Первичная характеристика бактерий

Вестник БГУ. Сер. 2. 2012. № 3
направления его изменения в процессе эволюции экосистем, а также выявить различия в биогенном
составе взвешенного вещества водоемов разного трофического типа. Так, по полученным данным
установлено, что при увеличении трофического уровня экосистемы концентрации взвешенных форм
биогенных элементов в воде закономерно увеличиваются, так же как и их относительная доля в общем пуле биогенных элементов в водоеме. В то же время удельное содержание биогенных элементов
в сестоне у более трофных водоемов, наоборот, ниже, чем у менее трофных. Ретроспективный анализ
данных подтверждает характер изменения биогенного состава взвешенного вещества и по временной
шкале наблюдений. Весовые соотношения биогенных элементов четко выраженных изменений
в зависимости от трофности водоемов не выявили, но можно говорить о тенденции увеличения
соотношения C:N:P по мере повышения трофности водоема. Вполне вероятно, что при увеличении
объема сведений по более разнотипным водоемам можно будет обнаружить более тесные зависимости. Современное состояние биогенного состава взвешенного вещества описывается значениями,
характерными для пресноводных водоемов умеренной зоны.
1. E l s e r J . J . // Nature. 2000. Vol. 408. P. 578.
2. S t e r n e r R . W . , S c h a m p e l J . H . , S c h u l z K . L . et al. // Verh. Internat. Verein. Limnol. Stuttgart, 2000. Vol. 27. P. 1–6.
3. S t e r n e r R . W . , A n d e r s e n T . , E l s e r J . J . et al. // Limnol. and Oceanogr. 2008. Vol. 53. № 3. P. 1169.
4. S t e r n e r R . W . , E l s e r J . J . Ecological stoichiometry: the biology of elements from molecules to the biosphere
[Electronic resource]. Princeton Univ. Press. 2002. Mode of access: http://books.google.com/. Date of access: 06.05.2011.
5. H e c k y R . E . , C a m p b e l l P . , H e n d z e l L . L . // Limnol. and Oceanogr. 1993. Vol. 38. P. 709.
6. О с т а п е н я А . П . Сестон и детрит как структурные и функциональные компоненты водных экосистем: Автореф.
дис. … д-ра биол. наук: 03.00.18 / Ин-т гидробиологии АН УССР. Киев, 1969.
7. В л а с о в Б . П . , Я к у ш к о О . Ф . , Г и г е в и ч Г . С . и др. Озера Беларуси: Справ. Минск, 2004.
8. О с т а п е н я А . П . , Ж у к о в а Т . В . // Докл. НАН Беларуси. 2009. Т. 53. № 3. С. 98.
9. Экологическая система Нарочанских озер / Под ред. Г. Г. Винберга. Минск, 1985.
10. Бюллетень экологического состояния озер Нарочь, Мястро, Баторино (2010 год) / Под общ. ред. А. П. Остапени.
Минск, 2011.
11. Ж у к о в а Т . В . // Биол. ресурсы водоемов в условиях антропогенного воздействия. Киев, 1985. С. 102.
12. Ж у к о в а Т . В . , О с т а п е н я А . П . // Экологическая система Нарочанских озер. Минск, 1985. С. 22.
13. О с т а п е н я А . П . // Докл. АН БССР. 1965. Т. 9. № 4. С. 273.
14. Руководство по химическому анализу поверхностных вод суши / Под ред. А. Д. Семенова. Л., 1977.
15. Методы исследования органического вещества в океане. М., 1980.
Поступила в редакцию 03.04.12.
Юлия Константиновна Верес – младший научный сотрудник УНЦ «Нарочанская биологическая станция
им. Г. Г. Винберга» БГУ.
Татьяна Васильевна Жукова – доктор биологических наук, директор УНЦ «Нарочанская биологическая станция
им. Г. Г. Винберга» БГУ.
Александр Павлович Остапеня – член-корреспондент НАН Беларуси, доктор биологических наук, заведующий
НИЛ гидроэкологии.
УДК 576.851.132
М. И. ЧЕРНЯВСКАЯ, АБДУННАБИ АМХЕМЕД ЭЛЬГАММУДИ (ЛИВИЯ), М. А. ТИТОК
ПЕРВИЧНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БАКТЕРИЙ-ДЕСТРУКТОРОВ НЕФТИ
Based on the growth under different temperature conditions, pH and NaCl concentrations, capability to utilize oil hydrocarbons
as a sole source of the carbon and energy, and presence of hydrolase in genome, gram-positive (10 strains) and gram-negative
(3 strains) perspective oil degrading bacteria were selected from among 46 bacterial strains isolated from soils of Belarus, Libya and Iraq.
Нефть является основным стратегическим сырьем мировой энергетики. Нарушения в эксплуатации добывающих, перерабатывающих и транспортирующих отраслей ведут к серьезным проблемам
загрязнения природной среды. Даже при отсутствии аварийных ситуаций в странах, добывающих
нефть, наблюдается сокращение пахотных земель, а в странах, транспортирующих и перерабатывающих этот энергоноситель, всегда имеют место локальные загрязнения (районы, прилегающие
к железнодорожному полотну, территории заправочных станций, автостоянок, хранилищ углеводородного сырья и нефтепродуктов).
Поиск эффективных средств борьбы с загрязнениями природных биоценозов нефтью и продуктами ее переработки не прекращается, приобретая все более нарастающие масштабы. Особый интерес
44
Биология
представляют биологически безопасные технологии, связанные с использованием природных микроорганизмов, способных эффективно утилизировать углеводороды, активизируя и восстанавливая
природные экосистемы. Для эффективного применения биологических средств очистки окружающей
среды особое значение приобретают экологические исследования, направленные на изучение
состава и метаболического потенциала природных сообществ микроорганизмов, сформированных
в условиях высокой степени загрязнения опасными ксенобиотиками. Понимание процесса формирования микробного сообщества, способного противостоять загрязнению вредными химическими
соединениями, обеспечит не только рациональный подход к восстановлению нарушенных экосистем,
но и позволит разумно управлять ими.
Целью настоящей работы явилась первичная характеристика бактерий-деструкторов нефти, выделенных из загрязненных почв Беларуси, Ливии и Ирака.
Материал и методика
В работе были использованы 46 штаммов бактерий-деструкторов, изолированных из загрязненных
нефтью и нефтепродуктами почв Беларуси, Ливии и Ирака (табл. 1).
Таблица 1
Источник выделения микроорганизмов-деструкторов нефти
Образец
почвы
АL18
GP
FD
Источник выделения
Автобусная остановка на Московском пр.,
г. Витебск, Беларусь
Берег оз. Мястро, г. Мядель, Беларусь
Бензоколонка Аль-Кат, Ирак
1
Бензоколонка Альхазба-Альхазара, Триполи, Ливия
4А
Бензоколонка № 615 (Эль-Азизия), Триполи, Ливия
5A
6А
6
7А
Бензоколонка № 1 (Эль-Азизия), Триполи, Ливия
Бензоколонка № 2 (Эль-Азизия), Триполи, Ливия
Бензоколонка (Абусэтте), Триполи, Ливия
Деревянная стружка, Альсадия, Ливия
8А
Бензоколонка № 640 (Альтадамен), Ливия
9
Бензоколонка № 3 (Гергарет), Триполи, Ливия
10
Бензоколонка № 1 (Гот-Эль-Шааль), Ливия
15
Бензоколонка № 615 (Эз-Завия), Ливия
Штаммы-деструкторы
Количество
штаммов-деструкторов
АL18
1
GP1
FD1, FD3, FD4, FD9
L1-2, L1-6, L1-14, 1-1, 1-2-1, 1-2-2,
1-5, 1-7-1
L4AN-2N,
4A-1A, 4A-2A
L5A-16, 5Ар, 5Аш, 5Аж, 5Аб
L6A-8
6-1, 6-3
7А-2А, 7А-3А-1, 7А-3А-2
L8A-1, L8A-6, 8А-1А,
8А-2А-1, 8А-2А-2, 8А-3А, 8А-4А
L9-6
10-3-1, 10-3-2, 10-3-3, 10-12, 10-15,
10-1N
15-1А, 15-2А, 15-3А, 15-4А
1
4
8
3
5
1
2
3
7
1
6
4
Культивирование бактерий производилось в полноценной среде LB и минимальной среде М9 [1],
агаризованные среды содержали 1,5 % агара.
Способность бактерий утилизировать в качестве источника углерода и энергии нефть (в концентрации 4 об. %) проверяли путем внесения отмытой и разбавленной в 10 раз ночной бактериальной
суспензии в минимальную среду М9 с последующим культивированием с аэрацией в течение 7 сут
при 28 °С. Наличие роста и деструкции нефти фиксировали визуально по увеличению мутности
среды и исчезновению или нарушению структуры нефтяной пленки.
Способность бактерий использовать в качестве источника углерода и энергии глюкозу в концентрации 0,2 %, гексадекан – 0,1 %, фенантрен и антрацен в концентрации 0,02 %, нафталин и толуол
(пары) определяли по формированию ими колонии на поверхности минимальной среды М9 в течение
48–72 ч при 28 °С.
Грампринадлежность определяли путем окраски по методу Грама и с использованием КОН-теста [2].
Параметры роста бактерий при разных температурных режимах (4÷55 °С) определяли по их
способности формировать колонии на поверхности плотной полноценной среды в течение 48 ч,
рост бактерий при различных концентрациях NaCl (1÷20 %) и значениях рН среды (5,0÷12,0) –
по их способности формировать колонии на поверхности полноценной среды в течение 48 ч
при 28 °С.
Тотальную ДНК для молекулярно-генетических исследований выделяли саркозиловым методом [3].
Для идентификации генетических детерминант типов alk1 и alk3, определяющих утилизацию алифатических углеводородов, использовали соответственно праймеры: ALK-FI (5'-CATAATAAAGGGCATCACCG-3')
45
Вестник БГУ. Сер. 2. 2012. № 3
и ALK-RI (5'-GATTTCATTCTCGAAACTCC-3'); ALK-FIII (5'-TCGAGCACATCCGCGGCC-3')
и ALK-RIII (5'-GTAGTGCTCGACGTAGTTCG-3') [4]. Полимеразную цепную реакцию проводили
с использованием реактивов производства «Fermentas» (Литва). Реакционная смесь (25 мкл) содержала 1 Ед. Тaq-полимеразы, 200 мкмоль/л каждого праймера, 200 ммоль/л dNTP, 1,5 ммоль/л MgCl2,
буфер, 3,0 % глицерина, 1,5 % DMSO. Амплификация детерминант alk1 (размером 185 п. н.) и alk3
(размером 330 п. н.) проходила при следующем режиме: 94 °С – 5 мин (1 цикл); 94 °С – 30 с,
40 °С – 30 с, 72 °С – 20 с (30 циклов).
Электрофоретический анализ проводили согласно методике, описанной в руководстве [5].
Для разделения продуктов амплификации использовали 2 % агарозный гель и TAE-буфер. В качестве
реперной ДНК для определения размеров фрагментов – репер GeneRuler™ DNA Ladder Mix производства «Fermentas» (Литва).
Результаты и их обсуждение
Поскольку нефть и продукты ее переработки представляют собой сложные органические смеси,
включающие большое количество компонентов [6, 7], трудно представить, что отдельный штамм
микроорганизма способен утилизировать все его составляющие. Логично предположить, что загрязненные почвы могут содержать определенный консорциум микроорганизмов, члены которого
способны утилизировать определенный компонент нефти или продуктов ее переработки. В работе
использовали 43 загрязненных нефтью и продуктами ее переработки (дизельное топливо, бензин,
керосин) почвенных образца, выделенные на территории стран, добывающих нефть (Ливия и Ирак),
а также изолированные на территории Беларуси, являющейся одним из крупных производителей высококачественного топлива и транспортирующей нефть в страны ближнего и дальнего зарубежья.
Наличие почвенных образцов из столь удаленных и разных в климатическом отношении стран
позволило осуществить сравнительный анализ бактерий-деструкторов, присутствующих в отобранных изолятах. Для выявления штаммов-деструкторов в пробах навеску почвы (1 г) помещали в пробирку, затем добавляли 4 мл стерильной водопроводной воды и сырую нефть (4 об. %), пробы культивировали в течение 48 ч при 28 °С с аэрацией. Такой подход позволил провести первичный анализ
почв, в которых присутствовали микроорганизмы-деструкторы, обеспечивающие утилизацию нефти,
что визуально фиксировалось по исчезновению нефтяной пленки на поверхности воды. В результате
этих экспериментов было отобрано 10 образцов почв с территории Ливии, 1 – с территории Ирака
и 2 – с территории Беларуси (см. табл. 1).
Навески (1 г) отобранных проб почвы помещали в пробирки с полноценной жидкой средой
и культивировали аналогично описанному ранее, затем готовили серию десятикратных разведений
(до 10–8). Аликвоты (100 мкл) разведения 10–8 высевали на полноценный агар, культивировали при
37 °С в течение 24 ч и отбирали отдельные колонии микроорганизмов, отличающихся по морфологическим признакам. Отобранные клоны дважды пассировались на полноценной агаризованной среде
для получения чистых линий. В результате этих экспериментов было выделено 120 штаммов микроорганизмов, отличающихся между собой по морфологии формирующихся на полноценном агаре
колоний. В частности, в почвенных образцах с территории Ливии выявлено от 4 до 16 штаммов,
в почвенном изоляте из Ирака – 9, а из Беларуси – 7 и 5 штаммов.
На следующем этапе исследовали способность выделенных бактерий использовать в качестве
единственного источника углерода нефть в концентрации 4 об. %. В результате из 120 проверенных
штаммов было отобрано 46 бактерий-деструкторов (39 %) (табл. 2). Например, из двух почвенных
образцов с территории Ливии (образцы 4А и 10) 75 % штаммов (соответственно 3 штамма из 4 изолированных и 6 штаммов из 8 изолированных) утилизировали нефть в качестве источника углерода
и энергии, а из образца почвы 8А такой способностью обладали 7 штаммов из 11 изолированных
(64 %). В почвенных образцах из Беларуси деградативной способностью обладали 2 штамма из
12 изолированных, а в изоляте из Ирака (FD) выявлено 4 штамма-деструктора из 9 изолированных
(45 %). Наличие большого количества микроорганизмов-деструкторов в почвах с территории
Ливии и Ирака может являться следствием их длительного и постоянного загрязнения, в результате
которого сформировались достаточно представительные консорциумы микроорганизмов, существование которых обеспечивается деградативной способностью многих членов, входящих в их
состав (см. табл. 2).
46
Биология
Таблица 2
Первичная характеристика бактерий-деструкторов нефти
Количество
выделенных штаммов
деструкторов
всего
число
%
120
46
Количество
грамположительных бактерий
Наличие
Отсутствие пигмента
пигмента
39
14
Количество
грамотрицательных бактерий
Наличие
Отсутствие пигмента
пигмента
21
4
8
Количество штаммов, растущих при температуре
1
10 °С
13
18 °С
32
рН=5
11
рН=6
24
рН=7
46
4
°С
28 °С
46
37 °С
46
42 °С
28
50
°С
54
2
°С
1
Количество штаммов, растущих при рН среды
рН=8
44
рН=9
22
рН=10
18
рН=12
4
Количество штаммов, растущих в среде, содержащей NaCl в концентрации
1%
46
7%
23
10 %
10
14 %
2
Количество штаммов, использующих в качестве источника углерода
гексадекан
42
нафталин
7
антрацен
1
фенантрен
1
ксилол
3
толуол
3
Количество штаммов, содержащих гидроксилазы типа
alk1
4
alk3
11
Первичная классификация (определение грампринадлежности) изолированных бактерий-деструкторов позволила установить, что большинство штаммов представлены грамположительными бактериями (34 штамма из 46), некоторые из них (14 штаммов) формируют на плотной агаризованной
среде (минимальной или полноценной) пигментированные колонии (оранжево-желтой или розовой
окраски разной интенсивности). Из 12 штаммов грамотрицательных бактерий флюоресцирующий
пигмент на среде Кинг В образуют 4 штамма (см. табл. 2). Полученные результаты подтверждают
имеющиеся в литературе данные о большом деградативном потенциале грамположительных бактерий. Например, представители рода Rhodococcus содержат в геноме более 200 генов, способных детерминировать синтез оксигеназ, которые, как известно, являются ключевыми ферментами первых
этапов окисления моно- и полициклических углеводородов [8].
Анализ роста изолированных бактерий-деструкторов в среде с различными значениями рН
(от 5,0 до 12,0) показал, что в слабокислой среде (рН 5,0÷6,0) способностью формировать колонии
обладали 35 штаммов, тогда как в щелочной среде (рН 9,0÷12,0) – 44 штамма (см. табл. 2). При этом
в широком диапазоне рН среды (рН 5,0÷12,0) росли три штамма, выделенные из почвенных образцов
с территории Ливии (4A-1A, 8A-2A-1 и 8A-4A).
Все изолированные бактерии-деструкторы росли в присутствии 1 % NaCl. При содержании в среде
хлорида натрия в концентрации 7 % рост наблюдался для 23 штаммов, при 10 % – для 10 штаммов
и только 2 штамма (FD3 и FD4), изолированные из почвы Ирака, росли в присутствии 14 % соли
(см. табл. 2).
Оптимальным режимом для большинства исследованных бактерий являлась температура культивирования 28÷37 °С. Поскольку основная часть бактерий-деструкторов выделена из почв Ливии,
на территории которой даже в зимнее время температура не опускается ниже 12 °С, а в летнее время
достигает 42 °С, то они должны быть адаптированы к высоким температурным режимам.
Действительно, 28 штаммов из 40 изолированных из почв Ливии росли при 42 °С. Самый широкий
температурный диапазон характерен для штамма FD3, выделенного из почвы Ирака, который формировал колонии в интервале температур от 4 до 42 °С. Из почвы Ирака был изолирован штамм FD9,
способный расти при 54 °С. Следует отметить, что в Ираке воздух в летнее время прогревается до
50 °С и выше, а в зимнее время опускается до 2 °С. Таким образом, большинство штаммов, выделенных из почв Ливии и Ирака, являются термофилами, способными расти при высоких температурных
режимах.
Способность бактерий-деструкторов нефти утилизировать отдельные ее компоненты, в частности
гексадекан, нафталин, фенантрен, антрацен, ксилол, толуол, устанавливали на основании роста
на плотной минимальной среде М9, содержащей их в качестве источника углерода и энергии.
В результате было установлено, что практически все штаммы способны утилизировать гексадекан
(42 штамма из 46 исследованных). Деградацию толуола осуществляли 3 штамма, нафталина – 7,
фенантрена и антрацена – 1, ксилола – 3 штамма (см. табл. 2). Следует отметить, что самым широким
47
Вестник БГУ. Сер. 2. 2012. № 3
деградативным потенциалом характеризовались штаммы AL18 и GP1, выделенные из почв Беларуси,
причем AL18 утилизировал все исследованные соединения, а GP1 обеспечивал деградацию гексадекана, нафталина, толуола и ксилола. Все штаммы, выделенные из почв Ливии, деградировали гексадекан, а единичные – дополнительно нафталин (5Ap, 7A-3A-2, 8A-3A, 10-1N, 15-4A), ксилол (L4AN-2N)
и толуол (L5A-16). Штаммы, изолированные из почв Ирака, не обладали способностью утилизировать ни одно из исследованных соединений (деградировали только нефть). Данный факт весьма интересный и может свидетельствовать о разделении «труда» в природном микробном сообществе. Доказательством этому может являться присутствие в изолированных бактериальных консорциумах
бактерий-деструкторов, способных утилизировать отдельные компоненты нефти, не обладая способностью использовать это соединение в целом.
В нефти выделяют легкие (метановые), средние (метанонафтеновые и нафтеновые) и тяжелые
(моно- и полициклические ароматические углеводороды, смолы и асфальтены) фракции. Легкая
фракция в основном представлена алифатическими углеводородами (алканами) с длиной углеводородной цепи от С5 до С27. Соединения с длиной цепи до С9, находясь в почвах, водной или воздушной
средах, оказывают наркотическое и токсическое действие на живые организмы. Они хорошо растворимы в воде, легко проникают в клетки живых организмов, нарушая структуру цитоплазматических
мембран, и практически не подвергаются деградации [9]. Однако вследствие летучести и высокой
растворимости их действие обычно не бывает продолжительным. В нефти, богатой легкой фракцией,
существенную роль играют высокомолекулярные углеводороды (С12–С27), которые утилизируются
многими микроорганизмами (дрожжи, грибы, бактерии) [10]. С уменьшением содержания легкой
фракции (путем испарения из почвы удаляется от 20 до 40 % легких фракций) токсичность нефти
в большей степени обусловливается ароматическими соединениями [7].
Генетические детерминанты грамположительных и грамотрицательных бактерий, обеспечивающие синтез гидроксилаз, окисляющих алифатические углеводороды, содержащие в цепочке шесть
и более атомов углерода, условно разделены на три типа. Первый тип гидроксилаз (тип alk1) обеспечивает окисление коротких алканов (С6–С12), второй тип (тип alk2) – углеводородов с длиной цепи С6
и более и, наконец, третий тип ферментов (тип alk3) характеризуется широкой субстратной специфичностью, способствуя деградации «коротких» и «длинных» алифатических углеводородов.
Анализ нуклеотидных последовательностей этих трех типов генетических детерминант позволил
сконструировать праймеры (соответственно alk1, alk2 и alk3), обеспечивающие их амплификацию [4].
Поскольку практически все отобранные бактерии-деструкторы (42 штамма из 46 изолированных)
способны использовать в качестве единственного источника углерода гексадекан (С16), можно предположить, что в их геноме присутствуют детерминанты типа alk2 или alk3. В то же время для всех
отобранных бактерий источником углерода может быть нефть, следовательно, среди них могут выявляться деструкторы алканов, содержащих в цепочке до 6 атомов углерода («короткие» алканы).
Использование двух пар праймеров (alk1 и alk3) в полимеразной цепной реакции (матрицей служила
тотальная ДНК, выделенная из клеток 46 штаммов-деструкторов) позволило выявить для 4 штаммов
продукты амплификации специфического размера, характерного для типа alk1 (185 п. н.), и для
11 штаммов – ампликоны типа alk3 (330 п. н.) (табл. 3).
Таблица 3
Характеристика перспективных бактерий-деструкторов нефти
Номер
образца
почвы
1
Штамм
2
Грампринадлежность
3
Диапазон роста
Пигмент
4
t, оС
5
рН
6
NaCl, %
7
АL18
АL18
Грам+
Розовый
18÷42
5÷10
1÷7
FD
FD3
8A-4A
Грам+
Грам–
Оранжевый
–
4÷42
18÷42
6÷10
5÷12
1÷14
1÷7
8А
8A-3A
Грам+
Розовый
10÷42
7÷8
1÷7
8А-1А
1-7-1
+
–
–
18÷42
18÷42
7÷8
7÷8
До 1
1÷7
1
48
Грам
Грам+
Источники
углерода
Гидроксилаза типа
8
9
Нефть, гексадекан,
нафталин, толуол,
ксилол, антрацен,
фенантрен
Нефть
Нефть, гексадекан
Нефть, гексадекан,
нафталин
Нефть, гексадекан
Нефть, гексадекан
alk1
alk1
alk1, аlk3
–
–
alk1, аlk3
Биология
Окончание табл. 3
1
2
+
Грам
5Ap
Грам+
6-3
Грам
+
10-15
Грам
+
10-1N
Грам–
15-3А
Грам–
10
15
4
L5A-16
5А
6
3
5
6
7
8
9
–
28÷37
6÷10
До 1
Розовый
18÷42
7÷9
1÷7
–
Желтооранжевый
Флюоресцирующий
Желтооранжевый
18÷50
7÷8
1÷10
Нефть, гексадекан,
толуол
Нефть, гексадекан,
нафталин
Нефть, гексадекан
18÷42
7÷8
1÷10
Нефть, гексадекан
аlk3
10÷37
5÷9
До 1
Нефть, нафталин
–
28÷42
6÷12
1÷7
Нефть, гексадекан
аlk3
–
–
–
Сравнительный анализ свойств исследованных бактерий-деструкторов, а именно рост при различных температурных режимах, разных значениях рН среды и концентрациях NaCl, способность
использовать в качестве источника углерода и энергии отдельные компоненты нефти, присутствие
в геноме гидролаз, обеспечивающих утилизацию алифатических углеводородов, позволил отобрать
наиболее перспективные штаммы для дальнейшего исследования (см. табл. 3). В частности, штамм
АL18 характеризовался самым широким деградативным потенциалом (способен использовать все
исследованные источники углерода), штамм FD3 – самым широким температурным диапазоном
(растет от 4 до 42 °С) и ростом при самой высокой концентрации NaCl (14 %); штаммы 8A-4A и 1-7-1
содержали в геноме гидроксилазы двух типов (alk1 и alk3), штаммы 10-15 и 15-3А – гидроксилазу
типа alk3; штамм L5A-16 хорошо рос на среде с толуолом, а штаммы 8A-3A, 5Ар и 10-1N – на среде
с нафталином (см. табл. 3). Следует отметить, что практически все отмеченные штаммы (10 из 13)
являлись грамположительными, больше половины из которых (6 из 10) образовывали на плотной агаризованной среде окрашенные колонии. Безусловно, выбор перспективных штаммов-деструкторов
был предварительным, поскольку решающим критерием для их дальнейшего использования
будет их способность осуществлять эффективную деградацию нефти в почвах разного состава при
различных физиологических режимах.
1. М и л л е р Д ж . Эксперименты в молекулярной генетике. М., 1976. C. 236.
2. Е г о р о в Н . С . Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1995. С. 95.
3. t e R i e l e H . , M i c h e l B . , E h r l i c h S . D . // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. Vol. 83. P. 2541.
4. K o h n o T . , S u g i m o t o Y . , S e i K . , M o r i K . // Microb. Environ. 2002. Vol. 17. Р. 114.
5. S a m b r o o k J . , F r i t s c h E . , M a n i a t i s T . // Cold Spring Harbor Publications. New York, 1989. Р. 468.
6. Б о й к о Е . В . Химия нефти и топлив: Учеб. пособие. Ульяновск, 2007. С. 60.
7. С ы р к и н А . М . , М о в с у м з а д е Э . М . Основы химии нефти и газа: Учеб. пособие. Уфа, 2002. С. 109.
8. M c L e o d M . P . // Proc. of the Nat. Acad. of Sciences of the USA. 2006. Vol. 103. P. 15582.
9. Д а в ы д о в а С . Л . , Т а г а с о в В . И . Нефть и нефтепродукты в окружающей среде: Учеб. пособие. М., 2004. С. 163.
10. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем / Под ред. М. А. Глазковской. М., 1988. С. 264.
Поступила в редакцию 21.05.12.
Мария Ивановна Чернявская – магистрант кафедры микробиологии биологического факультета. Научный руководитель – М. А. Титок.
Абдуннаби Амхемед Эльгаммуди – стажер кафедры микробиологии.
Марина Алексеевна Титок – доктор биологических наук, профессор кафедры микробиологии.
УДК 632.7:635.9:625.7 (476-21)
Ф. В. САУТКИН, А. В. РЫЖАЯ, С. В. БУГА
НАСЕКОМЫЕ-ФИТОФАГИ – ВРЕДИТЕЛИ ДЕКОРАТИВНЫХ КУСТАРНИКОВ
В ЗЕЛЕНЫХ НАСАЖДЕНИЯХ г. ГРОДНО
At least 21 species of phytophagous insect damage ornamental shrubs and are numerous under the condition of Grodno green stands
(Belarus). Information about their species composition, host plants, phenology, occurrence and level of damaging activity is given.
В настоящее время в Республике Беларусь большое внимание уделяется оптимизации экологической среды населенных пунктов средствами озеленения и зеленого строительства. Зеленые насаждения и дискретные посадки декоративных растений имеют важное санитарно-гигиеническое, архи49