Проблемы выявления аутоиммунных нарушений

Реклама
Проблемы выявления
аутоиммунных нарушений
Н.Н.Беляев, д.б.н., профессор,
заведующий лабораторией молекулярной
иммунологии и иммунобиотехнологии
Института молекулярной биологии и биохимии
им.М.А.Айтхожина КН МОН РК
В настоящее время принято считать, что
аутоиммунитет возникает из-за
патологических реакций Т-клеток и антител,
производимых В-клетками, с эпитопами
собственных антигенов
Положительная и отрицательная селекция в тимусе
Тимоциты
CD4+CD8+
Строма тимуса
Прошедшая отбор
клеточная популяция
Высокая
аффинность к
cобственным АГ
Невысокая
аффинность к
собственным АГ
CD8+
Отсутствие
связывания с
собственным МНС
Невысокая
аффинность к
собственным АГ
Высокая
аффинность к
собственным АГ
CD4+
Тот факт, что у всех людей в сыворотке крови в
малых количествах в норме присутствуют
антитела, реагирующие с ДНК, компонентами
цитоскелета, миелином, сывороточным
альбумином, тиреоглобулином, цитохромом с,
коллагеном, трансферином и другими
клеточными белками свидетельствует о том, что
само по себе наличие аутоиммунного состояния
еще не определяет развитие аутоиммунного
заболевания.
В развитии аутоиммунных процессов
важную роль играют нарушения
регуляции иммунной системы
Спектр регуляторных клеток, оказывающих
иммуносупрессорное действие
Анализ обширных исследований в области иммуносупрессии
позволяет заключить, что иммуносупрессорной активностью
могут обладать макрофаги, дендритные клетки,
миелоидные предшественники, мезенхимальные и
гемопоэтические стволовые клетки и несколько
субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов (Treg, Тh3, Тr1,
NKT и CD8+ клетки).
Гипотетическая схема репаративно-иммунологического
надзора
Изопикническое фракционирование клеток
костного мозга и селезенки CBA мышей
Cупрессорная активность
NS1-, NS2- и NS3-фракций клеток костного мозга
мышей линии СВА
Иммуносупрессорная активность различных фракций
миелоидных клеток периферической крови здоровых
доноров и больных ревматоидным артритом
Доноры n=15
Больные гр.1 n=13
Больные гр. 2 n=3
Закирьянова Г.К., Сейсенбаев, Габдуллина Г.Х., Даниленко С.А., Жанкин А.А., Курманова Г.М., Каральник Б.В., Беляев Н.Н.
Оценка натуральной супрессорной активности ядросодержащих клеток периферической крови при ревматоидном
артрите//Медицина.-2006.-№8.-с.23-26.
Алгоритм усовершенствования теста на активность
миелоидных супрессорных клеток (MDSC) с помощью
проточной цитометрии
Периферическая кровь
Выделение фракции с плотностью 1,09 г/мл
центрифугированием на двухступенчатом градиенте перкола
Мечение клеток флуоресцентными антителами к
поверхностным маркерам MDSC и внутриклеточным цитокинам
Определение в гейте CD34+CD15+ клеток, содержащих TGFb с помощью
проточной цитометрии
Т-регуляторные клетки
Механизмы действия FoxP3+ регуляторных Т-клеток
Треги участвуют в различных
иммунологических процессах, включая
аутоиммунные болезни, аллергию,
микробную инфекцию, противоопухолевый
иммунитет, органную трансплантацию,
фетально-материнскую толерантность, а
также ожирение. Дефект функции Трегов
может привести к развитию аутоиммуных
болезней, а гиперактивность приводит к
супрессии противоопухолевого иммунитета
и развитию опухоли.
Предотвращение аутоиммунитета Трег-клетками
Содержание CD25/FoxP3+ (а) и CD4/FoxP3+ Т-клеток (б) в
периферической крови здоровых доноров и аутоиммунных
больных
100
5
4
Здоров ые
3
Больные
2
1
0
Содержание клеток в лимфоцитарном гейте,%
Содержание клеток в лимфоцитарном гейте,%
6
90
80
70
60
Здоровые
50
Больные
40
30
20
10
0
CD25/FoxP3
а
CD25/FoxP3
б
Алгоритм разделения Т-клеток на основе связывания
высокомолекулярного гиалуронана
Периферическая кровь
Центрифугирование на фикол-изопаке
Биотинилированный
высокомолекулярный
гиалуронан
Негативная иммуномагнитная сепарация
Антибиотиновые
парамагнитные бусы
CD44+
CD4+ Т-клетки
Магнитная сепарация
Проточная цитометрия
Т-регуляторных клеток
Содержание CD4+CD25+FoxP3+ Treg-клеток во фракциях (связывающих
и не связывающих гиалуронан) мононуклеарных клеток
периферической крови здоровых доноров и больных ревматоидным
артритом (RA).
Содержание Трег-клеток во фракции лимфоцитов,%
90
80
70
60
50
Доноры
40
Больные РА
30
20
10
0
Гиалуронан (+)
Гиалуронан (-)
Алгоритм усовершенствования теста на содержание
гиалуронансвязывающих Т-регуляторных клеток крови
Иммуномагнитная сепарация CD4+CD25+CD127- Т-регуляторных клеток
c помощью коммерческого набора (Miltenyi Biotec)
Инкубация клеток с FITC-меченным гиалуронаном и антителами к маркерам
Т-регуляторных клеток
Проточная цитометрия
БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ
Похожие документы
Скачать