МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ

МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ
Государственное образовательное учреждение
Высшего профессионального образования
ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
(ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России)
Медико-профилактический факультет
Кафедра микробиологии
Методические рекомендации
к практическим занятиям для студентов
по теме: «Зоонозные инфекции»
для специальности: 060101 – Лечебное дело, дневное отделение (ЛДдо)
060103 – Педиатрия (ПЕД)
060104 – Медико-профилактическое дело (МПД)
Иркутск- 2009г.
Методические рекомендации составлены:
зав.кафедрой ИГМУ, проф.Р.В.Кибортом,
ассистентом кафедры Г.В.Козловой
Методические рекомендации составлены в соответствии с типовым учебным
планом общеобразовательного стандарта подготовки студентов высших медицинских
учебных
заведений
и
медицинских
факультетов
университетов
по
курсу
«Микробиология с вирусологией и иммунологией» и рабочей программой кафедры
микробиологии ИГМУ,
Методические рекомендации обсуждены на заседании кафедры микробиологии
ИГМУ.
Протокол №______от___________2009 г.
Методические рекомендации рассмотрены и рекомендованы к изданию на
заседании цикловой методической комиссии кафедр микробиологического профиля
ИГМУ.
Протокол №_____от______2009 г.
Председатель ЦМК профессор Р.В. Киборт
ЗАНЯТИЕ № 1
Тема занятия: «Возбудители зоонозных бактериальных инфекций: чумы,
сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, лептоспироза, листероза».
Вопросы для самостоятельной подготовки студентов к занятию:
1.
Общая, характеристика зоонозных заболеваний (источники инфекций, пути
передачи, сезонность, профессиональный характер и т.д.). Возбудители зоонозов этиологический фактор ООИ. Возможность применения их для бактериологического
терроризма.
2. Возбудители зоонозных заболеваний, характеристика их свойств; Экология
возбудителя.
3.
Источники инфекции и пути передачи, механизмы заражения.
4. Факторы вирулентности и патогенез заболеваний;
5.
Особенности иммунитета при зоонозных заболеваниях;
6. Особенности отбора материала для исследования. Методы лабораторной
диагностики: экспресс-диагностика (РИГА, РИФ, ИФА, ПЦР и др.).
7. Специфическая профилактика и лечение зоонозных заболеваний.
Студент должен знать:
1. Характеристику возбудителей зоонозных инфекций;
2. Экологию возбудителей. Источники инфекции и пути передачи
заболевания. Факторы вирулентности и патогенез заболеваний;
3. Особенности иммунитета при зоонозных заболеваниях;
4. Правила отбора материала для исследования. Методы лабораторной
диагностики зоонозных инфекций;
5. Лечение и профилактику заболеваний. Особенности отбора исследуемого
материала от больных.
Студент должен уметь:
1.
Дифференцировать в готовых мазках возбудителей чумы, сибирской язвы,
бруцеллеза, туляремии;
2. Поставить и оценить результаты реакции Хеддельсона;
3. Дать оценку реакции Райта;
4. Поставить реакцию Асколи для диагностики сибирской язвы;
5.
Поставить кровяно-капельную реакцию по Минкевичу для диагностики
туляремии;
6. Уметь интерпретировать полученные данные лабораторных исследований;
Выбрать препараты для диагностики и профилактики зоонозных инфекций.
Практическая работа студентов на занятии.
Задание 1. Используя Рис.1,
бактериальных инфекций.
укажите
вид
возбудителей
зооантропонозных
Возбудители зооантропонозных инфекций
Чума
Семейство_________________
Род и вид _________________
Сибирская язва
Семейство ___________________
Род и вид ____________________
Листериоз
Род и вид
_____________________
Туляремия
Род и вид
______________________
Бруцеллез
Семейство _________________
Род и вид __________________
Лептоспироз
Семейство __________________
Род и вид ___________________
Задание 2. Эпидемиология (источники
зооантропонозных заболеваний. Заполнить таблицу.
Источники инфекции
Пути передачи
инфекции,
пути
передачи)
Восприимчивый организм
ребенок
Задание 3. В санитарно-карантинный пункт аэропорта г. Иркутска поступил
больной t 38-39, жалуется на головную боль, чувство разбитости. Объективно:
«меловой» отечный язык, невнятная речь, увеличен паховый лимфоузел. Больной по
профессии - зоолог, возвращался из Монголии, где работал в экспедиции, отлавливал
грызунов.
Предполагаемый диагноз - чума? туляремия?
1.
Какой исследуемый материал следует взять на исследование?
2.
Какие исследования необходимо провести, чтобы поставить диагноз?
Задание 4. Работниками Иркутского противочумного института в процессе
полевых работ проводился отлов грызунов, переносчиков. Полевой материал
доставлен в институт, проведены исследования. При вскрытии трупов белых мышей
сделаны мазки-отпечатки из органов, окрашенные синькой Леффлера.
Промикроскопируйте, зарисуйте.
В мазке обнаружены биполярно окрашенные, мелкие, овоидной формы палочки.
1.
О возбудителе, какого заболевания можно подумать?
2.
Какие методы экспресс-диагностики можно применить для определения
этиологического фактора заболеваний?
Задание 5. Иркутским противочумным институтом обследован очаг
туляремии: исследованы трупы грызунов, переносчики, взята кровь людей для
постановки кровяно-капельной реакции по Минкевичу.
•Кровяно-капельная реакция по Минкевичу.
Для ускоренной диагностики туляремии используют кровяно-капельную реакцию
по Минкевичу. В основе её лежит ориентировочная реакция агглютинации на стекле,
используемая в данном случае для серодиагностики.
В каплю крови, высушенную на предметном стекле, добавьте каплю
дистиллированной воды (для гемолиза эритроцитов). В гемолизированную кровь
добавьте каплю туляремийного диагностикума.
Учет результатов проводится в течении первых минут после постановки
реакции.
Если реакция положительная, то выпадает агглютинат как минимум на ++.
Положительная реакция агглютинации по Минкевичу примерно соответствует
развёрнутой реакции агглютинации при наличии антител в сыворотке крови с титром
1:100. В случае положительного результата необходима постановка развёрнутой
реакции с целью определения титра антител в сыворотке крови больного.
Задание 6. Микроскопия мазков с возбудителями бруцеллеза и туляремии.
Можно ли на основании микроскопии поставить диагноз?
Задание 7. В сельскую больницу обратился больной с жалобами: на высокую
температуру, карбункул в области предплечья, отек, чувство зуда. Больной 3 дня
тому назад участвовал в вынужденном забое быка. Шкура быка вывешена для сушки в
сарае.
1. Какой материал следует взять?
2. Какие методы лабораторной диагностики целесообразно использовать?
Задание 8. В мазках и/или мазках-отпечатках из органов белой мыши
обнаружены стрептобациллы, имеющие капсулу.
1.Какое заключение можно сделать по результатам микроскопического
исследования?
Задание 9. Поставить реакцию кольцепрепицитации по Асколи для
установления зараженности шкуры спорами возбудителя сибирской язвы.
•Реакция термопреципитации Асколи.
Данный тип реакции относится к экспресс -методам диагностики
возбудителя сибирской язвы в исследуемом материале. Для её постановки необходимо:
1)получить растворимый преципитиноген (получают путём вываривания
исследуемого материала в физиологическом растворе с последующим его
фильтрованием, контрольный термоэкстракт готовят из того же материала, заведомо не
зараженного микробом);
2)диагностическая сибиреязвенная сыворотка.
Особенностью данной реакции при её постановке является то, что необходимо
осторожно наслоить по стенке пробирки выделенный антиген на диагностическую
сыворотку. В случае положительной реакции на границе двух сред образуется кольцо
преципитации.
Задание 10. В совхозе при ветеринарном обследовании обнаружены
овцы, пораженные бруцеллезом. По эпидемическим показаниям обследованы
животноводы с помощью реакции Хеддельсона.
•Постановка реакции Хеддельсона.
Для ускоренной серодиагностики бруцеллеза применяют реакцию
агглютинации Хедбпьсона. Для этого на обезжиренное стекло, условно разделенное на 5
квадратов, микропипеткой наносят нативную сыворотку больного соответственно в
объёме (мл): 0,04; 0,02; 0,01; 0,02 (контроль сыворотки); в 5-ый квадрат - контроль
антигена, добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Затем в каждый квадрат
добавляют бруцеллезный диагностикум по 0,03 мл (1 капля), кроме контроля
сыворотки. Осторожно перемешивают стеклянной палочкой и подогревают над
пламенем горелки.
Учет результатов проводится невооруженным глазом не позднее, чем через 2-8
минут после постановки реакции. Результаты записывают в таблицу 1.
Таблица 1
Учет результатов реакции агглютинации Хеддельсона.
Ингредиенты,
Опытные варианты
Контрольные
мл
варианты
Сыворотка
0,01
0,02
0,04
0,02
больного
Диагностикум
0,03
0,03
0,03
0,03
Физиологический
0,03
0,03
раствор
Результаты
При положительной реакции в первые минуты выпадает агглютинат - хлопья
синего света. Реакция положительна при наличии агглютинации на ++ в дозах
сыворотки 0,02-0,01 мл. Реакция является ориентировочной.
В случае, если реакция прошла в варианте с сывороткой на ++ и более в объёме
0,02 мл, то это соответствует примерно титру антител в развернутой реакции
агглютинации Райта 1:200, который является диагностическим.
Задание 11. Для подтверждения диагноза бруцеллез поставлена реакция
Райта. Учтите результаты реакции и внесите в таблицу 2.
Таблица 2
Реакция. Райта
1/100
1/200
1/400
1/800
КС
КА
Заключение: В сыворотке крови обследуемого обнаружены антитела в титре
______. Учитывая, что диагностический титр 1:200, диагноз
заболевания _______________________ (подтвержден/неподтвержден)
•Реакция агглютинации Райта.
В основе реакции Райта лежит развёрнутая реакция агглютинации (по типу
реакции Видаля). Реакция достаточно специфична, положительные результаты у
больных бруцеллезом отмечаются спустя 7-14 дней от начала заболевания и
сохраняются у переболевших многие годы. Диагностический титр реакции Райта равен
1:200.
Постановку реакции Райта проводят по общепринятой схеме:
Ингредиенты
Разведение сыворотки
КС
КА
1:100
1:200
1:400
1:800
Физиологический раствор
1мл
1мл
1мл
1мл
1мл
Сыворотка больного (1:50)
1мл
1мл
1мл
1мл
1мл
Диагностикум
2 кап
2 кап
2 кап
2 кап
2 кап
Результаты
Степень выраженности реакции оценивают в + (++++, +++, ++, +, -) и определяют
титр антител, который сопоставляют с диагностическим и на его основе приходят к
заключению.
Задание 12. В военный госпиталь поступил солдат с температурой 38.2С, озноб,
боли в мышцах, желтушное окрашивание склер. При осмотре обнаружены:
увеличенная печень и селезенка. 5 дней назад больной вернулся с полевых учений, где
пил воду из неизвестного источника. Подозрение на лептоспироз.
Как подтвердить диагноз заболевания?
Задание 13. Ознакомьтесь с набором препаратов. Заполните таблицу 3
«Препараты для диагностики, специфической профилактики и лечения зоонозных
заболеваний».
Таблица 3
Препараты для диагностики, специфической профилактики и лечения
зоонозных заболеваний
Название препарата
Назначение
Состав
Бруцеллезный диагностикум
Бруцеллин
Бруцеллезная вакцина живая
Бруцеллезная вакцина убитая
Тулярин
Живая туляремийная вакцина
Туляремийная
агглютинирующая
сыворотка
Вакцина «СТИ»
Лептоспирозный иммуноглобулин
Живая противочумная вакцина «ЕV»