Проблемы выявления аутоиммунных нарушений
advertisement
Проблемы выявления аутоиммунных нарушений Н.Н.Беляев, д.б.н., профессор, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии и иммунобиотехнологии Института молекулярной биологии и биохимии им.М.А.Айтхожина КН МОН РК В настоящее время принято считать, что аутоиммунитет возникает из-за патологических реакций Т-клеток и антител, производимых В-клетками, с эпитопами собственных антигенов Положительная и отрицательная селекция в тимусе Тимоциты CD4+CD8+ Строма тимуса Прошедшая отбор клеточная популяция Высокая аффинность к cобственным АГ Невысокая аффинность к собственным АГ CD8+ Отсутствие связывания с собственным МНС Невысокая аффинность к собственным АГ Высокая аффинность к собственным АГ CD4+ Тот факт, что у всех людей в сыворотке крови в малых количествах в норме присутствуют антитела, реагирующие с ДНК, компонентами цитоскелета, миелином, сывороточным альбумином, тиреоглобулином, цитохромом с, коллагеном, трансферином и другими клеточными белками свидетельствует о том, что само по себе наличие аутоиммунного состояния еще не определяет развитие аутоиммунного заболевания. В развитии аутоиммунных процессов важную роль играют нарушения регуляции иммунной системы Спектр регуляторных клеток, оказывающих иммуносупрессорное действие Анализ обширных исследований в области иммуносупрессии позволяет заключить, что иммуносупрессорной активностью могут обладать макрофаги, дендритные клетки, миелоидные предшественники, мезенхимальные и гемопоэтические стволовые клетки и несколько субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов (Treg, Тh3, Тr1, NKT и CD8+ клетки). Гипотетическая схема репаративно-иммунологического надзора Изопикническое фракционирование клеток костного мозга и селезенки CBA мышей Cупрессорная активность NS1-, NS2- и NS3-фракций клеток костного мозга мышей линии СВА Иммуносупрессорная активность различных фракций миелоидных клеток периферической крови здоровых доноров и больных ревматоидным артритом Доноры n=15 Больные гр.1 n=13 Больные гр. 2 n=3 Закирьянова Г.К., Сейсенбаев, Габдуллина Г.Х., Даниленко С.А., Жанкин А.А., Курманова Г.М., Каральник Б.В., Беляев Н.Н. Оценка натуральной супрессорной активности ядросодержащих клеток периферической крови при ревматоидном артрите//Медицина.-2006.-№8.-с.23-26. Алгоритм усовершенствования теста на активность миелоидных супрессорных клеток (MDSC) с помощью проточной цитометрии Периферическая кровь Выделение фракции с плотностью 1,09 г/мл центрифугированием на двухступенчатом градиенте перкола Мечение клеток флуоресцентными антителами к поверхностным маркерам MDSC и внутриклеточным цитокинам Определение в гейте CD34+CD15+ клеток, содержащих TGFb с помощью проточной цитометрии Т-регуляторные клетки Механизмы действия FoxP3+ регуляторных Т-клеток Треги участвуют в различных иммунологических процессах, включая аутоиммунные болезни, аллергию, микробную инфекцию, противоопухолевый иммунитет, органную трансплантацию, фетально-материнскую толерантность, а также ожирение. Дефект функции Трегов может привести к развитию аутоиммуных болезней, а гиперактивность приводит к супрессии противоопухолевого иммунитета и развитию опухоли. Предотвращение аутоиммунитета Трег-клетками Содержание CD25/FoxP3+ (а) и CD4/FoxP3+ Т-клеток (б) в периферической крови здоровых доноров и аутоиммунных больных 100 5 4 Здоров ые 3 Больные 2 1 0 Содержание клеток в лимфоцитарном гейте,% Содержание клеток в лимфоцитарном гейте,% 6 90 80 70 60 Здоровые 50 Больные 40 30 20 10 0 CD25/FoxP3 а CD25/FoxP3 б Алгоритм разделения Т-клеток на основе связывания высокомолекулярного гиалуронана Периферическая кровь Центрифугирование на фикол-изопаке Биотинилированный высокомолекулярный гиалуронан Негативная иммуномагнитная сепарация Антибиотиновые парамагнитные бусы CD44+ CD4+ Т-клетки Магнитная сепарация Проточная цитометрия Т-регуляторных клеток Содержание CD4+CD25+FoxP3+ Treg-клеток во фракциях (связывающих и не связывающих гиалуронан) мононуклеарных клеток периферической крови здоровых доноров и больных ревматоидным артритом (RA). Содержание Трег-клеток во фракции лимфоцитов,% 90 80 70 60 50 Доноры 40 Больные РА 30 20 10 0 Гиалуронан (+) Гиалуронан (-) Алгоритм усовершенствования теста на содержание гиалуронансвязывающих Т-регуляторных клеток крови Иммуномагнитная сепарация CD4+CD25+CD127- Т-регуляторных клеток c помощью коммерческого набора (Miltenyi Biotec) Инкубация клеток с FITC-меченным гиалуронаном и антителами к маркерам Т-регуляторных клеток Проточная цитометрия БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ
