнаружено межгрупповых различий в частоте развития бронхолегочной дисплазии тяжелой степени и пневмонии. За период пребывания в стационаре у новорож денных, умерших в период наблюдения, достоверно чаще, чем у выживших новорожденных, регистрировалось развитие генерализованной инфекции (сепсис) и формирование внутрижелудочковых кровоизлияний III степени тяжести с гемотампонадой. В ходе проведенного исследования было установлено, что летальный исход детей с ЭНМТ связан с повышением уровня IFNγ, снижением содержания IL-4 в сыворотке пуповинной крови и увеличением концентрации прокальцитонина, а также снижением гематологических показателей (гемоглобина, эритроцитов, тромбоцитов) на 1-е сутки жизни. Это свидетельствует о нарушении баланса сывороточного профиля цитокинов и истощении компенсаторных возможностей костномозгового кроветворения. Вышеназванные сдвиги у детей с летальным исходом сопровождались повышением уровня гаптоглобина, развитием генерализованной инфекции и тя желой неврологической патологии. Таким образом, определение уровня IFNγ, IL-4 и гаптоглобина в пуповинной крови, а также содержание гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов в первые сутки может служить дополнительным критерием в оценке выживаемости новорожденных с экстремально низкой массой тела в период выхаживания в условиях стационара. Работа поддержана Грантом РФФИ и РФФИ-Урал № 13-04-96080. Опыт применения препарата рекомбинантной супероксиддисмутазы Рексод® у больных локально обусловленной эпилепсией И.В. Чурилова 1, Е.Е. Дубинина 2, Л.В. Липатова 2, А.В. Василенко 2, Н.В. Леонова 1, Д.А. Егорова 1, Д.В. Алексеева 2, Н.А. Сивакова 2 1 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России; ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский психоневрологический институт имени В.М. Бехтерева» Минздрава России 2 Как известно, при большинстве патологических состояний, возникающих в организме человека на клеточном уровне, происходят процессы альтерации, ведущим механизмом ко торых является окислительный стресс. В связи с этим, в тера- Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 129 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы Ц И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ 130 Том 13 № 1 2014 Тезисы пии заболеваний различной природы большое значение имеют препараты, способствующие защите и восстановлению клеток (Коган А.Х., 1999; Elejalde Guerra J.I., 2001; Das U.N., 2001). Среди подобных соединений особое внимание привлека ют антиоксиданты, способные контролировать и модулировать окислительные процессы в клетке. Ключевым ферментом антиоксидантной защиты (АОЗ) организма является супероксиддисмутаза (СОД), осуществляющая дисмутацию супероксидного радикала (О2-) — продукта одноэлектронного восстановления молекулярного кислорода, который образуется практически во всех клетках организма, контактирующих с кислородом, и является родоначальником активных форм кислорода (АФК). Прерывая цепь свободно-радикальных процессов в начале своего зарождения на стадии одноэлектронного восстановления кислорода, СОД предотвращает даль нейшую генерацию АФК, в том числе токсичного гидроксильного радикала (OH), защищает белки, липиды, нуклеиновые кислоты, углеводы от окислительной деструкции. В ряде научных публикаций доказано, что окислительный стресс, сопровождаемый нарушением антиоксидантной защиты (ферментативной и неферментативной), может рассматриваться в качестве одного из патогенетических звеньев многих заболеваний, к числу которых относится эпилепсия. Исходя из этого, целесообразным является использование в клинической практике лекарственных форм, обладающих антиокси дантным действием, таких как препараты на основе СОД человека (Черепак Л.Н. и др., 1998; Davis J.M., Rosenfeld W.N. et al., 2000). Одним из новых отечественных лекарственных препаратов, является Рексод® (производство ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России), обладающий антиоксидантным, антицитолитическим и противовоспалительным действиями. Основным действующим веществом препарата «Рексод®» является рекомбинантная супероксиддисмутаза (СОД) человека, получаемая из дрожжей Saccharomyces cerevisiae, штамм Y2134. Цель работы — изучение состояния антиоксидантной си стемы у больных эпилепсией (БЭ) до и после введения препарата «Рексод®» посредством оценки динамики клинико-лабораторных показателей. Материалы и методы. Обследованы 58 больных эпилепсией (БЭ) (из них 20 женщин и 38 мужчин, средний возраст — 36,8 года), которым препарат «Рексод®» вводили внутривенно капельно, со скоростью 200 мл/час в течение 7–10 дней. Разовая доза составляла 3,2 млн. ЕД в 200 мл 0,9 % NaCl. О состоянии ферментативного звена антиоксидантной системы судили по активности СОД цельной крови. Для оценки тиолового статуса проводили исследование в плазме крови концентрации SH-групп. Эффективность лечения больных осуществляли посредством балльной оценки динамики общего клинического впечатления «СGI» по шкале «Clinical Global Impression Scale» (Guy W., 1976), частоты и тяжести эпилептических припадков «National Health Seizure Severity Scale — NHS-3» (O’Dono ghue M.F. et al., 1996) до и после лечения Рексод®. Полученные данные обрабатывали посредством стандартных статистических методов. Результаты и обсуждение. Нами выявлено, что активность СОД крови БЭ была ниже показателей нормы на 39 % (15 367,8 ± 3 042,2 и 25 000 ± 5 000 ЕД/мл, соответственно), что согласуется с литературными данными (Ben-Menachem E. et al., 2000; Dan Chen et al., 2012), уровень SH-групп у БЭ также был несколько ниже аналогичного показателя нормы (23,61 ± 3,06 и 24,0 ± 2,0 мкм/л). После курса лечения Рексод® было отмечено достоверное увеличение уровня СОД в крови БЭ (18 039 ± 2 792 ЕД/мл, р<0,05) и тенденция к увеличению уровня SH-групп, не достигавшая уровня достоверности (25,54 ± 2,64). Кроме того, отмечена корреляция между положительной динамикой сравниваемых биохимических показателей, отражавших состояние антиоксидантной системы БЭ, и улучшением общего самочувствия больных, достижением контроля над припадками и более высокими оценками по шкале CGI после лечения Рексод®. Таким образом, установленные закономерности в биохимических показателях при эпилепсии имеют определенную специфичность и могут свидетельствовать об истощении ме ханизмов антиоксидантной защиты, что является актуальным для разработки новых перспективных методов антиоксидантной фармакотерапии. Персонификация локальной иммунотерапии при тонзиллярной патологии у часто и длительно болеющих детей раннего и дошкольного возраста Е.В. Шабалдина 1, А.В. Шабалдин 1, 2, С.В. Рязанцев 3, А.С. Симбирцев 4 ГБОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия Минздрава России; 2 ФГБУ «НИИ Комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний» СО РАМН, г. Кемерово; 3 ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ уха горла носа и речи» Минздрава России; 4 ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России 1 Проблема часто и длительно болеющих детей с тонзиллярной патологией остается актуальной для современной отече ственной педиатрии и оториноларингологии. Больше половины этих детей имеют аллергические заболевания. Тем самым, для данной группы пациентов характерны инфекционный, лимфопролиферативный и аллергический синдромы иммунопатологии, для лечения которой необходимо проводить иммуномодулирующую терапию. Известно, что в раннем возрасте применение лекарственных форм с иммуномодулирующим эффектом ограничено препаратами иммуноглобулинов, интерферонов и некоторых аналогов тимусных гормонов (назальная форма тимогена). Исходя из этого, целью настоящего исследования был поиск персонифицированных патогенетически обоснованных подходов к топической иммуномодулирующей терапии у детей с рецидивирующими респираторными ин фекциями и тонзиллярной патологией. Первично обследовали 40 здоровых детей, у которых изу чали концентрации цитокинов (IL-1β, IL-1Ra, IL-4, TNFα, IFNα) в назофарингеальном смыве. Были получены интервалы нормальных значений (среднее значение ± 1,5 значения стандартного отклонения) каждого из изучаемых цитокинов. В дальнейшем дополнительно обследовали (на концентрацию цитокинов в назофарингеальном смыве) и пролечили (фонофорезом на небные миндалины препаратом «Колегель», содержащего рекомбинантный интерлейкин 1β) 86 детей с рецидивирующими острыми респираторными инфекциями (более 4 раз в год), с гипертрофией небных миндалин II/III степени, с тонзиллярной патологией (рецидивирующие тонзиллиты и фарингиты), а также с дефицитом в назофарингеальном секрете IL-1β (ниже 5,1 пг/мл). Концентрацию цитокинов смотрели до начала лечения и через 7 дней после его окончания. Было показано, что после лечения средний уровень IL-1β стал достигать 5,95 ± 0,11 пг/мл (p < 0,05), что выше нижнего предела нормального значения данного цитокина для назофаренгиального смыва. Средний уровень IL-1Ra снизился до 116,37 ± 12,67 против 145,46 ± 15,83 пг/мл до начала лечения (p < 0,01). Анализ острой респираторной заболеваемости за 6 месяцев после окончания лечения показал достоверное снижение частоты ОРВИ (с пересчетом на годовую заболеваемость: 6,12 ± 0,29 случай/год против 3,85 ± 0,31 случай/год после ле чения, p < 0,05). Тем самым, было показано, что проведение топической терапии рекомбинантным интерлейкином 1β у часто и длительно болеющих детей с тонзиллярной патологией должно быть персонифицировано по локальному уровню замещаемого цитокина. Поиск молекулярно-генетических маркеров профессиональной бронхиальной астмы А.У. Шагалина, Д.Р. Байзигитов, Д.О. Каримов, А.Б. Бакиров ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека», г. Уфа Профессиональная бронхиальная астма (ПБА) — это заболевание, в основе которого лежит хроническое воспаление Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 131 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы дыхательных путей, характеризующееся обструкцией, а также гиперреактивностью бронхов, обусловленное контактом со специфическими производственными агентами. В развитии ПБА участвуют множество механизмов, одним из которых является полиморфизм генов, продукты которых задейство ваны в патогенезе атопии. Молекулярно-генетические маркеры могут помочь в дифференциальной диагностике ПБА, в предсказании развития и течения этого заболевания. Исходя из этого, целью работы являлось изучение у больных ПБА Республики Башкортостан ассоциации частот полиморфных локусов rs2069812, rs1800925 с развитием ПБА. Нами были обследованы 105 пациентов, находившихся на стационарном лечении в отделении профессиональной аллер гологии и иммунореабилитации ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека» с диагнозом ПБА. Конт рольная группа сформирована из 354 неродственных инди видуумов, не имевших признаков ПБА на момент сбора ма териала. Выделение ДНК проводили методом фенольно-хлороформной экстракции. Изучение полиморфных локусов rs2069812, rs1800925 — методом полимеразной цепной реакции. Статистическую обработку результатов осуществляли при помощи программ «Statistica 7.0», «MicrosoftExcel». Распределение частот изученных полиморфных локусов rs2069812, rs1800925 в группах больных и здоровых индивидов соответствовало ожидаемому по равновесию Харди — Вайнберга. В группе больных ПБА достоверно чаще встречался генотип СС по сравнению с группой контроля (31 и 12 %, соответственно, χ2= 19,59; p = 0,001). Напротив, генотип TT достоверно чаще встречался в группе здоровых индивидов (44 %), тогда как его частота в группе больных ПБА составила 28 % (χ2= 8,43; p = 0,005). Частота аллеля С полиморфного локуса rs2069812 гена IL5 в группе больных ПБА достоверно больше, чем в группе контроля (52 и 34 %, соответственно, χ2= 20,80; p = 0,001). Существенные различия также наблюдались по частотам аллеля T, 66 % в контрольной группе и 48 % в группе больных ПБА (χ2= 20,80; p = 0,001). По частотам генотипа CT достоверных различий не обнаружено. При статистическом анализе частот генотипов аллелей полиморфного локуса rs1800925 гена IL13 группы больных ПБА и группы здоровых индивидов статистически значимы различия найдены не были (χ2= 0,02; p = 0,889 и χ2= 0,77 p = 0,381 для генотипов СС и ТТ, соответственно). Также не было обнаружено статистически значимых различий и при сравнении групп по наличию осложнений и степени тяжести болезни. Таким образом, в результате исследования было показано, что маркерами риска развития профессиональной бронхиальной астмы являются генотип СС (OR = 3,23; 95 % CI 1,92-5,42) и аллель С (OR = 2,07; 95 % CI 1,52-2,8) полиморфного локуса rs2069812 гена IL5. Подтверждающие тесты в доклинических испытаниях штаммов для живых противовирусных вакцин О.А. Шамсутдинова 1, И.Н. Лаврентьева 2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинской приматологиии» РАМН, г. Сочи; 2 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург 1 Вакцинные штаммы живых вакцин для профилактики полиомиелита, гриппа, кори, эпидемического паротита (ЭП), краснухи должны подвергаться контролю их специфической безопасности как в процессе получения, так и при серийном производстве соответствующих вакцинных препаратов. Ос новной критерий специфической безопасности — контроль остаточной нейровирулентности (НВ) на лабораторных приматах. В настоящее время схема проведения такого исследования включает интрацеребральное заражение обезьян исследуемыми штаммами вируса с последующей аутопсией, приготовлением гистологических срезов тканей центральной нервной системы (ЦНС) и внутренних органов животных. Оцен- Ц И Т О иК И Н ка отсутствия или наличия вирусспецифических поражений проводится макроскопически и при микроскопии срезов. В том и другом случаях — визуально. Учитывая особую важность заключения о безопасности применения вакцин, действующим началом которых являются хоть и ослабленные, но живые нейровирулентные вирусы (кори, гриппа, полиомиелита, ЭП), весьма актуальной представляется разработка подтверж дающих тестов, основанных на современных методах лабораторной диагностики. Цель исследования — оценка возможности применения метода ПЦР для подтверждения результатов морфологического и гистологического методов на примере оценки специфической безопасности вакцинных штаммов вируса краснухи «Орлов-В» и Wistar RA27/3 в опыте на обезьянах макакарезус. В работе использованы патоморфологические, гистологи ческие и вирусологические методы исследования. В ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией вы являли РНК вируса краснухи в аутопсийном материале (лимфатические узлы, кусочки легкого, поджелудочной железы, печени и селезенки) четырнадцати самцов макак-резусов, зараженных интрацеребрально препаратом из штамма «ОрловВ», коммерческой вакциной против краснухи Rudivax, содер жащей вакцинный штамм Wistar RA27/3, а также контрольных животных (группа плацебо). Для подготовки и проведения метода ПЦР использовали набор реагентов «АмплиСенс RubeIIa virus-FL» («ЦНИИЭ», г. Москва). Проведенное исследование по индикации РНК вируса краснухи в аутопсийном материале не выявило ни одного положительного случая, что соответствует результатам гистологического исследования и является свидетельством безопасности вакцинных штаммов вируса краснухи. Таким образом, метод детекции нуклеиновой кислоты вируса может быть использован в качестве подтверждающего теста и дополнять патоморфологические ис следования при оценке специфической безопасности противовирусных вакцинных препаратов. Биотехнологические препараты из гидробионтов и их фармакология А.Н. Шиков, О.Н. Пожарицкая, М.Н. Макарова, В.Г. Макаров ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации, Санкт-Петербург Одним из современных активно развивающихся направлений биотехнологии является «синяя биотехнология», специализирующаяся на применении организмов и процессов морской биологии. В центре исследований находятся биологические организмы мирового океана. Количество научных публикаций о новых соединениях из морских организмов показывает ус тойчивую тенденцию роста. По разным оценкам из морских гидробионтов выделено от 10 000 до 18 000 химических соеди нений, многие из которых обладают фармакологической ак тивностью. Уникальность биологически активных веществ гидробионтов обусловлена тем, что они являются вторичными метаболитами, то есть природными соединениями, не имеющими всеобщего распространения и присутствующими только у представителей отдельных таксонов или даже одного вида. Из гидробионтов выделены соединения, используемые в терапии рака, вирусных, микробных, грибковых инфекций, заболеваний сердечно-сосудистой системы, противовоспалительные средства, иммуномодуляторы и др. Чаще всего из гидробионтов выделяют: пептиды, полисахариды, полинена сыщенные жирные кислоты, антиоксиданты, ферменты, витамины и минералы. С использованием оригинальных биотехнологических подходов нами выделены и изучаются высокоэффективные комплексы из гидробионтов с антиоксидантными, противовоспалительными, иммуномодулирующими, антигипертензивными и другими свойствами. Нами установлены структуры и изучены антиоксидантное, антигистаминное, противовоспалительное и регенерирующее Ы ВОСПАЛЕНИЕ 132 Том 13 № 1 2014 Тезисы эффекты полигидроксинафтахинонов, выделенных из морских ежей. Селективное ингибирование ЦОГ-2, ингибирование фосфорилирования МАР-киназы р38 было обнаружено у комплекса из внутренностей морских ежей. Липидный комплекс гонад морского ежа оказывал положительное влияние на уровень глюкозы, способствовал репарации поджелудочной железы и снижению артериального давления в экспериментах in vivo. Исследование морских организмов как источников биологически активных соединений, их дальнейшая химическая трансформация, получение синтонов является важной частью биотехнологии и медицины. Интенсивность этих исследований возрастает в последние годы и приобретает все большее значение. Изменение количественного состава и фагоцитарной активности перитонеальных клеток при экспериментальном тиреотоксикозе у крыс Ю.И. Шилов, А.П. Годовалов, А.Л. Зенков ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, г. Пермь Известно, что тироксин может быть медиатором стимуляции фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов (Forner et al., 1996). Тиреоидные гормоны стимулируют продукцию макрофагами оксида азота, опосредованную индуцибельной NO-синтазой, где задействован негеномный путь с вовлечением протеинкиназ PI3K и ERK1/2 (Chen et al., 2012). Однако изменения функций перитонеальных мононуклеарных фагоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и мастоцитов при экспериментальном тиреотоксикозе изучены недостаточно. Цель работы — исследование изменения количественного состава и фагоцитарной активности перитонеальных клеток при экспериментальном тиреотоксикозе у крыс. Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 25 самцах белых крыс с исходной средней массой 313 ± 4 г. Для модели рования тиреотоксикоза ежедневно подкожно вводили L-тироксин в течение 14 дней в суточной дозе 0,04 мг/кг массы тела. Крысы контрольной группы получали растворитель препаратов. На 10-е сутки от начала эксперимента всех животных сенсибилизировали эритроцитами барана (10 8 клеток подкожно в правую стопу). На 4-е сутки после сенсибилизации вводили разрешающую дозу антигена (109 эритроцитов в правую стопу). Через 24 ч (15-е сутки эксперимента) оценивали количественный состав перитонеальных клеток и их фагоцитарную активность по отношению к формалинизированным эритроцитам барана. Статистический анализ результатов проводили с использованием методов описательной статистики и непарного варианта t-критерия Стьюдента. Результаты и обсуждение. Установлено, что при экспери ментальном тиреотоксикозе абсолютное количество всех перитонеальных лейкоцитов составляет 163,6 ± 2,9 млн. клеток, а в контрольной группе — 122,8 ± 13,5 млн. клеток (p = 0,007). У животных с тиреотоксикозом в сравнении с контролем выявляется статистически значимое увеличение абсолютного числа перитонеальных лимфоцитов (в опытной группе — 85,0 ± 5,6 млн. клеток, а в контрольной — 51,6 ± 7,7 млн. клеток; p = 0,0098). Абсолютное количество перитонеальных мононуклеарных фагоцитов, нейтрофильных гранулоцитов и тучных клеток статистически значимо не отличается от контрольной группы. При оценке фагоцитарной активности перито неальных клеток установлено, что относительное число активно фагоцитирующих мононуклеарных фагоцитов (захвативших 2 и более объекта фагоцитоза) при экспериментальном тиреотоксикозе (25,67 ± 2,22 %) статистически значимо ниже, чем в контрольной группе (33,33 ± 2,66 %; p < 0,05). Таким образом, при экспериментальном тиреотоксикозе у крыс наблюдается увеличение общего числа перитонеальных лейкоцитов с преимущественным увеличением количества лимфоцитов и снижение относительного числа активно фагоцитирующих клеток моноцитарно-макрофагального ряда. Содержание антимикробного пептида кателицидина в динамике неонатального периода у недоношенных новорожденных с дыхательными нарушениями Н.А. Шилова, Т.В. Чаша, М.А. Родина, Г.Н. Кузьменко ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, г. Иваново Актуальность. В настоящее время доказана роль генетически детерминированного иммунологического ответа, в частности эндогенных микробных пептидов (АМП), в защите новорожденного ребенка от инфекционных заболеваний. Одним из представителей АМП является кателицидин LL 37 (КЦ LL 37). Он проявляет антимикробную активность как против грамотрицательных, так и против грамположительных бактерий, грибов, некоторых вирусов и простейших. У новорожденных уровень КЦ LL37 повышается при язвенно-некротических энтероколитах, воспалительных заболеваниях легких, сепсисе. В то же время в литературе отсутствуют сведения о содержании кателицидина в динамике неонатального периода. Цель работы — выявление динамики содержания КЦ LL37 в сыворотке крови у глубоко недоношенных новорожденных с дыхательными нарушениями в неонатальном периоде. Материалы и методы. Обследованы 104 ребенка с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ), имевших дыхательные нарушения. Гестационный возраст детей — менее 32 недель. Были выделены 2 группы наблюдения: 1-я группа — 36 детей с респираторным дистресс-синдромом (РДС), 2-я — 68 детей с врожденной пневмонией. Забор крови осуществляли в 1-й день жизни и повторно в возрасте 1 месяца. Содержание кателицидина определяли методом ИФА реактивами фирмы «Hycult biotech» (Нидерланды) на автоматическом анализаторе «ELх808», фирма «ВIО-ТЕК INSTRUMENTS» (США), в нг/мл. Результаты и обсуждение. Уровень кателицидина в сыворотке крови, полученной в 1-е сутки жизни, во всех группах значимо не различался. В динамике неонатального периода было выявлено значимое увеличение содержания КЦ к возрасту 1-го месяца жизни во всех исследуемых группах. Это может быть результатом усиления антигенных влияний со стороны факторов внешней среды на организм ребенка после рождения. Кроме того, учитывая, что функциональная активность нейтрофилов у новорожденных снижена, а антимикробные пептиды являются маркерами системной активации нейтрофилов, то увеличение уровня КЦ в крови к 1-му месяцу жизни может также свидетельствовать о возрастании функциональной активности нейтрофилов в динамике неонатального периода у глубоко недоношенных новорожденных. Однако в возрасте 1-го месяца жизни уровень антимикробного пептида КЦ LL 37 в сыворотке крови был значимо выше у детей с РДС по сравнению с таковым у детей с врожденной пневмонией. Возможно, более низкий уровень защитного белка LL 37 в сыворотке крови у детей с врожденной пневмонией в 1 месяц жизни по сравнению с детьми с РДС может являться результатом развившейся недостаточности факторов врожденного иммунитета на фоне длительно текущего инфекционновоспалительного процесса в легких Новые иммунотропные средства для местного применения на основе кремний- и цинксодержащих глицерогидрогелей И.Н. Штанько 1, Т.Г. Хонина 1, Р.Р. Сахаутдинова 2, Л.П. Ларионов 2, И.А. Тузанкина 3 ФГБУН Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург; 2 ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Екатеринбург; 3 Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург 1 Учитывая актуальность использования иммунотропных средств для местного применения, авторами предложено средство, содержащее в качестве активной добавки галавит и гидрогель на основе глицеролатов кремния в качестве мазе Ц www.cytokines.ru, www.cytokines.uspb.ru 133 И Т О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Тезисы вой основы [Пат. РФ № 2470640, 2012]. Кроме того, был получен новый биологически активный кремнийцинксодержащий гидрогель на основе комбинированных глицеролатов кремния и моноглицеролата цинка, обладающий выраженным ранозаживляющим, регенерирующим, умеренным антибактериальным действием, а также иммунотропной активностью. Целью настоящей работы являлась сравнительная оценка иммунотропной активности разрабатываемых средств на примере экспериментальных животных. Оценку иммунотропной активности проводили на модели осложненного раневого процесса у крыс (механическая трав ма нижней части спины) популяции Wistar на фоне иммуносупрессии, вызванной введением гидрокортизона. Животные были разделены на 4 группы по 15 особей в каждой: крысам 1–3 групп в течение всего эксперимента ежедневно вводили гидрокортизон, крысам 4-й группы гидрокортизон не вводили. Крысам 1-й и 2-й групп на место ранения наносили тонкий слой (~0,2 г) исследуемых средств: кремнийцинксодержащего гидрогеля и средства с галавитом, соответственно, один раз в сутки до полного заживления; животные 3-й и 4-й групп лечения не получали. На 3-й, 8-й и 14-й дни эксперимента Ц И Т О иК И Н проводили гистологические и иммуногистохимические исследования тканей раневого участка кожи. Установлено, что на 8-й день эксперимента в 1-й группе на фоне применения кремнийцинксодержащего гидрогеля у 83 % животных фиксировали отхождение струпа, во 2-й и 4-й группе — у 33 % животных, в 3-й отхождения струпа не от мечено. На 14-й день эксперимента полная эпителизация ран в 100 % случаев наблюдалась в 1-й и 4-й группах. Во 2-й группе при использовании галавита эпителизация ран отмечена у 80 % животных, в случае 3-й группы — у 70 % животных. В результате гистологического и иммуногистохимического исследования раневого участка кожи также было показано, что наиболее благоприятное влияние на морфофункциональное состояние тканей оказывает кремнийцинксодержащий гидрогель. Таким образом, в эксперименте на лабораторных животных установлено, что наибольшей иммунотропной и ранозаживляющей активностью обладает кремнийцинксодержащий гли церогидрогель. Работа выполнена при финансовой поддержке Президиума УрО РАН — программа № 12-М-34-2071. Ы ВОСПАЛЕНИЕ 134 Том 13 № 1 2014 Авторский указатель к материалам конференции «СОВРЕМЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИММУНОФАРМАКОЛОГИИ, БИОТЕХНОЛОГИИ И ЦИТОКИНОВОЙ РЕГУЛЯЦИИ» А Абдулкеримов Х.Т. Абишева Н.Н. Абрамова Т.В. Абрамовских О.С. Агеев Ю.И. Агрба В.З. Акешова Н.А. Алексеева Д.В. Алиева А.И. Альшевская А.А. Андреева С.А. Антонов С.Ф. Антропова Н.В. Анушенко А.О. Анциферова Ю.С. Арипходжаева Г.З. Арискина О.Б. Аронова Н.В. Арсентьева Н.А. Асланян К.С. Афанасьев Б.В. Афонин А.А. Ахматова А.Н. Ахматова Н.К. Ащина Л.А. 109 85, 125 102, 103 85, 88 114 105 104 129 120 85, 108 114 86, 106 106 111 102 86 116 87 87 96 127 107 85 107 87 Б Бабаков В.Н. Байзигитов Д.Р. Бакиров А.Б. Баранова Н.И. Баратова Г.М. Басина В.В. Батрак Н.В. Батурина И.Л. Бахтин А.В. Бедулева Л.В. Безрукова Е.В. Беленичев И.Ф. Беловолова Р.А. Бельтюков П.П. Беспалова И.А. Бессмельцев С.С. Бобылева Г.В. Богданов И.В. Богомолова Т.С. Болдырев А.Г. Борзова Н.Ю. Бортникова Г.Э. Бочкова М.С. Брызгалова М.А. Бубнова Л.Н. Бурмистрова А.Л. Бутина Е.В. Бутома Б.Г. Бухтиярова И.П. Бушуева Т.В. Быкова Л.П. В Василенко А.В. Васильев Ф.Ф. Васильева Н.В. 118 131 131 87 104 87 123 85, 88 96 85, 88, 125 89 125 89 118 111, 114 115 126 89 127 106 97, 101 96 128 110 115 89, 124 98, 99 121 90 90 95 85, 121, 129 85 127 Васина О.И. Вахлова И.В. Венедиктова М.М. Вербицкая Н.Б. Виноградова Т.И. Витовская М.Л. Власова А.В. Власова О.Н. Войтенков Б.О. Войтенков В.Б. Волкова А.Г. Высочина О.В. Г Гаврилова М.В. Газиева И.А. Ганковская Л.В. Годовалов А.П. Голикова Е.А. Гольцова И.А. Гончаров М.А. Горбачь Т.В. Горбунова О.Л. Грибова Ю.В. Грозных Е.В. Громов Л.А. Гуреева Е.А. Гусев Е.Ю. Д Данилова Е.Ю. Дейко Р.Д. Демидова М.В. Демьянова В.Т. Деримедведь Л.В. Дитор М.П. Добролеж О.В. Добрынина М.А. Долгушин И.И. Долгушина В.Ф. Доненко Ф.В. Дорошенко Е.П. Дроговоз С.М. Дубинина Е.Е. Дубинина И.В. Дубровский Я.А. Дуванова О.В. 89 94 111 100 91, 94 91, 94 120 98 111 111 127 89 91 91, 129 120 95, 133 108 97 113 93 95 90 123 125 100 123 92 92 107 112 93 96 100 97 109 85 107 114 90 129 86 118 111 Е Евдокимов А.В. Евстигнеев В.И. Егорова Д.А. Егорова Т.С. Емелина Ю.Н. 89 100 129 93, 126 94 Ж Жанкин А.А. Жебрун А.Б. Железнова А.Д. Журавлева Ю.А. 104 105 123 94, 123 З Заболотных Н.В. Загоскина Т.П. 91, 94 98, 112 Задорина И.И. Зайцева Г.А. Закора Г.И. Заморина С.А. Зарубаев В.В. Зверева Н.Н. Зенков А.Л. Зинькович С.А. Златник Е.Ю. Зотина Е.Н. Зотова В.В. Зотова М.А. Зубаровская Л.С. Зуева Е.Б. Зурочка А.В. Зурочка В.А. И Иваненкова Н.И. Иванов В.Т. Иванов П.В. Иванова Е.Л. Иванова И.А. Иванова Н.А. Измайлова Т.Д. Исаева Н.В. Искрицкий В.Л. Ищенко А.М. К Кадырова Л.В. Каплина С.П. Капустин И.В. Капустина Т.В. Каратаев Г.И. Каримов Д.О. Картузова В.Е. Квятковская С.В. Кинкулькина А.Р. Киселёв О.И. Киселева А.К. Киселевский М.В. Клещенко Е.И. Климко Н.Н. Климович В.Б. Кобатов А.И. Ковалева С.В. Коженкова С.В. Колесникова Н.В. Колобова А.В. Коноплева О.С. Конторина Н.В. Копылов А.Н. Корал-Оглы Д.Д. Коробов В.П. Костоломова Е.Г. Котелева С.И. Кравченко Л.В. Красильников С.Э. Красильникова А.К. Крошкина Н.В. Круглеева О.Л. Крячко О.В. 95 98, 99 116 95 93, 119 101 133 116 96, 116 112 96 85, 88 127 97 97 97 97 111 88 124 111, 114 98 111 98, 99 93 90, 92, 93, 100, 125 97 99, 100 101 121 121 131 100 109 120 119 114 107 113 127 98 100 113 87 124 101 122 86 107 105 108 97 101 107 113 102 118, 123 85 102 Кубанов А.А. Кудряшова А.В. Кузнецова М.В. Кузьменко Г.Н. Кукушкина Е.А. Курбатова О.В. Курилин В.В. Курманова Г.М. Курносенко И.В. Л Лабзова А.К. Лаврентьева И.Н. Лазарева Ю.Ю. Ларионов И.В. Ларионов Л.П. Лебединская Е.А. Лебединская О.В. Левкович А.Ю. Левкович М.А. Лемкина Л.М. Леонова Н.В. Линде В.А. Липатова Л.В. Литвинов В.В. Логинова О.А. Ломтатидзе Л.В. Лопатникова Ю.А. Лукин В.А. Лысенко И.Б. Любимова Н.Е. www.cytokines.uspb.ru 135 90 105, 132 106 86, 106 133 107 107 107 107, 108 108 129 108 121, 129 108 95 113 85, 108 116 96 87 М Макаров В.Г. Макарова М.Н. Малышев М.Е. Малышкина А.И. Мамутова А.Е. Маркова В.А. Масленникова И.Л. Маслова Ю.А. Машинец О.О. Меджидова С.Р. Медкова А.Ю. Мезенцева Е.А. Меньшиков И.В. Мирошкина Л.В. Михалева И.И. Мишанькин Б.Н. Мозговая Л.А. Москалёв А.В. Мурадян В.Ю. 132 132 116 102, 118 104 109 104 115 109 110 121 85, 88 85, 110 111, 126 111 111, 114 95 112 89 Н Назаров П.Г. Назарова Е.Л. Некрасова И.В. Непомнящих В.М. Нестерова И.В. Нефедова Д.Д. Никушкина К.В. Новикова И.А. Ц www.cytokines.ru, 102, 103 103 104 133 101 111 113 104 105 И Т 98 112 104 85, 108 113 108 85, 88 96 О иК И Н Ы ВОСПАЛЕНИЕ Авторский указатель к тезисам Ц О Облеухова И.А. Омельченко Н.Д. Орнер И.Ю. Осиков М.В. Осипова И.В. Осипова М.В. Оспельникова Т.П. 113 111, 114 85, 88 114 116 87 114 П Павлов В.В. Павлов О.Н. Павлова А.А. Павлова И.Е. Павлович Н.В. Панова И.А. Панфилова Т.В. Перевозчикова В.Н. Петричук С.В. Петрова Н.Н. Пивоварова Л.П. Пиминов А.Ф. Писарева И.В. Плеханова Е.В. Плужникова Г.Э. Пожарицкая О.Н. Полосков В.В. Помыткин И.А. Попова Л.Ю. Попова М.О. Потапов А.С. Пыльцин С.А. 127 112 115 115 87, 128 103 123 115 111, 126 115 116 125 111 109 96 132 114 120 129 127 111 116 Р Радаева О.А. Радилов А.С. Раев М.Б. Раецкая С.А. Рассказова Н.И. Рембовский В.Р. Ремизова И.И. Роговская Н.Ю. Родина М.А. Романова Л.В. Романова О.В. 117 118 117, 128 96 120 118 91, 129 118 133 111 102 И Т О иК И Н Романова С.В. Ронь Г.И. Рудой А.С. Рябова Л.В. Рязанцев С.В. С Садовников П.С. Садыкова Ш.С. Салахова Л.М. Самойлович М.П. Саркисян Н.Г. Сарсенбаева А.С. Сахаутдинова Р.Р. Свентицкий Е.Н. Свитич О.А. Селезнева О.С. Семенов А.В. Семенова Е.А. Семикина Е.Л. Сёмин Е.Г. Сенников С.В. Серебряная Н.Б. Сивакова Н.А. Сидорова Е.В. Сизиков А.Э. Симбирцев А.С. 102 119 112 118 131 89 104 118 98 119 124 133 119, 120 120 96 87 120 126 121 85, 108, 113 121 121, 129 91 108 89, 90, 92, 109, 131 Синяшина Л.Н. 121 Сипок А.П. 105 Скворцов Н.В. 106 Скрипченко Н.В. 99, 100 Слепой-Савчук В.В. 86 Слита А.В. 93, 114, 119 Смирнова В.Н. 96 Смирнова Е.В. 103 Смирнова М.П. 86 Смирнова С.В. 122 Смольникова М.В. 122 Смолягин А.И. 123 Снежко Т.А. 96 Соколова Ю.В. 115 Соломатина Л.В. 94, 123 Сотникова Н.Ю. 97, 101, 102, 118, 123 Сташкевич Д.С. Стеблюк А.Н. Столярова Е.Ю. Судьина Л.В. Суменко В.В. Супрун А.С. Супрун Э.В. Сухобаевская Л.П. Суховей Ю.Г. Сушко Т.П. 124 124 125 111, 114 129 125 125 105 97 106 Т Тархов А.В. Телешева Л.Ф. Толпаров Ю.Н. Топтыгина А.П. Тотолян А.А. Трофимов А.В. Тузанкина И.А. Тюменев А.В. Тяготин Ю.В. 113 85, 114 93, 126 111, 126 87 100 119, 133 127 120 У Учеваткина А.Е. Ушакова Н.Д. 92, 127 96 Ф Федорова И.М. Филипова Н.А. Филиппенко А.В. Филиппова Л.В. Филиппова Ю.В. Филиппова Ю.Ю. Фомина К.В. Фрейнд Г.Г. Фролов Б.А. Фролова Е.В. Фурсова Л.В. 101 105 111, 114 92, 127 123 89 110 108 123 92, 127 129 Х Хабирова Т.Г. Хайдуков С.В. Хлипунова Д.А. Хмельницкая Н.М. Хонина Т.Г. 116 127 103 89 133 Хотян Д.С. Храмова Т.В. Храмцов П.В. 129 125 128 Ц Цимбалистова М.В. Цимбалова Е.Г. Цулун Е.В. 128 111 93 Ч Чайникова И.Н. Чарипова Б.Т. Чаша Т.В. Черняева Е.В. Чистякова Г.Н. Чудилова Г.А. Чурилова И.В. 123, 129 129 133 86, 93 91, 129 113 93, 129 Ш Шабалдин А.В. Шабалдина Е.В. Шабашова Н.В. Шагалина А.У. Шадривова О.В. Шамсутдинова О.А. Шардаков В.И. Шевченко Е.А. Шиков А.Н. Шилов Ю.И. Шилова Н.А. Шинкарева О.Н. Шипко Е.С. Шкаруба Н.С. Штанько И.Н. Штрыголь С.Ю. 127, 131 127, 131 92 131 127 105, 132 112 102 132 133 133 113 111 108 133 92 Щ Щеголева Р.А. Щекина Е.Г. 91 90, 92 Э Эсауленко Е.В. 87 Я Яковлева Л.А. 105 Ы ВОСПАЛЕНИЕ 136 Том 13 № 1 2014

Цитокины и воспаление

Разделы

Поддержка

Цитокины и воспаление

Добавить этот документ в коллекции

Добавить этот документ в сохраненные

Предложите, как улучшить StudyLib