Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике».

реклама
ÈÏÀÒÎÂÀ Î.Ì.
ÔÎÑÔÎÃËÈÂ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß
È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÊËÈÍÈÊÅ
ÌÎÑÊÂÀ
ÈÇÄÀÒÅËÜÑÒÂÎ
_________________
2005
1
ÁÁÊ ________
____________
____________
Àâòîð
Èïàòîâà Î.Ì.
Ôîñôîãëèâ: ìåõàíèçì äåéñòâèÿ è ïðèìåíåíèå â êëèíèêå.
Ìîñêâà: Èçäàòåëüñòâî________________ 2005 - _____ ñ
ISBN________
Êíèãà ïîñâÿùåíà âàæíåéøèì àñïåêòàì èçó÷åíèÿ
ñòðóêòóðîîáðàçóþùåé è ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ôîñôîëèïèäîâ â
êëåòêå
2
ÎÃËÀÂËÅÍÈÅ
Ïðåäèñëîâèå
ÃËÀÂÀ 1. ÎÁÙÈÅ ÏÐÅÄÑÒÀÂËÅÍÈß Î ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÀÕ
1.1. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è ñâîéñòâà
1.1.1. Æèðíûå êèñëîòû.
1.1.2. Ãëèöåðîôîñôîëèïèäû
1.1.3. Ñôèíãîôîñôîëèïèäû
1.2. Ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ îðãàíîâ è òêàíåé ÷åëîâåêà è
æèâîòíûõ
1.3. Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ôîñôîëèïèäîâ
ÃËÀÂÀ 2. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ Â ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÉ
ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ ÁÈÎÌÅÌÁÐÀÍ È ËÈÏÎÏÐÎÒÅÈÍÎÂ
2.1. Ñòðîåíèå áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí
2.2. Àñèììåòðèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ìåìáðàíå.
2.3. Æèäêîñòíîñòü áèîìåìáðàí êàê ôàêòîð ðåãóëÿöèè
ìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ.
2.4. Ìåìáðàííûå áåëêè.
2.5. Ëàòåðàëüíàÿ ãåòåðîãåííîñòü áèîìåìáðàí.
2.6. Ñîñòàâ è ìîëåêóëÿðíàÿ îðãàíèçàöèÿ ôîñôîëèïèäîâ â
ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè
ÃËÀÂÀ 3. ÔÓÍÊÖÈÎÍÀËÜÍÀß ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ Â
ÊËÅÒÊÅ
3.1. Ôîñôàòèäèëõîëèí
3.2. Ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí
3.3. Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû.
3.3.1. Îáùèå ôóíêöèè àíèîííûõ ôîñôîëèïèäîâ è èõ âëèÿíèå
íà àêòèâíîñòü âíåìåìáðàííûõ áåëêîâ.
3.3.2. Ñïåöèôè÷åñêèå ôóíêöèè èíäèâèäóàëüíûõ àíèîííûõ
ôîñôîëèïèäîâ.
3.4. Ñôèíãîìèåëèí è äðóãèå ñôèíãîëèïèäû.
3.5. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ëèçîôîñôîëèïèäîâ.
3.5.1. Ëèçîñôèíãîëèïèäû
3.5.2. Ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäû.
3.5.3. Ñî÷åòàííîå äåéñòâèå ñôèíãîëèïèäîâ
è ëèçîôîñôîëèïèäîâ íà êëåòî÷íûå ïðîöåññû.
3.6. Ôóíêöèè æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ
ÃËÀÂÀ 4. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ Â ÏÐÎÖÅÑÑÀÕ
ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈß ÊËÅÒÊÈ
4.1. Îñíîâíûå èçìåíåíèÿ â êëåòêàõ ïðè ïîâðåæäåíèè
4.1.1. Ðåàêöèÿ êëåòêè íà èçìåíåíèÿ óñëîâèé.
3
4.1.2. Ïðè÷èíû, âûçûâàþùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè.
4.2. Àïîïòîç è íåêðîç - äâà âàðèàíòà ãèáåëè ïîâðåæäåííîé
êëåòêè.
4.2.1. Àïîïòîç.
4.2.2. Èíèöèàöèÿ è òðàíñäóêöèÿ àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíàëà.
4.2.3. Ìèòîõîíäðèàëüíûé ïóòü àïîïòîçà.
4.2.4. Àïîïòîç è ôîñôîëèïèäû.
4.3. Íåêðîç è ïîâðåæäåíèå áèîìåìáðàí.
4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû ïðè íåêðîçå.
4.3.2. Îáðàòèìîñòü ïîâðåæäåíèé.
4.4. Ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí êàê îáðàòèìûé ýòàï íåêðîçà.
4.4.1.Îáùèå áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ
ìåìáðàíû.
4.4.2. Ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ.
4.4.3. Ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ïðîòåèíàçàìè è
ôîñôîëèïàçàìè.
4.4.4. Ìåõàíèçìû çàùèòû êëåòîê îò îêèñëèòåëüíûõ
ïîâðåæäåíèé.
4.5. Èçìåíåíèÿ ñîñòàâà ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ òêàíåé ïðè
ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ.
ÃËÀÂÀ 5. ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÉ ÊËÅÒÎÊ
ÏÅ×ÅÍÈ. ÌÅÕÀÍÈÇÌÛ ÃÅÏÀÒÎÒÎÊÑÈ×ÍÎÑÒÈ.
5.1. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè êèñëîòàìè
5.2. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ.
5.3. Õåìîêèíû, ìîëåêóëû àäãåçèè è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ ïðè
âîñïàëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè.
5.4. Ãåïàòîòîêñè÷íîñòü, âûçûâàåìàÿ äèñôóíêöèåé ìèòîõîíäðèé.
5.5. Òîêñè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè.
5.6. Ëåêàðñòâåííàÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü.
ÃËÀÂÀ 6. ÌÅÌÁÐÀÍÍÛÅ ÔÅÐÌÅÍÒÍÛÅ ÑÈÑÒÅÌÛ: ÈÕ
ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÅ È ÐÅÏÀÐÀÖÈß
6.1. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì áèîìåìáðàí.
6.2. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî
ðåòèêóëóìà êàê ïîêàçàòåëü ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè è èõ ðåïàðàöèÿ
ôîñôîëèïèäàìè.
ÃËÀÂÀ 7. ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÀß ÊÈÑËÎÒÀ: ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ
ÑÂÎÉÑÒÂÀ È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ Â ÊÀ×ÅÑÒÂÅ
ÏÐÎÒÈÂÎÂÈÐÓÑÍÎÃÎ ÀÃÅÍÒÀ
7.1. Îñíîâíûå áèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòû.
7.1.1. Èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà.
4
7.1.2. Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå.
7.1.3. Àíòèîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà
7.1.4. Ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà.
7.1.5. Ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò.
7.1.6. Àíòèêàíöåðîãåííîå äåéñòâèå.
7.1.7. Âëèÿíèå íà îáðàçîâàíèå NO.
7.2. Ïðèìåíåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå.
7.2.1. Ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòû.
7.2.2. Ðåçóëüòàòû êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿ
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ.
ÃËÀÂÀ 8. ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÀß ÊÎÌÏÎÇÈÖÈß ÍÀ ÎÑÍÎÂÅ
ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ È
ÔÎÑÔÀÒÈÄÈËÕÎËÈÍÀ ÑÎÈ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß
È ÒÅÕÍÎËÎÃÈß ÏÎËÓ×ÅÍÈß
8.1. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ è
ýôôåêòèâíîñòè çàùèòíîãî äåéñòâèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû
íà ìèêðîñîìàëüíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè.
8.2. Èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ñîåâîãî
ôîñôàòèäèëõîëèíà è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû.
8.2.1.Ñðàâíèòåëüíàÿ õàðàêòåðèñòèêà ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòîâ.
8.2.2. Âëèÿíèå ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà
Ð450 .
8.2.3. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà àêòèâíîñòü ìèêðîñîìàëüíûõ
ôåðìåíòîâ ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì
òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì.
8.2.4. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà àêòèâíîñòü
ìèòîõîíäðèàëüíûõ ôåðìåíòîâ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ
ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåïàòèòîì.
8.2.5. Âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ.
8.2.6. Ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå ñìåñè ÔÕÃÊ íà êóëüòóðó.
ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ïðè âîçäåéñòâèè òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ
8.3. Òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé
ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ôîñôîãëèâà íà îñíîâå ôîñôàòèäèëõîëèíà
ñîè è ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû.
ÃËÀÂÀ 9. ÄÎÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
ÔÎÑÔÎÃËÈÂÀ
9.1. Ñðàâíèòåëüíîå èçó÷åíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè
ïðåïàðàòîâ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå â ýêñïåðèìåíòàõ in situ.
9.2. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòà
5
ôîñôîãëèâ â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè îñòðîãî
ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4.
9.3. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ôîñôîãëèâà â
ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà,
âûçâàííîãî ÑÑ14.
9.4. Ðàñïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ ôîñôîãëèâà - ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòû è ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà - â îðãàíèçìå.
9.5. Òîêñèêîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ôîñôîãëèâà
ÃËÀÂÀ 10. ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ ÏÐÅÏÀÐÀÒÀ
ÔÎÑÔÎÃËÈÂ.
10.1. Îáîñíîâàíèå êëèíè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ ïðåïàðàòà
ôîñôîãëèâ
10.2. Ïðèìåíåíèå êàïñóëüíîé ôîðìû ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
10.3. Êëèíè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü èíúåêöèîííîé ôîðìû
ôîñôîãëèâà.
10.4. Ïðèìåíåíèå êîìáèíèðîâàííîãî (êàïñóëüíîãî è â/â) êóðñà
ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì.
10.5. Ïåðñïåêòèâû ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà.
10.6. Ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â ïåäèàòðèè.
ÐÅÊÎÌÅÍÄÎÂÀÍÍÛÅ ÑÕÅÌÛ ËÅ×ÅÍÈß
ÔÎÑÔÎÃËÈÂÎÌ.
6
ÏÐÅÄÈÑËÎÂÈÅ
Îñíîâíîé öåëüþ ìîíîãðàôèè Î.Ì.Èïàòîâîé ÿâëÿåòñÿ æåëàíèå
îáñóäèòü äâà âîïðîñà, êîòîðûå îáäåëåíû âíèìàíèåì êàê
ñîâðåìåííîé áèîõèìèè, òàê è ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãèè. Îáà
âîïðîñà ÿâëÿþòñÿ "ïàñûíêàìè" ýòèõ íàóê, èáî ìåæäó
äîñòèæåíèÿìè ñîâðåìåííîé áèîìåäèöèíñêîé íàóêè â îáëàñòè
ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè è áèîõèìèè è ïðîáëåìàìè, êîòîðûå áóäóò
îáñóæäàòüñÿ â ýòîé êíèãå, ñóùåñòâóåò îãðîìíûé ïðîáåë.
Ïåðâûé âîïðîñ - ðîëü ôîñôîëèïèäîâ â êëåòêå, èõ ó÷àñòèå â
ôóíêöèîíèðîâàíèè êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, ñèãíàëüíûõ ïðîöåññàõ è
ò.ä. Ê ñîæàëåíèþ, ôîñôîëèïèäàì ëèøü â ñàìîå ïîñëåäíåå âðåìÿ
ñòàëè óäåëÿòü áîëüøå âíèìàíèÿ, ÷åì çà ïðåäøåñòâóþùèå 10-20 ëåò
ðàçâèòèÿ áèîõèìèè. Ïðàâäà ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî îñîáûõ
äîñòèæåíèé â ýòîé îáëàñòè ïîêà íåò. Îäíàêî íå âûçûâàåò
ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî î ðîëè ôîñôîëèïèäîâ â êëåòêå ñòàëî
èçâåñòíî ãîðàçäî áîëüøå èìåííî çà ïîñëåäíèå ïÿòü ëåò. Îñîáåííî
èíòåðåñíû òå èññëåäîâàíèÿ, â êîòîðûõ îñíîâíîå âíèìàíèå óäåëåíî
ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ëèïèäîâ â êëåòêå, òàê êàê âñÿ
ïðåäøåñòâóþùàÿ èñòîðèÿ ôîñôîëèïèäîâ, ïî ñóòè, áûëà èñòîðèåé
ôîñôîëèïèäîâ êàê ñòðóêòóðíûõ êîìïîíåíòîâ áèîëîãè÷åñêèõ
ìåìáðàí è ëèïîïðîòåèíîâ. Â äàííîé îáëàñòè íàêîïëåí óæå
äîñòàòî÷íî áîëüøîé íàó÷íûé ìàòåðèàë, íî, ê ñîæàëåíèþ, ýòè
çíàíèÿ íå ïîëó÷èëè äîëæíîé ðåàëèçàöèè â ìåäèöèíñêîé
ïðàêòèêå. Ïî ñóòè äåëà, åñëè ìåäèöèíñêèé àñïåêò ïðîáëåìû
ðàññìàòðèâàòü â èñòîðè÷åñêîì ïëàíå, òî ôîñôîëèïèäû â êà÷åñòâå
ëåêàðñòâ ýôôåêòèâíî áûëè èñïîëüçîâàíû ëèøü îäíîé ôèðìîé
("Íàòòåðìàíí", Ãåðìàíèÿ) à ñîçäàííûå åé â íà÷àëå 60-õ ã.ã.
ïðåïàðàòû "Ýññåíöèàëå" è "Ëèïîñòàáèë" äî ñèõ ïîð ÿâëÿþòñÿ
åäèíñòâåííûìè íà ìèðîâîì ôàðìàöåâòè÷åñêîì ðûíêå. Àâòîð
êíèãè ïîñòàðàëàñü âîñïîëíèòü ñóùåñòâóþùèé ïðîáåë â
ôîñôîëèïèäíîé íàóêå è ïðåäëàãàåò âíèìàíèþ ÷èòàòåëåé íîâûé
îòå÷åñòâåííûé ëåêàðñòâåííûé ïðåïàðàò "Ôîñôîãëèâ" ãåïàòîïðîòåêòîð ñ àíòèâèðóñíûì äåéñòâèåì. Ñîçäàííàÿ ñ ó÷àñòèåì
àâòîðà îðèãèíàëüíàÿ òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è
èíúåêöèîííîé ôîðì "Ôîñôîãëèâà" íå èìååò àíàëîãîâ â ìèðå è â
íàñòîÿùåå âðåìÿ ýòîò ïðåïàðàò âñå øèðå è øèðå íà÷èíàåò
èñïîëüçîâàòüñÿ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé
ïå÷åíè ðàçëè÷íîãî ïðîèñõîæäåíèÿ.
Äðóãîé îáîéäåííûé âíèìàíèåì âîïðîñ, âòîðîé "ïàñûíîê"
áèîõèìèè è ôàðìàêîëîãèè - ýòî çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè. Íåñìîòðÿ íà
òî, ÷òî óãðîçà øèðîêîãî ðàñïðîñòðàíåíèÿ ãåïàòèòà Ñ íàâèñëà íàä
âñåì ìèðîì (òàê, íàïðèìåð, â ÑØÀ âèðóñîíîñèòåëÿìè ãåïàòèòà Ñ
7
ÿâëÿþòñÿ îêîëî 4 ìëí. ÷åëîâåê, â íàøåé ñòðàíå ýòà öèôðà
ïðèáëèæàåòñÿ ê 3,5 ìëí., à ñîãëàñíî ïðîãíîçàì Âñåìèðíîé
îðãàíèçàöèè çäðàâîîõðàíåíèÿ, ÂÎÇ, ê 2010 ãîäó îêîëî ïîëîâèíû
íàñåëåíèÿ çåìíîãî øàðà áóäåò èíôèöèðîâàíî ýòèì âèðóñîì)
âíèìàíèÿ ýòîìó âîïðîñó óäåëÿåòñÿ íåäîñòàòî÷íî. Íà òî åñòü ñâîè
îñíîâàíèÿ. Ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ íàèáîëåå òðóäíûì îáúåêòîì, íàèáîëåå
òðóäíîé ìèøåíüþ äëÿ ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãèè. Åñëè ïåðå÷íè
ëåêàðñòâ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ëå÷åíèÿ ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòûõ,
îíêîëîãè÷åñêèõ,
ëåãî÷íûõ,
èíôåêöèîííûõ
çàáîëåâàíèé
äîñòàòî÷íî îáøèðíû, êàæäûé èç íèõ âêëþ÷àåò íåñêîëüêî äåñÿòêîâ,
à òî è ñîòåí íàèìåíîâàíèé, òî â ñëó÷àå ïå÷åíè, ïî ñóòè äåëà, â
íàøåì ðàñïîðÿæåíèè íåò ëåêàðñòâ, äåéñòâóþùèõ ïàòîãåíåòè÷åñêè.
Íåêîòîðûå ñèìïòîìàòè÷åñêèå ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû, òàêèå êàê
"Ãåïàáåíå", "Ãàëñòåíà", "Òûêâåîë", "Õîôèòîë", "Ëàêòóëîçà" è ðÿä
äðóãèõ íåëüçÿ íàçâàòü ëåêàðñòâàìè, âîññòàíàâëèâàþùèìè ôóíêöèþ
ïå÷åíè. Òàê íàçûâàåìûå "ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñîåäèíåíèÿ" òåðìèí, êîòîðûé ñóùåñòâóåò â ôàðìàêîïåÿõ äàëåêî íå âñåõ ñòðàí,
èìååò î÷åíü ðàçìûòîå òîëêîâàíèå.  äîñëîâíîì ïåðåâîäå
"ãåïàòîïðîòåêòîðû" - ïðåïàðàòû, çàùèùàþùèå ïå÷åíü. À ÷òî ýòî
çíà÷èò? Ïå÷åíü ñàìà âûïîëíÿåò çàùèòíóþ ôóíêöèþ â îðãàíèçìå.
×òî çíà÷èò çàùèùàòü îðãàí, âûïîëíÿþùèé çàùèòíóþ ôóíêöèþ?
Òàê ÷òî, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî ýòîò òåðìèí øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí,
ñìûñë åãî ïðîäîëæàåò îñòàâàòüñÿ íå ÿñíûì. Åñëè â ñëó÷àå
òîêñè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè ìíîãèìè õèìè÷åñêèìè
ñîåäèíåíèÿìè òàê íàçûâàåìûå ãåïàòîïðîòåêòîðû è îáëàäàþò
íåêîòîðîé ýôôåêòèâíîñòüþ, òî äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ âèðóñíîãî
ïðîèñõîæäåíèÿ, ìåõàíèçì âîçíèêíîâåíèÿ êîòîðûõ äî ñèõ ïîð íå
ðàñøèôðîâàí, ýòè ñîåäèíåíèÿ, ïî ñóòè äåëà, íå ÿâëÿþòñÿ
ëåêàðñòâåííûìè ïðåïàðàòàìè. Äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ,
êàê ïðàâèëî, èñïîëüçóþòñÿ ïðåïàðàòû ñ øèðîêèì ñïåêòðîì
àíòèâèðóñíîãî äåéñòâèÿ, ýôôåêòèâíîñòü êîòîðûõ â îòíîøåíèè
ïå÷åíè âåñüìà îãðàíè÷åíà.
Èç-çà ñëîæíîñòè îðãàíèçàöèè è ìíîãîîáðàçèÿ ôóíêöèé ïå÷åíè
ìíîãèå âðà÷è è ôàðìàêîëîãè, â ïðèíöèïå, íå âåðÿò â âîçìîæíîñòü
ñîçäàíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé, íàïðàâëåííûõ íà
âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ïîðàæåííîé ïå÷åíè, ò.å.
ëåêàðñòâ ñî ñòðîãî íàïðàâëåííûì, âîçäåéñòâóþùèì íà ïàòîãåíåç
çàáîëåâàíèÿ äåéñòâèåì.
 ýòîé ìîíîãðàôèè àâòîð ïîñòàðàëàñü óáåäèòü ÷èòàòåëÿ, ÷òî
îäíèì èç ïåðâûõ òàêîãî ðîäà ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ ÿâëÿåòñÿ
"Ôîñôîãëèâ", îáúåäèíÿþùèé â ñåáå ñâîéñòâà ãåïàòîïðîòåêòîðà (ÿ
èñïîëüçóþ ýòîò íåóäà÷íûé òåðìèí, ò.ê. îí øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â
íàøåé ëèòåðàòóðå) è àíòèâèðóñíîãî ïðåïàðàòà øèðîêîãî ñïåêòðà
8
äåéñòâèÿ. Îáúåäèíåíèå ýòèõ äâóõ ìåõàíèçìîâ äåéñòâèÿ â ñîñòàâå
îäíîé êîìïîçèöèè ïîçâîëèëî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïîëó÷åííûé
ïðåïàðàò íå ïðîñòî ñóììà îò ýòèõ äâóõ ñîñòàâëÿþùèõ, íî è
îáëàäàåò ñèíåðãåòè÷åñêèì (ïðåâûøàþùèì ïðîñòîå ñóììèðîâàíèå)
ëå÷åáíûì ýôôåêòîì â îòíîøåíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Îäèí èç
îñíîâíûõ êîìïîíåíòîâ ýòîãî ïðåïàðàòà ôîñôàòèäèëõîëèí
(ëåöèòèí) ñîè îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ âîññòàíàâëèâàòü ñòðóêòóðó
ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê, äåéñòâóÿ êàê "ìåìáðàííûé êëåé",
"çàêëåèâàþùèé" äåôåêòû ïîâðåæäåííûõ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí
íåçàâèñèìî îò èõ ïðîèñõîæäåíèÿ. Ýòîò êîìïîíåíò "Ôîñôîãëèâà"
ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì äåéñòâóþùèì íà÷àëîì è òàêîãî õîðîøî
èçâåñòíîãî ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà, êàê "Ýññåíöèàëå". Íîâèçíà
åãî èñïîëüçîâàíèÿ â ïðåïàðàòå "Ôîñôîãëèâ" çàêëþ÷åíà â
ñîâåðøåííî
íîâîé
òåõíîëîãèè
ïðèãîòîâëåíèÿ
ñóõîé
ïîðîøêîîáðàçíîé ôîðìû ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà, ÷òî íå óäàâàëîñü
íèêîìó â ïðîøëîì. Âîçìîæíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ ñîåâîãî
ôîñôîëèïèäà â âèäå ñóõîãî ãðàíóëèðîâàííîãî ïîðîøêà ðàñøèðèëî
âîçìîæíîñòü åãî õðàíåíèÿ â êàïñóëàõ â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ëåò.
Îðèãèíàëüíàÿ òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû
ïîçâîëèëà ñîçäàòü óíèêàëüíóþ ôîñôîëèïèäíóþ íàíîñèñòåìó
ýìóëüãèðîâàííûõ ìèöåëë è ëèïîñîì, ïðåäñòàâëÿþùóþ ñîáîé
óñòîé÷èâûå ÷àñòèöû ñî ñðåäíèì äèàìåòðîì 30 - 50 íì, íå
ñîäåðæàùóþ òîêñè÷íûõ ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûõ ñîåäèíåíèé
(äåòåðãåíòîâ). Ïðîöåäóðà ïîëó÷åíèÿ òîíêîé ýìóëüñèè ñëîæíûõ
ìèöåëë, ñïîñîáíûõ õðàíèòüñÿ â ñóõîì ñîñòîÿíèè â òå÷åíèå 5-6 ëåò,
ñîñòàâëÿåò îñíîâó òåõíîëîãèè èçãîòîâëåíèÿ ýòîãî ïðåïàðàòà.
Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî, êàê è ëþáûå äðóãèå íàíî÷àñòèöû, îíè
ìîãóò îáëàäàòü ñîâåðøåííî èíûìè ôèçèêî-õèìè÷åñêèìè
ñâîéñòâàìè ïî ñðàâíåíèþ ñ ìèêðî- è ìàêðîñèñòåìàìè òîãî æå
ñîñòàâà, è èçó÷åíèå ýòèõ ñâîéñòâ óæå íà÷àëîñü â ëàáîðàòîðèè
àâòîðà.
Âòîðûì êîìïîíåíòîì "Ôîñôîãëèâà" ÿâëÿåòñÿ ãëèöèððèçèíîâàÿ
êèñëîòà - ñîåäèíåíèå ñ àíòèâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ øèðîêî
èçâåñòíîå â ßïîíèè, Êèòàå è äðóãèõ ñòðàíàõ Þãî-Âîñòî÷íîé Àçèè.
 îñíîâå ìåõàíèçìà åå äåéñòâèÿ ëåæèò èíòåðôåðîíïðîäóöèðóþùàÿ àêòèâíîñòü ýòîãî ñîåäèíåíèÿ, à òàêæå è
íåêîòîðûå äðóãèå àíòèâèðóñíûå ýôôåêòû. Ñîåäèíåíèå â îäíîì
ïðåïàðàòå äâóõ êîìïîíåíòîâ: ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà, äåéñòâóþùåãî
êàê "ìåìáðàííûé êëåé" è âîññòàíàâëèâàþùåãî ôóíêöèþ
ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê, ñ îäíîé ñòîðîíû, è ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû
êàê àíòèâèðóñíîãî êîìïîíåíòà, ñ äðóãîé, ïîçâîëèëî ïîëó÷èòü
ëåêàðñòâî íîâîãî ïîêîëåíèÿ, ãåïàòîïðîòåêòîð ñ àíòèâèðóñíûì
äåéñòâèåì. Êðîìå òîãî, ñîçäàíèå ñòàáèëüíîé âûñîêîäèñïåðñíîé
9
íàíîñèñòåìû èç ñîåâîãî ôîñôîëèïèäà ïîçâîëèëî ïîëó÷èòü
óíèâåðñàëüíóþ ñèñòåìó äëÿ òðàíñïîðòà ìíîãèõ ëåêàðñòâåííûõ
ñîåäèíåíèé. Ãèäðîôîáíûå, ïëîõî ðàñòâîðèìûå â âîäå ëåêàðñòâà
âêëþ÷àþòñÿ â ÿäðî ôîñôîëèïèäíîé ìèöåëëû, ïðåäñòàâëÿþùåå
ñîáîé ãèäðîôîáíîå ïðîñòðàíñòâî, ñîñòîÿùåå èç æèðíûõ êèñëîò
ôîñôàòèäèëõîëèíà. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, ôîñôîëèïèäíûå
íàíî÷àñòèöû ñ âûñîêî ðàçâèòîé ïîâåðõíîñòüþ ìîãóò ñîðáèðîâàòü
äîñòàòî÷íî áîëüøîå êîëè÷åñòâî ãèäðîôèëüíûõ (âîäîðàñòâîðèìûõ)
ëåêàðñòâ íà ñâîåé ïîâåðõíîñòè. Ïîýòîìó èíúåêöèîííàÿ ôîðìà
"Ôîñôîãëèâà" ìîæåò ñëóæèòü îñíîâîé âûñîêîýôôåêòèâíîé
òðàíñïîðòíîé ñèñòåìû, óëó÷øàþùåé áèîäîñòóïíîñòü ìíîãèõ
ëåêàðñòâ êàê æèðîðàñòâîðèìûõ (ãèäðîôîáíûõ), òàê è
âîäîðàñòâîðèìûõ (ãèäðîôèëüíûõ) ïî ñâîèì ôèçèêî-õèìè÷åñêèì
ñâîéñòâàì. Íåñîìíåííî, ÷òî îñíîâíûì äîñòèæåíèåì àâòîðñêîãî
êîëëåêòèâà ÿâëÿåòñÿ ñîçäàíèå îðèãèíàëüíûõ òåõíîëîãèé
ïðèãîòîâëåíèÿ íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì - êàïñóëüíîé è
èíúåêöèîííîé. Íà î÷åðåäè íàõîäèòñÿ ñîçäàíèå äðóãèõ ôîðì
ïðåïàðàòà.
Ñîçäàííûå îðèãèíàëüíûå âûñîêèå òåõíîëîãèè ïðèãîòîâëåíèÿ
ãîòîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì äàëè íîâóþ æèçíü ñòàðûì õîðîøî
èçâåñòíûì ñâîèìè ëåêàðñòâåííûìè ñâîéñòâàìè êîìïîíåíòàì
"Ôîñôîãëèâà" - ñîåâîìó ôîñôàòèäèëõîëèíó è ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòå. Íåñîìíåííî, ÷òî ñîçäàíèå ýòîãî îðèãèíàëüíîãî
îòå÷åñòâåííîãî ïðåïàðàòà ÿâëÿåòñÿ ñóùåñòâåííûì äîñòèæåíèåì
ñîâðåìåííîé ôàðìàêîëîãè÷åñêîé íàóêè è îòå÷åñòâåííîé
ôàðìàöåâòè÷åñêîé èíäóñòðèè. Îíî êàê áû îïðîâåðãàåò øèðîêî
ðàñïðîñòðàíåííûé òåçèñ, ÷òî Ðîññèÿ íå ãîòîâà ê ñîçäàíèþ íîâûõ
ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ è ïîýòîìó âûíóæäåíà äîâîëüñòâîâàòüñÿ
ïðîèçâîäñòâîì äæåíåðèêîâ.
Ñîçäàíèå ïðåïàðàòà ïî äîñòîèíñòâó áûëî îòìå÷åíî â íàøåé
ñòðàíå ïðèñóæäåíèåì ãðóïïå àâòîðîâ, ñðåäè êîòîðûõ è Èïàòîâà
Î.Ì. - ïðåìèè Ïðàâèòåëüñòâà ÐÔ çà 2002 ãîä. Íà ìîé âçãëÿä, òàêæå
êàê è íà âçãëÿä äðóãèõ àâòîðîâ ýòîãî ïðåïàðàòà è ìíîãèõ âðà÷åé,
ïðîâîäèâøèõ êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ, ïðåïàðàòó "Ôîñôîãëèâ"
ñóæäåíî áîëüøîå áóäóùåå.
Àêàäåìèê ÐÀÌÍ Àð÷àêîâ À.È.,
äèðåêòîð ÃÓ ÍÈÈ áèîìåäèöèíñêîé
õèìèè èì. Â.Í.Îðåõîâè÷à ÐÀÌÍ
10
ÃËÀÂÀ 1. ÎÁÙÈÅ ÏÐÅÄÑÒÀÂËÅÍÈß Î ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÀÕ
1.1. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è ñâîéñòâà
Âñå áèîìåìáðàíû, âêëþ÷àÿ ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó è
âíóòðåííèå ìåìáðàíû ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê, ïðåäñòàâëÿþò
ñîáîé àíñàìáëè ëèïèäíûõ è áåëêîâûõ ìîëåêóë. Ñîäåðæàíèå
äðóãèõ êîìïîíåíòîâ ñîñòàâëÿåò, êàê ïðàâèëî, ìåíåå 5%. Ëèïèäû
ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îáøèðíûé êëàññ íåïîëÿðíûõ ïðèðîäíûõ
ñîåäèíåíèé, ðàçëè÷àþùèõñÿ ìåæäó ñîáîé õèìè÷åñêîé
ñòðóêòóðîé. Ê íèì îòíîñÿò æèðíûå êèñëîòû, íåéòðàëüíûå
ãëèöåðèäû, ôîñôîëèïèäû, ñôèíãîëèïèäû, âîñêà è ò.ä. Â êëåòêå è
îðãàíèçìå ëèïèäàì ïðèñóùè òðè îñíîâíûå ôóíêöèè: (1) ýòî
âàæíåéøèå ñòðóêòóðíûå êîìïîíåíòû êëåòî÷íûõ ìåìáðàí; (2)
âàæíåéøèå áèîýôôåêòîðû, ðåãóëèðóþùèå âíóòðèêëåòî÷íûå
ðåàêöèè è ìåæêëåòî÷íûå âçàèìîäåéñòâèÿ; (3) ôîðìà çàïàñà
ìåòàáîëè÷åñêîãî òîïëèâà.
Ôîñôîëèïèäû (ÔË) ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îñíîâíîé êëàññ
ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, ñîäåðæàíèå êîòîðûõ âàðüèðóåò îò 40 äî 90%
îáùåãî
êîëè÷åñòâà
ëèïèäîâ.
Â
ñîñòàâ
ÔË
âõîäÿò
äëèííîöåïî÷å÷íûå íàñûùåííûå èëè íåíàñûùåííûå æèðíûå
êèñëîòû, ñîäåðæàùèå îò 10-12 äî 26-28 àòîìîâ óãëåðîäà.
Îáÿçàòåëüíûì ïðèçíàêîì ÔË ÿâëÿåòñÿ íàëè÷èå ôîñôàòíîé
ãðóïïû, ê êîòîðîé ïðèñîåäèíåíà ñïåöèôè÷åñêàÿ ïîëÿðíàÿ ãðóïïà.
Ïîëÿðíûìè ãðóïïàìè ÿâëÿþòñÿ àçîòèñòûå îñíîâàíèÿ (ýòàíîëàìèí
èëè õîëèí), àìèíîêèñëîòíûé îñòàòîê (ñåðèí) èëè óãëåâîäíûé
ôðàãìåíò (èíîçèò) [1 - 7].
Ñîïðÿæåíèå ìåæäó æèðíîêèñëîòíîé è ïîëÿðíîé ÷àñòüþ
ìîëåêóëû îñóùåñòâëÿåòñÿ â ïðèðîäå, êàê ïðàâèëî, ÷åðåç îäèí èç
äâóõ âèäîâ ñëîæíûõ ñïèðòîâ - ãëèöåðèíà èëè àìèíî-ñîäåðæàùåãî
ñïèðòà ñôèíãîçèíà (ÑÔ).  çàâèñèìîñòè îò ýòîãî ðàçëè÷àþò
ãëèöåðîôîñôîëèïèäû è ñôèíãîôîñôîëèïèäû.
Íåñìîòðÿ íà ðàçëè÷èå ñòðóêòóðû îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË, âñå
îíè ïîñòðîåíû ïî ñõîæåìó ïðèíöèïó. Â ñòðóêòóðå ÔË âûäåëÿþò
ïîëÿðíóþ "ãîëîâêó" è äâà ãèäðîôîáíûõ "õâîñòà" (Ðèñ. 1.1.1). Ó
ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ ãèäðîôîáíûå õâîñòû ïðåäñòàâëåíû
óãëåâîäîðîäíûìè ðàäèêàëàìè æèðíûõ êèñëîò, à ïîëÿðíàÿ ãîëîâêà
- îñòàòêîì ôîñôàòà, ñîåäèíåííîãî ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçüþ ñ
(àìèíî)ñïèðòîì.
Èìåííî ýòî ñî÷åòàíèå îáóñëàâëèâàåò îñíîâíîå ñâîéñòâî ÔË àìôèôèëüíîñòü, ò.å. ñðîäñòâî ê ïîëÿðíîé (âîäíîé) è ê
ãèäðîôîáíîé (æèðîâîé) ñðåäàì.
Æèðíûå êèñëîòû (ÆÊ) ÿâëÿþòñÿ óíèâåðñàëüíûì êîìïîíåíòîì
âñåõ òèïîâ îìûëÿåìûõ ëèïèäîâ, âêëþ÷àÿ ÔË. Îíè âî ìíîãîì
îïðåäåëÿþò ñâîéñòâà ÔË è îñîáåííîñòè èõ áèîëîãè÷åñêîãî
11
Ðèñ. 1.1.1. Ñòðóêòóðà ìîëåêóëû òèïè÷íîãî ãëèöåðîôîñôîëèïèäà
À - õèìè÷åñêàÿ ôîðìóëà; Á - ïðîñòðàíñòâåííîå ðàñïîëîæåíèå àòîìîâ;  - ïðèíÿòîå óñëîâíîå èçîáðàæåíèå.
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ.
 ìîëåêóëå ÔË æèðíûå êèñëîòû ñîåäèíåíû ñ ãëèöåðèíîì
(ñôèíãîçèíîì) ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçüþ, â îáðàçîâàíèè êîòîðîé
ó÷àñòâóþò êàðáîêñèëüíûå ãðóïïû æèðíîé êèñëîòû è
ãèäðîêñèëüíàÿ ãðóïïà ñïèðòà. Ñóùåñòâóåò áîëüøîå ðàçíîîáðàçèå
îñòàòêîâ æèðíûõ êèñëîò, êîòîðîå îïðåäåëÿåòñÿ äëèíîé
óãëåâîäîðîäíîé öåïè, êîëè÷åñòâîì è ìåñòîì ðàñïîëîæåíèÿ â íåé
äâîéíûõ ñâÿçåé. Íàëè÷èå äâîéíîé ñâÿçè - ò.å. íåíàñûùåííîñòü âàæíàÿ õàðàêòåðíàÿ ÷åðòà êàæäîé êèñëîòû, ÷àñòî îïðåäåëÿþùàÿ åå
ïîëîæåíèå â ìîëåêóëå ôîñôîëèïèäà, åãî ïîâåäåíèå è ñâîéñòâà â
êëåòî÷íîé ìåìáðàíå.
Íàñûùåííûå, ìîíîíåíàñûùåííûå è ïîëèíåíàñûùåííûå ÆÊ â
ðàçëè÷íûõ êîìáèíàöèÿõ ïðèñóòñòâóþò â ìîëåêóëàõ ÔË
ïðàêòè÷åñêè êàæäîãî ïðèðîäíîãî îáúåêòà (áèîìåìáðàí èëè
ëèïîïðîòåèíîâ).
Íåñìîòðÿ íà ÷ðåçâû÷àéíîå ðàçíîîáðàçèå ÆÊ â ïðèðîäå (èõ
íàñ÷èòûâàþò áîëåå 800 [8]), â ñîñòàâå ëèïèäîâ è ÔË òêàíåé
æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà êîëè÷åñòâî âñòðå÷àþùèõñÿ æèðíûõ êèñëîò
îãðàíè÷åíî 20, à ïðàêòè÷åñêè - åñëè íå ñ÷èòàòü ìèíîðíûõ, äîëÿ
êîòîðûõ ìåíåå 0.1% - îïðåäåëÿþò 10-12 îñíîâíûõ òèïîâ æèðíûõ
êèñëîò. Íî äàæå è ýòîãî êîëè÷åñòâà äîñòàòî÷íî, ÷òîáû îáåñïå÷èòü
øèðîêîå ðàçíîîáðàçèå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ êàæäîãî èç
ïðèðîäíûõ ôîñôîëèïèäîâ.
1.1.1. Æèðíûå êèñëîòû.
Îñíîâíûå íàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû ÔË æèâîòíûõ
12
îðãàíèçìîâ - ïàëüìèòèíîâàÿ (Ñ16:0) è ñòåàðèíîâàÿ (Ñ18:0). Ðåæå
âñòðå÷àþòñÿ, õîòÿ ïðèñóòñòâóþò â ìèíîðíûõ êîëè÷åñòâàõ â
æèâîòíûõ òêàíÿõ, íàñûùåííûå êèñëîòû ñ áîëåå êîðîòêîé öåïüþ
Ñ14:0 (ìèðèñòèíîâàÿ) èëè Ñ8:0 (êàïðèëîâàÿ), à òàêæå ñ áîëåå
äëèííîé öåïüþ, íàïðèìåð Ñ22:0 (ëèãíîöåðèíîâàÿ êèñëîòà).
Âñå æèâîòíûå êëåòêè ñïîñîáíû ñèíòåçèðîâàòü de novo
íàñûùåííûå ÆÊ, ïðåèìóùåñòâåííî ïàëüìèòèíîâóþ, à òàêæå
ñòåàðèíîâóþ, áåãåíîâóþ (Ñ20:0) è ëèãíîöåðèíîâóþ êèñëîòû.
Èç ìîíîíåíàñûùåííûõ, íàçûâàåìûõ ìîíîåíîâûìè, æèðíûõ
êèñëîò â ÔË ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì îëåèíîâàÿ êèñëîòà
(Ñ18:1), à òàêæå - çíà÷èòåëüíî â ìåíüøåì êîëè÷åñòâå ïàëüìèòîëåèíîâàÿ (Ñ16:1).
Áîëåå ïîëîâèíû æèðíûõ êèñëîò ÔË ñîäåðæàò äâå è áîëåå
äâîéíûå ñâÿçè (äèåíîâûå ÆÊ è ïîëèåíîâûå ÆÊ, íàçûâàåìûå
òàêæå ïîëèíåíàñûùåííûìè æèðíûìè êèñëîòàìè - ÏÍÆÊ).
Ó÷èòûâàÿ
ðàçëè÷èÿ
ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ
ñâîéñòâ
è
áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÏÍÆÊ, èõ ðàçäåëÿþò íà ñåìåéñòâà,
èñõîäÿ èç ïîëîæåíèÿ äâîéíîé ñâÿçè â öåïè æèðíîé êèñëîòû
îòíîñèòåëüíî êîíå÷íîãî àòîìà óãëåðîäà (ω- èëè n-).
 ïðèðîäå ðàñïðîñòðàíåíû äâà îñíîâíûõ ñåìåéñòâà ÏÍÆÊ, êîòîðûå
îáðàçóþòñÿ èç ëèíîëåâîé è àëüôà-ëèíîëåíîâîé êèñëîò: n-6 è n-3.
 ïðîöåññàõ ìåòàáîëèçìà â êëåòêå â ìîëåêóëó ÆÊ ìîãóò áûòü
ââåäåíû äîïîëíèòåëüíûå äâîéíûå ñâÿçè. Ýòó ðåàêöèþ
êàòàëèçèðóþò ôåðìåíòû äåñàòóðàçû. Ïðè äåéñòâèè äðóãèõ
ôåðìåíòîâ, ýëîíãàç, äëèíà óãëåâîäîðîäíîãî ñêåëåòà ìîæåò áûòü
óâåëè÷åíà íà 2 àòîìà óãëåðîäà. Òàêèì îáðàçîì, ïðè äåéñòâèè
ýëîíãàç è äåñàòóðàç ÆÊ ìîãóò ñòàòü äëèííåå è ïðèîáðåñòè áîëüøåå
÷èñëî äâîéíûõ ñâÿçåé. Ðàñòèòåëüíûå êëåòêè èìåþò â öèòîçîëå
òàêèå äåñàòóðàçû, êîòîðûå ïîçâîëÿþò èì ñèíòåçèðîâàòü ÏÍÆÊ
ñåìåéñòâà n-3 è n-6, èìåþùèå â óãëåâîäîðîäíîé öåïè äâå è áîëåå
äâîéíûõ ñâÿçè. Äåñàòóðàçû æèâîòíûõ êëåòîê ìîãóò îáðàçîâûâàòü
äâîéíûå ñâÿçè, óäàëåííûå îò êàðáîêñèëüíîé ãðóïïû íå äàëåå 9
àòîìà óãëåðîäà. Ïîýòîìó â îðãàíèçìå ÷åëîâåêà n-3 è n-6 ÏÍÆÊ,
ñîäåðæàùèå äâîéíûå ñâÿçè äèñòàëüíåå 9 àòîìà, íå ìîãóò
îáðàçîâûâàòüñÿ: n-6 ëèíîëåâàÿ Ñ18:2 (∆9,12), n-3 ëèíîëåíîâàÿ Ñ18:3
(∆9,12,15). Ïîñêîëüêó ýòè êèñëîòû íåîáõîäèìû äëÿ íîðìàëüíîãî
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ îðãàíèçìà, îíè äîëæíû ïîñòóïàòü ñ ïèùåé,
ïîýòîìó ÏÍÆÊ n-6 è n-3 íàçûâàþò ýññåíöèàëüíûìè æèðíûìè
êèñëîòàìè.
Ëèíîëåâààÿ êèñëîòàà, 18:2(n-66) - ñàìûé ðàñïðîñòðàíåííûé
êîìïîíåíò ðàñòèòåëüíûõ ëèïèäîâ è âñåõ êîììåð÷åñêèõ ìàñåë,
ïðîèçâîäèìûõ èç ñåìÿí. Õîòÿ âåñü ëèíîëåàò, ïðèñóòñòâóþùèé â
æèâîòíûõ òêàíÿõ, ïîñòóïàåò òîëüêî ñ ïèùåé, â áîëüøèíñòâå
13
êëàññîâ ëèïèäîâ ìëåêîïèòàþùèõ îí ñîñòàâëÿåò - âìåñòå ñ
îáðàçóþùåéñÿ èç íåãî àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé - 15-25%. Â
êàðäèîëèïèíå êëåòîê ñåðäöà ýòà öèôðà ìîæåò äîñòèãàòü 75% îò
îáùåãî êîëè÷åñòâà ÆÊ. Ëèíîëåâàÿ êèñëîòà òàêæå ÿâëÿåòñÿ
âàæíåéøèì êîìïîíåíòîì ÔË ðûá, õîòÿ ó ïîñëåäíèõ ïðåîáëàäàþò
æèðíûå êèñëîòû ñåìåéñòâà n-3.
Aðààõèäîíîâààÿ êèñëîòàà, 20:4(n-66) - âàæíåéøèé ìåòàáîëèò
ëèíîëåâîé êèñëîòû â æèâîòíûõ òêàíÿõ. Ýòî íàèáîëåå ÷àñòî
âñòðå÷àþùèéñÿ ïîëèíåíàñûùåííûé êîìïîíåíò ÔË, à â îäíîì èç
êëàññîâ ÔË - ôîñôàòèäèëèíîçèòå - îíà ñîñòàâëÿåò áîëåå 40% îò
âñåõ ÆÊ. Ìíîãèå áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå ñîåäèíåíèÿ, âêëþ÷àÿ
ïðîñòàãëàíäèíû (ðÿäà PG2), òðîìáîêñàíû, ëåéêîòðèåíû è
ëèïîêñèíû, ÿâëÿþòñÿ ïðîèçâîäíûìè àðàõèäîíîâîé êèñëîòû.
Àëüôàà-ë
ëèíîëåíîâààÿ êèñëîòàà, 18:3(n-33) - îñíîâíîé êîìïîíåíò
ëèñòüåâ è îñîáåííî ôîòîñèíòåçèðóþùåé ñèñòåìû âîäîðîñëåé è
âûñøèõ ðàñòåíèé. Ñîäåðæàíèå ëèíîëåíîâîé êèñëîòû â ëüíÿíîì
ìàñëå ñîñòàâëÿåò â ñðåäíåì 65% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ÆÊ, è
ïîýòîìó ýòî ìàñëî î÷åíü ÷óâñòâèòåëüíî ê îêèñëåíèþ. Ñîåâîå è
ðàïñîâûå ìàñëà ñîäåðæàò òîëüêî äî 7% ëèíîëåíàòà, ïîýòîìó îíè
áîëåå óñòîé÷èâû ê îêèñëåíèþ.
 êëåòêàõ æèâîòíûõ àëüôà-ëèíîëåíîâàÿ êèñëîòà ÿâëÿåòñÿ
ìèíîðíûì êîìïîíåíòîì. Îñòàëüíûå n-3 ÆÊ ñèíòåçèðóþòñÿ â
ðàñòèòåëüíûõ è æèâîòíûõ êëåòêàõ èç àëüôà-ëèíîëåíîâîé êèñëîòû
â õîäå ïîñëåäîâàòåëüíîãî óäëèíåíèÿ (ýëîíãàöèè) è äåñàòóðàöèè.
Âñå æèðíûå êèñëîòû n-3 ðÿäà ÿâëÿþòñÿ ýññåíöèàëüíûìè, òàê êàê
èõ èñòî÷íèê, àëüôà-ëèíîëåíîâàÿ êèñëîòà, ïîñòóïàåò â îðãàíèçì
òîëüêî ñ ïèùåé.
Ñîõðàíåíèå ïîñòîÿííîãî óðîâíÿ íåíàñûùåííîñòè æèðíûõ
êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ áèîìåìáðàí íåîáõîäèìî â ïåðâóþ î÷åðåäü
äëÿ ïîääåðæàíèÿ îïðåäåëåííûõ åå ôèçè÷åñêèõ ñâîéñòâ, òàêèõ, êàê
ïðîíèöàåìîñòü, æèäêîñòíîñòü è ò.ä.
Òàêèì îáðàçîì, ýññåíöèàëüíûå ëèíîëåâàÿ è ëèíîëåíîâàÿ
êèñëîòû íå ñèíòåçèðóþòñÿ â òêàíÿõ æèâîòíûõ è äîëæíû
îáÿçàòåëüíî ïîñòóïàòü ñ ïèùåé. Îíè àáñîëþòíî íåîáõîäèìû
îðãàíèçìó
äëÿ
ðîñòà,
ðåïðîäóêöèè
è
íîðìàëüíîãî
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ. Â ýêñïåðèìåíòàõ ñ íîâîðîæäåííûìè
æèâîòíûìè ñ äåôèöèòîì ýññåíöèàëüíûõ ÏÍÆÊ ïîêàçàíà
çàäåðæêà ðîñòà, íàðóøåíèå öåëîñòíîñòè ìåìáðàí è ãèáåëü êëåòîê
ïî÷åê è ïå÷åíè, ðàçâèòèå äåðìàòèòîâ è, êàê ðåçóëüòàò, ãèáåëü
îðãàíèçìà â öåëîì.
Äåôèöèò ýññåíöèàëüíûõ ÆÊ ïðîÿâëÿåòñÿ ó íîâîðîæäåííûõ
äåòåé èëè ó âçðîñëûõ, íàõîäÿùèõñÿ íà ïàðåíòåðàëüíîì ïèòàíèè, à
òàêæå ïðè íåêîòîðûõ ãåíåòè÷åñêèõ íàðóøåíèÿõ. Àáñîëþòíûå
14
ïîòðåáíîñòè îðãàíèçìà æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà â ýññåíöèàëüíûõ ÆÊ
ñåìåéñòâà n-3 è n-6 çàâèñÿò îò ðÿäà ôàêòîðîâ, âêëþ÷àÿ âèä è ïîë.
Êàê ïðàâèëî, ïîòðåáíîñòü ñîñòàâëÿåò äî 1-2% îò âñåõ ïîñòóïèâøèõ
ñ ïèùåé æèðíûõ êèñëîò äëÿ ëèíîëåàòà è íåñêîëüêî ìåíüøå äëÿ
ëèíîëåíàòà. Æèâîòíûì è ÷åëîâåêó ëèíîëåàò è ëèíîëåíàò
íåîáõîäèìû äëÿ ñèíòåçà âàæíåéøèõ äëèííîöåïî÷å÷íûõ
ìåòàáîëèòîâ.
Ôóíêöèè
àðàõèäîíîâîé,
ýéêîçàïåíòàåíîâîé
è
äîêîçàãåêñàåíîâîé êèñëîò, îïðåäåëÿþùèå èõ íåçàìåíèìîñòü äëÿ
îðãàíèçìà, åùå äî êîíöà íå èçó÷åíû. Îíè ïðèäàþò îïðåäåëåííûå
ñâîéñòâà ìåìáðàííûì ÔË. Êðîìå òîãî, ýòè ÏÍÆÊ ÿâëÿþòñÿ
ïðåäøåñòâåííèêàìè ýéêîçàíîèäîâ, âêëþ÷àÿ ïðîñòàãëàíäèíû
(PG1, PG2 è PG3 ðÿäà), òðîìáîêñàíû, ëåéêîòðèåíû è ëèïîêñèíû [9
- 11].
Îáùèé ïëàí ïîñòðîåíèÿ ìåìáðàí, îïðåäåëåííûé íàáîð â
ìåìáðàíå ÔË è èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ, ãåíåòè÷åñêè çàêðåïëåííûé
è ïðèíÿòûé åñòåñòâåííûì îòáîðîì, ñîõðàíèëèñü â ïðîöåññå
ýâîëþöèè [12]. Îäíàêî ïîñòîÿííûì ÿâëÿåòñÿ òîëüêî îáùèé
ïðèíöèï ïîñòðîåíèÿ ìåìáðàíû, â òî âðåìÿ êàê ñîñòàâ ÔË è èõ
æèðíûõ êèñëîò â ìåìáðàíàõ îòäåëüíûõ âèäîâ æèâîòíûõ
ñóùåñòâåííî îòëè÷àåòñÿ. Äî ñèõ ïîð íå âïîëíå ÿñíî, çà÷åì
ïðèðîäå ïîíàäîáèëîñü òàêîå ðàçíîîáðàçèå ëèïèäíûõ ñòðóêòóð.
Îäíàêî òîò ôàêò, ÷òî â îäíîé ìåìáðàíå ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü
áîëåå ñîòíè ðàçíîðîäíûõ ïî ñòðóêòóðå ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé,
ñîîòíîøåíèÿ êîòîðûõ ñïåöèôè÷íû äëÿ êàæäîãî òèïà ìåìáðàí,
ïîêàçûâàåò, ÷òî îíè äîëæíû ïðèíèìàòü ó÷àñòèå âî ìíîãèõ
ïðîöåññàõ, ïðîòåêàþùèõ â êëåòêå. Óíèêàëüíûå ôóíêöèè â
êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ íåêîòîðûõ èíäèâèäóàëüíûõ âèäîâ ÔË
íà÷èíàþò âûÿâëÿòüñÿ òîëüêî â ïîñëåäíèå ãîäû.
1.1.2. Ãëèö
öåðîôîñôîëèïèäû.
 ìîëåêóëàõ ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ îãðàíè÷åí
íàáîð ïîëÿðíûõ ãðóïï (ãîëîâîê). Â çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà ýòèõ
ãðóïï ðàçëè÷àþò îñíîâíûå êëàññû: ôîñôàòèäèëõîëèí,
ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí, ôîñôàòèäèëñåðèí, ôîñôàòèäèëèíîçèò,
ôîñôàòèäèë-ãëèöåðèí. (Ðèñ. 1.1.2)
Ôîñôààòèäèëõîëèí (ÔÕ, òðèâèàëüíîå íàçâàíèå - ëåöèòèí) ôîñôîëèïèä, íàèáîëåå øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûé âî âñåõ æèâûõ
êëåòêàõ (Ðèñ. 1.1.2.1). Åãî ñîäåðæàíèå äîñòèãàåò â ñðåäíåì 50% îò
îáùåãî êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïèäîâ. ÔÕ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì
"ñòðîèòåëüíûì áëîêîì" ìåìáðàí êëåòîê è ñóáêëåòî÷íûõ îðãàíåëë.
Ñîäåðæàíèå ýòîãî ôîñôîëèïèäà âûøå âî âíåøíåì ìîíîñëîå
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, ÷åì âî âíóòðåííåì. ÔÕ òàêæå
15
Ðèñ. 1.1.2. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ãëèöåðîôîñôàëèïèäîâ
16
îòíîñèòñÿ ê îñíîâíûì ôîñôîëèïèäàì, öèðêóëèðóþùèì â êðîâè,
ãäå îí ÿâëÿåòñÿ èíòåãðàëüíûì êîìïîíåíòîì ëèïîïðîòåèíîâ,
îñîáåííî âûñîêîé ïëîòíîñòè. Ñîäåðæàíèå ÔÕ â ëèïîïðîòåèíàõ
âûøå, ÷åì â ìåìáðàíàõ êëåòîê è äîñòèãàåò 70 - 75% âñåõ ÔË. Ñ
äðóãîé ñòîðîíû, ÔÕ ðåäêî îáíàðóæèâàåòñÿ â áàêòåðèàëüíûõ
ìåìáðàíàõ, ãëàâíûì îáðàçîì ó ãðàì-îòðèöàòåëüíûõ âèäîâ. ÔÕ
äîìèíèðóåò âî ìíîãèõ òêàíÿõ îðãàíèçìà ÷åëîâåêà è ñîñòàâëÿåò îò
30 äî 45% âñåõ ôîñôîëèïèäîâ. Òàê, âûñîêîå ñîäåðæàíèå ÔÕ
îáíàðóæåíî â òêàíÿõ ëåãêèõ (46,5%), ïå÷åíè (43,6%) è ñåëåçåíêå
(41,2%) [13].
Ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ ìîëåêóëà ÔÕ íå íåñåò
ñóììàðíîãî çàðÿäà è ÿâëÿåòñÿ öâèòòåðèîíîì. Â òêàíÿõ æèâîòíûõ
ÔÕ ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì â äèàöèëüíîé ôîðìå (ðèñ.
1.1.2.), ïðè÷åì, êàê ïðàâèëî, R' ïðåäñòàâëåíà íàñûùåííîé ÆÊ, à
R''- íåíàñûùåííîé).
Òêàíè áîëüøèíñòâà æèâîòíûõ îðãàíèçìîâ ñî ñõîäíîé
ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ èìåþò ÔÕ ñî ñõîäíûì
æèðíîêèñëîòíûì ñîñòàâîì. Êðîìå òîãî, â ñîñòàâ ìåìáðàí êëåòîê
òêàíåé íåêîòîðûõ îðãàíîâ âõîäèò ÔÕ, ñîäåðæàùèé âûñîêîå
êîëè÷åñòâî íàñûùåííûõ ÆÊ. Íàïðèìåð, èçâåñòíî, ÷òî ÔÕ ëåãêèõ
ó âñåõ âèäîâ æèâîòíûõ ñîäåðæèò âûñîêîå êîëè÷åñòâî (50% è
áîëåå) äèïàëüìèòîèëôîñôàòèäèëõîëèíà (ÄÏÔÕ). Ýòî îáóñëîâëåíî
òåì, ÷òî ÄÏÔÕ - îñíîâíîé êîìïîíåíò ëåãî÷íîãî ñóðôàêòàíòà,
îáåñïå÷èâàåò ñòàáèëüíîñòü àëüâåîë, ñíèæàÿ èõ ïîâåðõíîñòíîå
íàòÿæåíèå äî î÷åíü íèçêîãî óðîâíÿ.
Íàðÿäó ñ âàæíåéøåé ðîëüþ ÔÕ êàê ñòðóêòóðíîãî êîìïîíåíòà
ìåìáðàí, óñòàíîâëåíû åãî îïðåäåëåííûå, íå ìåíåå âàæíûå
ôóíêöèè â ïåðåäà÷å êëåòî÷íîãî ñèãíàëà, íàïðèìåð, â ïðîöåññå
îáðàçîâàíèÿ ôîíäà äèãëèöåðèäîâ èç ÔÕ. Îäíàêî, îòìå÷àþò, ÷òî
áîëüøîå êîëè÷åñòâî ÔÕ â êëåòêå èíãèáèðóåò åãî ïðåâðàùåíèå â
äèãëèöåðèäû.
Ñïåöèôè÷åñêîå ðàñùåïëåíèå ÔÕ â òêàíÿõ äëÿ îáðàçîâàíèÿ ðÿäà
áèîàêòèâíûõ êîìïîíåíòîâ ïðîèñõîäèò ïîä äåéñòâèåì
ôîñôîëèïàç, àêòèâèðóåìûõ ðÿäîì àãîíèñòîâ.
Ëèçîôîñôààòèäèëõîëèí (ëèçîÔÕ) - ôîñôîëèïèä, â ìîëåêóëå
êîòîðîãî åäèíñòâåííûé îñòàòîê ÆÊ íàõîäèòñÿ â ïîëîæåíèè sn-1.
Îí ñîäåðæèòñÿ â íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ â áîëüøèíñòâå æèâîòíûõ
òêàíåé (Ðèñ. 1.1.2.2).
ËèçîÔÕ îáðàçóåòñÿ ïðè ãèäðîëèçå ÔÕ ôîñôîëèïàçîé A2, â õîäå
öèêëè÷åñêîãî
ïðîöåññà
äåàöèëèðîâàíèÿ/ðåàöèëèðîâàíèÿ,
êîíòðîëèðóþùåãî ìîëåêóëÿðíûé ñîñòàâ âñåõ âèäîâ ÔË â
îðãàíèçìå. Ôîñôîëèïàçà A2 ðàñùåïëÿåò ñëîæíîýôèðíóþ ñâÿçü â
ìîëåêóëå ÔÕ â ïîëîæåíèè sn-2 ñ îáðàçîâàíèåì ëèçîÔÕ.
17
Âûñâîáîæäàåìàÿ ïðè ýòîì íåíàñûùåííàÿ æèðíàÿ êèñëîòà,
íàïðèìåð, àðàõèäîíîâàÿ, ìîæåò ñëóæèòü ñóáñòðàòîì äëÿ ñèíòåçà
ïðîñòàãëàíäèíîâ è ëåéêîòðèåíîâ [1, 11].
 ïëàçìå êðîâè ó æèâîòíûõ çíà÷èòåëüíîå êîëè÷åñòâî ëèçîÔÕ
îáðàçóåòñÿ ïîä äåéñòâèåì ôåðìåíòà ëåöèòèí-õîëåñòåðèíàöèëòðàíñôåðàçû (ËÕÀÒ), ñåêðåòèðóåìîãî ïå÷åíüþ. Ôåðìåíò
êàòàëèçèðóåò ïåðåíîñ æèðíûõ êèñëîò ôîñôàòèäèëõîëèíà èç
ïîëîæåíèÿ sn-2 ê ñâîáîäíîìó õîëåñòåðèíó (ÕÑ) â ïëàçìå ñ
îáðàçîâàíèåì ýôèðîâ ÕÑ è ëèçîÔÕ [14].
ËèçîÔÕ, êàê è äðóãèå ëèçîôîñôîëèïèäû, â ñâîþ î÷åðåäü
ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì äëÿ àöèëòðàíñôåðàç. Àöèëòðàíñôåðàçû,
âîçäåéñòâóÿ íà ëèçîÔË, ñïîñîáíû âêëþ÷àòü â ðåàêöèþ ðàçëè÷íûå
àöèëüíûå ãðóïïû, ÷òî â èòîãå ïðèâîäèò ê çàìåíå
æèðíîêèñëîòíîãî îñòàòêà â èñõîäíîé ìîëåêóëå äèàöèëüíîãî ÔË. Â
áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ àöèëüíûå ãðóïïû, êîòîðûå â íà÷àëüíîé
ñòàäèè ñèíòåçà ïåðåìåùàþòñÿ ïîä äåéñòâèåì àöèëòðàíñôåðàç,
îòëè÷àþòñÿ îò òåõ àöèëüíûõ ãðóïï, êîòîðûå ïðèñóòñòâóþò â
ôîñôîëèïèäå. Òàêèå çàìåíû àöèëüíûõ ãðóïï ÿâëÿþòñÿ
ðåçóëüòàòîì âîçäåéñòâèÿ ôîñôîëèïàç À1 è À2. Ôîñôîëèïàçû Ñ è D
ðàñùåïëÿþò ñâÿçè îêîëî ôîñôàòíîé è õîëèíîâîé ãðóïï
ñîîòâåòñòâåííî (Ðèñ. 1.1.3.).
Ðèñ. 1.1.3. Äåéñòâèå ðàçëè÷íûõ ôîñôîëèïàç íà ìîëåêóëó ôîñôîëèïèäà.
Ñóùåñòâåííûå êîëè÷åñòâà ëèçîÔÕ âõîäÿò â ñîñòàâ îêèñëåííûõ
ëèïîïðîòåèíîâ íèçêîé ïëîòíîñòè (ËÍÏ) è ñ÷èòàþòñÿ
"ïàòîëîãè÷åñêèì" êîìïîíåíòîì ËÍÏ, òàê êàê ïîëàãàþò, ÷òî
èìåííî ýòè ëèïîïðîòåèíû ÿâëÿþòñÿ îñíîâíûìè ôàêòîðàìè
âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ àòåðîñêëåðîçà [15, 16].  ïîñëåäíèå 1015 ëåò áûëè óñòàíîâëåíû íåêîòîðûå ôóíêöèè ëèçîÔÕ â ïåðåäà÷å
êëåòî÷íîãî ñèãíàëà, îïîñðåäîâàííîãî ðåöåïòîðîì, ñîïðÿæåííûì ñ
G-áåëêàìè (GPCR) (ñì. ãëàâó 3).
18
Ôîñôààòèäèëýòààíîëààìèí (ÔÝ, òðèâèàëüíîå íàçâàíèå - êåôàëèí)
ÿâëÿåòñÿ âòîðûì ïî ðàñïðîñòðàíåíèþ ôîñôîëèïèäîì â ëèïèäàõ
æèâîòíûõ è ðàñòåíèé è, êàê ïðàâèëî, ãëàâíûì ëèïèäíûì
êîìïîíåíòîì ìåìáðàí ìíîãèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Òàê æå êàê è ÔÕ,
ÔÝ ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûì "ñòðîèòåëüíûì áëîêîì" ìåìáðàííîãî
áèñëîÿ. ÔÝ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íåéòðàëüíûé öâèòòåðèîííûé
ôîñôîëèïèä (Ðèñ.1.1.2.3).
Ïî àíàëîãèè ñ ÔÕ, ÔÝ ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæèò îòíîñèòåëüíî
âûñîêèå êîëè÷åñòâà àðàõèäîíîâîé è äîêîçàãåêñàåíîâîé êèñëîò.
Îäíàêî ÔÝ èìååò ìåíüøóþ "ïîëÿðíóþ ãîëîâêó", ÷åì ÔÕ, è, â
îòëè÷èå îò íåãî, ñïîñîáåí îáðàçîâûâàòü äîïîëíèòåëüíûå
âîäîðîäíûå ñâÿçè ïðè ïîìîùè êîíöåâîé àìèíîãðóïïû.
Ôîñôààòèäèëñåðèí (ÔÑ), èëè 1,2-äèàöèë-sn-ãëèöåðî-3-ôîñôîL-ñåðèí - åäèíñòâåííûé ôîñôîëèïèä â æèâîòíûõ êëåòêàõ,
êîòîðûé ñîäåðæèò îñòàòîê àìèíîêèñëîòû. (Ðèñ. 1.1.2.4).
Õîòÿ ÔÑ øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â ïðèðîäå ó æèâîòíûõ,
ðàñòåíèé è â ìèêðîîðãàíèçìàõ, îí îáû÷íî ñîñòàâëÿåò ìåíåå 10% îò
îáùåãî êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïèäîâ. Íàèâûñøåå ñîäåðæàíèå ÔÝ
îáíàðóæåíî â òêàíÿõ ìîçãà. Íî â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ â
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è ýíäîïëàçìàòè÷åñêîì ðåòèêóëóìå (ÝÐ)
êëåòîê åãî êîëè÷åñòâî ìîæåò äîñòèãàòü 20 % îò âñåõ ÔË.
Ïî õèìè÷åñêîìó ñòðîåíèþ ÔÑ - àíèîííûé ôîñôîëèïèä ñ òðåìÿ
èîíèçèðîâàííûìè
ãðóïïàìè:
ôîñôàòíîé-,
àìèíîè
êàðáîêñèëüíîé. Êàê è äðóãèå êèñëûå ëèïèäû, îí ñóùåñòâóåò â
ïðèðîäå â ñîëåâîé ôîðìå.
Ôîñôààòèäèëèíîçèòîë
(ÔÈ)
ÿâëÿåòñÿ
âàæíåéøèì
ôîñôîëèïèäîì æèâûõ ñèñòåì. Ñ îäíîé ñòîðîíû, ÔÈ - êëþ÷åâîé
êîìïîíåíò ìåìáðàíû, à ñ äðóãîé - âàæíåéøèé ó÷àñòíèê
ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ðàñòåíèé, æèâîòíûõ è
íåêîòîðûõ âèäîâ áàêòåðèé (Ðèñ. 1.1.2.5À). ÔÈ ÿâëÿåòñÿ êèñëûì
(àíèîííûì) ôîñôîëèïèäîì, êîòîðûé ñîäåðæèò ôîñôàòèäíóþ
êèñëîòó, ñâÿçàííóþ ÷åðåç ôîñôàòíóþ ãðóïïó ñ øåñòèàòîìíûì
ñïèðòîì èíîçèòîì (ãåêñàîêñèöèêëîãåêñàíîì). Â ìåìáðàíàõ ýòîò
ôîñôîëèïèä ëîêàëèçóåòñÿ ïî÷òè ïîëíîñòüþ íà öèòîçîëüíîé
ñòîðîíå áèñëîÿ. Îí ïðèñóòñòâóåò âî âñåõ êëåòêàõ è òêàíÿõ
æèâîòíûõ, íî â ìåíüøèõ êîëè÷åñòâàõ, ÷åì ÔÕ, ÔÝ è ÔÑ. Áîëüøå
âñåãî ÔÈ ñîäåðæèòñÿ â òêàíÿõ ìîçãà, ãäå åãî óðîâåíü ìîæåò
äîñòèãàòü 10% îò êîëè÷åñòâà âñåõ ÔË.
Õàðàêòåðíîé ÷åðòîé ÔÈ, âûäåëåííîãî èç òêàíåé æèâîòíûõ,
ÿâëÿåòñÿ âûñîêîå ñîäåðæàíèå ñòåàðèíîâîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò.
Ïîýòîìó â æèâîòíûõ òêàíÿõ ÔÈ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì èñòî÷íèêîì
àðàõèäîíîâîé
êèñëîòû,
íåîáõîäèìîé
äëÿ
áèîñèíòåçà
ýéêîçàíîèäîâ, âêëþ÷àÿ ïðîñòàãëàíäèíû.
19
Èíîçèòîëüíûå ôîñôîëèïèäû (ôîñôîèíîçèòèäû, âêëþ÷àÿ
ïîëèôîñôîèíîçèòèäû), ïîâèäèìîìó, èãðàþò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â
ìåæôàçíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ è â ðåãóëÿöèè ïîâåäåíèÿ áåëêîâ íà
ãðàíèöàõ ðàçäåëà ôàç â êëåòêå. Áóäó÷è ïîëèàíèîíàìè,
ôîñôîèíîçèòèäû îáåñïå÷èâàþò ýôôåêòèâíûå íåñïåöèôè÷åñêèå
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ ñ áåëêàìè. Ýòè ÔË ÿâëÿþòñÿ
îñîáåííî ýôôåêòèâíûìè â ñïåöèôè÷åñêîì ñâÿçûâàíèè ñ òàê
íàçûâàåìûìè "ÐÍ" äîìåíàìè êëåòî÷íûõ áåëêîâ (ñì. ãëàâó 3).
Íàèáîëåå ñóùåñòâåííîé ðåàêöèåé ìåòàáîëèçìà ÔÈ ïîä
äåéñòâèåì ôîñôîëèïàç Ñ ÿâëÿåòñÿ îáðàçîâàíèå äèãëèöåðèäîâ.
Èìåííî ÔÈ â æèâîòíûõ è ðàñòèòåëüíûõ êëåòêàõ ÿâëÿåòñÿ
èñòî÷íèêîì äèãëèöåðèäîâ - âàæíåéøèõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë äëÿ
êëåòîê. Ïðîÿâëåíèÿ áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ðàçëè÷íûõ
ñîåäèíåíèé, îáðàçóþùèõñÿ â êëåòêå èç ôîñôîèíîçèòèäîâ, áûëè
ïðåäìåòîì èíòåíñèâíîãî èçó÷åíèÿ ïîñëåäíèõ äâàäöàòè ëåò.
Ïîêàçàíû ìíîãî÷èñëåííûå ýôôåêòû êàê äèãëèöåðèäîâ, òàê è
îòäåëüíûõ ôîñôîðèëèðîâàííûõ èíîçèòèäîâ, ñâÿçàííûå, â
îñíîâíîì, ñ ïðåîáðàçîâàíèåì (òðàíñäóêöèåé) êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ.
Èçâåñòíî, ÷òî ÔÈ ôîñôîðèëèðóåòñÿ ðÿäîì ðàçëè÷íûõ êèíàç,
êîòîðûå ïåðåíîñÿò ôîñôàòíóþ ãðóïïó îò ÀÒÔ ê 4 è 5 ïîëîæåíèÿì
èíîçèòíîãî êîëüöà. Òåðìèíîëîãè÷åñêè, ðàçëè÷íûå ñîåäèíåíèÿ,
ñîäåðæàùèå èíîçèò, îáúåäèíåíû ïîä îáùèì íàçâàíèåì
"ôîñôîèíîçèòèäû". Èçâåñòåí áîëüøîé ðÿä èçîìåðîâ, íî íàèáîëåå
âàæíûìè êàê â êîëè÷åñòâåííîì, òàê è â áèîëîãè÷åñêîì
îòíîøåíèÿõ ÿâëÿþòñÿ ÔÈ-4-ôîñôàò (PIP) è ÔÈ-4,5-äèôîñôàò
(PIP2) (Ðèñ.1.1.2.5Á, Â). Êàê ïðàâèëî, ýòè èçîìåðû ïðèñóòñòâóþò â
òêàíÿõ òîëüêî â íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ, ñîñòàâëÿÿ ïðèáëèçèòåëüíî
5% îò êîëè÷åñòâà ÔÈ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ñîäåðæàíèå PIP è PIP2
ïîääåðæèâàåòñÿ íà ïîñòîÿííîì óðîâíå íà âíóòðåííåé ñòîðîíå
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ñ ïîìîùüþ ñåðèè íåïðåðûâíûõ è
ïîñëåäîâàòåëüíûõ
ðåàêöèé
ôîñôîðèëèðîâàíèÿäåôîñôîðèëèðîâàíèÿ,
êàòàëèçèðóåìûõ
ñîîòâåòñòâóþùèìè
êèíàçàìè è ôîñôàòàçàìè.
 öåëîì, áîëüøèíñòâî ðàçëè÷íûõ ôîñôîèíîçèòèäîâ âêëþ÷åíû
â êîíòðîëü ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Îñîáåííî ñóùåñòâåííûì
ÿâëÿåòñÿ èõ ó÷àñòèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëîâ, äëÿ ïåðåãðóïïèðîâêè
àêòèíîâîãî öèòîñêåëåòà è âíóòðèêëåòî÷íîãî âåçèêóëÿðíîãî
òðàíñïîðòà. Èõ ñ÷èòàþò èäåàëüíûìè êàíäèäàòàìè â ðåãóëÿòîðû
äèíàìè÷åñêèõ êëåòî÷íûõ ìåõàíèçìîâ.
Ôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ÔÊ) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ôîñôîëèïèä,
âñòðå÷àþùèéñÿ ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ æèâûõ îðãàíèçìàõ. Îíà
ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ïðîìåæóòî÷íûì ñîåäèíåíèåì â áèîñèíòåçå
òðèãëèöåðèäîâ è áîëüøèíñòâà îñíîâíûõ ÔË. Ìîëåêóëà ÔÊ íåñåò
20
îòðèöàòåëüíûé çàðÿä è òðåáóåò ïðèñóòñòâèÿ ïðîòèâîèîíîâ (Ðèñ.
1.1.2.6).
Ëèçîôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ëèçîÔÊ) - 1-àöèë-sn-ãëèöåðèí-3ôîñôàò - îòëè÷àåòñÿ îò ôîñôàòèäíîé êèñëîòû òåì, ÷òî èìååò
òîëüêî îäíó ìîëåêóëó ÆÊ íà ìîëåêóëó ôîñôîëèïèäà. Õîòÿ
ëèçîÔÊ ïðèñóòñòâóåò â î÷åíü íèçêèõ êîëè÷åñòâàõ òîëüêî â
æèâîòíûõ òêàíÿõ, îíà èìååò âàæíîå áèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå, ò.ê.
âëèÿåò íà ìíîãèå áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû. ËèçîÔÊ ÿâëÿåòñÿ
âíóòðèêëåòî÷íûì ëèïèäíûì ìåäèàòîðîì ñ àêòèâíîñòüþ,
ïîäîáíîé ôàêòîðàì ðîñòà. Îíà áûñòðî ïðîäóöèðóåòñÿ è
âûñâîáîæäàåòñÿ èç àêòèâèðîâàííûõ òðîìáîöèòîâ, îêàçûâàÿ
âëèÿíèå íà ìíîãèå êëåòêè-ìèøåíè.
Ôîñôààòèäèëãëèö
öåðèí. Ïðè ñîåäèíåíèè äâóõ ìîëåêóë
ôîñôàòèäíîé êèñëîòû ÷åðåç ãèäðîêñèë ôîñôàòíîé ãðóïïû, îáðàçóåòñÿ
ìîëåêóëà ôîñôàòèäèëãëèöåðèíà (ÔÃ) (Ðèñ. 1.1.2.7).
Ôà - îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííàÿ ìîëåêóëà ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ
çíà÷åíèÿõ ðÍ. Ýòîò ôîñôîëèïèä îáëàäàåò âûðàæåííûìè
ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûìè ñâîéñòâàìè, ÷òî îïðåäåëÿåò åãî
ëîêàëèçàöèþ â ñóðôàêòàíòå àëüâåîë âìåñòå ñ ÄÏÔÕ - îñíîâíûì ÔË
ëåãêèõ. Èìåííî âûðàæåííûå ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûå ñâîéñòâà ÔÃ
ïîçâîëÿþò èñïîëüçîâàòü åãî êàê îäèí èç êîìïîíåíòîâ ëèïîñîìàëüíûõ
íîñèòåëåé ðÿäà ëåêàðñòâ.
Ïðèñîåäèíåíèå åùå îäíîãî ôîñôîãëèöåðèíîâîãî ôðàãìåíòà ÷åðåç
ãèäðîêñèë âòîðîé ôîñôàòíîé ãðóïïû, ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ
äèôîñôàòèäèëãëèöåðèíà, íàçûâàåìîãî òàêæå êàðäèîëèïèíîì.
Êààðäèîëèïèí (ÊË) - ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé î÷åíü êèñëóþ
ìîëåêóëó, íåñóùóþ ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ äâà
îòðèöàòåëüíûõ çàðÿäà (-2) (Ðèñ. 1.1.2.8). Ýòîò ôîñôîëèïèä
ëîêàëèçîâàí, ãëàâíûì îáðàçîì, íà âíóòðåííåé ñòîðîíå
ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû. Êàðäèîëèïèí áûë îòêðûò ïîçæå
äðóãèõ ÔË, â 30-õ ãîäàõ ïðîøëîãî âåêà. Âïåðâûå îí áûë âûäåëåí è
îõàðàêòåðèçîâàí èç ñåðäöà áûêà. ÊË ïðèñóòñòâóåò òàêæå è â äðóãèõ
òêàíÿõ, îäíàêî åãî ðàñïðåäåëåíèå â êëåòêå íåðàâíîìåðíî, è
ìåñòîì ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèè ÿâëÿþòñÿ ìèòîõîíäðèè.
Ôààêòîð àêòèâààöèè òðîìáîö
öèòîâ (PAF, platelet activating factor) 1-àëêèë-2-àöåòèë-sn-ãëèöåðî-3-ôîñôîõîëèí - áèîëîãè÷åñêè
àêòèâíûé àíàëîã ÔÕ ñ ïðîñòîé ýôèðíîé ñâÿçüþ (âìåñòî
ñëîæíîýôèðíîé ñâÿçè, êàê â ÔÕ) (Ðèñ. 1.1.2.9). Ïåðâîíà÷àëüíî PAF
ïðèâëåê âíèìàíèå ñâîåé ñïîñîáíîñòüþ â î÷åíü íèçêèõ
êîíöåíòðàöèÿõ âûçûâàòü àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, à òàêæå
îêàçûâàòü ãèïåðòåíçèâíîå äåéñòâèå. Â ïîñëåäóþùèõ ðàáîòàõ áûëà
âûÿâëåíà åãî ðîëü êàê ìåäèàòîðà âîñïàëåíèÿ, ó÷àñòâóþùåãî â
ïàòîãåíåçå ðÿäà çàáîëåâàíèé.
21
PAF áûë ïåðâûì ÔË, äëÿ êîòîðîãî óñòàíîâëåíû ôóíêöèè
ìåññåíäæåðà, ïðè÷åì ïðîöåññ ïåðåäà÷è ñèãíàëà ñ ïîìîùüþ PAF
ïðîèñõîäèò íå â ðåçóëüòàòå ïðÿìîãî âîçäåéñòâèÿ íà
ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó êëåòêè, à îïîñðåäóåòñÿ ÷åðåç
ïðèñîåäèíåíèå ýòîé ìîëåêóëû ê ñïåöèôè÷åñêèì ðåöåïòîðàì. PAF
îáû÷íî íå íàêàïëèâàåòñÿ â êëåòêàõ, íî ñèíòåçèðóåòñÿ èìè â
óñëîâèÿõ âîñïàëåíèÿ â îòâåò íà ñïåöèôè÷åñêèå ñòèìóëû.
Êîíöåíòðàöèÿ PAF â êëåòêàõ êîíòðîëèðóåòñÿ ñîîòâåòñòâóþùèìè
ãèäðîëàçàìè, êîòîðûå íåàêòèâíû ïî îòíîøåíèþ ê íàèáîëåå
ðàñïðîñòðàíåííûì ÔË.
PAF ôóíêöèîíèðóåò êàê ìåäèàòîð ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè,
îñòðîé âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè è àíàôèëàêòè÷åñêîãî øîêà. Îí
ñèíòåçèðóåòñÿ â îòâåò íà îáðàçîâàíèå êîìïëåêñà àíòèãåí-IgE íà
ïîâåðõíîñòè áàçîôèëîâ, íåéòðîôèëîâ, ýîçèíîôèëîâ, ìàêðîôàãîâ è
ìîíîöèòîâ. Ñèíòåç è âûñâîáîæäåíèå PAF èç êëåòêè ïðèâîäèò ê
àãðåãàöèè è îñâîáîæäåíèþ ñåðîòîíèíà èç òðîìáîöèòîâ. PAF òàêæå
èíèöèèðóåò ðåàêöèè "êëåòî÷íîãî îòâåòà" â ïå÷åíè, ñåðäöå,
ãëàäêîé ìûøöå, ëåãî÷íîé òêàíÿõ.
Ïëààçìààëîãåí ÿâëÿåòñÿ ðàñïðîñòðàíåííûì ïðåäñòàâèòåëåì
ôîðìû âèíèëîâîãî ýôèðà ôîñôîëèïèäîâ (àëêèëüíîé è
àëêåíèëüíîé ôîðì) (Ðèñ. 1.1.2.10 À, Á).
Ïëàçìàëîãåíû - âàæíåéøèå êîìïîíåíòû ìèåëèíà è
ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà òêàíè ñåðäöà. Õîëèíïëàçìàëîãåíû â èçîáèëèè ïðèñóòñòâóþò â ñåðäå÷íûõ òêàíÿõ.
1.1.3. Ñôèíãîôîñôîëèïèäû.
 îòëè÷èå îò ãëèöåðèíà, ñôèíãîçèí ñîäåðæèò îäíó èç äâóõ
èìåþùèõñÿ â ìîëåêóëå ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ óãëåâîäîðîäíûõ
öåïåé (êàê ïðàâèëî, âêëþ÷àþùóþ 15 óãëåðîäíûõ àòîìîâ). Äðóãàÿ
óãëåâîäîðîäíàÿ öåïü â ïîëÿðíûõ ëèïèäàõ ýòîãî òèïà,
ïðåäñòàâëåííàÿ îñòàòêîì ÆÊ, ñâÿçàíà ñî ñôèíãîçèíîì àìèäíîé
ñâÿçüþ (Ðèñ. 1.1.4 À) [17]. Ñåìåéñòâî ñôèíãîëèïèäîâ âêëþ÷àåò
ñôèíãîìèåëèíû
è
ãëèêîñôèíãîëèïèäû
(öåðåáðîçèäû,
ñóëüôàòèäû, ãëîáîçèäû è ãàíãëèîçèäû).
Ñôèíãîìèåëèí (ÑÌ) ÿâëÿåòñÿ ñôèíãîëèïèäíûì àíàëîãîì ÔÕ è
ïî ñòðîåíèþ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ôîñôîðèëõîëèíîâîå ïðîèçâîäíîå
öåðàìèäà (öåðàìèä ôîñôîðèëõîëèí) (Ðèñ. 1.1.4.Á). Öåðàìèä
ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé äëèííîöåïî÷å÷íîå ñôèíãîèäíîå îñíîâàíèå,
ñâÿçàííîå ñ æèðíîé êèñëîòîé àìèäíîé ñâÿçüþ.
ÑÌ øèðîêî ðàñïðîñòðàíåí â ïðèðîäå êàê íåîáõîäèìûé
êîìïîíåíò ìåìáðàí æèâîòíûõ êëåòîê, â êîòîðûõ îí ÿâëÿåòñÿ
ïðåîáëàäàþùèì ñôèíãîëèïèäîì.
 íåêîòîðûõ òêàíÿõ ñîäåðæàíèå ÑÌ ìîæåò ñîñòàâëÿòü äî 50%
22
Ðèñ 1.1.4. Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ñôèíãîçèíà, öåðàìèäîâ è ñôèíãîëèïèäîâ.
îò îáùåãî êîëè÷åñòâà ëèïèäîâ, õîòÿ, êàê ïðàâèëî, â æèâîòíîé
êëåòêå åãî ñîäåðæèòñÿ ìåíüøå, ÷åì ÔÕ. Íàïðèìåð, îêîëî 10%
ëèïèäîâ ãîëîâíîãî ìîçãà ñîñòàâëÿåò ÑÌ. Òàêæå, ñôèíãîìèåëèí
ôàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ çàìåùàåò ÔÕ â ýðèòðîöèòàõ áîëüøèíñòâà
æâà÷íûõ æèâîòíûõ.
Ïîäîáíî ÔÕ, ñôèíãîìèåëèí ïðåèìóùåñòâåííî ëîêàëèçóåòñÿ â
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå, îñîáåííî íà åå âíåøíåé ñòîðîíå.
Îáû÷íî â ìîëåêóëàõ ÑÌ ñîäåðæàòñÿ æèðíûå êèñëîòû ñ î÷åíü
äëèííîé öåïüþ, ñîäåðæàùåé ñâûøå 22 àòîìîâ Ñ - íàñûùåííûå è
ìîíîíåíàñûùåííûå, â òîì ÷èñëå è ñ íå÷åòíûì êîëè÷åñòâîì
óãëåðîäíûõ àòîìîâ (÷òî íå ñâîéñòâåííî ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì).
Äîëãîå âðåìÿ ñ÷èòàëè, ÷òî åäèíñòâåííîé ôóíêöèåé
ñôèíãîìèåëèíà ÿâëÿåòñÿ çàìåíà ÔÕ êàê ñòðîèòåëüíîé åäèíèöû
ìåìáðàíû [5, 21]. Ïîëàãàëè, ÷òî ïðèñóòñòâèå ÑÌ íåîáõîäèìî äëÿ
îáðàçîâàíèÿ ñòàáèëüíîé íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ëèïèäíîãî áèñëîÿ
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû. Äåéñòâèòåëüíî, ýòî îäíî èç ñâîéñòâ
ÑÌ. Èìåþòñÿ äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå î òåñíîé âçàèìîñâÿçè
ñôèíãîìèåëèíà è õîëåñòåðèíà â êëåòêå [18].  îòëè÷èå îò ìåìáðàí
äðóãèõ âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë (íàïðèìåð, ìèòîõîíäðèé), îáà
ôîñôîëèïèäà ïðåîáëàäàþò â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è
ìåìáðàíå àïïàðàòà Ãîëüäæè [18, 19].
Èìåÿ ðàçíîå ñòðîåíèå, ÑÌ è ÔÕ åñòåñòâåííî îòëè÷àþòñÿ ïî
ôèçèêî-õèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì, â ÷àñòíîñòè, ïî ñïîñîáíîñòè
îáðàçîâûâàòü âîäîðîäíûå ñâÿçè. Àìèäíàÿ ñâÿçü âî 2-îì ïîëîæåíèè
îñòàòêà ñïèðòà ñôèíãîçèíà è ãèäðîêñèëüíàÿ ãðóïïà â ïîëîæåíèè 3
ìîãóò ó÷àñòâîâàòü â ôîðìèðîâàíèè âîäîðîäíûõ ñâÿçåé.
Èìåþùàÿñÿ äâîéíàÿ ñâÿçü â óãëåâîäîðîäíîé öåïè ÑÌ
îáåñïå÷èâàåò ìåæìîëåêóëÿðíûå âçàèìîäåéñòâèÿ â ìåìáðàíàõ. Ó
ÔÕ, íàïðîòèâ, äâå ñëîæíîýôèðíûå êàðáîíèëüíûå ãðóïïû ìîãóò
ñëóæèòü òîëüêî êàê àêöåïòîðû âîäîðîäà. ÑÌ ñóùåñòâåííî
îòëè÷àåòñÿ îò ÔÕ è ïî ñòåïåíè íåíàñûùåííîñòè æèðíîêèñëîòíûõ
23
öåïåé, òàê êàê ñîäåðæèò çàìåòíûå êîëè÷åñòâà íåñâîéñòâåííûõ
äðóãèì ÔË äëèííîöåïî÷å÷íûõ íàñûùåííûõ è ìîíîåíîâûõ ÆÊ.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ èçâåñòíî, ÷òî ÑÌ (êàê è äðóãèå
ñôèíãîëèïèäû) âìåñòå ñ õîëåñòåðèíîì ñîñòàâëÿþò îñíîâó
ñïåöèôè÷åñêèõ ìåìáðàííûõ äîìåíîâ, íàçûâàåìûõ "ðàôòàìè" è
"êàâåîëàìè", êîòîðûå èãðàþò âàæíåéøóþ ðîëü â ìåõàíèçìàõ
ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ â êëåòêå (ñì. ãëàâó 2).
Ïîìèìî ýòîãî, ÑÌ ñëóæèò ïðåäøåñòâåííèêîì äëÿ îáðàçîâàíèÿ
öåðàìèäîâ, äëèííîöåïî÷å÷íûõ îñíîâàíèé, ñôèíãîçèí-1-ôîñôàòà
(S1P) è ìíîãèõ äðóãèõ âàæíûõ ñôèíãîëèïèäîâ. Íåêîòîðûå èç ýòèõ
ñîåäèíåíèé
âûïîëíÿþò
ôóíêöèè
âíóòðèêëåòî÷íûõ
ìåññåíäæåðîâ, à äðóãèå ÿâëÿþòñÿ âàæíûìè ñîñòàâíûìè ÷àñòÿìè
ìåìáðàíû. Ñôèíãîëèïèäû, ïîñòóïàþùèå ñ ïèùåé, ãèäðîëèçóþòñÿ
â êèøå÷íèêå äî öåðàìèäîâ è äëèííîöåïî÷å÷íûõ îñíîâàíèé,
êîòîðûå çàòåì âñàñûâàþòñÿ è ìåòàáîëèçèðóþòñÿ.
Ñ÷èòàþò, ÷òî ñôèíãîëèïèäû íåçàìåíèìû äëÿ ðàçâèòèÿ è
æèçíåäåÿòåëüíîñòè ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê [20, 21]. Â
äîïîëíåíèè ê èõ ïåðâè÷íîé ðîëè â êà÷åñòâå ñòðóêòóðíûõ
êîìïîíåíòîâ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, îíè âûïîëíÿþò âàæíûå
ôóíêöèè è êàê âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû. ÑÌ ÿâëÿåòñÿ
êîìïîíåíòîì ëèïîïðîòåèíîâ ñûâîðîòêè êðîâè. Ñôèíãîëèïèäû
âûïîëíÿþò ðåãóëÿòîðíóþ ðîëü â êëåòêå, ó÷àñòâóÿ â ïðîöåññàõ
ïåðåäà÷è êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [22, 23]. Ïðè ýòîì ÑÌ âíóòðåííåé
ïîâåðõíîñòè áèñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ÿâëÿåòñÿ äîíîðîì
âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ â ñôèíãîìèåëèíîâîì öèêëå [24, 25].
Íåñìîòðÿ íà îòñóòñòâèå äàííûõ î ïîòðåáíîñòè îðãàíèçìà â
ñôèíãîëèïèäàõ, âêëþ÷àÿ ÑÌ, êàê êîìïîíåíòîâ ïèòàíèÿ,
îðèåíòèðîâî÷íî ïîäñ÷èòàíî, ÷òî ïîòðåáëåíèå ñôèíãîëèïèäà íà
äóøó íàñåëåíèÿ â ÑØÀ ñîñòàâëÿåò ïîðÿäêà 0,3 - 0,4 ã â äåíü.
Ñîâñåì íåäàâíî ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÑÌ ìîæåò ñëóæèòü
"ôóíêöèîíàëüíûì" êîìïîíåíòîì áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ äîáàâîê
ê ïèùå äëÿ ïðîôèëàêòèêè ðÿäà çàáîëåâàíèé. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ
ïîÿâèëèñü äàííûå îá èíãèáèòîðíîì äåéñòâèè ÑÌ íà ðàçâèòèå
àòåðîñêëåðîçà è ðàêà. Îïûòû íà æèâîòíûõ ïîêàçàëè, ÷òî
êîðìëåíèå ñôèíãîëèïèäàìè èíãèáèðóåò ðîñò îïóõîëè òîëñòîé
êèøêè ó êðûñ, ñíèæàåò ñîäåðæàíèå ÕÑ â ëèïîïðîòåèíàõ íèçêîé
ïëîòíîñòè (ËÍÏ) â êðîâè è ïîâûøàåò ÕÑ ëèïîïðîòåèíîâ âûñîêîé
ïëîòíîñòè (ËÂÏ) [26, 27, 28].
Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîëèïèäû è èõ ìåòàáîëèòû ðàçíîîáðàçíû â
ðàçëè÷íûõ ïðèðîäíûõ îáúåêòàõ.  òî æå âðåìÿ íå âñå ïðèâåäåííûå
âûøå ôîñôîëèïèäíûå ñîåäèíåíèÿ èìåþò îäèíàêîâîå çíà÷åíèå è
ðàñïðîñòðàíåííîñòü â êëåòêàõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà. Íàáîð
íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ ÔË áèîìåìáðàí îãðàíè÷åí
24
íåñêîëüêèìè âèäàìè. Ðàçíîîáðàçèå æå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ
ìåìáðàííûõ ÔË îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ìíîæåñòâåííîñòè
êîìáèíàöèé îòíîñèòåëüíî íåáîëüøîãî ÷èñëà èõ êîìïîíåíòîâ æèðíûõ êèñëîò, îäíîãî èç äâóõ òèïîâ ïîëÿðíûõ ãîëîâîê è òèïà
ïîëÿðíîãî ôðàãìåíòà ãëèöåðîôîñôîëèïèäà.
1.2. Ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ îðãàíîâ è òêàíåé ÷åëîâåêà è
æèâîòíûõ
ÔË îáû÷íî âûäåëÿþò èç òêàíåé ïóòåì îáðàáîòêè
îðãàíè÷åñêèìè
ðàñòâîðèòåëÿìè
ñ
ïîñëåäóþùèì
õðîìàòîãðàôè÷åñêèì ðàçäåëåíèåì [29].
Ïðàêòè÷åñêè â ëþáîé æèâîòíîé òêàíè îáíàðóæèâàåòñÿ ñåìü
îñíîâíûõ êëàññîâ ÔË (â ïîðÿäêå óáûâàíèÿ) - ÔÕ, ÔÝ, ÑÌ, à òàêæå,
â çíà÷èòåëüíî ìåíüøèõ êîëè÷åñòâàõ (ìåíåå 10%), ÔÑ, ÔÈ, ëèçîÔÕ
è ÊË (ðèñ. 1.1.2).
Îäíîöåïî÷å÷íûå ëèïèäû òèïà ëèçîÔË îáû÷íî íå
ñèíòåçèðóþòñÿ êëåòêîé â çíà÷èòåëüíîì êîëè÷åñòâå, òàê êàê îíè,
ïîäîáíî äåòåðãåíòàì, ðàçðóøàþò ìåìáðàíû. Ïðèìåðîì ìîæåò
ñëóæèòü äåéñòâèå ëèçîÔÕ, êîòîðûé îáðàçóåòñÿ èç ÔÕ ïîä
âëèÿíèåì ôîñôîëèïàçû À2. Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè ýòîãî ÔË
ìîæåò ïðèâåñòè ê ðàñïàäó êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, ÷òî è ÿâëÿåòñÿ
îäíîé èç ïðè÷èí ñìåðòè ïðè óêóñå çìåè, ÿä êîòîðîé ñîäåðæèò
çíà÷èòåëüíûå êîëè÷åñòâà ôîñôîëèïàçû À2.
 ïðèíöèïå âñå òêàíè ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæàò ñõîæèå ÔË â
áëèçêîì êîëè÷åñòâåííîì ñîîòíîøåíèè [13]. Íàïðèìåð, ÔË
íåðâíîé òêàíè âûñøèõ æèâîòíûõ îòëè÷àþòñÿ îò ÔË æèâîòíûõ,
ñòîÿùèõ íà áîëåå íèçêèõ ñòóïåíÿõ ýâîëþöèè, â îñíîâíîì
íàëè÷èåì ÑÌ è ÔÈ-4-ôîñôàòà.  êëåòêàõ æèâîòíûõ îðãàíèçìîâ
ñóììàðíîå ñîäåðæàíèå öâèòòåðèîííûõ (ýëåêòðîíåéòðàëüíûõ)
ëèïèäîâ (ÔÕ+ÔÝ+ÑÌ) ñîñòàâëÿåò 75-90% îò îáùåãî êîëè÷åñòâà
ôîñôîëèïèäîâ.
Ñóùåñòâóþò
íåêîòîðûå
ñïåöèôè÷åñêèå
îñîáåííîñòè íàáîðà ÔË ðàçëè÷íûõ áèîìåìáðàí. Íàïðèìåð, â
ìåìáðàíàõ øâàííîâñêîé êëåòêè ìîçãà îòìå÷àåòñÿ âûñîêîå
ñîäåðæàíèå ÔÈ (10%) è íèçêîå - ÔÑ è ÔÝ - 3 è 14%,
ñîîòâåòñòâåííî [30]. Õàðàêòåðíîé îñîáåííîñòüþ ìåìáðàí
ýðèòðîöèòîâ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ÿâëÿåòñÿ ïðàêòè÷åñêè
ïîëíîå îòñóòñòâèå ÔÕ.
 òêàíÿõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà îáíàðóæèâàþòñÿ è ìèíîðíûå
ÔË. Íàïðèìåð, â ñëîÿõ êîæè ãëàçíîãî âåêà ÷åëîâåêà îáíàðóæåíû
àëêèë-àöèë-ÔÕ è ýòàíîëàìèí-ïëàçìàëîãåíû [31], ïðè÷åì â
ýïèäåðìèñå óðîâåíü ýòèõ ÔË ñíèæåí íà ôîíå ïîâûøåííîãî
ñîäåðæàíèÿ ÔÕ. Íà îñíîâàíèè ðàçëè÷èé â ãèäðîôîáíîñòè ýòèõ ÔË
àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî òàêîé ñîñòàâ ÔË ýïèäåðìèñà
25
ñïîñîáñòâóåò îñóùåñòâëåíèþ ôóíêöèè ýôôåêòèâíîãî âîäíîãî
áàðüåðà. Ïðèñóòñòâèå ÔË ñ ïðîñòûìè ýôèðíûìè ñâÿçÿìè (àëêèëÔË) îòìå÷àåòñÿ è â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ ÷åëîâåêà [32], à òàêæå
â ìèåëèíå è ñåðîì âåùåñòâå ìîçãà êðûñ [33].
Ñèñòåìàòè÷åñêèé àíàëèç ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà òêàíåé îêîëî
180 âèäîâ ìîðñêèõ áåñïîçâîíî÷íûõ ïîêàçàë, ÷òî âñå îíè ñîäåðæàò ÔÕ,
ÔÝ, ÔÑ è ÔÈ â êà÷åñòâå îñíîâíûõ êîìïîíåíòîâ; êðîìå òîãî, â
íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ â ìåìáðàíàõ ñîäåðæàòñÿ ÔÊ, ÊË è ÔÈ-4ôîñôàò. Ó áîëåå âûñîêîðàçâèòûõ âèäîâ (÷ëåíèñòîíîãèå, îáîëî÷íèêè,
èãëîêîæèå) ñîäåðæàíèå ÔÕ äîñòèãàåò 65%, â òî âðåìÿ êàê ãóáêè,
êîëü÷àòûå ÷åðâè è ìîëëþñêè ñîäåðæàò ~30% ýòîãî ëèïèäà [34].
Íàèáîëåå ÿðêî ñèñòåìàòè÷åñêèå ðàçëè÷èÿ ïðîÿâëÿþòñÿ â ñîäåðæàíèè
ñôèíãîëèïèäîâ - â ïðîöåññå ýâîëþöèè íàðàñòàåò ñîäåðæàíèå ÑÌ. Ó
ãóáîê (íàèìåíåå ðàçâèòûõ æèâîòíûõ) ñîäåðæàíèå ÔÑ äîñòèãàåò 25%,
ïðè÷åì ñôèíãîëèïèäû îòñóòñòâóþò ñîâñåì [34].  ïðîöåññå ýâîëþöèè
áåñïîçâîíî÷íûõ ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ ôîñôîëèïèäîâ
ñ õîëèíîâûìè ãðóïïàìè (ÔÕ è ÑÌ) è óìåíüøàëîñü ñóììàðíîå
êîëè÷åñòâî ëèïèäîâ, ñîäåðæàùèõ àìèíîãðóïïû (ÔÝ, ÔÑ).
Ñîîòíîøåíèå îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË â êëåòêå ìåíÿåòñÿ â
ðàçëè÷íûõ ñèòóàöèÿõ è ñòàäèÿõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è
îðãàíèçìà â öåëîì. Òàê, ïðè äëèòåëüíîé ôèçè÷åñêîé íàãðóçêå â
ñêåëåòíûõ ìûøöàõ êðûñû ñîäåðæàíèå îòäåëüíûõ ÔË ìåíÿåòñÿ,
ïðè÷åì â ðàçëè÷íûõ òèïàõ ìûøö ýòî èçìåíåíèå ïðîèñõîäèò ïîðàçíîìó [35]. Èìåþòñÿ äàííûå î âîçðàñòàíèè êîëè÷åñòâà ÑÌ â
ìåìáðàíàõ ðÿäà êëåòîê ïðè ñòàðåíèè [36].
Ëþáîé èç ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ, íàïðèìåð ÔÕ,
ÿâëÿåòñÿ íå èíäèâèäóàëüíûì âåùåñòâîì, à ñìåñüþ âåùåñòâ,
ìîëåêóëû êîòîðûõ ñîäåðæàò îäíó è òó æå ïîëÿðíóþ ÷àñòü ôîñôîõîëèí, è ðàçëè÷íûå æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè. Ïîñêîëüêó
îäíà è òà æå ïîëÿðíàÿ ãîëîâêà ìîæåò ñîåäèíÿòüñÿ ñ ðàçíûìè öåïÿìè,
îòêðûâàåòñÿ âîçìîæíîñòü îãðîìíîãî ÷èñëà êîìáèíàöèé ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ. Èìåííî áëàãîäàðÿ ðàçíîîáðàçèþ ÆÊ ïðè
âûäåëåíèè êàêîãî-ëèáî ôîñôîëèïèäà ïðàêòè÷åñêè òðóäíî ïîëó÷èòü
åãî â ïîëíîñòüþ îäíîðîäíîì ñîñòîÿíèè, òàê êàê ïîëó÷åííîå
âåùåñòâî áóäåò ïðåäñòàâëÿòü ñìåñü ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ äàííîãî
ÔË, îòëè÷àþùèõñÿ ðàçíûì íàáîðîì æèðíûõ êèñëîò.
 îäíîì îáúåêòå ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü áîëåå ñîòíè
íåîäèíàêîâûõ ïî ñòðóêòóðå ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé, ïðè÷åì
ñîîòíîøåíèÿ ìåæäó íèìè ñïåöèôè÷íû, ÷òî ïðåäïîëàãàåò èõ
ó÷àñòèå âî ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ.
Êàê óæå îòìå÷àëîñü, â ïðèðîäå íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåíû
ñëåäóþùèå âèäû ÆÊ: ïàëüìèòèíîâàÿ (16:0), ñòåàðèíîâàÿ (18:0),
îëåèíîâàÿ (18:1), ëèíîëåâàÿ (18:2), àðàõèäîíîâàÿ (20:4), à òàêæå
26
ëèíîëåíîâàÿ (18:3), ýéêîçîïåíòàåíîâàÿ (20:5) è äîêîçàãåêñàåíîâàÿ
(22:6) êèñëîòû. Â ìîëåêóëå ÔÕ ýòè êèñëîòû ñâÿçàíû ñ ãëèöåðèíîì
â äâóõ ïîëîæåíèÿõ, ïîýòîìó ðàçëè÷íûå ñî÷åòàíèÿ ñîçäàþò
âîçìîæíîñòü ñóùåñòâîâàíèÿ ðàçíûõ ìîëåêóë. Åñëè ó÷åñòü åùå
ìåíåå ðàñïðîñòðàíåííûå âèäû æèðíûõ êèñëîò, òî ÷èñëî
ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ åùå áîëåå âîçðàñòàåò, õîòÿ è îãðàíè÷èâàåòñÿ
îáùèì ïðàâèëîì ïðåèìóùåñòâåííîé (90-95%) ëîêàëèçàöèåé â ÔË
íàñûùåííûõ è íåíàñûùåííûõ ÆÊ â ïîëîæåíèè sn-1 è â
ïîëîæåíèè sn-2, ñîîòâåòñòâåííî. Òàê, áûëî èäåíòèôèöèðîâàíî
îêîëî 10 îñíîâíûõ âèäîâ ìîëåêóë ÔÕ, ðàçëè÷àþùèõñÿ
æèðíîêèñëîòíûì ñîñòàâîì. Íàïðèìåð, óñòàíîâëåíî, ÷òî â ïå÷åíè
êðûñû ïðèñóòñòâóþò îêîëî 30% ÔÕ, ñîäåðæàùåãî ïàëüìèòèíîâóþ
êèñëîòó (16:0), 18% ÔÕ ñ àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé (20:4), áîëåå 16%
ÔÕ, ñîäåðæàùåãî ëèíîëåâóþ êèñëîòó (18:2), ïî÷òè 50% îò îáùåãî
êîëè÷åñòâà ÔÈ ñîäåðæàëî â ïîëîæåíèè sn-1 ñòåàðèíîâóþ êèñëîòó
(18:0), à 37% - àðàõèäîíîâóþ â ïîëîæåíèè sn-2, è ò.ä. [37].
Íàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû ñîñòàâëÿþò â áîëüøèíñòâå ÔË
îêîëî 50% (÷òî ñîîòâåòñòâóåò ïî÷òè ïîëíîìó èõ çàïîëíåíèþ
ïîëîæåíèÿ sn-1 ìîëåêóëû ÔË). Êðîìå òîãî, ñóùåñòâóåò
îïðåäåëåííàÿ èçáèðàòåëüíîñòü â ïðåäïî÷òåíèè îòäåëüíûõ æèðíûõ
êèñëîò îòäåëüíûìè ÔË [18, 37]. Äëÿ ÔÊ, ÔÕ è ÔÑ ýòî â îñíîâíîì
êèñëîòà Ñ16:0, à äëÿ ÔÈ - Ñ18:0. Äëÿ ÑÌ õàðàêòåðíû íàñûùåííûå (è
ìîíîíåíàñûùåííûå) êèñëîòû ñ îñîáî äëèííîé öåïüþ, Ñ24 è áîëåå.
Ëèíîëåâàÿ êèñëîòà (Ñ18:2) â çàìåòíîì êîëè÷åñòâå ïðèñóòñòâóåò â ÔÑ,
ÔÊ è ÔÕ, íî áîëüøå âñåãî åå â êàðäèîëèïèíå (íàïðèìåð, â ÊË ïå÷åíè
- 77,5%). Íàèáîëåå âûñîêîå ñîäåðæàíèå àðàõèäîíîâîé êèñëîòû
(Ñ20:4) õàðàêòåðíî äëÿ ÔÈ.
Ðàçíîîáðàçèå ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔË ñâÿçàíî ñ èõ ó÷àñòèåì â
ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññàõ. Òàê, äëÿ òðîìáîöèòîâ ÷åëîâåêà ïîêàçàíà
ãåòåðîãåííîñòü æèðíûõ êèñëîò â ðàçíûõ êëàññàõ ÔË. Ñî÷åòàíèå
ïàëüìèòèíîâîé è îëåèíîâîé êèñëîò îêàçàëîñü õàðàêòåðíûì â
îñíîâíîì äëÿ ÔÕ (21% îò îáùåãî ÔÕ), â ìîëåêóëàõ ÔÝ, ÔÈ è ÔÑ
òðîìáîöèòîâ ýòà ïàðà ÆÊ ïðàêòè÷åñêè íå âñòðå÷àåòñÿ. Ñî÷åòàíèå
ñòåàðèíîâîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò ïðåîáëàäàåò â ìîëåêóëàõ ÔÝ è
ÔÈ (71%). Òàê êàê àðàõèäîíîâàÿ êèñëîòà ÿâëÿåòñÿ èñòî÷íèêîì
òðîìáîêñàíà, òî åå íåðàâíîìåðíîå ðàñïðåäåëåíèå ìåæäó ÔË óêàçûâàåò
íà îïðåäåëåííóþ ñòåïåíü ñåëåêòèâíîñòè â íà÷àëüíîì ýòàïå
îáðàçîâàíèÿ òðîìáîêñàíà è ïðîñòàãëàíäèíîâ: ãèäðîëèçó
ôîñôîëèïàçîé À2 (PLÀ2) ïîäâåðãàþòñÿ â ïåðâóþ î÷åðåäü ÔÝ è ÔÈ [38].
Äðóãîé æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ ñâîéñòâåíåí, íàïðèìåð, ÔË
ýðèòðîöèòîâ, ïðè÷åì ìåæäó îòäåëüíûìè âèäàìè æèâîòíûõ
íàáëþäàþòñÿ ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ. Íàïðèìåð, ýðèòðîöèòû
27
÷åëîâåêà ñîäåðæàò îêîëî 5 ðàçëè÷íûõ ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔÕ, à â
ýðèòðîöèòàõ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà îáíàðóæèâàþòñÿ òîëüêî
ñëåäû ÔÕ; ýðèòðîöèòû ÷åëîâåêà è êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà
ñîäåðæàò îêîëî 8 ìîëåêóëÿðíûõ âèäîâ ÔÝ, ðàçëè÷àþùèõñÿ êàê ïî
êîëè÷åñòâåííîìó ñîäåðæàíèþ, òàê è ïî æèðíîêèñëîòíîìó
ñîñòàâó.  ÔÝ ýðèòðîöèòîâ ÷åëîâåêà ïðåîáëàäàþùåé ÆÊ ÿâëÿåòñÿ
Ñ16:0, à êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà - Ñ18:1; äëÿ ÑÌ, ñîîòâåòñòâåííî,
Ñ18:0 è Ñ24:0 è ò.ä. [39]. Ñîñòàâ ÆÊ, âõîäÿùèõ â äàííûé
ôîñôîëèïèä, ìîæåò èçìåíÿòüñÿ ïðè ðÿäå ïàòîëîãèé èëè ïðè
ñòàðåíèè [40].
Ãóëüáåðò ñ ñîàâò. [41] ïðîâåëè àëëîìåòðè÷åñêèé àíàëèç ñîñòàâà
æèðíûõ êèñëîò ÔË òêàíåé ðàçëè÷íûõ êëàññîâ æèâîòíûõ è
ñãðóïïèðîâàëè èõ â ïîðÿäêå óâåëè÷åíèÿ ìàññû òåëà æèâîòíîãî - îò
çåìëåðîéêè (ñ âåñîì ïîðÿäêà 7 ã) äî êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà (ñ
âåñîì áîëåå 370 êã). Îêàçàëîñü, ÷òî ïî ìåðå óâåëè÷åíèÿ ìàññû òåëà
â ÔË ñåðäöà, ìûøö, ïå÷åíè è ïî÷åê ñíèæàåòñÿ ñîäåðæàíèå n-3
ÏÍÆÊ, îñîáåííî 22:6, õîòÿ â ìîçãå ó âñåõ âèäîâ æèâîòíûõ
îòìå÷àëîñü âûñîêîå ñîäåðæàíèå ýòèõ æèðíûõ êèñëîò. Àâòîðû
âûäâèãàþò ãèïîòåçó, ÷òî ñîäåðæàíèå 22:6 æèðíîé êèñëîòû â
ìåìáðàíàõ ÔË îòðàæàåò ñòåïåíü ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè.
1.3. Ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ôîñôîëèïèäîâ
Íàëè÷èå ó ìîëåêóë ÔË äâóõ ÷àñòåé - ñèëüíî ïîëÿðíîé
"ãîëîâêè" è íåïîëÿðíûõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé, ïðåïÿòñòâóåò èõ
ðàñòâîðèìîñòè â âîäå è äðóãèõ ïîëÿðíûõ ðàñòâîðèòåëÿõ è
îáóñëàâëèâàåò èõ ñïîñîáíîñòü îáðàçîâûâàòü ìåìáðàíû.
Ëîêàëèçàöèÿ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé ÆÊ â óïîðÿäî÷åííîé
ñòðóêòóðå âîäû ýíåðãåòè÷åñêè íåâûãîäíà, è èìåííî ïîýòîìó ÔË
ñòðåìÿòñÿ ê îáðàçîâàíèþ âåçèêóëÿðíûõ èëè ìèöåëëÿðíûõ
äèñïåðñèé (ðèñ. 1.3.1).
Íà ýëåêòðîííûõ ìèêðîôîòîãðàôèÿõ òàêèõ äèñïåðñèé
îáíàðóæåíû ñëîèñòûå ñòðóêòóðû, çàìûêàþùèåñÿ äðóã ñ äðóãîì ñ
îáðàçîâàíèåì ìåìáðàííûõ îáîëî÷åê, êîòîðûå îêàçàëèñü âíåøíå
÷ðåçâû÷àéíî ïîõîæèìè íà ìåìáðàíû êëåòîê. Âñêîðå áûëî
ïîêàçàíî, ÷òî åñëè â êîíòàêòèðóþùåì ñ ÔË âîäíîì ðàñòâîðå
ïðèñóòñòâóþò èîíû, òî îíè âêëþ÷àþòñÿ â îáðàçóþùóþñÿ
âíóòðåííþþ âîäíóþ îáëàñòü è óäåðæèâàþòñÿ òàì äëèòåëüíîå
âðåìÿ. Ýòî ïðîèñõîäèò çà ñ÷åò òîãî, ÷òî ñîçäàâàåìûå
ôîñôîëèïèäàìè ñëîèñòûå ìåìáðàííûå îáîëî÷êè çàõâàòûâàþò ïðè
çàìûêàíèè ÷àñòü âîäíîãî ðàñòâîðà è îáëàäàþò ñâîéñòâàìè
ïîëóïðîíèöàåìîãî áàðüåðà, ëåãêî ïðîïóñêàþùåãî âîäó, íî
îãðàíè÷èâàþùåãî äèôôóçèþ ðàñòâîðåííûõ â íåé äðóãèõ âåùåñòâ
[42, 43]. ÔË, ÿâëÿþùèåñÿ îñíîâíûìè êîìïîíåíòàìè è
28
ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè áèîìåìáðàí, ìîãóò â âîäíîì îêðóæåíèè
ñïîíòàííî îáðàçîâûâàòü çàìêíóòûå ìåìáðàííûå ñòðóêòóðû. Ýòî
îòêðûòèå ñûãðàëî áîëüøóþ ðîëü â ìåìáðàíîëîãèè. Ýíåðãåòè÷åñêè
âûãîäíîå ðàñïîëîæåíèå äëÿ òàêèõ àìôèôèëüíûõ ñîåäèíåíèé êàê
ÔË - ìîíîìîëåêóëÿðíûé ñëîé íà ïîâåðõíîñòè ðàçäåëà ìåæäó
âîäîé è ãèäðîôîáíîé ñðåäîé; â òàêîì ñëó÷àå ïîëÿðíûå "ãîëîâêè"
îðèåíòèðîâàíû â ñòîðîíó âîäû, à æèðíîêèñëîòíûå öåïè
ïîãðóæåíû â íåïîëÿðíóþ ñðåäó (ðèñ. 1.3.1). Ïîýòîìó â âîäíîé
ñðåäå ìîëåêóëû ÔË àññîöèèðóþòñÿ äðóã ñ äðóãîì, îáðàçóÿ
ìèêðîñêîïè÷åñêèå àññîöèàòû èëè áèñëîè, â êîòîðûõ
ðàñïîëîæåííûå âíóòðè ãèäðîôîáíûå öåïè ("õâîñòû") çàùèùåíû
îò âîäû ïîëÿðíûìè ãîëîâêàìè. Ñòðåìëåíèå ìàêñèìàëüíî
îãðàíè÷èòü êîíòàêò íåïîëÿðíûõ öåïåé ëèïèäà ñ âîäîé ïðèâîäèò ê
òîìó, ÷òî áèñëîé ïðè åãî äîñòàòî÷íîé ïðîòÿæåííîñòè, ìîæåò
çàìûêàòüñÿ ñàì íà ñåáÿ, ôîðìèðóÿ ñôåðè÷åñêèå ïîëûå
îáîëî÷å÷íûå ñòðóêòóðû, ïîëó÷èâøèå íàçâàíèå âåçèêóëû.
Ðèñ. 1.3.1. Ôîðìû îðèåíòàöèè ìîëåêóë ÔË â âîäå. Îáðàçîâàíèå ìèöåëë,
ëèïîñîì, ëàìåëëÿðíûõ ñòðóêòóð.
Îáû÷íî íàçâàíèÿ "ëèïîñîìû" è "ëèïèäíûå âåçèêóëû"
èñïîëüçóþò êàê ñèíîíèìû, íî íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî
ëèïîñîìàìè âïåðâûå áûëè íàçâàíû ÷àñòèöû, îáðàçóþùèåñÿ ïðè
ìåõàíè÷åñêîì äèñïåðãèðîâàíèè âçâåñè ÔË â âîäå.  ýòîì ñëó÷àå
îáðàçóþòñÿ áîëüøîãî ðàçìåðà (äî 50 ìêì), ñîñòîÿùèå èç
íåñêîëüêèõ äåñÿòêîâ ëèïèäíûõ áèñëîåâ, ðàçäåëåííûõ âîäíûìè
ïðîìåæóòêàìè (ìóëüòèëàìåëëÿðíûå) âåçèêóëû (ëèïîñîìû),
èìåþùèå íåäîñòàòî÷íî ðàçâèòóþ ïîâåðõíîñòü [44, 45].
Ïðèìåíåíèå ñïåöèàëüíûõ òåõíîëîãèé (óëüòðàçâóê, äåòåðãåíòû è
äð.) ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü ìîíîëàìåëëÿðíûå ëèïîñîìû ñ áîëüøåé
ïîâåðõíîñòüþ, äèàìåòðîì 100 - 200 íì, êîòîðûå ñîõðàíÿþò
29
íåêîòîðîå êîëè÷åñòâî çàõâà÷åííîé ïðè çàìûêàíèè âîäíîé ôàçû,
îêðóæåííîé áèñëîéíîé ôîñôîëèïèäíîé îáîëî÷êîé (ðèñ. 1.3.1).
Íàèáîëåå ìåëêèå ôîñôîëèïèäíûå ÷àñòèöû (ìåíåå 100 íì) ñ
âûñîêîðàçâèòîé ïîâåðõíîñòüþ, ñ ïîëÿðíûìè ãðóïïàìè ñíàðóæè è
æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè âíóòðè íàçûâàþò ìèöåëëàìè. Â
îòëè÷èå îò ëèïîñîì, îíè íå èìåþò âíóòðåííåãî âîäíîãî îáúåìà.
Ôîðìû ñàìîîðãàíèçàöèè ÔË â âîäå îïðåäåëÿþòñÿ çàðÿäîì èõ
ïîëÿðíûõ ãîëîâîê è ñîîòíîøåíèåì îáúåìîâ, çàíèìàåìûõ
ãîëîâêàìè è íåïîëÿðíûìè æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè. Êîãäà ýòè
îáúåìû ïðèìåðíî îäèíàêîâû, ò. å. êîãäà ìîëåêóëû ëèïèäà èìåþò
öèëèíäðè÷åñêèå î÷åðòàíèÿ, ïðåîáëàäàåò òåíäåíöèÿ ê
îáðàçîâàíèþ áèñëîÿ. Åñëè æå îáúåì ïîëÿðíîé ãîëîâêè áîëüøå
îáúåìà öåïåé (êàê, íàïðèìåð, ó ëèçîÔÕ), òî ìîëåêóëà ïî ôîðìå
ïðèáëèæàåòñÿ ê îáðàùåííîìó êîíóñó, è â âîäíîì îêðóæåíèè îíà
áóäåò íàõîäèòüñÿ â ìèöåëëÿðíîé ôàçå [46].
Ëèïèäíàÿ ìèöåëëà ìîæåò áûòü îêðóæåíà ïðåäïî÷òèòåëüíî
èîíàìè âîäîðîäà èëè ãèäðîêñèëüíûìè ãðóïïàìè îêðóæàþùåé åå
âîäû. Ïîýòîìó ïî ñâîèì ôèçè÷åñêèì ñâîéñòâàì âîäà âáëèçè
ïîâåðõíîñòè ìèöåëëû çàìåòíî îòëè÷àåòñÿ îò îñòàëüíîé.
Ñïîñîáíîñòü ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ îáðàçîâûâàòü áèñëîéíóþ
ñòðóêòóðó ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì èõ àìôèïàòè÷íîñòè [47].
Ñêëîííîñòü ÔË ê àññîöèàöèè è ôîðìèðîâàíèþ áèñëîåâ è
îïðåäåëÿåò èõ ôóíêöèè â æèâîé êëåòêå, ãäå îíè ÿâëÿþòñÿ
îñíîâíûìè "ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè" áèîìåìáðàí âñåõ êëåòîê â
æèâîé ïðèðîäå, îñíîâíûì ìàòðèêñîì, êóäà âñòðîåíû
ìíîãî÷èñëåííûå ìåìáðàííûå áåëêè è ôåðìåíòíûå ñèñòåìû.
Ïðèìåðîì ïðèðîäíûõ ëèïîñîì ÿâëÿåòñÿ ñàìà êëåòêà è åå
îðãàíåëëû, à ëèïîïðîòåèíû êðîâè, îòâåòñòâåííûå çà òðàíñïîðò
áèîàêòèâíûõ ñîåäèíåíèé, ïî ñòðîåíèþ ÿâëÿþòñÿ ìèöåëëàìè.
Ïåðâîå ïðèìåíåíèå ëèïîñîì â íàó÷íûõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî
ñâÿçàíî ñ ìîäåëèðîâàíèåì êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Ñ èõ ïîìîùüþ áûëè
óñòàíîâëåíû îñíîâíûå çàêîíîìåðíîñòè òðàíñïîðòà âåùåñòâ ÷åðåç
ìåìáðàíó, îïðåäåëåíû ïàðàìåòðû ëèïèäíîãî áèñëîÿ è åãî
äèíàìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè, èçó÷åíû ïðîöåññû ñëèÿíèÿ ìåìáðàí.
Ðåêîíñòðóèðîâàííûå ôîñôîëèïèäíûå ñèñòåìû èñïîëüçóþò äëÿ
èçó÷åíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ è áåëêîâûõ àíñàìáëåé.
Ôàðìàêîëîãè÷åñêîå ïðèìåíåíèå ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö (ìèöåëë,
ëèïîñîì) ñâÿçàíî ñ èõ ñïîñîáíîñòüþ òðàíñïîðòèðîâàòü ñàìûå
ðàçíîîáðàçíûå õèìè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ [48-53].
Õàðàêòåðíîé îñîáåííîñòüþ ôîñôîëèïèäíûõ óïîðÿäî÷åííûõ
ñòðóêòóð ÿâëÿåòñÿ èõ ñïîñîáíîñòü ê ôàçîâûì ïåðåõîäàì. ×èñòûì
èíäèâèäóàëüíûì ÔË, êàê è ìíîãèì õèìè÷åñêèì ñîåäèíåíèÿì,
ñâîéñòâåííà îïðåäåëåííàÿ òåìïåðàòóðà ïëàâëåíèÿ, íàçûâàåìàÿ
30
÷àùå òåìïåðàòóðîé ôàçîâîãî ïåðåõîäà (Òô.ï.). Ïðè ýòîé òåìïåðàòóðå
îñóùåñòâëÿåòñÿ ïåðåõîä ÔË îò ôàçû óïîðÿäî÷åííîãî (òâåðäîãî)
ãåëåîáðàçíîãî ñîñòîÿíèÿ â ôàçó ìåíåå óïîðÿäî÷åííîãî, òåêó÷åãî, òàê
íàçûâàåìîãî, æèäêî-êðèñòàëëè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ [54].
Æèäêîñòíîñòü (èëè Òô.ï.) ôîñôîëèïèäîâ ñóùåñòâåííî çàâèñèò
îò ñòðóêòóðû æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé, óâåëè÷èâàÿñü ñ
ïîâûøåíèåì äëèíû öåïåé è ñíèæàÿñü ïðè âîçðàñòàíèè ñòåïåíè èõ
íåíàñûùåííîñòè. Ñôèíãîëèïèäû íàèáîëåå áîãàòû äëèííûìè
íàñûùåííûìè æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè, ÷òî ñîçäàåò óñëîâèÿ
äëÿ áîëåå ïëîòíîé ìîëåêóëÿðíîé óïàêîâêè, è ïîýòîìó îíè èìåþò
ñðàâíèòåëüíî âûñîêóþ Òô.ï.. Â ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, ó
ïðèðîäíûõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ, ñîäåðæàùèõ îáû÷íî
íåíàñûùåííûå àöèëüíûå öåïè, Òô.ï. áîëåå íèçêàÿ (Òàáë.1.3.1).
Òàáëèöà 1.3.1.
Òåìïåðàòóðû ôàçîâûõ ïåðåõîäîâ ÔÕ è ÔÝ ñ ðàçëè÷íûìè
æèðíûìè êèñëîòàìè [ïî 54 c èçìåíåíèÿìè]
Ôîñôîëèïèä
ÔÕ: ÄÑÔÕ
ÄÏÔÕ
ÏÎÔÕ
ÑËÔÕ
ÄÎÔÕ
ÔÝ : ÄÑÔÝ
ÄÌÔÝ
Æèðíûå êèñëîòû
18:0, 18:0
16:0, 16:0
16:0, 18:1
18:0, 18:2
18:1, 18:1
18:0, 18:0
14:0, 14:0
Òô.ï. , îÑ
55
42
-7
- 16.7
-21
58
48
Cîêðàùåíèÿ: Ñ - ñòåàðèë-, Ï - ïàëüìèòîèë, Î - îëåîèë, Ë - ëèíîëåîèë;
ÄÑ-, ÄÏ-, ÄÎ-, ÄÌ - äèñòåàðîèë-,äèïàëüìèòîèë-, äèîëåîèë-, äèìèðèñòîèë- , ñîîòâåòñòâåííî
Äðóãèå ìåìáðàííûå ÔË, òàêèå, êàê ÔÑ, ÔÃ è ÔÈ, ñîäåðæàò â
îñíîâíîì íåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû è ïîýòîìó, ïîäîáíî
ÔÕ, óâåëè÷èâàþò æèäêîñòíîñòü îáðàçîâàííûõ èç íèõ ìåìáðàí. Â
òî æå âðåìÿ, ïðèñóòñòâèå ãëèêîñôèíãîëèïèäîâ (íàïðèìåð,
ãàíãëèîçèäîâ), èìåþùèõ ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü, ïîõîæóþ íà
òàêîâóþ ó ñôèíãîëèïèäîâ, ïðèäàåò æåñòêîñòü áèñëîþ [55].
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ I
1. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Ì., Íàóêà.
1982.
2. Avogaro H., Catapano A. Phospholipids and atherosclerosis.
Raven Press, N.Y. 1983.
3. Pulfer M., Murphy R.C. Electrospray mass spectrometry of phospholipids. Mass Spectrom Rev. 2003, 22, 332-364.
4. Audesirik T., Audesirik G. Biology, life on earth prentice hall.
New Jersey. 1999.
5. Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff Ì., Roberts Ê., Watson J. D.
31
Molecular Biology of the Cell. N.Y. 1994.
6. Wolfe S.L. Molecular and Cellular Biology. Wadsworth
Publishing Company. 1993.
7. Wang Y., Krull I.S, Liu C., Orr J.D. Derivatization of phospholipids. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2003, 793, 3-14.
8. Âàñüêîâñêèé Â.Å. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1997,
3, 32-37.
9. Zurier R.B. Prostaglandins: then and now and next. Semin
Arthritis Rheum. 2003, 33, 137-139.
10. Scholz H. Prostaglandins. Am J Physiol Regul Integr Comp
Physiol. 2003, 285, R512-514.
11. Claria J., Arroyo V. Prostaglandins and other cyclooxygenasedependent arachidonic acid metabolites and the kidney in liver disease.
Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2003, 72, 19-33.
12. Òèòîâ Â.Í. Àòåðîñêëåðîç êàê ïàòîëîãèÿ ïîëèåíîâûõ æèðíûõ
êèñëîò Ì., 2002.
13. Gundermann K.-J. Fd. The "essential" phospholipids as a membrane therapeutic Publisher Polish Section of European Society of biochemical pharmacology, Szczecin. 1993, 2-17.
14. Glomset J. The plasma lecithin:cholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res. 1968, 9, 155-167.
15. Ïðîêàçîâà Í.Â., Çâåçäèíà Í.Ä., Êîðîòàåâà À.À.. Âëèÿíèå
ëèçîôîñôàòèäèëõîëèíà íà ïåðåäà÷ó òðàíñìåìáðàííîãî ñèãíàëà
âíóòðü êëåòêè. Áèîõèìèÿ, 1998, 63, 38-46.
16. Gouni-Berthold I., Sachinidis A. Does the coronar risk factor low
density lipoprotein alter growth and signaling in vascular smooth muscle cells? FASEB J. 2002, 16, 1477-1488.
17. Ýëëèîò Â., Ýëëèîò Ä. Áèîõèìèÿ è ìîëåêóëÿðíàÿ áèîëîãèÿ.
Ïåðåâîä ñ àíãëèéñêîãî. Ì., 2002, 56.
18. Èâêîâ Â.Ã., Áåðåñòîâñêèé Ã.Í. Ëèïèäíûé áèñëîé
áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Ì., 1982.
19. Coste H, Martel M.B., Got R. Topology of glucosylceramide synthesis in Golgi membranes from porcine submaxillary glands. Biochim
Biophys Acta. 1986, 858, 6-12.
20. Hannun Y.A., Luberto C. Ceramide in the eukaryotic stress
response. Trends Cell Biol. 2000, 10, 73-80.
21. van Meer G., Holthuis J.C. Sphingolipid transport in eukaryotic
cells. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 145-170.
22. Auge N., Negre-Salvayre A., Salvayre R., Levade T.
Sphingomyelin metabolites in vascular cell signaling and atherogenesis.
Prog Lipid Res. 2000, 39, 207-229.
23. Prieschl E.E., Baumruker T. Sphingolipids: second messengers,
mediators and raft ñonstituents in signaling. Immunol Today. 2000, 21,
32
555-560.
24. Levade T., Auge N. Sphingolipid mediators in cardiovascular cell
biology and pathology. Circulation Res. 2001, 89, 957-977.
25. zu Heringdorf D. M., van Koppen C. J., and Jakobs K. H.
Molecular diversity of sphingolipid signalling. FEBS Lett. 1997, 410, 3438.
26. Silins I., Nordstrand M., Hogberg J., Stenius U. Sphingolipids
suppress preneoplastic rat hepatocytes in vitro and in vivo.
Carcinogenesis. 2003, 24, 1077-1083.
27. Spiegel S., Merrill A.H. Sphingolipid metabolism and cell growth
regulation. FASEB J. 1996, 10, 1388-1397.
28. Chatterjee S.. Sphingolipids in atherosclerosis and vascular biology. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1998, 18, 1523-1533.
29. Kates M., Technigues of lipidology. Elsevier, Amsterdam.1986.
30. Calderon R.O., DeVries G.H. Lipid composition and phospholipid asymmetry of membrane from Schwann cell line. J Neurosci Res.
1997, 49, 372-380.
31. Greiner J.V., Glonek T., Townsend D.J., Hearn S.L. Epidermal
and dermal phospholipids of the human eyelid: a 31P NMR sperctroscopy study. Arch Dermatol Res. 1998, 290, 298-305.
32. Murphy E.J., Joseph L., Stephens R., Horrock L.A. Phospholipid
composition of cultured human endothelial cells. Lipids. 1992, 27, 150153.
33. Rosenberger T.A., Oki J., Purdon A.D., Rapoport S.I., Murphy
E.J. Rapid synthesis and turnover of brain microsomal ether phospholipids in the adult rat. J Lipid Res. 2002, 43, 59-68.
34.
Êîñòåöêèé
Ý.ß.
Ñðàâíèòåëüíîå
áèîõèìè÷åñêîå
èññëåäîâàíèå ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà ìîðñêèõ áåñïîçâîíî÷íûõ.
Òåç. Âñåñîþçí. êîíô. "Ýâîëþöèîííàÿ áèîõèìèÿ è ïðîèñõîæäåíèå
æèçíè". Åðåâàí. 1978, 53-54.
35. Gorski J., Zendzian-Piotrowska M., deJong Y.F, Niklinska W.,
Glatz J.F. Effect of endurance training on the phospholipid content of
skeletal muscles in the rat. Eur J Appl Physiol Occup Physiol. 1999, 79,
421-425.
36. Borchman D., Byrdwell W.C., Yappert M.C. Regional and agedependent differences in the phospholipid composition of human lens
membranes. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1994, 35, 3938-3942.
37. Êàãàâà ßñóî. Áèîìåìáðàíû. Ì., 1985, 52-55.
38. Mahadevappa V.G., Holub B.J. The molecular species composition of individual diacyl phospholipids in human platelets. Âiochim
Biophys Acta. 1982, 713, 73-79.
39. Van Dijk P.V.M., Van Zoelen E.J.J., Seldenrijk R., Van Deenen
L.L.M. Calorimetric behaviour of individual phospholipid classes from
33
human and bovine erythrocyte membrane. Chem and Phys Lipids.
1976, 17, 336-343.
40. Laganiere S., Yu B.P. Modulation of membrane phospholipid
fatty acid ñomposition by age and food restriction. Gerontology. 1993,
39, 7-18.
41. Hulbert A.J., Rana T., Couture P. The acyl composition of mammalian phospholipids: an allometric analysis. Comp Biochem Physiol B
Biochem Mol Biol. 2002, 132, 515-527.
42. Bangham A.D., Horne R.W. Negative staining of phospholipids
and their strucrured modification by surface agents as observed in electron microscope. J Mol Biol. 1964, 8, 660-668.
43. Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. Diffusion of univalent ions across the lamelae of swollen phospholipids. J Mol Biol. 1965,
13, 238-252.
44. Áàðñóêîâ Ë.È., Ëèïîñîìû. Ñîðîñîâñêèé îáîçðåâàòåëüíûé
æóðíàë. 1998, N 10, 2-9.
45. Bangham A.D. In Liposomes Letters (Bangham À.ed), L., N.Y.,
Añad Press. 1983, 12-15.
46. Ãåííèñ Ð.Á. Áèîìåìáðàíû. Ìîëåêóëÿðíàÿ ñòðóêòóðà è
ôóíêöèè. Ïåðåâîä ñ àíãëèéñêîãî, Ì., 1997, 83.
47 Cavagnetto F., Relini A., Mirghani Z., Gliozzi A., Bertoia D.,
Gambacorta A. Molecular packing parameters of bipolar lipids. Biochim
Biophys Acta. 1992, 1106, 273-281.
48. Ìàðãîëèñ Ë.Á., Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ëèïîñîìû è èõ
âçàèìîäåéñòâèå ñ êëåòêàìè. Ì., 1986.
49. Barenholz Y. Design of liposome-based drug carriers: From basic
research to application as approved drugs. In Medical Applications of
Liposomes (Lasic D.D. and Papahadjopoulos D. eds), N.Y., Elsevier
Science BV. 1998, 545-565.
50. Allen Theresa M. and Cullis Pieter R. Drug Delivery Systems:
Entering the Mainstream. Drug Discovery. 2004, 303, 1818 - 1822.
51. Bashir R. BioMEMS: state-of-the-art in detection, opportunities
and prospects. Adv Drug Deliv Rev. 2004, 56, 1565-1586.
52. Allen T.M., Cullis P.R. Drug Delivery Systems: Entering the
Mainstream. Science. 2004, 303, 1818-1822.
53. Torchilin V.P . Drug targeting. Eur J Pharm Sci. 2000, 11, Suppl
2, 81-91.
54. Shaw A.W, McLean M.A,.Sligar S.G. Phospholipid phase transitions in homogeneous nanometer scale bilayer discs. FEBS Letters. 2004,
556, 260-264.
55. Hoekstra D., Maier O., van der Wouden J.M., Slimane T.A.
Membrane dynamics and cell polarity: the role of sphingolipids. J Lipid
Res. 2003, 44, 869-877.
34
ÃËÀÂÀ 2. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ Â ÑÒÐÓÊÒÓÐÍÎÉ
ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ ÁÈÎÌÅÌÁÐÀÍ È ËÈÏÎÏÐÎÒÅÈÍÎÂ
Áèîìåìáðàíû èìåþò êëþ÷åâîå çíà÷åíèå, êàê â îðãàíèçàöèè
ñòðóêòóðû, òàê è â ôóíêöèîíèðîâàíèè âñåõ êëåòîê: ïðîêàðèîòîâ,
ýóêàðèîòîâ, ðàñòåíèé è æèâîòíûõ. Ìåìáðàíû, ïî ñóùåñòâó,
óñòàíàâëèâàþò ãðàíèöû êîìïàðòìåíòîâ êëåòêè, îñóùåñòâëÿþò
ñâÿçü ìåæäó íèìè.
Îäíà èç âàæíåéøèõ ôóíêöèé áèîìåìáðàí çàêëþ÷àåòñÿ â
îòäåëåíèè êëåòêè îò âíåøíåé ñðåäû è â ñîõðàíåíèè àâòîíîìíîñòè
åå âíóòðåííåãî óñòðîéñòâà. Áëàãîäàðÿ íàëè÷èþ ìåìáðàíû, âíóòðè
êëåòêè è â åå îðãàíåëëàõ ïîñòîÿííî ïîääåðæèâàþòñÿ âûñîêèå
êîíöåíòðàöèè íåîáõîäèìûõ âåùåñòâ è îãðàíè÷èâàåòñÿ
ïîñòóïëåíèå ÷óæåðîäíûõ ñîåäèíåíèé, íå ó÷àñòâóþùèõ â
ïðîöåññàõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè. Êîìïàðòìåíòàëèçàöèÿ âíóòðåííåãî
ñîäåðæèìîãî êëåòêè (ò. å. ïðîñòðàíñòâåííîå ðàçäåëåíèå
ìåìáðàíàìè âíóòðèêëåòî÷íûõ ñèñòåì) ïîçâîëÿåò íåçàâèñèìî
îñóùåñòâëÿòü ðàçëè÷íûå, èíîãäà ïðîòèâîïîëîæíî íàïðàâëåííûå
ðåàêöèè ìåòàáîëèçìà, à òàêæå èõ òîíêóþ ðåãóëÿöèþ. Èìåííî
ìåìáðàíû ïîääåðæèâàþò êëåòêó â íåðàâíîâåñíîì ñîñòîÿíèè,
îáåñïå÷èâàÿ
ñîõðàíåíèå
ãðàäèåíòîâ
êîíöåíòðàöèé
è
ýëåêòðè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà. Ñâîáîäíàÿ ýíåðãèÿ, çàïàñåííàÿ òàêèì
îáðàçîì âíóòðè êëåòêè èëè åå îðãàíåëëàõ, ðàñõîäóåòñÿ íà
îñóùåñòâëåíèå ìíîãèõ æèçíåííî âàæíûõ ôóíêöèé - îò ãåíåðàöèè
è ðàñïðîñòðàíåíèÿ íåðâíîãî èìïóëüñà äî õèìè÷åñêîãî ñèíòåçà è
ñîâåðøåíèÿ ìåõàíè÷åñêîé ðàáîòû. Ðàçðóøåíèå ìåìáðàíû
ïðèâîäèò, êàê ïðàâèëî, ê ãèáåëè êëåòêè.
Ìåìáðàíû îïðåäåëÿþò ïðèðîäó âñåõ ñâÿçåé êàê âíóòðè-, òàê è
ìåæêëåòî÷íûõ. Îíè ôîðìèðóþò ñèñòåìû àêòèâíîãî âíóòðè- è
ìåæêëåòî÷íîãî
òðàíñïîðòà,
îáåñïå÷èâàþò
òðàíñäóêöèþ
êëåòî÷íîãî ñèãíàëà.  êëåòî÷íóþ ìåìáðàíó âñòðîåíî áîëüøîå
êîëè÷åñòâî òðàíñïîðòíûõ, ðåöåïòîðíûõ áåëêîâ, ôåðìåíòîâ è
ôåðìåíòíûõ ñèñòåì/êîìïëåêñîâ. Îäíè ôåðìåíòû êàòàëèçèðóþò
òðàíñìåìáðàííûå
ðåàêöèè
èëè
òðàíñïîðò
ìîëåêóë,
ðàñïîëîæåííûõ êàê íà âíóòðåííåé, òàê è íà âíåøíåé ñòîðîíå
ìåìáðàíû. Äðóãèå - âîâëå÷åíû â öåëóþ ñåðèþ ïîñëåäîâàòåëüíûõ
ðåàêöèé, êîòîðûå ïðîòåêàþò íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, ÷åì
îáåñïå÷èâàåòñÿ èõ âûñîêàÿ èçáèðàòåëüíîñòü è ýôôåêòèâíîñòü.
Äðóãèìè ñëîâàìè, áîëüøèíñòâî ôóíäàìåíòàëüíûõ ïðîöåññîâ,
ïðîòåêàþùèõ â êëåòêå (ðåïëèêàöèÿ ÄÍÊ, áèîñèíòåç è ñåêðåöèÿ
áåëêà, áèîýíåðãåòè÷åñêèå è ãîðìîí-çàâèñèìûå ïðîöåññû è ò.ä.),
ïðîèñõîäèò ñ âîâëå÷åíèåì êàê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, òàê è
ìåìáðàí åå êîìïàðòìåíòîâ.
Áèîëîãè÷åñêèå ìåìáðàíû ñîäåðæàò ãåòåðîãåííóþ ñìåñü ÔË,
35
îòëè÷àþùèõñÿ äðóã îò äðóãà ñòðóêòóðîé ïîëÿðíîé "ãîëîâêè",
äëèíîé æèðíîêèñëîòíîé öåïè, ñòåïåíüþ íåíàñûùåííîñòè
àöèëüíûõ öåïåé, âèäîì èõ ñâÿçûâàíèÿ è ò.ä. Ó÷èòûâàÿ âñå ýòî,
î÷åíü ñëîæíî îïðåäåëèòü ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà è ôóíêöèîíàëüíóþ
ðîëü èíäèâèäóàëüíûõ ëèïèäîâ, è ñïîñîá èõ âçàèìîäåéñòâèÿ ñ
äðóãèìè ëèïèäàìè â ïðèðîäíûõ áèîìåìáðàíàõ. Ïîýòîìó äëÿ
ïîëó÷åíèÿ èíôîðìàöèè î ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è
âçàèìîäåéñòâèè ëèïèäîâ âíóòðè ìåìáðàíû èññëåäîâàòåëè øèðîêî
èñïîëüçîâàëè èñêóññòâåííûå ñèñòåìû, ñîäåðæàùèå ÔË è
íåêîòîðûå äðóãèå ìåìáðàííûå êîìïîíåíòû, òàêèå êàê õîëåñòåðèí,
èíòåãðàëüíûå áåëêè. Ïîñëå ïåðèîäà îòíîñèòåëüíîãî "çàñòîÿ", â
ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå, ñ ïîÿâëåíèåì íîâûõ ìåòîäè÷åñêèõ
ïîäõîäîâ,
áûë
ñäåëàí
áîëüøîé
øàã
â
ïîíèìàíèè
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ. Êàê îòìå÷àþò
Killian è van Meer [1], ëèïèäû, â ÷àñòíîñòè, ÔË â ìåìáðàíå âåäóò
"äâîéíóþ æèçíü", ÿâëÿÿñü, ñ îäíîé ñòîðîíû, "ñòðîèòåëüíûìè
áëîêàìè", à ñ äðóãîé - ìîäóëÿòîðàìè âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ
ïðîöåññîâ.
Ïðèìåíåíèå
ñîâðåìåííûõ
êîìïüþòåðèçèðîâàííûõ
áèîõèìè÷åñêèõ è áèîôèçè÷åñêèõ ìåòîäîâ èññëåäîâàíèÿ ïîçâîëÿåò
èçó÷àòü ïîâåäåíèå ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ íà ìîëåêóëÿðíîì è äàæå
íà àòîìíîì óðîâíÿõ. Íîâûå ìåòîäè÷åñêèå ïîäõîäû ïîçâîëèëè â
ïîñëåäíèå ãîäû äîñòè÷ü îïðåäåëåííûõ óñïåõîâ â îáëàñòè
èññëåäîâàíèÿ ñòðóêòóðû áèîìåìáðàí, â ÷àñòíîñòè, ïåðåñìîòðåòü
êëàññè÷åñêóþ ìîäåëü èõ ñòðîåíèÿ. Òàê, îïòè÷åñêèå ìåòîäû,
ñâÿçàííûå ñ ðàçâèòèåì òåõíîëîãèè ôëóîðåñöåíòíûõ èçîáðàæåíèé
(ìóëüòèôîòîííàÿ ëàçåðíàÿ ñêàííèðóþùàÿ ìèêðîñêîïèÿ è
êîíôîêàëüíàÿ ìèêðîñêîïèÿ), ïîçâîëÿþò ñëåäèòü çà ðåàëüíûì
ïîâåäåíèåì âî âðåìåíè, äèíàìèêîé è ëîêàëèçàöèåé
ôëóîðåñöåíòíûõ àíàëîãîâ ïðèðîäíûõ ëèïèäîâ â ìåìáðàíàõ æèâîé
êëåòêè. Ñ èõ ïîìîùüþ áûëî âïåðâûå ïîêàçàíî, ÷òî ñîñòàâ è
ñòðóêòóðà ìåìáðàíû õàðàêòåðèçóþòñÿ íå ñòàòè÷åñêèìè
ïðèçíàêàìè, ñâîéñòâåííûìè êëåòêå â òå÷åíèå âñåé åå æèçíè è
ëèøü íåìíîãî ìåíÿþùèìèñÿ â ïðîöåññå ñîçðåâàíèÿ è ñòàðåíèÿ, à
ïðåäñòàâëÿþò
ñîáîé
äèíàìè÷åñêóþ,
ïîñòîÿííî
ìîäèôèöèðóþùóþñÿ
ñèñòåìó,
ñêîîðäèíèðîâàííóþ
ñ
áîëüøèíñòâîì êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ. Ñ äðóãîé ñòîðîíû ðàçâèòèå
ìåòîäîâ ïðîòåîìèêè è ãåíîìèêè êà÷åñòâåííî èçìåíèëè â
ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ñèòóàöèþ âî âñåõ îáëàñòÿõ áèîõèìèè,
âêëþ÷àÿ è ìåìáðàíîëîãèþ, ïðèâåëè ê îáíàðóæåíèþ íîâûõ, ðàíåå
íå èçâåñòíûõ ìåìáðàííûõ áåëêîâ: òðàíñïîðòåðîâ, ðåöåïòîðîâ,
ðåãóëÿòîðîâ, â ÷àñòíîñòè, ðåãóëÿòîðîâ ñîñòàâà è ðàñïîëîæåíèÿ
èíäèâèäóàëüíûõ
êëàññîâ
ìåìáðàííûõ
ôîñôîëèïèäîâ,
36
ãëèêîôîñôîëèïèäîâ, õîëåñòåðèíà. Ýòè áåëêè êîíòðîëèðóþò
ïðîöåññû íå òîëüêî áèîñèíòåçà ÔË, íî è äåàöèëèðîâàíèÿ
(ôîñôîëèïàçàìè
À)
ñ
ïîñëåäóþùèì
èçáèðàòåëüíûì
àöèëèðîâàíèåì (ò.í. "ðåìîäåëèðîâàíèå"), à òàêæå ñóùåñòâåííîå
äëÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ìåìáðàíû òðàíñáèñëîéíîå ïåðåìåùåíèå
("ôëèï-ôëîï") ìîëåêóë ÔË.
2.1. Ñòðîåíèå áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí
Ñîãëàñíî æèäêîìîçàè÷íîé ìîäåëè, ïðåäëîæåííîé â 1972 ã.
Ñèíãåðîì è Íèêîëñîíîì [2], ôîñôîëèïèäû â ìåìáðàíå
ðàñïîëîæåíû â ôîðìå äâîéíîãî ñëîÿ (áèñëîÿ), êîòîðûé îáðàçóåò
æèäêóþ èëè òî÷íåå æèäêîêðèñòàëëè÷åñêóþ ìàòðèöó (ðèñ. 2.1.1).
Êàæäûé ñëîé ÔË îáðàùåí æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè âíóòðü
áèñëîÿ, ôîðìèðóÿ ãèäðîôîáíóþ ôàçó. Ïîëÿðíûå ãèäðîôèëüíûå
"ãîëîâêè" ÔË îáðàùåíû íàðóæó è âíóòðü êëåòêè. Áåëêè
ïðîíèçûâàþò âñþ ìåìáðàíó èëè "ïëàâàþò" âíóòðè íåå. Òàêàÿ
ìåìáðàíà îáëàäàåò îïðåäåëåííîé òåêó÷åñòüþ, îáóñëîâëåííîé
ëàòåðàëüíîé äèôôóçèåé ëèïèäíûõ è áåëêîâûõ ìîëåêóë [3].
Ðèñ.2.1.1. Æèäêî-ê
êðèñòàëëè÷åñêàÿ ìîäåëü ìåìáðàíû
(ïî [215] ñ èçìåíåíèÿìè)
Íåñìîòðÿ íà ñóùåñòâåííûå äîñòèæåíèÿ, îñîáåííî â ïîñëåäíèå
ãîäû, ïîêàçàâøèå îãðîìíóþ, ïîêà åùå ïîëíîñòüþ íå îáúÿñíåííóþ
óñëîæíåííîñòü ìîëåêóëÿðíîé ñòðóêòóðû áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí,
ñîâðåìåííàÿ ìåìáðàíîëîãèÿ íå îòêàçàëàñü îò æèäêîìîçàè÷íîé
ìîäåëè ìåìáðàíû, ïîñòîÿííî äîïîëíÿÿ åå íîâûìè ïîëó÷åííûìè
äàííûìè. È â íàñòîÿùåå âðåìÿ ìû, ïî-ïðåæíåìó, ïîëüçóåìñÿ ýòîé
ìîäåëüþ ñòðîåíèÿ ìåìáðàíû, íî â óñëîæíåííîé ôîðìå, â êîòîðîé
îòðàæåíû íîâûå, ñïåöèôè÷åñêèå, íå èçâåñòíûå ðàíåå
çàêîíîìåðíîñòè.
Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì, öåíòðàëüíûé ñëîé
òàêîé ìåìáðàíû ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé òåêó÷èé ëèïèäíûé áèñëîé ñ
âêëþ÷åíèÿìè âíóòðèìåìáðàííûõ áåëêîâ. Ïîëàãàþò, ÷òî
37
àññîöèèðîâàííûå ñ ìåìáðàííîé áåëêè ÿâëÿþòñÿ ãëîáóëÿðíûìè.
Íåêîòîðûå èç íèõ ðàñïîëîæåíû íà ïîëÿðíîé ïîâåðõíîñòè
ìåìáðàíû èëè ÷àñòè÷íî ïîãðóæåíû â åå ìîíîñëîé êàê ñ íàðóæíîé,
òàê è ñ âíóòðåííåé ñòîðîíû. Ýòî, òàê íàçûâàåìûå, ïåðèôåðè÷åñêèå,
ôóíêöèîíàëüíî àññîöèèðîâàííûå ñ ìåìáðàíîé áåëêè,
óäåðæèâàåìûå íà åå ïîâåðõíîñòè ïðè ïîìîùè íåêîâàëåíòíûõ
ñâÿçåé. Äðóãèå, èíòåãðàëüíûå áåëêè ïðîõîäÿò ÷åðåç âñþ òîëùó
ìåìáðàíû, â òîì ÷èñëå è ÷åðåç âíóòðåííèå íåïîëÿðíûå åå ñëîè. Â
èíòåãðàëüíûõ áåëêàõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòü àìèíîêèñëîòíûõ
îñòàòêîâ ðàñïðåäåëåíà òàêèì îáðàçîì, ÷òî ãèäðîôîáíûå îñòàòêè
àìèíîêèñëîò ôîðìèðóþò ñòðóêòóðû, êîòîðûå ïðîíèçûâàþò
ìåìáðàíó, à ãèäðîôèëüíûå - îáðàçóþò ôóíêöèîíàëüíûå äîìåíû íà
âíóòðåííåé è/èëè íàðóæíîé ïîâåðõíîñòÿõ ìåìáðàíû. Òàêèì
îáðàçîì, ôóíêöèîíàëüíî ðàçíûå áåëêè ìåìáðàíû îáðàçóþò â
æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîì áèñëîå ôîñôîëèïèäîâ ñâîåîáðàçíóþ
ìîçàè÷íóþ ñòðóêòóðó. Ýòà ìîçàèêà íå ÿâëÿåòñÿ ñòðîãî
ôèêñèðîâàííîé, ÷òî ïîçâîëÿåò ðàçíûì êëàññàì ÔË è ìèíîðíûì
ëèïèäàì ìåìáðàíû ïðè ëàòåðàëüíîé äèôôóçèè ôîðìèðîâàòü
îïðåäåëåííûå êëàñòåðû (ó÷àñòêè ïîâåðõíîñòíîãî ìîíîñëîÿ
ìåìáðàíû).
Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà ñîäåðæèò ìíîãî ãëèêîëèïèäîâ,
ïîëÿðíûå óãëåâîäíûå ÷àñòè êîòîðûõ (îñòàòêè ìîíî- è
îëèãîñàõàðèäîâ), ðàñïîëîæåíû íà åå ïîâåðõíîñòè, ÷òî ïîçâîëÿåò
èì âûïîëíÿòü ñïåöèôè÷íûå ôóíêöèè, òàêèå êàê ðåöåïöèÿ
(êëåòî÷íîå
óçíàâàíèå)
è
èììóíîõèìè÷åñêèå
ðåàêöèè.
Âûñòóïàþùèå èç áèñëîÿ ãèäðîôèëüíûå îëèãîñàõàðèäíûå ó÷àñòêè
ãëèêîëèïèäîâ îáðàçóþò ó ýóêàðèîòè÷åñêèõ êëåòîê ïîäîáèå
íàðóæíîé îáîëî÷êè - ãëèêîêàëèêñà.
Îïðåäåëåííóþ ðîëü â ñòàáèëèçàöèè ëèïèäíîãî áèñëîÿ èãðàåò è
ñëîé âîäû, ïîêðûâàþùèé ñíàðóæè ìîíîñëîé ôîñôîëèïèäîâ è
ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Òàêèå ìîíîñëîè âîäû óäåðæèâàþòñÿ íà
ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû çà ñ÷åò âîäîðîäíûõ ñâÿçåé ìåæäó
ïîëÿðíûìè "ãîëîâêàìè" ÔË è ìîëåêóëàìè âîäû [4]. Â áèñëîå
èíäèâèäóàëüíûå ëèïèäíûå ìîëåêóëû ìîãóò ïåðåìåùàòüñÿ
(ëàòåðàëüíàÿ äèôôóçèÿ), ÷òî îáåñïå÷èâàåò ìåìáðàíå æèäêîñòíîñòü
è ãèáêîñòü. Îòäåëüíûå ìîëåêóëû ÔË, â çàâèñèìîñòè îò äëèíû èõ
æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ñïîñîáíû ïåðåìåùàòüñÿ ìåæäó íàðóæíûì
è âíóòðåííèì ìîíîñëîåì ìåìáðàíû, èñïîëüçóÿ ìåõàíèçì ôëèïôëîïà.
Âñå ýòî óêàçûâàåò íà òî, ÷òî áèñëîéíàÿ ìåìáðàíà ÿâëÿåòñÿ
åäèíîé äèíàìè÷íîé è ñàìîðåãóëèðóþùåéñÿ ñèñòåìîé.
Íà ðèñ. 2.1.2 ïðåäñòàâëåíà ñîâðåìåííàÿ áîëåå óñëîæíåííàÿ
æèäêîìîçàè÷íàÿ ìîäåëü ìåìáðàíû ýóêàðèîòè÷åñêîé êëåòêè.
38
Ðèñ. 2.1.2. Ñîâðåìåííàÿ èíòåðïðåòàöèÿ æèäêî-ì
ìîçàè÷íîé ìîäåëè
ìåìáðàíû (ïî [215] ñ èçìåíåíèÿìè).
Âèäíû âñòðîåííûå â ìåìáðàíó ïåðèôåðè÷åñêèå è èíòåãðàëüíûå áåëêè è ìîëåêóëû
õîëåñòåðèíà; ïîêàçàíî âçàèìîäåéñòâèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ ñ âíóòðèêëåòî÷íûìè
âîëîêíàìè öèòîñêåëåòà (íèæíÿÿ ÷àñòü ðèñóíêà) è ñ âíåêëåòî÷íûì ìàòðèêñîì, ïðè
âîçìîæíîì ó÷àñòèè ñâÿçàííûõ ñ ìåìáðàíîé ãëèêîëèïèäîâ è ãëèêîïðîòåèíîâ
(âåðõíÿÿ ÷àñòü ðèñóíêà).
Æèäêîìîçàè÷íàÿ ìîäåëü îáúÿñíÿåò ìíîãèå ñâîéñòâà
áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí, íàïðèìåð, íåîäèíàêîâîå ÷èñëî ìîëåêóë
áåëêà íà åäèíèöó ïëîùàäè, àññèìåòðèþ, âîçìîæíîñòü
ðàñïîëîæåíèÿ áåëêîâ òîëüêî íà âíóòðåííåé èëè òîëüêî íà
íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè, ðàçíóþ òîëùèíó ìåìáðàíû è äð.
Ýòà ìîäåëü ïîçâîëÿåò ïîíÿòü âûñîêîå ýëåêòðè÷åñêîå
ñîïðîòèâëåíèå ìåìáðàíû, èçáèðàòåëüíóþ ïðîíèöàåìîñòü,
èçìåí÷èâîñòü, à òàêæå ëàòåðàëüíóþ äèôôóçèþ - ïåðåìåùåíèå
îòäåëüíûõ ëèïèäîâ è áåëêîâ â ïëîñêîñòè íàðóæíîãî ìîíîñëîÿ ñî
çíà÷èòåëüíîé ñêîðîñòüþ.
Ïîìèìî áåëêîâ è ÔË, âàæíåéøèìè êîìïîíåíòàìè âñåõ
áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí ÿâëÿþòñÿ ñòåðèíû.  ïðîòèâîïîëîæíîñòü
èìåþùåìóñÿ ðàçíîîáðàçèþ ÔË, êëåòêè ìëåêîïèòàþùèõ ñîäåðæàò
òîëüêî îäèí âàæíåéøèé ñòåðèí - õîëåñòåðèí, êîòîðûé íåîáõîäèì
äëÿ èõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè è ïðîëèôåðàöèè [5 - 7]. Ìàêñèìàëüíàÿ
ðàñòâîðèìîñòü õîëåñòåðèíà â ôîñôîëèïèäíîì áèñëîå âàðüèðóåò â
ïðåäåëàõ 50 - 66 ìîë% â çàâèñèìîñòè îò âèäà äîìèíèðóþùåãî â íåì
ëèïèäà [8, 9]. Âñòðàèâàÿñü ìåæäó ìîëåêóëàìè ëèïèäîâ, ÕÑ
ó÷àñòâóåò â ðåãóëÿöèè òåêó÷åñòè ìåìáðàíû, ïðåïÿòñòâóÿ ïëîòíîé
óïàêîâêå óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé è òåì ñàìûì, ñíèæàÿ òåìïåðàòóðó
ïëàâëåíèÿ ëèïèäîâ. Âíåøíå ýòî ïðîÿâëÿåòñÿ â "ðàñøèðåíèè"
39
îáëàñòè ôàçîâîãî ïåðåõîäà â ëèïèäíîì áèñëîå. Â
æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîì ñîñòîÿíèè ÕÑ ïîâûøàåò ñòåïåíü
óïîðÿäî÷åííîé îðèåíòàöèè è ñíèæàåò ñêîðîñòü äâèæåíèÿ
óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé ÔË [10, 11].
Òàêèì îáðàçîì, ÕÑ è ìåìáðàííûå áåëêè çàìåòíî âëèÿþò íà
îðãàíèçàöèþ ëèïèäíîãî áèñëîÿ, óâåëè÷èâàÿ åãî ñòðóêòóðíóþ
ãåòåðîãåííîñòü [12].
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ñòðóêòóðíàÿ äèíàìèêà áèñëîÿ â
öåëîì (ôàçîâûå ïåðåõîäû, ïîääåðæàíèå àñèììåòðèè, òåêó÷åñòü,
ëàòåðàëüíàÿ äèôôóçèÿ, "ôëèï-ôëîï" è äð.) èãðàåò êëþ÷åâóþ ðîëü â
ðåàëèçàöèè ìåìáðàííûõ è òðàíñìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ. Â îñíîâå
ñòðóêòóðíîé äèíàìèêè áèñëîÿ ëåæàò ëèïèä/ëèïèäíûå è
ëèïèä/áåëêîâûå âçàèìîäåéñòâèÿ èëè, äðóãèìè ñëîâàìè,
ïîâåäåíèåì ëèïèäîâ óïðàâëÿåò èõ õèìè÷åñêàÿ ñòðóêòóðà.
Òàê, ïðîñòðàíñòâåííàÿ ñòðóêòóðà è ðàçìåð ïîëÿðíîé îáëàñòè ÔË
âëèÿþò íà ïëîòíîñòü ìîëåêóëÿðíîé óïàêîâêè, ò.å. íà
ïðîñòðàíñòâåííîå ðàñïîëîæåíèå â ìåìáðàíå æèðíîêèñëîòíûõ
öåïåé ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë. Íàïðèìåð, ýòàíîëàìèí
êîíôîðìàöèîííî çàíèìàåò ìåíüøèé îáúåì, ÷åì õîëèí (â êîòîðîì
àòîìû âîäîðîäà â àìèíîãðóïïå çàìåíåíû áîëüøèìè ïî îáúåìó
ìåòèëüíûìè ãðóïïàìè), ÷òî ñîçäàåò âîçìîæíîñòü áîëåå ïëîòíîé
óïàêîâêè àöèëüíûõ öåïåé â áèñëîå, ñîäåðæàùåì ÔÝ, ïî ñðàâíåíèþ
ñ ÔÕ. Áîëåå òîãî, ÔÝ ìîæåò îáðàçîâûâàòü îáøèðíóþ ñåòü
âîäîðîäíûõ ñâÿçåé, êîòîðûå äîïîëíèòåëüíî ïîâûøàþò ïëîòíîñòü
óïàêîâêè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé.
Õàðàêòåð óïàêîâêè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ÔË â ìåìáðàíå
ñóùåñòâåííî çàâèñèò îò èõ õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû. Òàê, â
ïîëíîñòüþ íàñûùåííûõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïÿõ ÔË âñå àòîìû
óãëåðîäà íàõîäÿòñÿ ïîëíîñòüþ â òðàíñ-êîíôîðìàöèè.  ñëó÷àå
äâóõ öåïåé â ìîëåêóëå îíè èìåþò âîçìîæíîñòü ðàñïîëàãàòüñÿ
ïàðàëëåëüíî äðóã äðóãó (è ïàðàëëåëüíî àöèëüíûì öåïÿì ñîñåäíèõ
ÔË ìîëåêóë). Ïðèìåðîì ýòîãî ìîæåò ñëóæèòü ìîëåêóëà
ñôèíãîìèåëèíà, êîòîðîé ñâîéñòâåííû íàèáîëåå íàñûùåííûå
àöèëüíûå öåïè - îíà çàíèìàåò â ñðåäíåì îáëàñòü 36 Α° 2.
Ââåäåíèå äâîéíîé ñâÿçè ñ öèñ-êîíôîðìàöèåé (à èìåííî â òàêîé
êîíôîðìàöèè íàõîäÿòñÿ íåíàñûùåííûå ÆÊ ïðèðîäíûõ ÔË)
ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ â æèðíîêèñëîòíîé öåïè ïåðåãèáà (êèíê),
ðàçðûõëÿþùåãî ïëîòíóþ óïàêîâêó, âàí-äåð-âààëüñîâñêîå
âçàèìîäåéñòâèå ïðè ýòîì îñëàáëÿåòñÿ. Ïîýòîìó ïðèñóòñòâèå õîòÿ
áû îäíîé åäèíñòâåííîé äâîéíîé ñâÿçè äîñòàòî÷íî äëÿ òîãî, ÷òîáû
îêàçàòü âûðàæåííîå âëèÿíèå íà ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà ÔË.
Ïðè íàëè÷èè â ìîëåêóëå ÔË äâóõ æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé,
ñîäåðæàùèõ íåíàñûùåííûå äâîéíûå ñâÿçè (êàê, íàïðèìåð, â
40
äèëèíîëåîèëôîñôàòèäèëõîëèíå - ÄËÔÕ), îáëàñòü, çàíèìàåìàÿ
îäíîé ìîëåêóëîé, ïðè äàâëåíèè, ðàâíîì âíóòðèêëåòî÷íîìó
äàâëåíèþ, îêàçûâàåìîìó íà áèñëîé (25 äèí/ñì), óâåëè÷èâàåòñÿ
ïî÷òè â 2 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîëíîñòüþ íàñûùåííûì ÔË.
Ôèçèêî-õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå êëåòî÷íûõ ìåìáðàí, òî÷íåå òåõ
ëèïèäîâ, èç êîòîðûõ ìåìáðàíû ïîñòðîåíû, îïðåäåëÿþò ìíîãèå
ôàêòîðû. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî
äëÿ îñóùåñòâëåíèÿ ìåìáðàíîé áèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé
íåîáõîäèìî îïðåäåëåííîå ñîñòîÿíèå ëèïèäíîé ìàòðèöû, â
÷àñòíîñòè, îïðåäåëåííàÿ ñòåïåíü æèäêîñòíîñòè áèñëîÿ.
 îòëè÷èå îò ïåðâûõ ïðåäñòàâëåíèé î ñâîáîäíîé äèôôóçèè ÔË
è áåëêîâ â ìåìáðàííîé ñòðóêòóðå, ñîãëàñíî æèäêîìîçàè÷íîé
ìîäåëè ìåìáðàíû, â íàñòîÿùåå âðåìÿ óñòàíîâëåíî, ÷òî ëàòåðàëüíàÿ
(ïëîñêîñòíàÿ) ñòðóêòóðà ìåìáðàíû áîëåå ñëîæíàÿ, è ÷òî ëèïèäû è
ìåìáðàííûå áåëêè â íåé íå èìåþò ïîëíîé ñâîáîäû ïåðåìåùåíèÿ,
à ìîãóò áûòü, íàïðèìåð, "çàÿêîðåíû" çà âíóòðåííèå
(öèòîïëàçìàòè÷åñêèå) ñòðóêòóðû êëåòêè, òèïà ìèêðîôèëàìåíòîâ
[13 - 16].
Íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèé íà
èñêóññòâåííûõ ìåìáðàíàõ íåäàâíî áûëà ïðåäëîæåíà ìîäåëü
îïðåäåëåííîé ëàòåðàëüíîé ëîêàëèçàöèè ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, òàê
íàçûâàåìàÿ ìîäåëü "ñóïåð-ðåøåòêè" èëè ìîäåëü ðåãóëÿðíîãî
ðàñïðåäåëåíèÿ [17]. Ñîãëàñíî ýòîé ìîäåëè ëàòåðàëüíîå
ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ èìååò òåíäåíöèþ ê îïðåäåëåííîìó
øàáëîíó èëè ìàòðèöå. Õàðàêòåð ðåãóëÿðíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ
îïðåäåëÿåòñÿ: (1) âàí-äåð-âààëüñîâñêèìè ñâÿçÿìè (ãëàâíûì
îáðàçîì
ïðè
ëèïèä/ëèïèäíîì
è
ëèïèä/áåëêîâîì
âçàèìîäåéñòâèÿõ); (2) ñèëàìè ýëåêòðîñòàòè÷åñêîãî îòòàëêèâàíèÿ
(íàïðèìåð, ìåæäó îäíîèìåííî çàðÿæåííûìè ïîëÿðíûìè
"ãîëîâíûìè" ãðóïïàìè ÔË) è (3) ñòåðè÷åñêèìè ýôôåêòàìè
(îáóñëîâëåííûìè, íàïðèìåð, ðàçìåðîì è ôîðìîé ïîëÿðíûõ
"ãîëîâîê" ÔË).
Âîçìîæíîñòü ïðèìåíåíèÿ ìîäåëè "ñóïåð-ðåøåòêè" ê
áèîëîãè÷åñêèì ìåìáðàíàì áûëà âïåðâûå èñïûòàíà íà ìåìáðàíå
ýðèòðîöèòîâ [18]. Ñîãëàñíî ïðåäñêàçàííîé ìîäåëè "ñóïåððåøåòêè", ëàòåðàëüíîå ðàñïðåäåëåíèå ÔË íà âíåøíåé è
âíóòðåííåé ñòîðîíå áèñëîÿ ïðîèñõîäèò â ñîîòâåòñòâèè ñ ðàçìåðîì
ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ÔË (õîëèí èëè ýòàíîëàìèí), â ñîîòâåòñòâèè ñ
èõ çàðÿäîì (íàïðèìåð, êèñëûå ÔË), èëè ïðèñóòñòâèåì õîëåñòåðèíà,
÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè õèìè÷åñêîãî àíàëèçà ñîñòàâà
ëèïèäîâ ìåìáðàí ýðèòðîöèòîâ [18].
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî õîòÿ ëàòåðàëüíîå ðàñïðåäåëåíèå
ëèïèäîâ â ìåìáðàíå òåîðåòè÷åñêè áûëî ïðåäñêàçàíî ìîäåëüþ
41
"ñóïåð-ðåøåòêè",
äëÿ
åå
ïîäòâåðæäåíèÿ
íåîáõîäèìû
äîïîëíèòåëüíûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ, îñîáåííî íà
ìåìáðàíàõ in vivo.
2.2. Àñèììåòðèÿ ôîñôîëèïèäîâ â ìåìáðàíå.
Ñòðóêòóðíàÿ àñèììåòðèÿ èëè ðàçëè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå
ëèïèäîâ ìåæäó âíóòðåííèìè è íàðóæíûìè ìîíîñëîÿìè ÿâëÿåòñÿ
îäíèì èç âàæíåéøèõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû, êîòîðîå
ïîçâîëÿåò åé äåéñòâîâàòü äèôôåðåíöèðîâàííî ïî îòíîøåíèþ ê
ðàçäåëÿåìûì åþ êëåòî÷íûì êîìïàðòìåíòàì. Èìåííî áëàãîäàðÿ
àñèììåòðèè, âíåøíÿÿ ïîâåðõíîñòü ìåìáðàíû õèìè÷åñêè
îòëè÷àåòñÿ îò âíóòðåííåé [19, 20].
Àñèììåòðè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ ìåæäó íàðóæíûì è
âíóòðåííèì ìîíîñëîÿìè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà îáíàðóæåíî
ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ áèîìåìáðàíàõ, â òîì ÷èñëå è
âíóòðèêëåòî÷íûõ [21].
 íàñòîÿùåå âðåìÿ óæå äîêàçàíî, ÷òî õîëèí-ñîäåðæàùèå
ëèïèäû, ÔÕ, ÑÌ ðàñïîëîæåíû ïðåèìóùåñòâåííî íà âíåøíåé
ñòîðîíå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû èëè â ïðîñâåòå ñòâîðîê
âíóòðåííèõ îðãàíåëë, à àìèíîñîäåðæàùèå ÔË (òàêèå êàê ÔÝ è ÔÑ)
- íà öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ñòîðîíå ìåìáðàíû. Äàííûå ïî äðóãèì
îñíîâíûì âèäàì ôîñôîëèïèäîâ, òàêèì, êàê ÔÊ, ÔÈ, ÔÈ-4ìîíîôîñôàò (ÐIÐ) è ÔÈ-4,5-äèôîñôàò (ÐIÐ2) ñâèäåòåëüñòâóþò î
âîçìîæíîé èõ ëîêàëèçàöèè êàê íà âíåøíåé, òàê è íà âíóòðåííåé
ñòîðîíå ìåìáðàíû. Íàïðèìåð, ìåìáðàíà ýðèòðîöèòîâ íà âíåøíåé
ñòîðîíå ìîíîñëîÿ ñîäåðæèò 75-80% ÔÕ è ÑÌ, 20% ÔÝ, ÔÊ, ÔÈ è
ÔÈ-4,5-äèôîñôàòà, íî íà ýòîé ñòîðîíå íå îáíàðóæèâàþòñÿ ÔÑ èëè
ÔÈ-4-ìîíîôîñôàò [22 - 26].
Àñèììåòðèÿ ìåìáðàííûõ ÔË ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ âûïîëíåíèÿ
êëåòêîé îïðåäåëåííûõ ôóíêöèé. Òàê, Kato ñ ñîàâò. [27] ïîêàçàëè
ðîëü àñèììåòðèè ìåìáðàí æèðîâûõ êëåòîê â ýêçîöèòîçå: ïðè åå
èñêóññòâåííîì íàðóøåíèè ñ ïîìîùüþ ñâåðõýêcïðåññèè
òðàíñïîðòíîãî áåëêà ñêðàìáëàçû íàáëþäàëîñü èíãèáèðîâàíèå
ýêçîöèòîçà.
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïîòåðÿ òðàíñìåìáðàííîé àñèììåòðèè ÔË ñ
ïîñëåäóþùèì ïîÿâëåíèåì ÔÑ âî âíåøíåì ìîíîñëîå
(ýêñòåðíàëèçàöèÿ) ïðîèñõîäèò êàê â íîðìå (ïðè íåêîòîðûõ
êëåòî÷íûõ
ñîáûòèÿõ),
òàê
è
ïàòîëîãèè.
Íàïðèìåð,
ýêñòåðíàëèçàöèÿ ÔÑ èíäóöèðóåòñÿ íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àïîïòîçà
êëåòîê [28], à òàêæå íàáëþäàåòñÿ ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ [29]
è â àíîìàëüíûõ ýðèòðîöèòàõ [30]. Ýòî ïåðåðàñïðåäåëåíèå ïðèâîäèò
ê çíà÷èòåëüíûì èçìåíåíèÿì ïîâåðõíîñòíûõ ñâîéñòâ êëåòêè,
èíèöèèðóÿ, íàïðèìåð, ïîâûøåííóþ àäãåçèþ [31, 32], ïîâûøåííóþ
42
àãðåãàöèþ [29], óçíàâàíèå ôàãîöèòàìè [33, 34]. Õîòÿ ýòè ïðîöåññû
î÷åíü âàæíû äëÿ íîðìàëüíîãî ðàçâèòèÿ êëåòêè è ãîìåîñòàçà,
íåðåãóëèðóåìàÿ ïîòåðÿ àñèììåòðèè ìåìáðàíû ìîæåò â
çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè ñïîñîáñòâîâàòü ðàçâèòèþ ðÿäà ñåðäå÷íîñîñóäèñòûõ çàáîëåâàíèé, åå ñâÿçûâàþò ñ âûñîêèì ðèñêîì ðàçâèòèÿ
äèàáåòà [35, 36]. Â ïîñëåäíèå ãîäû îïóáëèêîâàíî ìíîãî
èíòåðåñíûõ äàííûõ î çíà÷åíèè ëèïèäíîé àñèììåòðèè [37], ðîëè
áåëêîâ-òðàíñïîðòåðîâ â åå ïîääåðæàíèè [38, 39] è ïîñëåäñòâèÿõ
ïðè ïîòåðå àñèììåòðèè [40 - 42].
Èçâåñòíî, ÷òî ïðîöåññ áèîñèíòåçà ëèïèäîâ ïî ñâîåé ïðèðîäå
àñèììåòðè÷åí, òàê êàê ôåðìåíòû, îáåñïå÷èâàþùèå ýòîò ïðîöåññ,
ëîêàëèçóþòñÿ, êàê ïðàâèëî, òîëüêî íà îäíîé ñòîðîíå ìåìáðàíû, â
êîòîðîé è ïðîèñõîäèò áèîñèíòåç [43]. Òàê, äëÿ îñíîâíûõ âèäîâ ÔË
(ÔÑ, ÔÝ, ÔÕ è ÔÈ) ñèíòåç de novo ïðîèñõîäèò íà âíóòðåííåé,
öèòîçîëüíîé, ñòîðîíå ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà (ÝÐ) [44].
Èç-çà
ñóùåñòâóþùåãî
òåðìîäèíàìè÷åñêîãî
áàðüåðà,
ïðåïÿòñòâóþùåãî ñïîíòàííîìó ñàìîïðîèçâîëüíîìó ïåðåìåùåíèþ
ìåæäó ñëîÿìè, ýòè ëèïèäû äîëæíû îñòàâàòüñÿ íà òîé ñòîðîíå, ãäå
áûëè
ñèíòåçèðîâàíû,
ò.å.
íà
îáîãàùåííîé
èìè
öèòîïëàçìàòè÷åñêîé
ñòîðîíå
ìåìáðàíû.
Íåðàâíûé,
àñèììåòðè÷íûé ïðèðîñò âíîâü ñèíòåçèðîâàííûõ ÔË â îäíîì
ìîíîñëîå, äîëæåí áûë áû íàðóøàòü ñòàáèëüíîñòü ìåìáðàíû [44 46].
Ñóùåñòâóåò
ìíîãî
äîêàçàòåëüñòâ
ìåìáðàííîãî
ïåðåðàñïðåäåëåíèÿ ñèíòåçèðîâàííûõ ëèïèäîâ ñ ïîìîùüþ
ñïåöèôè÷åñêèõ ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ. Îáíàðóæåíû ëèïèäíûå
òðàíñïîðòåðû, êîòîðûå ïåðåìåùàþò ñèíòåçèðîâàííûå ÔË ÷åðåç
âñþ ìåìáðàíó ÝÐ, ïîýòîìó â äåéñòâèòåëüíîñòè ìåìáðàíû ÝÐ, ãäå
ïðîèñõîäèò ñèíòåç ÔË, è àïïàðàòà Ãîëüäæè ìåíåå àñèììåòðè÷íû,
÷åì ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà [47 - 49]. Òàêèì îáðàçîì, ïîñëå
ñèíòåçà ïðîèñõîäèò ïåðåðàñïðåäåëåíèå ÔË êàê âíóòðè ìåìáðàí
êëåòêè (ÝÐ, àïïàðàòà Ãîëüäæè), òàê è èõ òðàíñïîðò ê ìåñòó
ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèè.
ÔÕ, íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûé ìåìáðàííûé ÔË, ëîêàëèçóåòñÿ
íà îáåèõ ñòîðîíàõ ìåìáðàíû, ñ ïðåäïî÷òåíèåì ê íàðóæíîé
ïîâåðõíîñòè. Ïðåèìóùåñòâåííàÿ ëîêàëèçàöèÿ íà âíåøíåì
ìîíîñëîå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû áîëüøèíñòâà êëåòîê
õàðàêòåðíà òàêæå äëÿ ÕÑ. Êðîìå àñèììåòðè÷íîãî ðàñïîëîæåíèÿ
ÔË è ÕÑ, æèðíûå êèñëîòû, âõîäÿùèå â ñîñòàâ ÔË òàêæå
ðàñïðåäåëÿþòñÿ
àñèììåòðè÷íî
ñ
ïðåèìóùåñòâåííîé
ëîêàëèçàöèåé ïðîñòðàíñòâåííî èçîãíóòûõ (è çàíèìàþùèõ ïîýòîìó
áîëüøóþ ïëîùàäü) íåíàñûùåííûõ óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé âáëèçè
íàðóæíîé ñòîðîíû ìåìáðàíû.
43
 ïðèíöèïå, èçâåñòíû äâà ìåõàíèçìà, îáóñëàâëèâàþùèå
íåðàâíîìåðíîñòü ëîêàëèçàöèè îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË â íàðóæíîì
è âíóòðåííåì ñëîÿõ ìåìáðàíû. Îäèí èç íèõ, äàâíî èçâåñòíûé,
îñíîâàí íà ðàçëè÷èè êîíôîðìàöèîííûõ ðàçìåðîâ ïîëÿðíûõ
"ãîëîâíûõ" ãðóïï. Íàïðèìåð, õîëèí çà ñ÷åò òðåõ ìåòèëüíûõ ãðóïï
çàíèìàåò ïðîñòðàíñòâåííî áîëüøå ìåñòà, ÷åì ýòàíîëàìèí, ïîýòîìó
áîëåå åñòåñòâåííîé îêàçûâàåòñÿ ëîêàëèçàöèÿ ÔÕ íà âûïóêëîé
íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè, ãäå "ãîëîâêà" ìîæåò çàíèìàòü áîëüøóþ
ïëîùàäü, ÷åì ñîîòâåòñòâóþùèå åé ïîãðóæåííûå âíóòðü
æèðíîêèñëîòíûå õâîñòû. Ìîëåêóëû æå ÔÝ, ñ íåáîëüøîé
ýòàíîëàìèíîâîé ïîëÿðíîé "ãîëîâíîé" ãðóïïîé, ìîãóò òåñíåå
ðàñïîëàãàòüñÿ âî âíóòðåííåì âîãíóòîì öèòîçîëüíîì ñëîå, ñ
íåñêîëüêî ìåíüøåé îáùåé ïëîùàäüþ.
Âòîðîé, ïðåäëîæåííûé â ïîñëåäíèå ãîäû ìåõàíèçì
òðàíñëîêàöèè ìåáðàííûõ ÔË, ñâÿçàí ñ ó÷àñòèåì áåëêîâïåðåíîñ÷èêîâ. Îáíàðóæåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ ÀÒÔ-çàâèñèìûõ
áåëêîâ-ïåðåíîñ÷èêîâ ëèïèäîâ, ïîäòâåðæäàåò ôàêò, ÷òî
ñåëåêòèâíîå ïåðåìåùåíèå ëèïèäîâ ÷åðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ
ìåìáðàíó òðåáóåò çàòðàòû ýíåðãèè. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ
êàòàëèçèðóåìûé áåëêàìè òðàíñïîðò ñ÷èòàþò îñíîâíûì
ìåõàíèçìîì òðàíñëîêàöèè ìåáðàííûõ ÔË. Èìåííî ýòèì,
íàïðèìåð, ìîæíî îáúÿñíèòü ðàçëè÷èå ñêîðîñòè ïåðåìåùåíèÿ
àìèíî-ÔË â ðàçíûõ êëåòêàõ. Íàïðèìåð, â ôèáðîáëàñòàõ îíà íà
ïîðÿäîê âûøå, ÷åì â ýðèòðîöèòàõ [50].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî â ðàçëè÷íûõ ìåìáðàíàõ ñîñóùåñòâóþò ðàçíûå
áåëêîâûå òðàíñïîðòåðû, âûçûâàþùèå ðàíäîìèçàöèþ è
àñèììåòðèþ ëèïèäîâ. Òàê, ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîêàçàíî, ÷òî
ôîðìèðîâàíèå âûñîêî àñèììåòðè÷íîé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû
èç áîëåå ñèììåòðè÷íûõ ìåìáðàí ÝÐ è Ãîëüäæè îáåñïå÷èâàþò
ÀÒÔ-íåçàâèñèìûå è íåñåëåêòèâíûå ëèïèäíûå òðàíñïîðòåðû ÝÐ â
ñî÷åòàíèè ñ ïîäâèæíûìè ñóáñòðàò-ñïåöèôè÷íûìè ÀÒÔçàâèñèìûìè
òðàíñïîðòåðàìè,
ïåðåìåùàþùèìèñÿ
â
ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó [53]. Îäíàêî òðàíñïîðò ÔË ñ ïîìîùüþ
áåëêîâ-òðàíñïîðòåðîâ ïîêà ìàëî èçó÷åí. Îñòàåòñÿ åùå ìíîãî
âîïðîñîâ, ñâÿçàííûõ ñ èõ âíóòðèêëåòî÷íîé ëîêàëèçàöèåé,
áèîõèìè÷åñêîé ðåãóëÿöèåé è ò.ä.
Èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò ïîçâîëÿþò óòâåðæäàòü, ÷òî áåëêè,
ñïîñîáñòâóþùèå ìåìáðàííîìó ïåðåìåùåíèþ ëèïèäîâ, ÿâëÿþòñÿ
ãëàâíûìè â ïðîöåññàõ ñîçäàíèÿ è ðàññåèâàíèÿ òðàíñáèñëîéíîé
àñèììåòðèè. Ýòè áåëêè êëàññèôèöèðóþò â ñîîòâåòñòâèè ñ èõ
ñóáñòðàòíîé ñïåöèôè÷íîñòüþ, ïîòðåáíîñòüþ â ýíåðãèè è
íàïðàâëåíèåì òðàíñïîðòà.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ îïèñàíû äâà âèäà ÀÒÔ-çàâèñèìûõ áåëêîâ 44
ïåðåíîñ÷èêîâ ëèïèäîâ. Èç íèõ íàèáîëåå èçó÷åííàÿ
àìèíîôîñôîëèïèäòðàíñëîêàçà
èëè
"ôëèïàçà",
êîòîðàÿ
òðàíñïîðòèðóåò ÔÑ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå èç âíåøíåãî
ìîíîñëîÿ âî âíóòðåííèé. Äðóãîé áåëîê "ôëîïàçà" òðàíñïîðòèðóåò
ëèïèäû â ïðîòèâîïîëîæíîì íàïðàâëåíèè. Èç ñåìåéñòâà "ôëîïàç" â
íàñòîÿùåå âðåìÿ íàèáîëåå èçó÷åíû áåëêè, êàòàëèçèðóþùèå
òðàíñïîðò êîðîòêîöåïî÷å÷íûõ ëèïèäîâ èç âíóòðåííåãî ìîíîñëîÿ è
ñåëåêòèâíûé âûõîä (efflux) ÔÕ è õîëåñòåðèíà èç ìåìáðàíû.
Ñîîáùàåòñÿ òàêæå î òðåõ ÀÒÔ-íåçàâèñèìûõ è ñðàâíèòåëüíî
íåñïåöèôè÷íûõ
áåëêàõ-ïåðåíîñ÷èêàõ,
íàçûâàåìûõ
ñêðàìáëàçàìè:
(1)
Ñà2+-àêòèâèðóåìûé
òðàíñïîðòåð
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, è äâà òðàíñïîðòåðà, ñâÿçàííûõ ñ ÝÐ - (2)
ñïåöèôè÷íûé ê ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì è (3) ñïåöèôè÷íûé ê
ëèïèäàì, ñîäåðæàùèì óãëåâîäíûé ôðàãìåíò [51].
 öåëîì, êàê ïîêàçàíî â ðÿäå èññëåäîâàíèé, ñóììàðíîå
òðàíñáèñëîéíîå ðàñïðåäåëåíèå ÔË îïðåäåëÿåòñÿ ñïåöèôè÷íîñòüþ
ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ, ëîêàëèçîâàííûõ â ìåìáðàíå. Êàæäàÿ èç
òðàíñïîðòíûõ àêòèâíîñòåé îòðàæàåò óíèêàëüíóþ ñïåöèôè÷íîñòü
èëè íåñïåöèôè÷íîñòü, êîòîðàÿ îïðåäåëÿåò åå ôóíêöèþ â
óñòàíîâëåíèè ëèïèäíîé îðãàíèçàöèè [52 - 54].
Âçàèìîäåéñòâèå ìåæäó íåñåëåêòèâíûìè è ñåëåêòèâíûìè
òðàíñïîðòåðàìè âåäåò ê ïîääåðæàíèþ, à â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ - ê
ãåíåðàöèè òðàíñáèñëîéíîé ëèïèäíîé àñèììåòðèè. Õîòÿ òêàíåâîå
ðàñïðåäåëåíèå è ýêñïðåññèÿ íåêîòîðûõ èç ýòèõ òðàíñïîðòåðîâ
îãðàíè÷åíà, â öåëîì ëèïèäíàÿ àñèììåòðèÿ ïîääåðæèâàåòñÿ
èçáèðàòåëüíûì ïîòîêîì àìèíîôîñôîëèïèäîâ âíóòðü è ïîòîêîì
õîëèí- è ñôèíãîëèïèäîâ - íàðóæó. Íåñåëåêòèâíûå ñêðàìáëàçû â
ìåìáðàíàõ óðàâíèâàþò ðàñïðåäåëåíèå âíîâü ñèíòåçèðîâàííûõ
ëèïèäîâ.
ÀÒÔ-çàâèñèìûå
òðàíñïîðòåðû
èçáèðàòåëüíî
ïîääåðæèâàþò àñèììåòðè÷íîå ðàñïðåäåëåíèå ëèïèäîâ â
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Ãðàäèåíòû êîíöåíòðàöèé, ñîçäàííûå
ýòèìè òðàíñïîðòåðàìè, ìîãóò íèâåëèðîâàòüñÿ íåñåëåêòèâíîé Ñà2+àêòèâèðóåìîé ñêðàìáëàçîé â îòâåò íà ñòèìóëÿöèþ êëåòêè.
Íåñìîòðÿ íà îïðåäåëåííûå óñïåõè â èçó÷åíèè ìåõàíèçìîâ
òðàíñïîðòà ÔË áåëêàìè-ïåðåíîñ÷èêàìè è ïîääåðæàíèÿ ñ èõ
ïîìîùüþ òðàíñáèñëîéíîé ëèïèäíîé àñèììåòðèè, ïîëíîé
èäåíòèôèêàöèè ýòèõ áåëêîâ åùå íåò (òàáë. 2.2.1).
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî íåáîëüøîé âêëàä â ïîääåðæàíèå
àñèììåòðèè âíîñèò è ñïîíòàííàÿ òðàíñìåìáðàííàÿ äèôôóçèÿ ÔË,
êîòîðàÿ ïðîòåêàåò ñ î÷åíü íèçêîé ñêîðîñòüþ èç-çà âûñîêîé ýíåðãèè
àêòèâàöèè ýòîãî ïðîöåññà.
Êàê ïîêàçûâàþò èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ äåñÿòèëåòèé,
àñèììåòðè÷íûì ìîæåò áûòü è îòäåëüíûé ìîíîñëîé ìåìáðàíû, ãäå
45
Òàáëèöà 2.2.1
Ñïåöèôè÷íîñòü òðàíñáèñëîéíûõ ëèïèäíûõ òðàíñïîðòåðîâ
Êëàññ
Áåëîê
òðàíñïîðòåðà
Ôëèïïàçû
Ôëîïïàçû
Ñïåöèôè÷íîñòü
Ññûëêà
Ð4-ÀÔÒÔàçà
Àìôèïàòè÷åñêèå â -âà
55, 56
Mg2+-ÀÒÔàçà ýðèòðîöèòîâ
ÔÑ
57
ÀÂÑ R
N-ðåòèíèëèäåí -ÔÝ
58
ÀÂÑ A1
Õîëåñòåðèí
59-63
ÀÂÑ B1
íåò ñïåöèôè÷íîñòè
64
ÀÂÑ B4
ÔÑ
64
ÀÂÑ C1
Êîðîòêî-öåïî÷å÷íûå
65,66
ÔË
Ñêðàìáëàçû
PL SCR1
Íåò ñïåöèôè÷íîñòè
67,68
ôëèïïàçà ÝÐ
Íåò ñïåöèôè÷íîñòè
69, 48.
ëèïèäû àññîöèèðóþòñÿ â äîìåíû ðàçëè÷íîãî ñîñòàâà è ñ ðàçëè÷íîé
ñïîñîáíîñòüþ ê äèôôóçèè. Òàêàÿ íåîäíîðîäíîñòü ëèïèäíîé
ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû èëè ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ âîçíèêàåò ïðè
îáðàçîâàíèè ëàòåðàëüíûõ äîìåíîâ. Ýòè äîìåíû õàðàêòåðèçóþòñÿ
ñïåöèôè÷åñêîé ñåëåêòèâíîñòüþ ê íåêîòîðûì êîìïîíåíòàì
ìåìáðàíû, íàïðèìåð, áåëêàì, êîòîðûå, ïî âñåé âèäèìîñòè, íå
ó÷àñòâóþò â ëàòåðàëüíûõ ïåðåìåùåíèÿõ èç-çà îãðàíè÷èâàþùèõ èõ
öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ, âíóòðè- è âíåìåìáðàííûõ âçàèìîäåéñòâèé.
2.3. Æèäêîñòíîñòü áèîìåìáðàí êàê ôàêòîð ðåãóëÿöèè
ìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ.
Ïî
ìíîãî÷èñëåííûì
äàííûì
ðåíòãåíîñòðóêòóðíûõ
èññëåäîâàíèé, ÔË ìåìáðàí ïðè ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå
èìåþò æèäêîêðèñòàëëè÷åñêóþ ñòðóêòóðó. Ïðè èçìåíåíèè
ïàðàìåòðîâ ñðåäû, â ïåðâóþ î÷åðåäü, òåìïåðàòóðû è äàâëåíèÿ, ÔË
â ìåìáðàíå ìîãóò ïåðåéòè â (1) òâåðäîå, êðèñòàëëè÷åñêîå
ñîñòîÿíèå (ñîñòîÿíèå ãåëÿ) èëè (2) â æèäêîå ñîñòîÿíèå, êîòîðîå
ëèøåíî îïðåäåëåííîé ñòðóêòóðû. Èíûìè ñëîâàìè, ëèïèäû
ìåìáðàí ìîãóò "çàìåðçíóòü" èëè "ðàñïëàâèòüñÿ". È òî, è äðóãîå
ñîñòîÿíèå âëèÿþò íà áèîëîãè÷åñêèå ôóíêöèè ìåìáðàíû.
Ñòåïåíü æèäêîñòíîñòè ìåìáðàííûõ ÔË, ò. å. èõ ôèçèêîõèìè÷åñêîå ñîñòîÿíèå ìåæäó òâåðäîé, óïîðÿäî÷åííîé ôàçîé è
æèäêîêðèñòàëëè÷åñêèì ñîñòîÿíèåì çàâèñèò îò òîãî, íàñêîëüêî
òåìïåðàòóðà
ýòîãî
ôàçîâîãî
ïåðåõîäà
îòëè÷àåòñÿ
îò
ôèçèîëîãè÷åñêîé. Òåìïåðàòóðà ôàçîâîãî ïåðåõîäà (Òô.ï.) (à çíà÷èò
è æèäêîñòíîñòü, èëè òåêó÷åñòü ìåìáðàíû) çàâèñÿò îò ðÿäà
ôàêòîðîâ:
46
- äëèíû àöèëüíûõ öåïåé ÔË è ñòåïåíè èõ íåíàñûùåííîñòè;
- ïðèðîäû è âåëè÷èíû çàðÿäà ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ÔË;
- õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû ñòåðèíîâ è ñîîòíîøåíèÿ ÔË/ñòåðèí â
ìåìáðàíå (â êëåòêàõ æèâîòíûõ ýòî õîëåñòåðèí, ó ðàñòåíèé ôèòîñòåðèíû);
- õàðàêòåðîì âçàèìîäåéñòâèé ìåæäó ÔË è áåëêàìè.
Êðîìå òîãî, íà æèäêîñòíîñòü (èëè, íàïðîòèâ, ìèêðîâÿçêîñòü)
ìåìáðàí âëèÿþò òàêèå ôàêòîðû, êàê òåìïåðàòóðà, äàâëåíèå, îáúåì
(æèäêîñòíîñòü ïðîïîðöèîíàëüíà ñâîáîäíîìó îáúåìó ëèïèäíûõ
îñòàòêîâ), ìåìáðàííûé ïîòåíöèàë, êèñëîòíîñòü è èîíû êàëüöèÿ.
Ìíîãèå îðãàíèçìû ðåãóëèðóþò æèäêîñòíîñòü ñâîèõ ìåìáðàí
ïóòåì àäàïòàöèè ëèïèäíîãî ñîñòàâà ê òåìïåðàòóðå, ÷òî óêàçûâàåò
íà âàæíîñòü ýòîãî ïàðàìåòðà äëÿ ìåìáðàííûõ ôóíêöèé.
Ôèçè÷åñêîå
ñîñòîÿíèå
ìåìáðàíû
ìîæåò
ðåãóëèðîâàòü
ìíîãî÷èñëåííûå ðåàêöèè, ïðîòåêàþùèå â îáúåìå ìåìáðàíû èëè/è
ñâÿçàííûå ñ ôóíêöèîíèðîâàíèåì âñòðîåííûõ â ìåìáðàíû áåëêîâ.
Èìååòñÿ ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ðàáîò è îáçîðîâ,
èëëþñòðèðóþùèõ çàâèñèìîñòü àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ
îò æèäêîñòíîñòè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ: ïîêàçàíî, íàïðèìåð,
ðåçêîå èíãèáèðîâàíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ ïðè ðàçëè÷íûõ
âîçäåéñòâèÿõ, ïðèâîäÿùèõ ê ñíèæåíèþ æèäêîñòíîñòè ìåìáðàí. Ê
íèì îòíîñÿòñÿ ìîäèôèêàöèÿ ñîñòàâà ëèïèäîâ, äåéñòâèå
ôîñôîëèïàç, èëè ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, èçìåíåíèå
ñîäåðæàíèÿ ÕÑ èëè äèåòè÷åñêèå ìàíèïóëÿöèè, ïðèâîäÿùèå ê
èçìåíåíèþ æèðíîêèñëîòíîãî ñîñòàâà ÔË.
Èçìåíåíèå æèäêîñòíîñòè áèîìåìáðàí â îïðåäåëåííûõ
ïðåäåëàõ ìîæåò ðåãóëèðîâàòüñÿ ñàìîé êëåòêîé, à èìåííî:
ñåíñîðàìè, ñèãíàëüíîé òðàíñäóêöèåé è ãåííîé ðåãóëÿöèåé.
Ïðèìåðîì òàêîé ðåãóëÿöèè ìîæåò ñëóæèòü ñèñòåìà äåñàòóðàç
ëèïèäîâ â ðàñòåíèÿõ è öèàíîáàêòåðèÿõ. Ñäâèã Òô.ï. îò 34° äî 22°
èëè
óâåëè÷åíèå
ñòåïåíè
íåíàñûùåííîñòè
ëèïèäîâ
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïðè 36° (ò.å. âîçäåéñòâèÿ, ñíèæàþùèå
æèäêîñòíîñòü ìåìáðàíû) ïðèâîäÿò óæå ÷åðåç íåñêîëüêî ìèíóò ê
ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè ãåíà àöèëëèïèääåñàòóðàçû, ñóáñòðàòîì
êîòîðîé ÿâëÿþòñÿ æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè äèãëèöåðèäîâ. Â
ðåçóëüòàòå â ìîëåêóëàõ ÔË ìåìáðàíû ïîÿâëÿþòñÿ íåíàñûùåííûå
ÆÊ, ÷òî ïðèâîäèò ê óìåíüøåíèþ Òô.ï. è óâåëè÷åíèþ ìåìáðàííîé
æèäêîñòíîñòè. Ïîâûøåíèå ýêñïðåññèè ýòîãî ãåíà îñóùåñòâëÿåòñÿ
÷åðåç ñëîæíóþ öåïü ðåàêöèé ïåðåäà÷è (ïðåîáðàçîâàíèÿ) ñèãíàëà.
Ïåðâîíà÷àëüíî ðåàãèðóþùèé íà èçìåíåíèå æèäêîñòíîñòè ñåíñîð ãèñòèäèíêèíàçà Hik 33 ôîñôîðèëèðóåò ãèñòèäèíêèíàçó Íik19.
Ïîñëåäíÿÿ âêëþ÷àåò íåçàâèñèìûé îòâåòíûé ðåãóëÿòîð,
ñâÿçûâàþùèé ÄÍÊ è ðåãóëèðóþùèé òðàíñêðèïöèþ ãåíà.
47
Äðóãîé ïóòü ðåãóëÿöèè ôèçè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàíû èçìåíåíèå
áèîñèíòåçà
õîëåñòåðèíà.
Îí
îïîñðåäóåòñÿ
òðàíñêðèïöèîííûì ôàêòîðîì, âûñâîáîæäàþùèìñÿ èç ÝÐ è
íàçûâàåìûì SREBP (stterol regulaatory elementt binding prottein).
Âûõîä åãî èç ÝÐ áëîêèðóåòñÿ õîëåñòåðèíîì, êîòîðûé òàêèì ïóòåì
ñíèæàåò òðàíñêðèïöèþ áåëêà è òîðìîçèò ñèíòåç ïî ìåõàíèçìó
îòðèöàòåëüíîé îáðàòíîé ñâÿçè (ò.í. feedback control -"îáðàòíûé
êîíòðîëü"). Ïðè äåôèöèòå ÕÑ â ÝÐ ñíèìàåòñÿ "áëîêèðîâêà" SREBP
è âêëþ÷àåòñÿ ïðîöåññ åãî âûõîäà ñ ïîñëåäóþùåé òðàíñêðèïöèåé
êëþ÷åâîãî ôåðìåíòà ñèíòåçà ÕÑ - îêñèìåòèëãëóòàðèë-ÑîÀðåäóêòàçû.  ðåãóëÿöèè ïðîöåññà ó÷àñòâóåò òàêæå ÷àñòè÷íûé
ïðîòåîëèç òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ â àïïàðàòå Ãîëüäæè.
Æèäêîñòíîñòü ìåìáðàíû è âîçìîæíîñòü äèôôóçèè â íåé
ëèïèäîâ íåîáõîäèìû äëÿ: (1) ñîõðàíåíèÿ èîííîé ïðîíèöàåìîñòè;
(2) äèôôóçèè ìîëåêóë ñóáñòðàòîâ è (3) ñîõðàíåíèÿ àêòèâíîé
êîíôîðìàöèè áåëêîâ. Ìíîãèå ïðîöåññû â áèîìåìáðàíàõ, òàêèå êàê
òðàíñïîðò âåùåñòâ, òðàíñôîðìàöèÿ ýíåðãèè, áèîñèíòåç, ñàìîñáîðêà
è ò. ä., ñîïðÿæåíû ñ äâèæåíèåì ìîëåêóë. Ýòî ìîæåò áûòü êàê
òðàíñïîðò ñîåäèíåíèé ÷åðåç ìåìáðàíó, òàê è ïåðåìåùåíèå
ìîëåêóë, êîìïîíåíòîâ ìåìáðàíû (áåëêîâ, õîëåñòåðèíà,
ôîñôîëèïèäîâ). Ïðè ýòîì äâèæåíèå "ôëèï-ôëîï" - ñ íàðóæíîé
ñòîðîíû â öèòîçîëüíóþ ÷àñòü è îáðàòíî - èìååò äëÿ êîìïîíåíòîâ
ìåìáðàíû ìåíüøåå çíà÷åíèå, ÷åì ëàòåðàëüíîå ïåðåìåùåíèå â
ïðåäåëàõ îäíîãî ìîíîñëîÿ ìåìáðàíû. Ýòî îáúÿñíÿþò âûñîêîé
ýíåðãèåé àêòèâàöèè, íåîáõîäèìîé äëÿ ïåðåíîñà, íàïðèìåð,
ïîëÿðíîé ãðóïïû ôîñôîëèïèäà ÷åðåç óãëåâîäîðîäíîå ÿäðî áèñëîÿ.
Òàê, ýíåðãèÿ àêòèâàöèè äëÿ òðàíñáèñëîéíîãî ïåðåìåùåíèÿ ÔÕ
("ôëèï-ôëîï") ñîñòàâëÿåò ïîðÿäêà 80 êÄæ/ìîëü, â òî âðåìÿ êàê äëÿ
ëàòåðàëüíîé äèôôóçèè - 21 êÄæ/ìîëü [70].
2.4. Ìåìáðàííûå áåëêè.
Íà ñîñòîÿíèå ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ âëèÿåò è áåëêîâûé ñîñòàâ
ìåìáðàíû, ïðè÷åì ó áîëüøèíñòâà áèîìåìáðàí ýóêàðèîòè÷åñêèõ
êëåòîê îí íå ìåíåå ðàçíîîáðàçåí, ÷åì ëèïèäíûé. Ïðî÷íîñòü
ñâÿçûâàíèÿ áåëêîâ ñ ëèïèäíûì áèñëîåì â ìåìáðàíàõ âàðüèðóåò â
øèðîêèõ ïðåäåëàõ: îò ïðîñòîé ñîðáöèè äî ñòðóêòóð òèïà êàíàëîâ
[71]. Â çàâèñèìîñòè îò ëîêàëèçàöèè è õàðàêòåðà âçàèìîäåéñòâèÿ ñ
ìåìáðàíîé ðàçëè÷àþò â îñíîâíîì äâà òèïà ìåìáðàííûõ áåëêîâ: (1)
ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, êîòîðûå îòíîñèòåëüíî ñâîáîäíî
àññîöèèðîâàíû â ìåìáðàíå è (2) "âíóòðåííèå" èëè èíòåãðàëüíûå
áåëêè, êîòîðûå æåñòêî ñâÿçàíû ñ ìåìáðàíîé.
Êîíôîðìàöèÿ
áîëüøèíñòâà
èíòåãðàëüíûõ
è
÷àñòè
ïåðèôåðè÷åñêèõ áåëêîâ â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè çàâèñèò îò èõ
48
âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ëèïèäíûì áèñëîåì. Êðîìå òîãî, â îïðåäåëåííûõ
óñëîâèÿõ ñ áèîìåìáðàíàìè ìîãóò âçàèìîäåéñòâîâàòü è íåêîòîðûå
âîäîðàñòâîðèìûå, íàïðèìåð, öèòîïëàçìàòè÷åñêèå è ìåæêëåòî÷íûå
áåëêè. Ïîýòîìó ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, â ñâîþ î÷åðåäü,
ïîäðàçäåëÿþò íà: ñîáñòâåííî ïåðèôåðè÷åñêèå è ïîâåðõíîñòíûå.
Ñîáñòâåííî ïåðèôåðè÷åñêèå áåëêè, êàê ïðàâèëî, ñâÿçàíû ñ
ìåìáðàíîé ýëåêòðîñòàòè÷åñêèìè ñèëàìè è ÷àñòè÷íî ïîãðóæåíû â
åå ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü. Ïîâåðõíîñòíûå áåëêè íå ïîãðóæåíû â
ìåìáðàíó è ñâÿçàíû ñ íåé ýëåêòðîñòàòè÷åñêèìè ñèëàìè [71].
Îñîáûé
èíòåðåñ
äëÿ
èññëåäîâàòåëåé
ïðåäñòàâëÿþò
èíòåãðàëüíûå ìåìáðàííûå áåëêè, òàê êàê îíè èãðàþò ÷ðåçâû÷àéíî
âàæíóþ ðîëü â êëåòî÷íîé ôèçèîëîãèè è áèîýíåðãåòèêå. Ê íèì
îòíîñÿòñÿ ðåöåïòîðû, èîííûå íàñîñû, Na+ è K+ êàíàëû, öèêëàçû è
äð.
Ñðåäè èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ðàçëè÷àþò "ýêòîïðîòåèíû",
êîòîðûå ñãðóïïèðîâàíû â íàïðàâëåíèè ê âíåøíåìó ìîíîñëîþ
öèòîïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíû,
è
"ýíäîïðîòåèíû",
ëîêàëèçîâàííûå áëèæå ê åå âíóòðåííåé ñòîðîíå. Êàê ïðàâèëî,
èíòåãðàëüíûå ìåìáðàííûå áåëêè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé
ãëîáóëÿðíûå
àìôèôèëüíûå
ìàêðîìîëåêóëû,
êîòîðûå
âçàèìîäåéñòâóþò êàê ñ ãèäðîôîáíûìè, òàê è ñ ãèäðîôèëüíûìè
îáëàñòÿìè ìåìáðàíû. Äëÿ íèõ õàðàêòåðíî îáðàçîâàíèå ïðî÷íûõ
ñâÿçåé ñ ìåìáðàííûìè ëèïèäàìè èç-çà ïðèñóòñòâèÿ â
ïîëèïåïòèäíîé öåïè ôðàãìåíòîâ, ñîñòîÿùèõ èç àìèíîêèñëîòíûõ
îñòàòêîâ ñ ãèäðîôîáíûìè áîêîâûìè ãðóïïàìè. Âàæíîé
îñîáåííîñòüþ ýòèõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ òàêæå âûñîêîå ñîäåðæàíèå αñïèðàëüíûõ ó÷àñòêîâ è ó÷àñòêîâ ñ êîíôîðìàöèåé ñòàòèñòè÷åñêîãî
êëóáêà.
Ïîýòîìó
ìåìáðàííûå
áåëêè
ïðåäñòàâëåíû
ïðåèìóùåñòâåííî ãëîáóëÿðíûìè, à íå ïëîñêèìè ïðîòÿæåííûìè
ñòðóêòóðàìè. Ñòåïåíü ïîãðóæåíèÿ èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ â
ëèïèäíûé ìàòðèêñ îïðåäåëÿåòñÿ, êàê ïðàâèëî, èõ àìèíîêèñëîòíîé
ïîñëåäîâàòåëüíîñòüþ è òðåõìåðíîé ïðîñòðàíñòâåííîé ñòðóêòóðîé.
Òàê, íåêîòîðûå èíòåãðàëüíûå áåëêè (íàïðèìåð, Na+, K+-ÀÒÔàçà,
Ñà2+-ÀÒÔàçà, íàòðèåâûé êàíàë è äð.) ïðîíèçûâàþò ìåìáðàíó,
îáðàçóÿ ñïåöèôè÷åñêèå äîìåíû êàê íà âíóòðåííåé, òàê è íà
íàðóæíîé åå ñòîðîíàõ [71].
Âñòðàèâàíèå áåëêà â ìåìáðàíó âëèÿåò íà ñòðóêòóðó ëèïèäíîãî
áèñëîÿ.  îäíèõ ñëó÷àÿõ ïîâûøàåòñÿ óïîðÿäî÷åííîñòü ÔË â
áèñëîå, à â äðóãèõ - èíèöèèðóåòñÿ èõ òðàíñáèñëîéíîå
ïåðåìåùåíèå. Íàïðèìåð, ìåìáðàííûå áåëêè òðîìáîöèòîâ
êàòàëèçèðóþò Ñà2+-çàâèñèìîå òðàíñáèñëîéíîå äâèæåíèå ÔË, âëèÿÿ
íà èõ àñèììåòðèþ, ïðè÷åì ýòîò ïðîöåññ ïîâûøàåòñÿ ïðè
àêòèâàöèè êëåòîê. Ïîäîáíûé ïðîöåññ íàáëþäàëè è in vitro:
49
äîáàâëåíèå èîíîìèöèíà è Ñà2+ ê ôîñôîëèïèäíûì âåçèêóëàì
ñïîñîáñòâîâàëî òðàíñáèñëîéíîìó äâèæåíèþ ôëóîðåñöåíòíî
ìå÷åíûõ ÔË [72]. Ìåòîäîì ÝÏÐ ïîêàçàíî, ÷òî áåëîê êàëüäåñìîí
(ñâÿçûâàþùèéñÿ ñ êàëüìîäóëèíîì) ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñ ÔË
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ïå÷åíè êðûñû ïîâûøàåò
ïîäâèæíîñòü àöèëüíûõ öåïåé, ïðè÷åì àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî
ìèøåíüþ êàëüäåñìîíà ÿâëÿåòñÿ â îñíîâíîì ÔÑ, íà ÷òî óêàçûâàåò
èíãèáèðîâàíèå ðåàêöèè åãî ïðåâðàùåíèÿ â ÔÝ [73].
Âçàèìîäåéñòâèå ñ ìåìáðàííûìè ëèïèäàìè, â ñâîþ î÷åðåäü,
îêàçûâàåò âëèÿíèå íà êîíôîðìàöèþ áåëêà. Íàïðèìåð, ïðè
âçàèìîäåéñòâèè áåëêà ñ ïîâåðõíîñòüþ ìåìáðàíû âîçìîæíî
èçìåíåíèå åãî ïðîñòðàíñòâåííîé ñòðóêòóðû, ïðèâîäÿùåå òàêæå ê
èçìåíåíèþ àêòèâíîñòè áåëêà.
Ñ ïîìîùüþ ñîâðåìåííûõ âûñîêî÷óâñòâèòåëüíûõ ìåòîäîâ (ÝÏÐ,
êîìáèíàöèîííîãî ðàññåèâàíèÿ, ôëóîðåñöåíòíûõ çîíäîâ è äð.)
óäàëîñü ïîêàçàòü íàëè÷èå ñëîÿ "èììîáèëèçîâàííûõ" ÔË,
îêðóæàþùèõ áåëîê â ìåìáðàíå, íàçûâàåìûõ àííóëÿðíûìè
ôîñôîëèïèäàìè. Âî ìíîãèõ ìåìáðàíàõ (íàïðèìåð, ýðèòðîöèòîâ,
ÝÐ, ìèåëèíà è äð.) òàêèå èììîáèëèçîâàííûå ëèïèäû ñîñòàâëÿþò
çíà÷èòåëüíóþ ÷àñòü îò èõ îáùåãî êîëè÷åñòâà â áèñëîå. Íî
èììîáèëèçàöèÿ ÷àñòè ëèïèäîâ â öåëîì íå ñêàçûâàåòñÿ íà
îñòàëüíîì áèñëîå, ïîñêîëüêó ñâÿçü ìåæäó àííóëÿðíûìè è
îñòàëüíûìè ëèïèäàìè îñóùåñòâëÿåòñÿ, ãëàâíûì îáðàçîì, çà ñ÷åò
íåñïåöèôè÷åñêèõ ãèäðîôîáíûõ âçàèìîäåéñòâèé. Èíòåðåñíî
îòìåòèòü, ÷òî ïðè óìåíüøåíèè "òåêó÷åñòè" ëèïèäíîãî áèñëîÿ
àííóëÿðíûå ëèïèäû ñîõðàíÿþò ñâîþ ïðåæíþþ ïîäâèæíîñòü [74].
Îñíîâûâàÿñü íà äàííûõ ÝÏÐ è ðåçóëüòàòàõ ìîäåëèðîâàíèÿ, Lee
ñ ñîàâò. [75] ïîëàãàþò, ÷òî âëèÿíèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ íà ñâîéñòâà
îêðóæàþùåãî ëèïèäíîãî áèñëîÿ â îñíîâíîì îãðàíè÷åíî
ïðèëåãàþùèì ñëîåì àííóëëÿðíûõ ÔË è íå ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà
áîëåå óäàëåííûå ëèïèäíûå ìîëåêóëû. Ïîýòîìó äëÿ àííóëÿðíûõ
ÔË õàðàêòåðíû íåêîòîðûå ñïåöèôè÷åñêèå ñâîéñòâà.
Îòëè÷èÿ àííóëÿðíûõ ÔË ñâÿçàíû ñ òåì, ÷òî ïîâåðõíîñòü
òðàíñìåìáðàííîãî äîìåíà â èíòåãðàëüíîì áåëêå íå ÿâëÿåòñÿ
"ãëàäêîé", à èìååò ìíîæåñòâî âûåìîê è âûñòóïîâ. Äëÿ îáåñïå÷åíèÿ
äîñòàòî÷íî ïëîòíîé óïàêîâêè áåëêà â ëèïèäíîì áèñëîå,
íåîáõîäèìîé äëÿ îáåñïå÷åíèÿ áàðüåðíûõ ñâîéñòâà ìåìáðàíû,
æèðíîêèñëîòíûå îñòàòêè ÔË, îêðóæàþùèõ ýòîò áåëîê, äîëæíû
ïðîñòðàíñòâåííî "ïðèñïîñàáëèâàòüñÿ" ê ýòèì íåðîâíîñòÿì. Ñ
äðóãîé ñòîðîíû, ñóùåñòâóåò ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî àííóëÿðíàÿ
îáëàñòü (èëè àííóëþñ) ðåãóëèðóåò àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ áåëêîâ,
â ÷àñòíîñòè, ôåðìåíòîâ, ãëàâíûì îáðàçîì, çà ñ÷åò îðèåíòàöèè è
ãåîìåòðèè ñîñòàâëÿþùèõ åãî ëèïèäíûõ ìîëåêóë. Ñëåäîâàòåëüíî,
50
ïðè ðåàëèçàöèè òðàíñìåìáðàííûõ ïðîöåññîâ ñ ó÷àñòèåì
èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ñóùåñòâåííóþ ðîëü èãðàåò ëîêàëüíàÿ
ëèïèäíàÿ ðåãóëÿöèÿ, ò.å. èçìåíåíèå ñîñòîÿíèÿ ïîãðàíè÷íûõ
ëèïèäîâ [76]. Ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòû, âûïîëíåííûå íà
Na+,K+-ÀÒÔàçå, Ñà2+-ÀÒÔàçå, Í+-ÀÒÔàçå, öèòîõðîìîêñèäàçå è
äðóãèõ èíòåãðàëüíûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòàõ êàê â ñîñòàâå
íàòèâíûõ ìåìáðàí, òàê è â ðåêîíñòðóèðîâàííûõ ñèñòåìàõ
ïîäòâåðäèëè íàëè÷èå "èììîáèëèçîâàííûõ ôîñôîëèïèäíûõ
ìîëåêóë" âîêðóã ýòèõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, êîíòðîëèðóþùèõ èõ
êàòàëèòè÷åñêóþ è òðàíñïîðòíóþ àêòèâíîñòè.
Ìîëåêóëÿðíî-äèíàìè÷åñêîå ìîäåëèðîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî
ýíåðãèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ îòäåëüíîé ëèïèäíîé ìîëåêóëû ñ
ìåìáðàííûì áåëêîì íå ïîñòîÿííà è ìåíÿåòñÿ âî âðåìåíè. Îíà
ïðåäñòàâëÿåò ñóììó ìíîãèõ ñëàáûõ âàí-äåð-âààëüñîâñêèõ è
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ âçàèìîäåéñòâèé. Ïðè ýòîì êàæäàÿ ëèïèäíàÿ
ìîëåêóëà íå "çàìîðîæåíà" â åäèíñòâåííîé äîëãî æèâóùåé
êîíôîðìàöèè íà ïîâåðõíîñòè áåëêà, à îñòàåòñÿ â îêðóæàþùåé åãî
îáîëî÷êå ëèøü â òå÷åíèå î÷åíü êîðîòêîãî ïåðèîäà âðåìåíè,
îáû÷íî ñîñòàâëÿþùåãî ïðè 30°Ñ (1-2) õ 10-7ñ. Òàêîé áûñòðûé îáìåí
ÔË ìåæäó àííóëÿðíûì êîëüöîì è ìàññîé áèñëîÿ ìîæåò
ñóùåñòâåííî óñðåäíÿòü âëèÿíèå áåëêà íà ñòðóêòóðó ÔË.
Ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î
òîì, ÷òî ñëàáûå âçàèìîñâÿçè, êîòîðûå âîçíèêàþò ïðè
âçàèìîäåéñòâèè èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ ñ ëèïèäàìè, ìîãóò âûçûâàòü
êàê "ñòðóêòóðèðîâàíèå", òàê è íàðóøåíèå "óïàêîâêè" áëèçëåæàùèõ
ê áåëêó ëèïèäîâ [71]. Òàê, âîêðóã ìîëåêóëû öèòîõðîìîêñèäàçû
îáíàðóæåíî ñóùåñòâîâàíèå íåñêîëüêèõ ñëîåâ ôîñôîëèïèäíûõ
ìîëåêóë ñ äåêðåìåíòîì "çàòóõàíèÿ" íàðóøåííîé óïàêîâêè èõ
æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé â ðåçóëüòàòå âàí-äåð-âààëüñîâñêèõ
âçàèìîäåéñòâèé. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî êîëüöî àííóëÿðíîãî ëèïèäà
"ñæèìàåòñÿ" ïðè ïîâûøåíèè òåìïåðàòóðû, à åãî òîëùèíà
ìàêñèìàëüíà ïðè Òô.ï.
Óñòàíîâëåíî, ÷òî íåêîòîðûå ôîñôîëèïèäíûå ìîëåêóëû
íàñòîëüêî ïëîòíî ñâÿçàíû ñ áåëêîì, ÷òî èãðàþò ðîëü ñêîðåå
êîôàêòîðîâ, ÷åì ïðîñòî "ðàñòâîðèòåëÿ" èëè îêðóæåíèÿ áåëêîâîé
ãëîáóëû. Òàê, äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà
îáíàðóæèëè ñâÿçûâàíèå íåêîòîðûõ ó÷àñòêîâ òðàíñìåìáðàííîãî
äîìåíà ôåðìåíòà ñ ôîñôîëèïèäàìè è õîëåñòåðèíîì â ãëóáèíå
ùåëåé ìåæäó òðàíñìåìáðàííûìè α-ñïèðàëÿìè [77]. Äëÿ
îáîçíà÷åíèÿ òàêèõ ëèïèäîâ ââåëè ñïåöèàëüíûé òåðìèí
"íåàííóëÿðíûå ëèïèäû" (íå ïóòàòü ñ îñíîâíîé ìàññîé îáû÷íûõ
ëèïèäîâ áèñëîÿ).
Ýòè ìîëåêóëû ëèïèäîâ, ñîõðàíÿþùèåñÿ â îáðàçöå ïîñëå
51
îáðàáîòêè
äåòåðãåíòàìè,
ìîæíî
îáíàðóæèòü
ïðè
âûñîêîðàçðåøàþùåì ñòðóêòóðíîì èññëåäîâàíèè ìåìáðàííûõ
áåëêîâ. Èõ ïëîòíîå ïðèñîåäèíåíèå ê áåëêàì îáåñïå÷èâàåòñÿ,
ãëàâíûì îáðàçîì, (1) èììîáèëèçàöèåé ïîëÿðíûõ "ãîëîâíûõ" ãðóïï
íà
áåëêîâîé
ïîâåðõíîñòè
è/èëè
(2)
ãèäðîôîáíûìè
âçàèìîäåéñòâèÿìè
æèðíîêèñëîòíûõ
öåïåé
ëèïèäîâ
ñ
îïðåäåëåííûìè ãèäðîôîáíûìè ó÷àñòêàìè íà ïîâåðõíîñòè áåëêà.
 îòëè÷èå îò àííóëÿðíûõ ÔË, îáìåí ëèïèäîâ ìåæäó
íåàííóëÿðíûìè ìîëåêóëàìè è ìàññîé ëèïèäíîãî áèñëîÿ
ïðîèñõîäèò, ïî-âèäèìîìó, ãîðàçäî ìåäëåííåé, à ñâÿçûâàíèå áåëêîâ
â ýòèõ ìåñòàõ áîëåå ñïåöèôè÷íî.
Êàê óæå îòìå÷àëîñü, ëèïèä-áåëêîâûå âçàèìîäåéñòâèÿ â öåëîì
ÿâëÿþòñÿ ñóùåñòâåííûìè äëÿ ïðîÿâëåíèÿ è ðåãóëÿöèè
àêòèâíîñòåé ìåìáðàííûõ áåëêîâ, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî â êàæäîì
êîíêðåòíîì ñëó÷àå ïîòðåáíîñòü ýòèõ áåëêîâ â ìåìáðàííûõ ÔË
ìîæåò âàðüèðîâàòü êàê â êîëè÷åñòâåííîì, òàê è â êà÷åñòâåííîì
îòíîøåíèÿõ [78].
Ìíîãî÷èñëåííûå èññëåäîâàíèÿ, ñâÿçàííûå ñ âûäåëåíèåì
ëèïèäçàâèñèìûõ áåëêîâ, èõ äåëèïèäèðîâàíèåì, ïîñëåäóþùåé
ðåêîíñòðóêöèåé íà èñêóññòâåííûõ ôîñôîëèïèäíûõ ìåìáðàíàõ ñ
ïîëíûì èëè ÷àñòè÷íûì âîññòàíîâëåíèåì àêòèâíîñòåé è ò.ä.,
ïîçâîëèëè ñäåëàòü ðÿä âàæíûõ çàêëþ÷åíèé î ðîëè ìåìáðàííûõ
ëèïèäîâ â ôóíêöèîíèðîâàíèè áåëêîâ:
- ëèïèäû ÿâëÿþòñÿ ýôôåêòèâíûìè àëëîñòåðè÷åñêèìè
àêòèâàòîðàìè íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ;
- ÷àñòü ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, íàõîäÿùèõñÿ â íåïîñðåäñòâåííîé
áëèçîñòè ê ìîëåêóëàì áåëêà, îáðàçóþò âîêðóã èõ ãèäðîôîáíîãî
äîìåíà "ëèïèäíîå êîëüöî" èëè "àííóëþñ";
- ìåìáðàííûå ëèïèäû îáðàçóþò âîêðóã ìåìáðàíîñâÿçàííûõ
áåëêîâ îáøèðíóþ ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü, ïîäîáíóþ ìèöåëëå,
êîòîðàÿ ñîçäàåò íàèáîëåå áëàãîïðèÿòíûå óñëîâèÿ, íàïðèìåð, äëÿ
ôåðìåíò-ñóáñòðàòíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ;
- ìåìáðàííûå ëèïèäû îáðàçóþò áèñëîéíûå àññîöèàòû,
èìåþùèå íåîáõîäèìóþ êðèâèçíó è îðèåíòàöèþ; íåêîòîðûå
ìåìáðàííûå áåëêè àñèììåòðè÷íî ðàñïðåäåëÿþòñÿ â íèõ è
ïðèíèìàþò òàêóþ îðèåíòàöèþ, êîòîðàÿ íåîáõîäèìà äëÿ
ïðîÿâëåíèÿ èõ ñïåöèôè÷åñêîé àêòèâíîñòè.
Áëàãîäàðÿ íàçâàííûì ìîäóëÿòîðíûì ýôôåêòàì ëèïèäîâ íà
ìåìáðàííûå
áåëêè,
îáåñïå÷èâàåòñÿ
ñòàáèëèçàöèÿ
èõ
ôóíêöèîíàëüíî-àêòèâíîé êîíôîðìàöèè, íåîáõîäèìûé óðîâåíü
ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå îëèãîìåðíûõ
ñóáúåäèíè÷íûõ êîìïëåêñîâ), ýôôåêòèâíîå âçàèìîäåéñòâèå ñ
íåïîëÿðíûìè ñîåäèíåíèÿìè è äð. Èìååòñÿ ìíîæåñòâî ïðèìåðîâ
52
âëèÿíèÿ ÔË íà àêòèâíîñòü êîíêðåòíûõ áåëêîâ. Íàïðèìåð,
ñâÿçûâàíèå ñ ÔË ñòàáèëèçèðóåò êîíôîðìàöèþ ìèòîõîíäðèàëüíîé
ÀÒÔàçû [79], âëèÿåò íà àêòèâíîñòü ëåãî÷íîãî ñóðôàêòàíòíîãî
áåëêà è åãî äîìåíîâ [80], ìåíÿåò âòîðè÷íóþ ñòðóêòóðó ïåïòèäà
ïåíåòðèòèíà, äåéñòâóþùåãî êàê ïåðåíîñ÷èê ãèäðîôèëüíûõ
ìîëåêóë [81] è ò. ä.
Îäíèì èç ïðîÿâëåíèé ðåãóëÿòîðíîãî âîçäåéñòâèÿ ìåìáðàííûõ
ëèïèäîâ íà àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ
"âÿçêîòðîïíûé ýôôåêò": çàâèñèìîñòü ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè
ýòèõ áåëêîâ îò ñòåïåíè "ðàçæèææåíîñòè" àöèëüíûõ öåïåé ÔË.
Òàêàÿ "âÿçêîòðîïíàÿ" ðåãóëÿöèÿ äîâîëüíî ÷åòêî ïîêàçàíà â ñëó÷àå
ñ òðàíñïîðòíûìè ÀÒÔàçàìè, äëÿ êîòîðûõ êîíôîðìàöèîííàÿ
ïîäâèæíîñòü ìîëåêóë ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ìîìåíòîì, íåîáõîäèìûì
äëÿ ôóíêöèîíèðîâàíèÿ [82]. Æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí âëèÿåò íà
ìíîãèå ìåìáðàííûå ïðîöåññû, â òîì ÷èñëå è ýíäîöèòîç. Ýòî áûëî
ïîêàçàíî, â ÷àñòíîñòè, íà êëåòêàõ äðîææåé, â êîòîðûõ èçìåíåíèÿ
ýíäîöèòîçà íàáëþäàëè ïðè ìîäèôèêàöèè ñòðóêòóðû, âêëþ÷àÿ
èçìåíåíèå êîíöåíòðàöèè ñòåðèíà â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå.
Ïîëàãàþò, ÷òî â îñíîâå ëîêàëüíîé "âÿçêîòðîïíîé" ðåãóëÿöèè
àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ áåëêîâ ëåæèò ôàçîâîå ñîñòîÿíèå
"àííóëÿðíûõ" ëèïèäîâ. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî òåðìîäèíàìè÷åñêîå
ðàâíîâåñèå â ñèñòåìå "àííóëÿðíûå ëèïèäû/îáùèé áèñëîé"
êîíòðîëèðóåò ðàáîòó îëèãîìåðíûõ ìåìáðàííûõ áåëêîâ, îïðåäåëÿÿ
èõ äèñïåðãèðîâàííîå ñîñòîÿíèå â ìåìáðàíå [83].
Íåêîòîðûå áåëêè äëÿ îáåñïå÷åíèÿ íóæíîãî èì ôîëäèíãà,
ñòåïåíè ïîãðóæåíèÿ â ìåìáðàíó èëè ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè
òðåáóþò âçàèìîäåéñòâèÿ ñî ñïåöèôè÷íûìè ÔË [84]. Òàê, äëÿ
ôîëäèíãà ïåðìåàçû ëàêòîçû âî âíóòðåííåé ìåìáðàíå Å. coli
ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ âçàèìîäåéñòâèå ñ ÔÝ. Â îòñóòñòâèè ýòîãî
ÔË â ìåìáðàíó ïîãðóæàåòñÿ íóæíûì îáðàçîì òîëüêî Ñòåðìèíàëüíàÿ ÷àñòü áåëêà, à N-òåðìèíàëüíàÿ - íå ïîãðóæàåòñÿ, ÷òî
çíà÷èòåëüíî ñíèæàåò òðàíñïîðò ëàêòîçû. Îòñþäà áûëî âûñêàçàíî
ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî ÔÝ âûïîëíÿåò ôóíêöèþ "ëèïîøàïåðîíà", ò.å.
ëèïèäíîé ìàòðèöû, îáåñïå÷èâàþùåé íóæíóþ êîíôîðìàöèþ
áåëêà. Ìîëåêóëÿðíàÿ îñíîâà ñïåöèôè÷åñêîãî äåéñòâèÿ
èíäèâèäóàëüíûõ ÔË íà êîíôîðìàöèþ ìåìáðàííûõ áåëêîâ åùå
ïîëíîñòüþ íå ÿñíà.
Ïîêàçàíà ñïåöèôè÷åñêàÿ ïîòðåáíîñòü â ÔÑ àêòèâèðóåìîé Ñà2+
ïðîòåèíêèíàçû [85], âîë÷àíî÷íîãî àíòèêîàãóëÿíòà IgG [86],
àêòèâàòîðà-èíãèáèòîðà ïëàçìèíîãåíà [87] è ôàêòîðîâ ñâåðòûâàíèÿ
êðîâè - VIII, X [88].  ðÿäå ñëó÷àåâ ïîäîáíûé ýôôåêò íàáëþäàåòñÿ
â îòíîøåíèè ÔÝ è/èëè ÔÈ. Òàê, èç âñåõ ÔË ñîè ÔÈ âûçûâàë
ìàêñèìàëüíîå
ïîâûøåíèå
àêòèâíîñòè
β-ñóáúåäèíèöû
53
èíñóëèíîâîãî ðåöåïòîðà ïëàöåíòû ïðè àóòîôîñôîðèëèðîâàíèè
[89], à àíèîííûå ÔË èëè ñìåñü ÊË ñ ÔÝ ñïîñîáíû àêòèâèðîâàòü
äåëèïèäèðîâàííóþ ìàëàòäåãèäðîãåíàçó ìèêîáàêòåðèé [90].
2.5. Ëàòåðàëüíàÿ ãåòåðîãåííîñòü áèîìåìáðàí.
Äîëãîå âðåìÿ ñ÷èòàëîñü, ÷òî ìåìáðàííûå ëèïèäû ÿâëÿþòñÿ
äâóìåðíîé ðàñòâîðÿþùåé ôàçîé äëÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Îäíàêî â
ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ïîëó÷åíû äàííûå ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèé ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ, êîòîðûå ïðîòèâîðå÷àò ýòîìó
óòâåðæäåíèþ [91]. Íàïðèìåð, ïåðâîíà÷àëüíî ïðåäïîëàãàëîñü, ÷òî
ÕÑ â ìåìáðàíå, ñîñòîÿùåé èç íåñêîëüêèõ âèäîâ ÔË, äåéñòâóåò êàê
ãîìîãåíèçèðóþùèé àãåíò ìåìáðàííîé ìàòðèöû. Ó÷èòûâàÿ, ÷òî
êàæäûé èç ýòèõ ÔË èìååò ñâîþ, îòëè÷íóþ îò äðóãèõ Òô.ï., ñ÷èòàëè,
÷òî èìåííî õîëåñòåðèí áëàãîïðèÿòñòâóåò ñìåøèâàíèþ
ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ ïðè ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå, ñíèæàÿ
äî ìèíèìóìà ðàçëè÷èÿ ìåæäó æèäêèì è ãåëåâûì ñîñòîÿíèÿìè
ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ.
Íî
ýêñïåðèìåíòàëüíûå
äàííûå
ñâèäåòåëüñòâóþò î íåðàâíîìåðíîì ðàñïðåäåëåíèè ÕÑ âíóòðè
ìåìáðàí, ÷òî ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ äîìåíîâ, îáîãàùåííûõ è
îáåäíåííûõ õîëåñòåðèíîì [92].
 íàñòîÿùåå âðåìÿ áîëüøîå âíèìàíèå óäåëÿåòñÿ ìíîãèìè
èññëåäîâàòåëÿìè ëàòåðàëüíîé (ò.å. îòíîñÿùåéñÿ ê ïëîñêîñòè
ìåìáðàíû) ãåòåðîãåííîñòè áåëêîâ è ëèïèäîâ. Ãåòåðîãåííîñòü
ëèïèäîâ â ïëîñêîñòè ìåìáðàíû ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì îáðàçîâàíèÿ
ðàçëè÷íûõ àññîöèàöèé ëèïèäíûõ ìîëåêóë, ãðóïïèðóþùèõñÿ
ñîãëàñíî èõ ôèçèêî-õèìè÷åñêîìó ñîîòâåòñòâèþ. Ïðè ýòîì â
îòäåëüíûõ ñëîÿõ ìåìáðàíû (ãëàâíûì îáðàçîì, â íàðóæíîì)
âîçíèêàþò ëàòåðàëüíûå ëèïèäíûå äîìåíû, íàçûâàåìûå "ðàôòàìè"
(îò àíãëèéñêîãî ñëîâà "raft" - ïëîò). Ýòî ó÷àñòêè ïëîòíî
óïàêîâàííûõ ìîëåêóë ñ îòíîñèòåëüíî âûñîêîé ìîëåêóëÿðíîóïîðÿäî÷åííîé ôàçîé, "ïëàâàþùèå" â æèäêî-íåóïîðÿäî÷åííîé
ôàçå îñíîâíîãî ëèïèäíîãî ìàòðèêñà.
Îðãàíèçàöèþ ëèïèäîâ â ìåìáðàíå ìîæíî îáúÿñíèòü,
îñíîâûâàÿñü íà ñâîéñòâàõ ìîëåêóëÿðíîé ñòðóêòóðû âõîäÿùèõ â åå
ñîñòàâ èíäèâèäóàëüíûõ ëèïèäîâ, â ÷àñòíîñòè, èõ ñïîñîáíîñòè
îáðàçîâûâàòü áîëåå ïëîòíóþ, êîíäåíñèðîâàííóþ, èëè, íàîáîðîò,
æèäêóþ, îòíîñèòåëüíî ðàçðûõëåííóþ ñòðóêòóðó [91 - 95].
Èçâåñòíî, ÷òî ñôèíãîëèïèäû èìåþò ãîðàçäî áîëåå âûñîêóþ
òåìïåðàòóðó ïëàâëåíèÿ (Òï), ÷åì ãëèöåðîôîñôîëèïèäû. Íàïðèìåð,
Òï äëÿ ãàëàêòîçèëöåðàìèäà èç ìîçãà êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà
ñîñòàâëÿåò 83°Ñ [96]. Áëàãîäàðÿ ïëîòíîé óïàêîâêå è âûñîêîé
óïîðÿäî÷åííîñòè â áèñëîå, ñôèíãîëèïèäû èìåþò òàêæå è âûñîêóþ
Òô.ï. Â ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, Òï äëÿ ïðèðîäíûõ ÔÕ < 0°Ñ.
54
Ñòðóêòóðà ïîëèíåíàñûùåííîé àöèëüíîé öåïè â òàêèõ
ãëèöåðîôîñôîëèïèäàõ, èìåþùàÿ ïåðåãèáû â ìåñòàõ ðàñïîëîæåíèÿ
äâîéíîé ñâÿçè, ïðåïÿòñòâóåò ïëîòíîé óïàêîâêå ìîëåêóë, è ïðè
ôèçèîëîãè÷åñêîé òåìïåðàòóðå îíè íàõîäÿòñÿ â áåñïîðÿäî÷íîì
ñîñòîÿíèè
"ñâîáîäíîé
óïàêîâêè",
íàçûâàåìîé
æèäêîêðèñòàëëè÷åñêîé ôàçîé (Lc). Ïåðåõîä ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ
â êâàçè-òâåðäóþ âûñîêîóïîðÿäî÷åííóþ ãåëåâóþ ôàçó (Lβ)
âîçìîæåí òîëüêî ïðè òåìïåðàòóðå íèæå Òï, êîòîðàÿ, â ñâîþ
î÷åðåäü, ìíîãî íèæå ôèçèîëîãè÷åñêîé. Ïîýòîìó ïðè
ôèçèîëîãè÷åñêèõ
òåìïåðàòóðàõ
ãëèöåðîôîñôîëèïèäû
è
ôîñôîëèïèäíûå áèñëîè õàðàêòåðèçóþòñÿ ìåíåå ïëîòíîé
óïàêîâêîé è îòíîñèòåëüíî íèçêîé óïîðÿäî÷åííîñòüþ ïî
ñðàâíåíèþ ñî ñôèíãîëèïèäíûìè áèñëîÿìè. Èññëåäîâàòåëè
ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî ýòè ðàçëè÷èÿ ìåæäó ñôèíãîëèïèäàìè è
ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, çàêëþ÷àþùèåñÿ â îáðàçîâàíèè ïðè
ôèçèîëîãè÷åñêèõ òåìïåðàòóðàõ áèñëîåâ ñ óïàêîâêîé ÆÊ öåïåé
ðàçíîé ïëîòíîñòè, ïðèâîäÿò ê ëàòåðàëüíîìó ðàçäåëåíèþ ôàç â
ìåìáðàíå è îáðàçîâàíèþ ãåòåðîãåííûõ äîìåíîâ [91].
Ëàòåðàëüíîìó ðàçäåëåíèþ ôàç â ìåìáðàíå è îáðàçîâàíèþ
ãåòåðîãåííûõ äîìåíîâ ñïîñîáñòâóåò òàêæå ïðèñóòñòâèå
õîëåñòåðèíà.
Äîáàâëåíèå ÕÑ ê ÷èñòûì ãëèöåðîôîñôîëèïèäàì "ðàçìûâàåò"
íîðìàëüíûé òåìïåðàòóðíûé ïåðåõîä ìåæäó Lβ è Lc ôàçàìè,
ïðèäàâàÿ ìåìáðàíàì ñâîéñòâà, ïðîìåæóòî÷íûå ìåæäó ãåëåì è
æèäêîêðèñòàëëè÷åñêèì ñîñòîÿíèÿìè [92]. Íî âûñîêîå ñðîäñòâî ÕÑ
ê ñôèíãîëèïèäàì óñèëèâàåò ðàçäåëåíèå ôàç è ñïîñîáñòâóåò
îáðàçîâàíèþ ñïåöèôè÷åñêèõ ìèêðîäîìåíîâ â ìîäåëüíûõ
ìåìáðàíàõ [92, 97]. Â ðåçóëüòàòå ñôèíãîëèïèäû ïðèíèìàþò
ïðîìåæóòî÷íóþ ôàçó, îáîçíà÷åííóþ êàê æèäêî-óïîðÿäî÷åííàÿ
(Lo) [92]. Â ýòîé ôàçå æèðíîêèñëîòíûå öåïè ëèïèäà óïàêîâàíû òàê
æå ïëîòíî, êàê â ãåëåâîé, íî èìåþò áîëüøóþ ìîáèëüíîñòü,
áëàãîäàðÿ âíåäðåíèþ ìîëåêóë ÕÑ ìåæäó ñôèíãîëèïèäàìè.
Ïðåäïîëàãàåòñÿ òàêæå, ÷òî õîëåñòåðèí ìîæåò ëîêàëèçîâàòüñÿ âäîëü
ãðàíèöû
ìåæäó
ñôèíãîëèïèäíûìè
äîìåíàìè
è
ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, ñîçäàâàÿ ýíåðãåòè÷åñêè áëàãîïðèÿòíóþ
ïðåõîäíóþ çîíó ìåæäó Lo è Lc ôàçàìè [95].  ïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíå ãëèöåðîôîñôîëèïèäû îáðàçóþò Lc ôàçó ñî ñðàâíèòåëüíî
íèçêèì ñîäåðæàíèåì ÕÑ, à ñôèíãîëèïèäû îáðàçóþò æèäêîóïîðÿäî÷åííóþ ôàçó, ñèëüíî îáîãàùåííóþ õîëåñòåðèíîì, êîòîðàÿ
è ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ðàôòû. Âåðîÿòíî, îíè ñóùåñòâóþò â Lo ôàçå
èëè ñîñòîÿíèè, áëèçêîì ê íåé.
Ýòè ìèêðîäîìåíû ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê íåáîëüøèå
ïîëóæåñòêèå ðàôòû, ïëàâàþùèå â áîëåå æèäêîé, îáîãàùåííîé
55
ãëèöåðîôîñôîëèïèäàìè, ìàññå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû.
Äðóãèìè ñëîâàìè, îñíîâîé îáðàçîâàíèÿ ðàôòîâ ÿâëÿþòñÿ
ðàçëè÷íàÿ ñìåøèâàåìîñòü ëèïèäîâ, ðàçëè÷íàÿ óïàêîâêà èõ ÆÊ
öåïåé, à òàêæå òðàíñáèñëîéíàÿ è ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ èõ
ìîëåêóë. Â îáðàçîâàíèè ðàôòîâ èãðàåò òàêæå ðîëü òðàíñáèñëîéíàÿ
è ëàòåðàëüíàÿ àñèììåòðèÿ ìîëåêóë îòäåëüíûõ ëèïèäîâ, êîòîðàÿ
ó÷èòûâàåò ôîðìó êàæäîãî ìåìáðàííîãî ëèïèäà è âîçìîæíîñòü
ñîâìåñòíîãî ñóùåñòâîâàíèÿ âíóòðè ìåìáðàíû ðàçëè÷íûõ
ëèïèäíûõ ôàç Lc è Lo [95]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ýòà
ñîâðåìåííàÿ èíòåðïðåòàöèÿ ñòðóêòóðû ìåìáðàíû îïðîâåðãàåò
òðàäèöèîííîå ïðåäñòàâëåíèå îá îäíîðîäíîì ðàñïðåäåëåíèè
ëèïèäîâ è áåëêîâ â ãîìîãåííîì áèñëîå.
Ñîâðåìåííûå òåõíîëîãèè, òàêèå êàê àòîìíî-ñèëîâàÿ è
ôëóîðåñöåíòíî-ðåçîíàíñíàÿ ìèêðîñêîïèÿ, ïîçâîëèëè óáåäèòüñÿ â
ñóùåñòâîâàíèè ðàôòîâ in vivo, êîòîðûå ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé
ìàëåíüêèå ÷àñòèöû ðàçìåðîì ïðèáëèçèòåëüíî 50-70 íì â äèàìåòðå
[98 - 101]. Àíàëèòè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ñ îäíèì
ðàôòîì ìîæåò áûòü ñâÿçàíî, ïî ìåíüøåé ìåðå, 15 ìîëåêóë
"ãëèêîôîñôîèíîçèòèä (GPI)-çàÿêîðåííûõ" áåëêîâ [102, 103].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ðàçìåð ðàôòîâ ìîæåò ìåíÿòüñÿ â çàâèñèìîñòè
îò êîíöåíòðàöèè ëèïèäîâ â êëåòêå è âíåøíèõ óñëîâèé. Èçìåíåíèå
ýòèõ óñëîâèé ìîæåò ïðèâåñòè ê êîàëåñöåíöèè ðàôòîâ è äèñïåðñèè
îêðóæàþùåé èõ íåóïîðÿäî÷åííîé ëèïèäíîé ôàçû, ÷òî, â ñâîþ
î÷åðåäü,
ïðèâîäèò
ê
äðàìàòè÷åñêèì
ìîäèôèêàöèÿì
áèîôèçè÷åñêèõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû. Òàêèå ìîäèôèêàöèè
ïðîèñõîäÿò íåïðåðûâíî â õîäå æèçíè êëåòêè. Èññëåäîâàíèÿ ñ
ïîìîùüþ ôëóîðåñöåíòíûõ ôîñôîëèïèäíûõ ìîëåêóë ïîçâîëèëè
îïðåäåëèòü íå òîëüêî ðàçìåðû ðàôòîâ, íî è âîçìîæíîå âðåìÿ èõ
ñóùåñòâîâàíèÿ (â ñðåäíåì íå áîëåå 1 ìèí.).
Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ðàôòû íàõîäÿòñÿ íà îáåèõ ñòîðîíàõ
ìåìáðàíû è ñòàáèëèçèðóþòñÿ â ïðèñóòñòâèè ìåìáðàííûõ áåëêîâ,
êîòîðûå è îïðåäåëÿþò ñòðóêòóðó ðàôòîâ. Òàê, ïðèñóòñòâèå
ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ êàâåîëèíîâ îïðåäåëÿåò îñîáûé òèï ðàôòîâ
- êàâåîëÿðíûå ðàôòû, íàçûâàåìûå òàêæå "êàâåîëàìè" [104 - 106].
Êààâåîëû ("ïåùåðû") êàê ñòðóêòóðíûå åäèíèöû êëåòî÷íîé
ïîâåðõíîñòè èçâåñòíû ìîðôîëîãàì ñ 1955 ã. [107]. Íî â ïîñëåäíèå
ãîäû èçó÷åíèå ìåìáðàííûõ êàâåîë, êàê ìåñò ïðîòåêàíèÿ è
ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíûõ ñîó÷àñòíèêîâ ìíîãèõ êëåòî÷íûõ
ïðîöåññîâ, ïðèîáðåëî îñîáîå çíà÷åíèå è ñòàëî áûñòðî ðàñòóùåé
îáëàñòüþ èññëåäîâàíèé. Èçíà÷àëüíî áûëè óñòàíîâëåíû
ñïîñîáíîñòè êàâåîë òðàíñïîðòèðîâàòü ìîëåêóëû ÷åðåç
ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè. Ñîâðåìåííûå ìåòîäè÷åñêèå ïîäõîäû
ïîçâîëèëè ðàñøèðèòü ïðåäñòàâëåíèÿ î êàâåîëàõ è óçíàòü ìíîãî
56
íîâîãî îá èõ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè è ó÷àñòèè â êëåòî÷íûõ
ïðîöåññàõ. Òàê, áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êàâåîëû îáðàçóþò
óíèêàëüíûå ýíäî- è ýêçîöèòîçíûå êîìïàðòìåíòû íà ïîâåðõíîñòè
ìåìáðàí áîëüøèíñòâà êëåòîê è ñïîñîáíû êàê èìïîðòèðîâàòü
ìîëåêóëû, äîñòàâëÿÿ èõ âíóòðü êëåòêè, òàê è ýêñïîðòèðîâàòü
ìîëåêóëû âî âíåêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî. Êàâåîëû ñïîñîáíû
êîìïàðòìåíòàëèçîâàòü ðÿä ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ, ò.å.
ëîêàëèçîâàòü èõ ïðîòåêàíèå è êîîðäèíèðîâàòü èõ îòäåëüíûå ýòàïû
[108].
Ìîðôîëîãè÷åñêè êàâåîëû ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé îòäåëüíûå
"ìàëûå êàðìàíû", óãëóáëåíèÿ èëè êîëáîîáðàçíûå (íàçûâàåìûå
èíîãäà "îìåãà-îáðàçíûìè") èíâàãèíàöèè íà ïîâåðõíîñòè
êëåòî÷íîé ìåìáðàíû. Äèàìåòð êàâåîë ñîñòàâëÿåò 50-100 íì. Èõ
îáíàðóæèâàþò íà ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ ìíîãèõ âèäîâ
æèâîòíûõ êëåòîê. Íàèáîëåå ÷àñòî îíè âñòðå÷àþòñÿ â àäèïîöèòàõ,
ôèáðîáëàñòàõ, ìûøå÷íûõ êëåòêàõ (ñêåëåòíûõ, ãëàäêîìûøå÷íûõ è
êàðäèàëüíûõ), ýíäîòåëèè êàïèëëÿðîâ, ïíåâìîöèòàõ 1 òèïà.
Îïðåäåëÿþò
êàâåîëû
ëèáî
ìîðôîëîãè÷åñêè
(ïî
èõ
ôëàêîíîîáðàçíûì èíâàãèíàöèÿì), ëèáî ïî áèîõèìè÷åñêèì
êðèòåðèÿì (â ÷àñòíîñòè, ïî îáîãàùåííîñòè áåëêîì êàâåîëèíîì).
Êîëè÷åñòâåííûé ñîñòàâ ðÿäà ëèïèäîâ êàâåîë îòëè÷àåòñÿ îò èõ
ñîäåðæàíèÿ â ìåìáðàíå. Òàê, çàíèìàÿ âñåãî 1% ïîâåðõíîñòè
ìåìáðàíû, îíè ñîäåðæàò 10% ìåìáðàííîãî ÕÑ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ
ìîäåëüþ îáðàçîâàíèÿ ìèêðîäîìåíîâ èëè ðàôòîâ â ìåìáðàíå.
Êàâåîëû îáîãàùåíû òàêæå ñôèíãîìèåëèíîì (îò 55 äî 96% îò
îáùåãî åãî ñîäåðæàíèÿ â ìåìáðàíå) è äðóãèìè, ó÷àñòâóþùèìè â
ïåðåäà÷å êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ ("ñèãíàëüíûìè") ëèïèäàìè.
Êîëè÷åñòâî ÔÈ, öåðàìèäîâ è äèãëèöåðèäîâ ñîñòàâëÿåò äî 50% îò
ñóììàðíîãî ñîäåðæàíèÿ ýòèõ ëèïèäîâ â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå.
Î ëàòåðàëüíîé èëè òðàíñáèñëîéíîé îðãàíèçàöèè ëèïèäîâ â
êàâåîëÿðíîé ìåìáðàíå, òàê æå êàê è î ëîêàëüíîé æèäêîñòíîñòè
êàâåîë (â îòëè÷èå îò äàííûõ ïî öåëüíîé ìåìáðàíå) ïî÷òè íè÷åãî
íå èçâåñòíî.
Ìåìáðàííûå ôðàêöèè, óñòîé÷èâûå ê äåòåðãåíòàì è
îáîãàùåííûå
ãëèêîñôèíãîëèïèäàìè,
ñôèíãîìèåëèíîì,
õîëåñòåðèíîì è GPI-çàÿêîðåííûìè áåëêàìè, òàêæå áûëè âûäåëåíû
èç êëåòîê, â êîòîðûõ îòñóòñòâîâàëà ýêñïðåññèÿ êàâåîëèíà è
ìîðôîëîãè÷åñêè íå îïðåäåëÿëèñü êàâåîëû [109, 110]. Äëÿ ýòèõ
ìèêðîäîìåíîâ åùå íåò îïðåäåëåííîé ñòàíäàðòèçîâàííîé
íîìåíêëàòóðû.  ëèòåðàòóðå âñòðå÷àåòñÿ ìíîãî íàçâàíèé òàêèõ
ìèêðîäîìåíîâ, íàïðèìåð: íåðàñòâîðèìûå â äåòåðãåíòå
îáîãàùåííûå ãëèêîëèïèäàìè ìåìáðàíû; óñòîé÷èâûå ê äåòåðãåíòó
ìåìáðàíû; íåðàñòâîðèìûå â äåòåðãåíòå äîìåíû íèçêîé ïëîòíîñòè
57
èëè êàâåîëî-ïîäîáíûå äîìåíû è äð. Îäíàêî, ÷àùå âñåãî â íàó÷íîé
ëèòåðàòóðå èñïîëüçóåòñÿ íàçâàíèå "ëèïèäíûé ðàôò" èëè
"êàâåîëÿðíûé ðàôò", ïîä êîòîðûì ïîäðàçóìåâàåòñÿ ïëîòíûé
ëèïèä-îðãàíèçîâàííûé ìèêðîäîìåí ìåìáðàíû, ïðè÷åì ýòîò
ìèêðîäîìåí ìîæåò ñîñòîÿòü êàê èç êàâåîëÿðíûõ ó÷àñòêîâ
ìåìáðàíû, òàê è èç ëþáûõ äðóãèõ.  êà÷åñòâå íàèáîëåå èçâåñòíûõ
ìàðêåðîâ ëèïèäíûõ ðàôòîâ èñïîëüçóþò ñïåöèôè÷åñêèå "ðàôòîâûå"
áåëêè, òàêèå êàê êàâåîëèíû-1-3 [111 - 113], ôëîòèëëèíû-1-2 [114],
ãàíãëèîçèäû GM1, GM3 [115, 116], GPI-çàÿêîðåííûå áåëêè [117].
Àíàëèç íàêîïëåííûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ, ïîçâîëÿåò
óòâåðæäàòü, ÷òî êàâåîëû íà ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ñëóæàò äëÿ
êîìïàðòìåíòàëèçàöèè è èíòåãðàöèè øèðîêîãî ðÿäà ïðîöåññîâ
òðàíñäóêöèè ñèãíàëà [118]. Îíè âûïîëíÿþò òàêæå òðàíñïîðòíûå
ôóíêöèè, âêëþ÷àÿ âåçèêóëÿðíóþ èíòåðíàëèçàöèþ ìàëûõ ìîëåêóë
è òðàíñöèòîçíîå (ìåæêëåòî÷íîå) äâèæåíèå ìàêðîìîëåêóë. Âñå ýòî
îòêðûâàåò îïðåäåëåííûå âîçìîæíîñòè äëÿ ôóíäàìåíòàëüíûõ è
ïðèêëàäíûõ èññëåäîâàíèé â ôàðìàöåâòè÷åñêîé îáëàñòè, íàïðèìåð,
äëÿ ïîèñêà ïóòåé èñïîëüçîâàíèÿ êàâåîëÿðíûõ ìåìáðàííûõ
âçàèìîäåéñòâèé äëÿ ðàçâèòèÿ íîâîé ñòðàòåãèè êëåòî÷íîé è
òðàíñêëåòî÷íîé äîñòàâêè ëåêàðñòâ [118, 120].
Ñ ìåìáðàííûìè ðàôòàìè ñâÿçàí ðÿä ôèçèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé
êëåòêè. Èìåþòñÿ äàííûå â ïîëüçó ó÷àñòèÿ ðàôòîâ âî
âíóòðèêëåòî÷íîé ïåðåäà÷å ñèãíàëà, â êëåòî÷íîé àäãåçèè; ñ
ðàôòàìè ñåëåêòèâíî ñâÿçûâàþòñÿ ðåöåïòîðû àíòèãåíà Â-êëåòîê.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ ñòàíîâèòñÿ âñå áîëåå î÷åâèäíûì, ÷òî
ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò îïðåäåëåííóþ ðîëü âî ìíîãèõ êëåòî÷íûõ
ïðîöåññàõ, òàêèõ êàê òðàíñöèòîç, ôîòîöèòîç [119], àëüòåðíàòèâíûõ
ýíäîöèòîçó ïóòÿõ [120], â ïðîöåññàõ èíòåðíàëèçàöèè òîêñèíîâ,
áàêòåðèé è âèðóñîâ [121 - 123], òðàíñïîðòå õîëåñòåðèíà [124 - 126],
ãîìåîñòàçå êàëüöèÿ [127], ñîðòèðîâêå ìåìáðàííûõ áåëêîâ [128 130], òðàíñäóêöèè ìíîæåñòâåííûõ êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [131, 132].
Ïðåäïîëàãàþò òàêæå, ÷òî ðàôòû âîâëå÷åíû â ãåíåðàöèþ
ïàòîãåííûõ ôîðì ïðèîíîâûõ áåëêîâ è áåëêîâ, ñâÿçàííûõ ñ
áîëåçíüþ Àëüöãåéìåðà [100, 133, 134].
Áèîõèìè÷åñêèé àíàëèç áåëêîâîãî ñîñòàâà âûäåëåííûõ è
î÷èùåííûõ ëèïèäíûõ ðàôòîâ èç ìíîæåñòâà êëåòîê ðàçëè÷íûõ
âèäîâ ïîêàçàë âûðàæåííóþ êîíöåíòðàöèþ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë
âíóòðè ýòèõ ìèêðîäîìåíîâ [105, 135 - 137]. Ïîýòîìó
ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò îïðåäåëåííóþ
ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â òðàíñäóêöèè êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ [138 140].
Ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî îñíîâíûõ ïðè÷èí è óñëîâèé,
îáúÿñíÿþùèõ öåëåñîîáðàçíîñòü ó÷àñòèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â
58
ïðîöåññàõ ñèãíàëèçàöèè:
1) Ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò ñïîñîáñòâîâàòü ýôôåêòèâíîé è
ñïåöèôè÷åñêîé ïåðåäà÷å ñèãíàëà, îáåñïå÷èâàÿ îäíîâðåìåííîå
ôóíêöèîíèðîâàíèå
ìíîæåñòâà
ðàçëè÷íûõ
êîìïîíåíòîâ
ñïåöèôè÷åñêèõ ñèãíàëüíûõ ïóòåé.
2) Ðàñïîëîæåíèå ó÷àñòâóþùèõ â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ìîëåêóë
âíóòðè è/èëè íà ëèïèäíûõ ðàôòàõ ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü êîíòðîëþ
çà ïðîöåññîì ñèãíàëèíãà è âëèÿòü íà ñïîñîáíîñòü êëåòêè îòâå÷àòü
íà ðàçäðàæåíèå.
3) Äèôôåðåíöèðîâàííàÿ êîíöåíòðàöèÿ è ëîêàëèçàöèÿ
ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë â ëèïèäíûõ ðàôòàõ, ïî îòíîøåíèþ êî âñåìó
îáúåìó ìåìáðàíû, äàåò âîçìîæíîñòü êîíòðîëèðîâàòü äîñòóï
äðóãèõ ñîåäèíåíèé ê êàæäîé ñèãíàëüíîé ìîëåêóëå. Íàïðèìåð,
âíóòðè ëèïèäíîãî ðàôòà ïðîèñõîäèò ôîñôîðèëèðîâàíèå ðÿäà
áåëêîâ, ïðèâîäÿùåå ê èõ àêòèâàöèè, à ïëîòíàÿ (ñïåöèôè÷åñêàÿ)
ñòðóêòóðà ðàôòà çàùèùàåò ýòè áåëêè îò èíàêòèâèðóþùåãî
äåéñòâèÿ ìåìáðàííûõ ôîñôàòàç [141].
4) Óíèêàëüíîå ðàôòîâîå ìèêðîîêðóæåíèå ñïîñîáíî
ñïåöèôè÷åñêè âëèÿòü íà êîíôîðìàöèþ è àêòèâíîñòü ñèãíàëüíûõ
áåëêîâ [142].
5) Ìåæäó ðàçëè÷íûìè ñèãíàëüíûìè ïóòÿìè ìîãóò âîçíèêàòü
íåîáõîäèìûå äëÿ òðàíñäóêöèè ñïåöèôè÷åñêèå ïåðåêðåñòíûå ñâÿçè
òîëüêî â òîì ñëó÷àå, åñëè âîâëå÷åííûå â ýòîò ïðîöåññ ìîëåêóëû
ëîêàëèçîâàíû â òîì æå ëèïèäíîì ðàôòå.
6) Êëàñòåðèçàöèÿ èëè ïåðåìåùåíèå ëèïèäíûõ ðàôòîâ ìîæåò
áûòü ýôôåêòèâíûì ñðåäñòâîì òðàíñïîðòèðîâêè ïðåäâàðèòåëüíî
ñîáðàííûõ ñèãíàëüíûõ êîìïëåêñîâ ê ñïåöèôè÷åñêèì ê äàííîìó
ðàçäðàæåíèþ îáëàñòÿì ìåìáðàíû, íàïðèìåð, ó ïîëÿðèçóþùèõñÿ
èëè ìèãðèðóþùèõ êëåòîê.
7) Êëàñòåðèçàöèÿ îäíîãî èëè íåñêîëüêèõ òèïîâ ëèïèäíûõ
ðàôòîâ ñ îáðàçîâàíèåì âûñîêîîðãàíèçîâàííîãî ñèãíàëüíîãî
êîìïëåêñà ìîæåò ïðèâåñòè ê ìîäóëÿöèè ñèãíàëîâ ïóòåì
ïðîñòðàíñòâåííîé ðåãóëÿöèè.
8) Ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò, â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè, ïðåðûâàòü
èëè îñòàíàâëèâàòü ïåðåäà÷ó îïðåäåëåííûõ ñèãíàëîâ, èçîëèðóÿ
ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû â íåàêòèâíîé ôîðìå è ïðåïÿòñòâóÿ èõ
àêòèâàöèè (òàê íàçûâàåìàÿ, "íåãàòèâíàÿ" ðåãóëÿöèÿ ïåðåäà÷è
ñèãíàëîâ)
 ïîñëåäíèå ãîäû íàêîïëåíî ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
äàííûõ, óêàçûâàþùèõ íà òî, ÷òî, ëèïèäíûå ðàôòû, ïî âñåé
âèäèìîñòè, îáåñïå÷èâàþò â êëåòêå ýôôåêòèâíîñòü ïåðåäà÷è
ñèãíàëà è åãî ñïåöèôè÷íîñòü. Âïîëíå âåðîÿòíî, ÷òî îïðåäåëåííûå
âèäû ðàôòîâ, îáðàçîâàâøèõñÿ íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû îäíîé è
59
òîé æå êëåòêè, ìîãóò áûòü ñïåöèàëèçèðîâàíû äëÿ âûïîëíåíèÿ
îïðåäåëåííûõ, î÷åíü òîíêèõ ïðîöåññîâ.
Ëèïèäíûå ðàôòû, îáëàäàÿ óíèêàëüíûì áåëêîâûì è ëèïèäíûì
ñîñòàâîì, ñîîòâåòñòâóþùèì èõ ñïåöèôè÷åñêèì ôóíêöèÿì, ìîãóò
áûòü âîâëå÷åíû â êîìïàðòìåíòàëèçàöèþ ñðàçó íåñêîëüêèõ
ïðîöåññîâ èëè ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëà.  îòâåò íà âîçäåéñòâèå
îïðåäåëåííîãî ñòèìóëà îíè ñïîñîáíû áûñòðî "ñîáðàòü"
âûñîêîóïîðÿäî÷åííûé ñèãíàëüíûé êîìïëåêñ, èëè îáåñïå÷èòü
"ïåðåêðåùèâàíèå" íåñêîëüêèõ îäíîâðåìåííî ïðîòåêàþùèõ
ñèãíàëüíûõ
ïóòåé
("êî-ñòèìóëèðóþùèåñÿ"
ñèãíàëû).
Êëàñòåðèçàöèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ïðîöåññå ñèãíàëèíãà ìîæåò
ðåãóëèðîâàòüñÿ: çàäåðæêîé ïåðåäà÷è ñèãíàëà, èõ ñâÿçüþ ñ
öèòîñêåëåòîì è èõ âçàèìîäåéñòâèåì ñ îïðåäåëåííûìè
èíäèâèäóàëüíûìè áåëêàìè. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî â ïðîöåññ
êëàñòåðèçàöèè âîâëå÷åíû ëèïèäíûå ðàôòû ðàçëè÷íûõ òèïîâ.
Îáðàçîâàíèå âûñîêîîðãàíèçîâàííûõ ñèãíàëüíûõ êîìïëåêñîâ
êëàñòåðèçàöèåé îäíîãî èëè íåñêîëüêèõ òèïîâ ëèïèäíûõ ðàôòîâ
ìîæåò ïðèâåñòè ê ìîäóëÿöèè ñèãíàëîâ ïóòåì ïðîñòðàíñòâåííîé
ðåãóëÿöèè.
Íà
ñåãîäíÿøíèé
äåíü
ïîëó÷åíû
äîêàçàòåëüñòâà,
ïîäòâåðæäàþùèå ñóùåñòâîâàíèå ðàçíîîáðàçíûõ ïóòåé ïåðåäà÷è
ñèãíàëà ñ ïîìîùüþ ëèïèäíûõ ðàôòîâ, ñîïðÿæåííûõ ñ
ñîîòâåòñòâóþùèìè áèîëîãè÷åñêèìè ýôôåêòàìè. Ñþäà âõîäèò
ó÷àñòèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ðåöåïòîðàìè, ñâÿçûâàþùèìè G-áåëîê
[143, 144], ðåöåïòîðàìè ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (EGFR) [145
- 147], ðàçëè÷íûìè GPI-"çàÿêîðåííûìè" áåëêàìè [148 - 150]. Êðîìå
òîãî, áûëè ïîëó÷åíû èçîëèðîâàííûå ñèãíàëû â îòâåò íà èíñóëèí
[151] è ôàêòîð ðîñòà ôèáðîáëàñòîâ-2 (FGF-2) [152]. Âàæíî îòìåòèòü,
÷òî, íåñìîòðÿ íà íåäîñòàòî÷íîñòü äàííûõ î ìåõàíèçìàõ ðåãóëÿöèè
ïóòåé ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ, ñåãîäíÿ ìîæíî óòâåðæäàòü, ÷òî
ëèïèäíûå ðàôòû èãðàþò âàæíåéøóþ ðîëü â ýòèõ ïðîöåññàõ,
ìîäóëèðóÿ ïðîöåññû ñèãíàëèíãà ðàçëè÷íûìè, â òîì ÷èñëå è åùå
íåèçâåñòíûìè ïóòÿìè.
Òàê êàê ðàôòû ñïîñîáíû ëàòåðàëüíî äèôôóíäèðîâàòü â
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ïîäîáíî ïëàâàþùèì "÷åëíîêàì"
("øàòòëàì"), îíè ñïîñîáíû ïåðåíîñèòü è ñîçäàâàòü óñëîâèÿ äëÿ
ñâÿçûâàíèÿ ìåæäó àêòèâèðîâàííûìè ðåöåïòîðàìè è ìîëåêóëàìè
òðàíñäüþñåðàìè [153].
Èññëåäîâàòåëÿìè áûëà ïðåäëîæåíà "îáúåäèíåííàÿ" ìîäåëü
òðàíñäóêöèè ñèãíàëà èììóííîé êëåòêîé [154, 155]. Íàïðèìåð, â
ïîêîÿùèõñÿ æèðîâûõ êëåòêàõ ðåöåïòîð èììóíîãëîáóëèíà Å - FcεR
è áåëîê Lyn ëîêàëèçîâàíû íà âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàííîãî ðàôòà.
 ïðîöåññå îáðàçîâàíèÿ àíòèãåíîâîãî êîìïëåêñà Ag-IgE, Lyn è
60
FcεRI ïåðåìåùàþòñÿ â ñïåöèôè÷åñêèå ðàôòû. Îáúåäèíåíèå ýòèõ
ðàôòîâ èíäóöèðóåòñÿ ïîëèâàëåíòíûì àíòèãåíîì, êîòîðûé,
âçàèìîäåéñòâóÿ ñ FcεRI è Lyn, çàïóñêàåò, òàêèì îáðàçîì, ïðîöåññ
ïåðåäà÷è ñèãíàëà: êî-êîìïàðòìåíòàöèþ FcεRI-ðåöåïòîðîâ ñ ðàôòñâÿçàííîé Lyn-òèðîçèíêèíàçîé, îáåñïå÷èâàÿ ïðîñòðàíñòâåííîå
ñáëèæåíèå, íåîáõîäèìîå äëÿ ôîñôîðèëèðîâàíèÿ FcεRI ñ
îáðàçîâàíèåì àêòèâèðîâàííîãî ìîòèâà (ITAM). Ýòîò ìîòèâ, â ñâîþ
î÷åðåäü, çàïóñêàåò ñèãíàëüíûé êàñêàä, êîòîðûé ïðèâîäèò ê
âûñâîáîæäåíèþ ìåäèàòîðîâ àëëåðãè÷åñêîãî îòâåòà. Òàêèì
îáðàçîì, àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî íåêîòîðûå êîìïîíåíòû,
ó÷àñòâóþùèå â ïåðåäà÷å ñèãíàëà, ìîãóò áûòü ïðåäâàðèòåëüíî, äî
íà÷àëà ïðîöåññà, "ñîáðàíû" â ëèïèäíûõ ðàôòàõ ìåìáðàí
ïîêîÿùèõñÿ êëåòîê, ñïîñîáñòâóÿ, òåì ñàìûì, áûñòðîé è
ýôôåêòèâíîé èõ àêòèâàöèè íà íà÷àëüíîì ýòàïå ñèãíàëèíãà.
Ïðåäïîëàãàåòñÿ òàêæå ó÷àñòèå ðàôòîâûõ ìèêðîäîìåíîâ
ìåìáðàí íå òîëüêî â ñèãíàëèíãå, íàïðàâëåííîì âíóòðü êëåòêè, íî
è â
ñèãíàëèíãå èç êëåòêè íàðóæó, êîîðäèíèðóþùåì
ôîðìèðîâàíèå íàðóæíîãî êîíòàêòà ìåæäó êëåòêîé è êëåòî÷íûì
ìàòðèêñîì, â êîòîðîì ó÷àñòâóåò ñåìåéñòâî áåëêîâ, íàçûâàåìûõ
èíòåãðèíàìè. Ñ÷èòàþò, ÷òî èíòåãðèí-ëèãàíäíûå âçàèìîäåéñòâèÿ
ðåãóëèðóþòñÿ ñèãíàëüíûìè ìîëåêóëàìè (â îñíîâíîì êèíàçàìè
cåìåéñòâà Src , ÔÈ-3-êèíàçîé, ïðîòåèíêèíàçîé Ñ è ñâÿçàííûìè ñ
ÃÒÔàçîé ïåïòèäàìè Rho-ñåìåéñòâà).
Ëèïèäíûå ðàôòû ñïîñîáñòâóþò îáðàçîâàíèþ êëàñòåðîâ
íåêîòîðûõ êîíòàêòíûõ áåëêîâ è ñîçäàþò â ìåìáðàíå
ñïåöèàëèçèðîâàííûå áåëîê-ëèïèäíûå êîìïëåêñû; ñ ðàôòàìè
ñâÿçàíà êëàñòåðèçàöèÿ ðåöåïòîðîâ àäãåçèè. Â ïðîöåññàõ äâèæåíèÿ
êëåòîê ðàôòû íóæíû äëÿ ïðîñòðàíñòâåííîé ëîêàëèçàöèè
ïñåâäîïîäèé â ó÷àñòêå ìåìáðàíû, ñîîòâåòñòâóþùåì íàïðàâëåíèþ
êëåòî÷íîé ìèãðàöèè, ÷òî îïðåäåëÿåò ýôôåêòèâíîñòü ìèãðàöèè
[156]. Âîïðîñû î òîì, ó÷àñòâóþò ëè ðàôòû â îáðàçîâàíèè
àññîöèàòîâ (àíñàìáëåé, êîìïëåêñîâ) íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû,
íåîáõîäèìûõ äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ìåæêëåòî÷íîãî êîíòàêòà, ÿâëÿþòñÿ
ïðåäìåòîì ñïåöèàëüíûõ èññëåäîâàíèé [156 - 159].
 öåëîì, ðàôòû ìîæíî íàçâàòü ñîðòèðóþùåé ìîëåêóëû
"ìàøèíîé" èëè "ïëàòôîðìîé", ñïîñîáíîé êîîðäèíèðîâàòü
ïðîñòðàíñòâåííî-âðåìåííóþ îðãàíèçàöèþ ïóòåé òðàíñäóêöèè
ñèãíàëà âíóòðè ñåëåêòèâíûõ îáëàñòåé ("ñèãíàëîñîìàõ")
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû.
 ðÿäå ðàáîò, îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû, áûëî
ïîêàçàíî, ÷òî ëèïèäíûå ðàôòû ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ øèðîêèì
äèàïàçîíîì ïàòîãåíîâ, âêëþ÷àÿ âèðóñû, ïàðàçèòû, áàêòåðèè è èõ
òîêñèíû, äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ â êëåòêó [160 - 161]. Â ýòîò ïðîöåññ
61
ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â êà÷åñòâå îñíîâíûõ èëè âñïîìîãàòåëüíûõ
ðåöåïòîðîâ êàê ðàñïîëîæåííûå íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàí êëåòîê
GPI-çàÿêîðåííûå áåëêè, òàê è ðàôòîâûå ëèïèäû. Íàïðèìåð,
õîëåðíûé òîêñèí ñâÿçûâàåòñÿ ñ ãàíãëèîçèäîì GM1 [160], òîêñèí
Shiga - ñ íåéòðàëüíûì ãëèêîëèïèäîì Gb3 [161], ìèêîáàêòåðèè - ñ
õîëåñòåðèíîì, à E.coli ÷åðåç àäãåçèí FimH ïðèñîåäèíÿåòñÿ ê GPIçàÿêîðåííîìó áåëêó CD48 [162 - 164].
Áîëüøîé èíòåðåñ âûçûâàåò âçàèìîäåéñòâèå òîêñèíîâ ñòîëáíÿêà
è áîòóëèçìà ñ íåðâíîé êëåòêîé. Ýòè íåéðîòîêñèíû
ïðèñîåäèíÿþòñÿ ê íåêîòîðûì äè- è òðè-ñèàëîãàíãëèîçèäàì (â
îñíîâíîì GD1a, GD1b è GT1b) íà ïîâåðõíîñòè ïðåñèíàïòè÷åñêîé
ìåìáðàíû [121]. Îäíàêî ïðè âûñîêèõ óðîâíÿõ òîêñè÷íîñòè,
äîñòèãàåìûõ ñóáïèêîìîëÿðíûìè êîíöåíòðàöèÿìè òîêñèíîâ,
àôôèííîñòü ïîñëåäíèõ ê ýòèì ãàíãëèîçèäàì îêàçàëàñü íåîæèäàííî
íèçêîé. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ ýòîãî ïàðàäîêñà Montecucco [165]
ïðåäëîæèë ìîäåëü "äâîéíîãî ðåöåïòîðà". Ñîãëàñíî ýòîé ìîäåëè,
îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííàÿ ïîâåðõíîñòü ïðåñèíàïòè÷åñêîé
ìåìáðàíû ñîäåðæèò âûñîêèå êîíöåíòðàöèè ãàíãëèîçèäíûõ
ðåöåïòîðîâ, ê êîòîðûì òîêñèí ïðèñîåäèíÿåòñÿ ÷åðåç íèçêîàôôèííîå âçàèìîäåéñòâèå.
Ýòó ìîäåëü óáåäèòåëüíî ïîäòâåðæäàåò èäåíòèôèêàöèÿ áåëêà 58
êÄà, êîòîðûé ñâÿçûâàåò íåéðîòîêñèíû áîòóëèçìà è ñòîëáíÿêà
òîëüêî â ïðèñóòñòâèè GT1b èëè GD1a [166]. Â ïðåäëîæåííîé ñõåìå
òðåáóåò äîêàçàòåëüñòâ ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî ïðèñîåäèíåíèå ê
ãàíãëèîçèäàì èíäóöèðóåò òàêèå êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ
ñòðóêòóðû òîêñèíà, êîòîðûå óâåëè÷èâàþò åãî àôôèííîñòü ê
áåëêîâîìó ðåöåïòîðó. Ýòà ìîäåëü îñîáåííî èíòåðåñíà òåì, ÷òî
èëëþñòðèðóåò ðàçíîîáðàçíûå ñâîéñòâà ëèïèäíûõ ðàôòîâ ïî
îòíîøåíèþ ê ðàçëè÷íûì ïàòîãåíàì è òîêñèíàì: (1) ðàôòû
îáåñïå÷èâàþò îêðóæåíèå ïàòîãåíîâ è òîêñèíîâ áîëüøèì
êîëè÷åñòâîì
íèçêî-àôôèííûõ
ðåöåïòîðîâ,
êîòîðûå
ñòàáèëèçèðóþò "çàõâàò" íà ïîâåðõíîñòè êëåòêè; (2) ðàôòû ñïîñîáíû
ïåðåìåùàòü ïàòîãåíû è òîêñèíû ê ñîîòâåòñòâóþùèì âûñîêîàôôèííûì ðåöåïòîðàì, è (3) ñïåöèôè÷åñêèå ëèïèäû â ðàôòàõ
ìîãóò äåéñòâîâàòü êàê øàïåðîíû, èíäóöèðóÿ êîíôîðìàöèîííûå
èçìåíåíèÿ â ñòðóêòóðå áåëêîâ ïàòîãåíîâ è òîêñèíîâ, êîãäà îíè
ñáëèæåíû ñ âûñîêî-àôôèííûìè ðåöåïòîðàìè. Íåäàâíî áûëî
ïîêàçàíî [167], ÷òî ýòà ìîäåëü ñîãëàñóåòñÿ ñ ðåàêöèåé ñëèÿíèÿ,
îïèñàííîé äëÿ ïðîöåññà èíôèöèðîâàíèÿ êëåòîê âèðóñîì
èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà 1 (ÂÈ×-1).
 áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ, êîìïîíåíòû ðàôòîâ, óçíàâàåìûå
òîêñèíàìè, ýòî ðàôòîâûå ëèïèäû - õîëåñòåðèí è/èëè
ñôèíãîìèåëèí.  ñëó÷àå òîêñèíà Shiga, ãëèêîëèïèäíûé ðåöåïòîð
62
(Gb3) ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì íå òîëüêî äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ñàéòà
ñâÿçûâàíèÿ íà ïîâåðõíîñòè êëåòêè, íî òàêæå äëÿ òðàíñïîðòèðîâêè
òîêñèíà â ÝÐ [168, 169]. Èíòåðåñíî, ÷òî íåêîòîðûå ïàòîãåíû è èõ
òîêñèíû èñïîëüçóþò îáû÷íûå ôóíêöèè ëèïèäíûõ ðàôòîâ
(íàïðèìåð, âíóòðèêëåòî÷íûé òðàíñïîðò) äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ
âíóòðü êëåòêè [170].
 ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâèëîñü ìíîãî îáçîðîâ, ïîñâÿùåííûõ
èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ èíôèöèðîâàíèÿ êëåòêè âèðóñàìè ÂÈ×-1. Â
íèõ ïîêàçàíà âàæíåéøàÿ ðîëü ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ïðîöåññå
ñëèÿíèÿ âèðóñà ÂÈ×-1 ñ êëåòêîé è â äàëüíåéøåì ðàçâèòèè áîëåçíè
[171 - 177]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî â ñëèçèñòîé êèøå÷íèêà ëèïèäíûå
ðàôòû âîâëå÷åíû â ïåðåíîñ ÂÈ×-1 âèðèîíà ÷åðåç èíòàêòíóþ
ýïèòåëèàëüíóþ êëåòêó è â ïàòîãåíåç ÂÈ×-1 ýíòåðîïàòèè.
Ïîêàçàíà ðîëü ëèïèäíûõ ðàôòîâ â êîíâåðñèè ïðèîíîâûõ
áåëêîâ, è ðàçâèòèè áîëåçíè Àëüöãåéìåðà [178 - 180].
Óñòàíîâëåíèå ìåõàíèçìîâ ñâÿçûâàíèÿ ðàôòîâûìè ëèïèäàìè
íåêîòîðûõ ýêçîãåííûõ áåëêîâ è èõ òðàíñëîêàöèè â ñïåöèôè÷åñêèå
ñàéòû íà ïîâåðõíîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, à òàêæå
ìåõàíèçìîâ èíèöèàöèè íåîáõîäèìûõ êîíôîðìàöèîííûõ
èçìåíåíèé â ïåðåìåùåííûõ áåëêàõ îòêðûâàåò íîâûå îáëàñòè â
ìîëåêóëÿðíîé ìåäèöèíå [100]. Íàïðèìåð, óæå ñåãîäíÿ
ðàçðàáîòàíû íîâûå ñèíòåòè÷åñêèå ðàñòâîðèìûå àíàëîãè
ãàëàêòîçèëöåðàìèäà (GalCer), êîòîðûå ñâÿçûâàþòñÿ ñ V3-ïåòëåé
gp120 (áåëêà âèðóñà ÂÈ×-1) è èíãèáèðóþò ñëèÿíèå âèðóñà ñ
êëåòêîé [181, 182]. Äëÿ àíòèàäãåçèâíîé òåðàïèè âèðóñíûõ è
áàêòåðèàëüíûõ òîêñèíîâ ðàçðàáîòàíû è â íàñòîÿùåå âðåìÿ
èñïûòûâàþòñÿ
ìîíîè
ïîëèâàëåíòíûå
ïðîèçâîäíûå
îëèãîñàõàðèäîâ (ãëèêîäåíäðèìåðû) [183, 184].
Ïåðñïåêòèâíûì íàïðàâëåíèåì â òåðàïèè ïðèîíîâûõ,
Àëüöãåéìåðà è äðóãèõ çàáîëåâàíèé, âûçâàííûõ äåôåêòíûì
ôîëäèíãîì áåëêîâ, ÿâëÿåòñÿ ðàçðàáîòêà ïåïòèäîâ, ñïîñîáíûõ
ðàçðóøèòü β-ñòðóêòóðó â ìîëåêóëå ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ, êîòîðûå
â ïðîöåññå èíôèöèðîâàíèÿ ïðèñîåäèíÿþòñÿ ê ïðèîíîâûì (PrP) è
àìèëîèäíûì ïåïòèäàì, òåì ñàìûì ñòàáèëèçèðóÿ èõ åñòåñòâåííóþ
êîíôîðìàöèþ [185, 186]. Ýêñïåðèìåíòàëüíî áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
ñíèæàþùèå õîëåñòåðèí àãåíòû (ñòàòèíû), ñíèæàþò ó ÷åëîâåêà
âåðîÿòíîñòü çàáîëåâàíèÿ áîëåçíüþ Àëüöãåéìåðà [187]. Ó æèâîòíûõ
ëå÷åíèå ñòàòèíàìè òàêæå ñíèæàåò óðîâíü β-àìèëîèäíîãî ïåïòèäà,
÷òî ñîîòâåòñòâóåò êëþ÷åâîé ðîëè ÕÑ â îáðàçîâàíèè àìèëîèäíûõ
áëÿøåê. Ïðèçíàíèå ó÷àñòèÿ ëèïèäíûõ ðàôòîâ â ðàçëè÷íûõ
èíôåêöèîííûõ è íåèíôåêöèîííûõ ïàòîëîãèÿõ, áåç ñîìíåíèÿ,
îòêðîåò â áëèæàéøåì áóäóùåì íîâûå âîçìîæíîñòè êàê äëÿ
äàëüíåéøèõ ôóíäàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé, òàê è äëÿ ðàçðàáîòêè
63
íîâûõ òåðàïåâòè÷åñêèõ ñðåäñòâ.
2.6. Ñîñòàâ è ìîëåêóëÿðíàÿ îðãàíèçàöèÿ ôîñôîëèïèäîâ
â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè.
Ëèïîïðîòåèíû ïëàçìû êðîâè ïîäðàçäåëÿþò íà òðè îñíîâíûõ
êëàññà - âûñîêîé (ËÂÏ), íèçêîé (ËÍÏ) è î÷åíü íèçêîé ïëîòíîñòè
(ËÎÍÏ). Íåñìîòðÿ íà ðàçëè÷èÿ â ðàçìåðå, ñîäåðæàíèè ëèïèäîâ,
íàëè÷èè îïðåäåëåííûõ áåëêîâ (àïîïðîòåèíîâ) è ìåòàáîëè÷åñêîì
ïîâåäåíèè, âñå òðè êëàññà ëèïîïðîòåèíîâ ïîñòðîåíû ïî îáùåìó
ïðèíöèïó. Îíè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ãëîáóëû (ìèöåëëû)
íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ - òðèãëèöåðèäîâ è ýôèðîâ ÕÑ - ïîêðûòûå
ìîíîìîëåêóëÿðíûì ñëîåì ôîñôîëèïèäîâ ñ áåëêîâûìè
âêëþ÷åíèÿìè (ðèñ. 2.6.1).
Ñòðîåíèå è ôóíêöèè ëèïîïðîòåèíîâ è èõ àïîïðîòåèíîâ
Ðèñ.2.6.1. Ñòðîåíèå ëèïîïðîòåèíîâ
ïîäðîáíî îïèñàíû âî ìíîãèõ îáçîðàõ [188 - 192]. Â îñíîâå ôóíêöèè
ÔË â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè ëåæèò òîò æå ïðèíöèï ñòðîåíèÿ
ôîñôîëèïèäîâ, ÷òî è â áèîìåìáðàíàõ - èõ àìôèôèëüíîñòü. Ïðè
ýòîì ÔË â ëèïîïðîòåèíàõ òàêæå èãðàþò ðîëü ïîãðàíè÷íîãî ñëîÿ
ìåæäó âîäíîé ñðåäîé ïëàçìû êðîâè è ãèäðîôîáíîé ãëîáóëîé
íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ. Òàêîå íàçíà÷åíèå ëèïîïðîòåèíîâûõ
ôîñôîëèïèäîâ è îáóñëàâëèâàåò õàðàêòåð èõ îðãàíèçàöèè â âèäå
îðèåíòèðîâàííîãî ê íàðóæíîé âîäíîé ôàçå ïîâåðõíîñòíîãî
ìîíîñëîÿ ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" è óñòðåìëåííûõ ê öåíòðó
64
æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé.
Ïðèíöèï ìîëåêóëÿðíîé îðãàíèçàöèè ýòîãî ìîíîñëîÿ ñõîäåí ñ
òàêîâûì äëÿ íàðóæíîãî ñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê:
ðàñïîëîæåíèå áåëêîâ ìîçàè÷íî, è ñòåïåíü ïîãðóæåííîñòè
áåëêîâûõ ìîëåêóë â ëèïèäû çàâèñèò îò èõ ãèäðîôîáíîñòè è
íàëè÷èÿ α-ñïèðàëüíûõ ôðàãìåíòîâ. Òàê, àïîïðîòåèí À1 (àïîÀ1) îñíîâíîé áåëîê ËÂÏ - ëîêàëèçóåòñÿ öåëèêîì íà ïîâåðõíîñòè
ãëîáóëû, âçàèìîäåéñòâóÿ ïðåèìóùåñòâåííî ñ ïîëÿðíûìè
"ãîëîâêàìè" ÔË. Çíà÷èòåëüíàÿ åãî îáëàñòü ñîïðèêàñàåòñÿ ñ
îêðóæàþùåé âîäíîé ôàçîé. Ýòî îáóñëàâëèâàåò åãî îòíîñèòåëüíóþ
ïîäâèæíîñòü âïëîòü äî ñïîñîáíîñòè ïîêèäàòü "ìàòåðèíñêóþ"
ëèïîïðîòåèíîâóþ ÷àñòèöó â ïðîöåññå òðàíñôîðìàöèè
ëèïîïðîòåèíîâ â êðîâÿíîì ðóñëå. Äðóãîé æå áåëîê òåõ æå ËÂÏ àïîïðîòåèí ÀII, ãëóáæå ïîãðóæåí â ãèäðîôîáíóþ îáëàñòü
ëèïîïðîòåèíà
èç-çà
íàëè÷èÿ
æèðíîêèñëîòíûõ
öåïåé
ôîñôîëèïèäîâ - è âñëåäñòâèå ýòîãî îòäåëÿåòñÿ îò
ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû ñ òðóäîì, òîëüêî â óñëîâèÿõ in vitro, ïðè
äåéñòâèè äåòåðãåíòîâ. Åùå áîëüøåé ãèäðîôîáíîñòüþ îáëàäàåò
îñíîâíîé áåëîê ËÍÏ - àïîïðîòåèí Â, ÷àñòü ôðàãìåíòîâ êîòîðîãî
âçàèìîäåéñòâóåò íå òîëüêî ñ îñòàòêàìè æèðíûõ êèñëîò ÔË, íî è â
íåêîòîðîé ñòåïåíè ñ íåïîëÿðíûìè ãèäðîôîáíûìè ëèïèäàìè
îêðóæåíèÿ ÿäðà ("core") ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû, ñîñòîÿùåãî èç
ýôèðîâ õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ.
Ðàçìåðîì ýòîãî ãèäðîôîáíîãî ÿäðà, ðàçíîãî äëÿ êàæäîãî êëàññà
ëèïîïðîòåèíîâ, è îïðåäåëÿåòñÿ îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâåííîå
ñîäåðæàíèå ôîñôîëèïèäîâ. Èç ïðîñòûõ ãåîìåòðè÷åñêèõ
ñîîáðàæåíèé ÿñíî, ÷òî ïðè îäèíàêîâîé òîëùèíå ôîñôîëèïèäíîãî
ìîíîñëîÿ (òî åñòü äëèíå æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé ÔË) äîëÿ åãî
îáúåìà ïî îòíîøåíèþ êî âñåé ÷àñòèöå âîçðàñòàåò ñî ñíèæåíèåì
äèàìåòðà ÿäðà. Ïîýòîìó ïðîöåíò ôîñôîëèïèäîâ ìèíèìàëåí (515%) â ñàìûõ êðóïíûõ ÷àñòèöàõ - õèëîìèêðîíàõ (äèàìåòðîì îò 200
äî 1000 íì) è ËÎÍÏ (40 - 60 íì), â êîòîðûõ ïðåîáëàäàþò
íåéòðàëüíûå ëèïèäû, è ìàêñèìàëåí äëÿ îòíîñèòåëüíî ìåëêèõ
ËÂÏ (äèàìåòðîì 4 - 5 íì) (~ 30%) [191, 193].
Òàêàÿ æå íàïðàâëåííîñòü, íî âûðàæåííàÿ åùå â áîëüøåé
ñòåïåíè - ñâîéñòâåííà è äðóãîìó êîìïîíåíòó ïîâåðõíîñòè
ëèïîïðîòåèíîâ - áåëêàì. Èõ ñîäåðæàíèå âîçðàñòàåò îò 2% â
õèëîìèêðîíàõ äî 55% â íàèáîëåå ìåëêîé ïî ðàçìåðó è ïëîòíîé
ïîäôðàêöèè ËÂÏ (ËÂÏ3). Ïðè ýòîì ÷àñòü ïîâåðõíîñòè
ëèïîïðîòåèíà, çàíÿòàÿ àïîïðîòåèíàìè, è çàìåíÿþùàÿ òåì ñàìûì
ôîñôîëèïèäû, òàêæå âëèÿåò íà îáùèé ïðîöåíò ïîñëåäíèõ â
ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöå. Ýòî îñîáåííî õàðàêòåðíî äëÿ áîãàòûõ
áåëêîì ïîäôðàêöèé ËÂÏ. ËÂÏ3 ìåíüøå ïî äèàìåòðó, ÷åì ïðîäóêò
65
èõ ÷àñòè÷íîé òðàíñôîðìàöèè â ïëàçìå êðîâè - ËÂÏ2, ïîýòîìó
îòíîñèòåëüíàÿ äîëÿ ïîâåðõíîñòíîãî ìîíîñëîÿ (îò âñåé ìàññû
÷àñòèöû) â ËÂÏ3 ìàêñèìàëüíà. Íî âñëåäñòâèå âûñîêîãî ïðîöåíòà
áåëêà íà ñâîáîäíóþ îò íåãî çîíó ôîñôîëèïèäàì îñòàåòñÿ ìåíüøàÿ
÷àñòü ïîâåðõíîñòè, ÷òî è îáúÿñíÿåò íåñêîëüêî ìåíüøèé (â ñðåäíåì
~25%) ïðîöåíò ÔË â íåé ïî ñðàâíåíèþ ñ áîëåå êðóïíûìè ËÂÏ2
(~33%).
Ïî äàíûì Rye è Duong [194] êîëè÷åñòâî ôîñôîëèïèäîâ â ËÂÏ
âíîñèò îñíîâíîé âêëàä â èõ ðàçìåð è ñòðóêòóðó. Ïðè äåéñòâèè
ôîñôîëèïàçû À2, ãèäðîëèçóþùåé ÔË ïðîèñõîäèò çíà÷èòåëüíîå
óìåíüøåíèå ðàçìåðà ðåêîìáèíèðîâàííûõ ËÂÏ.
Ñâîáîäíûé õîëåñòåðèí (ïðîöåíò êîòîðîãî â ëèïîïðîòåèíàõ, â
îòëè÷èå îò ìåìáðàí êëåòîê, íåâåëèê è ñîñòàâëÿåò âñåãî 5-15 %)
ëîêàëèçóåòñÿ â îñíîâíîì â ïîâåðõíîñòíîì ìîíîñëîå, ðàñïîëàãàÿñü
ìåæäó ìîëåêóëàìè ôîñôîëèïèäîâ, êàê è â íàðóæíîì ñëîå
áèîìåìáðàí èëè ëèïîñîì. Çíà÷åíèÿ ìîëÿðíîãî îòíîøåíèÿ
"õîëåñòåðèí-ôîñôîëèïèäû",
âàæíîãî
äëÿ
ñòðóêòóðû
ôîñôîëèïèäíîãî ìîíîñëîÿ, â ËÎÍÏ è ËÍÏ áëèçêî ê òàêîâîìó äëÿ
áèîìåìáðàí - 0,7-0,8, à äëÿ ïîäôðàêöèé ËÂÏ - âäâîå íèæå.
Ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâûõ ÔË ïîäîáåí ñîñòàâó íàðóæíîãî ñëîÿ
ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê, äëÿ êîòîðîãî, õàðàêòåðíà
ïðåèìóùåñòâåííàÿ ëîêàëèçàöèÿ õîëèíñîäåðæàùèõ ôîñôîëèïèäîâ,
ÔÕ è ÑÌ (òàáë. 2.6.1) [195-199]. Â ëèïîïðîòåèíàõ, ãäå âíóòðåííåãî
ìåìáðàííîãî ñëîÿ íåò, ïî÷òè íåò è àìèíîñîäåðæàùèõ
ôîñôîëèïèäîâ, ÷òî, âîçìîæíî, ñâÿçàíî ñ êîíóñîîáðàçíîé ôîðìîé
èõ ìîëåêóë, íå ñîîòâåòñòâóþùåé âûïóêëîé ñôåðè÷åñêîé
ïîâåðõíîñòè ëèïîïðîòåèíîâ. Áîëåå 90% îò âñåõ ÔË ïðèõîäèòñÿ íà
ÔÕ, ÑÌ è ëèçîÔÕ. Â îñíîâíîì ýòî ÔÕ, äîëÿ êîòîðîãî â ñðåäíåì
âäâîå âûøå, ÷åì â áèîìåìáðàíàõ. Òàêîé ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâ
ìîæåò áûòü ñâÿçàí è ñ îñîáåííîñòÿìè èõ ñèíòåçà è ñåêðåöèè
ìåìáðàíàìè ãåïàòîöèòîâ [200].
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 2.6.1, ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå ÔË ìåæäó
îòäåëüíûìè êëàññàìè ëèïîïðîòåèíîâ âûðàæåíû íå î÷åíü ðåçêî;
íàèáîëåå ñóùåñòâåííàÿ ñïåöèôè÷åñêàÿ îñîáåííîñòü - ýòî
íåñêîëüêî áîëüøèé ïðîöåíò ñôèíãîìèåëèíà â áîãàòûõ
õîëåñòåðèíîì ËÍÏ ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè êëàññàìè
ëèïîïðîòåèíîâ, ÷òî ÿâëÿåòñÿ åùå îäíèì ïðîÿâëåíèåì
êîìïëåìåíòàðíîñòè ñôèíãîìèåëèíà è õîëåñòåðèíà.
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ñóùåñòâåííûå ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå ÔË
ìåæäó ëèïîïðîòåèíàìè â ïðèíöèïå íåâîçìîæíû èç-çà ïîñòîÿííî
èäóùèõ â êðîâÿíîì ðóñëå ïðîöåññîâ ïðåâðàùåíèÿ ëèïîïðîòåèíîâ,
òðàíñïîðòà è ïåðåõîäà àïîïðîòåèíîâ è ëèïèäîâ, âêëþ÷àÿ
èíäèâèäóàëüíûå ÔË, ñ ó÷àñòèåì ôîñôîëèïèä-òðàíñïîðòíîãî
66
Òàáëèöà 2.6.1.
Ñîñòàâ ôîñôîëèïèäîâ ëèïîïðîòåèíîâ ïëàçìû êðîâè [197 - 199]
(â % îò îáùåãî ñîäåðæàíèÿ ôîñôîëèïèäîâ)
Êëàññû
ôîñôîëèïèäîâ
Ôîñôàòèäèëõîëèí
ËÎÍÏ
[197]
76,2 ± 1,6
ËÍÏ
[198]
66,0 ± 0,2
[197]
79,2 ± 2,91
ËÂÏ
[199]
67,3 ± 3,8
Ñôèíãîìèåëèí
13,1 ± 0,4
29,2 ± 0.6
13,5 ± 0,21
15,6 ± 0,1
4,7 ± 0,2
16,2 ± 0,1*
ÐËÎÍÏ <0.05
ÐËÂÏ <0.05
3,6 ± 0,4
Ôîñôàòèäèë
ýòàíîëàìèí
Ôîñôàòèäèëñåðèí
4,8 ± 0,2**
2,3± 2,19
-
0,13 ± 0,03
0,7 ± 0,1
-
0,06 ± 0,02***
-
Ôîñôàòèäèëèíîçèò 0,41 ± 0,04
0,4 ± 0,1
-
2,81 ± 0,04
-
2,1 + 0,1.
-
0,14 ± 0,08
-
0,77 ± 0,08
-
0,4 ± 0,06***
-
Ëèçîôîñôàòèäèë õîëèí
3,2 ± 0,1
Êàðäèîëèïèí +
0,42 ± 0,04
ôîñôàòèäèëãëèöåðèí
[197]
77,1 ± 2,1
* ÐËÎÍÏ, ÐËÎÍÏ - äîñòîâåðíîñòü ïî îòíîøåíèþ ê ïðîöåíòó â ËÎÍÏ è ËÂÏ [197];
** -ÔÝ âìåñòå ñ ïëàçìàëîãåíîì
*** - äàííûå Deguchi H. Et al. [196]
(-) - èçìåðåíèÿ íå ïðîâîäèëèñü
áåëêà (ÔËÒÁ), à òàêæå îáìåíà ôîñôîëèïèäîâ ìåæäó
ëèïîïðîòåèíàìè è ìåìáðàíàìè êëåòîê [201 - 203].
Ïðèñóòñòâèå â ëèïîïðîòåèíàõ, íàðÿäó ñ õîëèíñîäåðæàùèìè
ÔË, îïòèìàëüíûìè äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ âûïóêëîãî ìîíîñëîÿ, òàêæå
è äðóãèõ êëàññîâ ôîñôîëèïèäîâ ñâÿçàíî, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, ñ
îñîáåííîñòÿìè ôîðìèðîâàíèÿ ëèïîïðîòåèíîâîé ÷àñòèöû â
ïå÷åíè, êîãäà ïîä âëèÿíèåì ñèíòåçèðîâàííûõ â êëåòêå
àïîïðîòåèíîâ ñåêâåñòèðóåòñÿ îïðåäåëåííàÿ îáëàñòü ìåìáðàíû ÝÐ
ãåïàòîöèòîâ ñî âñåìè íàõîäÿùèìèñÿ â íåé ôîñôîëèïèäàìè. Ïî
ìíåíèþ Vance è Vance [200] äëÿ ñåêðåöèè ëèïîïðîòåèíîâ
ãåïàòîöèòàìè èñïîëüçóþòñÿ ñïåöèôè÷åñêèå ïóëû ÔË, ÷òî ñâÿçàíî
ñ
ïóòÿìè
èõ
áèîñèíòåçà.
Ïðè
ýòîì
ýôôåêòèâíûì
ïðåäøåñòâåííèêîì ôîñôîëèïèäîâ ëèïîïðîòåèíîâ îêàçûâàåòñÿ íå
ÔÝ, à ÔÕ.
Âçàèìîäåéñòâèå ó÷àñòêà ìåìáðàíû ÝÐ ãåïàòîöèòà ñ
àïîïðîòåèíîì ÀI è/èëè ÀÏ ïðèâîäèò ê ñåêâåñòèðîâàíèþ è
ñåêðåöèè ó÷àñòêà ìèêðîñîìàëüíîãî ìåìáðàííîãî áèñëîÿ,
ïðèíèìàþùåãî ôîðìó ïëîñêîãî äèñêà ñ àïîïðîòåèíàìè íà
ïåðèôåðèè [204, 205] (íàçûâàåìîãî â ïîñëåäíåå âðåìÿ ïî
ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ïðå-β-ËÂÏ).  ïëàçìå îíè
ïðèîáðåòàþò ïðàêòè÷åñêè ñðàçó ñôåðè÷åñêóþ ôîðìó, çà ñ÷åò
êàòàëèçèðóåìîãî ËÕÀÒ îáðàçîâàíèÿ ýôèðîâ õîëåñòåðèíà,
67
ôîðìèðóþùèõ ñôåðè÷åñêîå ãèäðîôîáíîå ÿäðî ëèïîïðîòåèíîâîé
÷àñòèöû [206, 207].
 ïîñëåäíåå âðåìÿ ïîÿâèëèñü äîâîäû â ïîëüçó äðóãîãî,
âíåêëåòî÷íîãî ïóòè ôîðìèðîâàíèÿ ïðå-β-ËÂÏ. Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî
àïîÀ1 ìîæåò ñåêðåòèðîâàòüñÿ èç ïå÷åíè â ñâîáîäíîì ñîñòîÿíèè, èëè
ñ î÷åíü íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì ôîñôîëèïèäîâ, à îñòàëüíûå ÔË
çàáèðàþòñÿ èì ñ ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí êëåòîê ñ ïîìîùüþ ÀÒÔñâÿçûâàþùåãî òðàíñïîðòåðíîãî ìåìáðàííîãî áåëêà ÀÂÑ À1 [208,
209]. Ýòèì ìîæíî îáúÿñíèòü ïîäîáèå ñîñòàâà ôîñôîëèïèäíîãî
ìîíîñëîÿ ëèïîïðîòåèíîâ è íàðóæíîãî ñëîÿ ìåìáðàí êëåòîê.
Ïðè îáðàçîâàíèè æå ËÎÍÏ, êàê è õèëîìèêðîíîâ â êèøå÷íèêå,
ÔË âìåñòå ñ íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì àïîïðîòåèíîâ ñîçäàþò
ïîêðûâàþùóþ
ïîâåðõíîñòü
äëÿ
âûñîêî
ãèäðîôîáíûõ
òðèãëèöåðèäîâ, îáåñïå÷èâàÿ èõ ñåêðåöèþ â êðîâü â âèäå ñòàáèëüíûõ
÷àñòèö.
×òî êàñàåòñÿ òîïîãðàôèè îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË íà ïîâåðõíîñòè
ëèïîïðîòåèíà, òî îíè ðàñïîëîæåíû íå áåñïîðÿäî÷íî, à â âèäå
ñåãðåãèðîâàííûõ äîìåíîâ, ÷òî áûëî ïîêàçàíî ñ èñïîëüçîâàíèåì
ôëóîðåñöåíòíî ìå÷åííûõ ôîñôîëèïèäîâ - ÔÕ è ÑÌ [210]. Òàêæå
áûëà ïîêàçàíà âûñîêàÿ ìèêðîâÿçêîñòü ïðèìûêàþùèõ ê àïîïðîòåèíó
ìèêðîîáëàñòåé ÔË. Îäíîé èç ïðè÷èí ýòîãî ìîæåò áûòü
ýëåêòðîñòàòè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ïîëÿðíûõ àìèíîêèñëîòíûõ
îñòàòêîâ áåëêà ñ ôîñôîõîëèíîâûì ôðàãìåíòîì ÔÕ. Ðàáîòàìè
ïîñëåäíèõ ëåò ïîêàçàíà ïëàñòè÷íîñòü ñòðóêòóðû ëèïîïðîòåèíîâ,
îñîáåííî ËÂÏ, â êîòîðûõ àìôèïàòè÷åñêèå α-ñïèðàëüíûå äîìåíû
îñíîâíîãî áåëêà àïîïðîòåèíà À1, âçàèìîäåéñòâóþò ñ
ôîñôîëèïèäàìè [211, 212].
×àñòèöû ËÂÏ â ïëàçìå âûñîêî äèíàìè÷íû è ïîäâåðãàþòñÿ
ïîñòîÿííîìó ðåìîäåëèðîâàíèþ ñ ó÷àñòèåì ñïåöèôè÷åñêèõ
òðàíñïîðòíûõ è ôåðìåíòíûõ áåëêîâ ïëàçìû êðîâè è áèîìåìáðàí. Â
íàñòîÿùåå âðåìÿ ìåòîäîì ÿäåðíî-ìàãíèòíîãî ðåçîíàíñà (ßÌÐ) áûëà
ïîëó÷åíà ïîäðîáíàÿ èíôîðìàöèÿ î áåëîê-ôîñôîëèïèäíûõ
âçàèìîäåéñòâèÿõ â ËÂÏ, âêëþ÷àÿ âçàèìîäåéñòâèÿ è ñ äðóãèìè
àïîïðîòåèíàìè (ÑI, ÑII) [213]. Äëÿ áîëåå êðóïíûõ ëèïîïðîòåèíîâ ËÍÏ, íåäàâíî ïðåäëîæåíà íîâàÿ ñòðóêòóðíàÿ ìîäåëü "òðåõñëîéíàÿ", â êîòîðîé, ïîìèìî ïîâåðõíîñòè è ÿäðà, îòìå÷àåòñÿ
ïðèñóòñòâèå ïðîìåæóòî÷íîãî ñëîÿ [214]. Àâòîðû îòìå÷àþò âàæíîñòü
âêëàäà β-ñêëàä÷àòîé ñòðóêòóðû áåëêà (àïîïðîòåèíà Â) è ïîëÿðíûõ
ãîëîâîê ôîñôàòèäèëõîëèíà â ôîðìèðîâàíèå ÷åòâåðòè÷íîé
ñòðóêòóðû áåëêà. Ïðè ýòîì ïîä÷åðêèâàþòñÿ èçìåíåíèÿ
ìîëåêóëÿðíûõ õàðàêòåðèñòèê è áåëîê-ëèïèäíûõ âçàèìîäåéñòâèé â
ìîäèôèöèðîâàííûõ, íàèáîëåå àòåðîãåííûõ ÷àñòèöàõ ËÍÏ.
68
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 2.
1. Killian J.A., van Meer G. The "double life" of membrane lipids.
EMBO Reports. 2001, 21, 91-95.
2. Singer S., Nicolson G. The fluid mosaiñ model of the structure of
cell membranes. Science. 1972, 175, 720-731.
3. Íàêàãàêè Ì. Ôèçè÷åñêàÿ õèìèÿ ìåìáðàí. Ìèð, Ì. 1991, 60.
4. Ho C., Slater S.J., Stubbs C.D., Slater S.J., Stubbs C.D. Hydration
and order in lipid bilayers. Biochemistry. 1995, 34, 6188-6195.
5. Ëîïóõèí Þ.Ì., Àð÷àêîâ À.È., Âëàäèìèðîâ Þ.À., Êîãàí Ý.Ì.
Õîëåñòåðèíîç (Õîëåñòåðèí áèîìåìáðàí. Òåîðåòè÷åñêèå è
êëèíè÷åñêèå àñïåêòû). Ìåäèöèíà, Ì. 1983.
6. Dahl C., Dahl J. In: Biology of cholesterol (Yagle P.L. ed). CRC
Press, Boca Raton (Fl., USA). 1988, 147-172.
7. Ohvo-Rekila H., Ramsted B., Leppimaki P., Slotte P. Cholesterol
interaction with phospholipids in membranes. Progr Lipid Res. 2002, 41,
66-97.
8. Barenholz Y. In: Physiology of membrane fluidity (Shinitzky
M.ed). CRC Press, Boca Raton (Fl., USA). 1984, 131-173.
9. Huang J., Buboltz J.T., Feigenson G.W. Maximum solubility of
cholesterol in phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine
bilayers. Biochim Biophys Acta. 1999, 1417, 89-100.
10. Stockton B.W., Smith I.C.P. A deuterium nuclear magnetic resonance study of the condensing effect of cholesterol on egg phosphatidylcholine bilayer membranes. I. Perdeuterated fatty acid probes. Chem
Phys Lipids. 1976, 17, 251-263.
11. Yeagle P.L Cholesterol and the cell membrane. Biochim Biophys
Acta.1985, 822, 267-287.
12. Yeagle P.L. In: Cholesterol in membrane models (Finegold L. ed).
Boca Raton (Fl., USA), CRC Press. 1993, 1-12.
13. Sackmann E. In: Structure and dynamics of membranes-from
cells to vesicles (Lipowsky R., Sackmann E. eds). North-Holland. 1995,
1-65.
14. Jacobon K., Sheets E.D., Simson R. Revisiting the fluid mosaic
model of membranes. Science. 1995, 268, 1441-1442.
15. Sheets E.D., Lee G.M., Simson R., Jacobson K. Transient confinement of a glycosylphosphatidylinositol-anchored protein in the plasma
membrane. Biochemistry. 1997, 36, 12449-12458.
16. Roper K., Corbeil D., Huttner W.B. Retention of prominin in
microvilli reveals distinct cholesterol-based lipid microdomains in the
apical plasma membrane. Nat. Cell Biol. 2000, 2, 582-592.
17. Somerharju P., Virtanen J.A., Cheng K.H. Lateral organisation of
membrane lipids. The superlattice view. Biochim Biophys Acta. 1999,
1440, 32-48.
69
18. Virtanen J.A., Cheng K.H., Somerharju P. Phospholipid composition of the mammalian red cell membrane can be rationalized by a
superlattice model. Proc Nat Acad Sci USA. 1998, 95, 4964-4969.
19. Boon J.M., Smith B.D. Chemical control of phospholipid distribution across bilayer membranes. Review. Med Res Rev. 2002, 22, 251-281.
20. Kol M.A., van Laak Rijkers, Killian J.A. Phospholipid flop
induced by transmembrane peptides in model membranes is modulated
by lipid composition. Biochemistry. 2003, 42, 231-237.
21. Okeley N.M., Gelb M. H. A designed probe for acidic phospholipids reveals the unique enriched anionic character of the cytosolic face
of the mammalian plasma membrane. J Biol Chem. 2004, 279, 2183321840.
22. Op den Kamp J.A.F. Lipid asymmetry in membranes. Annu Rev
Biochem. 1979, 48, 47-71.
23. Rothman J.E., Lenard J. Membrane asymmetry. Science. 1977,
195, 743-753.
24. Bretscher M.S. Phosphatidylethanolamine: differential labelling
in intact cells and cell ghosts of human erythrocytes by a membraneimpermeable reagent. J Mol Biol. 1972, 71, 523-528.
25. Gascard P., Tran D., Sauvage M., Sulpice J.-C., Fukami K.,
Takenawa T., Claret M., Giraud F. Asymmetric distribution of phosphoinositides and phosphatidic acid in the human erythrocyte membrane.
Biochim Biophys Acta. 1991, 1069, 27-36.
26. Butikofer P., Lin Z.W, Chiu D.T-Y., Kuypers F.A. Transbilayer
distribution and mobility of phosphatidylinositol in human red blood
cells. J Biol Chem. 1990, 265, 16035-16038.
27. Kato N., Nakanishi M., Hirashima N. Transbilayer asymmetry of
phospholipids in plasma membrane rergulates exocytotic release in mast
cells. Biochemistry. 2002, 41, 8068-8074.
28. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton
D.L., Henson P.M. Exposure of phosphatidylserine on the surface of
apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by
macrophages. J Immunol. 1992, 148, 2207-2216.
29. Bevers E.M., Comfurius P., van Rijn J.L., Hemker H.C., Zwaal
R.F. Generation of prothrombin-converting activity and the exposure of
phosphatidylserine at the outer surface of platelets. Eur J Biochem. 1982,
122, 429-436.
30. Lubin B., Chiu D., Bastacky J., Roelofsen B., van Deenen L.L.
Abnormalities in membrane phospholipid organization in sickled erythrocytes. J Clin Invest. 1981, 67, 1643-1649.
31. Schlegel R.A., McEvoy L., Williamson P. Membrane phospholipid asymmetry and the adherence of loaded red blood cells. Bibl
Haematol. 1985, 51, 150-156.
70
32. Wali R.K., Jaffe S., Kumar D., Sorgente N., Kalra V.K. Increased
adherence of oxidant treated human and bovine erythrocytes to cultured
endothelial cells. J Cell Physiol. 1987, 133, 25-33.
33. Fadok V.A., Bratton D.L., Henson P.M. Phagocyte receptors for
apoptotic cells: recognition, uptake, and consequences. J Clin Invest.
2001, 108, 957-962.
34. Fadok V.A., Bratton D.L., Frasch S.C., Warner M.L., Henson P.M.
The role of phosphatidylserine in recognition of apoptotic cells by
phagocytes. Cell Death Differ. 1998, 5, 551-562.
35. Wilson M.J., Richter-Lowney K., Daleke D.L. Hyperglycemia
induces a loss of phospholipid asymmetry in human erythrocytes.
Biochemistry. 1993, 32, 11302-1131.
36. Wali R.K., Jaffe S., Kumar D., Kalra V.K. Alterations in organization of phospholipids in erythrocytes as a factor in adherence to
endothelial cells in diabetes mellitus. Diabetes. 1988, 37, 104-111.
37. Pomorski T., Hrafnsdottir S., Devaux P.F., van Meer G. Lipid distribution and transport across cellular membranes. Semin Cell Dev Biol.
2001, 12, 139-148.
38. Borst P., Zelcer N., van Helvoort A. ABC transporters in lipid
transport. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 128-144.
39. Borst P., Elferink R.O. Mammalian abc transporters in health and
disease. Annu Rev Biochem. 2002, 71, 537-592.
40. Bevers E.M., Comfurius P., Dekkers D.W., Zwaal R. F. Lipid
translocation across the plasma membrane of mammalian cells. Biochim
Biophys Acta. 1999, 1439, 317-330.
41. Zwaal R.F., Schroit A.J. Pathophysiologic implications of membrane phospholipid asymmetry in blood cells. Blood. 1997, 89, 11211132.
42. Schlegel R.A., Williamson P. Phosphatidylserine, a death knell.
Cell Death Differ. 2001, 8, 551-563.
43. Voelker D.R. New perspectives on the regulation of intermembrane glycerophospholipid traffic. J Lipid Res. 2003, 44, 441-449.
44. Bell R. M., Ballas L.M., Coleman R.A. Lipid topogenesis. J Lipid
Res. 1981, 22, 391-403.
45. Daleke D.L., Huestis W.H. Incorporation and translocation of
aminophospholipids in human erythrocytes. Biochemistry. 1985, 24,
5406-5416.
46. Ferrell J.E., Lee K. J., Huestis W.H. Membrane bilayer balance
and erythrocyte shape: a quantitative assessment. Biochemistry. 1985,
24, 2849-2857.
47. Bishop W.R., Bell R.M. Assembly of the endoplasmic reticulum
phospholipid bilayer: The phosphatidylcholine transporter. Cell. 1985,
42, 51-60.
71
48. Buton X., Morrot G., Fellmann P., Seigneuret M. Ultrafast glycerophospholipid-selective transbilayer motion mediated by a protein in
the endoplasmic reticulum membrane. J Biol Chem. 1996, 271, 66516657.
49. Zachowski A. Phospholipids in animal eukaryotic membranes:
transverse asymmetry and movement. Biochem J. 1993, 294, 1-14.
50. Pomorski T., Muller P., Zimmermann B., Burger K., Devaux P.F.,
Herrmann A. Transbilayer movement of fluorescent and spin-labeled
phospholipids in plasma membrane of human fibroblasts: a quantitative
approach. J Cell Sci. 1996, 109, 687-698.
51. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry. J Lipid Res. 2003, 44, 233-242.
52. Wang L., Beserra C., Garbers D.L. A novel aminophospholipid
transporter exclusively expressed in spermatozoa is required for membrane lipid asymmetry and normal fertilization. Dev Biol. 2004, 267,
203-215.
53. Oram J.F., Wolfbauer G., Vaughan A.M., Tang C., Albers J.J.
Phospholipid transfer protein interacts with and stabilizes ATP-binding
cassette transporter A1 and enhances cholesterol efflux from cells. J Biol
Chem. 2003, 278, 52379-52385.
54. Paterson J., Zimmerman M., Lyles J., Lee C-W., Halleck M.,
Williamson P., Schlegel R., Daleke D.L. Lipid specificity of candidate
flippases. Biophys J. 2001, 80, 256.
55. Tang X., Halleck M.S., Schlegel R.A., Williamson P. A subfamily
of P-type ÀTPases with aminophospholipid transporting activity.
Science. 1996, 272, 1495-1497.
56. Ding J., Wu Z., Crider B.P., Ma Y., Li X., Slaughter C., Gong L.,
Xie X.S. Identification and functional expression of four isoforms of
ATPase II, the putative aminophospholipid translocase. Effect of isoform
variation on the ATPase activity and phospholipid specificity. J Biol
Chem. 2000, 275, 23378-23386.
57. Morrot G., Zachowski A., Devaux P.F. Partial purification of the
human erythrocyte Mg2+-ATPase. A candidate aminophospholipid
translocase. FEBS Lett. 1990, 266, 29-32.
58. Allikmets R., Shroyer N.F., Singh N., Seddon J.M., Lewis R.A.,
Bernstein P.S., Peiffer A., Zabriskie N.A., Li Y., Hutchinson A., Dean M.,
Lupski J.R., Leppert M. Mutation of the Stargardt disease gene (ABCR)
in age-related macular degeneration. Science. 1997, 277, 1805-1807.
59. Oram J.F., Lawn R.M. ABCA1: the gatekeeper for eliminating
excess tissue cholesterol. J Lipid Res. 2001, 42, 1173-1174.
60. Attie A.D., Kastelen J.P., Heyden M.R. Pivotal role of ABCA1 in
reverse cholesterol transport. J Lipid Res. 2001, 42, 1717-1726.
61. Santamarina-Foyo S., Remaley A.T., Neufeld E.B., Brewer H.B.
72
Regulation and intracellular trafficking of the ABCA1 transporter. J
Lipid Res. 2001, 42, 1339-1345.
62. Wang Nan, Silver D.L., Thiele C., Tall A.R. ATP-binding Cassette
Transporter A1 (ABCA1) Functions as a Cholesterol Efflux Regulatory
Protein. J Biol Chem. 2001, 276, 23742-23747.
63. Hovingh G.K., van Wijland M.J.A., Drownlie A., Bisoendial R.J.,
Heyden M.R. The role of ABCA1 transporter and cholesterol efflux in
familial hypoalphalipoproteinemia. J Lipid Res. 2003, 44, 1251-1255.
64. van Helvoort A., Smith A.J., Sprong H., Fritzsche I., Schinkel
A.H., Borst P., van Meer G. MDR1 P-glycoprotein is a lipid translocase
of broad specificity, while MDR3 P-glycoprotein specifically translocates phosphatidylcholine. Cell. 1996, 87, 507-517.
65. Dean M., Hamon Y., Chimini G. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. J Lipid Res. 2001, 42, 1007-1017.
66. Smit, J.J., Schinkel A.H., Mol C.A., Majoor D., Mooi W.J.,
Jongsma A.P., Lincke C.R., Borst P. Tissue distribution of the human
MDR3 P-glycoprotein. Lab. Invest. 1994, 71, 638-649.
67. Zhou Q., Zhao J., Stout J.G., Luhm R.A., Wiedmer T., Sims P.J.
Molecular cloning of human plasma membrane phospholipid scramblase. A protein mediating transbilayer movement of plasma membrane
phospholipids. J Biol Chem.1997, 272, 18240-18244.
68. Sims P.J., Wiedmer T. Unraveling the mysteries of phospholipid
scrambling. Thromb Haemost. 2001, 86, 266-275.
69. Chang Q.L., Gummadi S.N., Menon A.K. Chemical modification
identifies two populations of glycerophospholipid flippase in rat liver
ER. Biochemistry. 2004, 43, 10710-10718.
70. Êàãàâà ßñóî. Áèîìåìáðàíû. Âûñø. Øê., Ì. 1985, 52-55.
71. Êðàâöîâ À.Â., Àëåêñååíêî È.Ð. Ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè
âåêòîðíûõ ôåðìåíòîâ áèîìåìáðàí. Êèåâ, Íàóêîâà Äóìêà. 1990.
72. Comfurius P., Williamson P., Smeets E.F., Schlegel E.A., Bevers
E.M., Zwaal R.F. Reconstitution of phospholipid scramblase activity
from human blood platelets. Biochemistry. 1996, 35, 7631-7634.
73. Makowski P., Makush R., Sikorski A.F., Jezierski A., Pikula S.,
Dabrowska R. Interaction of caldesmon with ER membrane: effect on
the mobility of phospholipids in membrane and on the phosphatidylserine base-exchange reaction. Biochem J. 1997, 328, 509-505.
74. Wilschut I., Duzgunes N., Hoekstra D., Papahadjopoulos B.
Modulation of membrane fusion by membrane fluidity: temperature
dependens of divalent cation induced fusion of phosphatidylserine vesicles. J Biochemistry. 1985, 24, 8-14.
75. Lee A.G. Lipid-protein interactions in biological membranes: a
structural perspective. Biochim Biophys Acta. 2003, 1612, 1-40.
76. May S., Ben-Shaul A. Molecular theory of lipid-protein interac73
tion and the L -HII transition. Biophys J. 1999, 76, 751-767.
77. Santiago-Garcia J., Delgado-Coello B.A., Mas-Oliva J. Thermal
analysis of the plasma membrane Ca2+-ATPase. Mol Cell Biochem. 2000,
209, 105-112.
78. Hatch G.M. Cell biology of cardiac mitochondrial phospholipids.
Biochem Cell Biol. 2004, 82, 99-112.
79. Laird D.M., Parce J.W., Montgomery R.I., Cunningham C.C.
Effect of phospholipids on the catalytic subunits of the mitochondrial
F0.F1-ATPase. J Biol Chem. 1986, 261, 14851-14856.
80. Ross G.F., Notter R.H., Meuth J., Whitsett J.A. Phospholipid
binding and biological activity of pulmonary surfactant-associated protein (SAP)-35 and its non-collagenous COOH-terminal domains. J Biol
Chem. 1986, 261, 14283-14291.
81. Magzoub M., Eriksson L.E., Graslund A. Conformational states pf
the cell-penetrating peptide penetretin when interacting with phospholipid vesicles: effect of surface charge and peptide concentration.
Biochim Biophys Acta. 2002, 1563, 53-63.
82. Knoll W., Frank C.W., Heibel C., Naumann R., Offenhausser A.,
Ruhe J., Schmidt E.K., Shen W.W., Sinner A. Functional tethered lipid
bilayers. J Biotechnol. 2000, 74, 137-158.
83. Äåðãóíîâ À.Ä., Êàïðåëüÿíö À.Ñ., Îñòðîâñêèé Ä.Í. Áåëîêëèïèäíûå
âçàèìîäåéñòâèÿ
è
ôóíêöèîíèðîâàíèå
ìåìáðàíîñâÿçàííûõ ôåðìåíòîâ. Óñïåõè áèîë õèìèè. 1984, 25, 89109.
84. Bogdanov M., Dowhan W., Lipid-assisted protein folding. J Biol
Chem. 1999, 274, 36827-36830.
85. Kaibuchi K., Takai Y., Nishizuka Y. Cooperative role of various
membrane phospholipids in the activation of Ca-activated, phospholipid
dependent proteinkinase. J Biol Chem. 1981, 256, 7146-7149.
86. Rao L.V., Hoang A.D., Rapaport S.I. Mechanism of effects of the
binding of lupus anticoagulant JgG and protrombin to surface phospholipid. Blood. 1996, 88, 4173-4182.
87. Lambers J.W., Cammenga M., Konig B.W., Mertens K.,
Pannekoek H, van Mourik J.A. Activation of human entothelal cell-type
plasminogen activator inhibitor (PAI-1) by negative charged phospholipids. J Biol Chem. 1987, 262, 17492-17496.
88. Gilbert G.E., Furie B.C., Furie B. Binding of human factor VIII to
phospholipid vesicles. J Biol Chem. 1990, 265, 815-822.
89. Sweet L.J., Dudley D.T., Pessin J.E., Spector A.A. Phospholipid
activation of the insulin receptor kinase by phosphatidylinositol. FASEB
J. 1987, 1, 55-59.
90. Imai T., Kageyama Y., Tobari J. Mycobacterium smegmatis
malate dehydrogenase: activation of the lipid-dependent enzyme by
74
anionic phospholipids and phosphatidylethanolamine. Biochim Biophys
Acta. 1995, 1246, 189-196.
91. Brown R.E. Sphingolipid organization in biomembranes: what
physical studies of model membranes reveal. J Cell Sci. 1998, 111, 1-9.
92. Brown D.A., London E. Structure and function of sphingolipidand cholesterol-rich membrane rafts. J Biol Chem. 2000, 275, 1722117224.
93. Simons K., Ikonen E. Functional rafts in cell membranes. Nature.
1997, 387, 569-572.
94. Brown D.A., London E. Functions of lipid rafts in biological
membranes. Annu Rev Cell Dev Biol. 1998, 14, 111-136.
95. Rietveld A., Simons K. The differential miscibility of lipids as the
basis for the formation of functional membrane rafts. Biochim Biophys
Acta. 1998, 1376, 467-479.
96. Israelachvili J.N., Marcelja S., Horn R.G. Physical principles of
membrane organization. Q Rev Biophys. 1980, 13, 121-200.
97. Brugger B., Sandhoff R., Wegehingel S., Gorgas K., Malsam J.,
Helms J.B., Lehmann W.D., Nickel W., Wieland F.T. Evidence for segregation of sphingomyelin and cholesterol during formation of COPIcoated vesicles. J Cell Biol. 2000, 151, 507-518.
98. London E., Brown D.A. Insolubility of lipids in triton X-100:
physical origin and relationship to sphingolipid/cholesterol membrane
domains (rafts). Biochim Biophys Acta. 2000, 1508, 182-195.
99. Pralle A., Keller P., Florin E-L., Simons K., Horber J. K. H.
Sphingolipid-cholesterol rafts diffuse as small entities in the plasma
membrane of mammalian cells. J Cell Biol. 2000, 148, 997-1008.
100. Jacques F., Garmy N., Mahfoud R., Yahi N. Lipid rafts: structure,
function and role in HIV, Alzheimer's and prion diseases. Cambridge
University Press. 2002.
101. Pike L.J. Lipid rafts: bringing order to chaos. J Lipid Res. 2003,
44, 655-667.
102. Friedrichson T., Kurzchalia T. V. Microdomains of GPIanchored proteins in living cells revealed by crosslinking. Nature. 1998,
394, 802-805.
103. Varma R., Mayor S. GPI-anchored proteins are organized in
submicron domains at the cell surface. Nature. 1998, 394, 798-801.
104. Galbiati F., Razani B., Lisanti M. P. Emerging themes in lipid
rafts and caveolae. Cell. 2001, 106, 403-411.
105. Zajchowski L.D., Robbins S.M. Lipid rafts and little caves.
Compartmentalized signalling in membrane microdomains. Eur J
Biochem. 2002, 269, 737-752.
106. Gargalovic P., Dory L. Caveolins and macrophage lipid metabolism. J Lipid Res. 2003, 44, 11-21.
75
107. Dupree P., Parton R. G., Raposo G.,. Kurzchalia T. V., Simons K.
Caveolae and sorting in the trans-Golgi network of epithelial cells.
EMBO J. 1993, 12, 1597-1605.
108. Anderson R.G.W. The caveolae membrane system. Annu Rev
Biochem. 1998, 67, 199-225.
109. Mirre C., Monlauzeur L., Garcia M., Delgrossi M.-H., Le Bivic A.
Detergent-resistant membrane microdomains from Caco-2 cells do not
contain ñaveolin. Am. Physiol. 1996, 271, 887-894.
110. Riddell D.R, Christie G., Hussain I., Dingwall C.
Compartmentalization of beta-secretase (Asp2) into low-buoyant density, noncaveolar lipid rafts. Curr Biol. 2001, 11, 1288-1293.
111. Rothberg K.G., Heuser J.E., Donzell W.C., Ying Y.-S., Glenney
J.R., Anderson R.G.W. Caveolin, a protein component of caveolae membrane coats. Cell. 1992, 68, 673-682.
112. Scherer P.E., Okamoto T., Chum M., Nishimoto I., Lodish H.F.,
Lisanti M.P. Identication, sequence, and expression of caveolin-2 genes
a caveolin gene family. Proc Natl Acad Sci USA. 1996, 93, 131-135.
113. Tang Z., Scherer P.E., Okamoto T., Song K., Chu C., Kohtz S.,
Nishimoto I., Lodish H.F., Lisanti M.P. Molecular cloning of caveolin-3,
a novel member of the caveolin gene family expressed predominantly in
muscle. J Biol Chem. 1996, 271, 2255-2261.
114. Bickel P.E., Scherer P.E., Schnitzer J.E., Oh P., Lisanti M.P.,
Lodish H.F. Flotillin and epidermal surface antigen a new family of caveolae-associated integral membrane proteins. J Biol Chem. 1997, 272,
13793-13802.
115. Harder T., Schei.ele P., Verkade P., Simons K. Lipid domain
structure of the plasma membrane revealed by patching of membrane
components. J Cell Biol. 1998, 141, 929-942.
116. Iwabuchi K., Handa K., Hakomori S. Separation of 'glycosphingolipid signaling domain' from caveolin-containing membrane fraction
in mouse melanoma B16 cells and its role in cell adhesion coupled with
signalling. J Biol Chem. 1998, 273, 33766-33773.
117. Chan B.L., Chao M.V., Saltiel A.R. Nerve growth factor stimulates the hydrolysis of glycosyl-phosphatidylinositol in PC-12 cells: a
mechanism of protein kinase C regulation. Proc Natl Acad Sci USA.
1989, 86, 1756-1760.
118. Gumbleton M., Abulrob A.G., Campbell L. Caveolae: an alternative membrane transport compartment. Pharm Res. 2000, 17, 10351048.
119. Shin J.S., Abraham S.N. Caveolae as portals of entry for
microbes. Microbes Infect. 2001, 3, 755-761.
120. Mukherjee S., Maxfield F.R. Role of membrane organization and
membrane domains in endocytic lipid trafficking. Traffic. 2000, 1, 20376
211.
121. Swaminathan S., Eswaramoorthy S. Structural analysis of the
catalytic and binding sites of Clostridium botulinum neurotoxin B. Nat
Struct Biol. 2000, 7, 693-699.
122.Triantafilou K., Triantafilou M. Lipid-raft-dependent
Coxsackievirus B4 internalization and rapid targeting to the Golgi.
Virology. 2004, 326, 6-19.
123. Bavari S., Bosio C.M., Wiegand E., Ruthel G., Will AB., Geisbert
T.W., Hevey M., Schmaljohn C., Schmaljohn A., Aman M.J. Lipid raft
microdomains: a gateway for compartmentalized trafficking of Ebola
and Marburg viruses. J Exp Med. 2002, 195, 593-602.
124. Hao M., Mukherjee S., Maxfield F.R. Cholesterol depletion
induces large scale domain segregation in living cell membranes. Proc
Natl Acad Sci. USA. 2001, 98, 13072-13077.
125. Tall A.R., Costet P., Wang N. Regulation and mechanisms of
macrophage cholesterol efflux. J Clin Invest. 2002, 110, 899-904.
126. Fielding C.J., Fielding P.E. Cholesterol and caveolae: structural
and functional relationships. Biochim Biophys Acta. 2000, 1529, 210222.
127. Isshiki M., Anderson R.G.W. Calcium signal transduction from
caveolae. Cell Calcium. 1999, 26, 201-208.
128. Slimane T.A., Trugnan G. Mechanisms of sorting and transport
of proteins to tw membrane domains of epithelial cells. J Soc Biol. 2003,
197, 211-216.
129. Brown D.A., Rose J.K. Sorting of GPI-anchored proteins to glycolipid-enriched membrane subdomains during transport to the apical
cell surface. Cell. 1992, 68, 533-544.
130. Van Ijzendoorn S.C.D., Hoekstra D. The sub-apical compartment: a novel sorting center? Trends Cell Biol. 1999, 9, 144-149.
131. Simons K., Toomre D. Lipid rafts and signal transduction. Nat
Rev Mol Cell Biol. 2000, 1, 31-41.
132. Drevot P., Langlet C., Guo X-J., Bernard A-M., Colard O.,
Chauvin J-P., Lasserre R., He H-T. TCR signal initiation machinery is
pre-assembled and activated in a subset of membrane rafts. EMBO J.
2002, 21, 1899-1908.
133. Sanghera N., Pinheiro T.J. Binding of prion protein to lipid
membranes and implications for prion conversion. J Mol Biol. 2002, 315,
1241-1256.
134. Kakio A., Nishimoto S., Yanagisawa K., Kozutsumi Y.,
Matsuzaki K. Interactions of amyloid beta-protein with various gangliosides in raftlike membranes: importance of GM1 ganglioside-bound
form as an endogenous seed for Alzheimer amyloid. Biochemistry. 2002,
41, 7385-7390.
77
135. Wu C., Butz S., Ying Y., Anderson R.G.W. Tyrosine kinase
receptors concentrated in caveolae-like domains from neuronal plasma
membrane. J Biol Chem.1997, 272, 3554-3559.
136. Hope H.R., Pike L.J. Phosphoinositides and phosphoinositideutilizing enzymes in detergent-insoluble lipid domains. Mol Biol Cell.
1996, 7, 843-851.
137. Helms J.B., Zurzolo C. Lipids as targeting signals: lipid rafts and
intracellular trafficking. Traffic. 2004, 5, 247-254.
138. Muppidi J.R., Tschopp J., Siegel R.M. Life and death decisions:
secondary complexes and lipid rafts in TNF receptor family signal transduction. Immunity. 2004, 21, 461-465.
139. Langlet C., Bernard A. M., Drevot P., He H. T. Membrane rafts
and signaling by the multichain immune recognition receptors. Curr
Opin Immunol. 2000, 12, 250-255.
140. Leo A., Schraven B. Adapters in lymphocyte signalling. Curr
Opin Immunol. 2001, 13, 307-316.
141. Inagaki N., Ito M., Nakano T., Inagaki M. Spatio-temporal distribution of protein kinase and phosphatase activities. Trends Biochem
Sci. 1994, 19, 448-452.
142. Lin J., Weiss A., Finco T.S. Localization of LAT in glycolipidenriched microdomains is required for T cell activation. J Biol Chem. 1999,
274, 28861-28864.
143. Chun M., Liyanage U.K., Lisanti M.P., Lodish H.F. Signal transduction of a G protein-coupled receptor in caveolae: colocalization of
endothelin and its receptor with caveolin. Proc Natl Acad Sci USA. 1994,
91, 11728-11732.
144. Moffett S., Brown D.A., Linder M.E. Lipid-dependent targeting
of G proteins into rafts. J Biol Chem. 2000, 275, 2191-2198.
145. Yamabhai M., Anderson R.G.W. Second cysteine-rich region of
EGFR contains targeting information for caveolae/rafts. J Biol Chem.
2002, 277, 24843-24846.
146. Waugh M.G., Lawson D., Hsuan J.J. Epidermal growth factor
receptor activation is localized within low buoyant density, non-caveolar membrane domains. Biochem J. 1999, 337, 591-597.
147. Pike L. J., Casey L. Cholesterol levels modulate EGF receptormediated signaling by altering receptor function and trafficking.
Biochemistry. 2002, 41, 10315-10322.
148. Chatterjee S., Smith E.R., Hanada K., Stevens V.L., Mayor S. GPI
anchoring leads to sphingolipid-dependent retention of endocytosed
proteins in the recycling endosomal compartment. EMBO J. 2001, 20,
1583-1592.
149. Lipardi C., Nitsch L., Zurzolo C. Detergent-insoluble GPIanchored proteins are apically sorted in Fischer rat thyroid cells, but
78
interference with cholesterol or sphingolipids differentially affects
detergent insolubility and apical sorting. Mol Biol Cell. 2000, 11, 531542.
150. Millan J., Alonso M.A. MAL, a novel integral membrane protein
of human T lymphocytes, associates with glycosylphosphatidylinositol
anchored proteins and Src-like tyrosine kinases. Eur J Immunol. 1998,
28, 3675-3684.
151. Gustavsson J., Parpal S., Karlsson M., Ramsing C., Thorn H.,
Borg M., Lindroth M., Holmgren P.K., Magnusson K.-E., Stralfors P.
Localization of the insulin receptor in caveolae of adipocyte plasma
membrane. FASEB J. 1999, 13, 1961-1971.
152. Davy A., Feuerstein C., Robbins S.M. Signaling within a caveolae-like membrane microdomain in human neuroblas-toma cells in
response to fibroblast growth factor. J Neurochem. 2000, 74, 676-683.
153. Prieschl E.E., Baumruker T. Sphingolipids: second messengers,
mediators and raft constituents in signaling. Immunol Today. 2000, 21,
555-560.
154. Alonso M. A., Millan J. The role of lipid rafts in signalling and
membrane trafficking in T lymphocytes. J Cell Sci. 2001, 114, 3957-3965.
155. Janes P.W., Ley S.C., Magee A.I., Kabouridis P.S. The role of
lipid rafts in T cell antigen receptor (TCR) signaling. Semin. Immunol.
2000, 12, 23-34.
156. Schmidt C.E., Horwitz A.F., Lauffenburger D.A., Sheetz M.P.
Integrin-cytoskeletal interactions in migrating fibroblasts are dynamic,
asymmetric, and regulated. J Cell Biol. 1993, 123, 977-991.
157. Adams J.C. Molecular organisation of cellmatrix contacts: essential multiprotein assemblies in cell and tissue function. Expert Rev Mol
Med, 2002, Feb., 1-24.
158. Brown D.A., London E. Functions of lipid rafts in biological
membranes. Annu Rev Cell Dev Biol. 1998, 14, 111-136.
159. Maines S., Mira E., Ga³mez-Mout³n C., Lacalle R.A., Keller P.,
Labrador J.P., Martinez A.C. Membrane raft microdomains mediate
front-rear polarity in migrating cells. EMBO J. 1999, 18, 6211-6220.
160. Wolf A.A., Fujinaga Y., Lencer W.I. Uncoupling of the cholera
toxin-G(M1) ganglioside receptor complex from endocytosis, retrograde
Golgi trafficking, and downstream signal transduction by depletion of
membrane cholesterol. J Biol Chem. 2002, 277, 16249-16256.
161. Kovbasnjuk O., Edidin M., Donowitz M. Role of lipid rafts in
Shiga toxin 1 interaction with the apical surface of Caco-2 cells. J Cell
Sci. 2002, 114, 4025-4031.
162. Keller P., Simons K. Cholesterol is required for surface transport
of influenza virus hemagglutinin. J Cell Biol. 1998, 140, 1357-1367.
163. Bomsel M., Alfsen A. Entry of viruses through the epithelial bar79
rier: pathogenic trickery. Nat Rev Mol Cell Biol. 2003, 4, 57-68.
164. Simons K., Ehehalt R. Cholesterol, lipid rafts, and disease. J Clin
Invest. 2002, 110, 597-603.
165. Montecucco C. How do tetanus and botulinum toxins bind to
neuronal membranes? Trends Biochem Sci. 1986, 11, 314-317.
166. Nishiki T., Tokuyama Y., Kamata Y., Nemoto Y., Yoshida A.,
Sato K., Sekiguchi M., Takahashi M., Kozaki S The high-affinity binding
of Clostridium botulinum type B neurotoxin to synaptotagmin II associated with gangliosides GT1b/GD1a. FEBS Lett. 1996, 378, 253-257.
167. Fantini J., Hammache D., Pieroni G., Yahi N. Role of glycosphingolipid microdomains in CD4-dependent HIV-1 fusion. Glycoconj J.
2000, 17, 199-204.
168. Lingwood C.A. Glycolipid receptors for verotoxin and
Helicobacter pylori: role in pathology. Biochim Biophys Acta. 1999,
1455, 375-386.
169. Falguieres T., Mallard F., Baron C., Hanau D., Lingwood C.,
Goud B. Salamero J., Johannes L. Targeting of Shiga toxin B-subunit to
retrograde transport route in association with detergent-resistant membranes. Mol Biol Cell. 2001, 12, 2453-2468.
170. Bagnat M., Keranen S., Shevchenko A., Simons K. Lipid rafts
function in biosynthetic delivery of proteins to the cell surface in yeast.
Proc Natl Acad Sci USA. 2000, 97, 3254-3259.
171. Hammache D., Yahi N., Maresca M., Pieroni G., Fantini J.
Human erythrocyte glycosphingolipids as alternative cofactors for
human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) entry: evidence for
CD4-induced interactions between HIV-1 gp120 and reconstituted
membrane microdomains of glycosphingolipids (Gb3 and GM3). J Virol.
1999, 73, 5244-5248.
172. Puri A., Hug P., Jernigan K., Barchi J., Kim H.Y., Hamilton J.,
Wiels J., Murray G.J., Brady R.O., Blumenthal R. The neutral glycosphingolipid globotriaosylceramide promotes fusion mediated by a CD4dependent CXCR4-utilizing HIV type 1 envelope glycoprotein. Proc
Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 14435-14440.
173. Hug P., Lin H.M., Korte T., Xiao X., Dimitrov D.S., Wang J.M.,
Puri A., Blumenthal R. Glycosphingolipids promote entry of a broad
range of human immunodeficiency virus type 1 isolates into cell lines
expressing CD4, CXCR4, and/or CCR5. J Virol. 2000, 74, 6377-6385.
174. Kozak S.L., Heard J.M., Kabat D. Segregation of CD4 and CXCR4
into distinct lipid microdomains in T lymphocytes suggests a mechanism
for membrane destabilization by human immunodeficiency virus. J
Virol. 2002, 76, 1802-1815.
175. Manes S., del Real G., Lacalle R.A., Lucas P., Gomez-Mouton C.,
Sanchez-Palomino S., Delgado R., Alcami J., Mira E., Martinez A.C.
80
Membrane raft microdomains mediate lateral assemblies required for
HIV-1 infection. EMBO Repors. 2000, 1, 190-196.
176. Liao Z., Cimakasky L.M., Hampton R., Nguyen D.H., Hildreth
J.E. Lipid rafts and HIV pathogenesis: host membrane cholesterol is
required for infection by HIV type 1. AIDS Res Hum Retroviruses. 2001,
17, 1009-1019.
177. Popik W., Alce T.M., Au W.C. Human immunodeficiency virus
type 1 uses lipid raft-colocalized CD4 and chemokine receptors for productive entry into CD4(+) T cells. J Virol. 2002, 76, 4709-4722.
178. Meng G., Wei X., Wu X., Sellers M.T., Decker J.M., Moldoveanu
Z., Orenstein J.M., Graham M.F., Kappes J.C., Mestecky J., Shaw G.M.,
Smith P.D. Primary intestinal epithelial cells selectively transfer R5
HIV-1 to CCR5+ cells. Nat Med. 2002, 8, 150-156.
179. Fantini J., Maresca M., Hammache D., Yahi N., Delezay O.
Glycosphingolipid (GSL)microdomains as attachment platforms for host
pathogens and their toxins on intestinal epithelial cells: activation of signal transduction pathways and perturbations of intestinal absorption
and secretion. Glycoconj J. 2000, 17, 173-179.
180. Clayton F., Kotler D.P., Kuwada S.K., Morgan T., Stepan C.,
Kuang J., Le J., Fantini J. Gp120-induced Bob/GPR15 activation: a possible cause of human immunodeficiency virus enteropathy. Am J Pathol.
2001, 159, 1933-1939.
181. Fantini, J., Hammache D., Delezay O., Yahi N., Andre-Barres Ñ.,
Rico-Lattes I., Lattes A. 1997 Synthetic soluble analogs of galactosylceramide (GalCer) bind to the V3 domain of HIV-1 gp120 and inhibit
HIV-1-induced fusion and entry. J Biol Chem. 2001, 272, 7245-7252.
182. Fantini J. Synthetic soluble analogs of glycolipids for studies of
virus-glycolipid interactions. Methods Enzymol. 2000, 311, 626-638.
183. Mulvey G., Kitov P.I., Marcato P., Bundle D.R., Armstrong G.D.
Glycan mimicry as a basis for novel anti-infective drugs. Biochimie.
2001, 83, 841-847.
184. Mylvaganam M., Lingwood C.A. Adamantyl globotriaosyl
ceramide: a monovalent soluble mimic which inhibits verotoxin binding
to its glycolipid receptor. Biochem Biophys Res Commun. 1999, 257,
391-394.
185. Soto C. Plaque busters: strategies to inhibit amyloid formation in
Alzheimer's disease. Mol Med Today. 1999, 5, 343-350.
186. Soto C., Kascsak R.J., Saborio G.P., Aucouturier P., Wisniewski
T., Prelli F., Kascsak R., Mendez E., Harris DA., Ironside J., Tagliavini F.,
Carp R.I., Frangione B. Reversion of prion protein conformational
changes by synthetic beta-sheet breaker peptides. Lancet. 2000, 355,
192-197.
187. Golde T.E., Eckman C.B. Cholesterol modulation as an emerging
81
strategy for the treatment of Alzheimer's disease. Drug Discov Today.
2001, 6, 1049-1055.
188. Scanu A. Phospholipids in serum lipoproteins. In: Phospholipids
and atherosclerosis (Avogaro H., Catapano A. eds). Raven Press, N.Y.
1983, 91-97.
189. Pownall H.J., Gotto A.M. Structure and function of plasma
lipoproteins. In: Phospholipids and atherosclerosis (Avogaro H.,
Catapano A. eds). Raven Press, N.Y. 1983, 99-114.
190. Êëèìîâ À.Í. Àòåðîñêëåðîç. Â êí. Ïðåâåíòèâíàÿ
êàðäèîëîãèÿ (ðåä. Ã.È. Êîñèöêèé). Ìåäèöèíà, Ì. 1987, 239-315.
191. Êëèìîâ À.Í., Íèêóëü÷åâà Í.Ã. Îáìåí ëèïèäîâ è
ëèïîïðîòåèäîâ è åãî íàðóøåíèÿ. Ïèòåð, Ñ.-Ï. 1999, 137-239.
192. Griffin J.H., Fernandez J.A., Deguchi H. Plasma lipoproteins,
hemostasis and thrombosis. Thromb Haemost. 2001, 86, 386-94.
193. Carpentier Y.A., Scruel O. Changes in the concentration and
composition of plasma lipoproteins during the acute phase response.
Curr Opin Clin Nutr Metab Care. 2002, 5, 153-158.
194. Rye K.-A., Duong My Ngan. Influence of phospholipid depletion on the size, structure, and remodeling of reconstituted high density
lipoproteins. J Lipid Res. 2000, 41, 1640-1650.
195. Zhang W., Asztalos B., Roheim P., Wong L. Characterization of
phospholipids in pre- HDL: selective phospholipid efflux with apo A1.
J Lipid Res. 1998, 39, 1601-1607.
196. Deguchi H., Fernandez J., Hackeng T., Banka C., Griffin J.
Cardiolipin is a normal component of human plasma lipoproteins. Proc
Natl Acad Sci USA. 2000, 97, 1743-1748.
197. Subbaiah P.V. In: Book of lipoprotein testing. (Rifai N., Warnik
G. eds). AACC, Washington, DC. 1997, 415-429.
198. Sommer À., Prernner E., Gorges R., Stutz H., Grillhofer H.,
Kostner G.M., Paltauf F., Hermetter A. Organization of phosphatidylcholine and sphingomyelin in surface monolayer of LDL and lipoprotein(a) as determined by time-resolved fluorometry. J Biol Chem. 1992,
267, 24217-24222.
199. Îçåðîâà È.Í., Ïàðàìîíîâà È.Â., Îëôåðüåâ À.Ì.,
Àõìåäæàíîâ Í.Ì., Àëåêñàíäðîâà Ì.À., Ïåðîâà Í.Â. Âëèÿíèå
ñèìâàñòàòèíà íà ôîñôîëèïèäíûé ñîñòàâ ëèïîïðîòåèíîâ âûñîêîé
ïëîòíîñòè ó ïàöèåíòîâ ñ ãèïåðõîëåñòåðèíåìèåé. Áþëë Ýêñï Áèîë
Ìåä. 2001, 132, 178-180.
200. Vance J.E., Vance D.E. Specific pools of phospholipids are used
for lipoprotein secretion by cultured hepatocytes. J Biol Chem. 1986,
261, 4486-4491.
201. Tall A. Plasma lipid transfer proteins. Annu Rev Biochem. 1995,
64, 235-257.
82
202. Rao R., Albers J.J., Wolfbauer G., Pownall H.J. Molecular and
macromolecular specifity of human plasma phospholipid transfer protein. Biochemistry. 1997, 36, 3645-3653.
203. Oka T., Kujiraoka T., Ito M., Egashira T., Takahashi S., Nanjee
M.N., Miller N.E., Metso J., Olkonnen V.M., Ehnholm C., Jauhiainen M.,
Hattori H. Distribution of phospholipid transfer protein in human plasma. J Lipid Res. 2000, 41, 1651-1657.
204. Pownal H., Massey J., Sparrow J., Gotto A. Lipid-protein interactions and lipoprotein reassembly. In: Plasma lipoproteins (Gotto A.M.
ed). Elsevie, N.-Y. 1987, 95-127.
205. Wang M., Briggs M.R. HDL: the metabolism, function, and therapeutic importance. Chem Rev. 2004, 104, 119-137.
206. Barter P., Kastelein J., Nunn A., Hobbs R. Future Forum
Editorial Board. High density lipoproteins (HDLs) and atherosclerosis:
the unanswered questions. Atherosclerosis. 2003, 168, 195-211.
207. Glomset J. The plasma lecithin: cholesterol acyltransferase reaction. J Lipid Res.1968, 9, 155-167.
208. Frikke-Schmidt R., Nordestgaard B.G., Jensen G.B., TybjaergHansen A. Genetic variation in ABC transporter A1 contributes to HDL
cholesterol in the general population. J Clin Invest. 2004, 114, 13431353.
209. Wang N., Silver D., Thiele C., Tall A., ATP-binding cassete
transporter A1 (ABCA1) functions as a cholesterol efflux regulatory protein. J Biol Chem. 2001, 276, 23742-23747.
210. Áåðãåëüñîí Ë.Ä., Ìîëîòêîâñêèé Þ.Ã., Ãåðàñèìîâà Å.Í.
Õèìè÷åñêèå ïîäõîäû ê èçó÷åíèþ òîïîãðàôèè ôîñôîëèïèäîâ â
ËÂÏ. ËÂÏ è àòåðîñêëåðîç. Ìàòåðèàëû ñèìïîçèóìà. Ìåäèöèíà, Ì.
1983, 67-79.
211. Segrest J.P., Li L., Anantharamaiah G.M., Harvey S.C., Liadaki
K.N., Zannis V. Structure and function of apolipoprotein A-I and highdensity lipoprotein. Curr Opin Lipidol. 2000, 11, 105-115.
212. Lund-Katz S., Liu L., Thuahnai S.T., Phillips M.C. High density
lipoprotein structure. Front Biosci. 2003, 8, 1044-1054.
213. Cushley R.J., Okon M. NMR studies of lipoprotein structure.
Annu Rev Biophys Biomol Struct. 2002, 31, 177-206.
214. Hevonoja T., Pentikainen M.O., Hyvonen M.T., Kovanen P.T.,
Ala-Korpela M. Structure of low density lipoprotein (LDL) particles:
basis for understanding molecular changes in modified LDL. Biochim
Biophys Acta. 2000, 1488, 189-210.
215. Cell Structure and Function: Lipid Membranes.
http://scidiv.bcc.ctc.edu/rkr/Biology101/lectures/pdfs.
83
ÃËÀÂÀ 3. ÔÓÍÊÖÈÎÍÀËÜÍÀß ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ
 ÊËÅÒÊÅ
Âûøå áûëè ðàññìîòðåíû ñòðóêòóðîîáðàçóþùèå ñâîéñòâà ÔË,
êàê "ñòðîèòåëüíûõ" ýëåìåíòîâ, ôîðìèðóþùèõ âñå áåç èñêëþ÷åíèÿ
áèîìåìáðàíû. Äîëãîå âðåìÿ ýòà ôóíêöèÿ ñ÷èòàëàñü åäèíñòâåííîé,
òàê êàê àìôèôèëüíîñòü ôîñôîëèïèäîâ è îáóñëîâëåííàÿ åþ
ñïîñîáíîñòü ñòðóêòóðèðîâàòüñÿ â âîäíîé ñðåäå ñ îáðàçîâàíèåì
ñëîèñòûõ àãðåãàòîâ íå áåç îñíîâàíèÿ ïîçâîëÿëà ñ÷èòàòü ÔË êàê áû
ñïåöèàëüíî ïðåäíàçíà÷åííûìè ïðèðîäîé äëÿ åñòåñòâåííîãî
êîíñòðóèðîâàíèÿ áèîìåìáðàí êëåòêè è åå êîìïàðòìåíòîâ. Òàêîé,
êàê òåïåðü âèäíî, íåïîëíûé âçãëÿä íà ðîëü ÔË íå ïðîòèâîðå÷èë
âñåì ïîñëåäîâàòåëüíî ðàçâèâàâøèìñÿ ìîäåëÿì ñòðóêòóðû ìåìáðàí,
âêëþ÷àÿ ìîçàè÷íóþ ìîäåëü Ñèíãåðà (ñì. ãëàâó 2) [1].  òî æå âðåìÿ,
â òå÷åíèå ìíîãèõ ëåò îñòàåòñÿ íåÿñíûì âîïðîñ î ïðè÷èíå ñòîëü
øèðîêîãî ðàçíîîáðàçèÿ âèäîâ ìåìáðàííûõ ÔË - âåäü òîëüêî äëÿ
ôîðìèðîâàíèÿ áèñëîÿ äîñòàòî÷íî, êàçàëîñü áû, îäíîãî, íàïðèìåð,
ÔÕ, â ñî÷åòàíèè ñ õîëåñòåðèíîì, äàþùåãî in vitro áèñëîéíûå
ëèïèäíûå ìåìáðàíû, ïîñòðîåííûå òàê æå, êàê è ìåìáðàíû êëåòîê.
Òàê çà÷åì æå ïðèðîäå ïîíàäîáèëîñü òàêîå ðàçíîîáðàçèå,
òðåáóþùåå ðàáîòû ìíîæåñòâà ôåðìåíòíûõ ñèñòåì è ýíåðãåòè÷åñêè
çàòðàòíûõ áèîñèíòåòè÷åñêèõ ðåàêöèé?
Ïåðâûå îòâåòû íà ýòè âîïðîñû ïîÿâèëèñü îäíîâðåìåííî ñ
èññëåäîâàíèÿìè ñòðóêòóðû ìåìáðàí ôèçèêî-õèìè÷åñêèìè
ìåòîäàìè, êîòîðûå ïîçâîëèëè ââåñòè ïîíÿòèå ìåìáðàííîé
æèäêîñòíîñòè (ñì. ãëàâó 2).  ìíîãî÷èñëåííûõ ðàáîòàõ, â îñíîâíîì
êîíöà 70-õ - íà÷àëà 80-õ ãîäîâ ïðîøëîãî âåêà, ïîêàçàíî ðàçëè÷íîå
âëèÿíèå ÔÕ è ÑÌ íà æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí è àêòèâíîñòü
ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Â òî æå âðåìÿ ðîëü àìèíî-ÔË, ëèçîÔË è
àíèîííûõ ÔË äîëãî îñòàâàëàñü íåÿñíîé. Îäíàêî èññëåäîâàíèÿ
ñâîéñòâ îòäåëüíûõ êëàññîâ ÔË è îñîáåííîñòåé èõ âçàèìîäåéñòâèé
ñ áåëêàìè - êàê âñòðîåííûìè â ìåìáðàíó, òàê è îáðàòèìî
ñâÿçûâàþùèìèñÿ ñ îáåèìè åå ñòîðîíàìè - ïðèâåëè ê
ñóùåñòâåííîìó ðàñøèðåíèþ ïîíèìàíèÿ ðîëè êîíêðåòíûõ ÔË â
ôóíêöèîíèðîâàíèè ìåìáðàíû è êëåòêè â öåëîì. Ïîñòåïåííî
ñêëàäûâàëîñü è ïîäòâåðæäàëîñü ïðåäñòàâëåíèå î òîì, ÷òî ÔË
áèîìåìáðàíû ÿâëÿþòñÿ íå òîëüêî åå "ñòðîèòåëüíûìè áëîêàìè", íî
òàêæå è àêòèâíûìè ó÷àñòíèêàìè ìíîãèõ âàæíåéøèõ äëÿ
æèçíåîáåñïå÷åíèÿ êëåòêè ïðîöåññîâ.
3.1. Ôîñôàòèäèëõîëèí (ÔÕ)
ÔÕ - îñíîâíîé, íàèáîëåå óíèâåðñàëüíûé ôîñôîëèïèä,
ìàêñèìàëüíî ïðåäñòàâëåííûé â ìåìáðàíàõ ðàçëè÷íûõ êëåòîê è
òêàíåé (35-50% îò âñåõ ÔË), à òàêæå â ëèïîïðîòåèíàõ êðîâè (7084
75%). [2]. Ýòî èìåííî òîò ÔË, äëÿ êîòîðîãî ïåðâîñòåïåííîé
ÿâëÿåòñÿ ñòðóêòóðîîáðàçóþùàÿ ôóíêöèÿ. Íî íàðÿäó ñ ýòèì îí
âûïîëíÿåò òàêæå ðÿä äðóãèõ ôóíêöèé, â ÷àñòíîñòè - ñëóæèò
ìåòàáîëè÷åñêèì ïðåäøåñòâåííèêîì äëÿ äâóõ äðóãèõ âàæíåéøèõ
âèäîâ ÔË - ÔÝ è ÑÌ, à òàêæå èñòî÷íèêîì öåëîãî ðÿäà ëèïèäíûõ
ìåññåíäæåðîâ è áèîàêòèâíûõ ñîåäèíåíèé: ëèçîÔÕ, äðóãèõ
ëèçîÔË, äèãëèöåðèäîâ, ôàêòîðà àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ è
àðàõèäîíîâîé êèñëîòû [3 - 5].
Èíãèáèðîâàíèå ÖÄÔ-õîëèí-çàâèñèìîãî ïóòè ñèíòåçà ÔÕ èëè,
íàîáîðîò, ñâåðõýêñïðåññèÿ ìåòèëèðîâàíèÿ ÔÝ â ÔÕ â ïå÷åíè â
áîëüøèíñòâå æèâîòíûõ êëåòîê ìîæåò ïðèâåñòè ê íàðóøåíèþ
ëèïèäíîãî ãîìåîñòàçà, çàäåðæêå ðîñòà èëè äàæå ãèáåëè êëåòîê [6 - 8].
Èçó÷åíèå êëåòêè â ïðîöåññå äåëåíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî
âíóòðèêëåòî÷íûé ñèíòåç ÔÕ ñòðîãî êîíòðîëèðóåòñÿ. Âàæíîñòü
ðåãóëÿöèè ýòîãî ïðîöåññà äëÿ êëåòî÷íîé ôèçèîëîãèè î÷åâèäíà,
òàê êàê äàæå íåáîëüøîå íåñîâïàäåíèå íàêîïëåíèÿ ÔÕ ñ êëåòî÷íûì
öèêëîì ïðèâåëî áû ê ïðîäóöèðîâàíèþ àíîìàëüíûõ êëåòîê, ñ
èçáûòêîì èëè ñ äåôèöèòîì ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè è/èëè
âíóòðèêëåòî÷íîìó íàêîïëåíèþ ëèïèäîâ.
Âàæíàÿ è íåçàìåíèìàÿ ðîëü ÔÕ, êàê îñíîâíîãî ìåìáðàííîãî
ÔË, â ôóíêöèîíèðîâàíèè, ðîñòå è ðàçâèòèè êëåòîê ïðîÿâëÿåòñÿ âî
âñåõ òêàíÿõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà, ÷òî îáóñëîâëåíî áèîëîãè÷åñêîé
çíà÷èìîñòüþ ìåìáðàí â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è îðãàíèçìà â
öåëîì [9 - 11]. Ýòî îñîáåííî âàæíî äëÿ îòíîñèòåëüíî áûñòðî
îáíîâëÿþùèõñÿ êëåòîê êðîâè, à òàêæå äëÿ êëåòîê ïå÷åíè âñëåäñòâèå èõ âûñîêîé ìåòàáîëè÷åñêîé, â òîì ÷èñëå
áèîñèíòåòè÷åñêîé àêòèâíîñòè, êîãäà ÷àñòü ìåìáðàííîãî ìàòåðèàëà
ÝÐ ïîñòîÿííî ðàñõîäóåòñÿ íà ñåêðåöèþ â êðîâü ëèïîïðîòåèíîâ. ÔÕ
â ýòîì ïðîöåññå, âñëåäñòâèå ñâîåé àìôèôèëüíîñòè è ïîâåðõíîñòíîàêòèâíûõ ñâîéñòâ, èãðàåò ðîëü ñâÿçóþùåãî çâåíà ìåæäó
àïîïðîòåèíîì è ïîñòóïèâøèìè (èëè ñèíòåçèðîâàííûìè â êëåòêå)
íåéòðàëüíûìè ëèïèäàìè. Òàêèì îáðàçîì, ÔÕ ó÷àñòâóåò òàêæå è â
ïîñòðîåíèè ëèïîïðîòåèíîâûõ ÷àñòèö (ñì. ãëàâó 2 ðàçäåë 2.6).
Ïîäîáíûé ïðîöåññ ïðîèñõîäèò è â ýïèòåëèàëüíûõ êëåòêàõ
êèøå÷íèêà, ãäå ÔÕ âìåñòå ñ àïîïðîòåèíîì "îáâîëàêèâàåò" æèðîâûå
êàïëè, îáåñïå÷èâàÿ îáðàçîâàíèå ïîñòóïàþùèõ â êðîâü
õèëîìèêðîíîâ.
Áëàãîäàðÿ ñâîèì ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûì ñâîéñòâàì, ÔÕ âìåñòå
ñ íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì äðóãèõ ÔË è æåë÷íûõ êèñëîò â ïå÷åíè
ó÷àñòâóåò â îáðàçîâàíèè æåë÷è, îáåñïå÷èâàÿ òåì ñàìûì ïðîöåññû
ýêñêðåöèè, â òîì ÷èñëå âûâåäåíèå õîëåñòåðèíà è åãî ìåòàáîëèòîâ.
Îòìå÷åíà êëþ÷åâàÿ ðîëü â ýòîì ïðîöåññå ÔÕ êàíàëèêóëÿðíûõ
ìåìáðàí ïå÷åíè [12]. Ïîêàçàíî, ÷òî ÔÕ ñîñòàâëÿåò 95%
85
ôîñôîëèïèäîâ æåë÷è [13].
Êðîìå ýòîãî, â êëåòêàõ ïå÷åíè ÔÕ ó÷àñòâóåò â
ôóíêöèîíèðîâàíèè öèòîõðîìà Ð450, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, òåñíî
âçàèìîäåéñòâóÿ ñ íèì ïî òèïó "íåàííóëëëÿðíûõ" ëèïèäîâ. Â
êëåòêàõ ìîçãà ÔÕ ñëóæèò èñòî÷íèêîì õîëèíà, íåîáõîäèìîãî äëÿ
ïîääåðæàíèÿ èõ íîðìàëüíîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ [14].
 ëåãêèõ ÔÕ (ñ äâóìÿ æèðíîêèñëîòíûìè öåïÿìè Ñ16:0)
âûïîëíÿåò ôóíêöèþ ñóðôàêòàíòà, ïîêðûâàÿ ïîâåðõíîñòü àëüâåîë è
ïðåïÿòñòâóÿ èõ ñëèïàíèþ â ìîìåíò âûäîõà [15].
3.2. Ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí (ÔÝ)
Àìèíîôîñôîëèïèäû, â ÷àñòíîñòè, ÔÝ, ïðèíèìàþò ó÷àñòèå â
ðåãóëÿöèè ðÿäà ïðîöåññîâ, òàêèõ êàê ñâåðòûâàíèå êðîâè [16],
êëåòî÷íàÿ àäãåçèÿ [17 - 20] è ýíäîöèòîç [21, 22]. Ïî âñåé
âåðîÿòíîñòè, íà îñóùåñòâëåíèå ýòèõ ôóíêöèé îêàçûâàåò âëèÿíèå
ïðîñòðàíñòâåííàÿ "êîíóñîîáðàçíàÿ" ôîðìà ìîëåêóë ÔÝ, â êîòîðîé
àöèëüíûå öåïè øèðå, ÷åì ïîëÿðíàÿ "ãîëîâêà". Ïîýòîìó îíè èìåþò
òåíäåíöèþ îáðàçîâûâàòü íåáèñëîéíûå ñòðóêòóðû, òàêèå êàê
îáðàùåííàÿ ãåêñàãîíàëüíàÿ ôàçà èëè êóáè÷åñêàÿ ôàçà, êîòîðûå
âîâëå÷åíû â ïðîöåññû ñëèÿíèÿ ìåìáðàí èëè ôîðìèðîâàíèå
ýíäîöèòîçíûõ âåçèêóë. Ðàñïîëàãàÿñü æå â ìåìáðàíå,
ñôîðìèðîâàííîé â îñíîâíîì èç ÔÕ, îíè "âûíóæäåíû" ïðèíèìàòü
ïëîñêîñòíóþ ñòðóêòóðó, ÷òî ñîçäàåò íàïðÿæåíèå â ãèäðîôîáíîé
îáëàñòè áèñëîÿ. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî òàêèå ñâîéñòâà ìåìáðàíû ìîãóò
ðåãóëèðîâàòü ôîëäèíã áåëêà, êîíòðîëèðóÿ ñòåïåíü ïîãðóæåíèÿ åãî
â ìåìáðàíó è òåì ñàìûì, îáåñïå÷èâàÿ êîíôîðìàöèþ, íåîáõîäèìóþ
äëÿ ïðîÿâëåíèÿ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè [23].
Íàëè÷èå â ìåìáðàíå ÔÝ, ëîêàëèçîâàííîãî âî âíóòðåííåì
ìîíîñëîå, è åãî îïðåäåëåííîå ñîîòíîøåíèå ñ îñíîâíûì
ìåìáðàííûì ôîñôîëèïèäîì, ÔÕ, ñîçäàåò, ïî-âèäèìîìó, óñëîâèÿ,
âëèÿþùèå íà ôîðìó ìåìáðàíû.
3.3. Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû.
3.3.1. Îáù
ùèå ôóíêö
öèè àíèîííûõ ÔË è èõ âëèÿÿíèå íàà
àêòèâíîñòü âíåìåìáðààííûõ áåëêîâ.
Àíèîííûå ôîñôîëèïèäû, ê êîòîðûì îòíîñÿòñÿ ÔÑ, ÔÊ, ÔÃ, ÊË
è ÔÈ, îáëàäàþò ðÿäîì áèîëîãè÷åñêèõ àêòèâíîñòåé, âëèÿþùèõ êàê
íà âíóòðèêëåòî÷íûå ôóíêöèè, òàê è íà âçàèìîäåéñòâèå êëåòêè ñ
âíåêëåòî÷íûìè áåëêàìè. Èõ ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà (1),
âíóòðèìåìáðàííûå è (2) ïîâåðõíîñòíî-ìåìáðàííûå, êîòîðûå
âëèÿþò íà ñâîéñòâà ïðèëåãàþùèõ ê ìåìáðàíå ñ îáåèõ ñòîðîí
áåëêîâ âîäíîé ôàçû.
Òàê, àíèîííûå ÔË èãðàþò ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â îïðåäåëåíèè
86
òîïîëîãèè âñòðîåííûõ â ìåìáðàíó áåëêîâ. Ñ÷èòàþò, ÷òî
îðèåíòàöèÿ ìíîãèõ èíòåãðàëüíûõ áåëêîâ è îáðàçîâàíèå áåëêîâûõ
àññàìáëåé â ìåìáðàíå òåñíî ñâÿçàíû ñ àñèììåòðè÷íûì
ðàñïðåäåëåíèåì àíèîííûõ ÔË âíóòðè ýòîé ìåìáðàíû è çàâèñÿò îò
ïðîñòðàíñòâåííîãî ñîïðÿæåíèÿ ïîëîæèòåëüíî çàðÿæåííûõ
ó÷àñòêîâ áåëêà (äîìåíîâ) ñ îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííûìè
"ãîëîâêàìè" àíèîííûõ ÔË.
 ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü àíèîííûõ ÔË ñòèìóëèðîâàòü
òàê íàçûâàåìóþ "òðàíñëîêàöèþ" âîäîðàñòâîðèìûõ áåëêîâ,
ñîçäàþùóþ óñëîâèÿ äëÿ èõ àêòèâàöèè. Èçâåñòíî, ÷òî
ïðèñîåäèíåíèå ñïåöèôè÷åñêîãî áåëêà ê ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû
ñâÿçàíî ñ êîíôîðìàöèîííûìè èçìåíåíèÿìè åãî ìîëåêóëû,
èíèöèèðóþùèìè ïåðåõîä áåëêà â àêòèâíîå ñîñòîÿíèå. Íàèáîëåå
èçó÷åííûå âíóòðèêëåòî÷íûå ôåðìåíòû, ðåãóëèðóåìûå ïóòåì
òðàíñëîêàöèè ê ôîñôîëèïèäíîé ïîâåðõíîñòè: öèòîçîëüíàÿ
ôîñôîëèïàçà À2 (cPLA2) [24, 25], ïðîòåèíêèíàçà Ñ (ÐÊ Ñ) [26, 27] è
ÖÒÔ-ôîñôîõîëèí öèòèäèëòðàíñôåðàçà (ÖÒ) [28, 29]. Ñâÿçûâàíèå
ôåðìåíòîâ ñ ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòüþ èíîãäà áûâàåò òðóäíî
îòëè÷èòü îò êëàññè÷åñêîãî ôåðìåíò-ñóáñòðàòíîãî ñâÿçûâàíèÿ ñ
ëîêàëèçîâàííûìè â ìåìáðàíå ñóáñòðàòàìè. Íàïðèìåð, ïîêàçàíî,
÷òî â ñëó÷àå ñåêðåòîðíûõ ôîñôîëèïàç À2 (sPLA2) ôåðìåíò,
ñâÿçàííûé ñ àíèîííûìè ôîñôîëèïèäíûìè âåçèêóëàìè, ìîæåò
ýôôåêòèâíî îòùåïëÿòü æèðíûå êèñëîòû, îñòàâàÿñü íà
ôîñôîëèïèäíîé ïîâåðõíîñòè â òå÷åíèå ìíîãèõ êàòàëèòè÷åñêèõ
öèêëîâ. Ñ÷èòàþò, ÷òî ñâÿçûâàíèå òàêèõ ôåðìåíòîâ ñ ïîâåðõíîñòüþ
ìåìáðàíû - îäíî èç óñëîâèé, îáåñïå÷èâàþùèõ èõ êàòàëèòè÷åñêóþ
àêòèâíîñòü.
Àíèîííûå ÔË îáðàçóþò íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû
îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííóþ îáëàñòü, êîòîðàÿ ìîæåò ôîðìèðîâàòü
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå ñâÿçè ñ êàòèîííûìè îáëàñòÿìè áåëêà èëè
ïåïòèäà, ðàñïîëîæåííîãî âáëèçè ìåìáðàíû.
Âëèÿíèå àíèîííûõ ÔË íà ïîâåðõíîñòü ìåìáðàíû ñâÿçàíî ñ èõ
ñïîñîáíîñòüþ îáðàçîâûâàòü êàê ïîëÿðíûå, òàê è íåïîëÿðíûå ñâÿçè.
Ïðåäïîëàãàþò [29], ÷òî íà íà÷àëüíîì ýòàïå ïðèìåìáðàííûé áåëîê
çà ñ÷åò îáðàçîâàíèÿ ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ ñâÿçåé âçàèìîäåéñòâóåò ñ
åå ïîâåðõíîñòüþ. Ýòî â äàëüíåéøåì ïðèâîäèò ê ïðîíèêíîâåíèþ
áåëêà âãëóáü ìåìáðàíû, â êîòîðîì âàæíóþ ðîëü èãðàþò
ãèäðîôîáíûå âçàèìîäåéñòâèÿ.
Äëÿ èíèöèèðîâàíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêîãî îòâåòà (ò.å. äëÿ
èçìåíåíèÿ àêòèâíîñòè ïðèñîåäèíèâøåãîñÿ ê ìåìáðàíå
"òðàíñëîöèðîâàííîãî" áåëêà) îáû÷íî òðåáóåòñÿ îïðåäåëåííûé
ïîðîãîâûé óðîâåíü ïëîòíîñòè àíèîííûõ çàðÿäîâ íà ìåìáðàíå,
ñïîñîáíûé îáåñïå÷èòü íåîáõîäèìóþ ñòåïåíü ýëåêòðîñòàòè÷åñêîãî
87
âçàèìîäåéñòâèÿ. Êàê ïðàâèëî, äëÿ ýòîãî àíèîííûå ÔË äîëæíû
ñîñòàâëÿòü 10-20% îò îáùèõ ÔË ìåìáðàíû. Â ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíî,
÷òî êðèâàÿ çàâèñèìîñòè àêòèâàöèè ïðèìåìáðàííîãî áåëêà îò
êîíöåíòðàöèè àíèîííûõ ÔË èìååò ñèãìîîáðàçíûé õàðàêòåð, ò.å.,
äîéäÿ äî êàêîãî-òî ìàêñèìóìà, ñîîòâåòñòâóþùåãî îïòèìàëüíîé,
àêòèâíîñòü áåëêà ñíîâà ñíèæàåòñÿ. Ïðè ýòîì ñïåöèôè÷íîñòü â
îòíîøåíèè ïîëÿðíûõ ãðóïï àíèîííûõ ÔË íåâåëèêà, è ýôôåêòû
ÔÑ, ÔÃ è ÔÈ áëèçêè äðóã äðóãó.
Èç àíèîííûõ ÔË íàèâûñøóþ àêòèâíîñòü â ñâÿçûâàíèè áåëêîâ
ïðîÿâëÿþò ÔÊ è êàðäèîëèïèí. Ïîðîãîâûé óðîâåíü äëÿ ýòèõ ÔË
îáû÷íî ìåíåå 10 ìîë%, ÷òî ñâÿçàíî ñ ïðèñóòñòâèåì â ìîëåêóëå
äâóõ ôîñôàòíûõ ãðóïï. Ïîäîáíûå æå ñâîéñòâà â îòíîøåíèè
íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâÿçûâàíèÿ ïðîÿâëÿþò ïîëèàíèîííûå
ôîñôîèíîçèòèäû - äè- è òðèôîñôàòû ÔÈ.
Ñâÿçûâàíèå áåëêà ñ ïîâåðõíîñòüþ ìåìáðàíû çàâèñèò îò ïëîòíîñòè
ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà ìåìáðàíû, îáåñïå÷èâàþùåé ìíîæåñòâåííûå
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ ìåæäó ôîñôîëèïèäíîé
ïîâåðõíîñòüþ è ðàçëè÷íûìè ó÷àñòêàìè ìîëåêóëû áåëêà.
Ïîìèìî ìåæôàçîâûõ ïîâåðõíîñòíûõ ýôôåêòîâ, àíèîííûå ÔË
ìîãóò ñïîñîáñòâîâàòü âñòðàèâàíèþ ãèäðîôîáíûõ ïåïòèäîâ è
áåëêîâ â áèîëîãè÷åñêóþ ìåìáðàíó [30, 31].  ìîäåëüíûõ
èññëåäîâàíèÿõ ïîêàçàíî, ÷òî åñëè ãèäðîôîáíîñòü ïåïòèäà íèæå
ïîðîãîâîãî óðîâíÿ, ïðè êîòîðîì îí ìîæåò ñïîíòàííî âõîäèòü â
ìåìáðàíó, òî åãî âçàèìîäåéñòâèþ ñ ìåìáðàíîé ñïîñîáñòâóþò
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå ñèëû, îáåñïå÷èâàåìûå àíèîííûìè ÔË [32].
Îòìå÷àþò îñîáóþ ðîëü îñòàòêîâ àðîìàòè÷åñêèõ àìèíîêèñëîò, â
÷àñòíîñòè, òðèïòîôàíà â îáåñïå÷åíèè ïîâåðõíîñòíîãî ñâÿçûâàíèÿ
áåëêîâ è ïåïòèäîâ ñ ìåìáðàíîé [33 - 35].
Íà îñíîâàíèè êèíåòè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé áûëà îïðåäåëåíà
âîçìîæíàÿ ðîëü àíèîííûõ ÔË, â ÷àñòíîñòè ÔÈ, â ðåãóëÿöèè
àêòèâíîñòè ðÿäà ôåðìåíòîâ, îáëàäàþùèõ áîëüøèì ñðîäñòâîì ê
àíèîííûì ïîâåðõíîñòÿì è ïîãðàíè÷íîå ñâÿçûâàíèå ÿâëÿåòñÿ äëÿ
íèõ îäíèì èç ýòàïîâ ôåðìåíòàòèâíîãî ïðîöåññà. Ê òàêèì íàèáîëåå
èçó÷åííûì ôåðìåíòàì îòíîñÿòñÿ íèçêîìîëåêóëÿðíûå sPLA2 [24, 36
- 40] è ÖÒÔ-ôîñôîõîëèí-öèòèäèëòðàíñôåðàçû [41]. Ñâÿçûâàíèå ñ
àíèîííûìè ÔË ìåìáðàíû ïîêàçàíî òàêæå äëÿ äâóõ äîìåíîâ
óíèâåðñàëüíîãî ñèãíàëüíîãî ôåðìåíòà ÐÊ Ñ, íî, â îòëè÷èå îò PLA2,
îíî ñïåöèôè÷íî è îñóùåñòâëÿåòñÿ òîëüêî ñ ôîñôàòèäèëñåðèíîì.
3.3.2. Ñïåö
öèôè÷åñêèå ôóíêö
öèè èíäèâèäóààëüíûõ àíèîííûõ
ôîñôîëèïèäîâ.
Ôîñôààòèäèëñåðèí - àíèîííûé ÔË, ñîñòàâëÿþùèé äî 10% îò
êîëè÷åñòâà ÔË â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è ìåìáðàíàõ ÝÐ.
88
Ïîýòîìó ñðåäè àíèîííûõ ÔË îí âíîñèò íàèáîëüøèé âêëàä â
ìåæôàçíûå ýôôåêòû, âêëþ÷àÿ ýëåêòðîñòàòè÷åñêèå âçàèìîäåéñòâèÿ
ïðè ïîâåðõíîñòíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ, â ðåãóëÿöèþ èõ àêòèâíîñòè
è äðóãèå ñïåöèôè÷åñêèå ïðîöåññû. Ïðè ýòîì îí ìîæåò îêàçûâàòü
äâà âèäà ýôôåêòîâ: (1) íà âíóòðèêëåòî÷íûå ðåàêöèè çà ñ÷åò ñâîåé
ëîêàëèçàöèè íà âíóòðåííåì ñëîå ìåìáðàíû â îáû÷íîì ñîñòîÿíèè
êëåòêè; (2) íà âíåêëåòî÷íûå ïðîöåññû ïðè íàðóøåíèè íîðìàëüíîé
ìåìáðàííîé àñèììåòðèè è ïîÿâëåíèè åãî â íàðóæíîì ñëîå, ÷òî
èìååò ìåñòî ïðè íåêîòîðûõ ñïåöèôè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ êëåòêè.
Èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ýôôåêòîâ ÔÑ íàèáîëåå èçó÷åíî åãî
âçàèìîäåéñòâèå ñ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ. Ñâÿçûâàíèå ÐÊ Ñ ñ
ìåìáðàíûì ÔÑ îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç Ñ2-äîìåíû ôåðìåíòà.
Èäåíòèôèöèðîâàíû ñïåöèôè÷åñêèå êàòèîííûå àìèíîêèñëîòíûå
îñòàòêè áåëêîâûõ äîìåíîâ, íåïîñðåäñòâåííî âçàèìîäåéñòâóþùèå ñ
ÔÑ ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû, ïðè÷åì ñâÿçûâàíèå ÿâëÿåòñÿ
ñòåõèîìåòðè÷åñêèì: ïîêàçàíî ó÷àñòèå âîñüìè ìîëåêóë ÔÑ â
ïðèñîåäèíåíèå ìîëåêóëû áåëêà (ÐÊ Ñ-βII) [42]. Â îïûòàõ in vitro
ïîêàçàíî, ÷òî ñòåïåíü àêòèâàöèè ÐÊ Ñ çàâèñèò îò ìîëÿðíîãî
ïðîöåíòà ÔÑ [42]. Ïðè ñðàâíåíèè èçîìåðîâ, L- è D-ÔÑ â ðåàêöèÿõ
ñâÿçûâàíèÿ ôåðìåíòà àêòèâíûì îêàçàëñÿ ëèøü L-èçîìåð, ÷òî
ãîâîðèò î âàæíîé ðîëè ñòðóêòóðû ïîëÿðíûõ "ãîëîâîê" ýòîãî
ôîñôîëèïèäà â ïðîöåññàõ ñâÿçûâàíèÿ.
Åùå îäíà ãðóïïà áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ÔÑ ñâÿçàíà ñ åãî
ïîÿâëåíèåì íà íåñâîéñòâåííîé äëÿ íîðìàëüíîé ëîêàëèçàöèè,
âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû.
Êàê èçâåñòíî, âíåøíèé ÔË ìîíîñëîé ïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíû ýëåêòðîíåéòðàëåí è ìîæåò ïðèîáðåñòè îòðèöàòåëüíûé
çàðÿä òîëüêî ïðè íåêîòîðûõ îñîáûõ ñîñòîÿíèÿõ êëåòêè. Íàïðèìåð,
âûõîä ÔÑ (ñî ñâîåé àíèîííîé ãðóïïîé) âî âíåøíèé ìîíîñëîé
ÿâëÿåòñÿ õàðàêòåðíûì ïðîöåññîì ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ [43]
èëè ïðè àïîïòîçå [44]. Ïðè ýòîì ïîâåðõíîñòü êëåòêè
ìîäèôèöèðóåòñÿ, âñëåäñòâèå ÷åãî "óçíàåòñÿ" áåëêàìè ñâåðòûâàíèÿ
êðîâè è ìàêðîôàãàìè [45].
Íåñêîëüêî áîëåå ïðîòèâîðå÷èâûå äàííûå ïîëó÷åíû ïðè
èçó÷åíèè âûõîäà ÔÑ ê ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè â ïðîöåññàõ
ñòàðåíèÿ êëåòêè. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî ïîÿâëåíèå ÔÑ íà ïîâåðõíîñòè
ñòàðåþùèõ ýðèòðîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ "çíàêîì" äëÿ èõ óäàëåíèÿ
ìàêðîôàãàìè [46, 47]. Îäíàêî ýòîãî íå íàáëþäàåòñÿ, íàïðèìåð, ïðè
ìíîãèõ ôîðìàõ ãåìîëèòè÷åñêîé àíåìèè.
Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ñóùåñòâóåò çàâèñèìîñòü ìåæäó ïðîöåññàìè
ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ, îêèñëåíèåì ÔÑ è åãî òðàíñëîêàöèåé,
ïðè÷åì â îòëè÷èå îò äðóãèõ ÔË, îêèñëåíèå ÔÑ íå ïðåäîòâðàùàåòñÿ
àíòèîêñèäàíòàìè òèïà âèòàìèíà Å [48].
89
Ïîëàãàþò, ÷òî ñ ïàòîëîãè÷åñêèìè ïîñëåäñòâèÿìè ïîÿâëåíèÿ
àíèîííûõ ÔË, â ÷àñòíîñòè, ÔÑ, íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû ñâÿçàíû
èììóííûå íàðóøåíèÿ, íàçûâàåìûå "àíòèôîñôîëèïèäíûì
ñèíäðîìîì". Ïðè ýòîì êëåòêè ìîãóò ýêñïðåññèðîâàòü íà
ïîâåðõíîñòè ÔÑ, êîòîðûé ñâÿçûâàåòñÿ ñ β2-ãëèêîïðîòåèíîì, ÷òî
ïðèâîäèò ê óäàëåíèþ òàêèõ êëåòîê ìàêðîôàãàìè ñ ïîìîùüþ
ðåöåïòîðîâ, ñïåöèôè÷åñêèõ ê ÔÑ [45].
Ñóùåñòâåííûé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿåò ñâÿçûâàíèå ÔÑ ñ áåëêîì
àííåêñèíîì V, îòíîñÿùèìñÿ ê ãðóïïå Ñà2+-íåçàâèñèìûõ
ôîñôîëèïèä-ñâÿçûâàþùèõ áåëêîâ (àííåêñèíîâ). Àííåêñèí V ñîñóäèñòûé àíòèêîàãóëÿíò, îáëàäàþùèé âûñîêèì ñðîäñòâîì ê ÔÑ.
×åðåç âçàèìîäåéñòâèå ñ ÔÑ àííåêñèí V òðàíñëîöèðóåòñÿ ê
ìåìáðàííîé ïîâåðõíîñòè, ñ îáðàçîâàíèåì êàëüöèåâûõ "ìîñòèêîâ"
[49, 50]. Ýòî ñâÿçûâàíèå âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíûé îòâåò ïóòåì
èíãèáèðîâàíèÿ PLA2. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ìåõàíèçì èíãèáèðîâàíèÿ
ýòîé ôîñôîëèïàçû ñâÿçàí ñî ñïîñîáíîñòüþ àííåêñèíîâ
îáðàçîâûâàòü êëàñòåðû íà ïîâåðõíîñòè ìîíîñëîÿ, ïðåäîòâðàùàÿ
òåì ñàìûì äîñòóï PLA2 ê ïîâåðõíîñòíûì ôîñôîëèïèäàì [51 - 53].
Ïðè àêòèâàöèè êëåòîê àííåêñèí òðàíñïîðòèðóåòñÿ ê ÿäåðíûì
ìåìáðàíàì. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî âîçìîæåí è àëüòåðíàòèâíûé
âàðèàíò - îáðàçîâàíèå â ÿäåðíîé ìåìáðàíå âûñîêî ñïåöèôè÷íîãî ê
àííåêñèíó ôîñôîëèïèäíîãî äîìåíà. Äëÿ àïîïòîòè÷åñêèõ êëåòîê
õàðàêòåðíî áûñòðîå ñâÿçûâàíèå ñ ýòèì áåëêîì, êîòîðîå ïðîèñõîäèò
óæå ïðè 6 ìîë% ÔÑ [54, 55].
Ôîñôààòèäíààÿ êèñëîòàà (ÔÊ). Ðîëü ôîñôàòèäíîé êèñëîòû â
ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè êëåòêè ÿâëÿåòñÿ â ïîñëåäíèå ãîäû
îáëàñòüþ èíòåíñèâíûõ èññëåäîâàíèé è ãèïîòåç. Ýòîò ÔË îáû÷íî
ïðèñóòñòâóåò â î÷åíü íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ â êëåòî÷íûõ
ìåìáðàíàõ ìëåêîïèòàþùèõ: <5 ìîë% îò ñîäåðæàíèÿ ÔÕ. Áóäó÷è
âàæíûì áèîñèíòåòè÷åñêèì èíòåðìåäèàòîì, ÔÊ ìîæåò
ñèíòåçèðîâàòüñÿ in situ èç äðóãèõ ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ ïðè
äåéñòâèè ôîñôîëèïàçû D. Ïîëàãàþò, ÷òî ÔÊ ÿâëÿåòñÿ äèàíèîíîì
(ðÊà2 = 7,6) â áèñëîÿõ, îáðàçîâàííûõ èç ÔÕ [55]. Äîáàâëåíèå åå ê ÔÕ
âåçèêóëàì ïîâûøàåò ÷óâñòâèòåëüíîñòü ïîñëåäíèõ ê âûçûâàåìîé
Ñà2+ àãðåãàöèè è ñëèÿíèþ (ôóçèè). Ýòî ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñî
ñòèìóëèðóåìîé Ñà2+ êëàñòåðèçàöèåé ÔÊ â ìåìáðàíå [56],
ïðèâîäÿùåé ê ôîðìèðîâàíèþ ôîñôîëèïèäíîãî äîìåíà.
Ïîêàçàíî, ÷òî ÔÊ ñïîñîáíà ñòèìóëèðîâàòü ãèäðîëèç ÔÕâåçèêóë sPLA2: ïðåäâàðèòåëüíàÿ îáðàáîòêà âåçèêóë ôîñôîëèïàçîé
D ïðèâîäèò ê óñèëåíèþ èõ ãèäðîëèçà sPLA2 [57]. Âîçìîæíî, çäåñü
èãðàåò ðîëü íåêîòîðîå ðàçðûõëåíèå óïàêîâêè ÔË â ìåìáðàíå çà
ñ÷åò îáðàçóþùåéñÿ ÔÊ, è ýòî, â ñâîþ î÷åðåäü, ïîâûøàåò
äîñòóïíîñòü ñóáñòðàòà äëÿ sPLA2.
90
Âûñêàçûâàëèñü ïðåäïîëîæåíèÿ, ÷òî ÔÊ ìîæåò ïîä äåéñòâèåì
ýòèõ ôîñôîëèïàç ãåíåðèðîâàòüñÿ âî âíåøíåì ìîíîñëîå
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïðè âîñïàëèòåëüíîì îòâåòå êëåòîê
îðãàíèçìà [58, 59], êîãäà sPLA2 ñòàíîâèòñÿ ïðîâîñïàëèòåëüíûì
ôàêòîðîì [60]. Ïîêàçàíà âûñîêàÿ àêòèâíîñòü òàêîé ðåàêöèè ïðè
ñåïòè÷åñêîì øîêå, ïðè êîòîðîì óðîâåíü sPLA2 â êðîâè ÷åëîâåêà
âîçðàñòàåò â ñòî ðàç, äîñòèãàÿ âåëè÷èíû ïîðÿäêà 1ìêã/ìë,
äîñòàòî÷íîé äëÿ ãèäðîëèçà êëåòî÷íûõ ìåìáðàí. Ïî-âèäèìîìó, â
îáðàçîâàíèè ÔÊ íà íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ìåìáðàí ó÷àñòâóåò è
ôîñôîëèïàçà D.  ñûâîðîòêå êðîâè áûëà îáíàðóæåíà ñïåöèôè÷íàÿ
ê ãëèêîçèëôîñôàòèäèëèíîçèòó ôîñôîëèïàçà D, ñïîñîáñòâóþùàÿ
ãåíåðàöèè ÔÊ â íåñâîéñòâåííîì ýòîìó ÔË ïîâåðõíîñòíîì
ìîíîñëîå ìåìáðàí êëåòîê, ÷òî ìîæåò in vivo ñòèìóëèðîâàòü
âîñïàëèòåëüíûé îòâåò.
Îáíàðóæåíî, ÷òî ÔÊ ïðèñóòñòâóåò â ìèêðîâåçèêóëàõ,
îáðàçóþùèõñÿ ïðè "øåäèíãå" ìåìáðàí (ÿâëåíèè "îòïî÷êîâûâàíèÿ"
è îòäåëåíèÿ îò ìåìáðàíû ó÷àñòêîâ åå íàðóæíîãî ñëîÿ), âîçìîæíî,
ó÷àñòâóÿ â ýòîì ïðîöåññå. Íà ýòî óêàçûâàåò îáðàçîâàíèå
ëèçîôîñôàòèäíîé êèñëîòû (ëèçîÔÊ) ïðè äåéñòâèè sPLA2 ÷åëîâåêà
íà ýòè ìèêðîâåçèêóëû [61]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ëèçîÔÊ ïðèñóòñòâóåò
â àðòðèòíîé ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè, ãäå âûñîêà àêòèâíîñòü sPLA2.
ÔÊ ñâÿçàíà ñ íåêîòîðûìè ïðîöåññàìè â àïïàðàòå Ãîëüäæè [62].
Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ÔÊ ìîæåò áûòü âêëþ÷åíà â ïðîöåññû ïåðåäà÷è
ñèãíàëà, õîòÿ íåïîñðåäñòâåííàÿ åå ðîëü êàê ëèïèäíîé ñèãíàëüíîé
ìîëåêóëû íå äîêàçàíà [63 - 65]. Áîëåå îïðåäåëåííîé â
ôóíêöèîíàëüíîì
îòíîøåíèè
ÿâëÿåòñÿ
ðîëü
ÔÊ
êàê
ïðåäøåñòâåííèêà ëèçîÔÊ, êîòîðàÿ èãðàåò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â
ïðîöåññàõ ïåðåäà÷è êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ. ÔÊ è ëèçîÔÊ îêàçûâàþò
ïðîòèâîïîëîæíûå ýôôåêòû íà êðèâèçíó ìåìáðàíû è ïðîöåññ
ñëèÿíèÿ ìåìáðàí ïðè îáðàçîâàíèè âåçèêóë, ÷òî ñâÿçûâàþò ñ
àêòèâíîñòüþ ëèçîôîñôàòèäèë-àöèëòðàíñôåðàçû [66]. Çàìåíà
êîíóñîîáðàçíîãî ëèïèäà (ÔÊ) íà ëèïèä ñ êîíôîðìàöèåé
ïåðåâåðíóòîãî êîíóñà (ëèçîÔÊ) óñèëèâàåò îòðèöàòåëüíóþ
ìåìáðàííóþ êðèâèçíó, ñïîñîáñòâóþùóþ ñëèÿíèþ ìåìáðàí.
Ôîñôîèíîçèòèäû (ÔÈ
È). Èçâåñòíî, ÷òî èíîçèò-ñîäåðæàùèå ÔË
èãðàþò ðîëü êàê â ïîâåðõíîñòíîì ñâÿçûâàíèè áåëêîâ, òàê è â
ãåíåðàöèè âàæíûõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë. Áóäó÷è ïîëèàíèîíàìè,
ôîñôîèíîçèòèäû çà ñ÷åò àíèîííîãî çàðÿäà âûñîêîé ïëîòíîñòè
ýôôåêòèâíû
â
ýëåêòðîñòàòè÷åñêèõ
ëèïèä-áåëêîâûõ
âçàèìîäåéñòâèÿõ äàæå ïðè îòíîñèòåëüíî íèçêîì ñîäåðæàíèè èõ â
ìåìáðàíå [66].
Ñóùåñòâåííûì ÿâëÿåòñÿ è ñïåöèôè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ÔÈ ñ
áåëêîâûìè äîìåíàìè, íàïðèìåð, ñ òàê íàçûâàåìûìè ÐÍ-äîìåíàìè.
91
Âïåðâûå îíè áûëè èäåíòèôèöèðîâàíû â ïëåêñòðèíå êàê
ïîâòîðÿþùèéñÿ áåëêîâûé ìîäóëü, íàñ÷èòûâàþùèé îêîëî 120
àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ, ïîñëå ÷åãî áûëè îáíàðóæåíû òàêæå
áîëåå ÷åì ó 100 ýóêàðèîòè÷åñêèõ áåëêîâ. Ýòè äîìåíû, íàçûâàåìûå
ïëåêñòðèí-ãîìîëîãè÷íûìè, îáëàäàþò ñõîäíîé òðåòè÷íîé
ñòðóêòóðîé è ìîãóò ñëóæèòü ìåäèàòîðàìè â áåëîê-ëèïèäíûõ èëè
áåëîê-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèÿõ. Ëèãàíäàìè äëÿ íèõ ÿâëÿþòñÿ
ðàçëè÷íûå ôîñôîðèëèðîâàííûå ÔÈ. Áîëüøèíñòâî áåëêîâ,
ñîäåðæàùèõ ÐÍ-äîìåíû, òðåáóþò äëÿ âûïîëíåíèÿ ñâîèõ ôóíêöèé
ïðèñîåäèíåíèÿ ê ìåìáðàíå, êîòîðîå è îñóùåñòâëÿþò ñ ïîìîùüþ
ýòèõ ó÷àñòêîâ. Ïðèìåðîì áåëêîâ, âçàèìîäåéñòâóþùèõ ñ ìåìáðàíîé
ïîñðåäñòâîì ÐÍ-äîìåíîâ, ÿâëÿåòñÿ ôîñôîëèïàçà Ñ-δ1 [67]. Êðîìå
òîãî, âûÿâëåí ðÿä äðóãèõ áåëêîâûõ äîìåíîâ, óçíàþùèõ ðàçëè÷íûå
ôîñôîðèëèðîâàííûå ÔÈ, â ÷àñòíîñòè, â íåäàâíî îòêðûòîì
ôóíêöèîíàëüíî âàæíîì ôåðìåíòå ôîñôîèíîçèòèä-3-êèíàçå [68].
ÔÈ ó÷àñòâóþò â ïîääåðæàíèè ñòðóêòóðû GPI-çàÿêîðåííûõ
áåëêîâ, èìåþòñÿ òàêæå äàííûå î èõ ðîëè â ôóíêöèîíèðîâàíèè
áåëêîâ öèòîñêåëåòà [69].
Íàèáîëåå âàæíóþ ðîëü ÔÈ èãðàåò â ìåìáðàíàõ, îñîáåííî â
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå êëåòîê. Ýòî ñâÿçàíî ñ ó÷àñòèåì ÔÈ â
ïðîöåññàõ òðàíñäóêöèè ñèãíàëà, â õîäå êîòîðîé âíóòðåííèå
ñòðóêòóðû êëåòêè "óçíàþò" î êàêèõ-ëèáî âíåêëåòî÷íûõ ñîáûòèÿõ íàïðèìåð, î ïðèñîåäèíåíèè áåëêîâ, ãîðìîíîâ, è äð. ÔÈ,
ïðèñóòñòâóÿ â ìåìáðàíå â ìèíîðíûõ êîëè÷åñòâàõ, ïîäâåðæåí
àêòèâíîìó ìåòàáîëèçìó, ñòðîãî êîíòðîëèðóåìîìó è ðåàãèðóþùåìó
íà âíåêëåòî÷íûå âîçäåéñòâèÿ. Ìåõàíèçìàì ó÷àñòèÿ ÔÈ â
ïðîöåññàõ ïåðåäà÷è ñèãíàëà ïîñâÿùåíû ìíîãèå îáçîðû [70, 71].
Êðàòêî, ÔÈ ïîäâåðãàåòñÿ ïîñëåäîâàòåëüíîìó ôîñôîðèëèðîâàíèþ
äî ÔÈ-4,5-äèôîñôàòà (ñ ó÷àñòèåì ÀÒÔ è ðÿäà êèíàç) è àêòèâàöèè (â
îòâåò íà âíåøíèå ñòèìóëû - âêëþ÷àÿ àíòèãåíû) ôîñôîëèïàçû Ñ,
ïîä äåéñòâèåì êîòîðîé îáðàçóåòñÿ äèãëèöåðèä è èíîçèòòðèôîñôàò-1,4,5. Êàæäîå èç ýòèõ ñîåäèíåíèé ìîæåò ñëóæèòü
âòîðè÷íûì ìåññåíäæåðîì, "âêëþ÷àþùèì" êàñêàä áèîëîãè÷åñêè
âàæíûõ ðåàêöèé. Íàïðèìåð, äèãëèöåðèä àêòèâèðóåò ÐÊ Ñ, à
èíîçèò-òðèôîñôàò-1,4,5 èíäóöèðóåò âûõîä âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+.
ÔÈ èãðàþò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ
ôóíêöèÿõ. Èõ âíóòðèêëåòî÷íûé óðîâåíü ñòðîãî ðåãóëèðóåòñÿ
ñïåöèôè÷åñêèìè ÔÈ êèíàçàìè, ôîñôàòàçàìè è ôîñôîëèïàçàìè.
Ñàì ôîñôàòèäèëèíîçèò ðàññìàòðèâàåòñÿ êàê ïðåäøåñòâåííèê
äðóãèõ ÔÈ (ïîëè-ÔÈ), îáðàçîâàíèå êîòîðûõ ïðîèñõîäèò ñ
ïîìîùüþ
ïîñëåäîâàòåëüíîãî
ôîñôîðèëèðîâàíèÿ
ÔÈ
ñïåöèôè÷åñêèìè êèíàçàìè.
Ìåòàáîëèçì ÔÈ â êëåòêå ñòðîãî êîíòðîëèðóåòñÿ. Îíè
92
äåéñòâóþò ëèáî êàê ïðåäøåñòâåííèêè âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ,
òàêèõ êàê èíîçèò-òðèôîñôàò-1,4,5 è äèãëèöåðèä, èëè
íåïîñðåäñòâåííî - ïóòåì âçàèìîäåéñòâèÿ ñ áåëêàìè è
ïðîñòðàíñòâåííî-âðåìåííûì
êîîðäèíèðîâàíèåì
ïóòåé
âíåêëåòî÷íîé ïåðåäà÷è ñèãíàëà ("ñèãíàëèíãà") [2, 72].
Ïîêàçàíî ó÷àñòèå ÔÈ â ðÿäå ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ,
âêëþ÷àÿ êëåòî÷íóþ ïðîëèôåðàöèþ, ðåãóëÿöèþ ïåðåäâèæåíèÿ ñ
ó÷àñòèåì áåëêîâ öèòîñêåëåòà, ïåðåìåùåíèå âíóòðèêëåòî÷íûõ
âåçèêóë, êëåòî÷íûé ìåòàáîëèçì è, íàêîíåö, ãèáåëü êëåòêè.
Ïîýòîìó äèñôóíêöèè â êîíòðîëå èõ óðîâíÿ ÷àñòî âåäóò ê
ïàòîëîãèÿì [71, 73].
ÔÈ-3,4,5-òðèôîñôàò è ÔÈ-3,4-äèôîñôàò ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé
ìèíîðíûå ÔÈ, áûñòðî ïðîäóöèðóåìûå â îòâåò íà ðàçëè÷íûå
ñòèìóëÿöèè êëåòêè. ÔÈ-3,4,5-òðèôîñôàò ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëüíîé
ìîëåêóëîé, ñïîñîáíîé âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ âûñîêèì ñðîäñòâîì ñ
íåêîòîðûìè áåëêàìè, ñîäåðæàùèìè ÐÍ-äîìåí. Ïîêàçàíî, ÷òî ËÍÏ
êðîâè ñïîñîáíû ñòèìóëèðîâàòü êàòàáîëèçì ÔÈ ñ ãåíåðàöèåé
âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ, äèãëèöåðèäà è èíîçèò-1,4,5-òðèôîñôàòà,
è ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé ïðîòåèíêèíàçû Ñ è âûñâîáîæäåíèåì
Ñà2+ èç âíóòðèêëåòî÷íîãî äåïî [74, 75].
Ôîñôààòèäèëãëèö
öåðèí (ÔÃ
Ã) è êààðäèîëèïèí (ÊË). ÔÃ - ãëàâíûé
êîìïîíåíò ÔË áàêòåðèàëüíûõ ìåìáðàí, íî ìèíîðíûé ÔË â òêàíÿõ
æèâîòíûõ. Îí ïðèñóòñòâóåò â îñíîâíîì â ëåãî÷íîì ñóðôàêòàíòå,
ãäå ôóíêöèè åãî íå ÿñíû - ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îí èãðàåò ðîëü â
ñâÿçûâàíèè ñóðôàêòàíòíûõ áåëêîâ. Ïîêàçàíà ðîëü ÔÃ êàê
ôèçèîëîãè÷åñêîãî àêòèâàòîðà ÿäåðíîé ïðîòåèíêèíàçû Ñ [76].
ÊË ïðèñóòñòâóåò ãëàâíûì îáðàçîì â ìèòîõîíäðèÿõ, ãäå
ëîêàëèçóåòñÿ âî âíóòðåííåé ìåìáðàíå. Ïîëàãàþò, ÷òî ÊË èãðàåò
ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â ôóíêöèîíèðîâàíèè ìèòîõîíäðèé çà ñ÷åò
âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ðÿäîì ìèòîõîíäðèàëüíûõ áåëêîâ. ÊË ìîæåò
ó÷àñòâîâàòü â äîñòàâêå áåëêîâ âíóòðü ìèòîõîíäðèé [32].
3.4. Ñôèíãîìèåëèí è äðóãèå ñôèíãîëèïèäû.
Ñôèíãîìèåëèí (ÑÌ) êàê ñòðóêòóðíûé ýëåìåíò êëåòî÷íûõ
ìåìáðàí ïðèâëåêàåò âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé óæå ïî÷òè 100 ëåò,
íî òîëüêî íåäàâíî áûëè ïîëó÷åíû äîêàçàòåëüñòâà åãî
ðåãóëÿòîðíîé ðîëè â âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ [77 - 81]. Â
ïîñëåäíèå ãîäû ïðåäñòàâëåíèÿ î ðîëè ÑÌ è åãî ìåòàáîëèòîâ â
îáåñïå÷åíèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ áèîìåìáðàí çíà÷èòåëüíî
ðàñøèðèëèñü. Ïðè ýòîì èçó÷àëàñü ðîëü íå òîëüêî ñàìîãî ÑÌ, íî è
ðÿäà åãî ìåòàáîëèòîâ, òàêèõ êàê öåðàìèäû è ðàçëè÷íûå
ïðîèçâîäíûå ñôèíãîçèíîâîãî îñíîâàíèÿ.
Êàê èçâåñòíî, ïðèñóòñòâèå â ìåìáðàíàõ ÑÌ, ñ åãî
93
äëèííîöåïî÷å÷íûì îñíîâàíèåì è íàñûùåííîé æèðíîé êèñëîòîé,
ïðèäàåò ìåìáðàíå æåñòêîñòü. Âîçìîæíî, èìåííî ñ ýòèì ñâÿçàíî
ïðåèìóùåñòâåííîå ðàñïðåäåëåíèå ýòîãî ÔË â òêàíÿõ ñîñóäîâ è
íåðâíûõ âîëîêíàõ, òêàíÿõ ñ íàèáîëüøèìè òðåáîâàíèÿìè ê
ìåõàíè÷åñêîé ïðî÷íîñòè ñîñòàâëÿþùèõ èõ êëåòîê. Ñ
îñîáåííîñòÿìè ýòèõ òêàíåé ñîïðÿæåíî, âåðîÿòíî, è äðóãîå
ñâîéñòâî ÑÌ - âûñîêàÿ àôèííîñòü ê õîëåñòåðèíó. Ïîêàçàíî
íàëè÷èå òåñíîé âçàèìîñâÿçè ñôèíãîìèåëèíà ñ õîëåñòåðèíîì â
êëåòêàõ, ÷òî ïîäòâåðæäàåòñÿ ïîâûøåííûì èõ ñîäåðæàíèåì â îäíèõ
è òåõ æå êëåòî÷íûõ êîìïàðòìåíòàõ - ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå è
àïïàðàòå Ãîëüäæè [82].
Íàêîïëåíî ìíîãî ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ, äîêàçûâàþùèõ
ó÷àñòèå íåêîòîðûõ ñôèíãîëèïèäîâ, â ÷àñòíîñòè, ñôèíãîìèåëèíà è
åãî ìåòàáîëèòîâ, â ðåãóëÿöèè ðÿäà âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ
ïðîöåññîâ [83, 84]. Ïîêàçàíà ðîëü ñôèíãîëèïèäîâ â ïðîöåññàõ
àïîïòîçà, ìèãðàöèè, êëåòî÷íîé àäãåçèè, â ðåãóëÿöèè òîíóñà
ñîñóäîâ, àíãèîãåíåçå, â ïàòîãåíåçå àòåðîñêëåðîçà è åãî
îñëîæíåíèé, â ïðîÿâëåíèÿõ êàðäèîòîêñè÷íîñòè, âûçâàííûõ
àíòðàöèêëèíàìè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÑÌ ÷åðåç àêòèâàöèþ
ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû ó÷àñòâóåò â ðåãóëÿöèè îáðàçîâàíèÿ
NO, êîòîðîå ïðèâîäèò ê çàâèñèìîé îò ýíäîòåëèÿ âàçîðåëàêñàöèè
[79, 85].
Íà ðàçëè÷íûõ òèïàõ êëåòîê ðàçëè÷íûõ âèäîâ æèâîòíûõ
ïîêàçàíî, ÷òî ñôèíãîëèïèäû ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â ïðîöåññû
ðåãóëÿöèè ðîñòà è ïðîëèôåðàöèè êëåòîê â êà÷åñòâå êëþ÷åâûõ
ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë [77]. Îáíàðóæåíà ðàíåå íåèçâåñòíàÿ
ñïîñîáíîñòü ñôèíãîëèïèäîâ óñèëèâàòü âîçäåéñòâèå íåêîòîðûõ
âíåêëåòî÷íûõ ýôôåêòîðîâ [86]. Íàïðèìåð, ñôèíãîëèïèäû
ó÷àñòâóþò â ñèãíàëüíûõ ïðîöåññàõ, èíèöèèðîâàííûõ öèòîêèíàìè,
ôàêòîðàìè ðîñòà è ëèïîïðîòåèíàìè, êîòîðûå èãðàþò êëþ÷åâóþ
ðîëü â àíãèîãåíåçå, à â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ è â ðàçâèòèè
ñîñóäèñòîé ïàòîëîãèè. Òàê, ýêñïåðèìåíòàëüíî áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
âîçäåéñòâèå òàêèõ ïîâðåæäàþùèõ àãåíòîâ, êàê TNF, îêèñëåííûõ
ËÍÏ, èíòåðëåéêèíà-1 è 2, è äð. âûçûâàåò â ýíäîòåëèàëüíûõ,
ãëàäêîìûøå÷íûõ êëåòêàõ, òðîìáîöèòàõ è êàðäèîìèîöèòàõ
ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ, ÑÔ, S1P è äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ
ñôèíãîëèïèäîâ [87].
Ðåçóëüòàòû ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèé ïîñëåäíèõ ëåò
ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî òàêèå ïðîèçâîäíûå ñôèíãîëèïèäîâ, êàê
öåðàìèäû, ñôèíãîçèí è ñôèíãîçèí-1-ôîñôàò ÿâëÿþòñÿ
âòîðè÷íûìè ìåññåíäæåðàìè ìíîãèõ âàæíåéøèõ êëåòî÷íûõ
ïðîöåññîâ. Íàïðèìåð, óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðîëèôåðàöèÿ [88],
äèôôåðåíöèðîâêà [89] èëè àïîïòîç êëåòîê [90] ìîãóò áûòü
94
èíèöèèðîâàíû ãèäðîëèçîì ÑÌ ñ ïîñëåäóþùèì íàêîïëåíèåì
öåðàìèäîâ. Òàêæå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî åùå äî ïðîÿâëåíèÿ
íà÷àëüíûõ
ýòàïîâ
àòåðîñêëåðîòè÷åñêîãî
ïîðàæåíèÿ
ïðîëèôåðàöèè ãëàäêîìûøå÷íûõ êëåòîê ñîñóäîâ - óâåëè÷èâàåòñÿ
àêòèâíîñòü ñôèíãîìèåëèíàçû (ÑÌàçû), ñîïðîâîæäàþùàÿñÿ
îáðàçîâàíèåì ñôèíãîëèïèäíûõ ìåòàáîëèòîâ [91].
Êðîìå òîãî, öåðàìèäû èëè ïðîäóêòû èõ ìåòàáîëèçìà ÿâëÿþòñÿ
ìåäèàòîðàìè íåêîòîðûõ ìåæêëåòî÷íûõ ðåãóëÿòîðîâ, òàêèõ êàê
öèòîêèíû, ôàêòîðû ðîñòà, ñòðåññîðíûå àãåíòû. Ïîêàçàíî, ÷òî
âîçäåéñòâèå ýòèõ ðåãóëÿòîðîâ íà êëåòêó ïðèâîäèò ê ãåíåðàöèè â
íåé öåðàìèäà è åãî ïðîèçâîäíûõ. Äîáàâëåíèå ýêçîãåííûõ
ïðîèçâîäíûõ ñôèíãîëèïèäîâ ê êóëüòóðå êëåòîê èìèòèðóåò
áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû öèòîêèíîâ è ôàêòîðîâ ðîñòà [92, 93].
"Âìåøàòåëüñòâî" âî âíóòðèêëåòî÷íûé ñèíòåç ñôèíãîëèïèäíûõ
ìåäèàòîðîâ ìåíÿåò áèîëîãè÷åñêèé îòâåò êëåòêè íà âíåøíèå
ñòèìóëû [94, 95]. Îáðàçîâàíèå ñôèíãîëèïèäíûõ ìåäèàòîðîâ è ïóòè
èõ àêòèâàöèè óíèâåðñàëüíû â ïðèðîäå: îíè ïðèñóòñòâóþò êàê â
êëåòêàõ ïðîêàðèîò (äðîææåé), òàê è âûñøèõ ýóêàðèîò (÷åëîâåêà).
Ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî íàêîïëåíèå öåðàìèäà â êëåòêå ÿâëÿåòñÿ
õàðàêòåðíûì ïðîÿâëåíèåì àïîïòîçà - ïðîãðàììèðóåìîé ãèáåëè
êëåòêè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî âûçûâàþùèå àïîïòîç ìíîãî÷èñëåííûå
ñòðåññîâûå âîçäåéñòâèÿ îêðóæàþùåé ñðåäû ïðèâîäÿò ê
âíóòðèêëåòî÷íîé ãåíåðàöèè öåðàìèäîâ. Ïðè ýòîì òðàíñëîêàöèÿ
ÑÌ â ðàôòàõ îáåñïå÷èâàåò â äàëüíåéøåì ó÷àñòèå îáðàçîâàííûõ èç
íåãî öåðàìèäîâ â ïåðåäà÷å ñèãíàëà ïðè àïîïòîçå.
Àïîïòîòè÷åñêèé
"ðàçäðàæèòåëü"
èíäóöèðóåò
ïîòåðþ
àñèììåòðèè â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Ôîñôàòèäèëñåðèí ïðè
ýòîì îêàçûâàåòñÿ íà íåñâîéñòâåííîé åìó âíåøíåé ñòîðîíå
ìåìáðàíû, à ÑÌ, íàîáîðîò, ìåäëåííî âûòåñíÿåòñÿ èç íåå,
ïåðåäâèãàÿñü íà öèòîïëàçìàòè÷åñêóþ ñòîðîíó, ãäå âåðîÿòíî, è
ïðîõîäèò åãî ãèäðîëèç ÑÌàçîé è îáðàçîâàíèå öåðàìèäà [96]. Òàêèå
ïðîöåññû, êîãäà âíåøíèé ìîíîñëîé ëèøàåòñÿ ñâîåãî ÑÌ íå òîëüêî
çà ñ÷åò åãî òðàíñëîêàöèè, íî è çà ñ÷åò ãèäðîëèçà, îêàçûâàþò
âëèÿíèå íà ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ìåìáðàíû. Ìåíÿåòñÿ
æèäêîñòíîñòü
ìèêðîäîìåíîâ
ïëàçìàòè÷åñêèõ
ìåìáðàí,
ïðîèñõîäèò ïåðåðàñïðåäåëåíèå õîëåñòåðèíà ïî íàïðàâëåíèþ ê
âíóòðåííåé ÷àñòè êëåòêè èëè ê âíåêëåòî÷íîìó àêöåïòîðó
(ëèïîïðîòåèíó). Âñå ýòè èçìåíåíèÿ ïðèâîäÿò ê àêòèâàöèè
ïðîöåññîâ àïîïòîçà [97].
Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî òàêèì ïîâåðõíîñòíûì èçìåíåíèÿì
ïðåïÿòñòâóåò äîáàâëåíèå ÑÌ ê àïîïòîçíîé êëåòêå, íà îñíîâàíèè
÷åãî
ïðåäïîëîæèëè,
÷òî
îïðåäåëÿþùèì
ôàêòîðîì
ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â àïîïòîçíîé êëåòêå ÿâëÿåòñÿ íå
95
îáðàçîâàíèå öåðàìèäà, à óõîä ñ ïîâåðõíîñòè ÑÌ è åãî ãèäðîëèç
[96]. Õîòÿ ïðåäñòàâëåíèÿ î òîì, íàñêîëüêî âàæíîé ÿâëÿåòñÿ ñâÿçü
ìåæäó àïîïòîçîì è îáðàçîâàíèåì öåðàìèäîâ â êëåòêå,
îêîí÷àòåëüíî íå ñôîðìèðîâàëèñü, áîëüøèíñòâî èññëåäîâàòåëåé
ïîäòâåðæäàþò åå ñóùåñòâîâàíèå. Íàïðèìåð, êëåòêè ýíäîòåëèÿ
ëåãêèõ, òîíêîãî êèøå÷íèêà è ñïèííîãî ìîçãà ó ìûøåé, ëèøåííûõ
ÑÌàçû (è íå ïðîäóöèðóþùèõ öåðàìèä), îêàçàëèñü óñòîé÷èâûìè ê
èíäóöèðîâàííîìó ðàäèàöèåé àïîïòîçó, à äîáàâëåíèå öåðàìèäà ê
íèì ñïîñîáñòâîâàëî èíäóêöèè àïîïòîçà [98 - 100]. Âûÿâëåíà ñâÿçü
àïîïòîçà ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ñ ãåíåðàöèåé öåðàìèäà ïðè
âûçâàííîì ëèïîïîëèñàõàðèäîì ñåïòè÷åñêîì øîêå [101].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî öåðàìèäû èãðàþò ñïåöèôè÷åñêóþ ðîëü â
àïîïòîçå êàðäèîìèîöèòîâ, èíäóöèðîâàííîì ïðîòèâîîïóõîëåâûì
àíòèáèîòèêîì
äîêñîðóáèöèíîì,
àêòèâèðóþùèì
ÑÌàçó.
Èíãèáèðîâàíèå àêòèâàöèè ÑÌàçû L-êàðíèòèíîì, áëîêèðóþùèì
ãåíåðàöèþ
öåðàìèäîâ,
ïðåäîòâðàùàëî
ïîâðåæäåíèå
êàðäèîìèîöèòîâ è ñíèæàëî àïîïòîç [102].
Ïóòè ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ, âîâëå÷åíûõ
â èíäóöèðîâàííûé ñôèíãîëèïèäàìè àïîïòîç, âêëþ÷àþò
èíãèáèðîâàíèå ñâÿçàííûõ ñ âûæèâàíèåì êëåòîê ïðîöåññîâ, òàêèõ
êàê äåéñòâèå PKB/Akt (ñåðèí-òðåîíèíîâàÿ ïðîòåèí-êèíàçà Â)
è/èëè ïðîöåññîâ àêòèâàöèè êëàññè÷åñêèõ êàñêàäîâ êàñïàç [103,
104]. Àïîïòîç ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, èíäóöèðîâàííûé
ýêçîãåííûìè öåðàìèäàìè, ìîæíî ïðåäîòâðàòèòü äîáàâëåíèåì
ýíäîòåëèàëüíîãî âàñêóëÿðíîãî ôàêòîðà ðîñòà [104, 105] èëè
ãåíåðàöèåé S1P [106]. Âåðîÿòíî, òàê æå, êàê è äëÿ äðóãèõ òèïîâ
êëåòîê [107], ñîîòíîøåíèå èëè áèîñòàòóñ öåðàìèä/S1P ìîæåò
ìîäóëèðîâàòü àïîïòîç ñîñóäèñòûõ êëåòîê, ëèáî ïîääåðæèâàåò èõ
æèçíåñïîñîáíîñòü çà ñ÷åò òîíêîé ðåãóëÿöèè êëþ÷åâûõ ôåðìåíòîâ
ìåòàáîëèçìà ñôèíãîëèïèäîâ [108 - 110].
Îäíèì èç íàèáîëåå ïîäðîáíî èçó÷åííûõ ïðîöåññîâ ñ ó÷àñòèåì
ñôèíãîëèïèäíîé ðåãóëÿöèè êëåòî÷íîãî ñèãíàëà ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç,
èíäóöèðîâàííûé ôàêòîðîì íåêðîçà îïóõîëè - α-TNF. Â 2002 ã.
S.Malagarie-Cazenave
è
äð.
[111]
ïðåäëîæèëè
ñõåìó
ñôèíãîëèïèäíîãî ñèãíàëèíãà, íåêîòîðûå ýëåìåíòû êîòîðîé ìîãóò
èìåòü îáùèå ÷åðòû è ñ äðóãèìè ïðîöåññàìè ïåðåäà÷è ñèãíàëà ñ
ó÷àñòèåì ñôèíãîëèïèäîâ.
α-TNF (tumor necrosis factor) - îòíîñèòñÿ ê ñåìåéñòâó
öèòîêèíîâ; îí ìîæåò ñâÿçûâàòüñÿ ñ ìíîæåñòâîì ðîäñòâåííûõ
ðåöåïòîðîâ, àêòèâàöèÿ êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìûì óñëîâèåì
òàêèõ âàæíåéøèõ äëÿ æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè ïðîöåññîâ, êàê
ïðîëèôåðàöèÿ, äèôôåðåíöèðîâêà, àïîïòîç. ×àùå âñåãî àêòèâàöèþ
ýòèõ ïðîöåññîâ ñâÿçûâàþò ñ ïðèñóòñòâèåì â êëåòêå äâóõ òèïîâ
96
ðåöåïòîðîâ ê α-TNF - TNFR1 è TNFR2.
Ñèãíàëüíûå ïóòè, îïîñðåäóþùèå ýôôåêòû α−TNF, åùå
ïîëíîñòüþ íå èçó÷åíû, íî èçâåñòíî, ÷òî îíè âêëþ÷àþò
ôîñôîðèëèðîâàíèå è äåôîñôîðèëèðîâàíèå ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ,
àêòèâàöèþ ÑÌàç, íåêîòîðûõ òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ è
îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà.
Ðàííèå íàáëþäåíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî TNF ñïîñîáåí çàïóñêàòü
äåãðàäàöèþ ÑÌ è ãåíåðàöèþ öåðàìèäîâ [89] â ðàçëè÷íûõ òèïàõ
êëåòîê. Íàïðèìåð, äîáàâëåíèå α-TNF ê êóëüòóðå êëåòîê
ôèáðîáëàñòîâ ÷åëîâåêà âûçûâàëî â ïîñëåäóþùèå 50-60 ìèíóò
àêòèâàöèþ íåéòðàëüíîé ÑÌàçû, ãèäðîëèç ÑÌ è ãåíåðàöèþ
öåðàìèäîâ â êëåòêàõ. Ýòè æå ïðîöåññû, íî ñî ñêîðîñòüþ â 10 ðàç
âûøå, íàáëþäàëèñü â êóëüòóðå îïóõîëåâûõ êëåòîê U937. Êðîìå
òîãî, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñèíòåç öåðàìèäîâ àêòèâèðóåòñÿ ñ
ó÷àñòèåì ðåöåïòîðà ê α-TNF - TNFR1 [112 - 114].
Ñîãëàñíî Malagarie-Cazenave è äð. [111], âçàèìîäåéñòâèå
ñôèíãîëèïèäîâ ñ ýôôåêòîðàìè è ðåöåïòîðàìè α-TNF â ïðîöåññå
àïîïòîçà ïðîèñõîäèò ïî ñëåäóþùåé ñõåìå:
- ïðè ñâÿçûâàíèè α-TNF ïðîèñõîäèò òðèìåðèçàöèÿ TNFðåöåïòîðà (TNFR1), ÷òî èíäóöèðóåò ìîáèëèçàöèþ íåêîòîðûõ
áåëêîâ ê öèòîïëàçìåííîìó äîìåíó ðåöåïòîðà, îáîçíà÷åííîìó êàê
DD ("äîìåí ñìåðòè", "death domain").
- îáðàçóþùèéñÿ êîìïëåêñ ñëóæèò àäàïòîðíûì áåëêîì,
ñïîñîáíûì àêòèâèðîâàòü êèñëóþ ÑÌàçó;
- äðóãîé ôðàãìåíò àêòèâèðîâàííîãî ðåöåïòîðà (NSD) ó÷àñòâóåò
â àêòèâàöèè íåéòðàëüíîé ÑÌàçû;
- îáðàçóþùèéñÿ ïðè âîçäåéñòâèè ÑÌàç íà ñôèíãîìèåëèí
öåðàìèä äåéñòâóåò íà ñïåöèôè÷åñêèå áåëêè - êàñïàçû,
âûçûâàþùèå àïîïòîç (ñì. ãëàâó 4).
Òàêîé ìåõàíèçì ïîäòâåðæäàåòñÿ òåì, ÷òî ñèíòåç öåðàìèäîâ
áëîêèðóåòñÿ â êëåòêàõ, óñòîé÷èâûõ ê öèòîòîêñè÷åñêîìó ýôôåêòó
TNF, à íàñëåäñòâåííûé äåôåêò èëè èíãèáèðîâàíèå ÑÌàç ðàçîáùàåò
àïîïòîç.
Ïîëàãàþò, ÷òî â äàëüíåéøåì ýòè ðåçóëüòàòû, ïî-âèäèìîìó,
ñìîãóò íàéòè êëèíè÷åñêîå ïðèìåíåíèå, òàê êàê íåêîòîðûå
ïàòîëîãè÷åñêèå ñîñòîÿíèÿ ÷åëîâåêà õàðàêòåðèçóþòñÿ àíîìàëüíîé
ïðîäóêöèåé TNF èëè èçìåíåíèåì åãî âçàèìîäåéñòâèÿ ñ
ðåöåïòîðîì (ñåïòè÷åñêèé øîê, áîëåçíü Êðîíà, ðÿä âîñïàëèòåëüíûõ
ïðîöåññîâ).
Ïîìèìî àïîïòîçà ñôèíãîëèïèäû è èõ ïðîèçâîäíûå ó÷àñòâóþò â
ðåàëèçàöèè è äðóãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ
α-TNF:
äèôôåðåíöèðîâêè ìîíîöèòîâ, ïðîëèôåðàöèè ôèáðîáëàñòîâ,
ýêñïðåññèè àäãåçèâíûõ ìîëåêóë è ðåçèñòåíòíîñòè ê èíñóëèíó.
97
Íàïðèìåð,
îáðàçîâàíèå
öåðàìèäîâ,
èíäóöèðîâàííîå
áàêòåðèàëüíîé ÑÌàçîé èëè ôàêòîðîì íåêðîçà îïóõîëè, âûçûâàåò
Å-ñåëåêòèí-çàâèñèìóþ àäãåçèþ íåéòðîôèëîâ ê ýíäîòåëèàëüíûì
êëåòêàì ÷åëîâåêà [115, 116].  äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [117]
ïîêàçàíî, ÷òî ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè èíäóöèðóåò àêòèâíîñòü
ñôèíãîçèí-êèíàçû è íàêîïëåíèå S1P, ïðèâîäÿùåå ê óâåëè÷åíèþ
ñïåöèôè÷åñêèõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë, Å-ñåëåêòèíà è VCAM-1 (vascular cell adhesive molecule), ýêñïðåññèðóåìûõ ÷åðåç àêòèâàöèþ NFκB è MAPK [118, 119].
3.5. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ëèçîôîñôîëèïèäîâ.
Âàæíîå ìåñòî â ìåòàáîëèçìå ÔË çàíèìàþò ëèçîÔË, êîòîðûì
ïðèíàäëåæèò è ñóùåñòâåííàÿ äîëÿ ðåãóëÿòîðíûõ ôóíêöèé
ôîñôîëèïèäîâ [120]. ËèçîÔË ñîñòîÿò èç áîëüøîé ãèäðîôèëüíîé
ïîëÿðíîé "ãîëîâêè", ïðèêðåïëåííîé ê ãëèöåðèíîâîìó èëè
ñôèíãîçèíîâîìó "ñêåëåòó", è îäíîé äëèííîé ãèäðîôîáíîé
óãëåâîäîðîäíîé öåïè - îñòàòêà æèðíîé êèñëîòû äëÿ ëèçîãëèöåðîÔË, èëè ñôèíãîèäíîãî îñíîâàíèÿ äëÿ ëèçîÑÔË.
 áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ ëèçîÔË ïðèñóòñòâóþò, êàê
ïðàâèëî, â î÷åíü íèçêèõ êîëè÷åñòâàõ (0,5-6% îáùåãî âåñà ëèïèäîâ
ìåìáðàí), ÷òî îáúÿñíÿþò îñîáåííîñòÿìè èõ õèìè÷åñêîé
ñòðóêòóðû. Íàëè÷èå áîëåå ãèäðîôèëüíîé ïîëÿðíîé "ãîëîâêè", ÷åì
â îáû÷íûõ ÔË, è òîëüêî îäíîé äëèííîé óãëåâîäîðîäíîé öåïè,
ïðèäàþò ëèçîÔË áîëåå âûðàæåííûå ñóðôàêòàíòíûå è
äåòåðãåíòíûå ñâîéñòâà. Âûñîêèå êîíöåíòðàöèè ëèçîÔË íàðóøàþò
öåëîñòíîñòü ìåìáðàí, âîçäåéñòâóþò íà àêòèâíîñòè ìíîãèõ
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ è ìîãóò äàæå ïðèâîäèòü ê ëèçèñó êëåòîê
[120].
Íåñìîòðÿ íà íèçêèå êîíöåíòðàöèè, ëèçîÔË øèðîêî
ðàñïðîñòðàíåíû â æèâîòíûõ òêàíÿõ è ëèïîïðîòåèíàõ. Â êðîâè
ëèçîÔË îáíàðóæèâàþòñÿ â ñâÿçàííîì ñ àëüáóìèíîì âèäå.
Êîíöåíòðàöèÿ ëèçîÔË ïîâûøàåòñÿ ïðè àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ,
ïðè ïîâðåæäåíèè òêàíåé, âîñïàëåíèè è íåîïëàçèè. Áèîëîãè÷åñêèå
ôóíêöèè ëèçîÔË ñîïðÿæåíû ñ ðîñòîì êëåòêè, âêëþ÷àÿ
ïðîëèôåðàöèþ, äèôôåðåíöèðîâêó è ïðîöåññû åå âûæèâàíèÿ, à
òàêæå ñ ïîäàâëåíèåì àïîïòîçà.
Ïðè íèçêèõ íå òîêñè÷íûõ êîíöåíòðàöèÿõ ëèçîÔË ìîãóò
äåéñòâîâàòü êàê ëèïèäíûå âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû, ïðåîáðàçóÿ
ñèãíàëû, ïîëó÷åííûå îò ìåìáðàííûõ ðåöåïòîðîâ, à òàêæå
ïðîÿâëÿÿ ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå àêòèâíîñòè.
Ëèçîôîñôîëèïèäíûå ìåäèàòîðû ãåíåðèðóþòñÿ â ìåìáðàíàõ
êëåòîê â õîäå ñïåöèôè÷åñêîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ðàñùåïëåíèÿ
ãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ è ñôèíãîëèïèäîâ.
98
3.5.1. Ëèçîñôèíãîëèïèäû.
Ëèçîñôèíãîëèïèäû îáðàçóþòñÿ ïðè ãèäðîëèçå ÑÌ ñ
ïîñëåäóþùèì îáðàòèìûì ðàñùåïëåíèåì öåðàìèäà äî ñôèíãîçèíà
è äàëüíåéøèì âîçìîæíûì ôîñôîðèëèðîâàíèåì ïîñëåäíåãî äî S1P.
 ïîñëåäíèå ãîäû ýòî ñîåäèíåíèå ïðèâëåêàåò âíèìàíèå
èññëåäîâàòåëåé èç-çà âûÿâëåííîé âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè.
 ýêñïåðèìåíòàõ in vitro íà ìîäåëüíûõ ñèñòåìàõ ïîêàçàíà
âàæíàÿ ðåãóëÿòîðíàÿ ðîëü S1P â àíãèîãåíåçå [121 - 123]. Îí
ñïîñîáåí
óâåëè÷èâàòü
ïðîëèôåðàöèþ
è
õåìîòàêñèñ
ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, ñòèìóëèðîâàòü îáðàçîâàíèå êàïèëëÿðîâ â
êóëüòóðå êëåòîê, ðàñòóùèõ íà êîëëàãåíîâîì ãåëå [123, 124],
óñèëèâàòü äåéñòâèå ôàêòîðà ðîñòà ôèáðîáëàñòîâ íà òêàíè ðîãîâîãî
ñëîÿ ó ìûøåé [125]. Ñóùåñòâóåò òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî èìåííî S1P,
ïîñòóïàþùèé â êëåòêó ïîñëå âûñâîáîæäåíèÿ èç òðîìáîöèòîâ, èëè
âíîñèìûé â íåå îêèñëåííûìè ËÍÏ, à òàêæå ñèíòåçèðîâàííûé
âíóòðè êëåòêè, ìîæåò ó÷àñòâîâàòü â ïðîëèôåðàöèè êëåòîê
ñîñóäèñòîé ñòåíêè, âûçûâàÿ åå óòîëùåíèå è ñòàáèëèçàöèþ
àòåðîñêëåðîòè÷åñêîé áëÿøêè [126].
Óðîâåíü S1P êîíòðîëèðóåòñÿ â êëåòêå ïóòåì ñòðîãîé
êîîðäèíèðîâàííîé ðåãóëÿöèè íåñêîëüêèõ ôåðìåíòîâ - ñôèíãîçèíêèíàçû, S1P-ôîñôàòàçû è S1P-ëèàçû [127]. Ïîêàçàíî, ÷òî èç-çà
îòíîñèòåëüíîé âîäîðàñòâîðèìîñòè S1P ìîæåò ïîêèäàòü êàê
ìåìáðàíó, òàê è ñàìó êëåòêó. Áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû S1P
ðàçëè÷íû è ñâÿçàíû ñ åãî ëîêàëèçàöèåé âíóòðè èëè âíå êëåòêè
[128].
Ïîìèìî S1P, â ïîñëåäíèå ãîäû áûë îòêðûò åùå îäèí àêòèâíûé
ëèçîñôèíãîëèïèäíûé ðåãóëÿòîð - ñôèíãîçèë-ôîñôîðèëõîëèí
(SPC), ïðîäóêò äåàöèëèðîâàíèÿ ÑÌ. Íåêîòîðûå ýôôåêòû SPC
ñâÿçûâàþò ñ åãî ïðåäïîëàãàåìîé ñïîñîáíîñòüþ ê àêòèâàöèè NOñèíòàçû è äåéñòâèåì íà ñâÿçàííûé ñ íåé ìåòàáîëè÷åñêèé ïóòü [85].
Âìåñòå ñ S1P SPC áûë îáíàðóæåí â ËÍÏ, îñîáåííî â èõ îêèñëåííûõ
ôîðìàõ. Ïîêàçàíî, ÷òî è S1P, è SPC ÿâëÿþòñÿ êëþ÷åâûìè
ñèãíàëüíûìè ìîëåêóëàìè, âîâëå÷åííûìè â ñòèìóëÿöèþ
êëåòî÷íîãî ðîñòà [129]. Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî, ïî êðàéíåé ìåðå,
÷àñòü ìèòîãåííîãî è àòåðîãåííîãî ýôôåêòîâ ËÍÏ îáóñëîâëåíû
ñâÿçàííûìè ñ íèìè S1P è SPC [130, 131].
Ïîêàçàíî, ÷òî ñôèíãîçèí, S1P è SPC ÿâëÿþòñÿ ïîòåíöèàëüíûìè
êàëüöèé-ìîáèëèçóþùèìè
àãîíèñòàìè:
S1P
óñèëèâàåò
èíèöèèðóåìîå ñôèíãîçèíîì âûñâîáîæäåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî
Ñà2+ [132], à SPC ìîæåò ìîáèëèçîâàòü Ñà2+ â ãëàäêîìûøå÷íûõ è
ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ [133, 134].
Ðåãóëÿòîðíûå
âîçäåéñòâèÿ
ëèçîñôèíãîëèïèäîâ
÷àñòî
99
ñî÷åòàþòñÿ ñ äåéñòâèÿìè ëèçîÔË, îñîáåííî ëèçîÔÊ, ïîýòîìó â
ïîñëåäíåå âðåìÿ óäåëÿåòñÿ áîëüøîå âíèìàíèå êîìïëåêñíîìó
äåéñòâèþ ýòèõ ëèçîÔË.
3.5.2. Ëèçîãëèö
öåðîôîñôîëèïèäû.
Íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäîì â
êëåòî÷íîé ìåìáðàíå ÿâëÿåòñÿ ëèçîÔÕ; îí ïðåäñòàâëåí òàêæå â ËÍÏ
êðîâè, îñîáåííî â îêèñëåííî ìîäèôèöèðîâàííûõ ËÍÏ, à òàêæå â
áåçëèïîïðîòåèíîâîé ôðàêöèè ñûâîðîòêè â êîìïëåêñå ñ àëüáóìèíîì.
ËèçîÔÕ ñîñòàâëÿåò â ñðåäíåì 6 - 9% îò âñåõ ÔË ñûâîðîòêè. Äðóãèå
ëèçîÔË ïðèñóòñòâóþò â ñûâîðîòêå è â ëèïîïðîòåèíàõ â çíà÷èòåëüíî
ìåíüøèõ, íå îïðåäåëÿåìûõ ïðè îáû÷íîì ôîñôîëèïèäíîì àíàëèçå
êîëè÷åñòâàõ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êîíöåíòðàöèè ëèçîÔÊ è S1P â
íîðìàëüíîé ñûâîðîòêå ìîãóò ñîñòàâëÿòü ïðèáëèçèòåëüíî 10 ìêÌ è
0,5 ìêÌ ñîîòâåòñòâåííî [135, 136].
Óâåëè÷åíèå óðîâíÿ ëèçîÔË â ðåçóëüòàòå èçìåíåííîãî
ìåòàáîëèçìà ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ ñâÿçàíî ñ ðàçâèòèåì ðÿäà
çàáîëåâàíèé, òàêèõ, êàê èøåìèÿ è àðèòìèÿ ìèîêàðäà, èøåìèÿ è
äåìèåëèíèçàöèÿ ïåðèôåðè÷åñêèõ íåðâîâ.
Äîëãîå âðåìÿ ðàçëè÷íûå ýôôåêòû ëèçîÔË îáúÿñíÿëè â
îñíîâíîì èõ ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûìè èëè äåòåðãåíòíûìè
ñâîéñòâàìè. Èñïîëüçîâàíèå íîâûõ ìåòîäè÷åñêèõ ïîäõîäîâ
(âûñîêîðàçðåøàþùèõ îïòè÷åñêèõ ìåòîäîâ, ðàçëè÷íûõ çîíäîâ,
ìîäåëüíûõ ìåìáðàííûõ ñèñòåì è äð.) ïîçâîëèëî èññëåäîâàòåëÿì
äîáèòüñÿ ñóùåñòâåííûõ óñïåõîâ â âûÿñíåíèè ðîëè è ó÷àñòèÿ ýòèõ
ñîåäèíåíèé â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è, îñîáåííî, â
òðàíñäóêöèè êëåòî÷íûõ ñèãíàëîâ.
 ñâÿçè ñ áîëüøåé äîñòóïíîñòüþ ëèçîÔÕ ïî ñðàâíåíèþ ñ
äðóãèìè ëèçî-ïðîèçâîäíûìè, áîëüøèíñòâî èññëåäîâàíèé
áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ â òå÷åíèå ðÿäà ëåò ïðîâîäèëè èìåííî íà
ýòîì ëèçîÔË. Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî, âîçäåéñòâóÿ íà ãåííóþ
ýêñïðåññèþ, ëèçîÔÕ îêàçûâàåò âëèÿíèå íà êëåòî÷íûå îòâåòû.
ËèçîÔÕ ó÷àñòâóåò â ïðîÿâëåíèè íåêîòîðûõ áèîëîãè÷åñêèõ
ôóíêöèé ëèïîïðîòåèíîâ, ñòèìóëèðóåò ðîñò ìàêðîôàãîâ,
îáóñëàâëèâàåò îïîñðåäîâàííûå ïðîòåèíêèíàçîé Ñ àêòèâàöèþ Òëèìôîöèòîâ è äèôôåðåíöèàöèþ HL-60 êëåòîê â ìàêðîôàãè [137].
Ïîëó÷åíû äàííûå, ÷òî ëèçîÔÕ îêàçûâàåò ìèòîãåííûé ýôôåêò
íà ìàêðîôàãè ìûøåé, èíäóöèðóÿ ýêñïðåññèþ ãåíîâ ðîñòîâûõ
ôàêòîðîâ, âîâëå÷åííûõ â àòåðîãåíåç è âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû.
Îí ìîæåò ðåãóëèðîâàòü ýêñïðåññèþ ìîëåêóë àäãåçèè íà
ïîâåðõíîñòè ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, ìîäóëèðîâàòü çàâèñèìóþ îò
ýíäîòåëèÿ àðòåðèàëüíóþ ðåëàêñàöèþ, ïðîÿâëÿÿ, òàêèì îáðàçîì,
âàçîàêòèâíûå ñâîéñòâà [138].
100
ËèçîÔÕ ìîæåò òàêæå óñèëèâàòü èììóííûå îòâåòû. Íàïðèìåð,
îí ñòèìóëèðóåò ôàãîöèòîç ìàêðîôàãîâ è ëåéêîöèòîâ. Ïîëàãàþò,
÷òî ëèçîÔÕ, ëèáî èç ËÍÏ, ëèáî èç ìåìáðàííûõ ÔË ïîâðåæäåííûõ
êëåòîê, èãðàåò îïðåäåëåííóþ ðîëü íà ðàííèõ ñòàäèÿõ
àòåðîñêëåðîçà è â âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññàõ. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî
ëèçîÔÕ è åãî ïðîèçâîäíûå ïðîÿâëÿþò ïðîòèâîîïóõîëåâûå ñâîéñòâà
è áàêòåðèöèäíóþ àêòèâíîñòü.
Ïðè âêëþ÷åíèè ëèçîÔÕ â ìåìáðàíû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî
ðåòèêóëóìà íàáëþäàëè ñíèæåíèå àêòèâíîñòè Ñà2+-ÀÒÔàçû áåç
èçìåíåíèÿ ïîäâèæíîñòè æèðíîêèñëîòíûõ öåïåé [139]. Àâòîðû
ïðåäïîëîæèëè, ÷òî â îñíîâå ñíèæåíèÿ àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ëåæàò
èçìåíåíèÿ ïîâåðõíîñòíûõ ñâîéñòâ ìåìáðàíû, âëèÿþùèå íà
êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ Ñà-ÀÒÔàçû, à òàêæå äåéñòâèå
ëèçîÔÕ îïîñðåäîâàííîå ñèãíàëüíîé òðàíñäóêöèåé.
Äðóãèì âûñîêî àêòèâíûì ëèçîãëèöåðîÔË ÿâëÿåòñÿ ëèçîÔÊ,
ñîäåðæàùàÿ - êàê è ëèçîñôèíãîëèïèäû - îäíó äëèííóþ
óãëåâîäîðîäíóþ öåïü è ôîñôàòíî-ãèäðîêñèëüíóþ ïîëÿðíóþ
"ãîëîâêó".
 êëåòî÷íûõ ìåìáðàíàõ ïðèñóòñòâóþò ìèíîðíûå, åäâà
îïðåäåëÿåìûå êîëè÷åñòâà ñâîáîäíîé ëèçîÔÊ, ÷òî, âîçìîæíî,
ñâÿçàíî ñ îáðàòíûì ïðåâðàùåíèåì åå â ÔÊ ïîä äåéñòâèåì ëèçîÔÊàöèëòðàíñôåðàçû, èëè áûñòðûì ðàñùåïëåíèåì ñ ïîìîùüþ
ëèçîôîñôîëèïàç.
Ýòîò
ïðîñòåéøèé
ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèä
ÿâëÿåòñÿ
ìóëüòèôóíêöèîíàëüíûì ôîñôîëèïèäîì, ñïîñîáíûì âûçûâàòü
ðàçëè÷íûå áèîëîãè÷åñêèå îòâåòû, âêëþ÷àÿ àãðåãàöèþ
òðîìáîöèòîâ, ñîêðàùåíèå ãëàäêîé ìóñêóëàòóðû, ïðîëèôåðàöèþ è
äèôôåðåíöèðîâêó êëåòîê, ñîêðàùåíèå àêñîíîâ, àññîöèàöèþ
àäãåçèâíûõ ìîëåêóë è äð.  ðÿäå ðàáîò ïîêàçàíî ó÷àñòèå ëèçîÔÊ â
îïóõîëåâîì ðîñòå, à òàêæå, âìåñòå ñ ïðîñòàãëàíäèíàìè è
ãàíãëèîçèäàìè, â àíãèîãåíåçå [140-146].
Ñóùåñòâåííûé ïîäúåì óðîâíÿ ëèçîÔÊ îáíàðóæåí â ñûâîðîòêå
êðîâè æåíùèí, ñòðàäàþùèõ êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ, ïðè÷åì ýòîò
ïîäúåì íàáëþäàëñÿ óæå íà ïåðâîé ñòàäèè áîëåçíè. Ïîýòîìó áûëî
ïðåäëîæåíî èñïîëüçîâàòü ëèçîÔÊ â êà÷åñòâå íîâîãî ìàðêåðà ïðè
îïóõîëè ÿè÷íèêîâ [140]. Êðîìå òîãî, îíà èíäóöèðóåò
ïðîëèôåðàöèþ è ìèòîãåííûé ñèãíàëèíã êëåòîê ðàêà ïðîñòàòû
[141]. Ïðèñóòñòâèå ëèçîÔÊ ïîêàçàíî è â ôîëëèêóëÿðíîé æèäêîñòè
ÿè÷íèêîâ çäîðîâûõ æåíùèí [142]. Ýòîò ôàêò ïîçâîëèë
ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ëèçîÔÊ, êàê áèîëîãè÷åñêèé ìåäèàòîð
ãåíåðèðóåòñÿ ðåïðîäóêòèâíûìè òêàíÿìè, èãðàÿ, ïî âñåé
âåðîÿòíîñòè, ìíîæåñòâåííóþ ðîëü è â ìóæñêîé, è â æåíñêîé
ðåïðîäóêòèâíîé ôèçèîëîãèè è ïàòîëîãèè [141].
101
Òàêèì îáðàçîì, ëèçîÔÊ, S1P è SPÑ ðàññìàòðèâàþòñÿ ñåé÷àñ êàê
âàæíûå âíåêëåòî÷íûå ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû, êîòîðûì
ñâîéñòâåííû ðàçëè÷íûå ýôôåêòû [143], âêëþ÷àÿ ìèòîãåíåç,
äèôôåðåíöèðîâêó, ìèãðàöèþ êëåòîê, àïîïòîç, à òàêæå ðåãóëÿöèþ
òàêèõ ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, êàê àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ,
ñîñóäîñóæèâàþùàÿ
àêòèâíîñòü,
çàæèâëåíèå
ðàí,
èììóíîìîäóëÿöèÿ è àíãèîãåíåç. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ýòè ñîåäèíåíèÿ
êàê ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû ó÷àñòâóþò â ðåãóëÿöèè òàêèõ ïðîöåññîâ,
êàê ìîáèëèçàöèÿ êàëüöèÿ, èíãèáèðîâàíèå àäåíèëàòöèêëàçû è
àêòèâàöèÿ ìèòîãåí-àêòèâèðóþùåé ïðîòåèíêèíàçû (ÌÀPK). S1P
òàêæå âîâëå÷åí â öåðåáðàëüíûé âàçîñïàçì. Ïîêàçàíî, ÷òî ëèçîÔË
ñïîñîáñòâóþò ïîâûøåíèþ óðîâíåé èíîçèò-1,4,5-òðèôîñôàòà,
äèãëèöåðèäà, ôîñôàòèäíîé è àðàõèäîíîâîé êèñëîò. Íåêîòîðûå
ëèçîÔË èíèöèèðóþò è ðåãóëèðóþò ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê ñ
ïîìîùüþ ìåõàíèçìîâ, èìåþùèõ ñõîäñòâî ñ ïðîöåññàìè,
èíèöèèðóåìûìè îñíîâíûìè ïîëèïåïòèäíûìè ôàêòîðàìè ðîñòà
[141, 144 - 146]. Ïðè ýòîì ïîìèìî èíèöèèðóåìûõ ðîñòîâûõ
ýôôåêòîâ, ëèçî-ïðîèçâîäíûå â êëåòêå ôóíêöèîíèðóþò êàê
ìåäèàòîðû ìíîæåñòâåííûõ êëåòî÷íûõ îòâåòîâ.
Ëèçîôîñôîëèïèäû, áëàãîäàðÿ áîëüøèì ïîëÿðíûì "ãîëîâêàì",
îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ èíèöèèðîâàòü ôóíêöèîíèðîâàíèå
ìåìáðàííûõ Ê+-êàíàëîâ (ò.í. TREK-êàíàëîâ), âûñîêèé óðîâåíü
ýêñïðåññèè êîòîðûõ îòìå÷åí â öåíòðàëüíîé è ïåðèôåðè÷åñêîé
íåðâíîé ñèñòåìå (íî íå îáíàðóæåí â ñåðäöå). Ýòè êàíàëû
ðåãóëèðóþòñÿ ôîñôîðèëèðîâàíèåì è îòêðûâàþòñÿ ïîä äåéñòâèåì
ðàçëè÷íûõ ôèçè÷åñêèõ è õèìè÷åñêèõ ñòèìóëîâ (ëèçîÔË,
ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû è ëåòó÷èå àíåñòåòèêè) [147,
148].
3.5.3. Ñî÷åòààííîå äåéñòâèå ñôèíãîëèïèäîâ è ëèçîÔË
íàà êëåòî÷íûå ïðîö
öåññû.
 ïðîöåññàõ áèîñèíòåçà ëèçîãëèöåðîôîñôîëèïèäîâ è
ñôèíãîëèïèäîâ è îñóùåñòâëÿåìûõ ñ èõ ó÷àñòèåì ïóòåé ïåðåäà÷è
ñèãíàëà ïðîÿâëÿþòñÿ ìíîãî÷èñëåííûå âçàèìîäåéñòâèÿ ìåæäó
ýòèìè ãðóïïàìè ÔË. Ïðè ýòîì áèîõèìè÷åñêèå ðåàêöèè
áèîñèíòåçà, ðàñùåïëåíèÿ è ñèãíàëèíãà òåñíî âçàèìîñâÿçàíû è
ñòðîãî êîîðäèíèðîâàíû äðóã ñ äðóãîì.
Ïðåäëîæåíî òðè îñíîâíûõ ìåõàíèçìà, ïî êîòîðûì ïðîèñõîäèò
óñèëåíèå ñèíòåçà ôîñôàòèäíîé êèñëîòû ïðè ó÷àñòèè ñôèíãîçèíà,
S1P è ëèçîÔÊ [77, 135, 149, 150]:
(1) óâåëè÷åíèå ñ ïîìîùüþ ÑÌàçû îáðàçîâàíèÿ ÔÊ. Ýòî
îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ñîçäàíèÿ â ìåìáðàíå áëàãîïðèÿòíûõ
óñëîâèé äëÿ ðàñùåïëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ ôîñôîëèïàçîé D;
102
(2) ñòèìóëÿöèÿ àêòèâíîñòè ôîñôîëèïàçû D ëèçîôîñôàòèäíîé
êèñëîòîé [150];
(3) ðåãóëÿöèÿ ñ ïîìîùüþ ñôèíãîçèíà è S1P âçàèìîïðåâðàùåíèÿ
ÔÊ è äèãëèöåðèäà çà ñ÷åò ñòèìóëèðîâàíèÿ îáðàçîâàíèÿ ÔÊ è
èíãèáèðîâàíèÿ ìåòàáîëè÷åñêèõ ïóòåé åå ðàñùåïëåíèÿ
(îáðàçîâàíèå ëèçîÔÊ è ïîñëåäóþùåå åå ðàñùåïëåíèå äî
ìîíîãëèöåðèäîâ).
Âçàèìîäåéñòâèÿ ëèçîÔÊ è S1P ìîãóò áûòü êàê êîîïåðàòèâíûìè,
òàê è àíòàãîíèñòè÷åñêèìè. Íàïðèìåð, ñôèíãîçèí è S1P
èíãèáèðóþò êàòàëèçèðóåìîå ôîñôîëèïàçîé Ñ îáðàçîâàíèå ìîíî- è
äèãëèöåðèäîâ, ïîäàâëÿÿ òåì ñàìûì ñòèìóëÿöèþ ïðîòåèíêèíàçû Ñ,
â òî âðåìÿ, êàê ëèçîÔÊ ñòèìóëèðóåò ýòîò ïðîöåññ.
Èíèöèàöèÿ ïðîöåññîâ ñèãíàëèíãà ñ ïîìîùüþ ëèçîÔË
íà÷èíàåòñÿ ñ èõ ïðèñîåäèíåíèÿ ê íåäàâíî îòêðûòûì
ñïåöèôè÷åñêèì ðåöåïòîðàì (íàçûâàåìûì Edg-ðåöåïòîðàìè).
Áóäó÷è âñòðîåíûìè â ìåìáðàíó, îíè âçàèìîäåéñòâóþò ñ
óíèâåðñàëüíûìè ðåãóëÿòîðíûìè G-áåëêàìè. Edg-ðåöåïòîðû
ÿâëÿþòñÿ ãðóïïîé ñîïðÿæåííûõ ñ G-áåëêàìè ðåöåïòîðîâ, GPCRðåöåïòîðîâ (G-protein coupled receptors), àêòèâèðîâàíèå êîòîðûõ
ïðèâîäèò ê "çàïóñêó" ðÿäà âíóòðèêëåòî÷íûõ ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ
[151, 152].
C ïîìîùüþ ýòèõ ïðîöåññîâ ëèçîÔË, êàê óíèêàëüíûå ìåäèàòîðû
àêòèâíîñòè Edg-ðåöåïòîðîâ, ñïîñîáñòâóþò ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè
áèîëîãè÷åñêè âàæíûõ áåëêîâ, îêàçûâàÿ âëèÿíèå íà èõ ñîäåðæàíèå
è/èëè àêòèâíîñòü è, òåì ñàìûì, íà ìíîãèå êëåòî÷íûå ïðîöåññû,
òàêèå êàê: ïîâûøåíèå ÿäåðíûõ òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ,
ïîäàâëåíèå àêòèâíîñòè êàñïàç ïðè àïîïòîçå, ïîâûøåíèå
ìåìáðàííîãî ñîäåðæàíèÿ ãåïàðèí-ñâÿçûâàþùåãî ýïèäåðìàëüíîãî
ôàêòîðà ðîñòà. Ýôôåêòèâíî ïðèñîåäèíÿÿñü ê îäíîìó è áîëåå
ðåöåïòîðàì, ëèçîÔË ìîãóò âûçûâàòü ïîìèìî ðîñòîâûõ, ìíîæåñòâî
äðóãèõ êëåòî÷íûõ îòâåòîâ [135].
Ìíîãî÷èñëåííûå áèîëîãè÷åñêèå ýôôåêòû ñôèíãîëèïèäîâ è
ëèçîÔË äàþò îñíîâàíèÿ äëÿ ïðåäñêàçàíèÿ âîçìîæíîñòè
ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ èõ àãîíèñòîâ èëè àíòàãîíèñòîâ,
âîçäåéñòâóþùèõ íà íåêîòîðûå êîíòðîëèðóåìûå ýòèìè ÔË
ïðîöåññû. Íàïðèìåð, áûëà ïðîèçâåäåíà ïîïûòêà ëîêàëüíîãî
èñïîëüçîâàíèÿ öåðàìèäà: ïîêðûòûé èì áàëëîíîâûé êàòåòåð
ñíèæàë â ýêñïåðèìåíòå íåîèíòèìàëüíóþ ãèïåðïëàçèþ ïîñëå
ïîâðåæäåíèÿ ñîííîé àðòåðèè êðîëèêà [153]. Ñïîñîáíîñòü ëèçîÔÊ
è S1P ê ïîäàâëåíèþ àïîïòîçà ìîæåò áûòü â ïðèíöèïå
èñïîëüçîâàíà,
íàïðèìåð,
äëÿ
ïðîäëåíèÿ
æèçíè
òðàíñïëàíòèðîâàííîãî
îðãàíà,
çàùèòû
êàðäèîìèîöèòîâ,
ïîâðåæäåííûõ ïðè èøåìèè [135]. Ëîêàëüíàÿ äîñòàâêà àãîíèñòîâ
103
ëèçîÔË ìîãëà áû áûòü âûãîäíà ïðè âîññòàíîâëåíèè òêàíåé è
àíãèîãåíåçå, â òî âðåìÿ êàê â äðóãèõ ñèòóàöèÿõ ìîãóò áûòü
èñïîëüçîâàíû àíòàãîíèñòû ëèçîÔË ðåöåïòîðîâ, íàïðèìåð, äëÿ
ñíèæåíèÿ êëåòî÷íîé ïðîëèôåðàöèè ñ öåëüþ îãðàíè÷åíèÿ ñêëåðîçà
è ôóíêöèîíàëüíî ðàçðóøèòåëüíîãî ôèáðîçà.
 òî æå âðåìÿ íåîáõîäèìî ïîíèìàòü, ÷òî ðîñò-ñòèìóëèðóþùàÿ
àêòèâíîñòü ëèçîÔÊ è S1P ìîæåò òàêæå ñïîñîáñòâîâàòü ðàçâèòèþ è
ðàñïðîñòðàíåíèþ
îïóõîëè.
Ïîýòîìó
äëÿ
âîçìîæíîñòè
âìåøàòåëüñòâà â ýòó ñèñòåìó ëèçîôîñôîëèïèäíîé ðåãóëÿöèè
íåîáõîäèìî áîëåå ãëóáîêîå ïîíèìàíèå ìåõàíèçìîâ ðåãóëÿöèè
ýêñïðåññèè ëèçîôîñôîëèïèäíûõ ðåöåïòîðîâ, âûÿñíåíèå ïóòåé
ñèãíàëèíãà è èõ âçàèìîäåéñòâèé.
3.6. Ôóíêöèè æèðíûõ êèñëîò ôîñôîëèïèäîâ
Ñóùåñòâåííàÿ äîëÿ ôóíêöèé ÔË ñâÿçàíà ñ îñîáûì çíà÷åíèåì èõ
äëèííîöåïî÷å÷íûõ
æèðíûõ
êèñëîò
ðàçíîé
ñòåïåíè
íåíàñûùåííîñòè. Òàê êàê âíóòðåííåå ãèäðîôîáíîå ïðîñòðàíñòâî
ìåìáðàíû ìåæäó åå íàðóæíûì è âíóòðåííèì ñëîåì çàíèìàþò
ãèäðîôîáíûå öåïè, òî èìåííî îíè âî ìíîãîì îïðåäåëÿþò êàê
æèäêîñòíîñòü ìåìáðàí, òàê è õàðàêòåð áåëîê-ëèïèäíîãî
âçàèìîäåéñòâèÿ äëÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Êðîìå òîãî, æèðíûå
êèñëîòû, îòùåïëÿÿñü îò ÔË ñ ïîìîùüþ ôîñôîëèïàç, ñàìè
ñòàíîâÿòñÿ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûìè ðåãóëÿòîðàìè - ïóòåì
ãåíåðàöèè ïðîñòàãëàíäèíîâ è ëåéêîòðèåíîâ.
Îáðàçóþùèåñÿ ïðîñòàãëàíäèíû, ëåéêîòðèåíû è ðÿä äðóãèõ
ïðîèçâîäíûõ ìîãóò â ìèíèìàëüíûõ êîíöåíòðàöèÿõ îêàçûâàòü
âëèÿíèå íà ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû [154-156].
Áîëüøîå âíèìàíèå â ïîñëåäíèå ãîäû óäåëÿåòñÿ, â ÷àñòíîñòè,
ïîëèíåíàñûùåííûì æèðíûì êèñëîòàì, îñîáåííî ëèíîëåâîé è
àðàõèäîíîâîé. Âàæíîå çíà÷åíèå ïðèäàåòñÿ ïîëèíåíàñûùåííûì
æèðíûì
êèñëîòàì
ðÿäà
n-3
êàê
ïðåäøåñòâåííèêàì
ïðîñòàãëàíäèíîâ. Îáðàçóþùèåñÿ ïðîñòàãëàíäèíû, ëåéêîòðèåíû è
ðÿä äðóãèõ ïðîèçâîäíûõ ìîãóò â ìèíèìàëüíûõ êîíöåíòðàöèÿõ
îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ìíîæåñòâåííûå áèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû
[157-159].
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 3.
1. Singer S.J., Nicolson G.L. The fluid mosaic model of the structure
of cell membranes. Science. 1972, 175, 720-731.
2. Vance J.E., Vance D.E. Specific pools of phospholipids are used for
lipoprotein secretion by cultured hepatocytes. J Biol Chem. 1986, 261,
4486-4491.
3. Thompson W., MacDonald G. Isolation and characterization of
104
cytidine diphosphate diglyceride from beef liver. J Biol Chem. 1975,
250, 6779-6785.
4. Lambeth J.D., Ryu S.H. Glycerolipids in signal transduction. In:
Biochemistry of lipids, lipoproteins and membranes. (Vance D.E, Vance
J.E. eds.). Elsevier Science, Amsterdam. 1996, 237-255.
5. Merrill A.H.J., Sweely C.C. Sphingolipid: metabolism and cell signalling. In: Biochemistry of lipids, lipoproteins and membranes. (Vance
D.E., Vance J.E. eds). Elsevier Science, Amsterdam. 1996, 1-34.
6. Cui Z., Houwelin M. Phosphatidylcholine and cell death. Biochim
Biophys Acta. 2002, 1585, 87-96.
7. Terce F., Brun H., Vance D.E. Requirement of phosphatidylcholine for normal progression through the cell cycle in C3H/10T1/2
fibroblasts. J Lipid Res. 1994, 35, 2130-2142.
8. Jackowski S.A. Cell cycle regulation of membrane phospholipid
metabolism. J Biol Chem. 1996, 271, 20219-20222.
9. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Íàóêà, Ì.
1982.
10. Killian J.A., van Meer G. The ”double life” of membrane lipids.
Workshop: A lipid milestone. EMBO Reports. 2001, 21, 91-95.
11. Pomorski T., Hrafnsdottir S., Devaux P.F., van Meer G. Lipid distribution and transport across cellular membranes. Semin Cell Dev Biol.
2001, 12, 139-148.
12. Ahmed H.A., Jazrawi R.P., Goggin P.M., Dormandy J.,
Northfield T.C. Intrahepatic biliary cholesterol and phospholipid transport in humans: effect of obesity and cholesterol cholelithiasis. J Lipid
Res. 1995, 36, 2562-2573.
13. Moschetta A., vanBerge-Henegouwen G.P., Portincasa P.,
Palasciano G., van Erpecum K.J. Cholesterol crystallization in model
biles: effects of bile salt and phospholipid species composition. J Lipid
Res. 2001, 42, 1273-1281.
14. Zeisel S.H. Choline: needed for normal development of memory. J Am Coll Nutr. 2000, 19, 528-531.
15. Veldhuizen R., Possmayer F. Phospholipid metabolism in lung
surfactant. Subcell Biochem. 2004, 37, 359-388.
16. Bevers E.M, Comfurius P., Zwaal R.F. Changes in memdrane
phospholipid distribution during platelet activation. Biochim Biophys
Acta. 1983, 736, 57-66.
17. Tanaka Y., Schroit A.J. Insertion of fluorescent phosphatidylserine into the plasma membrane of red blood cells. Recognition by autologous macrophages. J Biol Chem. 1983, 258, 11335-11343.
18. Schlegel R.A., Prendegrast T.W., Williamson P. Membrane
phospholipid asymmetry as a factor in erythrocyte-endothelial cell
interactions. J Cell Physiol, 1985, 123, 215-218.
19. Schwartz R.S., Tanaka Y., Fidler I.J., Chiu D.T., Lubin B., Schroit
A.J. Increased adherence of sickled and phosphatidylserine-enriched
human erythrocytes to cultured human peripheral blood monocytes. J
Clin Invest. 1985, 75, 1965-1972.
20. McEvoy L., Williamson P., Schlegel R.A. Membrane phospho105
lipid asymmetry as a determinant of erythrocyte recognition by
macrophages. Proc Natl Acad Sci USA. 1986, 83, 3311-3315.
21. Devaux P.F. Static and dynamic lipid asymmetry in cell membranes. Biochemistry. 1991, 30, 1163-1173.
22. Farge E., Ojcius D.M., Subtil A., Dautry-Varsat A. Enhancement
of endocytosis due to aminophospholipid transport across the plasma
membrane of living cells. Am J Physiol. 1999, 276, 725-733.
23. Bogdanov M., Dowhan W. Lipid-assisted protein folding. J Biol
Chem. 1999, 274, 36827–36830.
24. Clark J.D., Schievella A.R., Nalefski E.A., Lin L.L. Cytosolic
phospholipase A2. J Lipid Mediat Cell Signal. 1995, 12, 83-117.
25. Leslie C.C. Properties and regulation of cytosolic phospholipase
A2. J Biol Chem. 1997, 272, 16709-16712.
26. Newton A.C., Johnson J.J. Protein kinase C: a paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting modules.
Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 155-172.
27. Newton A.C. Protein kinase C: structure, function, and regulation. J Biol Chem. 1995, 270, 28495-28498.
28. Kent C. CTP:phosphocholine cytidylyltransferase. Biochim
Biophys Acta. 1997, 1348, 79-90.
29. Buckland A.G., Wilton D.C. Anionic phospholipids, interfacial
binding and the regulatiojn of cell functions. Biochim Biophys Acta.
2000, 1483, 199-216.
30. de Kruijff B. Anionic phospholipids and protein translocation.
FEBS Lett. 1994, 346, 78-82.
31. van Klompenburg W., de Kruijff B. The role of anionic lipids in
protein insertion and translocation in bacterial membranes. J Membr
Biol. 1998, 162, 1-7.
32. Liu L.P., Deber C.M. Anionic phospholipids modulate peptide
insertion into membranes. Biochemistry. 1997, 36, 5476-5482.
33. Wimley W.C., White. S.H. Experimentally determined
hydrophobicity scale for proteins at membrane interfaces. Nat Struct
Biol. 1996, 3, 842-848.
34. Yau W.M., Wimley W.C., Gawrish K., White S.H. The preference of tryptophan for membrane interfaces. Biochemistry. 1998, 37,
14713-14718.
35. White S.H., Wimley W.C. Hydrophobic interactions of peptides
with membrane interfaces. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 339-352.
36. Leslie C.C., Channon J.Y. Anionic phospholipids stimulate an
arachidonoyl-hydrolyzing phospholipase A2 from macrophages and
reduce the calcium requirement for activity. Biochim Biophys Acta.
1990, 1045, 261-270.
37 Mosior M., Six D.A., Dennis. E.A. Affinity and specificity to
phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate resulting in dramatic increases in
activity. J Biol Chem. 1998, 273, 2184-2191.
38. Scott D.L, Mandel A.M., Sigler P.B., Honig B. The electrostatic
basis for the interfacial binding of secretory phospholipases A2. Biophys
J. 1994, 67, 493-504.
106
39. Snitko Y., Koduri R.S., Han S.K., Othman R., Baker S.F., Molini
B.J., Wilton D.C., Gelb M.H., Cho W.H. Mapping the interfacial binding surface of human secretory group IIa phospholipase A2.
Biochemistry. 1997, 36, 14325-14333.
40. Koduri R.S., Baker S.F., Snitko Y., Han S.K., Cho W.H., Wilton
D.C., Gelb M.H. Action of human group IIa secreted phospholipase A2
on cell membranes. Vesicle but not heparinoid binding determines rate
of fatty acid release by exogenously added enzyme. J Biol Chem. 1998,
273, 32142-32153.
41. Cornell R.B. How cytidylyltransferase uses an amphipathic helix
to sense membrane phospholipid composition. Biochem Soc Trans.
1998, 26, 539-544.
42. Mosior M., Newton A.C. Mechanism of the apparent cooperativity in the interaction of protein kinase C with phosphatidylserine.
Biochemistry. 1998, 37, 17271-17279.
43. Zwaal R.F., Comfurius P., Bewers E.M. Lipid-protein interactions in blood coagulation. Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 433-453.
44. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton
D.L., Henson P.M. Exposure of phosphatidylserine on the surface of
apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by
macrophages. J Immunol. 1992, 148, 2207-2216.
45. Bazzi M.D., Youakim A., Nelsestuen G.L. Importance of phosphatidylethanolamine for association of protein kinase C and other
cytoplasmic proteins with membranes. Biochemistry. 1992, 31, 11251134
46. Boas F.F., Forman L., Beutler E. Phosphatidylserine exposure
and red cell viability in red cell aging and in hemolytic anemia. Proc
Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 3077-3081.
47. Kagan V.E., Borisenko G.G., Serinkan B.F., Tyurina Y.Y., Tyurin
V.A., Jiang J., Liu S.X., Shvedova A.A., Fabisak J.P, Uthaisang W.,
Fadeel B. Appetizing rancidity of apoptotic cells for macrophages: oxidation, externalization and recognition of phosphatidylserine. Am J
Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2003, 285, 1-17.
48. Fabisiak J.P., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Lazo J.S., Kagan V.E.
Random versus selective membrane phospholipid oxidation in apoptosis: role of phosphatidylserine. Biochemistry. 1998, 37, 13781-13790.
49. Gerke V., Moss S.E. Annexins and membrane dynamics.
Biochim Biophys Acta. 1997, 1357, 129-154.
50. Swairjo M.A., Concha N.O., Kaetzel M.A., Dedman J.R.,
Seaton.B.A. Ca(2+)-bridging mechanism and phospholipid head group
recognition in the membrane-binding protein annexin V. Nat Struct
Biol. 1995, 2, 968-974.
51. Davidson F.F., Dennis E.A., Powell M., Glenney J.R. Inhibition
of phospholipase A2 by “lipocortins” and calpactins. An effect of binding to substrate phospholipids. J Biol Chem. 1987, 262, 1698-1705.
52. Aarsman A.J., Mynbeek G., van den Bosh H., Rothut B., Prieur
B., Comera C., Jordan L., Russo-Marie F. Lipocortin inhibition of extracellular and intracellular phospholipases A2 is substrate concentration
107
dependent. FEBS Lett. 1987, 219, 176-180.
53. Buckland A.G., Wilton D.C. Inhibition of secreted phospholipases A2 by annexin V. Competition for anionic phospholipid interfaces
allows an assessment of the relative interfacial affinities of secreted
phospholipases A2. Biochim Biophys Acta. 1998, 1391, 367-376.
54. Stuart M.A., Reutelingspeger C.M., Frederik P.M. Binding of
annexin V to bilayers with various phospholipid compositions using
glass beads in a flow cytometer. Cytometry. 1998, 33, 414-419.
55. Swairjo M.A., Roberts M.F., Campos M.B., Dedman J.R., Seaton
B.A. Annexin V binding to the outer leaflet of small unilamellar vesicles leads to altered inner-leaflet properties: 31P- and 1H-NMR studies.
Biochemistry. 1994, 33, 10944-10950.
56. Geng D., Chura J., Roberts M.F. Activation of phospholipase D
by phosphatidic acid. Enhanced vesicle binding, phosphatidic acidCa2+ interaction, or an allosteric effect? J Biol Chem. 1998, 273, 1219512202.
57. Kinkaid A.R., Othman R., Voysey J., Wilton D.C. Phospholipase
D and phosphatidic acid enhance the hydrolysis of phospholipids in
vesicles and in cell membranes by human secreted phospholipase A2.
Biochim Biophys Acta. 1998, 1390, 173-185.
58. Balsinde J., Balboa M.A., Insel P.A., Dennis E.A. Regulation and
inhibition of phospholipase A2. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1999, 39,
175-189.
59. Murakami M., Kambe T., Shimbara S., Kudo I. Functional association of type IIA secretory phospholipase A(2) with the glycosylphosphatidylinositol-anchored heparan sulfate proteoglycan in the
cyclooxygenase-2-mediated delayed prostanoid-biosynthetic pathway.
J Biol Chem. 1999, 274, 3103-3115.
60. Murakami M., Nakatani Y., Atsumi G., Inoue K., Kudo I.
Regulatory functions of phospholipase A2. Crit Rev Immunol. 1997, 17,
225-283.
61. Fourcade O., Le Balle F., Fauvel J., Simon M.F., Chap H.
Regulation of secretory type-II phospholipase A2 and of lysophosphatidic acid synthesis. Adv Enzyme Regul. 1998, 38, 99-107.
62. Stamnes M., Schiavo C., Stenbeck G., Sollner T.H., Rothman J.E.
ADP-ribosylation factor and phosphatidic acid levels in Golgi membranes during budding of coatomer-coated vesicles. Proc Natl Acad Sci
USA. 1998, 95, 13676-13680.
63. Hodgkin M.N., Pettit T.R., Martin A., Michell R.H., Pemberton
A.J., Wakelam M.J. Diacylglycerols and phosphatidates: which molecular species are intracellular messengers? Trends Biochem Sci. 1998, 23,
200-204.
64. Exton J.H. Phospholipase D: enzymology, mechanisms of regulation, and function. Physiol Rev. 1997, 77, 303-320.
65. Exton J.H. Phospholipase D. Biochim Biophys Acta. 1998, 1436,
105-115
66. Schmidt A., Wolde M., Thiele C., Fest W., Kratzin H.,
Podteleinikov A.V., Witke W., Huttner W.B., Soling H.D. Endophilin I
108
mediates synaptic vesicle formation by transfer of arachidonate to
lysophosphatidic acid. Nature. 1999, 401, 133-141.
67. Stauffer T.P., Ahn S., Meyer T. Receptor-induced transient
reduction in plasma membrane PtdIns(4,5)P2 concentration monitored
in living cells. Curr Biol. 1998, 8, 343-346.
68. Fruman D.A., Rameh L.E., Cantley L.C. Phosphoinositide binding domains: embracing 3-phosphate. Cell. 1999, 97, 817-820.
69. Hsuan J.J., Minogue S., dos Santos M. Phosphoinositide 4- and 5kinases and the cellular roles of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate.
Adv Cancer Res. 1998, 74, 167-216.
70. Toker A. Phosphoinositides and signal transduction. Cell Mol
Life Sci. 2002, 59, 761-779.
71. Pendaries C., Tronchere H., Plantavid M., Payrastre B.
Phosphoinositide signaling disorders in human diseases FEBS Lett.
2003, 546, 25-31
72. Sattler M., Verma S., Pride Y.B., Salgia R., Rohrschneider L.R.,
Griffin J.D. SHIP1, an SH2 domain containing polyinositol-5-phosphatase, regulates migration through two critical tyrosine residues and
forms a novel signaling complex with DOK1 and CRKL. J Biol Chem.
2001, 276, 2451-2458.
73. Raucher D., Stauffer T., Chen W., Shen K., Guo S., York J.D.,
Sheetz M.P., Meyer T. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate functions
as a second messenger that regulates cytoskeleton-plasma membrane
adhesion. Cell. 2000, 100, 221-228.
74. Breitschopf K., Zeiher A.M., Dimmeler S. Pro-atherogenic factors induce telomerase inactivation in endothelial cells through an Aktdependent mechanism. FEBS Lett. 2001, 493, 21-25.
75. Cerbon J., Falcon A., Hernandez-Luna C., Segura-Cobos D.
Inositol phosphoryl ceramide synthase a regulator of intracellular levels of diacylglcerol and ceramide during the G1 to S transition in
Saccharomyces cerevisae. Biochem J. 2004, Nov 24; [Epub ahead of
print].
76. Murray N.R., Fields A.P. Phosphatidylglycerol is a physiologic
activator of nuclear protein kinase C. J Biol Chem. 1998, 273, 1151411520.
77. Spiegel S., Merrill A.H. Sphingolipid metabolism and cell growth
regulation. FASEB J. 1996, 10, 1388–1397.
78. Hannun Y.A., Luberto C. Ceramide in the eukaryotic stress
response. Trends Cell Biol. 2000, 10, 73–80.
79. Levade T., Auge N. Sphingolipid mediators in cardiovascvular
cell biology and pathology. Circulation Res. 2001, 89, 957-977.
80. van Meer G., Holthuis J.C. Sphingolipid transport in eukaryotic
cells. Biochim Biophys Acta. 2000, 1486, 145–170.
81. Koval M., Pagano R.E. Intracellular transport and metabolism of
sphingomyelin. Biochim Biophys Acta. 1991, 1082, 113–125.
82. Yeagle P.L. Cholesterol and the cell membrane. Biochim
Biophys Acta. 1985, 822, 267-287.
83. Holthuis J.C., Pomorski T., Raggers R.J., Sprong H., van Meer G.
109
The organizing potential of sphingolipids in intracellular membrane
transport. Physiol Rev. 2001, 81, 1689-1723.
84. Wu J., Spiegel S., Sturgill T.W. Sphingosine 1-phosphate rapidly
activates the mitogen-activated protein kinase pathway by a G protein–dependent mechanism. J Biol Chem. 1995, 270, 11484–11488.
85. Fogli S., Nieri P., Breschi M.C. The role of nitric oxide in anthracycline toxicity and prospects of pharmacological prevention of cardiac
damage. FASEB J. 2004, 18, 664-675.
86. Lopez-Marure R., Ventura J.L., Sanchez L., Montano L.F.,
Zentella A. Ceramide mimics TNF in the induction of cell cycle arrest
in endothelial cells. Eur J Biochem. 2000, 267, 4325–4333.
87. Masamune A., Igarashi Y., Hakomori S. Regulatory role of
ceramide in interleukin (IL)-1-ß-induced E-selectin expression in
human umbilical vein endothelial cells. J Biol Chem. 1996, 271,
9368–9375.
88. Boucher L.M., Wiegmann K., Futterer A., Pfeffer K., Machleidt
T., Schutze S., Mak T.W., Kronke M. CD28 signals through acidic
sphingomyelinase. J Exp Med. 1995, 181, 2059-2068.
89. Kim M.Y., Linardic C., Obeid L., Hannun Y. Identification of
sphingomyelin turnover as an effector mechanism for the action of
tumor necrosis factor alpha and gamma-interferon. Specific role in cell
differentiation. J Biol Chem. 1991, 266, 484-489.
90. Obeid L.M., Linardic C.M., Karolak L.A., Hannun Y.A.
Programmed cell death induced by ceramide. Science. 1993, 259, 17691771.
91. Auge N., Nikolova-Karakashian M., Carpentier S., Parthasarathy
S., Negre-Salvayre A., Salvayre R., Merrill A.H.Jr., Levade T. Role of
sphingosine 1-phosphate in the mitogenesis induced by oxidized low
density lipoprotein in smooth muscle cells via activation of sphingomyelinase, ceramidase, and sphingosine kinase. J Biol Chem. 1999,
74, 21533-21538.
92. Hannun Y.A., Luberto C., Argraves K.M. Enzymes of sphingolipid metabolism: from modulator to integrative signaling.
Biochemistry. 2001, 40, 4893-4903.
93. Levade T., Jaffrezou J.P. Signaling sphingomyelinases: which,
where, how and why? Biochim Biophys Acta. 1999, 1438, 1-17.
94. Zhu K., Baudhuin L.M., Hong G., Williams F.S., Cristina K.L.,
Kabarowski J.H., Witte O.N., Xu Y. Sphingosylphosphorylcholine and
Lysophosphatidylcholine are ligands for the G protein-coupled receptor
GPR4. J Biol Chem. 2001, 276, 41325-41335.
95. Ozaki H., Hla T., Lee M.J. Sphingosine-1-phosphate signaling in
endothelial activation. J Atheroscler Thromb. 2003, 10, 125-131.
96. Dbaibo G.S., El-Assaad W., Krikorian A., Liu B., Diab K., Idriss
N.Z., El-Sabban M., Driscoll T.A., Perry D.K., Hannun Y.A. Ceramide
generation by two distinct pathways in TNF induced cell death. FEBS
Lett. 2001, 503, 7-12.
97. O’Brien N.W., Gelling N.M., Guo M., Barlow S.B., Glembotski
C.C., Sabbadini R.A. Factors associated with neutral sphingomyelinase
110
activation and its role in cardiac cell death. Circ Res. 2003, 92, 589-591.
98. Santana P., Pena L.A., Haimovitz-Friedman A., Martin S., Green
D., McLoughlin M., Cordon-Cardo C., Schuchman E.H., Fuks Z.,
Kolesnick R. Acid sphingomyelinase-deficient human lymphoblasts
and mice are defective in radiation-induced apoptosis. Cell. 1996, 86,
189–199.
99. Pena L.A., Fuks Z., Kolesnick R.N. Radiation-induced apoptosis
of endothelial cells in the murine central nervous system: protection by
fibroblast growth factor and sphingomyelinase deficiency. Cancer Res.
2000, 60, 321–332.
100. Paris F., Fuks Z., Kang A., Capodieci P., Juan G., Ehleiter D.,
Haimovitz-Friedman A., Cordon-Cardo C., Kolesnick R. Endothelial
apoptosis as the primary lesion initiating intestinal radiation damage in
mice. Science. 2001, 293, 293–297.
101. Haimovitz-Friedman A., Cordon-Cardo C., Bayoumy S.,
Garzotto M., McLoughlin M., Gallily R., Edwards C.K., Schuchman
E.H., Fuks Z., Kolesnick R. Lipopolysaccharide induces disseminated
endothelial apoptosis requiring ceramide generation. J Exp Med. 1997,
186, 1831–1841.
102. Andrieu-Abadie N., Jaffrezou J.P., Hatem S., Laurent G., Levade
T., Mercadier J.J. L-Carnitine prevents doxorubicin-induced apoptosis
of cardiac myocytes: role of inhibition of ceramide generation. FASEB
J. 1999, 13, 1501–1510.
103. Lawlor M., Alessi D. PKB/Akt: a key mediator of cell proliferation, survival and insulin responses? J Cell Sci. 2001, 114, 2903-2910.
104. Harada-Shiba M., Kinoshita M., Kamido H., Shimokado K.
Oxidized low density lipoprotein induces apoptosis in cultured human
umbilical vein endothelial cells by common and unique mechanisms. J
Biol Chem. 1998, 273, 9681–9687.
105. Deigner H.P., Claus R., Bonaterra G.A., Gehrke C., Bibak N.,
Blaess M., Cantz M., Metz J., Kinscherf R. Ceramide induces aSMase
expression: implications for oxLDL-induced apoptosis. FASEB J. 2001,
15, 807–814.
106. Xia P., Wang L., Gamble J.R., Vadas M.A. Activation of sphingosine kinase by TNF inhibits apoptosis in human endothelial cells. J
Biol Chem. 1999, 274, 34499–34505.
107. Cuvillier O., Pirianov G., Kleuser B., Vanek P.J., Coso O.A.,
Gutkind J.S., Spiegel S. Suppression of ceramide-mediated programmed
cell death by sphingosine-1-phosphate. Nature. 1996, 381, 800–803.
108. Hisano N., Yatomi Y., Satoh K., Akimoto S., Mitsumata M.,
Fujino M.A., Ozaki Y. Induction and suppression of endothelial cell
apoptosis by sphingolipids: a possible in vitro model for cell-cell interactions between platelets and endothelial cells. Blood. 1999, 93,
4293–4299.
109. Lee M.J., Thangada S., Claffey K.P., Ancellin N, Liu C.H., Kluk
M., Volpi M., Sha’afi R.I., Hla T. Vascular endothelial cell adherens
junction assembly and morphogenesis induced by sphingosine-1-phosphate. Cell. 1999, 99, 301–312.
111
110. Kwon Y.G., Min J.K., Kim K.M., Lee D.J., Billiar T.R., Kim Y.M.
Sphingosine-1-phosphate protects human umbilical vein endothelial
cells from serum-deprived apoptosis by nitric oxide production. J Biol
Chem. 2001, 276, 10627–10633.
111. Malagarie-Cazenave S., Andrieu-Abadie N., Segui B., Gouaze
V., Tardy C., Cuvillier O., Levade T. Sphingolipid signalling: molecular
basis and role in TNF - induced cell death. Expert Rev Mol Med. 2002,
20, 1-15.
112. Henis Y.I., Moustakas A., Lin H.Y., Lodish H.F. The types II
and III transforming growth factor-beta receptors form homooligomers. J Cell Biol. 1994, 126, 139-154.
113. Gilboa L., Wells R.G., Lodish H.F., Henis Y.I. Oligomeric structure of type I and type II transforming growth factor beta receptors:
homodimers form in the ER and persist at the plasma membrane. J Cell
Biol. 1998, 140, 767-777.
114. Yanaga F., Watson S.P. TNF-alpha stimulates sphingomyelinase
through the 55 kDa receptor in HL-60 cells. FEBS Lett. 1992, 314, 297300.
115. Modur V., Zimmerman G.A., Prescott S.M., McIntyre T.M.
Endothelial cell inflammatory responses to TNF. J Biol Chem. 1996,
271, 13094–13102
116. Kim I., Moon S.O., Kim S.H., Kim H.J., Koh Y.S., Koh G.Y.
Vascular endothelial growth factor expression of intercellular adhesion
molecule 1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1),
and E-selectin through nuclear factor-B. J Biol Chem. 2001, 276,
7614–7620.
117. Slowik M.R., De Luca L.G., Min W., Pober J.S. Ceramide is not
a signal for TNF-induced gene expression but does cause programmed
cell death in human vascular endothelial cells. Circ Res. 1996, 79,
736–747.
118. Xia P., Gamble J.R., Rye K.A., Wang L., Hii C.S., Cockerill P.,
Khew-Goodall Y., Bert A.G., Barter P.J., Vadas M.A. TNFα induces
adhesion molecule expression through the sphingosine kinase pathway.
Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95, 14196–14201.
119. Xia P., Wang L., Gamble J.R., Vadas M.A. Activation of sphingosine kinase by TNFα inhibits apoptosis in human endothelian cell. J
Biol Chem. 1999, 274, 34499-34505.
120. Wang A., Dennis E.A. Mammalian lysophospholipases.
Biochim Biophys Acta. 1999, 1439, 1-16.
121. Yatomi Y., Ohmori T., Rile G., Kazama F., Okamoto H., Sano
T., Satoh K., Kume S., Tigyi G., Igarashi Y., Ozaki Y. Sphingosine-1phosphate as a major bioactive lysophospholipid that is released from
platelets and interacts with endothelial cells. Blood. 2000, 96,
3431–3438.
122. English D., Welch Z., Kovala A.T., Harvey K., Volpert O.V.,
Brindley D.N., Garcia J.G. Sphingosine-1-phosphate released from
platelets during clotting accounts for the potent endothelial cell chemotactic activity of blood serum and provides a novel link between hemo112
stasis and angiogenesis. FASEB J. 2000, 14, 2255–2265.
123. Lee O.H., Kim Y.M., Lee Y.M., Moon E.J., Lee D.J., Kim J.H.,
Kim K.W., Kwon Y.G. Sphingosine-1-phosphate induces angiogenesis:
its angiogenic action and signaling mechanism in human umbilical vein
endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun. 1999, 264, 743–750.
124. Wang F., Van Brocklyn J.R., Hobson J.P., Movafagh S.,
Zukowska-Grojec Z., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate
stimulates cell migration through a Gi-coupled cell surface receptor. J
Biol Chem. 1999, 274, 35343–35350.
125. Olivera A., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate as second messenger in cell proliferation induced by PDGF and FCS mitogens.
Nature. 1993, 365, 557-560.
126. Sano T., Baker D., Virag T., Wada A., Yatomi Y., Kobayashi T.,
Igarashi Y., Tigyi G. Multiple mechanisms linked to Platelet Activation
result in Lysophosphatidic Acid and Sphingosine 1-Phosphate generation in blood. J Biol Chem. 2002, 227, 21197–21206.
127. Pyne S., Pyne N.J. Sphingosine-1-phosphate signalling in mammalian cells. Biochem J. 2000, 349, 385–402.
128. Hla T., Lee M.J., Ancellin N., Liu C.H., Thangada S., Thompson
B.D., Kluk M. Sphingosine-1-phosphate: extracellular mediator or
intracellular second messenger? Biochem Pharmacol. 1999, 58,
201–207.
129. Spiegel S., Milstein S. Sphingosine-1-phosphate, a key cell signaling molecule. J Biol Chem. 2002, 277, 25851-25854.
130. Sachinidis A., Kettenhofen R., Seewald S., Gouni-Berthold I.,
Schmitz U., Seul C., Ko Y., Vetter H. Evidence that lipoproteins are carriers of bioactive factors. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1999, 19,
2412-2421.
131. Gouni-Berthold I., Sachinidis A. Does the coronart risk factor
low density lipoprotein alter growth and signaling in vascular smooth
muscle cells? FASEB J. 2002, 16, 1477-1488.
132. Ghosh T.K., Bian J., Gill D.L. Intracellular calcium release
mediated by sphingosine derivatives generated in cells. Science. 1990,
248, 1653–1656.
133. van Koppen C.J., Meyer Zu Heringdorf D., Laser K.T., Zhang
C., Jakobs K.H. Bunemann M., Pott L. Activation of a high affinity Gi
protein-coupled plasma membrane receptor by sphingosine-1-phosphate. J Biol Chem. 1996, 271, 2082–2087.
134. Nakajima N., Cavalli A.L., Biral D., Glembotski C.C.,
McDonough P.M., Ho P.D., Betto R., Sandona D., Palade P.T., Dettbarn
C.A., Klepper R.E., Sabbadini R.A. Expression and characterization of
Edg-1 receptors in rat cardiomyocytes: calcium deregulation in
response to sphingosine-1-phosphate. Eur J Biochem. 2000, 267,
5679–5686.
135. Goetzl E.J., An S. Diversity of cellular receptors and functions
for the lysophospholipid growth factors lysophosphatidic acid and
sphingosine 1-phosphate. FASEB J. 1998, 12, 1589-1598.
136. Chun J., Goetzl E.J., Hla T., Igarashi Y., Lynch K.R., Moolenaar
113
W., Pyne S., Tigyi G. International Union of Pharmacology. XXXIV.
Lysophospholipid receptor nomenclature. Pharmacol Rev. 2002, 54,
265-269.
137. Ïðîêàçîâà Í.Â., Çâåçäèíà Í.Ä., Êîðîòàåâà À.À. Âëèÿíèå
ëèçîôîñôàòèäèëõîëèíà íà ïåðåäà÷ó òðàíñìåìáðàííîãî ñèãíàëà
âíóòðü êëåòêè. Áèîõèìèÿ. 1998, 63, 38-46.
138. Silliman C.C., Elzi D.J., Ambruso D.R., Musters R.J., Hamiel C.,
Harbeck R.J., Paterson A.J., Bjornsen A.J., Wyman T.H., Kelher M.,
England K.M., McLaughlin-Malaxecheberria N., Barnett C.C., Aiboshi
J., Bannerjee A. Lysophosphatidylcholines prime the NADPH oxidase
and stimulate multiple neutrophil functions through changes in cytosolic calcium. J Leucoc Biol. 2003, 73, 511-524.
139. Hunter G., Bigelow D., Squier T. Lysophosphatidylcholine
modulates catalytically important motions of Ca-ATPase phosphorylation domain. Biochemistry. 1999, 38, 4604-4612.
140. Fang X., Gaudette D., Furui T., Mao M., Estrella V., Eder A.,
Pustilnik T., Sasagawa T., Lapushin R., Yu S., Jaffe R.B., Wiener J.R.,
Erickson J.R., Mills G.B. Lysophospholipid growth factors in the initiation, progression, metastases, and management of ovarian cancer. Ann
N Y Acad Sci. 2000, 905, 188-208.
141. Budnik L.T., Mukhopadhyay A.K.. Lisophosphatidic acid and
its role in reproduction. Biol Reprod. 2002, 66, 859-865.
142. Tokumura A., Miyake M., Nishioka Y., Yamano S., Aono T.,
Fukuzawa K. Production of lysophosphatidic acids by lysophospholipase D in human follicular fluids of In vitro fertilization patients. Biol
Reprod. 1999, 61, 195-199.
143. Galaria I., Fegley A.J., Nicholl S.M., Roztocil E., Davies M.G.
Differential regulation of ERK1/2 and p38(MAPK) by components of
the Rho signaling pathway during sphingosine-1-phosphate-induced
smooth muscle cell migration. J Surg Res. 2004, 122, 173-179.
144. Santos W.L., Rossi J.A., Boggs S.D., MacDonald T.L. The molecular pharmacology of lysophosphatide signaling. Ann N Y Acad Sci.
2000, 905,233–241.
145. Sorensen S.D., Nicole O., Peavy R.D., Montoya L.M., Lee C.J.,
Murphy T.J., Traynelis S.F., Hepler J.R. Common signaling pathways
link activation of murine PAR-1, LPA, and S1P receptors to proliferation of astrocytes. Mol Pharmacol. 2003, 64, 1199-1209.
114
ÃËÀÂÀ 4. ÐÎËÜ ÔÎÑÔÎËÈÏÈÄÎÂ Â ÏÐÎÖÅÑÑÀÕ
ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈß ÊËÅÒÊÈ
Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè íàêîïëåíî ìíîãî äàííûõ î ðîëè
ôîñôîëèïèäîâ â ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è ôóíêöèîíèðîâàíèè
êëåòêè. Ýòî âàæíî äëÿ èçó÷åíèÿ è ïîíèìàíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ
ìåõàíèçìîâ âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ ïàòîëîãèé, ìíîãèå èç
êîòîðûõ,
êàê
ïðàâèëî,
ñîïðîâîæäàþòñÿ
èçìåíåíèÿìè
âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèè è
öåëîñòíîñòè áèîìåìáðàí è, â òîé èëè èíîé ñòåïåíè,
ïîâðåæäåíèÿìè êëåòêè â öåëîì. Íàðóøåíèå ôóíêöèé îäíèõ
êëåòîê ìîæåò áûòü ïåðâîïðè÷èíîé ðàçâèòèÿ áîëåçíè, à
ñîçäàâøèåñÿ íåáëàãîïðèÿòíûå èçìåíåíèÿ â îðãàíèçìå âëåêóò çà
ñîáîé íàðóøåíèå ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê äðóãèõ òêàíåé è
äàëüíåéøåå ðàçâèòèå ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà. Íàïðèìåð, ãèáåëü
êëåòîê ñåðäå÷íîé ìûøöû ïðè èíôàðêòå ìèîêàðäà ìîæåò ïðèâåñòè
ê ãèïîêñèè è íàðóøåíèþ ôóíêöèé êëåòîê äðóãèõ îðãàíîâ: ïî÷åê,
ìîçãà, ïå÷åíè [1-5].
Ïðîöåññû, ïðèâîäÿùèå ê ïîâðåæäåíèþ êëåòêè, äàâíî
ïðèâëåêàëè âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé. Â ñåðåäèíå ïðîøëîãî âåêà
îñíîâíûì
êðèòåðèåì
ïîâðåæäåíèÿ
áûëî
ïîâûøåíèå
ïðîíèöàåìîñòè êëåòî÷íîé ìåìáðàíû [6,7]. Ïîçäíåå, (â 70õ- 80õ
ãîäàõ), ñ óñîâåðøåíñòâîâàíèåì ìåòîäîâ âûäåëåíèÿ, àíàëèçà è
êîíñòðóèðîâàíèÿ ìåìáðàí, áûëî ïîëó÷åíî ìíîæåñòâî äàííûõ,
ñâèäåòåëüñòâóþùèõ î ïåðâè÷íîñòè ìåìáðàííûõ íàðóøåíèé åäâà
ëè íå âî âñåõ âèäàõ êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé [8].  ïîñëåäíèå ãîäû
ðàçâèòèå òàêèõ íàïðàâëåíèé ñîâðåìåííîé áèîõèìèè, êàê ãåíîìèêà
è ïðîòåîìèêà, ïîçâîëèëî ãëóáæå ïîíÿòü ìíîãèå ìîëåêóëÿðíûå
ïðîöåññû, ïðîòåêàþùèå â êëåòêå, â òîì ÷èñëå è ìåõàíèçìû åå
ïîâðåæäåíèÿ [9]. Îäíîâðåìåííûé ìîíèòîðèíã ìíîãèõ òèïîâ
ìîëåêóë äàë âîçìîæíîñòü èçó÷àòü êëåòî÷íûå îòâåòû íà
ìîëåêóëÿðíûå ïîâðåæäåíèÿ, âêëþ÷àÿ ýâîëþöèîííî çàêðåïëåííûå
ñèñòåìû èíäóöèðóåìîé ìîëåêóëÿðíîé çàùèòû. Âñå ýòî ïîçâîëèëî
âûÿâèòü íîâûå áèîìàðêåðû, äåéñòâèÿ êîòîðûõ îñíîâàíû íà
ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìàõ êëåòî÷íîãî îòâåòà íà ïîâðåæäåíèÿ [9].
 ìíîãî÷èñëåííûõ ðàáîòàõ, îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû
è ñâÿçàííûõ ñ ïîâåäåíèåì êëåòêè â ðàçëè÷íûõ ïîâðåæäàþùèõ
óñëîâèÿõ (êàê in vitro, òàê è in vivo, âêëþ÷àÿ ïàòîëîãè÷åñêîå
ñîñòîÿíèå îðãàíèçìà è âíåøíèå âîçäåéñòâèÿ), ïîâðåæäåíèÿ
ìåìáðàííûõ ñèñòåì êëåòêè çàíèìàþò ñóùåñòâåííîå ìåñòî ëèáî êàê
ïåðâàÿ ïîâðåæäàåìàÿ ìèøåíü, ëèáî êàê ñèñòåìà, îïðåäåëÿþùàÿ âî
ìíîãîì äàëüíåéøóþ ñóäüáó êëåòêè [1, 2, 10].
115
4.1. Îñíîâíûå èçìåíåíèÿ â êëåòêàõ ïðè ïîâðåæäåíèè
4.1.1. Ðåààêö
öèÿÿ êëåòêè íàà èçìåíåíèÿÿ óñëîâèé.
 óñëîâèÿõ íîðìàëüíîãî ãîìåîñòàçà ñóùåñòâîâàíèå êëåòêè
îãðàíè÷åíî äîâîëüíî óçêèì äèàïàçîíîì ôóíêöèîíàëüíûõ è
ñòðóêòóðíûõ õàðàêòåðèñòèê, îïðåäåëÿåìûõ åå ãåíåòè÷åñêîé
ïðîãðàììîé ìåòàáîëèçìà, äèôôåðåíöèàöèè è ñïåöèàëèçàöèè,
îêðóæåíèåì ñîñåäíèõ êëåòîê, à òàêæå äîñòóïíîñòüþ
ìåòàáîëè÷åñêèõ ñóáñòðàòîâ. Ïðè íåêîòîðîì èçìåíåíèè óñëîâèé
èëè êàêèõ-ëèáî ïàòîëîãè÷åñêèõ ñòèìóëàõ âîçìîæåí ðÿä
ôèçèîëîãè÷åñêèõ è ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé, ïðè êîòîðûõ
äîñòèãàåòñÿ íîâîå ñòàöèîíàðíîå ñîñòîÿíèå, çàùèùàþùåå
æèçíåñïîñîáíîñòü êëåòêè è âíîñÿùåå íåêîòîðûå èçìåíåíèÿ â åå
ôóíêöèè â îòâåò íà âíåøíèå ñòèìóëû. Òàêîå ñîñòîÿíèå íàçûâàþò
àäàïòàöèåé êëåòîê. Îíà, íàïðèìåð, ìîæåò âêëþ÷àòü îáîãàùåíèå
ìåìáðàííûõ ôîñôîëèïèäîâ ÏÍÆÊ ïðè ïîíèæåííûõ òåìïåðàòóðàõ
[11]. Ýòî ïðåïÿòñòâóåò ñíèæåíèþ æèäêîñòíîñòè ìåìáðàíû, èëè
ñíèæåíèþ ýêñïðåññèè ãåíîâ, êîäèðóþùèõ SREBP áåëêè,
ó÷àñòâóþùèå â áèîñèíòåçå õîëåñòåðèíà â îòâåò íà åãî èçáûòî÷íîå
ïîñòóïëåíèå â êëåòêó [12, 13] è ò.ä.
Åñëè àäàïòàöèîííûå âîçìîæíîñòè êëåòêè ïðåâûøåíû,
âîçíèêàåò
ïîñëåäîâàòåëüíîñòü
ñîáûòèé,
íàçûâàåìàÿ
ïîâðåæäåíèåì. Äî êàêîãî-òî ìîìåíòà ïîâðåæäåíèå ìîæåò áûòü
îáðàòèìûì, íî åñëè âîçäåéñòâèå ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà
îêàçûâàåòñÿ äëèòåëüíûì èëè óñèëèâàåòñÿ, ïîâðåæäåíèå
ñòàíîâèòñÿ íåîáðàòèìûì, è êëåòêà ãèáíåò. Ðåàêöèÿ êëåòêè íà
ïîâðåæäåíèå çàâèñèò êàê îò õàðàêòåðà ïîâðåæäàþùåãî ñòèìóëà, òàê
è îò ñâîéñòâ ñàìîé êëåòêè. Òàê, êëåòêè ñ âûñîêîé ñêîðîñòüþ
ìåòàáîëèçìà (íåéðîíû, êëåòêè ñåðäå÷íîé ìûøöû) â íàèáîëüøåé
ñòåïåíè ïîäâåðæåíû ïîâðåæäåíèÿì (èøåìèÿ ïðè ãèïîêñè÷åñêèõ
âîçäåéñòâèÿõ) [14]. Êðîìå òîãî, ïîäâåðæåííîñòü êëåòîê è òêàíåé
(îñîáåííî ïå÷åíè) ïîâðåæäàþùåìó ôàêòîðó ìîæåò çàâèñåòü îò
ñîñòîÿíèÿ èëè îñîáåííîñòåé îðãàíèçìà. Òàê, ãîëîäàíèå ïîâûøàåò
ãåïàòîòîêñè÷íîñòü ÑÑ14, à èíäèâèäóàëüíàÿ íåïåðåíîñèìîñòü ê
àãåíòàì (íàïðèìåð, ê àëêîãîëþ èëè êàêèì-ëèáî ëåêàðñòâàì)
óñèëèâàåò èõ ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå [15]. Ëþáîé ïàòîëîãè÷åñêèé
ïðîöåññ, êàêîé áû ñòåïåíüþ ôóíêöèîíàëüíûõ íàðóøåíèé îí íå
ñîïðîâîæäàëñÿ, íà÷èíàåòñÿ íà óðîâíå óëüòðàñòðóêòóð èëè
áèîõèìè÷åñêèõ ñèñòåì êëåòêè, è òîëüêî ïîñëå äîñòèæåíèÿ
íåêîòîðîãî óðîâíÿ èõ äåçîðãàíèçàöèè â ïîâðåæäåííîé êëåòêå
íà÷èíàþò ïðîÿâëÿòüñÿ ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ.
4.1.2. Ïðè÷èíû, âûçûâààþù
ùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè.
Âñå ïðè÷èíû, âûçûâàþùèå ïîâðåæäåíèå êëåòêè è ñâÿçàííûå ñ
116
âîçäåéñòâèåì êàê íà îðãàíèçì â öåëîì, òàê è íåïîñðåäñòâåííî íà
êëåòêè, ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà íåñêîëüêî îñíîâíûõ
êàòåãîðèé.
1) Íåäîñòàòîê êèñëîðîäà, íàïðèìåð, ïðè èøåìèè, ñåðäå÷íîé
èëè äûõàòåëüíîé íåäîñòàòî÷íîñòè, àíåìèè, èëè îòðàâëåíèè
îêèñüþ óãëåðîäà.
2) Ôèçè÷åñêèå âîçäåéñòâèÿ, ê êîòîðûì îòíîñÿòñÿ ìåõàíè÷åñêàÿ
òðàâìà, ðåçêîå èçìåíåíèå òåìïåðàòóðû, âíåçàïíûå èçìåíåíèÿ
àòìîñôåðíîãî äàâëåíèÿ, ðàäèàöèÿ, ýëåêòðè÷åñêèé øîê, è ò.ä.
3) Õèìè÷åñêèå àãåíòû, ê êîòîðûì îòíîñÿò: (à) îáû÷íûå
ñóáñòðàòû òèïà ãëþêîçû èëè ñîëè, íî â ïîâûøåííûõ
(ãèïåðòîíè÷åñêèõ) êîëè÷åñòâàõ; (á) òîêñè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ, â òîì
÷èñëå òÿæåëûå ìåòàëëû, ðàñòâîðèòåëè, ÿäû, ãîðìîíû, (â) ëåêàðñòâà
è äð.
4) Èíôåêöèîííûå àãåíòû (âèðóñû, áàêòåðèè);
5) Àíàôèëàêòè÷åñêèå è àóòîèììóííûå ðåàêöèè (è èçìåíåííûå
èììóííûå îòâåòû âîîáùå).
6) Ãåíåòè÷åñêèå íàðóøåíèÿ êàê â îòäåëüíûõ ãåíàõ, òàê è
àíîìàëèè â õðîìîñîìàõ.
7) Ïèòàòåëüíûé äèñáàëàíñ, ñâÿçàííûé ñ íåäîñòàòî÷íîñòüþ (èëè,
íàîáîðîò, ñ èçáûòî÷íîñòüþ) ïîñòóïëåíèÿ â îðãàíèçì áåëêîâ,
âèòàìèíîâ.
8) Ñòàðåíèå, äåéñòâèå êîòîðîãî ìîæåò ïðîÿâëÿòüñÿ èëè
ñïåöèôè÷åñêè, èëè â êîìáèíàöèè ñ âûøå íàçâàííûìè ôàêòîðàìè.
Ñòðóêòóðíûå è áèîõèìè÷åñêèå àññîöèàöèè â êëåòêå íàñòîëüêî
âçàèìîñâÿçàíû, ÷òî êàêèì áû íè áûë ëîêóñ ïåðâîíà÷àëüíîé
ïîâðåæäàþùåé àòàêè, îíà âñå ðàâíî ïðèâîäèò ê øèðîêîìó ðÿäó
âòîðè÷íûõ ýôôåêòîâ.
4.2. Àïîïòîç è íåêðîç - äâà âàðèàíòà ãèáåëè ïîâðåæäåííîé
êëåòêè.
Ìîðôîëîãè÷åñêèå
ðàçëè÷èÿ
ôèçèîëîãè÷åñêîé
è
ïàòîëîãè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè âïåðâûå ïîäðîáíî áûëè îïèñàíû
áîëåå 50 ëåò íàçàä [16], à òåðìèí "àïîïòîç", êàê îáîçíà÷åíèå ôîðìû
ãèáåëè êëåòêè, ðàäèêàëüíî îòëè÷àþùåéñÿ îò íåêðîçà, ïðî÷íî
óêîðåíèëñÿ â 70-õ ãîäàõ ïðîøëîãî âåêà [17]. Ñ òåõ ïîð ñ÷èòàåòñÿ
îáùåïðèçíàííûì ñóùåñòâîâàíèå äâóõ îñíîâíûõ ôîðì êëåòî÷íîé
ãèáåëè, îäèíàêîâûõ ïî ðåçóëüòàòó (ïðåêðàùåíèå áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè êëåòêè è ôàãîöèòîç åå îñòàòêîâ), íî îòëè÷àþùèõñÿ ïî
ìîëåêóëÿðíî-áèîõèìè÷åñêèì, ìîðôîëîãè÷åñêèì è êëèíè÷åñêèì
êðèòåðèÿì.
Ê ìîðôîëîãè÷åñêèì êðèòåðèÿì àïîïòîçà îòíîñÿòñÿ öåëîñòíîñòü
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, êîíäåíñàöèÿ õðîìàòèíà, íàáóõàíèå
117
ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû. Îñòàòêè êëåòêè ôàãîöèòèðóþòñÿ
ìàêðîôàãàìè èëè ñîñåäíèìè êëåòêàìè, ïîýòîìó êëåòî÷íîå
ñîäåðæèìîå íå ïîïàäàåò â ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî è íå
âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè. Ïðè íåêðîçå, íàïðîòèâ, êëåòêè
íàáóõàþò, èõ ìèòîõîíäðèè è äðóãèå îðãàíåëëû óâåëè÷èâàþòñÿ â
îáúåìå, ðàçðûâàþòñÿ âíóòðèêëåòî÷íûå è ïëàçìàòè÷åñêàÿ
ìåìáðàíû. Â ðåçóëüòàòå àêòèâèðóþòñÿ ëèçîñîìàëüíûå ôåðìåíòû, à
âíóòðèêëåòî÷íîå ñîäåðæèìîå, ïîïàäàÿ âî âíåêëåòî÷íóþ ñðåäó,
âûçûâàåò âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû (ðèñ.4.2.1) [4, 18, 19 ].
Ðèñ. 4.2.1. Ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ êëåòêè ïðè àïîïòîçå
è íåêðîçå (ïî [22] ñ èçìåíåíèÿìè)
1 - íîðìàëüíàÿ êëåòêà, 2 - àïîïòîòè÷åñêîå ñìîðùèâàíèå êëåòêè ñ îáðàçîâàíèåì ïóçûð÷àòûõ
âûðîñòîâ, 3 - ôðàãìåíòàöèÿ êëåòêè ñ îáðàçîâàíèåì àïîïòîòè÷åñêèõ òåëåö, 4 - íàáóõàíèå
êëåòêè ïðè íåêðîçå, 5 - íåêðîòè÷åñêàÿ äåçèíòåãðàöèÿ êëåòêè.
Ïóòü ãèáåëè, "âûáèðàåìûé" ïîâðåæäàåìîé êëåòêîé, çàâèñèò îò
ìíîãèõ ôàêòîðîâ, âêëþ÷àÿ òèï êëåòêè, åå ýíåðãåòè÷åñêèé ñòàòóñ
(ò.å. óðîâåíü ñèíòåçà ÀÒÔ), õàðàêòåð è ñòåïåíü ïîâðåæäåíèÿ,
ñîñòîÿíèå èììóííîé ñèñòåìû îðãàíèçìà, â ÷àñòíîñòè àêòèâíîñòè
êëåòîê Ò-êèëëåðîâ, è äð. [20, 21].
4.2.1. Àïîïòîç.
Àïîïòîç - ïðîöåññ "çàïðîãðàììèðîâàííîé ãèáåëè êëåòîê", êîòîðûé
â çäîðîâîì îðãàíèçìå ñáàëàíñèðîâàí èõ ôèçèîëîãè÷åñêîé
ðåãåíåðàöèåé [23]. Â õîäå àïîïòîçà âíóòðåííèå èëè âíåøíèå ôàêòîðû,
àêòèâèðóÿ ïîñðåäñòâîì ïåðåäà÷è ñèãíàëîâ ãåíåòè÷åñêóþ ïðîãðàììó,
âûçûâàþò ãèáåëü êëåòêè è åå ýôôåêòèâíîå óäàëåíèå èç òêàíè [20, 21].
Ïî âûðàæåíèþ Ñêóëà÷åâà Â.Ï. [24], "Àïîïòîç ñëóæèò ìîëåêóëÿðíûì
118
ìåõàíèçìîì, îáåñïå÷èâàþùèì ñòàðåíèå è ñìåðòü æèâîãî îðãàíèçìà,
÷òî, âîçìîæíî, íå î÷åíü ïîëåçíî äëÿ èíäèâèäà, íî ÷ðåçâû÷àéíî âàæíî
äëÿ ñòàáèëüíîñòè ïîïóëÿöèè". Åæåäíåâíî îêîëî 5% êëåòîê â
îðãàíèçìå ïîäâåðãàþòñÿ àïîïòîçó, èñ÷åçàÿ áåññëåäíî â òå÷åíèå 15 120 ìèíóò, à èõ ìåñòî çàíèìàþò íîâûå [25]. Òàêèì îáðàçîì, àïîïòîç ãåíåòè÷åñêè
êîíòðîëèðóåìûé
áèîëîãè÷åñêèé
ìåõàíèçì,
îòâåòñòâåííûé çà ïîääåðæàíèå ïîñòîÿíñòâà ÷èñëåííîñòè è
âûáðàêîâêó äåôåêòíûõ êëåòîê.
Ñðåäè ìîëåêóëÿðíî-áèîõèìè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ àïîïòîçà
âàæíåéøèìè ÿâëÿþòñÿ:
(1) Ýíåðãîçàâèñèìîñòü.  îòëè÷èå îò íåêðîçà, àïîïòîç òðåáóåò
îáÿçàòåëüíîãî íàëè÷èÿ ÀÒÔ, èçìåíåíèå åãî óðîâíÿ ìîæåò
îïðåäåëèòü íàïðàâëåíèå êëåòî÷íîé ãèáåëè. Ïî ìíåíèþ íåêîòîðûõ
èññëåäîâàòåëåé, ðåøàþùèì ìîæåò ÿâëÿòüñÿ äàæå íå àáñîëþòíîå
ñîäåðæàíèå ÀÒÔ, à îòíîøåíèå ÀÒÔ/ÀÄÔ â êëåòêå [26].
(2) Ðàñùåïëåíèå ÿäåðíîé ÄÍÊ ñ ôîðìèðîâàíèåì êðóïíûõ
ôðàãìåíòîâ, êðàòíûõ, êàê ïðàâèëî, 180-200 ïàð íóêëåîòèäîâ, ÷òî
ïðèâîäèò ê ôîðìèðîâàíèþ ÄÍÊîâîé "ëåñòíèöû" íà
ýëåêòðîôîðåãðàììå;
(3) Óìåíüøåíèå îáúåìà êëåòêè. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àïîïòîçà
êëåòêà ñìîðùèâàåòñÿ, òåðÿÿ äî 1/3 ñâîåãî îáúåìà çà íåñêîëüêî
ìèíóò.
(4) Àêòèâàöèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ öèñòåèíîâûõ ïðîòåàç (êàñïàç) è,
ñîîòâåòñòâåííî, äåãðàäàöèÿ áåëêà â êëåòêå.
(5) Ïîÿâëåíèå (ýêñòåðíàëèçàöèÿ) ôîñôàòèäèëñåðèíà íà
íàðóæíîé ïîâåðõíîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû êëåòêè è
îáðàçóþùèõñÿ èç íåå àïîïòîòè÷åñêèõ òåëåö, ÷òî ñïîñîáñòâóåò èõ
óçíàâàíèþ ìàêðîôàãàìè è ôàãîöèòîçó.
Àïîïòîç ÿâëÿåòñÿ ðåçóëüòàòîì äåéñòâèÿ ðàçëè÷íûõ âíåøíèõ è
âíóòðåííèõ ôàêòîðîâ. Íåñïåöèôè÷åñêèå âíåøíèå ôàêòîðû
ñïîñîáíû èíäóöèðîâàòü àïîïòîç, êîòîðûé ïðè óâåëè÷åíèè
âîçäåéñòâèÿ ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà ìîæåò ïåðåéòè â íåêðîç êëåòêè
[27]. Ê ôèçèîëîãè÷åñêèì ôàêòîðàì àïîïòîçà îòíîñÿò êàê
âíóòðèêëåòî÷íûå ñèãíàëû, òàê è âíåøíèå, îïîñðåäóþùèå ñâîå
äåéñòâèå ÷åðåç ðåöåïòîðíûå ñèñòåìû. Ñðåäè íèõ íàèáîëüøèé
èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿþò ãîðìîíû. Îíè ìîãóò âûñòóïàòü êàê
èíäóêòîðàìè, òàê è èíãèáèòîðàìè ãèáåëè êëåòêè, â çàâèñèìîñòè îò
ñòàäèè åå äèôôåðåíöèðîâêè (íàïðèìåð, ïîëîâûå ãîðìîíû) [28, 29].
Äðóãèì ôèçèîëîãè÷åñêèì ðåãóëÿòîðîì àïîïòîçà ÿâëÿþòñÿ
öèòîêèíû, ïðåäñòàâëÿþùèå îáøèðíóþ ãðóïïó ïðîäóöèðóåìûõ
êëåòêàìè ïîëèôóíêöèîíàëüíûõ ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, äåéñòâóþùèõ
ïðè ñâÿçûâàíèè ñî ñïåöèôè÷åñêèìè ðåöåïòîðàìè íà êëåòêàõìèøåíÿõ [30].  çàâèñèìîñòè îò ñòðóêòóðû è ôóíêöèè öèòîêèíû
119
ïîäðàçäåëÿþò íà òðè áîëüøèå ãðóïïû: ðîñòîâûå ôàêòîðû,
ñåìåéñòâî TNF è ñïèðàëüíûå öèòîêèíû (èíòåðëåéêèíû,
èíòåðôåðîíû). Ýôôåêò öèòîêèíîâ íà êëåòêè íåîäíîçíà÷åí: äëÿ
îäíèõ êëåòîê îíè âûñòóïàþò â ðîëè èíäóêòîðîâ, äëÿ äðóãèõ èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà. Ýòî çàâèñèò îò òèïà êëåòêè, ñòàäèè åå
äèôôåðåíöèðîâêè è ôóêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ è ò.ä. [31].
Îäíîâðåìåííîå ïðèñóòñòâèå â êëåòêå èíäóêòîðîâ è èíãèáèòîðîâ
àïîïòîçà ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî ïðîãðàììèðóåìàÿ ãèáåëü
êëåòêè íàïðÿìóþ çàâèñèò îò ñîîòíîøåíèÿ ýòèõ ðåãóëÿòîðîâ.
Ðàçëè÷àþò íåñêîëüêî ôàç àïîïòîçà èëè ïðîãðàììèðîâàííîé
ãèáåëè êëåòêè: (1) èíèöèàöèÿ àïîïòîçà; (2) òðàíñäóêöèÿ
(ïðîâåäåíèå) àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíàëà; (3) àêòèâàöèÿ êàñïàç; (4)
àêòèâàöèÿ ýíäîíóêëåàç è ñïåöèôè÷åñêàÿ äåãðàäàöèÿ ÄÍÊ, êîòîðàÿ
è ïðèâîäèò ê ãèáåëè êëåòêè.
4.2.2. Èíèö
öèààöèÿÿ è òðààíñäóêö
öèÿÿ àïîïòîòè÷åñêîãî ñèãíààëàà.
 çàâèñèìîñòè îò ñòèìóëîâ, èíèöèèðóþùèõ àïîïòîç, ìîæíî
âûäåëèòü äâà ãëàâíûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ àïîïòîçíûõ ñèãíàëüíûõ
êàñêàäà: ìèòîõîíäðèàëüíûé è ðåöåïòîðíûé, îïîñðåäîâàííûé
ñïåöèôè÷åñêèìè
"ðåöåïòîðàìè
ñìåðòè"
ïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíû. Ïîñëåäíèå ÿâëÿþòñÿ ÷àñòüþ ñóïåðñåìåéñòâà
ðåöåïòîðîâ TNF. Ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ñîáûòèé ïîñëå ñòèìóëÿöèè
àïîïòîçà íàèáîëåå èçó÷åíà â íàñòîÿùåå âðåìÿ äëÿ ðåöåïòîðà Fas
(Fas-R), òàêæå íàçûâàåìîãî CD95 [20, 25, 32]. Öèòîïëàçìàòè÷åñêèé
äîìåí Fas-R îáîãàùåí öèñòåèíîì, à èíòåãðàëüíàÿ (ìåìáðàííàÿ)
÷àñòü, ñîäåðæèò äîìåí ñìåðòè DD, êîòîðûé âîâëåêàåòñÿ â áåëîêáåëêîâîå âçàèìîäåéñòâèå, ãåíåðèðóÿ ñèãíàë ñìåðòè. Ëèãàíä ýòîãî
ðåöåïòîðà (Fas-L) - öèòîêèí èç ñåìåéñòâà áåëêîâ TNF,
ýêñïðåññèðóþùèéñÿ, ãëàâíûì îáðàçîì, íà àêòèâèðîâàííûõ Òëèìôîöèòàõ è åñòåñòâåííûõ êèëëåðàõ. Ñâÿçûâàíèå ëèãàíäà Fas-L ñ
ðåöåïòîðîì (Fas-R/Fas-L) ïðèâîäèò ê îëèãîìåðèçàöèè ïîñëåäíåãî è
ôîðìèðîâàíèþ ñèãíàëüíîãî êîìïëåêñà, èíèöèèðóþùåãî êàñêàä
ðåàêöèé, âûçûâàþùèõ àïîïòîç.  îëèãîìåðèçàöèè Fas ó÷àñòâóþò:
(1) öèòîïëàçìàòè÷åñêèé DD-äîìåí ðåöåïòîðà, (2) "àäàïòîðíûé"
áåëîê FADD (Fas-àññîöèèðîâàííûé DD, ñîäåðæàùèé DED ýôôåêòîðíûé äîìåí ñìåðòè) è (3) ïðîêàñïàçû-8. Îáðàçîâàíèå
êîìïëåêñà ýòèõ áåëêîâ àêòèâèðóåò êàñïàçó-8, è ðàçâèâàåòñÿ
õàðàêòåðíûé äëÿ àïîïòîçà êàñêàä àêòèâàöèîííûõ ïðîöåññîâ [32].
Èíòåðåñíî, ÷òî ó íåêîòîðûõ îïóõîëåâûõ êëåòîê àêòèâíîñòü
êàñïàçû-8 ìîæåò áûòü èíãèáèðîâàíà ñïåöèàëüíûì FLIP (FLICE
inhibitory protein; FLICE - FADD-Like Interleukin Converting
Enzyme) áåëêîì, êîòîðûé, ñâÿçûâàÿñü ñ ñèãíàëüíûì êîìïëåêñîì,
ïðåïÿòñòâóåò àïîïòîçó [33]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ìóòàöèè â ãåíàõ Fas
120
èëè Fas-L ïðèâîäÿò ê ðàçâèòèþ àóòîèììóííûõ çàáîëåâàíèé [25].
Îïèñàí àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ñâÿçûâàíèåì ðåöåïòîðîâ
ñåìåéñòâà TNF, êîòîðûå òàêæå ñîäåðæàò äîìåíû DD (TNF-R) ñ
ëèãàíäîì TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand). Èõ
îëèãîìåðèçàöèÿ ïðè ñâÿçûâàíèè, àíàëîãè÷íà Fas-R/Fas-L è
îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ó÷àñòèåì FADD è ñõîäíîãî ñ íèì áåëêà TRADD
(TNF-R-àññîöèèðîâàííîãî DD) [34, 35].
Êààñïààçû ,
ñïåöèôè÷åñêèå
öèñòåèíîâûå
ïðîòåàçû,
êàòàëèçèðóþùèå îãðàíè÷åííîå ðàñùåïëåíèå êëåòî÷íûõ áåëêîâ,
ñ÷èòàþò êëþ÷åâûìè ôåðìåíòàìè â ðàçâèòèè àïîïòîçà [36]. Êàñïàçû
ðàñùåïëÿþò ïåïòèäíóþ ñâÿçü ïî êàðáîêñèëüíîìó êîíöó îñòàòêà
àñïàðàãèíîâîé êèñëîòû (Asp), ÷òî ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè èëè
èíàêòèâàöèè áåëêà [36, 37]. Âñåãî èäåíòèôèöèðîâàííî 14 êàñïàç.
Îíè ñèíòåçèðóþòñÿ â âèäå çèìîãåíîâ áîëüøåãî ìîëåêóëÿðíîãî
âåñà - ïðîêàñïàç, êîòîðûå çàòåì àêòèâèðóþòñÿ ïóòåì
ïðîòåîëèòè÷åñêîãî ïðîöåññèðîâàíèÿ [36-38].
Ïî ôóíêöèîíàëüíûì ñâîéñòâàì ñåìåéñòâî êàñïàç ïîäðàçäåëÿþò
íà äâà ãëàâíûõ ïîäñåìåéñòâà. Êàñïàçû -1, -4 è -5 ó÷àñòâóþò â
àêòèâàöèè (ñîçðåâàíèè) öèòîêèíîâ, òàêèõ êàê èíòåðëåéêèí-1β,
èíòåðëåéêèí-18, óñèëèâàÿ èõ ïðîâîñïàëèòåëüíûå ñâîéñòâà.
Îñòàëüíûå êàñïàçû, ó÷àñòâóþùèå â àïîïòîçíîì ôåðìåíòàòèâíîì
êàñêàäå, ïîäðàçäåëÿþòñÿ íà ýôôåêòîðû, ò.å. ôåðìåíòû,
íåïîñðåäñòâåííî ãèäðîëèçóþùèå ñòðóêòóðíûå áåëêè êëåòêè, è
èíäóêòîðû - ïðèíèìàþùèå è ïåðåäàþùèå àïîïòîòè÷åñêèé ñèãíàë.
Ñòðóêòóðíûå îñîáåííîñòè è êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ êàñïàç â
ïðîöåññàõ èíèöèàöèè è àêòèâàöèè àïîïòîçà ïîäðîáíî îïèñàíû â
ðàçëè÷íûõ îáçîðàõ [36, 37, 39-41].
Ñðåäè ìîëåêóëÿðíûõ ìèøåíåé ýôôåêòîðíûõ êàñïàç èçâåñòíû
ìíîãèå áåëêè, äåãðàäàöèÿ êîòîðûõ âûçûâàåò ðàçâèòèå
íåîáðàòèìûõ ïðîöåññîâ, õàðàêòåðíûõ äëÿ àïîïòîçà. Ê íèì
îòíîñÿòñÿ ìåìáðàííûå áåëêè, áåëêè öèòîïëàçìû è ÿäåðíîé
ëàìèíû [42, 43].
Ðåãóëÿöèÿ àêòèâíîñòè êàñïàç â èíòàêòíîé êëåòêå ïðîèñõîäèò çà
ñ÷åò: (1) âçàèìîäåéñòâèÿ èíäóêòîðà àïîïòîçà ñî ñïåöèôè÷åñêèìè
ðåöåïòîðàìè (íàïðèìåð, àêòèâàöèÿ êàñïàçû 8 â Fas/Fas-L ñèñòåìå);
(2) îáðàçîâàíèÿ ãåòåðîäèìåðîâ êàñïàç ñî ñïåöèôè÷íûìè
ðåãóëÿòîðíûìè áåëêàìè ñåìåéñòâà Bcl-2; (3) âçàèìîäåéñòâèÿ êàñïàç
ñ ñåðèíîâîé ïðîòåàçîé - ãðàíçèìîì Â (GrB) (íàïðèìåð, ïðè
âîçäåéñòâèè íà êëåòêó öèòîòîêñè÷åñêèõ Ò-ëèìôîöèòîâ) [44]. Â
íàñòîÿùåå âðåìÿ åùå íå äî êîíöà ïîíÿòî, êàêèì îáðàçîì
ýôôåêòîðíûå êàñïàçû àêòèâèðóþòñÿ ïîñëå ñâÿçûâàíèÿ ðåöåïòîðîâ
êëåòî÷íîé ãèáåëè.
Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî âîçäåéñòâèå êàñïàç íà áåëêè öèòîñêåëåòà
121
ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ôîðìû êëåòêè.
 ïîñëåäíåå âðåìÿ ïîëó÷åíû äîêàçàòåëüñòâà òîãî, ÷òî
èíãèáèòîðû êàñïàç íå ïîëíîñòüþ áëîêèðóþò íåêîòîðûå
ìîðôîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ àïîïòîçà, íàïðèìåð, ñìîðùèâàíèå
êëåòîê [45]. Ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ, óêàçûâàþùèõ, ÷òî
êàñïàçû íå îõâàòûâàþò âñå àñïåêòû àïîïòîçà ó ìëåêîïèòàþùèõ, è
èññëåäîâàòåëè ïðîäîëæàþò ïðåäëàãàòü íîâûå àäåêâàòíûå,
íåçàâèñèìûå îò êàñïàç, êëåòî÷íûå ìîäåëè àïîïòîçà. Íàïðèìåð,
ïîñðåäñòâîì àêòèâàöèè íóêëåàçû ïðè ïîìîùè âûñâîáîæäàåìîãî èç
ìèòîõîíäðèé áåëêà - ôàêòîðà, èíäóöèðóþùåãî àïîïòîç (apoptosis
inducing factor, AIF) [46].
4.2.3. Ìèòîõîíäðèààëüíûé ïóòü àïîïòîçàà.
Íåêîòîðûå èíäóêòîðû àïîïòîçà ñïîñîáíû âûçâàòü óâåëè÷åíèå
ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí ìèòîõîíäðèé, âîçäåéñòâóÿ íà íèõ ëèáî
íåïîñðåäñòâåííî,
ëèáî
÷åðåç
àêòèâàöèþ
äðóãèõ
ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ [47]. Íàïðèìåð, àêòèâíûå ôîðìû
êèñëîðîäà (ÀÔÊ), îêñèä àçîòà, íåêîòîðûå òîêñèíû, âèðóñíûå
áåëêè, ëåêàðñòâà âûçûâàþò àïîïòîòè÷åñêóþ ãèáåëü êëåòîê
íåçàâèñèìî îò àêòèâàöèè äðóãèõ èíèöèàòîðíûõ ñèñòåì, òàêèõ, êàê
"ðåöåïòîðû ñìåðòè" [19, 20, 47-51].
Äåéñòâèå ýòèõ èíäóêòîðîâ àïîïòîçà ïðèâîäèò ê ðåçêîìó
ñíèæåíèþ
âåëè÷èíû
ýëåêòðîõèìè÷åñêîãî
ïîòåíöèàëà
ìèòîõîíäðèé ∆µΗ+ è ñîïðîâîæäàåòñÿ âûõîäîì èç íèõ öèòîõðîìà ñ.
Ïîñëåäíèé, âûñâîáîæäàÿñü â öèòîïëàçìó, èíèöèèðóåò àêòèâàöèþ
êàñïàç [20, 32]. Íàðÿäó ñ öèòîõðîìîì ñ âîçìîæíî âûñâîáîæäåíèå â
öèòîïëàçìó è äðóãèõ ëîêàëèçîâàííûõ â ìèòîõîíäðèÿõ
ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ìåäèàòîðîâ - ïðîêàñïàçû-2, -3 è -9, AIF,
ýíäîíóêëåàçû G è äð. [45]. Ñ÷èòàþò, ÷òî èõ âûõîä èç ìèòîõîíäðèé
êîíòðîëèðóåòñÿ ñïåöèàëüíûìè áåëêàìè ñåìåéñòâà Bcl-2 [52].
Áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2 ÿâëÿþòñÿ ñàìûìè èçâåñòíûìè
âíóòðèêëåòî÷íûìè ðåãóëÿòîðàìè àïîïòîçà è õàðàêòåðèçóþòñÿ íàëè÷èåì
ãîìîëîãè÷íûõ äîìåíîâ, íàçûâàåìûõ ÂÍ 1-4-äîìåíàìè. Ôóíêöèîíàëüíî
÷ëåíû Âñ1-2 ñåìåéñòâà ðàçäåëÿþòñÿ íà àíòèàïîïòîòè÷åñêèå (Bcl-2, Bñl-õ,
Mcl-1) ñ äîìåíàìè ÂÍ 1, 2 è 4, è ïðîàïîïòîòè÷åñêèå (Âid, Bad, Bax, Bim) ñ
äîìåíîì ÂÍ 3 [18, 53]. Íàïðèìåð, áåëîê Âid (tBid), âçàèìîäåéñòâóÿ ñ
ìèòîõîíäðèàëüíûìè ëèïèäàìè, èíäóöèðóåò âûñâîáîæäåíèå èç ýòèõ
îðãàíåëë ýíäîíóêëåàçû G [54, 55] è âíåäðåíèå ëèçîôîñôîëèïèäîâ
(îñîáåííî ëèçîÔÕ) â ìåìáðàíó ìèòîõîíäðèé ñ âîçìîæíûì ïîñëåäóþùèì
åå ðàçðûâîì [56]. Ýòè ýôôåêòû, êàê ïðåäïîëàãàþò, îáóñëîâëåíû òåì, ÷òî Ñêîíöåâûå äîìåíû ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ áåëêîâ Bcl-2 "çàÿêîðåíû" â
ìåìáðàíå, ÷òî ñïîñîáñòâóåò èõ âîçäåéñòâèþ íà ìåìáðàíû ÝÐ èëè
ìèòîõîíäðèé [18] ñ âîçìîæíûì âîâëå÷åíèåì â ôîðìèðîâàíèå ïîð [18, 52].
Áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2 ìîãóò îáðàçîâûâàòü êàê ãîìîäèìåðû, òàê
122
è ãåòåðîäèìåðû èç áåëêîâ, îáëàäàþùèõ ðàçíîíàïðàâëåííûì
äåéñòâèåì. Ïðè ýòîì êàæäûé èç íèõ ñïîñîáåí ïîäàâëÿòü ôóíêöèþ
äðóãîãî. Ñ÷èòàþò, ÷òî ñîîòíîøåíèå áåëêîâ ñåìåéñòâà Bcl-2 â
çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè îïðåäåëÿåò ïðåäðàñïîëîæåííîñòü èëè
óñòîé÷èâîñòü êëåòêè ê àïîïòîçó [57, 58].
Ìíîãèå èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ÷òî äëÿ áîëüøèíñòâà òèïîâ
êëåòîê îáùåé ÷åðòîé àïîïòîçà ÿâëÿåòñÿ äåïîëÿðèçàöèÿ
ìèòîõîíäðèé, êîòîðàÿ ñîïðÿæåíà ñ ãëóáîêèìè èçìåíåíèÿìè
ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí, ñ îáðàçîâàíèåì
ãèãàíòñêèõ òðàíçèòíûõ ïîð - ìåãàêàíàëîâ (permeability transition
pore, PTP) [59, 60-63]. Îäíèì èç âèäîâ ÐÒÐ ÿâëÿåòñÿ, íàïðèìåð,
íåñïåöèôè÷åñêèé êàíàë, îáðàçóþùèéñÿ ïðè îêèñëåíèè SHãðóïïû Cys-56 â àäåíèííóêëåîòèäòðàíñëîêàçå - áåëêå âíóòðåííåé
ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé, îñóùåñòâëÿþùåì àíòèïîðò ÀÒÔ/ÀÄÔ)
[46]. Îáðàçóþùèé ïîðû êîìïëåêñ ñîäåðæèò ìíîæåñòâî ìèøåíåé äëÿ
âíåøíåãî âîçäåéñòâèÿ è ðåãóëèðóåòñÿ ìíîãèìè ýíäîãåííûìè ôàêòîðàìè,
òàêèìè êàê îêñèä àçîòà, ÀÔÊ, êîíöåíòðàöèåé èîíîâ (Ca2+ è Mg2+),
èçìåíåíèÿ ∆µΗ+, êîíöåíòðàöèÿ ÀÄÔ è ÀÒÔ, ëèïèäîâ è îïðåäåëåííûõ
áåëêîâ, èçìåíåíèå ñîîòíîøåíèÿ áåëêîâ Bcl-2 è äð. [59-64].
Ñóäÿ ïî âñåìó, ãèãàíòñêàÿ ïîðà èíòåãðèðóåò ðàçëè÷íûå
îòâåòíûå ðåàêöèè êëåòêè íà ñòðåññ, è ïî÷òè ïðè âñåõ ïðîöåññàõ
êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðîèñõîäèò åå ðàñêðûòèå, èçìåíÿþùåå
ìèòîõîíäðèàëüíóþ ïðîíèöàåìîñòü.
Åñëè íà÷àëüíûå ôàçû àïîïòîçà ðàçëè÷àþòñÿ â çàâèñèìîñòè îò
òèïà êëåòîê è îò èíäóöèðóþùåãî ñèãíàëà, òî ýòàï äåãðàäàöèè ÄÍÊ
óíèâåðñàëåí äëÿ áîëüøèíñòâà êëåòîê. Ýòà ôàçà ÿâëÿåòñÿ ïåðåõîäîì
ê íåîáðàòèìîé - òåðìèíàëüíîé ñòàäèè àïîïòîçà, êîòîðóþ òàêæå
êîíòðîëèðóþò áåëêè ñåìåéñòâà Bcl-2, êîäèðóåìûå îäíîèìåííûìè
ãåíàìè. Äåãðàäàöèÿ ÄÍÊ ïðè àïîïòîçå îñóùåñòâëÿåòñÿ
ýíäîíóêëåçàìè, âêëþ÷àÿ âûñâîáîæäàåìóþ èç ìåæìåìáðàííîãî
ïðîñòðàíñòâà ìèòîõîíäðèé ýíäîíóêëåàçó G [65, 66].
Ê èçó÷åííûì áåëêàì - ðåãóëÿòîðàì àïîïòîçà îòíîñÿò ôàêòîð
òðàíñêðèïöèè ð53, êîòîðûé ñïîñîáåí áëîêèðîâàòü ïðîöåññû
äåëåíèÿ êëåòêè ñ ïîâðåæäåííîé ÄÍÊ, "çàïóñêàÿ" àïîïòîç [25, 67].
Ýòîò áåëîê ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 53 êÄà ëîêàëèçîâàí â ÿäðå
êëåòêè. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ ïîâðåæäåíèÿ ÄÍÊ åãî ýêñïðåññèÿ
ïîâûøàåòñÿ, áëîêèðóÿ êëåòî÷íûé öèêë â ôàçå G1 è G2, äî
ðåïëèêàöèè ÄÍÊ è ìèòîçà. Ýòî äàåò âîçìîæíîñòü ðåïàðèðîâàòü
ïîâðåæäåííóþ ÄÍÊ, ïðåäîòâðàùàÿ òåì ñàìûì ïîÿâëåíèå
ìóòàíòíûõ êëåòîê. Åñëè àêòèâíîñòü ðåïàðàöèîííûõ ñèñòåì
íåäîñòàòî÷íà è ïîâðåæäåíèÿ â ÄÍÊ ñîõðàíÿþòñÿ, òî â òàêèõ
êëåòêàõ èíäóöèðóåòñÿ àïîïòîç. Íàêîïëåíèå â êëåòêå áåëêà ð53
âîçìîæíî ïðè îáîèõ ïóòÿõ àïîïòîçà [67, 68]. Â òî æå âðåìÿ ó áîëåå
123
÷åì 50% èçó÷åííûõ âèäîâ îïóõîëåâûõ êëåòîê ãåí ð53
èíàêòèâèðîâàí, ñâÿçàííàÿ ñ íèì ðåãóëÿöèÿ êëåòî÷íîãî ãîìåîñòàçà
íàðóøåíà; ñëåäñòâèåì ÷åãî îêàçûâàåòñÿ íàêîïëåíèå ìóòèðîâàííûõ
êëåòîê [69-71].
Âàæíûì êîìïîíåíòîì èíäóêöèè àïîïòîçà âî ìíîãèõ òèïàõ
êëåòîê ÿâëÿåòñÿ óðîâåíü ñâîáîäíîãî èîíèçèðîâàííîãî êàëüöèÿ
â öèòîïëàçìå. Ïîëàãàþò, ÷òî ïîâûøåíèå óðîâíÿ Ca2+ â êëåòêå
ñïîñîáñòâóåò "çàïóñêó" ìèòîõîíäðèàëüíîãî àïîïòîçíîãî
ñèãíàëüíîãî êàñêàäà, èíèöèèðóÿ îáðàçîâàíèå òðàíçèòíûõ ïîð
[72], âûõîä öèòîõðîìà ñ è ýíäîíóêëåàçû G, [73]. Â
âûñâîáîæäåíèè Ca 2+ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ äåïî ó÷àñòâóþò
âòîðè÷íûå ìåññåíäæåðû - äèãëèöåðèä è èíîçèòîë-1,4,5òðèôîñôàò (IP3), ãåíåðàöèÿ êîòîðûõ â êëåòêå ñâÿçàíà ñ
àêòèâàöèåé ðàçëè÷íûõ èçîôîðì ôîñôîëèïàçû Ñ. Íåêîòîðûå
òîêñèíû òàêæå ñïîñîáíû ñòèìóëèðîâàòü àïîïòîç ïóòåì
íàðóøåíèÿ íîðìàëüíîãî ãîìåîñòàçà êàëüöèÿ, íî ïðè óñëîâèè
ñîõðàíåíèÿ îñíîâíîãî ïóëà ÀÒÔ; èíà÷å êëåòêà ìîæåò ïåðåéòè ê
íåêðîçó [26].
 ïðîöåññå àïîïòîçà ìîæåò ó÷àñòâîâàòü öèòîçîëüíàÿ
ôîñôîëèïàçà À 2 (cPLÀ 2 ). Òàê, äëÿ Fas-èíäóöèðîâàííîãî
àïîïòîçà cPLÀ 2 ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì êàñïàçû-2 è -8 [74].
Âîçìîæíî, ÷òî èíàêòèâàöèÿ cPLÀ 2 ïðèâîäèò ê ñíèæåíèþ
ñèíòåçà ïðîâîñïàëèòåëüíûõ ïðîñòàãëàíäèíîâ, îáðàçóþùèõñÿ èç
àðàõèäîíîâîé êèñëîòû. Ïîñëåäíÿÿ, êàê èçâåñòíî, ÿâëÿåòñÿ
ïðîäóêòîì ãèäðîëèçà ôîñôîëèïèäîâ cPLÀ2 [75]. Â òî æå âðåìÿ,
äëÿ TNF-èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà áûëà ïîêàçàíà àêòèâàöèÿ
cPLÀ2 êàñïàçîé-3, ÷òî, êàê ñ÷èòàþò, íåîáõîäèìî äëÿ âûõîäà
äðóãèõ êàñïàç [76].
Zhao ñ ñîàâò. [77] îòìå÷àþò, ÷òî ó÷àñòèå ôîñôîëèïàçû À2
óñèëèâàåò
ïîâðåæäåíèå
ëèçîñîì,
ðîëü
êîòîðûõ
â
ïðîãðàììèðóåìîé ãèáåëè êëåòîê àêòèâíî îáñóæäàåòñÿ â
ïîñëåäíèå ãîäû. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî âûñâîáîæäåíèå
ìèòîõîíäðèÿìè ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ ôàêòîðîâ ìîæåò áûòü
ñëåäñòâèåì ïðåäøåñòâóþùåé äåñòàáèëèçàöèè ëèçîñîì ñ
ó÷àñòèåì ôîñôîëèïàçû À 2 [78, 79]. Àâòîðû ïðåäïîëàãàþò
ñóùåñòâîâàíèå "ëèçîñîìíî-ìèòîõîíäðèàëüíîé îñè" àïîïòîçà,
îïðåäåëÿþùåé
è
êîîðäèíèðóþùåé
ýôôåêò
êàñïàç,
ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç è ãåíåðàöèþ ìèòîõîíäðèÿìè ÀÔÊ.
Îêîí÷àòåëüíàÿ ðåàëèçàöèÿ òîãî èëè èíîãî àïîïòîçíîãî
ñèãíàëüíîãî êàñêàäà îïðåäåëÿåòñÿ ïóòåì ïåðåêðåñòíûõ
ñîïðÿæåííûõ äðóã ñ äðóãîì ðåàêöèé ("cross-talk") ìåæäó
âçàèìîâëèÿþùèìè ýôôåêòîðàìè [77]. Âàæíàÿ ðîëü ëèçîñîì â
ðåàëèçàöèè àïîïòîçà îòìå÷àåòñÿ è äðóãèìè àâòîðàìè [80]. Íà
124
Ðèñ. 4.2.2. Íåêîòîðûå ïóòè ïåðåäà÷è àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ â êëåòêå
(ïî [46] ñ èçìåíåíèÿìè)
Àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà (ÀÔÊ) ñïîñîáñòâóþò ðàñêðûòèþ â ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíå
ïîð (ÐÒÐ), ÷åðåç êîòîðûå â öèòîïëàçìó âûõîäèò öèòîõðîì ñ, àêòèâèðóþùèé êàñêàä êàñïàç,
ïðèâîäÿùèé ê àïîïòîçó. Ðåöåïòîð TNF, ïîñëå âçàèìîäåéñòâèÿ ñ ëèãàíäîì, òàêæå àêòèâèðóåò
êàñïàçó-3 ïîñðåäñòâîì êàñïàçû-8. Ïîñëåäíÿÿ ìîæåò èíèöèèðîâàòü öåïü ñîáûòèé, âåäóùèõ ê
ðàñêðûòèþ ÐÒÐ è âûõîäó ìèòîõîíäðèàëüíûõ àïîïòîòè÷åñêèõ áåëêîâ áåç ó÷àñòèÿ ÀÔÊ.
Ôîñôàòèäèëñåðèí (ÔÑ) âíóòðåííåãî ñëîÿ ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû ïåðåõîäèò íà âíåøíèé,
÷àñòè÷íî îêèñëÿÿñü (ÔÑîê) ñ ó÷àñòèåì ÀÔÊ, ÷òî ñëóæèò ñèãíàëîì äëÿ óçíàâàâíèÿ è óäàëåíèÿ
àïîïòîçíîé êëåòêè (ïî [46])
ðèñ. 4.2.2. ñõåìàòè÷åñêè ïðåäñòàâëåíû íåêîòîðûå ïóòè
ïåðåäà÷è àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ â êëåòêå [46].
4.2.4. Àïîïòîç è ôîñôîëèïèäû.
Êîíå÷íûì ýòàïîì àïîïòîçà ñ÷èòàþò ôðàãìåíòàöèþ êëåòîê íà
"àïîïòîòè÷åñêèå òåëüöà" è ïîãëîùåíèå èõ ñîñåäíèìè êëåòêàìè
èëè ìàêðîôàãàìè. Íà ýòîì ýòàïå íàèáîëåå ñóùåñòâåííûå ïðîöåññû
ïðîòåêàþò â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Òàê, â ìåìáðàíå
íàáëþäàåòñÿ ïåðåðàñïðåäåëåíèå ÔË, ýêñòåðíàëèçàöèÿ ÔÑ âî
âíåøíèé ìîíîñëîé ìåìáðàíû [81, 82] è ïîñëåäóþùåå åãî
îêèñëåíèå [83]. Òðàíñëîêàöèÿ ÔÑ ïðè àïîïòîçå îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ
ó÷àñòèåì Ñà2+-àêòèâèðóåìîé ñêðàìáëàçû [84] èëè ïðè ñâîáîäíîðàäèêàëüíîì îêèñëåíèè êàðäèîëèïèíà ìèòîõîíäðèé [85].
Ïåðåìåùåíèå ÔÑ ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëîì ("eat me") äëÿ ïîãëîùåíèÿ
ïîâðåæäåííîé êëåòêè îêðóæàþùèìè êëåòêàìè ñ ó÷àñòèåì
"ðåöåïòîðà âíåøíåãî ÔÑ", ëîêàëèçîâàííîãî â ïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíå [46, 84]. Ïî ìíåíèþ Henson ñ ñîàâò. [84], ðåöåïòîð ÔÑ
ýêñïðåññèðóåòñÿ â ðàçëè÷íûõ êëåòêàõ è òêàíÿõ, áëàãîäàðÿ ÷åìó
àïîïòîòè÷åñêèå êëåòêè èëè "òåëüöà" ìîãóò çàõâàòûâàòüñÿ è
ïåðåâàðèâàòüñÿ íå òîëüêî ôàãîöèòàìè, íî è ïðîñòûìè êëåòêàìè.
Ïðè
ýòîì
ðåöåïòîðû
ê
ÔÑ
îêàçûâàþò
òàêæå
è
125
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå, ïîäàâëÿÿ èììóííóþ ðåàêöèþ
ôàãîöèòèðóþùåé êëåòêè.
Îòìå÷àþò, ÷òî â àïîïòîòè÷åñêîé êëåòêå âîçðàñòàåò ãåíåðàöèÿ
ëèçîÔÕ, êîòîðûé â äàííîì ñëó÷àå ÿâëÿåòñÿ õåìîòàêñè÷åñêèì
ôàêòîðîì (èñòî÷íèêîì ñèãíàëà "seak me"), ñòèìóëèðóþùèì ïðèòîê
ôàãîöèòîâ ê àïîïòîçíîé îáëàñòè [82].
 ðÿäå ðàáîò ïîñëåäíèõ ëåò ïðîäåìîíñòðèðîâàíà
ñïåöèôè÷åñêàÿ ðîëü ìåìáðàííûõ ðàôòîâ (ñì. ãëàâó 2) â ïðîöåññàõ
àïîïòîçà [86, 87], êîòîðàÿ, â ÷àñòíîñòè, ñâÿçàíà ñ ðåãóëÿöèåé
èîííûõ êàíàëîâ è îðãàíèçàöèåé ("ñáîðêîé") ñèãíàëüíûõ
êîìïëåêñîâ. Ïðè ýòîì, ñòèìóëû àïîïòîçà âûçûâàþò ðåîðãàíèçàöèþ
ðàôòîâ, èõ óêðóïíåíèå â áîëüøèå, îáîãàùåííûå öåðàìèäàìè
ìåìáðàííûå ïëàòôîðìû [86].
 êà÷åñòâå ñèãíàëüíûõ âòîðè÷íûõ ìåññåíäæåðîâ â ïðîöåññû
àïîïòîçà âîâëå÷åíû òàêèå ïðîèçâîäíûå ÔË, êàê öåðàìèäû,
ñôèíãîçèí è S1P (ñì. ÷àñòü 3) [88], êîòîðûå ñïîñîáíû ðåãóëèðîâàòü
âûæèâàíèå èëè ãèáåëü êëåòêè [89]. Òàê, öåðàìèä, îáðàçóþùèéñÿ â
êëåòêàõ èç ñôèíãîìèåëèíà ìåìáðàí â îòâåò íà ðàçëè÷íûå
ñòðåññîâûå ñèãíàëû (öèòîêèíîâàÿ àòàêà, ðàäèàöèÿ è äð.), äåéñòâóÿ
êàê âòîðè÷íûé ìåññåíäæåð àïîïòîçà, ñïîñîáåí àêòèâèðîâàòü åãî
êëþ÷åâûå ðåãóëÿòîðû. Îáðàçîâàíèå öåðàìèäà âî âíåøíåì ñëîå
êëåòî÷íîé ìåìáðàíû, âûçûâàåò ïîëÿðíîå ïåðåðàñïðåäåëåíèå è
îëèãîìåðèçàöèþ ("îáðàçîâàíèå øàïêè") ðåöåïòîðà Fas [90]. Ïðè
ýòîì íà öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ñòîðîíå ìåìáðàíû ôîðìèðóåòñÿ
ñóïåðêàòàëèòè÷åñêèé äîìåí, óñèëèâàþùèé Fas-îïîñðåäîâàííûé
àïîïòîç. Öåðàìèä ñïîñîáåí òàêæå óñèëèòü äåñòàáèëèçàöèþ
ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí è âûñâîáîæäåíèå àïîïòîãåííûõ
ôàêòîðîâ.
Íàïðèìåð,
óñèëèâàÿ
Âàõ-èíäóöèðîâàííóþ
ïðîíèöàåìîñòü ìåìáðàíû, öåðàìèä èíèöèèðóåò ôîðìèðîâàíèå
íåñïåöèôè÷íûõ "öåðàìèäíûõ" ïîð, êîòîðûå ïîâûøàþò
ïðîíèöàåìîñòü íàðóæíîé ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé è óñèëèâàþò
âûñâîáîæäåíèå öèòîõðîìà ñ [91]. Ñôèíãîçèí, îáðàçóþùèéñÿ èç
öåðàìèäà ïîä äåéñòâèåì öåðàìèäàç, òàêæå ñïîñîáåí óñèëèâàòü
àïîïòîç, èíãèáèðóÿ ïðîòåèíêèíàçó Ñ [92]. Èç öåðàìèäà îáðàçóåòñÿ
òàêæå S1P - ñèãíàëüíûé ëèïèä, îáëàäàþùèé àíòèàïîïòîòè÷åñêèìè
ñâîéñòâàìè (ñì. ãëàâó 3) [93]. Åãî ýôôåêòû ðåàëèçóþòñÿ ðàçíûìè
ìåõàíèçìàìè: (1) S1P àêòèâèðóåò àíòèàïîïòîòè÷åñêèå ñèãíàëüíûå
ïóòè (NFkB, êèíàçà ERK - Extracellular signal Regulated Kinase); (2) â
ëèìôîöèòàõ S1P ñíèæàåò ýêñïðåññèþ ïðîàïîïòîòè÷åñêèõ Bcl-2
(Bax), áëîêèðóÿ àïîïòîç; (3) S1P ìîæåò îêàçûâàòü
àíòèàïîïòîòè÷åñêîå äåéñòâèå, ïðåäîòâðàùàÿ èíäóöèðîâàííûå
ñòðåññîì ïðîöåññû â ìèòîõîíäðèÿõ (íàïðèìåð, áëîêèðóÿ
âûñâîáîæäåíèå èç íèõ öèòîõðîìà ñ è ïðåäîòâðàùàÿ àêòèâàöèþ
126
êàñïàç); (4), â ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòêàõ S1P áëîêèðóåò àïîïòîç,
ïîâûøàÿ ïðîäóêöèþ NO [93, 94].
Òàêèì îáðàçîì, àïîïòîç èëè çàïðîãðàìèðîâàííàÿ ãèáåëü êëåòêè
ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñëîæíûé, ãåíåòè÷åñêè êîíòðîëèðóåìûé
ìíîãîñòàäèéíûé áèîõèìè÷åñêèé ïðîöåññ, íå âñå ñòîðîíû êîòîðîãî
ïîëíîñòüþ âûÿñíåíû. Õîòÿ ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû íå ÿâëÿåòñÿ
ïåðâîïðè÷èíîé àïîïòîçà, â íàñòîÿùåå âðåìÿ ïîêàçàíî, ÷òî
ìåìáðàíà ÿâëÿåòñÿ âàæíûì ó÷àñòíèêîì ñëîæíûõ àïîïòîçíûõ
ðåàêöèé. Èìåííî â ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå ïðîèñõîäèò
îëèãîìåðèçàöèÿ è íóæíàÿ îðèåíòàöèÿ àïîïòîçíûõ ðåöåïòîðîâ, à
òàêæå ëîêàëèçàöèÿ ìíîãèõ àïîïòîçíûõ ñèãíàëîâ, â òîì ÷èñëå è
ñèãíàëà "eat me", ñâÿçàííîãî ñ ýêñòåðíàëèçàöèåé ÔÑ. Äëÿ äðóãîé
ôîðìû ãèáåëè êëåòêè - íåêðîçà - ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàíû è
ñâÿçàííîå ñ íèìè âîçðàñòàíèå èîííîé ïðîíèöàåìîñòè ÿâëÿåòñÿ
êëþ÷åâûìè â ìåõàíèçìàõ êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé.
4.3. Íåêðîç è ïîâðåæäåíèå áèîìåìáðàí.
Íåêðîç, â ïðîòèâîïîëîæíîñòü àïîïòîçó, - ïàññèâíàÿ ôîðìà
áûñòðîé ãèáåëè êëåòîê ïîä âëèÿíèåì èíòåíñèâíûõ âíåøíèõ
âîçäåéñòâèé, íà êîòîðûå êëåòêà íå ìîæåò èëè æå íå óñïåâàåò
îòðåàãèðîâàòü ñ ïîìîùüþ ñâîèõ çàùèòíûõ ñèñòåì, è îíè âûçûâàþò
íàðóøåíèå ôóíêöèé êëåòî÷íûõ îðãàíåëë, â ïåðâóþ î÷åðåäü,
íàðóæíîé ìåìáðàíû êëåòîê. Âñå ìíîãîîáðàçèå ôàêòîðîâ,
âûçûâàþùèõ íåêðîç, óñëîâíî ìîæíî ðàçäåëèòü íà ôèçè÷åñêèå,
õèìè÷åñêèå è áèîãåííûå. Ê ïîñëåäíèì îòíîñÿòñÿ áàêòåðèàëüíûå è
âèðóñíûå èíôåêöèè, àëëåðãè÷åñêèå, àóòîèììóííûå ôàêòîðû è ò.
ä. Êëåòîê, óñòîé÷èâûõ ê ôàêòîðàì, âûçûâàþùèì íåêðîç, íåò, õîòÿ
÷óâñòâèòåëüíîñòü ê íèì ðàçëè÷íà. Íåêðîç, â îòëè÷èå îò àïîïòîçà,
îáÿçàòåëüíî ñîïðîâîæäàåòñÿ àâòîëèçîì êëåòêè [1, 2, 19] (ðèñ. 4.2.1),
â õîäå êîòîðîãî êëåòêà ëèçèðóåòñÿ, åå ñîäåðæèìîå èçëèâàåòñÿ â
ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî, ñîçäàâàÿ îáëàñòü âîñïàëåíèÿ,
ÿâëÿþùóþñÿ îòëè÷èòåëüíîé ÷åðòîé íåêðîçà.
Ìåõàíèçìû ðàçâèòèÿ íåêðîçà ñëîæíû è îïðåäåëÿþòñÿ
õàðàêòåðîì
ïàòîãåííûõ
âîçäåéñòâèé,
ñòðóêòóðíîôóíêöèîíàëüíûìè îñîáåííîñòÿìè òêàíè, íàñëåäñòâåííîêîíñòèòóöèîíàëüíûìè ôàêòîðàìè îðãàíèçìà. Â çàâèñèìîñòè îò
ìåõàíèçìà äåéñòâèÿ ïàòîãåííîãî ôàêòîðà ðàçëè÷àþò ïðÿìîé
íåêðîç, îáóñëîâëåííûé íåïîñðåäñòâåííûì âîçäåéñòâèåì
(òðàâìàòè÷åñêèé è òîêñè÷åñêèé íåêðîçû), è íåïðÿìîé âîçíèêàþùèé îïîñðåäîâàííî ÷åðåç ñîñóäèñòóþ è íåéðîýíäîêðèííóþ ñèñòåìû.
Ìîðôîëîãè÷åñêè
íåêðîòè÷åñêàÿ
êëåòêà
ñóùåñòâåííî
îòëè÷àåòñÿ îò àïîïòîçíîé. Íàáëþäàåòñÿ ðàñïàä ÿäðà íà îòäåëüíûå
127
ôðàãìåíòû (ãëûáêè, clumps) - êàðèîðåêñèñ è åãî ëèçèñ
(êàðèîëèçèñ). Ìèòîõîíäðèè íàáóõàþò, ïîâðåæäàåòñÿ èõ
âíóòðåííÿÿ ìåìáðàíà, ïðîèñõîäèò ëèçèñ è äåçèíòåãðàöèÿ êðèñò
[95]. Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà âûïÿ÷èâàåòñÿ, îáðàçóÿ ïóçûðè
("áëåááèíã" ìåìáðàíû). Â öèòîïëàçìå ïðîèñõîäÿò äèññîöèàöèÿ è
äèñïåðãèðîâàíèå ïîëèðèáîñîì, çà ñ÷åò ÷åãî óâåëè÷èâàåòñÿ åå
âÿçêîñòü è ïîÿâëÿåòñÿ ãðàíóëÿðíàÿ íåîäíîðîäíîñòü. Ïðîèñõîäèò
äåíàòóðàöèÿ è êîàãóëÿöèÿ áåëêîâ, íàáóõàíèå è ôðàãìåíòàöèÿ
öèñòåðí øåðîõîâàòîãî ÝÐ è àïïàðàòà Ãîëüäæè [2, 96].
Ðàçðóøåíèå ìåìáðàííûõ ñòðóêòóð êëåòêè âåäåò ê åå
ãèäðàòàöèè,
íàñòóïàåò
ïëàçìîëèç
(ãèäðîëèòè÷åñêîå
"ðàñïëàâëåíèå" öèòîïëàçìû), êîòîðûé â îäíèõ ñëó÷àÿõ îõâàòûâàåò
âñþ êëåòêó (öèòîëèç), â äðóãèõ - ëèøü åå ÷àñòü (ôîêàëüíûé
êîëëèêâàöèîííûé íåêðîç, èëè áàëëîííàÿ äèñòðîôèÿ). Ïðè
ôîêàëüíîì íåêðîçå ìîæåò ïðîèçîéòè ïîëíîå âîññòàíîâëåíèå
íàðóæíîé ìåìáðàíû êëåòêè. Åñëè âîçäåéñòâèå ïîâðåæäàþùåãî
àãåíòà ïðîäîëæàåòñÿ, ïðîèñõîäèò ëèçèñ êëåòêè è íåîáðàòèìûå
èçìåíåíèÿ ìåæêëåòî÷íîãî âåùåñòâà, åãî âîëîêíèñòûõ ñòðóêòóð.
Îáùèì ìîðôîëîãè÷åñêèì ïðèçíàêîì íåêðîçà, â îòëè÷èå îò
àïîïòîçà, ÿâëÿåòñÿ íàáóõàíèå êëåòêè, ïðèâîäÿùåå ê ðàçðûâó åå
ìåìáðàíû. Ìîðôî- è ïàòîãåíåç íåêðîçà õîðîøî èçó÷åíû è
ïîäðîáíî îïèñàíû â ëèòåðàòóðå [1, 3, 14, 19, 20, 97 è äð.].
 îòëè÷èå îò àïîïòîçà, ïîðàæàþùåãî åäèíè÷íûå, áåñïîðÿäî÷íî
ðàñïîëîæåííûå êëåòêè, íåêðîç, êàê ïðàâèëî, ðàçâèâàåòñÿ
îäíîâðåìåííî â áîëüøîé ãðóïïå êëåòîê, ïîäâåðãàþùèõñÿ îáùèì
èíòåíñèâíûì âîçäåéñòâèÿì. Çíà÷åíèå íåêðîçà îïðåäåëÿåòñÿ åãî
ñóùíîñòüþ êàê "ìåñòíîé ñìåðòüþ" è âûêëþ÷åíèåì èç ôóíêöèè çîí
òêàíè, ïîýòîìó íåêðîç æèçíåííî âàæíûõ îðãàíîâ, îñîáåííî
êðóïíûõ èõ ó÷àñòêîâ, íåðåäêî âåäåò ê ñìåðòè. Òàêîâû èíôàðêòû
ìèîêàðäà, èøåìè÷åñêèå íåêðîçû ãîëîâíîãî ìîçãà, íåêðîçû
êîðêîâîãî âåùåñòâà ïî÷åê, ïðîãðåññèðóþùèé íåêðîç ïå÷åíè,
îñòðûé ïàíêðåàòèò, îñëîæíåííûé ïàíêðåîíåêðîçîì. Íåðåäêî
îìåðòâåíèå òêàíè ÿâëÿåòñÿ ïðè÷èíîé òÿæåëûõ îñëîæíåíèé
ìíîãèõ çàáîëåâàíèé. Êëèíè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ íåêðîçà
îòëè÷àþòñÿ áîëüøèì ðàçíîîáðàçèåì [98].
Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî íåêðîç âíîñèò îïðåäåëåííûé âêëàä â
ïàòîãåíåç ìíîãèõ çàáîëåâàíèé ÷åëîâåêà, åãî ìîëåêóëÿðíûå
ìåõàíèçìû îñòàþòñÿ íåäîñòàòî÷íî èçó÷åííûìè. Ýòî îò÷àñòè
îáóñëîâëåíî òåì, ÷òî íåêðîç, â îòëè÷èå îò àïîïòîçà, ïðåäñòàâëÿåò
ñîáîé ñóììó íåïðîãðàììèðóåìûõ, ìàêñèìàëüíî äåñòðóêòèâíûõ
ïðîöåññîâ [99].
 òî æå âðåìÿ èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò, ïðîâåäåííûå íà
ðàçëè÷íûõ æèâîòíûõ, ïîçâîëèëè âûÿâèòü íåêîòîðûå îáùèå
128
áèîõèìè÷åñêèå çàêîíîìåðíîñòè êëåòî÷íîé äåñòðóêöèè ïðè
íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè. Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì,
"áûëî áû îøèáêîé ðàññìàòðèâàòü íåêðîç êàê ìåíåå óïîðÿäî÷åííûé
è ðåãóëèðóåìûé ïðîöåññ, ÷åì àïîïòîç" [100].
Íåñìîòðÿ íà ñõîäñòâî íåêîòîðûõ äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ ïðè
àïîïòîçå è íåêðîçå (ïîâðåæäåíèå ìèòîõîíäðèé, íàðóøåíèå
ãîìåîñòàçà Ñà2+, ãåíåðàöèÿ ÀÔÊ), ïðèíöèïèàëüíûì îòëè÷èåì
íåêðîçà, ïîìèìî îòñóòñòâèÿ çàâèñèìîñòè îò ýíåðãåòè÷åñêîãî
ñòàòóñà êëåòêè, ÿâëÿåòñÿ îòñóòñòâèå ãåíåòè÷åñêîãî êîíòðîëÿ è
ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ-ðåãóëÿòîðîâ íåêðîòè÷åñêîãî ïðîöåññà;
âìåñòî ýòîãî - ïîä÷èíåíèå áèîõèìè÷åñêèì çàêîíîìåðíîñòÿì
ñîïðÿæåííûõ äðóã ñ äðóãîì ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíûõ
ïðîöåññîâ, äåéñòâóþùèõ â ñîîòâåòñòâèè ñ îáùåé çàêîíîìåðíîñòüþ
âîçðàñòàíèÿ ýíòðîïèè.
4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîö
öåññû ïðè íåêðîçå.
Îòìå÷àþò íåñêîëüêî âàæíåéøèõ áèîõèìè÷åñêèõ êàñêàäîâ, îáùèõ äëÿ
íåêðîòè÷åñêîãî ïóòè ãèáåëè êëåòêè, íåñìîòðÿ íà ðàçíóþ ïðèðîäó
ïîâðåæäàþùåãî àãåíòà:
- íàðóøåíèå îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ (ñèíòåçà ÀÒÔ) è
ãëèêîëèçà;
- íàðóøåíèå ãîìåîñòàçà Ñà2+ (íàêîïëåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+) [101];
- óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è
ìåìáðàí âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë;
- ãåíåðàöèÿ ÀÔÊ è ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ;
- íåîáðàòèìîå ðàçðóøåíèå ìèòîõîíäðèé;
ïîâðåæäåíèå
ÿäðà
êëåòêè,
àêòèâàöèÿ
ýíäîíóêëåàç,
äåïîëèìåðèçàöèÿ íóêëåèíîâûõ êèñëîò (äåçèíòåãðàöèÿ ÄÍÊ è
ÐÍÊ).
Ïî ìíåíèþ B.Padanilam [20], îïðåäåëÿþùèìè äåòåðìèíàíòàìè
íåêðîçà ÿâëÿþòñÿ ìåõàíèçìû èîííîãî ãîìåîñòàçà. Ïðè ïðÿìîì
ïîâðåæäåíèè êëåòêè ïðîèñõîäèò ïîâðåæäåíèå öåëîñòíîñòè
ìåìáðàíû, è èçìåíåíèå ãîìåîñòàçà êëåòêè íå âûçûâàåò ñîìíåíèé.
 ñëó÷àå íåïðÿìîãî íåêðîçà, íàïðèìåð, ïðè èøåìèè, ïðîèñõîäèò,
ïðåæäå âñåãî, ðåçêîå ýíåðãåòè÷åñêîå "èñòîùåíèå" êëåòêè
âñëåäñòâèå
ðàçîáùåíèÿ
ìèòîõîíäðèàëüíûõ
ïðîöåññîâ
îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ. Ïðè ýòîì ñóùåñòâåííî
ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ÀÒÔ, íàðóøàåòñÿ ðàáîòà ÀÒÔ-çàâèñèìûõ èîííûõ
êàíàëîâ, ïðîèñõîäèò ïîòåðÿ ðåãóëÿöèè èîííîãî ãîìåîñòàçà,
ðàçðóøåíèå áåëêîâ öèòîñêåëåòà [102]. Ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà
òåðÿåò ñïîñîáíîñòü ðåãóëèðîâàòü êëåòî÷íûé îáúåì è èîííóþ
ïðîíèöàåìîñòü. Óñèëåííûé òðàíñïîðò èîíîâ ïðèâîäèò ê ïîòåðå
îñìîòè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ, óâåëè÷åíèþ êîíöåíòðàöèè Na+ â
129
öèòîçîëå. Ýòî àêòèâèðóåò Na+-K+-ÀÒÔàçó, èñòîùàÿ åùå áîëüøå
çàïàñû ÀÒÔ â êëåòêå è ñïîñîáñòâóÿ íàáóõàíèþ ìèòîõîíäðèé è
êëåòêè â öåëîì (îòåê êëåòêè).  íà÷àëüíîé ñòàäèè ïîâðåæäåíèÿ
èîííûé ãîìåîñòàç â êëåòêå åùå ïîääåðæèâàåòñÿ îäíîâðåìåííûì
îòòîêîì Ê+. Îäíàêî ïî ìåðå ñíèæåíèÿ óðîâíÿ ÀÒÔ èîííûå íàñîñû
áëîêèðóþòñÿ, è ïðèòîê â êëåòêó Na+ è âîäû óâåëè÷èâàåòñÿ.
 ïîñëåäíèå ãîäû íà ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ êóëüòóðàõ
óñòàíîâëåíû ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ è ðîëü òàêèõ èîííûõ íàñîñîâ è
òðàíñìåìáðàííûõ èîííûõ êàíàëîâ, êàê Na+/K+-íàñîñ, Na+/H+ è
Na+/Ca2+ èîííûå êàíàëû, Na+-K+-2Cl--êîòðàíñïîðòåð [103, 104].
Îäíàêî ìåõàíèçìû, âûçûâàþùèå ðåçêîå óâåëè÷åíèå ïðèòîêà Na+ â
öèòîçîëü ïðè íåêðîçå, äî ñèõ ïîð íåèçâåñòíû [20].
Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè Na+ â êëåòêå ïðèâîäèò ê
âûêëþ÷åíèþ ñèñòåìû Na+/Ca2+ îáìåíà ÷åðåç êëåòî÷íóþ ìåìáðàíó,
ê ïîâûøåíèþ îñìîòè÷åñêîãî äàâëåíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ è êëåòêå è
èõ íàáóõàíèþ. Çà ñ÷åò óâåëè÷åíèÿ ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàíû
ïðîèñõîäèò âûðàâíèâàíèå êîíöåíòðàöèé èîíîâ âíóòðè è âíå
êëåòêè. Êîíöåíòðàöèÿ Ca2+ â öèòîïëàçìå óâåëè÷èâàåòñÿ îò 10-8-107 Ì (â íîðìå) äî 10-6-10-5 Ì [101]. Ýòîìó ñïîñîáñòâóþò òàêæå (à)
óâåëè÷åíèå
ïðîíèöàåìîñòè
âíóòðèêëåòî÷íûõ
ìåìáðàí,
óñèëèâàþùèå ïðèòîê Ca2+ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ êîìïàðòìåíòîâ
(íàïðèìåð, èç ÝÐ) [2, 105], ñ ó÷àñòèåì ïðîòåèíêèíàçû Ñ è
èíîçèòîë-òðèôîñôàòà, è (á) ðàçâèâàþùèéñÿ îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ
[106]. Ê íàêîïëåíèþ Ñà2+ â öèòîïëàçìå ïðèâîäèò è îêèñëåíèå SÍãðóïï ðÿäà ìåìáðàííûõ áåëêîâ, âûçûâàþùåå ïîÿâëåíèå â
ìåìáðàíàõ äåôåêòîâ, ÷åðåç êîòîðûå èîíû Ñà2+ ïî ãðàäèåíòó
äèôôóíäèðóþò â êëåòêó.
Âûñîêèå óðîâíè Ca2+, â ñâîþ î÷åðåäü, àêòèâèðóþò:
- Ca2+-ÀÒÔàçó, óâåëè÷èâàÿ ïîòðåáëåíèå ÀÒÔ è âûçûâàÿ
äåïîëÿðèçàöèþ ìèòîõîíäðèé [105, 107];
- ýíäîíóêëåàçû (ãèäðîëèçóþùèå ÄÍÊ) è ñïåöèôè÷åñêèå
êëåòî÷íûå ïðîòåàçû, òàêèå êàê êàëüïàèí, ñóáñòðàòîì êîòîðûõ
ñëóæàò íåêîòîðûå ñòðóêòóðíûå è ñèãíàëüíûå áåëêè êëåòêè [108];
- ãåíåðàöèþ ìèòîõîíäðèÿìè ÀÔÊ, ñîïðÿæåííóþ ñ
èçìåíåíèÿìè ñòðóêòóðû êàðäèîëèïèíà ìèòîõîíäðèàëüíûõ
ìåìáðàí [85] è àêòèâàöèåé PLA2 [75, 105];
- ðÿä "äåñòðóêòèâíûõ", â òîì ÷èñëå ëèçîñîìàëüíûõ, ôåðìåíòîâ,
òàêèõ êàê: (1) ôîñôîëèïàçû, ãèäðîëèçóþùèå ìåìáðàííûå ÔË; (2)
ñïåöèôè÷åñêèå ïðîòåàçû, óñèëèâàþùèå äåñòðóêöèþ ìåìáðàí,
âêëþ÷àÿ ïðîòåàçû, ðàçðóøàþùèå ìåñòà ïðèêðåïëåíèÿ ôèëàìåíòîâ
öèòîñêåëåòà ê êëåòî÷íîé ìåìáðàíå, ÷òî ïðèâîäèò ê îñëàáëåíèþ
ôèêñàöèè ïîñëåäíåé è èçìåíåíèþ ôîðìû ïîâåðõíîñòè êëåòîê; (3)
ÀÒÔàçû, óâåëè÷èâàþùèå ïîòåðþ ÀÒÔ â êëåòêå è, (4) ýíäîíóêëåàçû,
130
ñïîñîáñòâóþùèå ôðàãìåíòàöèè õðîìàòèíà.
Íàêàïëèâàþùèåñÿ ñâîáîäíûå æèðíûå êèñëîòû è èîíû Ca2+
àêòèâèðóþò PLA2, ÷òî ïðèâîäèò ê ãèäðîëèçó ÔË, è äåñòðóêöèÿ
ïðèîáðåòàåò àâòîêàòàëèòè÷åñêèé õàðàêòåð [105]. Ëàâèíîîáðàçíûé
êàñêàä âçàèìíî óñèëèâàþùèõ äðóã äðóãà äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ
äåëàåò ïîâðåæäåíèÿ íåîáðàòèìûìè, ïðèâîäÿ ê àóòîëèçó êëåòêè,
ðàçðûâó ìåìáðàíû, ñ âûñâîáîæäåíèåì âíóòðèêëåòî÷íîãî
ñîäåðæèìîãî. Ïðè ýòîì èç ÔË ðàçðóøåííûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ
ìåìáðàí âîçìîæíî îáðàçîâàíèå ìèåëèíîâûõ ñòðóêòóð, êîòîðûå
ìîãóò ëèáî ïîãëîùàòüñÿ äðóãèìè êëåòêàìè, ëèáî ïîäâåðãàòüñÿ
äàëüíåéøåé äåãðàäàöèè ñ îáðàçîâàíèåì ñâîáîäíûõ æèðíûõ
êèñëîò. Ïîñëåäíèå, îáðàçóÿ ñîëè ñ Ñà2+, ñïîñîáñòâóþò äàëüíåéøåé
íåêðîòèçàöèè òêàíè. Ïîñëå ãèáåëè êëåòêè ïðîäîëæàåòñÿ
äåãðàäàöèÿ åå êîìïîíåíòîâ. Âûñâîáîæäåíèå âìåñòå ñ ñîäåðæèìûì
êëåòêè â ìåæêëåòî÷íóþ ñðåäó åå ôåðìåíòîâ è ïîñëåäóþùåå
îáíàðóæåíèå èõ â êðîâè ñëóæèò âàæíûì êëèíè÷åñêèì ïðèçíàêîì
ãèáåëè êëåòîê (â ÷àñòíîñòè ïðè èíôàðêòå ìèîêàðäà èëè
çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè).
Íåñïîñîáíîñòü êëåòî÷íûõ ìåìáðàí ïîääåðæèâàòü íèçêóþ
êîíöåíòðàöèþ Ñà2+ â öèòîïëàçìå è ðåãóëÿöèþ ãîìåîñòàçà
ìèòîõîíäðèàëüíîãî Ca2+ Brookes ñ ñîàâò. [72] ñ÷èòàþò
ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì â ðàçâèòèè íåîáðàòèìûõ ïîâðåæäåíèé,
ëåæàùèì â îñíîâå ìåõàíèçìà íåêðîçà êëåòîê ïðè öåëîì ðÿäå
ïàòîëîãèé (èøåìèÿ, àóòîèììóííûå ïðîöåññû è ò. ä.), à òàêæå
öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ìíîãèõ õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé.
Âûñîêèå êîíöåíòðàöèè Ca2+ â öèòîïëàçìå äåéñòâóþò íà
ìèòîõîíäðèè, ñïîñîáñòâóÿ ðàñêðûòèþ â íèõ (êàê è ïðè àïîïòîçå)
òðàíçèòíûõ ïîð (ÐÒÐ), îñîáåííî â óñëîâèÿõ îêèñëèòåëüíîãî
ñòðåññà [59-63, 109]. Ïðè âûðàæåííîì îáðàçîâàíèè ÐÒÐ íàðóøàåòñÿ
îñìîòè÷åñêèé áàëàíñ ìåæäó ìàòðèêñîì è ìåæìåìáðàííûì
ïðîñòðàíñòâîì ìèòîõîíäðèé, âîäà íà÷èíàåò ïîñòóïàòü â ìàòðèêñ,
âûçûâàÿ åãî íàáóõàíèå è ðàçðûâ íàðóæíîé ìèòîõîíäðèàëüíîé
ìåìáðàíû. Â ïîâðåæäåííîé ìèòîõîíäðèè ãåíåðàöèÿ ÀÒÔ ðåçêî
ñíèæàåòñÿ. Îòêðûòèå ÐÒÐ ïðèâîäèò òàêæå ê ñíèæåíèþ
ìèòîõîíäðèàëüíîãî òðàíñìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà [110]. Ýòî
ñî÷åòàåòñÿ ñ äåïîëÿðèçàöèåé ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, ïðèâîäÿ ê
äåãðàäàöèè Na+,Ê+-ÀÒÔàçû è åùå áîëüøå óñèëèâàÿ ïîâðåæäåíèå
ìåìáðàíû [59, 111]. Ñ÷èòàþò, ÷òî îòêðûòèå ÐTP ÿâëÿåòñÿ âàæíûì
ôàêòîðîì â ïàòîãåíåçå íåêðîçà ïîñëå èøåìèè è ðåïåðôóçèè [109].
Ðàñêðûòèå
ïîð
è
óâåëè÷åíèå
ïðîíèöàåìîñòè
ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí êîíòðîëèðóåòñÿ íåêîòîðûìè
(ñïåöèôè÷íûìè) âòîðè÷íûìè ìåññåíäæåðàìè è ïðîàïîïòîçíûìè
áåëêàìè, âêëþ÷àÿ ñåìåéñòâî Bcl-2.  îáû÷íîé êëåòêå áåëîê BNIP3,
131
îòíîñÿùèéñÿ ê ýòîìó ñåìåéñòâó, ñëàáî àññîöèèðîâàí ñ
ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíîé, íî ïðè àêòèâàöèè ïîâðåæäàþùèõ
ñòèìóëîâ îí ïîëíîñòüþ èíòåãðèðóåòñÿ â íàðóæíóþ ìåìáðàíó
ìèòîõîíäðèé, óâåëè÷èâàÿ åå ïðîíèöàåìîñòü, ñïîñîáñòâóÿ
äèñôóíêöèè ìèòîõîíäðèé è ó÷àñòâóÿ, òàêèì îáðàçîì, â
íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè. Äàííûé ìåõàíèçì ìîæåò èìåòü
âàæíîå çíà÷åíèå, â ÷àñòíîñòè, ïðè ãèïîêñè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè
êëåòêè, âûçûâàþùåì ýêñïðåññèþ BNIP3 [112].
Ðåïåðôóçèÿ èøåìèçèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ ãëèêîëèòè÷åñêèì
ñóáñòðàòîì, ñïîñîáñòâóþùàÿ âîññòàíîâëåíèþ óðîâíÿ ÀÒÔ,
ïðåäîòâðàùàåò íåêðîç äàæå ïîñëå îòêðûòèÿ ÐÒÐ, è âìåñòî íåêðîçà
âêëþ÷àåòñÿ èíäóöèðîâàííûé êàñïàçàìè àïîïòîç [109]. Òî åñòü,
îäíèì èç ãëàâíûõ ôàêòîðîâ, îïðåäåëÿþùèõ "âûáîð" ìåæäó
íåêðîçîì
è
àïîïòîçîì
êëåòêè,
îêàçûâàåòñÿ
óðîâåíü
âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÒÔ. Ïîâûøåííûé ðàñõîä ÀÒÔ â ïîâðåæäåííîé
êëåòêå ìîæåò áûòü âûçâàí íåîáõîäèìîñòüþ ðåñèíòåçà ÍÀÄ+ â
ñâÿçè ñ àêòèâàöèåé òðåáóþùèõ ÍÀÄ+ ôåðìåíòîâ [112]. Â òî æå
âðåìÿ òàêàÿ òî÷êà çðåíèÿ ïðîòèâîðå÷èò äàííûì Yu ñ ñîâò. [113],
ïîêàçàâøèì, ÷òî ðàñõîä ÍÀÄ+ ñëóæèò òîëüêî ñèãíàëîì äëÿ
òðàíñëîêàöèè â öèòîçîëü ìåæìåìáðàííîãî ìèòîõîíäðèàëüíîãî
áåëêà AIF (apoptos inducing factor), àêòèâèðóþùåãî íóêëåàçû [46], è
ðàñõîä ÀÒÔ îïðåäåëÿåòñÿ ýíåðãåòè÷åñêèìè ïîòðåáíîñòÿìè êëåòêè.
Óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû èç-çà
îòêðûòèÿ òðàíçèòíûõ ïîð ñ ïîñëåäóþùèì ðàçðóøåíèåì
ìèòîõîíäðèé è èíãèáèðîâàíèåì äûõàíèÿ ïîêàçàíî â ñëó÷àå
öèòîëèòè÷åñêîãî ãåïàòèòà [114, 115].
 öåëîì, âñåìè àâòîðàìè îòìå÷àåòñÿ, ÷òî ðåçêî âûðàæåííàÿ
ïîòåðÿ ÀÒÔ, îñîáåííî ñîïðÿæåííàÿ ñ îòêðûòèåì ÐÒÐ [62],
ïðèâîäèò ê íåêðîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè. Ýòî, êàê ñ÷èòàþò,
âûçâàíî âëèÿíèåì âîçíèêàþùåãî äåôèöèòà ÀÒÔ íà ìíîãèå
ñèñòåìû êëåòêè, â ÷àñòíîñòè:
- ñíèæàåòñÿ àêòèâíîñòü ìåìáðàííîãî ýíåðãîçàâèñèìîãî íàòðèåâîãî
íàñîñà, ÷òî ïðèâîäèò ê âíóòðèêëåòî÷íîé îñìîòè÷åñêîé ïåðåãðóçêå;
- èçìåíÿåòñÿ ýíåðãåòè÷åñêèé ìåòàáîëèçì â êëåòêå.
Ïîâûøåííàÿ ñêîðîñòü àýðîáíîãî ãëèêîëèçà ïðèâîäèò ê
áûñòðîìó èñòîùåíèþ çàïàñà ãëèêîãåíà è ñíèæåíèþ
âíóòðèêëåòî÷íîãî ðÍ. Ðàçâèâàþùèéñÿ àöèäîç, â ñâîþ î÷åðåäü,
ñïîñîáñòâóåò âûõîäó â öèòîïëàçìó ôåðìåíòîâ, ëîêàëèçîâàííûõ â
ëèçîñîìàõ (êàòåïñèíû, íóêëåàçû, ãèàëóðîíèäàçà, êèñëàÿ ôîñôàòàçà
è äð.), êîòîðûå ñïîñîáíû ãèäðîëèçîâàòü ñîáñòâåííûå êîìïîíåíòû
êëåòêè, âêëþ÷àÿ êëåòî÷íûå ìåìáðàíû.
 öåëîì, ïðè ëþáûõ ïîâðåæäåíèÿõ êëåòêè ñóäüáà ìèòîõîíäðèé
âî ìíîãîì îïðåäåëÿåò âîçìîæíîñòü åå âûæèâàíèÿ, à òàêæå ïóòü
132
ãèáåëè (àïîïòîç èëè íåêðîç) [59]. Îáåñïå÷èâàÿ êëåòêó ýíåðãèåé
(ñèíòåç ÀÒÔ), ìèòîõîíäðèè ÿâëÿþòñÿ òàêæå è èñòî÷íèêîì
îáðàçóþùèõñÿ â ýòèõ ïðîöåññàõ ÀÔÊ, êîòîðûå â ñëó÷àå
ãèïåðïðîäóêöèè è íàðóøåíèÿ ãîìåîñòàçà â êëåòêå, ñòàíîâÿòñÿ
èñòî÷íèêîì åå ïîâðåæäåíèÿ è ãèáåëè.  íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ
äîïóñòèìûé óðîâåíü ÀÔÊ â ìèòîõîíäðèÿõ ïîääåðæèâàåòñÿ
ðàçâèòîé ñèñòåìîé çàùèòû, âêëþ÷àþùåé öèòîõðîìîêñèäàçó,
ñóïåðîêñèääèñìóòàçó è ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçó è äð. Åñëè æå
êîíöåíòðàöèÿ ÀÔÊ ïðîäîëæàåò íàðàñòàòü, ïðîèñõîäèò îòêðûòèå
ÐÒÐ, ñ âûõîäîì â öèòîïëàçìó ÀÔÊ è öèòîõðîìà ñ, ÷òî ñäåðæèâàåò
äàëüíåéøóþ ãåíåðàöèþ ÀÔÊ. Ïðîäîëæåíèå îòêðûòèÿ ÐÒÐ ïðè
èçáûòêå ÀÔÊ âûçûâàåò ãèáåëü ìèòîõîíäðèé (íàçûâàåìóþ
"ìèòîïòîçîì"), êîòîðàÿ, çà ñ÷åò âûõîäà ìèòîõîíäðèàëüíûõ áåëêîâ
(öèòîõðîìà ñ, AIF) ìîæåò ïðèâåñòè ê àïîïòîçó, èëè (ïðè íåõâàòêå
ÀÒÔ) ê íåêðîçó [46].
Ãèáåëü êëåòîê, âûçâàííóþ îñëàáëåíèåì ôóíêöèîíèðîâàíèÿ
ìèòîõîíäðèé è äåôèöèòîì ÀÒÔ, ñ÷èòàþò ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì
â ðàçâèòèè ìíîãèõ ïàòîëîãèé (àòåðîñêëåðîç, äèàáåò,
íåéðîäåãåíåðàòèâíûå çàáîëåâàíèÿ, ñòàðåíèå) [116].
4.3.2. Îáðààòèìîñòü ïîâðåæäåíèé.
Ñòðóêòóðíûå è ôóíêöèîíàëüíûå èçìåíåíèÿ ìèòîõîíäðèé
ìîãóò áûòü îáðàòèìûìè, íàïðèìåð, ïðè íåðåçêî âûðàæåííîé
ðàäèàöèè, âêëþ÷àþùåé èîíèçèðóþùåå è ÓÔ-èçëó÷åíèå, îñîáåííî
â òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé ñâîéñòâåííà è äðóãèì
ñóáêëåòî÷íûì ñòðóêòóðàì, òàêèì, êàê ïëàçìàòè÷åñêàÿ ìåìáðàíà è
ÝÐ [117]. Îáðàòèìûì ñ÷èòàþò ñàìî ÿâëåíèå ôîðìèðîâàíèÿ
òðàíçèòíûõ ïîð [59, 118], îäíàêî êîíêðåòíûå óñëîâèÿ èõ
âîçìîæíîãî çàêðûòèÿ íå îïèñàíû. In vitro ïðè ãèïåðîñìîòè÷åñêîì
âîçäåéñòâèè, âûçûâàþùåì ôðàãìåíòàöèþ ìèòîõîíäðèàëüíîé ñåòè,
ïîêàçàíà îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé ìèòîõîíäðèé: ÷åðåç 1 ÷àñ ïîñëå
çàìåíû ãèïåðòîíè÷åñêîé ñðåäû íà èçîòîíè÷åñêóþ íàáëþäàëîñü
âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû [119].
Âîçìîæíîñòü îáðàòèìîñòè ïîâðåæäåíèé, îñîáåííî íà
íà÷àëüíûõ ýòàïàõ, ïîêàçàíà è äëÿ öåëüíûõ êëåòîê. Ïåðâàÿ,
îáðàòèìàÿ ñòàäèÿ - ýòî íåñïåöèôè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ, ñâîéñòâåííàÿ
ëþáîìó ðàçäðàæåíèþ. Îíà õàðàêòåðèçóåòñÿ óâåëè÷åíèåì
ïðîíèöàåìîñòè êëåòî÷íûõ ìåìáðàí äëÿ èîíîâ, â ÷àñòíîñòè, Ñà2+, ñ
ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé âíóòðèêëåòî÷íûõ ãèäðîëàç. Ïðè ýòîì
îòíîñèòåëüíî ìÿãêèå óñòîé÷èâûå ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí,
ïðîÿâëÿþùèåñÿ â íåáîëüøîì èçìåíåíèè ñîñòàâà ëèïèäîâ è
ìèêðîâÿçêîñòè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ, ïðèâîäÿò íå ê ãèáåëè
êëåòêè, à ê ðàçâèòèþ ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé. Íàïðèìåð,
133
âîçðàñòàíèå äîëè õîëåñòåðèíà â ìåìáðàíàõ ïðè íàðóøåíèÿõ
ëèïèä-òðàíñïîðòíîé ñèñòåìû, ñâÿçàííûõ ñ àòåðîñêëåðîçîì è/èëè
ñòàðåíèåì, èëè ÷àñòè÷íî êîìïåíñèðóåìûå ïðîöåññû ÏÎË ïðè
ñàõàðíûì äèàáåòå [120]. Ïàòîëîãèè, ñâÿçàííûå ñ òàêèìè
íàðóøåíèÿìè, ìîãóò ïðîòåêàòü äëèòåëüíîå âðåìÿ, âûçûâàÿ
õðîíè÷åñêîå íàêîïëåíèå äåôåêòîâ ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ôóíêöèé. Â
òî æå âðåìÿ, ïî ïðåêðàùåíèþ äåéñòâèÿ ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ
(èøåìèè, ðàäèàöèè, òîêñè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ è äð.) îãðàíè÷åííîå
(ëîêàëüíîå) ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû ìîæåò áûòü âîññòàíîâëåíî.
Òàê, îáðàòèìîñòü èçìåíåíèé â êëåòêàõ íàáëþäàëè ïðè èøåìèè
ìèîêàðäà ñ ïîñëåäóþùåé ðåïåðôóçèåé [121]. Ïðè îòíîñèòåëüíî
íåáîëüøîé
èøåìèè
âîçìîæíà
àäàïòàöèÿ
êëåòêè,
ñîïðîâîæäàþùàÿñÿ íåêîòîðûìè èçìåíåíèÿìè ñîîòíîøåíèÿ
ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ (íàñûùåííûõ è íåíàñûùåííûõ æèðíûõ
êèñëîò, èíäèâèäóàëüíûõ êëàññîâ ÔË, õîëåñòåðèíà) è ñâÿçàííûìè ñ
ýòèì íåáîëüøèìè ïîñòåïåííûìè ïîâðåæäåíèÿìè. Ðåçêàÿ æå èëè
äëèòåëüíàÿ èøåìèÿ ïðèâîäèò óæå ê ãëóáîêîìó ïîâðåæäåíèþ
êëåòêè è ðàçâèòèþ íåêðîçà èëè àïîïòîçà. Îòìå÷àþò äâà ôàêòîðà,
îáóñëàâëèâàþùèå íåîáðàòèìîñòü êëåòî÷íîãî ïîâðåæäåíèÿ ïðè
èøåìèè: (1) ìèòîõîíäðèàëüíàÿ äèñôóíêöèÿ êëåòêè ñ ðåçêèì
äåôèöèòîì ÀÒÔ è (2) ðàçâèòèå âûðàæåííûõ ïîâðåæäåíèé
ôóíêöèé ìåìáðàí. Ïðè íàëè÷èè ýòèõ ôàêòîðîâ âîçíèêøåå
ïîâðåæäåíèå â îñòàâøèõñÿ êëåòêàõ îáîñòðÿåòñÿ ïîñëå ðåïåðôóçèè
åùå áîëüøå, âûçûâàÿ, òàê íàçûâàåìûå, "èøåìè÷åñêèåðåïåðôóçèîííûå" ïîâðåæäåíèÿ.
Äî ñèõ ïîð íåò óíèâåðñàëüíîé îöåíêè, õàðàêòåðèçóþùåé
"ïîãðàíè÷íûé" ñòàòóñ ïåðåõîäà ïîâðåæäåííîé êëåòêè èç
îáðàòèìîãî ñîñòîÿíèÿ ê íåîáðàòèìîìó. Âåðîÿòíî, ýòî è
íåâîçìîæíî èç-çà ñîâîêóïíîñòè ìíîæåñòâåííîãî âëèÿíèÿ
èíäèâèäóàëüíûõ êëåòî÷íûõ ôàêòîðîâ.
Lieberthal ñ ñîàâò. [122] ïðîâåëè ðàñ÷åò çàâèñèìîñòè
îáðàòèìîñòè èëè íåîáðàòèìîñòè ïîâðåæäåíèÿ êëåòêè (óõîäà â
àïîïòîç èëè íåêðîç) îò åå îáåñïå÷åííîñòè ÀÒÔ. Ïî èõ äàííûì,
àïîïòîç ðàçâèâàåòñÿ ïðè äåôèöèòå ÀÒÔ â 25-70 % îò åãî
íîðìàëüíîãî óðîâíÿ, à íåêðîç - â ñëó÷àå ïðåâûøåíèÿ ýòîãî ïîðîãà.
Ñëåäîâàòåëüíî, åñëè äåôèöèò ÀÒÔ ìåíüøå ~ 20%, òî óñïåâøèå
ðàçâèòüñÿ èçìåíåíèÿ, âêëþ÷àÿ ïåðâè÷íûå ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàíû,
ÿâëÿþòñÿ îáðàòèìûìè è ó êëåòêè åñòü "øàíñ" âûæèòü. Âàæíóþ ðîëü
â íîðìàëèçàöèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòêè èãðàþò, òàê
íàçûâàåìûå, "áåëêè òåïëîâîãî øîêà" (heat shock proteins, hsp),
êîòîðûå ñïîñîáñòâóþò îïòèìàëüíîìó ôîëäèíãó áåëêîâ è
âîññòàíîâëåíèþ èõ ïîñëå ïîâðåæäåíèé [46, 123].
Âçàèìîñâÿçü ðàññìîòðåííûõ âûøå áèîõèìè÷åñêèõ ïðîöåññîâ,
134
Ðèñ. 4.3.1. Áèîõèìè÷åñêèå ïðîöåññû ïðè íåêðîòè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè êëåòêè
ïðèâîäÿùèõ ê íåêðîçó êëåòêè ìîæíî ïðåäñòàâèòü ñõåìîé (Ðèñ.4.3.1). [19].
Òàêèì îáðàçîì, â áèîõèìè÷åñêîì ìåõàíèçìå íåêðîòè÷åñêîé
ãèáåëè êëåòêè êëþ÷åâóþ ðîëü èãðàþò òðè òèïà ñîïðÿæåííûõ
ïðîöåññîâ: (1) ðåçêîå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè èîíîâ Ñà2+ â
öèòîçîëå; (2) ðàçîáùåíèå äûõàíèÿ è îêèñëèòåëüíîãî
ôîñôîðèëèðîâàíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ (ñ èñòîùåíèåì êëåòî÷íîãî
ÀÒÔ); (3) âîçðàñòàíèå ïðîíèöàåìîñòè ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è
åå ïîâðåæäåíèå. Ýòè äåñòðóêòèâíûå ïðîöåññû, êàæäûé èç êîòîðûõ
óñèëèâàåòñÿ ãåíåðàöèåé ÀÔÊ è ðàçâèâàþùèìñÿ îêèñëèòåëüíûì
ñòðåññîì, ïðîòåêàþò îäíîâðåìåííî è âçàèìîñâÿçàíî [3, 8, 105-107].
Òîðìîæåíèå èëè áëîêèðîâàíèå íà îïðåäåëåííûõ ñòàäèÿõ ýòèõ
äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ, îñîáåííî â ñî÷åòàíèè ñ íàïðàâëåííîé
ðåïàðàöèåé ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí, è ÿâëÿåòñÿ îñíîâîé
òåðàïåâòè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ íà ïàòîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû,
ñîïðîâîæäàþùèåñÿ ðàçâèòèåì íåêðîçîâ.
 ïîñëåäíèå ãîäû ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü ñìåøàííûõ ïóòåé
êëåòî÷íîé ñìåðòè, à èìåííî, íåêðîòè÷åñêàÿ ãèáåëü êëåòîê ìîæåò
ñîäåðæàòü íåêîòîðûå ýëåìåíòû àïîïòîçà (íî íå íàîáîðîò) [100].
Íàïðèìåð, íåîáðàòèìàÿ ãèáåëü êëåòîê ïî÷å÷íîé òêàíè,
èíäóöèðîâàííàÿ èøåìèåé, òîêñèíàìè èëè îñòðîé ïî÷å÷íîé
íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïðîèñõîäèò ïóòåì àïîïòîçà è íåêðîçà
îäíîâðåìåííî [20]. Îòíîñèòåëüíûé âêëàä ýòèõ äâóõ ìåõàíèçìîâ â
ãèáåëü êëåòîê çàâèñèò îò èõ òèïà è ñòåïåíè ïîâðåæäåíèÿ [124, 125].
Ïî ìíåíèþ Zeiss [100], ñóùåñòâóåò, òàê íàçûâàåìûé, "àïîïòîçîíåêðîçíûé
êîíòèíóóì",
îïðåäåëÿåìûé
ïåðåêðåñòíûìè
âçàèìîäåéñòâèÿìè (cross-talk) ìåæäó ðåàêöèÿìè ãèáåëè êëåòêè è
135
ñîõðàíåíèÿ ãîìåîñòàçà. Ýòè ïðîöåññû ìîãóò ñîñóùåñòâîâàòü êàê â
òêàíè, òàê è â îäíîé êëåòêå. Íà êóëüòóðå êëåòîê áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
âíåñåíèå ãëþêîçû êàê ýíåðãåòè÷åñêîãî ñóáñòðàòà ñäâèãàåò áàëàíñ â
ñòîðîíó àïîïòîçà [26]. Ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ,
ñâèäåòåëüñòâóþùèõ îá ó÷àñòèè â ïðîöåññàõ íåêðîçà â êëåòêå íå
òîëüêî ìèòîõîíäðèàëüíûõ ïîð (ÐÒÐ), íî è íåêîòîðûõ êàñïàç (â
÷àñòíîñòè êàñïàçû-1) [126], èëè "Fas-àññîöèèðîâàííîãî äîìåíà
ñìåðòè" (FADD) [127]. Íà êóëüòóðå êëåòîê 293Ò ïîêàçàí
"íåàïîïòîòè÷åñêèé" òèï ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé ñìåðòè - ñ
÷àñòè÷íî àïîïòîçíîé ìîðôîëîãèåé, íî ñ íàáóõàíèåì ìèòîõîíäðèé
è áåç ôðàãìåíòàöèè ÿäðà - íàçâàííûé àâòîðàìè "ïàðàïòîçîì" [128].
Äëÿ ãèáåëè íåéðîíîâ òàêæå îòìå÷åíû "íåêðîçî-ïîäîáíûå
ôåíîòèïû" (àïîíåêðîç) [14]. Â èññëåäîâàíèÿõ ex vivo íà àöèíàðíûõ
êëåòêàõ ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ìÿãêàÿ
(óìåðåííàÿ) ôîðìà ïàíêðåàòèòà ñîïðÿæåíà ïðåèìóùåñòâåííî ñ
àïîïòîçîì, à ïðè îñòðîì âûðàæåííîì ïàíêðåàòèòå íàáëþäàëñÿ
íåêðîç ñ î÷åíü ìàëûì âêëþ÷åíèåì àïîïòîçíûõ êëåòîê [19].
Òàêèì îáðàçîì, ðàçíîîáðàçíûå âíåøíèå è âíóòðåííèå
ïîâðåæäàþùèå ôàêòîðû èíèöèèðóþò â êëåòêå îòâåò â âèäå
àïîïòîçà è/èëè íåêðîçà - äâóõ ôîðì êëåòî÷íîé ãèáåëè,
ðàçëè÷àþùèõñÿ ïî êëèíèêî-ìîðôîëîãè÷åñêèì è áèîõèìè÷åñêèì
ïðèçíàêàì. Ïðåäñòàâëåíèÿ î ïåðâè÷íîñòè ìåìáðàííûõ íàðóøåíèé
ïðè äåéñòâèè íà êëåòêó ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ, õàðàêòåðíûå äëÿ
70-80-õ
ã.ã.
ïðîøëîãî
âåêà,
áëàãîäàðÿ
ïîëó÷åííûì
ìíîãî÷èñëåííûì äîêàçàòåëüñòâàì, íåñêîëüêî èçìåíèëèñü. Äëÿ
àïîïòîçà õàðàêòåðíî èçìåíåíèå ôóíêöèé ìåìáðàí íà
çàêëþ÷èòåëüíûõ ýòàïàõ ãèáåëè êëåòêè, à äëÿ íåêðîçà ýòîò ýòàï
ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç êëþ÷åâûõ, îïðåäåëÿþùèõ îáðàòèìîñòü
ðàçâèâàþùèõñÿ ïîâðåæäåíèé.
4.4. Ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí êàê îáðàòèìûé ýòàï íåêðîçà.
4.4.1.Îáù
ùèå áèîõèìè÷åñêèå ìåõààíèçìû ïîâðåæäåíèÿÿ
ìåìáðààíû.
Íåñìîòðÿ
íà
ìíîãîîáðàçèå
ôàêòîðîâ,
âûçûâàþùèõ
íåêðîòè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå êëåòêè, ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî
îñíîâíûõ ìåõàíèçìîâ íàðóøåíèÿ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ìåìáðàí
êëåòîê è èõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Ê ÷èñëó íàèáîëåå âàæíûõ
ïåðâè÷íûõ ïðîöåññîâ îòíîñÿò [105]: (1) ÏÎË, ñîïðîâîæäàþùååñÿ
îêèñëèòåëüíîé ìîäèôèêàöèåé ìåìáðàííûõ áåëêîâ è èçìåíåíèåì
ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ â êëåòêå; (2) àêòèâàöèÿ ëèçîñîìàëüíûõ
ãèäðîëàç è ýíäîãåííûõ ôîñôîëèïàç. Ýòè äåñòðóêòèâíûå ïðîöåññû
â êëåòêå ñîïðÿæåíû ñ (3) äåòåðãåíòíûìè ýôôåêòàìè
136
íàêàïëèâàþùèõñÿ ïðîäóêòîâ ðàñùåïëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ
(ñâîáîäíûõ æèðíûõ êèñëîò, ëèçîôîñôîëèïèäîâ); (4) ïîâðåæäåíèì
öèòîñêåëåòà è "îòñîåäèíåíèåì" åãî îò êëåòî÷íîé ìåìáðàíû, ÷òî
äåëàåò ìåìáðàíó áîëåå äîñòóïíîé ê ðàñòÿæåíèþ è ðàçðûâó.
 òîé èëè èíîé ñòåïåíè êàæäûé èç óêàçàííûõ ìåõàíèçìîâ
ÿâëÿåòñÿ óíèâåðñàëüíûì è èãðàåò ðîëü â ïàòîãåíåçå ìíîãèõ
çàáîëåâàíèé. Âîçìîæíû âîçäåéñòâèÿ è ðÿäà èíûõ, áîëåå
ñïåöèôè÷åñêèõ,
ìåìáðàíî-ïîâðåæäàþùèõ
ôàêòîðîâ,
íàïðàâëåííûõ íåïîñðåäñòâåííî íà áåëêîâûå êîìïîíåíòû
(òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå èîíîâ òÿæåëûõ ìåòàëëîâ, áàêòåðèàëüíûõ
òîêñèíîâ, íåêîòîðûõ ÿäîâ è äð.), ÷òî ïîäðîáíî îïèñàíî â
ëèòåðàòóðå [1, 3].
4.4.2. Ñâîáîäíî-ð
ðàäèêààëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ.
Ñâîáîäíîðàäèêàëüíîå èëè ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ,
áëàãîäàðÿ âîçðîñøåìó èíòåðåñó ê åãî ìíîãî÷èñëåííûì ýôôåêòàì,
ñòàëî ôàêòè÷åñêè îòäåëüíîé îáëàñòüþ áèîõèìèè, êîòîðîé
ïîñâÿùåíî îãðîìíîå êîëè÷åñòâî ëèòåðàòóðû [129 - 137], íà÷èíàÿ ñî
ñòàâøåé óæå êëàññè÷åñêîé êíèãè À.È. Àð÷àêîâà è Þ.À.
Âëàäèìèðîâà "Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ
ìåìáðàíàõ" [130]. Â íàñòîÿùåì îáçîðå ïðåäïîëàãàåòñÿ ðàññìîòðåòü
ëèøü ìåìáðàííî-ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ÏÎË, â îñíîâíîì çà ñ÷åò
îáðàçóþùèõñÿ ïåðåêèñíûõ ëèïèäíûõ ñîåäèíåíèé (îáîçíà÷àåìûõ â
ëèòåðàòóðå êàê LOOH) è äðóãèõ ðîäñòâåííûõ èì èíòåðìåäèàòîâ
(ïðîìåæóòî÷íûõ ñîåäèíåíèé ðåàêöèé ÏÎË).
Â
èíèöèèðîâàíèè
ïðîöåññîâ
ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîãî
ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò
ôîñôîëèïèäîâ âåäóùóþ ðîëü èãðàþò àêòèâíûå ôîðìû
ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà. Ê èõ ÷èñëó îòíîñÿòñÿ ñèíãëåòíûé
êèñëîðîä (1Î2), ñóïåðîêñèäíûå ðàäèêàëû (Î2•- ), ïåðåêèñü âîäîðîäà
Í2Î2 è íàèáîëåå ðåàêöèîííî àêòèâíûå ãèäðîêñèëüíûå (ÎÍ•) è
ïåðîêñèäíûå (ÍΕ2) ðàäèêàëû.
×ðåçâû÷àéíî ðåàêöèîííîñïîñîáíûé ñèíãëåòíûé êèñëîðîä (1Î2)
ïðåäñòàâëÿåò
ñîáîé
ýëåêòðîííî-âîçáóæäåííóþ
ôîðìó
ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà [138].  îòëè÷èå îò îáû÷íîé ìîëåêóëû Î2,
â êîòîðîé äâà íåñïàðåííûõ ýëåêòðîíà ñ ïàðàëëåëüíûìè ñïèíàìè
íàõîäÿòñÿ íà ðàçðûõëÿþùèõ îðáèòàëÿõ (îáîçíà÷àåìûõ êàê π*x,z), â
ñèíãëåòíîì êèñëîðîäå ïðîèñõîäèò èçìåíåíèå ñîñòîÿíèÿ îäíîãî èç
ýëåêòðîíîâ ïóòåì åãî ïåðåõîäà íà äðóãóþ îðáèòàëü ñ îäíîâðåìåííîé
èíâåðñèåé ñïèíà (ò.å. íàïðàâëåíèÿ âðàùåíèÿ). Îáðàçîâàíèå
ñèíãëåòíîãî êèñëîðîäà, îáëàäàþùåãî äèàìàãíèòíûìè è
âûðàæåííûìè ýëåêòðîííî-àêöåïòîðíûìè ñâîéñòâàìè, ñîïðÿæåíî ñ
ïîãëîùåíèåì ñâîáîäíîé ýíåðãèè (400 ÊÄæ/ìîëü).
137
 îðãàíèçìå ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ 1Î2 îáðàçóåòñÿ êàê ïîáî÷íûé
ïðîäóêò ïðè òàêèõ ðåàêöèÿõ, êàê ðàñïàä îðãàíè÷åñêèõ
ãèäðîïåðåêèñåé, äèñìóòàöèÿ ñóïåðîêñèäíûõ àíèîíîâ è
ïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ, âçàèìîäåéñòâèÿõ Í2Î2 ñ -ÎÑl,
êàòàëèçèðóåìûõ õëîðïåðîêñèäàçîé. Ïîêàçàíî îáðàçîâàíèå 1Î2 ïðè
ïåðåêèñíîì îêèñëåíèè ìèêðîñîìàëüíûõ ëèïèäîâ, ðåàêöèÿõ
áèîñèíòåçà ïðîñòàãëàíäèíîâ, è äð. [131]. Íàïðèìåð, ïðè
ðàçëîæåíèè Í2Î2 êàòàëàçîé 0,5% îáðàçóþùåãîñÿ êèñëîðîäà
íàõîäèòñÿ â ñèíãëåòíîì ñîñòîÿíèè. Èç-çà âûñîêîé ðåàêöèîííîé
ñïîñîáíîñòè âðåìÿ æèçíè 1Î2 â ìåìáðàíàõ ÷ðåçâû÷àéíî êîðîòêîå
(ïîðÿäêà 10-6 ñåê), ïîýòîìó åãî êîíöåíòðàöèÿ â ìåìáðàíàõ íå
ïðåâûøàåò 10-6 Ì [134]. Ñèíãëåòíûé êèñëîðîä ñ÷èòàþò îäíèì èç
ñàìûõ ñèëüíûõ îêñèäàíòîâ, öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå êîòîðîãî
ñâÿçàíî, ïðåæäå âñåãî, ñ îêèñëèòåëüíîé ìîäèôèêàöèåé
ìåìáðàííûõ áåëêîâ çà ñ÷åò îêèñëåíèÿ Trp, His, Tyr, Met è Cys, ñ
äàëüíåéøåé èíèöèàöèåé äðóãèõ îêèñëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ.
Ñëåäñòâèåì òàêîãî îêèñëåíèÿ îêàçûâàåòñÿ èíàêòèâàöèÿ áåëêîâ è èõ
àãðåãàöèÿ ñ îáðàçîâàíèåì ïîïåðå÷íûõ ñøèâîê [138-140]. Ïîêàçàíî,
÷òî äåéñòâèå 1Î2 ðàçîáùàåò ñèãíàëüíûå ïðîöåññû â êëåòêå, è
âûçûâàåò çàùèòíûé êëåòî÷íûé îòâåò, âêëþ÷àþùèé àêòèâàöèþ
ÌÀÐÊ [141]. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè íå
ñ÷èòàþò îïðåäåëÿþùèì âêëàä ýíäîãåííîãî 1Î2 â îáùåå
öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÀÔÊ [134, 142], â áîëüøèíñòâå ðàáîò
ñàìûõ ïîñëåäíèõ ëåò îòìå÷àåòñÿ çíà÷åíèå ñèíãëåòíîãî êèñëîðîäà
êàê ìîùíîãî ôàêòîðà ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ [138, 139].
Êëþ÷åâûìè â äåéñòâèè ÀÔÊ ÿâëÿþòñÿ òàêæå ïåðâè÷íûå,
ñóïåðîêñèäíûå ðàäèêàëû (Î2•-), êîòîðûå îáðàçóþòñÿ ïðè ó÷àñòèè
ýëåêòðîí-òðàíñïîðòíûõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì â ìèòîõîíäðèÿõ
îñîáåííî èíòåíñèâíî ïðè "êèñëîðîäíîì âçðûâå", ñâÿçàííîì ñ
àêòèâàöèåé ÍÀÄÔÍ-îêñèäàçû [143]. Ñêîðîñòü ãåíåðàöèè (Î2•-)
ìîæåò óâåëè÷èâàòüñÿ ïðè ïîïàäàíèè â êëåòêè òàêèõ ñîåäèíåíèé,
êàê áèïèðèäèëû èëè àíòðàöèêëèíû, êîòîðûå ïðèíèìàþò èëè
îòäàþò ýëåêòðîíû íà óðîâíå ôëàâèíîâûõ èëè õèíîíîâûõ
ïåðåíîñ÷èêîâ è çàòåì àóòîîêèñëÿþòñÿ, ïîâûøàÿ âûõîä
êèñëîðîäíîãî ðàäèêàëà [133]. Èç íèõ îáðàçóþòñÿ âòîðè÷íûå
ñâîáîäíûå ðàäèêàëû - ðàäèêàëû ãèäðîêñèëà (ÎÍ•), ïåðîêñèäà
(ÍÎ2•) è ðàäèêàëû ëèïèäîâ - êàê ïðîäóêòû ðåàêöèé ñóïåðîêñèäà
(Î2•-), ïîä äåéñòâèåì ïðèñóòñòâóþùèõ â îðãàíèçìå èîíîâ ìåòàëëîâ
ïåðåìåííîé âàëåíòíîñòè, â ïåðâóþ î÷åðåäü Fe2+ [8, 106, 130, 134,
137]. Ñóïåðîêñèä (Î2•-) ðåàãèðóåò êðàéíå áûñòðî ñ äðóãèì, ñëàáî
îêèñëÿþùèìñÿ ðàäèêàëîì, îêñèäîì àçîòà (NO•), îáðàçóÿ
ïåðîêñèíèòðèò (ÎNOÎ) èëè ïåðîêñèíèòðîêèñëîòó (ÎNOÎÍ) ñèëüíûé îêñèäàíò è íèòðèðóþùèé àãåíò [144]. Âñå ýòè ïðîäóêòû
138
îêàçûâàþò ðàçðóøèòåëüíîå äåéñòâèå íà êëåòî÷íûå ñòðóêòóðû,
èíèöèèðóÿ ðåàêöèè öåïíîãî îêèñëåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ ìåìáðàí.
Èíèöèèðîâàíèå öåïíîé ðåàêöèè íà÷èíàåòñÿ ñ âíåäðåíèÿ â
ìåìáðàíó ñâîáîäíîãî ðàäèêàëà (â ïåðâóþ î÷åðåäü ÎÍ•), ñïîñîáíîãî
èç-çà íåáîëüøîãî ðàçìåðà ïðîíèêàòü â òîëùó ãèäðîôîáíîãî
ëèïèäíîãî ñëîÿ è âñòóïàòü â õèìè÷åñêîå âçàèìîäåéñòâèå ñ
ïîëèíåíàñûùåííûìè æèðíûìè êèñëîòàìè ÔË, ðàçðûâàÿ Ñ-Í-ñâÿçè
îêîëî ñîñåäíåãî ñ äâîéíîé ñâÿçüþ àòîìà óãëåðîäà (-ÑÍ=ÑÍ-CÍ2-), ñ
ïîñëåäóþùèì îáðàçîâàíèåì ëèïèäíûõ ðàäèêàëîâ, èíèöèèðóþùèõ,
â ñâîþ î÷åðåäü, ñëåäóþùóþ ðåàêöèþ. Ýòîò, ïîäðîáíî îïèñàííûé â
ëèòåðàòóðå ïðîöåññ, ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ øèðîêîãî ñïåêòðà
ïðîäóêòîâ äåãðàäàöèè ÔË, âûçûâàþùèõ èçìåíåíèÿ ñâîéñòâ
áèîìåìáðàí [8, 130, 134].
 ïðîöåññå îêèñëåíèÿ ìîæåò ïðîèñõîäèòü, â ÷àñòíîñòè,
îáðàçîâàíèå ìåìáðàíîàêòèâíûõ ëèçîÔË. Ãèäðîîêñèäû ÔË è
ëèçîÔË, îáëàäàÿ âûðàæåííûìè äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè,
ñïîñîáíû
âûçâàòü
äåçîðãàíèçàöèþ
ëèïèäíîãî
áèñëîÿ,
ïðîÿâëÿþùóþñÿ â óâåëè÷åíèè òîëùèíû ìåìáðàíû, ôðàãìåíòàöèè
ìåìáðàííûõ âåçèêóë, âûòåñíåíèè ìåìáðàííûõ áåëêîâ èç
ãèäðîôîáíîé çîíû áèñëîÿ â ïîâåðõíîñòíóþ ïîëÿðíóþ îáëàñòü.
 áèîìåìáðàíàõ öåïü îêèñëåíèÿ ìîæåò ñîñòîÿòü èç äåñÿòè è
áîëåå çâåíüåâ. Â êîíöå êîíöîâ, öåïü îáðûâàåòñÿ â ðåçóëüòàòå
âçàèìîäåéñòâèÿ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ ñ àíòèîêñèäàíòàìè, èîíàìè
ìåòàëëîâ ïåðåìåííîé âàëåíòíîñòè (íàïðèìåð, Fe2+) èëè äðóã ñ
äðóãîì [8, 130, 137].
Îêèñëåíèþ ÔË ñïîñîáñòâóåò áîëåå âûñîêàÿ (â 7-8 ðàç)
ðàñòâîðèìîñòü ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà â ëèïèäíîé ôàçå, ÷åì â
âîäå è ãèäðîôèëüíûõ ó÷àñòêàõ êëåòêè. Äëÿ ðàçâèòèÿ ïðîöåññà
âàæíà ñòåïåíü íàñûùåííîñòè òêàíåé êèñëîðîäîì, ïîâûøàþùàÿ
êîëè÷åñòâî ðàäèêàëîâ â âèäå âòîðè÷íûõ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà.
Ïîýòîìó õîðîøî ñíàáæàåìûå êðîâüþ è íàñûùåííûå êèñëîðîäîì
òêàíè (ëåãêèå, ñåðäöå, ãîëîâíîé ìîçã) ÿâëÿþòñÿ áîëåå
÷óâñòâèòåëüíûìè ê ïîâðåæäàþùåìó äåéñòâèþ àêòèâàòîðîâ ÏÎË.
Îêèñëåíèþ ïîäâåðæåíû â ïåðâóþ î÷åðåäü íåíàñûùåííûå ÔË,
ñîäåðæàùèå â sn-2 ïîëîæåíèè ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå
êèñëîòû - àðàõèäîíîâóþ, ëèíîëåâóþ è äð., ÿâëÿþùèåñÿ îñíîâíîé
ìèøåíüþ ÏÎË. Íàïðèìåð, ïðè èíäóêöèè ÏÎË â ìåìáðàíàõ ÝÐ
ïðîèñõîäèò èçáèðàòåëüíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ïîëèåíîâûõ æèðíûõ
êèñëîò ÔÝ. Ñîäåðæàíèå ÔÕ òàêæå ñíèæàåòñÿ è óâåëè÷èâàåòñÿ
êîíöåíòðàöèÿ áîëåå ïîëÿðíûõ ëèïèäîâ, ñ íàñûùåííûìè æèðíûìè
êèñëîòàìè - ëèçîÔÕ è ÑÌ. Ïðè ýòîì óðîâåíü àðàõèäîíîâîé
êèñëîòû ñíèæàåòñÿ áîëåå ÷åì âäâîå, à äîêîçîãåêñàåíîâàÿ êèñëîòà
(22:6) èñ÷åçàåò ïî÷òè ïîëíîñòüþ [145].
139
Èçâåñòíî, ÷òî ÔË ðàñïðåäåëåíû â ìåìáðàíå àñèììåòðè÷íî ñ
ïðåèìóùåñòâåííîé ëîêàëèçàöèåé àìèíîñîäåðæàùèõ ëèïèäîâ ñ
ïîëèíåíàñûùåííûìè ÆÊ âî âíóòðåííåì ìîíîñëîå [146] (ñì. ãëàâó
3). Èìåííî ýòè ÔË íàèáîëåå ïîäâåðæåíû ïåðåêèñíîìó îêèñëåíèþ,
ïðèâîäÿùåìó â èòîãå ê åùå áîëüøåé àñèììåòðèè ìåìáðàíû è
èçìåíåíèþ åå ñâîéñòâ, ñîïðÿæåííûõ ñ æèäêîñòíîñòüþ è
ïðîíèöàåìîñòüþ, ÷òî è íàáëþäàåòñÿ ïðè ïàòîëîãè÷åñêèõ
ïðîöåññàõ ðàçëè÷íîé ýòèîëîãèè.  ïðîöåññ âîâëåêàþòñÿ ÔË, êàê
ôîðìèðóþùèå áèñëîé, òàê è âõîäÿùèå â ìèêðîîêðóæåíèå
ìåìáðàííûõ áåëêîâ. Ðåöåïòîðû ìàêðîôàãîâ ìîãóò "óçíàâàòü"
ìåìáðàíû êëåòîê, ïîâðåæäåííûõ ÏÎË çà ñ÷åò ïðèñóòñòâèÿ íà
âíåøíåì ìîíîñëîå îêèñëåííûõ ôîñôîëèïèäîâ è ÔÑ,
òðàíñëîöèðîâàííîãî èç âíóòðåííåé îáëàñòè ìåìáðàíû (ñì.
àïîïòîç) [83]. ÔË, ëîêàëèçîâàííûå â ìåìáðàííûõ ðàôòàõ, ìåíåå
ïîäâåðæåíû ÏÎË èç-çà íèçêîãî ñîäåðæàíèÿ â íèõ íåíàñûùåííûõ
æèðíûõ êèñëîò.
Ïåðåêèñíîìó îêèñëåíèþ ïîäâåðãàåòñÿ òàêæå è ìåìáðàííûé
õîëåñòåðèí, ïðè ýòîì îáðàçóþòñÿ 5α-, 6α-, 7α- è 6β-ãèäðîïåðåêèñè
õîëåñòåðèíà [147].
 íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ èç-çà ñòðîãîãî êîíòðîëÿ ñïåöèôè÷åñêèõ
ðåãóëÿòîðíûõ ñèñòåì êëåòêè ñêîðîñòü ÏÎË íåâåëèêà. Óâåëè÷åííîå
îáðàçîâàíèå ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ â îðãàíèçìå è ñâÿçàííîå ñ ýòèì
óñèëåíèå ïðîöåññîâ ÏÎË (îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ) ñîïðîâîæäàåòñÿ
ðÿäîì íàðóøåíèé ñâîéñòâ áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí è
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòêè â öåëîì [101, 148 - 150].
Íåïîñðåäñòâåííûì ðåçóëüòàòîì ÏÎË ÿâëÿåòñÿ ïîâûøåíèå
ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàíû, ÷òî ìîæåò áûòü îáóñëîâëåíî: (1)
èçìåíåíèåì çàðÿäà íà ïîâåðõíîñòè ðàçäåëà ìåìáðàíàîêîëîìåìáðàííàÿ ñðåäà; (2) èçìåíåíèåì êîíôîðìàöèè
ìåìáðàííûõ ëèïîïðîòåèíîâûõ êîìïëåêñîâ; (3) ïîÿâëåíèåì
ãèäðîôèëüíûõ ó÷àñòêîâ â ãèäðîôîáíîì ñëîå ìåìáðàíû.
Îáðàçîâàíèå òàêèõ ãèäðîôèëüíûõ ñàéòîâ ìîæåò ïðèâåñòè ê
ôîðìèðîâàíèþ âîäíûõ ïîð, ðåçêî íàðóøèòü ñòàáèëüíîñòü ñëîÿ
ìåìáðàíû, âïëîòü äî åå ïîëíîãî ðàçðûâà [130, 137 14]. Ðåçóëüòàòîì
ÏÎË îêàçûâàåòñÿ è óìåíüøåíèå ñòàáèëüíîñòè ëèïèäíîãî áèñëîÿ,
÷òî ìîæåò ïðèâåñòè, â ñâîþ î÷åðåäü, ê èçìåíåíèþ ýëåêòðè÷åñêèõ
ñâîéñòâ ìåìáðàíû, è, êàê ñëåäñòâèå - ïîòåðå ìåìáðàíîé åå
áàðüåðíûõ ôóíêöèé.
Îñîáîå âíèìàíèå â ëèòåðàòóðå ïîñëåäíèõ ëåò óäåëÿåòñÿ
äåéñòâèþ NO• è ãåíåðèðóþùèõ åãî NO-ñèíòàç (îñîáåííî
ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû - eNOS) [151-153], â ÷àñòíîñòè, ðîëè
NO• â ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññàõ. Ýòà, ïðîíèêàþùàÿ ÷åðåç
ìåìáðàíó ìîëåêóëà, îáíàðóæåííàÿ â áèîëîãè÷åñêèõ ñèñòåìàõ â
140
1980-õ ãîäàõ, îêàçàëàñü âàæíûì ñèãíàëüíûì ðåãóëÿòîðîì ìíîãèõ
ïðîöåññîâ, âêëþ÷àÿ ìèòîõîíäðèàëüíîå äûõàíèå è îáðàçîâàíèå
ÀÔÊ. NO• ñ áîëüøèì ñðîäñòâîì, ÷åì êèñëîðîä, ñâÿçûâàåòñÿ ñ
öèòîõðîìîêñèäàçîé, èíãèáèðóÿ òåì ñàìûì ìèòîõîíäðèàëüíûé
àýðîáíûé ìåòàáîëèçì è êîíòðîëèðóÿ ñêîðîñòü âõîäà êèñëîðîäà â
äûõàòåëüíóþ öåïü. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî èìåííî áëàãîäàðÿ ýòîìó
ñâîéñòâó NO• ïðè îêèñëèòåëüíîì ñòðåññå â íåêîòîðîé ñòåïåíè
ñäåðæèâàþòñÿ ïðîöåññû îêèñëåíèÿ. Êðîìå òîãî, ïðè èíòåíñèâíîé
ãåíåðàöèè ÀÔÊ, NO•, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ðàäèêàëàìè, ñïîñîáñòâóåò
ãåíåðàöèè ðåàêöèîííîñïîñîáíîãî ïåðîêñèíèòðèòà [153]. Ïðè
òÿæåëûõ ïàòîëîãèÿõ (íàïðèìåð, ñåïñèñ) NO• è ÀÔÊ, íàêàïëèâàÿñü
â êëåòêå â áîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ, èíàêòèâèðóþò êîìïîíåíòû
ìèòîõîíäðèàëüíîé äûõàòåëüíîé öåïè, áëîêèðóÿ êëåòî÷íîå
äûõàíèå è èíèöèèðóÿ íåêðîç [154]. Ïîýòîìó ñåïñèñ â ïîñëåäíåå
âðåìÿ îòíîñÿò ê "ìèòîõîíäðèàëüíûì áîëåçíÿì", òåðàïèÿ êîòîðûõ
ìîæåò áûòü ñâÿçàíà ñ âîçäåéñòâèåì íà äûõàòåëüíûå ôåðìåíòû
ìèòîõîíäðèé [155].
Ëèïèäíûå ðàäèêàëû èíèöèèðóþò ïîâðåæäåíèÿ íå òîëüêî
ôîñôîëèïèäîâ ìåìáðàíû, íî è ìåìáðàííûõ áåëêîâ [156, 157],
óñóãóáëÿÿ òåì ñàìûì îáùèå ìåìáðàííûå ïîâðåæäåíèÿ. Ïðè ýòîì
íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå ìèêðîâÿçêîñòè ìåìáðàí, èçìåíåíèå èõ
ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà, óìåíüøåíèå ãèäðîôîáíîãî îáúåìà,
óâåëè÷åíèå ïîëÿðíîñòè ëèïèäíîé ôàçû.
Íàèáîëåå
ðàñïðîñòðàíåííûì
ïóñêîâûì
ìåõàíèçìîì
îêèñëèòåëüíîãî ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ
ðåàêöèÿ ñóëüôãèäðèëüíûõ (SH) ãðóïï àìèíîêèñëîòû öèñòåèíà ñî
ñâîáîäíûìè ðàäèêàëàìè. Ïðè ýòîì îáðàçóþòñÿ ðàäèêàëû ñ
ëîêàëèçàöèåé íåñïàðåííîãî ýëåêòðîíà îêîëî àòîìà ñåðû (-S•),
êîòîðûå çàòåì âçàèìîäåéñòâóþò äðóã ñ äðóãîì ñ îáðàçîâàíèåì
äèñóëüôèäîâ, ëèáî îêèñëÿþòñÿ êèñëîðîäîì äî ïðîèçâîäíûõ
ñóëüôîíîâîé êèñëîòû. Êëàññè÷åñêèì ïðèìåðîì òàêîãî ïðîöåññà
ÿâëÿåòñÿ ñâÿçàííîå ñ ÏÎË ïîâðåæäåíèå áåëêîâ è îáðàçîâàíèå
áåëêîâûõ àãðåãàòîâ â õðóñòàëèêå ãëàçà, ïðèâîäÿùåå ê åãî
ïîìóòíåíèþ. Ýòîò ïðîöåññ èãðàåò âàæíóþ ðîëü â ðàçâèòèè
êàòàðàêòû ó ÷åëîâåêà. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî ÔË ñ îêèñëåííûìè
ôðàãìåíòàìè
àðàõèäîíîâîé
êèñëîòû
â
ìåìáðàíàõ
ôîòîðåöåïòîðíûõ äèñêîâ ìîãóò âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ εàìèíîãðóïïîé îñòàòêîâ ëèçèíà, ìîäèôèöèðóÿ áåëêè ñåò÷àòêè
[145].
Ïîìèìî Cys, îêèñëåíèþ ïîäâåðãàþòñÿ His, Ser, Pro, Arg, Met,
Phe è Tyr [130]. Íàðÿäó ñ îêèñëåíèåì ýòèõ àìèíîêèñëîòíûõ
îñòàòêîâ ñèíãëåòíûì êèñëîðîäîì [131, 138], ïðîöåññû ÏÎË òàêæå
ïðèâîäÿò ê ïîÿâëåíèþ îêèñëåííûõ ãåì-ñîäåðæàùèõ áåëêîâ è
141
ïðîèçâîäíûõ àìèíîêèñëîò. Â ìåìáðàííûõ áåëêàõ ïîä äåéñòâèåì
ÀÔÊ âîçìîæíî ôîðìèðîâàíèå êîìïëåêñîâ "îêèñëåííûé ëèïèä áåëîê", ïîëèìåðèçàöèÿ áåëêîâûõ ìîëåêóë, ðàçðóøåíèå áîêîâûõ
ãðóïï àìèíîêèñëîò (â ïåðâóþ î÷åðåäü, ñîäåðæàùèõ SH-ãðóïïû).
Ðåçóëüòàòîì îêèñëåíèÿ àìèíîêèñëîò ìîæåò áûòü íàðóøåíèå
âòîðè÷íîé è òðåòè÷íîé ñòðóêòóðû áåëêîâ, îáëåã÷àþùåå
äàëüíåéøåå îêèñëåíèå àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ, è äåíàòóðàöèÿ
áåëêîâûõ ìîëåêóë, â ðåçóëüòàòå ÷åãî íàðóøàþòñÿ èõ ôóíêöèè, â
÷àñòíîñòè, íåîáðàòèìî èíàêòèâèðóþòñÿ ôåðìåíòû. Íàðóøåíèå
ñòðóêòóðû áåëêîâ äåëàåò èõ äîñòóïíûìè äëÿ ïðîòåîëèòè÷åñêèõ
ôåðìåíòîâ. Ê ýòîìó äîáàâëÿåòñÿ äåéñòâèå ñïåöèôè÷åñêèõ ïðîòåàç,
ãèäðîëèçóþùèõ îêèñëåííûå áåëêè, äëÿ êîòîðûõ îêèñëåííûå
àìèíîêèñëîòíûå îñòàòêè ÿâëÿþòñÿ ìàðêåðàìè [158].
Ñ÷èòàþò, ÷òî â îñíîâå îáðàçîâàíèÿ êîìïëåêñîâ áåëêîâ ñ
îêèñëåííûìè ëèïèäàìè ëåæàò, ïî êðàéíåé ìåðå, äâà
ìåõàíèçìà: (1) îáðàçîâàíèå êîâàëåíòíîé ñâÿçè ìåæäó ñâîáîäíûìè
SH-ãðóïïàìè àìèíîêèñëîò è àëüäåãèäàìè èëè êàðáîêñèëüíûìè
ãðóïïàìè îêèñëåííûõ ëèïèäîâ è, (2) îáðàçîâàíèå ïîëèìåðíûõ
ïðîäóêòîâ çà ñ÷åò ôîðìèðîâàíèÿ ïîïåðå÷íûõ ñâÿçåé ("ñøèâîê") â
áåëêîâûõ ìîëåêóëàõ. Ýòè ïðî÷íûå íåðàñòâîðèìûå ïîïåðå÷íîñøèòûå ñîåäèíåíèÿ íå ðàçðóøàþòñÿ ôåðìåíòàìè ëèçîñîì.
Îáðàçîâàíèå ìîëåêóëÿðíûõ ñøèâîê ñïîñîáñòâóåò äàëüíåéøåé
àãðåãàöèè áåëêîâ.
 ïîñëåäíèå ãîäû ê èçâåñòíûì ïîâðåæäàþùèì ýôôåêòàì ÀÔÊ
ïðèáàâèëîñü èõ ó÷àñòèå â òðàíñäóêöèè ñèãíàëîâ îò ìåìáðàííûõ
ðåöåïòîðîâ âî ìíîãèõ ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ [159, 160]. Ïðè
ýòîì ÀÔÊ è NO• îáû÷íî ãåíåðèðóþòñÿ ïðè ó÷àñòèè òàêèõ
ôåðìåíòíûõ ñèñòåì, êàê ÍÀÄÔÍ-îêñèäàçà è NOS ñîîòâåòñòâåííî,
îáåñïå÷èâàÿ ñèñòåìó "ðåäîêñ-ðåãóëÿöèè" [106]. Ïðè íàðóøåíèè
ýòîé ñèñòåìû ïîâûøåííîå îêèñëèòåëüíîå äåéñòâèå âûçûâàåò
ïîâðåæäåíèÿ ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, ñ âîçìîæíûìè èõ
ôóíêöèîíàëüíûìè èçìåíåíèÿìè, ÷òî âíîñèò ñâîé âêëàä â
ïîâðåæäåíèå êëåòêè.
4.4.3. Ïîâðåæäåíèå ìåìáðààí ïðîòåèíààçààìè è ôîñôîëèïààçààìè.
Ïðè ìíîãèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ â ïîâðåæäåííûõ
êëåòêàõ ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ëèçîñîì ñ ïîñëåäóþùèì
âûñâîáîæäåíèåì ëîêàëèçîâàííûõ â íèõ ôåðìåíòîâ, âêëþ÷àÿ
ïðîòåèíàçû è ôîñôîëèïàçû, êîòîðûå îêàçûâàþò ïîâðåæäàþùåå
äåéñòâèå íà ìåìáðàíû [161]. Ñóùåñòâóåò äàæå òî÷êà çðåíèÿ, ÷òî
èìåííî âûñâîáîæäåíèå äåñòðóêòèâíûõ ôåðìåíòîâ èç ëèçîñîì,
îêàçûâàåòñÿ òåì êëþ÷åâûì ìåõàíèçìîì, êîòîðûé çàïóñêàåò öåïü
ïîñëåäóþùåãî íåêðîòè÷åñêîãî ïîâðåæäåíèÿ êëåòêè [97]. Òàê,
142
ïîâðåæäåíèÿ ëèçîñîìàëüíîãî àïïàðàòà ïå÷åíè, ñ âûñâîáîæäåíèåì
ãèäðîëàç, ïîêàçàíû â ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ïðè
èíòîêñèêàöèè æèâîòíûõ ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè, íàïðèìåð,
òåòðàõëîðìåòàíîì (ÑÑ14), ãàëàêòîçàìèíîì, àôëàòîêñèíàìè,
çìåèíûì ÿäîì, õëîðïðîìàçèíîì è äð.
Ïîêàçàíî, ÷òî çàðàæåíèå ìûøåé âèðóñàìè ìûøèíîãî ãåïàòèòà
è îñïîâàêöèíû âûçûâàåò àêòèâàöèþ ðÿäà ëèçîñîìàëüíûõ ãèäðîëàç
(γ-ãëþêóðîíèäàçû, êèñëîé ïðîòåèíàçû, ÄÍÊàçû è ÐÍÊàçû) â
ëèçîñîìàëüíîé è íàäîñàäî÷íîé ôðàêöèÿõ ãîìîãåíàòà ïå÷åíè
æèâîòíûõ. Ìåòîäîì ýëåêòðîííîãî ìèêðîñêîïèðîâàíèÿ áûëî
îáíàðóæåíî ðàçðóøåíèå ìåìáðàí ëèçîñîì è âîçäåéñòâèå
îñâîáîäèâøèõñÿ ãèäðîëàç íà ìèòîõîíäðèè. Ïðèçíàêè àêòèâàöèè
ëèçîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ íàáëþäàëè è â òêàíåâûõ êóëüòóðàõ ïðè
ðåïðîäóêöèè ðàçëè÷íûõ âèðóñîâ, â òîì ÷èñëå âèðóñà ìûøèíîãî
ãåïàòèòà. Íà îñíîâàíèè ýòîãî ïîëàãàþò, ÷òî öèòîïàòè÷åñêîå
äåéñòâèå âèðóñîâ ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ ïîâðåæäåíèåì
ëèçîñîìàëüíîé ìåìáðàíû [162]. Â öåëîì, ïî ìíåíèþ Înî ñ ñîàâò.
[87], óðîâåíü àêòèâíîñòè ëèçîñîìàëüíûõ ôåðìåíòîâ â öèòîçîëå
êëåòêè îïðåäåëÿåò ñòåïåíü ïîâðåæäåíèÿ åå ìåìáðàíû.
Àêòèâàöèÿ
ëèçîñîìàëüíûõ
ôåðìåíòîâ,
ñâÿçàííàÿ
ñ
ðàçðóøàþùèì äåéñòâèåì æåë÷íûõ êèñëîò íà ìåìáðàíû ëèçîñîì,
îòìå÷åíà ïðè õîëåñòàçå, ÷òî è îáóñëàâëèâàåò íåêðîòè÷åñêèå
èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ ïðè ýòîì çàáîëåâàíèè [163].
Ëàáèëèçàòîðàìè ëèçîñîì ìîãóò áûòü èîíû Ñà2+, Mg2+, K+, âèòàìèíû
À è Å, ôîñôîëèïàçà, ïðîãåñòåðîí, òåñòîñòåðîí è äð. [164], à òàêæå
ïðîäóêòû ÏÎË [130, 165]. Âûñâîáîæäåíèå è àêòèâàöèÿ êèñëûõ
ëèïàç è ôîñôîëèïàç èç ïîâðåæäåííûõ ëèçîñîì, ïðèâîäèò, â èòîãå, ê
ôåðìåíòàòèâíîìó ãèäðîëèçó âíóòðèêëåòî÷íûõ êîìïîíåíòîâ,
âêëþ÷àÿ íóêëåîïðîòåèíû, ãëèêîãåí è ñîäåðæèìîå ÿäðà.
Âàæíûì çâåíîì â ìåõàíèçìå ïîâðåæäåíèÿ áèîëîãè÷åñêèõ
ìåìáðàí ÿâëÿåòñÿ ãèäðîëèç ôîñôîëèïèäîâ, ñâÿçàííûé ñ
àêòèâàöèåé ôîñôîëèïàç, îñîáåííî ÐLA2, îòùåïëÿþùèõ æèðíóþ
êèñëîòó ôîñôîëèïèäîâ â sn-2 ïîëîæåíèè [75] (ñì. ãëàâó 1).
Îáðàçóþùèåñÿ ïðè äåéñòâèè ýíäîãåííûõ ôîñôîëèïàç À ëèçîÔË
õîðîøî ðàñòâîðèìû â âîäíîé ôàçå è ïðè êîíöåíòðàöèÿõ âûøå 0,1%
îò îáùåé ñóììû ÔË îêàçûâàþò ìåìáðàíîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå. Êàê
óæå îòìå÷àëîñü, ëèçîÔË, îáëàäàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè,
íàðóøàþò óïîðÿäî÷åííóþ ñòðóêòóðó ìåìáðàíû, îáðàçóÿ â íåé
ðûõëûå ó÷àñòêè, âûçûâàþò ïîÿâëåíèå "äûðîê" â ìåìáðàíàõ è
äàëüíåéøèé èõ ðàçðûâ. Â ïðèñóòñòâèè ëèçîÔË ìåìáðàíû
ñòàíîâÿòñÿ óòîëùåííûìè, ãèäðàòèðîâàííûìè, à èõ ïðîíèöàåìîñòü
äëÿ ðàçëè÷íûõ âåùåñòâ ðåçêî âîçðàñòàåò. Òàê, ïðè ãèïîêñèè â
ðåçóëüòàòå íàêîïëåíèÿ ëèçîÔË íàáóõàþò ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé,
143
íàðóøàåòñÿ èõ ôóíêöèîíàëüíàÿ àêòèâíîñòü è ñïîñîáíîñòü
àêêóìóëèðîâàòü êàëüöèé, ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ìàêðîýíåðãåòè÷åñêèõ
ôîñôàòîâ.
ËèçîÔÕ
ïðåïÿòñòâóåò
àêêóìóëÿöèè
Ñà2+
ñàðêîïëàçìàòè÷åñêèì ðåòèêóëóìîì, è çà ñ÷åò ïîâûøåíèÿ
ïðîíèöàåìîñòè ïðîèñõîäèò âûñâîáîæäåíèå åãî èç âåçèêóë.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ, â çàâèñèìîñòè îò íóêëåîòèäíîé
ïîñëåäîâàòåëüíîñòè êîäèðóþùèõ ãåíîâ, ðàçëè÷àþò êàê ìèíèìóì
10 ãðóïï ÐLA2 (I-X), îäíàêî ïîêà ÷àùå èñïîëüçóåòñÿ
ïðåäøåñòâóþùàÿ êëàññèôèêàöèÿ, îñíîâàííàÿ íà ëîêàëèçàöèè PLA2
â êëåòêå è åå ïîòðåáíîñòè äëÿ ïðîÿâëåíèÿ êàòàëèòè÷åñêîé
àêòèâíîñòè â Ñà2+. Òàê, ðàçëè÷àþò: (à) ôîñôîëèïàçó, ñåêðåòèðóåìóþ
èç êëåòîê èëè ñåêðåòîðíóþ (sPLA2), c ìàññîé 14-18 êÄ, (á)
öèòîçîëüíóþ Ñà2+-çàâèñèìóþ (ñPLA2, 85-100 êÄ) è (â) öèòîçîëüíóþ
Ñà2+-íåçàâèñèìóþ (iPLA2, 29-85 êÄ). Èçîôîðìû sPLA2 òðåáóþò äëÿ
ïðîÿâëåíèÿ àêòèâíîñòè ìèëëèìîëÿðíûõ êîíöåíòðàöèé Ñà2+ è íå
ïðîÿâëÿþò ñïåöèôè÷íîñòè ê îòùåïëÿåìîé æèðíîé êèñëîòå; ñPLA2
ïðèñóòñòâóþò â öèòîçîëå, òðåáóþò ìèêðîìîëÿðíîãî óðîâíÿ Ñà2+
äëÿ òðàíñëîêàöèè ê ìåìáðàííûì ÔË è ñåëåêòèâíû ê ÔË ñ
àðàõèäîíîâîé êèñëîòîé. iPLA2 ëîêàëèçîâàíû êàê â öèòîçîëå, òàê è
â ìåìáðàííûõ ôðàêöèÿõ. Àêòèâíîñòü sPLA2, è ñPLA2
êîíòðîëèðóåòñÿ àíèîííûìè ÔË ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû [166].
Äëÿ iPLA2 ïîêàçàíî íåñêîëüêî âàðèàíòîâ ãåíà, ïðèâîäÿùèõ ê
ýêñïðåññèè äâóõ èçîôîðì. Ñïîñîáíîñòü âñåõ PLA2 âûñâîáîæäàòü
àðàõèäîíîâóþ êèñëîòó (ñóáñòðàò äëÿ ïðîñòàãëàíäèí Í-ñèíòàçû)
îáóñëàâëèâàåò èõ ó÷àñòèå â ïðîöåññàõ âîñïàëåíèÿ.
 ïîñëåäíèå ãîäû ïîêàçàíî, ÷òî èçîôîðìû PLA2 ÿâëÿþòñÿ
ìîäóëÿòîðàìè
êëåòî÷íûõ
ïîâðåæäåíèé,
âûçâàííûõ
èøåìèåé/ðåïåðôóçèåé, îêñèäàíòàìè, ëåêàðñòâàìè è òîêñèêàíòàìè.
Ðîëü PLA2 â àïîïòîçå è íåêðîçå çàâèñèò îò èçîôîðìû PLA2, òèïà
êëåòêè è õàðàêòåðà ïîâðåæäàþùåãî ñòèìóëà.
Ìíîãîëåòíèå èññëåäîâàíèÿ ðîëè ôîñôîëèïàçû A2 â
ïîâðåæäåíèè êëåòîê ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü ìåõàíèçì, ñîãëàñíî
êîòîðîìó
ïðè
ïîâðåæäåíèè
óâåëè÷èâàåòñÿ
ãèäðîëèç
ôîñôîëèïèäîâ ñ ïîìîùüþ PLA2, ÷òî ïðèâîäèò ê ïîâûøåíèþ
ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí è âûçûâàåò êëåòî÷íûé ëèçèñ.
Ïðàâîìî÷íîñòü òàêîãî ìåõàíèçìà áûëà ïîêàçàíà ñ èñïîëüçîâàíèåì
èíãèáèòîðîâ PLA2 [167]. Îäíàêî, â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî â òî âðåìÿ
ìíîãî÷èñëåííûå èçîôîðìû PLA2 íå áûëè èçâåñòíû,
èñïîëüçîâàííûå èíãèáèòîðû íå îòëè÷àëèñü ñïåöèôè÷íîñòüþ.
Ïîýòîìó ðÿä ïðåæíèõ ïîëîæåíèé â ïîñëåäíèå ãîäû áûë
ïåðåñìîòðåí [75]. Íàïðèìåð, ôòîð-ñîäåðæàùèé èíãèáèòîð ñPLA2
(è âûõîäà àðàõèäîíîâîé êèñëîòû) íå èíãèáèðîâàë sPLA2 è iPLA2 â
ïî÷å÷íûõ êëåòêàõ. Òîëüêî ñ èñïîëüçîâàíèåì êîìïëåêñà
144
èíãèáèòîðîâ è ìîíèòîðèíãà àêòèâíîñòè PLA2 áûëî ïîêàçàíî
ó÷àñòèå ñPLA2 â íåêðîòè÷åñêîì ïîâðåæäåíèè ("îíêîçå" [168]) ýòîãî
òèïà êëåòîê [169]. Ïîëàãàþò, ÷òî èìåííî ñPLÀ2, îñîáåííî â
ñî÷åòàíèè
ñ
ÀÔÊ,
îêàçûâàåò
ñóùåñòâåííîå
ìåìáðàíîïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ïðè íåêðîçå è àïîïòîçå [170].
Ñ÷èòàþò, ÷òî â ýòèõ ïðîöåññàõ êëþ÷åâóþ ðîëü èãðàåò ïîâûøåíèå
óðîâíÿ öèòîçîëüíîãî Ñà2+ è, ñîîòâåòñòâåííî, ñâÿçûâàíèå åãî ñ Ñà2+ëèïèä-ñâÿçûâàþùèì
äîìåíîì
ñPLA2,
÷òî
èíèöèèðóåò
òðàíñëîêàöèþ ôåðìåíòà ê âíóòðèêëåòî÷íûì ìåìáðàíàì.
Ïî ìíåíèþ Ñummings c ñîàâò. [75], âîçìîæíîñòü
ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ PLA2 îïðåäåëÿåòñÿ ëîêàëèçàöèåé è
òèïîì ìåìáðàííûõ ÔË, èçîôîðìàìè PLA2 è õàðàêòåðîì
ïîâðåæäàþùèõ ñòèìóëîâ. Òàê, ïîâðåæäåíèÿ, âûçûâàåìûå Í2Î2 èëè
äðóãèìè òîêñèêàíòàìè, óñèëèâàþòñÿ áëàãîäàðÿ äåéñòâèþ ñPLA2, è
â ýòîì ýôôåêòå ñóùåñòâåííàÿ ðîëü ïðèíàäëåæèò èîíàì Ñà2+.
Ðåçóëüòàòîì äåéñòâèÿ PLA2 íà ëèïèäû áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí
ÿâëÿåòñÿ âûñâîáîæäåíèå íåíàñûùåííûõ ÆÊ, â òîì ÷èñëå
àðàõèäîíîâîé. Ïîñëåäíÿÿ ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì öèêëîîêñèãåíàçû,
ïîä äåéñòâèåì êîòîðîé ïðîèñõîäèò îáðàçîâàíèå â îðãàíèçìå
ýéêîçàíîèäîâ (ïðîñòàãëàíäèíîâ, òðîìáîêñàíîâ, ïðîñòàöèêëèíîâ).
Ïîä âëèÿíèåì äðóãîãî ôåðìåíòà - 5-ëèïîêñèãåíàçû, àðàõèäîíîâàÿ
êèñëîòà ïðåâðàùàåòñÿ â ëåéêîòðèåíû, êîòîðûå ðåãóëèðóþò
ñîñóäèñòóþ ïðîíèöàåìîñòü è ÿâëÿþòñÿ õèìèîàòðàêòàíòàìè
íåéòðîôèëîâ.
Îêàçàëîñü, ÷òî â ìåìáðàíàõ äåéñòâèþ sPLA2 ïîäâåðãàþòñÿ
ñïåöèôè÷åñêèå ÔË. Íàïðèìåð, öèòîëèòè÷åñêèé ýôôåêò
ðåêîìáèíàíòíûõ sPLA2 ÷åëîâåêà è sPLA2 èç çìåèíîãî ÿäà ïî
îòíîøåíèþ ê ýðèòðîöèòàì ÷åëîâåêà, ýðèòðîëåéêåìè÷åñêèì è U937
êëåòêàì âîçðàñòàåò â ïðèñóòñòâèè ýêçîãåííûõ ëèïîñîìàëüíûõ ÔË
(ÔÕ è ÔÝ). [171]. Ïðè ýòîì öèòîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå sPLA2
÷åëîâåêà ïðîÿâëÿëîñü òîëüêî â ïðèñóòñòâèè ÔÝ. Ïîëàãàþò, ÷òî
òàêàÿ ñïåöèôè÷íîñòü sPLA2 ñâÿçàíà ñ ïîâûøåíèåì òðàíñïîðòà
îêèñëåííûõ ÔË ïðè ïîâðåæäåíèè ê íàðóæíîé ñòîðîíå ìåìáðàíû,
÷òî äåëàåò èõ áîëåå äîñòóïíûìè äëÿ ôåðìåíòà.
Ïîêàçàíî, ÷òî sPLÀ2 âûñâîáîæäàåòñÿ èç êëåòîê ïðè ðÿäå
âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ è îáíàðóæèâàåòñÿ â ïëàçìå êðîâè âî
ôðàêöèÿõ ëèïîïðîòåèíîâ [172]. Ñåêðåòîðíàÿ PLÀ2 ðàñùåïëÿåò â
îñíîâíîì îêèñëåííûå ÔË è èãðàåò òåì ñàìûì àíòèîêñèäàíòíóþ
ñêýâåíäæåðíóþ ðîëü [173]. Ñóáñòðàòîì åå ÿâëÿåòñÿ, â îñíîâíîì,
ôàêòîð àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ (ÔÀÒ, PAF) è ðîäñòâåííûå åìó ïî
ñòðîåíèþ ñîåäèíåíèÿ ôîñôîëèïèäíîé ïðèðîäû, ïðåäñòàâëÿþùèå
ñîáîé ïðîäóêòû êàê îêèñëèòåëüíîãî, òàê è ÷àñòè÷íîãî
ýíçèìàòè÷åñêîãî ðàñùåïëåíèÿ ÔË. Ýòî áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûå
145
ñîåäèíåíèÿ (áîëåå 150), ÷ðåçâû÷àéíî òîêñè÷íûå (LD50 äëÿ êðîëèêà
- 0,005 ìã/êã; äëÿ ñîáàêè - 0,07 ìã/êã), âûçûâàþùèå ïðè
âíóòðèâåííîì ââåäåíèè øîêîïîäîáíîå ñîñòîÿíèå (îñòðûé,
íåêóïèðóåìûé êîëëàïñ, áðîíõîñïàçì è äð.). Â íîðìå íàêîïëåíèþ
ýòèõ ñîåäèíåíèé â îðãàíèçìå è ïðåïÿòñòâóåò sPLÀ2.
Èçó÷åíèå ðîëè PLA2 â ðàçâèòèè ïðîöåññîâ àïîïòîçà êëåòêè
ïîêàçàëî, ÷òî ëèçîÔÕ, îáðàçóþùèéñÿ â ðåçóëüòàòå ãèäðîëèçà ÔË
ìåìáðàíû iPLA2, ÿâëÿåòñÿ õåìîòàêñè÷åñêèì ìåññåíäæåðîì äëÿ
ìàêðîôàãîâ. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ëèçîÔÕ âûñâîáîæäàåòñÿ èç ìíîãèõ
âèäîâ àïîïòîçíûõ êëåòîê ñ ïîìîùüþ Ñà2+-íåçàâèñèìîé iPLA2,
àêòèâèðîâàííîé êàñïàçîé-3 [174].
 öåëîì, ñðåäè îòìå÷åííûõ âûøå ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ
ìåìáðàí â ïðîöåññàõ ðàçâèâàþùåãîñÿ àïîïòîçà èëè íåêðîçà êëåòîê
êëþ÷åâûìè ÿâëÿþòñÿ ÏÎË, óâåëè÷åíèå ïðîíèöàåìîñòè
ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ, àêòèâàöèÿ ôîñôîëèïàç è ëèçîñîìàëüíûõ
ãèäðîëàç.  çàâèñèìîñòè îò ðÿäà ôàêòîðîâ, â òîì ÷èñëå è îò ôîðìû
êëåòî÷íîé ãèáåëè, îäèí èç ýòèõ ïðîöåññîâ ñòàíîâèòñÿ îñíîâíûì,
èíäóöèðóþùèì ðàçâèòèå îñòàëüíûõ.
4.4.4. Ìåõààíèçìû
ïîâðåæäåíèé.
çààùèòû
êëåòîê
îò
îêèñëèòåëüíûõ
Ïðè íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ ìåõàíèçìû àíòèîêñèäàíòíîé
çàùèòû ñîçäàþò óñòîé÷èâîå ñòàöèîíàðíîå ñîñòîÿíèå ñ ñèñòåìàìè,
ïðîäóöèðóþùèìè àêòèâíûé êèñëîðîä. Ñèñòåìà ýíçèìàòè÷åñêèõ
ìåõàíèçìîâ çàùèòû êëåòêè îò îêèñëèòåëüíûõ ïîâðåæäåíèé
âêëþ÷àåò: ñóïåðîêñèääèñìóòàçó, êàòàëàçó, ãëóòàòèîí-çàâèñèìûå
ôåðìåíòû [8, 133, 134]. Èìåþòñÿ äàííûå î âîçìîæíûõ äðóãèõ
ìåõàíèçìàõ çàùèòû îò èçáûòî÷íîãî ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ. Òàê,
áûëî ïîêàçàíî, ÷òî â òðîìáîöèòàõ ïðèñóòñòâèå ïëàçìàëîãåíîâ (â
ìîëåêóëàõ êîòîðûõ âìåñòî æèðíûõ êèñëîò ïðèñóòñòâóåò
óãëåâîäîðîäíàÿ öåïü ñ êåòîíîâîé ãðóïïîé), çàùèùàåò îñòàëüíûå
ÔË îò îêèñëåíèÿ. Ïîñëå èõ óäàëåíèÿ ÔË àêòèâíåå ïîäâåðãàþòñÿ
îêèñëåíèþ [175]. Â äðóãîé ðàáîòå [176] áûëà ïîêàçàíà âàæíàÿ ðîëü
ïåðîêñèäàçû è ôîñôîëèïàçû â ðåïàðàöèè îêèñëèòåëüíî
ïîâðåæäåííûõ ôîñôîëèïèäîâ áèîìåìáðàí. Àâòîðû îêèñëÿëè ÔË
ïå÷åíè êðûñû êàê â ãîìîãåíàòå òêàíè, òàê è â ëèïîñîìàõ,
ïðèãîòîâëåííûõ èç ýêñòðàãèðîâàííûõ ëèïèäîâ, è àíàëèçèðîâàëè ñ
ïîìîùüþ ÂÝÆÕ îáðàçóþùèåñÿ ãèäðîïåðåêèñè ÔÕ è ÔÝ. Ïðè
îêèñëåíèè ãîìîãåíàòà òêàíè íàáëþäàëè îáðàçîâàíèå îêèñëåííûõ
ñâîáîäíûõ æèðíûõ êèñëîò, îòñóòñòâóþùèõ ïðè îêèñëåíèè
ëèïîñîì, ÷òî óêàçûâàåò íà äåéñòâèå òêàíåâûõ ôîñôîëèïàç. Åñëè ê
ãîìîãåíàòó äîáàâëÿëè ýêçîãåííûé îêèñëåííûé ÔÕ, òî
ñîäåðæàùèåñÿ â íåì ïåðåêèñíûå ãðóïïû âîññòàíàâëèâàëèñü ñ
146
îáðàçîâàíèåì îêñè-ÔÕ, ñ ïîñëåäóþùèì ãèäðîëèçîì äî ñâîáîäíûõ
æèðíûõ îêñèêèñëîò. Òî åñòü, ïðèñóòñòâóþùèå â òêàíè ôåðìåíòû
"î÷èùàþò" ìîëåêóëó ÔË îò îêèñëåííûõ æèðíûõ êèñëîò.
Îñíîâíîé àíòèîêñèäàíòíûé ôåðìåíò, ñóïåðîêñèääèñìóòàçà,
êàòàëèçèðóåò ðåàêöèþ âçàèìîäåéñòâèÿ (äèñìóòàöèè) äâóõ
ñóïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ ñ îáðàçîâàíèåì ïåðåêèñè âîäîðîäà è
ìîëåêóëÿðíîãî êèñëîðîäà [133, 134]. Â äåòîêñèêàöèè LÎÎÍ
ó÷àñòâóþò òðè âíóòðèêëåòî÷íûõ ãëóòàòèîí-ñîäåðæàùèõ ôåðìåíòà
- ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçà, ÔË-ïåðîêñèä-ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçà è
ñåëåí-íåñîäåðæàùàÿ ãëóòàòèîí-SH-S-òðàíñôåðàçà òèï α,
îñóùåñòâëÿþùèå äâóõýëåêòðîííîå âîññòàíîâëåíèå LÎÎÍ [133].
Äëÿ ãèäðîïåðåêèñåé ÔË (LÎÎÍ) óäàëåíèå ìîæåò âêëþ÷àòü: (1)
ïîñëåäîâàòåëüíîå äåéñòâèå ïåðîêñèä/Ñà2+-ñòèìóëèðóåìîé PLA2 è
ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçû ïî ñõåìå "ãèäðîëèç - âîññòàíîâëåíèå ðåïàðàöèÿ", èëè (2) ïîñëåäîâàòåëüíîå äåéñòâèå ÔË-ïåðîêñèäãëóòàòèîíïåðîêñèäàç è ôîñôîëèïàçû À2, (ò.å. "âîññòàíîâëåíèå ãèäðîëèç - ðåïàðàöèÿ"), ÷òî â îáîèõ ñëó÷àÿõ ïðèâîäèò ê
ðåàöèëèðîâàíèþ îáðàçóþùèõñÿ ëèçîÔË. Â óñëîâèÿõ äèñáàëàíñà
ìåæäó ýíäîãåííûìè îêñèäàíòàìè è àíòèîêñèäàíòàìè âîçìîæíî
èçáûòî÷íîå îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ êèñëîðîäíûõ ìåòàáîëèòîâ,
êîòîðîå îïðåäåëÿþò êàê îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ [134, 177].
 ïîñëåäíèå ãîäû âûçûâàåò çíà÷èòåëüíûé èíòåðåñ
îêèñëèòåëüíî-ñòðåññîðíûé
ñèãíàëèíã,
êîòîðûé
ìîæåò
ñîïðîâîæäàòü ÏÎË è äîñòèãàòü êóëüìèíàöèè ïðè àïîïòîçå. Òàê
ïîêàçàíî, ÷òî ýêçî- èëè ýíäîãåííûå ïåðîêñèäû ìîãóò çàïóñêàòü
àïîïòîòè÷åñêèé êàñêàä â ëåéêåìè÷åñêèõ êëåòêàõ [133]. Ñóäüáà
êëåòêè ïîñëå âîçäåéñòâèÿ íà íåå îêñèäàíòîâ ñ âûçâàííûìè èìè
ïîâðåæäåíèÿìè ìåìáðàí, ìîæåò áûòü äâîÿêîé: âûæèâàíèå èëè
ãèáåëü ÷åðåç àïîïòîç èëè íåêðîç. Ïî ìíåíèþ Girotti [133], ýòî
îïðåäåëÿåòñÿ ñòåïåíüþ îêèñëèòåëüíûõ ïîâðåæäåíèé. Âî ìíîãèõ
ðàáîòàõ ïîêàçàíî, ÷òî æèâîòíûå êëåòêè â îòâåò íà óãðîæàþùèé
óðîâåíü îêñèäàíòîâ ñïîñîáíû ïîñðåäñòâîì ñèãíàëèíãà
ïðîäóöèðîâàòü èçáûòîê àíòèîêñèäàíòîâ è àêòèâèðîâàòü
ôåðìåíòíûå çàùèòíûå ñèñòåìû - âîññòàíîâëåííûé ãëóòàòèîí
(GSH), ãëóòàòèîíïåðîêñèäàçó, êàòàëàçó, ñóïåðîêñèääèñìóòàçó,
ãåìîêñèãåíàçó-1, ôåððèòèí è äð.[106, 133, 178].
Ïîêàçàíî, ÷òî îêñèäàíò-èíäóöèðîâàííûé ñèãíàëèíã [178]
ñòèìóëèðóåò ýêñïðåññèþ ãåíîâ, ñâÿçàííûõ ñ öèòîïðîòåêöèåé,
àïîïòîçîì èëè äðóãèìè êëåòî÷íûìè îòâåòàìè, ïðè÷åì â ýòîì
ñèãíàëèíãå âàæíóþ ðîëü èãðàåò àêòèâàöèÿ íåêîòîðûõ
ïðîòåèíêèíàç è ôîñôîëèïàç. Òàê, îòìå÷àþò îñîáóþ ðîëü â ýòèõ
ïðîöåññàõ ïðîòåèíêèíàçû Ñ, ÌÀÐÊ è ãèäðîëàç - ôîñôîëèïàçû Ñ
(PLC) è àêòèâèðóåìîé Ñà2+ PLÀ2. Ïîëó÷åíû äàííûå â ïîëüçó òîãî,
147
÷òî íåêîòîðûå LÎÎÍ ÿâëÿþòñÿ ðàííèìè èíòåðìåäèàòàìè â
ñòèìóëÿöèè ýòèõ ïóòåé, è ÷òî îíè ìîãóò áûòü "ìèìåòèêàìè"
ýôôåêòîâ íåêîòîðûõ ôàêòîðîâ ðîñòà, (íàïðèìåð TNF-α), öèòîêèíîâ
èëè äðóãèõ ïðèðîäíûõ àãîíèñòîâ. Âñå ýòè ôàêòû âûçâàëè èíòåðåñ
èññëåäîâàòåëåé ê îêñèäàíòíûì ïðîèçâîäíûì êàê âîçìîæíûì
âòîðè÷íûì ìåññåíäæåðàì [179]. Îêñèäàíòíàÿ àêòèâàöèÿ PLÀ2
÷åðåç âûñâîáîæäåíèå àðàõèäîíîâîé êèñëîòû èíèöèèðóåò
îáðàçîâàíèå ýéêîçàíîèäíûõ ëèïèäíûõ ìåäèàòîðîâ, à òàêæå
ëèçîÔË. Ïîñëåäíèå ìîãóò ïðîÿâëÿòü ïðÿìûå ýôôåêòû èëè
ìåòàáîëèçèðîâàòüñÿ äî PAF è äðóãèõ ýôôåêòîðîâ.
Èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ PLÀ2 íà ìåìáðàííûå ôîñôîëèïèäû
ïîêàçàëè, ÷òî ãèäðîëèòè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ýòèõ ôåðìåíòîâ
âîçðàñòàëà êàê ôóíêöèÿ ñîäåðæàíèÿ ïåðîêñèäîâ ÔË â ìåìáðàíå.
Äàííûé ýôôåêò, íàáëþäàâøèéñÿ è â ýêñïåðèìåíòàõ ñ ëèïîñîìàìè,
ñîäåðæàùèìè îêèñëåííûå ÔË, îáúÿñíÿëè èçìåíåíèÿìè óïàêîâêè
ÔË, îäíîâðåìåííî ñ óâåëè÷åíèåì ñâÿçûâàíèÿ Ñà2+. Àâòîðû
ïîä÷åðêèâàþò, ÷òî ñêîðîñòü ãèäðîëèçà îêèñëåííûõ ÔË
çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàëà ñêîðîñòü ãèäðîëèçà íåîêèñëåííûõ ÔË, ÷òî
ïðèâîäèëî ê áîëåå áûñòðîìó âûñâîáîæäåíèþ îêèñëåííûõ ÆÊ
[180]. Âîçìîæåí è äðóãîé ìåõàíèçì àêòèâàöèè, êîòîðûé îòíîñèòñÿ
òîëüêî ê cPLA2, äåéñòâóþùåé ïðåäïî÷òèòåëüíî íà àðàõèäîíîèëÔË,
è
âêëþ÷àåò
êàòàëèçèðóåìîå
ïðîòåèíêèíàçîé
Ñ
ôîñôîðèëèðîâàíèå ôåðìåíòà è åãî òðàíñëîêàöèþ ê ìåìáðàíå
[181]. Â ýòîì ìåõàíèçìå ìåìáðàííûå îêèñëåííûå ÔË àêòèâèðóþò
ïðîòåèíêèíàçó
Ñ,
÷òî,
â
ñâîþ
î÷åðåäü,
âûçûâàåò
ôîñôîðèëèðîâàíèå/àêòèâàöèþ cPLA2 â êëåòêàõ, âîçìîæíî ÷åðåç
àêòèâàöèþ ÌÀÐÊ [181, 182]. Ýòîò ìåõàíèçì, â îòëè÷èå îò ïåðâîãî,
ìåíåå çàâèñèì îò Ñà2+, è, ñëåäîâàòåëüíî, ìîæåò âêëþ÷àòüñÿ ïðè
îòíîñèòåëüíî íèçêîì óðîâíå ÏÎË, ò.å. äî òîãî, êàê íà÷èíàåòñÿ
ñóùåñòâåííîå íàêîïëåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî Ñà2+.
Ñîïðÿæåíèå
ïåðåêèñíîãî
îêèñëåíèÿ
ìåìáðàííûõ
ôîñôîëèïèäîâ ñ ðàçëè÷íûìè ñïåöèôè÷åñêèìè íàðóøåíèÿìè
ìåòàáîëèçìà â êëåòêå ïðè ìíîãèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ íå
âûçûâàåò ñîìíåíèé.
4.5. Èçìåíåíèÿ ñîñòàâà ìåìáðàííûõ ëèïèäîâ òêàíåé
ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ.
Çíà÷èìîñòü ìåìáðàííûõ èçìåíåíèé äëÿ êëåòêè è îðãàíèçìà â
öåëîì ïîäòâåðæäàåòñÿ îáøèðíûì ôàêòîëîãè÷åñêèì ìàòåðèàëîì îá
èçìåíåíèè ñîñòàâà ÔË ìåìáðàí ðÿäà êëåòîê è òêàíåé ïðè
ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãèÿõ. Íå âñåãäà ÿñíî, êàê ýòè èçìåíåíèÿ ñâÿçàíû
ñ ïàòîãåíåçîì áîëåçíè, ÿâëÿþòñÿ ëè îíè ïðè÷èíîé èëè, íàîáîðîò,
ïðîÿâëåíèåì êàêîãî-ëèáî èç åå ïîñëåäñòâèé. Íàïðèìåð, ñíèæåíèå
148
àêòèâíîñòè ôîñôîëèïàçû À2 â ìîçãå ÷åëîâåêà ïðè áîëåçíè
Àëüöãåéìåðà ðàññìàòðèâàþò êàê íåîáõîäèìûå êîìïåíñàòîðíûå
èçìåíåíèÿ, ñíèæàþùèå ñêîðîñòü ïîòåðè ÔË [183]. Íàáëþäàåìîå
ïðè ýòîì âîçðàñòàíèå êîëè÷åñòâà ãëèöåðîôîñôîðèëõîëèíà è
óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè ëèçîôîñôîëèïèä-àöèëòðàíñôåðàçû
ñâÿçûâàþò ñ èçìåíåíèåì ìåòàáîëèçìà õîëèí-ñîäåðæàùèõ ÔË ñ
ó÷àñòèåì àìèëîèäíûõ ïåïòèäîâ [184]. Ïðè èçó÷åíèè ëèïèäîâ
ìîçãà ó áîëüíûõ øèçîôðåíèåé èëè èõ ïîòîìêîâ íàáëþäàëè
ñíèæåíèå óðîâíÿ ôîñôîìîíîýôèðîâ - ìåòàáîëèòîâ ñèíòåçà ÔË. Èõ
óðîâåíü ìîæåò óêàçûâàòü íà ðèñê ðàçâèòèÿ øèçîôðåíèè [185, 186].
Ïðè ýòîì çàáîëåâàíèè îòìå÷àþò òàêæå èçìåíåíèå ñîñòàâà
ïîëèíåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ÔË ìîçãà, òàêèõ êàê 20:4, 20:5
è 22:6 [187].
Èçó÷àÿ ñâîéñòâà ìåìáðàíû íåéðîíà ïðè ðàçëè÷íûõ
çàáîëåâàíèÿõ ìîçãà, Haag [188] ïðèøåë ê âûâîäó, ÷òî
æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ ìåìáðàííûõ ÔË è àêòèâíîñòü PLÀ2 èìåþò
ïåðâîñòåïåííîå çíà÷åíèå â ðàçâèòèè äèñôóíêöèè íåéðîíîâ.
Ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì àòåðîñêëåðîçå ó êðîëèêîâ,
èøåìè÷åñêîé áîëåçíè ñåðäöà è öèððîçå ïå÷åíè ó ÷åëîâåêà
ïîêàçàíî âîçðàñòàíèå îòíîøåíèÿ õîëåñòåðèí/ÔË â ìåìáðàíàõ
ýðèòðîöèòîâ, ñîïðîâîæäàåìîå ðåçêèì ñíèæåíèåì àêòèâíîñòè Na+,
K+-ÀÒÔàçû è äåôîðìèðóåìîñòè ýðèòðîöèòà. Ïðè ýòîì ó êðîëèêîâ
íàáëþäàëèñü ïàðàëëåëüíûå èçìåíåíèÿ è â òêàíè àîðòû [189, 190].
Âïîñëåäñòâèè â ìåìáðàíàõ ýðèòðîöèòîâ áîëüíûõ èøåìè÷åñêîé
áîëåçíüþ ñåðäöà áûëî îáíàðóæåíî âîçðàñòàíèå äîëè
ñôèíãîìèåëèíà, ÔÑ, ÔÝ è ëèçîÔÕ, ïðè ñîîòâåòñòâóþùåì
ñíèæåíèè äîëè ÔÕ [191]. Ñíèæåíèå óðîâíÿ ÔÕ (è â ìåíüøåé
ñòåïåíè ÔÝ è ÔÈ) íàáëþäàëè â òêàíÿõ ñåðäöà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ ïðè åãî ïîâðåæäåíèè, âûçâàííîì èøåìèåé ðåïåðôóçèåé [192]. Ïðè ýòîì áûëî îòìå÷åíî, ÷òî â ïîâðåæäåííîì
ìèîêàðäå ñóùåñòâåííî èçìåíÿëñÿ ïðîöåññ "äåàöèëèðîâàíèÿ ðåàöèëèðîâàíèÿ" ÔË.
Ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ ÔË ìåìáðàí ýðèòðîöèòîâ
îáíàðóæåíû ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå. Òàê, ó áîëüíûõ ïîêàçàíî
ïðèñóòñòâèå 9-îêñèëèíîëåâîé êèñëîòû, êàê ïðîäóêòà îêèñëåíèÿ
ìåìáðàííûõ ÔË [193]. Ó òó÷íûõ áîëüíûõ ñ ãèïåðèíñóëèíåìèåé
áåç äèàáåòà êîëè÷åñòâî ìåìáðàííîãî ÑÌ ïîëîæèòåëüíî
êîððåëèðîâàëî ñ óðîâíåì èíñóëèíà ïëàçìû, ÷òî ñîïðîâîæäàëîñü
èçìåíåíèåì âÿçêîñòè ìåìáðàí [194, 195]. Àâòîðû ïðåäïîëîæèëè,
÷òî ìåìáðàííûé ÑÌ ýðèòðîöèòîâ ìîæåò áûòü íåçàâèñèìûì
ïðåäèêòîðîì óðîâíÿ èíñóëèíà.
Åùå îäíèì ïîêàçàòåëåì ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàí ÿâëÿåòñÿ ñòåïåíü
ýêñïîíèðîâàíèÿ ÔÑ íà èõ ïîâåðõíîñòè (ò.å. íàðóøåíèå
149
ìåìáðàííîé àñèììåòðèè) [146]. Ó òó÷íûõ áîëüíûõ ýòîò ïîêàçàòåëü
êîððåëèðîâàë ñ àäãåçèâíîñòüþ ýðèòðîöèòîâ è íàëè÷èåì
âîñïàëèòåëüíûõ ìàðêåðîâ [196].
Ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì ñàõàðíîì äèàáåòå ó êðûñ óñòàíîâëåíî
ñíèæåíèå óðîâíÿ ÔÕ è ÔÑ â ìåìáðàíàõ ÿäåð êëåòîê ïå÷åíè, ÷òî
îáúÿñíÿþò ó÷àñòèåì èíñóëèíà â ðåãóëÿöèè ñîäåðæàíèÿ ÿäåðíûõ
ÔË [197]. Èçìåíåíèÿ ÔË áûëè íàéäåíû è â áðîíõî-àëüâåîëÿðíîé
æèäêîñòè áîëüíûõ, â òîì ÷èñëå äåòåé, ñ ëåãî÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè,
÷òî ñâÿçàíî ñ íàðóøåíèÿìè ïîêðûâàþùåãî àëüâåîëû ëåãî÷íîãî
ñóðôàêòàíòà, ñîñòîÿùåãî â îñíîâíîì èç ÄÏÔÕ. Ïðè ýòîì ó âçðîñëûõ
áîëüíûõ ñ àñòìîé íàáëþäàëè ñíèæåíèå ýòîãî ÔË, êîððåëèðóþùåå ñ
îñëàáëåíèåì ëåãî÷íîé ôóíêöèè [198], à ó äåòåé ñ ëåãî÷íûìè
çàáîëåâàíèÿìè, âêëþ÷àÿ àñòìó è èíôåêöèîííûå çàáîëåâàíèÿ, áûëî
îáíàðóæåíî óâåëè÷åíèå óðîâíÿ (êîíöåíòðàöèè) ÔË, ñ íàêîïëåíèåì
àãðåãàòîâ, ÷òî ñâÿçûâàþò ñ âûõîäîì ðàçðóøåííîãî ìåìáðàííîãî
ìàòåðèàëà èç âîñïàëåííûõ êëåòîê [199].
Ïðè óìåðåííîì ïîòðåáëåíèè àëêîãîëÿ â ìåìáðàíàõ ðÿäà êëåòîê
íàáëþäàëè âîçðàñòàíèå ïîêàçàòåëåé îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà [200],
à ïðè àëêîãîëüíîé àáñòèíåíöèè - ñíèæåíèå èíòåíñèâíîñòè è
âðåìåíè ðåëàêñàöèè ßÌÐ ñèãíàëà ÔË áåëîãî âåùåñòâà ìîçãà,
ðàñöåíèâàåìîå êàê ïðèçíàê ñíèæåíèÿ êîíöåíòðàöèè è
ïîäâèæíîñòè ÔË [201].  òêàíè ìåòàñòàçèðóþùåé êèøå÷íîé
êàðöèíîìû êðûñ íàáëþäàëè âîçðàñòàíèå óðîâíÿ ÔÝ [202], à â
êëåòêàõ ñëèçèñòîé êèøå÷íèêà ÷åëîâåêà ïðè ïåïòè÷åñêîé ÿçâå ñ
èíôèöèðîâàíèåì Helicobacter i., íàîáîðîò, áûëî ïîêàçàíî,
ñíèæåíèå óðîâíÿ ýòîãî ÔË.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ IV
1. Maeshima Y., Makino H. Molecular mechanism of cell injury.
Contrib Nephrol. 2003, 139, 32-43.
2. Paschen W., Doutheil J. Disturbance of endoplasmic reticulum
functions: a key mechanism underlying cell damage? Acta Neurochir
Suppl. 1999, 73, 1-5.
3. Êóöåíêî Ñ. À. Îñíîâû òîêñèêîëîãèè. Ñ-Ï. 2002.
4. Takemura G., Fujiwara H. Role of apoptosis in remodeling after
myocardial infarction. Pharmacol Ther. 2004, 104, 1-16.
5. Arakawa N., Nakamura M., Endo H., Sugawara S., Suzuki T.,
Hiramori K. Brain natriuretic peptide and cardiac rupture after acute
myocardial infarction. Intern Med. 2001, 40, 232-236.
6. Òàðóñîâ Á.Í. Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû áèîëîãè÷åñêîãî
äåéñòâèÿ èîíèçèðóþùèõ èçëó÷åíèé. Óñï ñîâð áèîë. 1957, 44, 171185.
7. Ýììàíóýëü Í.Ì., Ëèï÷èíà Ë.Ï. Ëåéêîç ó ìûøåé è
150
îñîáåííîñòè åãî ðàçâèòèÿ ïðè âîçäåéñòâèè èíãèáèòîðîâ öåïíûõ
ðåàêöèé. Äîêë ÀÍ ÑÑÑÐ. 1958, 121, 141-144.
8. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ
è ôèçè÷åñêèå ñâîéñòâà áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Áèîôèçèêà. 1987,
32, 830-844.
9. MacGregor J.T. The future of regulatory toxicology: impact of the
biotechnology revolution. Toxicol Sci. 2003, 75, 236-248.
10. Wright M.M., Howe A.G., Zaremberg V. Cell membranes and
apoptosis: role of cardiolipin, phosphatidylcholine, and anticancer lipid
analogues. Biochem Cell Biol. 2004, 82, 18-26.
11. Haque M.A., Russell N.J. Strains of Bacillus cereus vary in the
phenotypic adaptation of their membrane lipid composition in response
to low water activity, reduced temperature and growth in rice starch.
Microbiology. 2004, 150, 1397-1404.
12. Brown M.S., Goldstein J.L. The SREBP pathway: regulation of
cholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor. Cell. 1997, 89, 331-340.
13. Worgall T.S., Johnson R.A., Seo T., Gierens H., Deckelbaum R.J.
Unsaturated fatty acid-mediated decreases in sterol regulatory elementmediated gene transcription are linked to cellular sphingolipid metabolism. J Biol Chem. 2002, 277, 3878-3885.
14. Yakovlev A.G., Faden A.I. Mechanisms of neural cell death:
implications for development of neuroprotective treatment strategies.
J.Amer Soc Exper Neuro Therapeutics. 2004, 1, 5-16.
15. Thrall K.D., Vucelick M.E., Gies R.A., Zangar R.C., Weitz K.K.,
Poet T.S., Springer D.L., Grant D.M., Benson J.M. Comparative metabolism of carbon tetrachloride in rats, mice, and hamsters using gas
uptake and PBPK modeling. J Toxicol Environ Health. 2000, 60, 531548.
16. Glucksmann A. Cell death in normal vertebrate ontogeny. Biol
Rev. 1951, 26, 59-86.
17. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological
phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J
Cancer. 1972, 26, 239-257.
18. Yeh E.T.H. Life and death in the cardiovascular system.
Circulation. 1997, 95, 782-786.
19. Bhatia M. Apoptosis versus necrosis in acute pancreatitis. Am J
Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2004, 286, 189-196.
20. Padanilam B.J. Cell death induced by acute renal injury: a perspective on the contributions of apoptosis and necrosis. Am J Physiol
Renal Physiol. 2003, 284, 608-627.
21. Green D.R. Overview: apoptotic signaling pathways in the
immune system. Immunol Rev. 2003, 193, 5-9.
151
22. Ñàìóèëîâ Â.Ô. Áèîõèìèÿ ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé
ñìåðòè (àïîïòîçà) ó æèâîòíûõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé
æóðíàë. 2001, 7, 18-25.
23. Ranganath R.M., Nagashree N.R. Role of programmed cell death
in development. Int Rev Cytol. 2001, 202, 159-242.
24. Ñêóëà÷åâ Â.Ï. Çàêîíû áèîýíåðãåòèêè. Ñîðîñîâñêèé
îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1997, 1, 9-14.
25. Israels L.G., Israels E.D. Apoptosis. Stem Cells. 1999, 17, 306-313.
26. Leist M., Single B., Castoldi A., Kuhnle S., Nicotera P.
Intracellular Adenosine Triphosphate (ATP) concentration: a switch in
the decision between apoptosis and necrosis. J Exp Ved. 1997, 185,
1481-1486.
27. Afford S., Randhawa S. Apoptosis. Mol Pathol. 2000, 53, 55-63.
28. Gompel A., Chaouat M., Hugol D., Forgez P. Steroidal hormones
and proliferation, differentiation and apoptosis in breast cells.
Maturitas. 2004, 49, 16-24.
29. Øèðøåâ Ñ.Â., Êóêëèíà Å.Ì., ßðèëèí À.À. Ðîëü
ðåïðîäóêòèâíûõ ãîðìîíîâ â êîíòðîëå àïîïòîçà Ò-ëèìôîöèòîâ.
Áèîõèìèÿ. 2003, 68, 470-475.
30. Walker A., Ward C., Dransfield I., Haslett C., Rossi A.G.
Regulation of granulocyte apoptosis by hemopoietic growth factors,
cytokines and drugs: potential relevance to allergic inflammation. Curr
Drug Targets Inflamm Allergy. 2003, 2, 339-347.
31. Kharroubi I., Ladriere L., Cardozo A.K., Dogusan Z., Cnop M.,
Eizirik D.L. Free fatty acids and cytokines induce pancreatic beta-cell
apoptosis by different mechanisms: role of nuclear factor-kappaB and
endoplasmic reticulum stress. Endocrinology. 2004, 145, 5087-5096.
32. Kaufmann S.H., Hengartner M.O. Programmed cell death: alive
and well in the new millennium. Trends Cell Biol. 2001, 11, 526-534.
33. Roth W., Reed J.C. FLIP protein and TRAIL-induced apoptosis.
Vitam Horm. 2004, 67, 189-206.
34. MacEwan D.J. TNF ligands and receptors - a matter of life and
death. Brit J Pharmacol. 2002, 135, 855-875.
35. Rudner J., Jendrossek V., Lauber K., Daniel P.T., Wesselborg S.,
Belka C. Type I and type II reactions in TRAIL-induced apoptosis results from dose-response studies. Oncogene. 2005, 24, 130-140.
36. Creagh E.M., Martin S.J. Caspases: cellular demolition experts.
Biochem Soc Trans. 2001, 29, 696-702.
37. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrates and functions during apoptosis. Ann Rev
Biochem. 1999, 68, 383-424.
38. Kruidering M., Schouten T., Evan G.I., Vreugdenhil E. Caspasemediated cleavage of the Ca2+ dependent protein kinase-like kinase
152
facilitates neuronal apoptosis. J Biol Chem. 2001, 276, 38417-38425.
39. Strasser A., O'Konnor L., Dixit V.M. Apoptosis signaling. Ann
Rev Biochem. 2000, 69, 217-245.
40. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within.
Science. 1998, 281, 1312-1316.
41. Tibbetts M.D., Zheng L., Lenardo M.J. The death effector
domain protein family: regulators of cellular homeostasis. Nat Immun.
2003, 4, 404-409.
42. Gruenbaum Y., Goldman R.D., Meyuhaus R., Mills E., Margalit
A., FridkinA., Dayani Y., Prokocimer M., Enosh A. The nuclear lamina
and its functions in the nucleus. Int Rev Cytol. 2003, 226, 1-62.
43. Nagase H., Fukuyama H., Tanaka M., Kawane K., Nagata S.
Mutually regulated expression of caspase-activated DNase and its
inhibitor for apoptotic DNA fragmentation. Cell Death Differ. 2003, 10,
142-143.
44. Goping I.S., Barry M., Liston P., Sawchuk T., Constantinescu G.,
Michalak K.M., Shostak I., Roberts D.L., Hunter A.M., Korneluk R.,
Bleackley R.C. Granzyme B-induced apoptosis requires both direct caspase
activation and relief of caspase inhibition. Immunity. 2003, 18, 355-365.
45. Bortner C.D., Cidlowski J.A. Caspase independent/dependent
regulation of K(+), cell shrinkage, and mitochondrial membrane potential during lymphocyte apoptosis. J Biol Chem. 1999, 274, 21953-21962.
46. Ñêóëà÷åâ Â.Ï. ßâëåíèÿ çàïðîãðàììèðîâàííîé ñìåðòè.
Ìèòîõîíäðèè, êëåòêè è îðãàíû: ðîëü àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà.
Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 2001, 7, 4-10.
47. Desagher S., Martinou J.C. Mitochondria as the central control
point of apoptosis. Trends Cell Biol. 2000, 10, 369-377.
48. Bellamy C.O., Makcomson R.D., Harrison D.J., Wyllie A.H. Cell
death in health and disease: the biology and regulation of apoptosis.
Semin Cancer Biol. 1995, 6, 3-16.
49. Hengartner M.G. The biochemistry of apoptosis. Nature. 2000,
407, 770-775.
50. Boonstra J., Post J.A. Molecular events associated with reactive
oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells. Gene.
2004, 337, 1-13.
51. Villialba J.M., Navas P. Plasma membrane redox system in the control of stress-induced apoptosis. Antiox Redox Signal. 2000, 2, 213-230.
52. Willis S., Day C.L., Hinds M.G., Huang D.C.S. The Bcl-2-regulated
apoptotic pathway. J Cell Science. 2003, 116, 4053-4056.
53. Zha H., Aime-Sempre C., Sato T., Reed J.C. Proapoptotic protein
Bax heterodimerizes with Dcl2 and homodimerizes with Bax via a
novel domain (BH3) distinct from BH1 and BH2. J Biol Chem. 1996,
271, 7440-7444.
153
54. van Loo G., Schotte P., van Gurp M., Demol H., Hoorelbeke B.,
Gevaert K., Rodriguez I., Ruiz-Carrillo A., Vandekerckhove J., Declercq
W., Beyaert R., Vandenabeele P. Endonuclease G: a mitochondrial protein
released in apoptosis and involved in caspase-independent DNA degradation. Cell Death Differ. 2001, 8, 1136-1142.
55. Liang Y., Eid M.A., Lewis R.W., Kumar M.V. Mitochondria from
TRAIL-resistant prostate cancer cells are capable of responding to apoptotic stimuli. Cell Signal. 2005, 17, 243-251.
56. Goonesinghe A., Mundy E.S., Smith M., Khosravi-Far R.,
Martinou J.C., Esposti M.D. Pro-apoptotic Bid induces membrane perturbation by inserting selected lysolipids into the bilayer. Biochem J.
2005, 387, 109-118.
57. Tsujimoto Y. Bcl-2 family of proteins: life-or-death switch in
mitochondria. Biosci Rep. 2002, 22, 47-58.
58. Adams J.M., Cory S. Life or death decisions by the Bcl-2 protein
family. Trends in Biochem Sci. 2001, 26, 61-66.
59. Bernardi P., Scorrano L., Colonna R., Petronilli V., Di Lisa F.
Mitochondria and cell death. Mechanistic aspects and methodological
issues. Eur J Biochem. 1999, 264, 687-701.
60. Szewczyk A., Wojtczak L. Mitochondria as a pharmacological
target. Pharmacol Rev. 2002, 54, 101-127.
61. Kim J.S., Qian T., Lemasters J.J. Mitochondrial permeability
transition in the switch from necrotic to apoptotic cell death in
ischemic rat hepatocytes. Gastroenterology. 2003, 124, 494-503.
62. Lemasters J.J., Qian T., He L., Kim J.S., Elmore S.P., Cascio W.E.,
Brenner D.A. Role of mitochondrial inner membrane permeabilization
in necrotic cell death, apoptosis, and autophagy. Antioxid Redox Signal.
2002, 4, 769-781.
63. Petrolini V., Penzo D., Scorrano L., Bernardi P., Di Lisa F. The
mitochondrial permeability transition, release of cytochrome c and cell
death. Correlation with the duration of pore opening in situ. J Biol
Chem. 2001, 276, 12030-12034.
64. Henry-Mowatt J., Dive C., Martinou J.C., James D. Role of mitochondrial membrane permeabilization in apoptosis and cancer.
Oncogene. 2004, 23, 2850-2860.
65. Sakahira H., Takemura Y., Nagata S. Enzymatic active site of caspase-activated DNase (CAD) and its inhibition. Arch Biochem Biophys.
2001, 388, 91-99.
66. Li L.Y., Luo X., Wang X. Endonuclease G is an apoptotic DNase
when released from mitochondria. Nature. 2001, 412, 95-97.
67. Seluanov A., Gorbunova V., Falcovitz A., Sigal A., Milyavsky M.,
Zurer I., Shohat G., Goldfinger N., Rotter V. Change of the death pathway in senescent human fibroblasts in response to DNA damage is
154
caused by an inability to stabilize p53. Mol Cellular Biol. 2001, 21,
1552-1564.
68. Scoggins C.R., Meszoely I.M., Wada M., Means A.I., Yang L.,
Leach SD. p53-dependent acinar cells apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancrease. Am J Physiol Gastrointest
Liver Physiol. 2000, 279, 827-836.
69. Lain S., Xirodimas D., Lane D.P. Accumulating active p53 in the
nucleus by inhibition of nuclear export: a novel strategy to promote the
p53 tumor suppressor function. Exp Cell Res. 1999, 253, 315-324.
70. Gil J., Esteban M. Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent proteinkinase R (PKR): mechanism of action. Apoptosis. 2000, 5,
107-114.
71. Iordanov M.S., Ryabinina O.P., Schneider P., Magun B.E. Two
mechanisms of caspase 9 processing in double-stranded RNA- and
virus-triggered apoptosis. Apoptosis. 2005, 10, 153-166.
72. Brookes P.S., Yoon Y., Robotham J.L., Anders M.W., Sheu S.S.
Calcium, ATP, and ROS: a mitochondrial love-hate triangle. Am J
Physiol Cell Physiol. 2004, 287, 817-833.
73. Davies A.M., Hershman S., Stabley G.J., Hoek J.B., Peterson J.,
Cahil A. A Ca2+ induced mitochondrial permeability transition causes
complete release of rat liver endonuclease G activity from its exclusive
location within the mitochondrial intermembrane space. Identification
of a novel endo-exonuclease activity residing within the mitochondrial
matrix. Nucleic Acids Res. 2003, 31, 1364-1373.
74. Luchen S., Ussat S., Kronke M., Adam-Klages S. Cleavage of
human cytosolic phospholiase A2 by caspase-1 (ICE) and caspase-8
(FLICE). Biochem Biophys Res Commun. 1998, 253, 92-98.
75. Cumming D.S., Mchowat J., Schnellmann R.G. Phospholipase
À2s in cell injury and death. J Pharmacol Experim Therapeutic. 2000,
294, 793-799.
76. Wissing D., Mouritzen H., Egeblad M., Poirer G.G, Jattela M.
Involvement of caspase-dependent activation of cytosolic phospholipase À2 in tumor necrosis factor-induced apoptosis. Pros Natl Acad Sci
USA. 1997, 94, 5073-5077.
77. Zhao M., Antunes F., Eaton J.W., Brunk U.T. Lysosomal
enzymes promote mitochondrial oxidant production, cytochrome ñ
release sand apoptosis. Eur J Biochem. 2003, 270, 3778-3786.
78. Brunk U.T., Neuzil J., Eaton J.W. Lysosomal involvement in
apoptosis. Redox Report. 2001, 6, 91-97.
79. Salvesen G.S. A lysosomal protease enters the death scene. J Clin
Invest. 2001, 107, 21-22.
80. Ono K., Kim S.O., Han J. Susceptibility of lysosomes to rupture
is a determinant for plasma membrane disruption in tumor necrosis fac155
tor alpha-induced cell death. Mol Cell Biol. 2003, 23, 665-676.
81. Fabisiak J.P., Borisenko G.G., Kagan V.E. Quantitative method of
measuring phosphatidylserine externalization during apoptosis using
electron paramagnetic resonance spectroscopy and annexin-conjugated
iron. Methods Mol Biol. 2005, 291, 457-464.
82. Fadeel B. Plasma membrane alterations during apoptosis: role in
corpse clearance. Antiox Redox Signal. 2004, 6, 269-275.
83. Kagan V.E., Borisenko G.G., Serinkan B.F., Tyurina Y.Y., Tyurin
V.A., Jiang J., Liu S.X., Shvedova A.A., Fablsiak J.P., Uthaisang W.,
Fadeel B. Appetizing rancidity of apoptotic cells for macrophages: oxidation, externalization, and recognition of phosphatidylserine. Am J
Physiol Lunp Cell Mol Physiol. 2003, 285, l-17.
84. Henson P.M., Bratton D.L., Fadok V.A. The phosphatidylserine
receptor: a crucial molecular switch? Nature Rev Mol Cell Biol. 2001, 2,
627-633.
85. Kagan V.E., Borisenko G.G., Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Jiang J.,
Potapovich A., Kini V., Amoscato A.A., Fuji Y. Oxidative lipidomics of
apoptosis: rådox catalytic interactions of cytochrome c with cardiolipin
and phosphatidylserine. Free Rad Biol Med. 2004, 37, 1963-1985.
86. Szabo I., Adams C., Gulbins E. Ion channels and membrane rafts
in apoptosis. Pflugers Arch. 2004, 448, 304-312.
87. Eramo A., Vitani L.R., Sargiacomo M., Peschle, De Maria R.
CD95 signaling is initiated in lipid rafts. The Third European Workshop
on cell death. Salobreca (Spain). 2002, abstr. 8.
88. Gomez-Munoz A., Kong J.Y., Salh B., Steinbrecher U.P.
Ceramide-1-phosphate blocks apoptosis through inhibition of acid
sohingomyelinase in macrophages. J Lipid Res. 2004, 45, 99-105.
89. Hannun Y.A., Obeid L.M. Mechanisms of ceramide-mediated
apoptosis. Adv Exp Med Biol. 1997, 407, 145-149.
90. Cremesti A., Paris F., Grassme H., Holler N., Tschopp J., Fuks Z.,
Gulbins E., Kolesnick R Ceramide enables fas to cap and kill. J Biol
Chem. 2001, 276, 23954-23961.
91. Novgorodov S.A., Szulc Z.M., Luberto C., Jones J.A., Bielawski J.,
Bielawska A., Hannun Y.A., Obeid L.M. Positively charged ceramide is
a potent inducer of mitochondrial permeablization. J Biol Chem. 2005,
280, 16096-16105.
92. Cuvillier O., Nava V.E., Murthy S.K., Edsall L.C., Levade T.,
Milstien S., Spiegel S. Sphingosine generation, cytochrome c release,
and activation of caspase-7 in doxorubicin-induced apoptosis of MCF7
breast adenocarcinoma cells.Cell Death Differ. 2001, 8, 162-171.
93. Payne S.G., Milstein S., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate: dual
messenger functions. FEBS Lett. 2002, 531, 54-57.
94. Spiegel S., Milstein S. Sphingosine-1-phosphate, a key signaling
156
molecule. J Biol Chem. 2002, 277, 25851-25854.
95. Laio K.U., Shelburne J.D., Trump B.F. Observation on cell volume, ultrastructure, mitochondrial conformation and vital-dye uptake
in Ehrlich ascites tumor cells. Effects of inhibiting energy production
and function of the plasma membrane. Am J Pathol. 1971, 65, 203-230.
96. Trump B.F., Goldblatt P.J., Stowell R.E. Studies of necrosis in
vitro of mouse hepatic parenchimal cells. Ultrastructural alterations in
endoplasmatic reticulum, Golgi apparatus, plasma membrane and lipid
droplets. Lab Invest. 1965, 14, 2000-2028.
97. Syntichaki P., Tavernakis N. Death by necrosis. Uncontrollable
catastrophe, or is there order behind the haos? EMBO Reports. 2002, 3,
604-609.
98. Äàí÷åíêî Å.Î. Âëèÿíèå ïðåïàðàòîâ æåë÷íûõ êèñëîò íà
áèîñèíòåç ÄÍÊ, àïîïòîç è íåêðîç ãåïàòîöèòîâ in vitro. Âîïð. ìåä.
õèìèè. 2001, 47, 236-242.
99. Ray S.D., Lam T.S., Rotollo J.A., Phadke S., Patel C.,
Dontabhaktuni A., Mohammad S., Lee H., Strika S., Dobrogowska A.,
Bruculeri C., Chou A., Patel S., Patel R., Manolas T., Stohs S. Oxidative
stress is the master operator of drug and chemically-induced programmed and unprogrammed cell death: Implications of natural antioxidants in vivo. Biofactors. 2004, 21, 223-232.
100. Zeiss Ñ.J. The apoptosis-necrosis continuum: insights from
genetically altered mice. Vet Pathol. 2003, 40, 481-495.
101. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Êàëüöèåâûå íàñîñû æèâîé êëåòêè.
Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 1998, 3, 20-27.
102. Barros L.F., Hermosilla T., Castro J. Necrotic volume increase
and the early physiology of necrosis. Comp Biochem Physiol A Mol
Integr Physiol. 2001, 130, 401-409.
103. Carini R., Bellomo G., Dianzani M.U., Albano E. The operation
of Na+/Ca2+ exchanger prevents intracellular Ca2+ overload and hepatocytes killing following iron-induced lipid peroxidation. Biochem
Biophys Res Commun. 1995, 208, 813-818.
104. Levitsky J., Gurell D., Frishman W.H. Sodium ion/hydrogen
ion exchange inhibition: a new pharmacological approach to myocardial ishemia and reperfusion injury. J. Clin Pharmacol. 1998, 38, 887898.
105. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Íàðóøåíèå áàðüåðíûõ ñâîéñòâ
âíóòðåííåé è íàðóæíîé ìåìáðàí ìèòîõîíäðèé, íåêðîç è àïîïòîç.
Áèîëîãè÷åñêèå ìåìáðàíû. 2002, 19, 356-377.
106. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev. 2001, 82, 47-95.
107. Ermak G., Davies K.J. Calcium and oxidative stress: from cell
signaling to cell death. Mol Immunol. 2002, 38, 713-721.
157
108. Wang K.K. Calpain and caspases: can you tell the difference?
Trends Neurosci. 2000, 23, 20-26.
109. Kim J.S., He L., Qian T., Lemasters J.J. Role of the mitochondrial permeability transition in apoptotic and necrotic death after
ischemia/reperfusion injury to hepatocytes. Curr Mol Med. 2003, 3,
527-535.
110. Ly J.D., Grubb D.R., Lawen A. The mitochondrial membrane
potential (deltapsi(m)) in apoptosis; an update. Apoptosis. 2003, 8, 115128.
111. Dussmann H., Rehm M., Kogel D., Prehn J.H. Outer mitochondrial membrane permeabilization during apoptosis triggers caspase-independent mitochondrial and caspase-dependent plasma membrane potential
depolarization: a single-cell analysis. J Cell Sci. 2003, 116, 525-536.
112. Guo K., Searfoss G., Krolikowski D., Pagnoni M., Franks C.,
Clark K., Yu K.T., Jaye M., Ivashenko Y. Hypoxia induces the expression of the proapoptotic gene BNIP3. Cell Death Differ. 2001, 8, 367376.
113. Yu S.W., Wang H., Poitras M.F., Coombs C., Bowers W.J.,
Fedoroff H.J., Poirier G.G., Dawson T.M., Dawson V.L. Mediation of
poly(ADP-ribose) polymerase-1-dependent cell eath by apoptosis
inducing factor. Science. 2002, 297, 259-263.
114. Pessayre D., Mansouri A., Haouzi D., Fromenty B.
Hepatotoxicity due to mitochondrial dysfunction. Cell Biol Toxicol.
1999, 15, 367-373.
115. Hatano E., Bradham C.A., Stark A., Iimuro Y., Lemasters J.J.,
Brenner D.A. The mitochondrial permeability transition augments Fasinduced apoptosis in mouse hepatocytes. J Biol Chem. 2000, 275, 1181411823.
116. Fosslien Å. Mitochondrial medicine-molecular pathology of
defective oxidative phosphorylation. Ann Clin Lab Sci. 2001, 31, 25-67.
117. Somosy Z. Radiation response of cell organelles. Micron. 2000,
31, 165-181.
118. Rodriguez-Enriquez S., He L., Lemasters J.J. Role of mitochondrial
permeability transition pores in mitochondrial autophagy. Int J Biochem
Cell Biol. 2004, 36, 2463-2472.
119. Copp J., Wiley S., Ward M.W., van der Geer P. Hypertonic
shock inhibits growth factor receptor signaling, induces caspase-3 activation, and causes reversible fragmentation of the mitochondrial network. Am J Physiol Cell Physiol. 2005, 288, 403-415.
120. Davi G., Falco A., Patrono C. Lipid peroxidation in diabetes
mellitus. Antioxid Redox Signal. 2005, 7, 256-268.
121. Asano G., Takashi E., Ishiwata T., Onda M., Yokoyama M.,
Naito Z., Ashraf M., Sugisaki Y. Pathogenesis and protection of
158
ischemia and reperfusion injury in myocardium. J Nippon Med Sch.
2003, 70, 384-392.
122. Lieberthal W., Menza S.A., Levine J.S. Graded ATP depletion
can cause necrosis or apoptosis of cultured mouse proximal tubular
cells. Am J Physiol. 1998, 274, 315-327.
123. Bruemmer-Smith S., Stuber F., Schroeder S. Protective functions of intracellular heat-shock protein (HSP) 70-expression in patients
with severe sepsis. Intensive Care Med. 2001, 27, 1835-1841.
124. De Broe M.E. Apoptosis in acute renal failure. Nephrol Dial
Transplant. 2001, 16, 23-26.
125. Lieberthal W., Levine J.S. Mechanism s of apoptosis and its
potåntial rolå in renal tubular epithelial cell injury. Am J Physiol Renal
Fluid Electrolyte Physiol. 1996, 271, 477-488.
126. Edelstein C.L., Shi Y., Schrier R.W. Role of caspases in hypoxia-induced necrosis of rat renal proximal tubules. J Am Soc Nephrol.
1999, 10, 1940-1949.
127. Vanden Berghe T., van Loo G., Saelens X., Van Gurp M.,
Brouckaert G., Kalai M., Declercq W., Vandenabeele P. Differential signaling to apoptotic and necrotic cell death by Fas-associated death domain
protein FADD. J Biol Chem. 2004, 279, 7925-7933.
128. Wang Y., Li X., Wang L., Ding P., Zhang Y., Han W., Ma D. An
alternative form of paraptosis-like cell death, triggered by TAJ/TROY
and enhanced by PDCD5 overexpression. J Cell Sci. 2004, 117, 15251532.
129. Skulachev V.P. How proapoptotic proteins can escape from
mitochondria? Free Radic Biol Med. 2000, 29, 1056-1059.
130. Âëàäèìèðîâ Þ.À., Àð÷àêîâ À.È. Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå
ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ. Íàóêà, Ì. 1972.
131. Archakov A.I., Bachmanova G.I. Cytochrome P-450 and active
oxygen. Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990.
132. Îñèïîâ À.Í., Àçèçîâà Î.À., Âëàäèìèðîâ Þ.À. Àêòèâíûå
ôîðìû êèñëîðîäà è èõ ðîëü â îðãàíèçìå. Óñïåõè.áèîë.õèìèè. 1990,
31, 180-208.
133. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and
effector action in biological systems. J Lipid Res. 1998, 39, 1529-1542.
134. Çåíêîâ Í.Ê., Ëàíêèí Â.Ç., Ìåíüùèêîâà Å.Á. Îêèñëèòåëüíûé
ñòðåññ. Áèîõèìè÷åñêèé è ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèé àñïåêòû. ÌÀÈÊ,
Íàóêà/Èíòåðïåðèîäèêà, Ì. 2001.
135. Montine T.J., Neely M.D., Quinn J.F., Beal M.F., Markesbery
W.R., Roberts L.J., Morrow J.D. Lipid peroxidation in aging brain and
Alzheimer's disease. Free Radic Biol Med. 2002, 33, 620-626.
136. Spiteller G. Are lipid peroxidation processes induced by changes in
the cell wall structure and how are these processes connected with dis-
159
eases? Med Hypotheses. 2003, 60, 69-83.
137. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíûå ðàäèêàëû â áèîëîãè÷åñêèõ
ñèñòåìàõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. Áèîëîãèÿ. 2000,
12, 13-19.
138. Davies M.J. Singlet oxygen-mediated damage to proteins and its
consequences. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 305, 761-770.
139. Davies M.J. Reactive species formed on proteins exposed to singlet oxygen. Photochem Photobiol Sci. 2004, 3, 17-25.
140. Kim S.Y, Kim E.J., Park J.W. Control of singlet oxygen-induced
oxidative damage in Escherichia coli. J Biochem Mol Biol. 2002, 35,
353-357.
141. Klotz L.O., Kroncke K.D., Sies H. Singlet oxygen-induced signaling effects in mammalian cells. Photochem Photobiol Sci. 2003, 2,
88-94.
142. Kehrer J.P. Free radicals as mediators of tissue injury and disease. Crit Rev Toxicol. 1993, 23, 21-48.
143. Forman H.J., Torres M. Reactive oxygen species and cell signaling:
respiratory burst in macrophage signaling. Am J Respir Crit Care Med.
2002, 166, 4-8.
144. Stamler J.S., Single D., Loscalzo J. Biochemistry of nitric oxide
and its redox-activated forms. Science. 1992, 258, 1898-1902.
145. Gu X., Sun M., Gugiu B., Hazen S., Crabb J.W., Salomon R.G.
Oxidatively truncated docosahexaenoate phospholipids: total synthesis,
generation, and Peptide adduction chemistry. J Org Chem. 2003, 68,
3749-3761.
146. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry. J Lipid Res. 2003, 44, 233-242.
147. Korytowski W., Zareba M., Girotti A.W. Inhibition of free radical-mediated cholesterol peroxidation by diazeniumdiolate-derived
nitric oxide: effect of release rate on mechanism of action in a membrane system. Chem Res Toxicol. 2000, 13, 1265-1274.
148. Kunsch C., Medford R. Oxidative stress as a regulator of gene
expression in vasculature. Circ Res. 1999, 85, 753-766.
149. Bowie A., O'Neill L.A. Oxidative stress and nuclear factorkappaB activation: a reassessment of the evidence in the light of recent
discoveries. Biochem Pharmacol. 2000, 59, 13-23.
150. Eligini S., Brambilla M., Banfi C., Camera M., Sironi L., Barbieri
S.S., Auwerx J., Tremoli E., Colli S. Oxidized phospholipids inhibit
cyclooxygenase-2 in human macrophages via nuclear factorkappaB/IkappaB- and ERK2-dependent mechanisms. Cardiovasc Res.
2002, 55, 406-415.
151. Sakoda T., Hirata K., Kuroda R. Myristoylation of endothelial
cells nitric oxide synthase is important for extracellular release of nitric
160
oxide. Mol and Cell Biochem. 1995, 152, 143-148.
152. Ïðîñêóðÿêîâ Ñ.ß., Êîíîïëÿíèêîâ À.Ã., Èâàíèêîâ À.È.,
Ñêâîðöîâ Â.Ã. Áèîëîãèÿ îêèñè àçîòà. Óñïåõè ñîâð. Áèîëîãèè. 1999,
119, 380-395.
153. Stuart-Smith K. Demystified. Nitric oxide. Mol Pathol. 2002,
55, 360-366.
154. Brown G.C., Borutaite V. Nitric oxide, mitochondria, and cell
death. IUBMB Life. 2001, 52, 189-195.
155. Lopez M.F., Melov S. Applied proteomics: mitochondrial proteins and effect on function. Circ Res. 2002, 90, 380-389.
156. Àð÷àêîâ À.È., Ìîõîñîåâ È.Ì. Ìîäèôèêàöèÿ áåëêîâ
àêòèâíûìè ôîðìàìè êèñëîðîäà è èõ äåãðàäàöèÿ. Áèîõèìèÿ. 1989,
54, 179-186.
157. Resmi H., Akhunlar H., Temiz Artmann A., Guner G. In vitro
effects of high glucose concentrations on membrane protein oxidation,
G-actin and deformability of human erythrocytes. Cell Biochem Funct.
2004, 23,163-168.
158. Ernst A., Stolzing A., Sandig G., Grune T. Protein oxidation and
the degradation of oxidized proteins in the rat oligodendrocyte cell line
OLN 93-antioxidative effect of the intracellular spin trapping agent
PBN. Brain Res Mol Brain Res. 2004, 122, 126-132.
159. Toledano M.B., Leonard W.J. Modulation of transcription factor NFkB binding activity by oxidation -reduction in vitro. PNAS USA.
1991, 88, 4328-4332.
160. Lo Y.Y., Wong J.M., Cruz T.F. Reactive oxygen species mediate
cytokine activation of c-Jun NH2-terminal kinases. J Biol Chem. 1996,
271, 15703-15707.
161. Liddil J.D., Dorr R.T., Scuderi P. Association of lysosomal activity with sensitivity and resistance to tumor necrosis factor in murine
L929 cells. Canser Res. 1989, 49, 2722-2728.
162. Jensen K.D., Kopeckova P., Kopecek J. Antisense oligonucleotides delivered to the lysosome escape and actively inhibit the hepatitis B virus. Bioconjug Chem. 2002, 13, 975-984.
163. Canbay A., Guicciardi M.E., Higuchi H., Feldstein A., Bronk
S.F., Rydzewski R., Taniai M., Gores G.J. Cathepsin B inactivation
attenuates hepatic injury and fibrosis during cholestasis. J Clin Invest.
2003, 112, 152-159.
164. Futerman A.H., van Meer G. The cell biology of lysosomal storage disorders. Nat Rev Mol Cell Biol. 2004, 5, 554-565.
165. Takahashi T., Kitaoka K., Ogawa Y., Kobayashi T., Seguchi H.,
Tani T., Yoshida S. Lysosomal dysfunction on hydrogen peroxideinduced apoptosis of osteoarthritic chondrocytes. Int J Mol Med. 2004,
14, 197-200.
161
166. Balsinde J. Roles of various phospholipases A2 in providing
lysophospholipid acceptors for fatty acid phospholipid incorporation
and remodelling. Biochem J. 2002, 364, 695-702.
167. Sevanian A. Lipid damage and repair. In: Oxidative Damage and
Repair: Clinical, Biological and Medical Aspects. (Davies RJA ed).
Pergamon Press, N-Y. 1988, 543-549.
168. Krysko O., De Ridder L., Cornelissen M. Phosphatidylserine
exposure during early primary necrosis (oncosis) in JB6 cells as evidenced by immunogold labeling technique. Apoptosis. 2004, 9, 495500.
169. Kohjimoto Y., Kennington L., Scheid C.R., Honeyman T.W.
Role of phospholipase A2 in the cytotoxic effects of oxalate in cultured
renal epithelial cells. Kidney Int. 1999, 56, 1432-1441.
170. Sapirstein A., Spech R.A., Witzgall R., Bonventre J.V. Cytosolic
phospholipase A2 (PLA2), but not secretory PLA2, potentiates hydrogen peroxide cytotoxicity in kidney epithelial cells. J Biol Chem. 1996,
271, 21505-21513.
171. Vadas P. Group II phospholipases A2 are indirectly cytolytic in
the presence of exogenous phospholipid. Biochim Biophys Acta. 1997,
1346, 193-197.
172. Tselepis A., Chapman M. Inflammation, bioàctive lipids and
atherosclerosis: potential role of LP-associated phospholipase A2, PAFacetylhydrolase. Atherîsclerosis. 2002, Supplement 3, 57-68.
173. Granata F., Balestrieri B., Petraroli A., Giannattasio G., Marone
G., Triggiani M. Secretory phospholipases a(2) as multivalent mediators
of inflammatory and allergic disorders. Int Arch Allergy Immunol.
2003, 131, 153-163.
174. Lauber K., Bohn E., Krober S.M., Xiao Y.J., Blumenthal S.G.,
Lindemann R.K., Marini P., Wiedig C., Zobywalski A., Baksh S., Xu Y.,
Autenrieth I.B., Schulze-Osthoff K., Belka C., Stuhler G., Wesselborg S.
Apoptotic cells induce migration of phagocytes via caspase-3-mediated
release of a lipid attraction signal.Cell. 2003, 113, 717-730.
175. Leray C., Cazenave J.P., Gachet C. Platelet phospholipids are
differentially protected against oxidative degradation by plasmalogens.
Lipids. 2002, 37, 285-290.
176. Kambayashi Y., Yamashita S., Ntki E., Yamamoto Y. Oxidation
of rat liver phospholipids: comparison of pathways in homogeneous
solution, in liposomal suspension and in whole tissue homogenates. J.
Biochem. (Tokyo). 1997, 121, 425-431.
177. Nedeljkovic Z.S., Gokce N., Loscalzo J. Mechanisms of oxidative stress and vascular Postgrad Med J. 2003, 79, 195-199.
178. Klotz L.O. Oxidant-induced signaling: effects of peroxynitrite
and singlet oxygen. Biol Chem. 2002, 383, 443-456.
162
179. Suzuki Y.J., Forman H.F., Sevanian A. Oxidants as stimulators
of signal transduction. J Free Rad Biol Med. 1997, 22, 269-285.
180. Rashba-Step J., Tatopyan A., Du R., Ann D., Pushpa-Rehka
T.R., Sevanian A. Phospholipid peroxidation induces cytosolic phospholipase A2 activity: membrane effects versus enzyme phosphorylation. Arch Biochem Biophys. 1997, 343, 44-54.
181. Clark J.D., Schievella A.R., Nalefski E.A., Lin L.L. Cytosolic
phospholipase A2. J Lipid Mediators Cell Signal. 1995, 12, 83-117.
182. Newton A.C., Johnson J.J. Protein kinase C: a paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting
modules.Biochim Biophys Acta. 1998, 1376, 155-172.
183. Ross B.M., Moszczynska. A., Erlich J., Kish S.J. Phospholipidmetabolizing enzymes in Alzheimer's disease: increased lysophospholipid acyltransferase activity and decreased phospholipase A2 activity. J
Neurochem. 1998, 70, 786-793.
184. Mulder C., Wahlund L.O., Teerlink T., Blomberg M., Veerhuis
R., Van Kamp G.J., Scheltens P., Scheffer P.G. Decreased lysophsphatidylcholine/ phosphatidylchoine ratio in cerebrospinal fluid in
Alzheimer' s disease. J Neural Transm. 2003, 110, 949-955.
185. Stanley J.A., Williamson P.C., Drost D.J., Carr T J., Rylett R.J.,
Morrison-Stewartr S., Thompson R.T. Membrane phospholipid metabolism and schizophrenia: an in vivo 31P-MR spectroscopy study.
Schizophr Res. 1994, 13, 209-215.
186. Keshavan M.S., Stanley J.A., Montrose D.M., Minshew N.J.,
Pettegrew J.W. Prefrontal membrane phospholipid metabolism of child
and adolescent offspring at risk for schizophrenia or schizoaffective disorder: an in vivo (31)P MRS study. Mol Psychiatry. 2003, 8, 316-323.
187. Mahadik S.P., Evans D.R. Is schizophrenia a metabolic brain
disorder? Membrane phospholipid dysregulation and its therapeutic
implications. Psychiatr Clin North Am. 2003, 26, 85-102.
188. Haag M. Essential fatty acids and the brain. Can J Psychiatry.
2003, 48, 195-203.
189. Salvioli G. Relationship between lipid composition of erythrocytes and their deformability. In: Phospholipids and Atherosclerosis
(Avogaro P.et al. eds.) Raven Press, New York. 1983, 99-114.
190. Ëîïóõèí Þ.Ì., Àð÷àêîâ À.È., Âëàäèìèðîâ Þ.À., Êîãàí
Ý.Ì. Õîëåñòåðèíîç (Õîëåñòåðèí áèîìåìáðàí. Òåîðåòè÷åñêèå è
êëèíè÷åñêèå àñïåêòû.) Ìåäèöèíà. Ì. 1983.
191. Wei X.D., Li L., Bai J. Effect of Salvia miltiorrhizae Composita
on erythrocyte membrane phospholipid in patients with coronary heart
disease. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1997, 17, 336-338.
192. Das D.K., Engelman R.M., Rousou J.A., Breyer R.H., Otani H.,
Lemeshow S. Role of membrane phospholipids in myocardial injury
163
induced by ischemia and reperfusion. Am J Physiol Heart Circ Physiol.
1986, 251, 71-79.
193. Inouye M., Mio T., Sumino K. Formation of 9-hydroxy linoleic
acid as a product of phospholipid peroxidation in diabetic erythrocyte
membranes. Biochim Biophys Acta. 1999, 1438, 204-212.
194. Candiloros H., Zeghari N., Ziegler O., Donner M., Drouin P.
Hyperinsulinemia is related to erythrocyte phospholipid composition
and membrane fluidity changes in obese nondiabetic women. J Clin
Endocrinol Metab. 1996, 81, 2912-2918.
195. Brown R.E. Sphingolipid organization in biomembranes: what
physical studies of model membranes reveal. J Cell Sci. 1998, 111, 1-9.
196. Samocha-Bonet D., Lichtenberg D., Tomer A., Deulsch V.,
Mardi T., Goldin Y., Abi Abeid S., Shenkerman G., Patshornik H.,
Shapira I., Berliner S. Enhanced erythrocyte adhesiveness/aggregation
in obesity corresponded to low-grade inflammation. Obes Res. 2003, 1,
403-407.
197. Zendzian-Piotrowska M., Bucki R., Gorska M., Gorski J.
Diabetes affects phospholipid content in the nuclei of the rat liver.
Horm Metab Res. 2000, 32, 386-389.
198. Wright S.M., Hockey P.M., Enhorning G., Strong P., Reid K.B., Holgate
S.T., Djukanovic R., Postle A.D. Altered airway surfactant phospholipid composition and reduced lung function in asthma. J AppI Physiol. 2000, 89, 1283-1292.
200. Mander A., Langton-Hewer S., Bernhard W., Warner J.O.,
Postle A.D. Altered phospholipid composition and aggregate structure
of lung surfactant is associated with impaired lung function in young
children with respiratory infections. Am J Respir Cell Mol Blol. 2002,
27, 714-721.
201. Rigamonti C., Mottaran E., Reale E., Rolla R., Cipriani V.,
Capelli F., Boldorini R., Vidali M., Sartori M., Albano E. Moderate alcohol consumption increases oxidative stress in patients with chronic
hepatitis C. Hepatology. 2003, 38, 42-49.
202. Estilaei M.R., Matson G.B., Payne G.S., Leach M.O., Fein G.,
Meyerhoff D.J. Effects of abstinence from alcohol on the broad phospholipid signal in human brain: an in vivo 31P magnetic resonance
spectroscopy study. Alcohol Clin Exp Res. 2001, 25, 1213-1220.
203. Li S., Yu B., An P., Liang Z., Yuan S., Cai H. Variations of cellular membrane phospholipids with genesis and hepatic metastasis of
large intestine cancer. Zhonghua Wai Ke Za Zhi. 2002, 4, 561-563.
164
ÃËÀÂÀ 5. ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÉ ÊËÅÒÎÊ
ÏÅ×ÅÍÈ. ÌÅÕÀÍÈÇÌÛ ÃÅÏÀÒÎÒÎÊÑÈ×ÍÎÑÒÈ.
Ïðîÿâëåíèå ðàññìîòðåííûõ âûøå ìåõàíèçìîâ êëåòî÷íûõ
ïîâðåæäåíèé èìååò ðÿä ñïåöèôè÷åñêèõ îñîáåííîñòåé â ïå÷åíè.
Õîðîøî èçâåñòíî, ÷òî ïå÷åíü - ýòî îñíîâíîé îðãàí, ãäå ïðîèñõîäèò
ìåòàáîëèçì ÷óæåðîäíûõ ñîåäèíåíèé (êñåíîáèîòèêîâ). Áëàãîäàðÿ
ýòèì óíèêàëüíûì ôóíêöèÿì, êëåòêè ïå÷åíè ïîñòîÿííî íàõîäÿòñÿ
ïîä âîçäåéñòâèåì ìíîæåñòâà ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ è ÿâëÿþòñÿ
îñíîâíîé ìèøåíüþ äëÿ òîêñèêàíòîâ, êñåíîáèîòèêîâ, ïðîäóêòîâ
îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà è ò.ä. [1-3]. Êëåòêè ïå÷åíè î÷åíü
÷óâñòâèòåëüíû ê ãèïîêñèè, îñîáåííî ïðè íèçêîì ñîäåðæàíèåì
ãëèêîãåíà. Â ýòèõ óñëîâèÿõ â ãåïàòîöèòàõ ñíèæàåòñÿ ñèíòåç ÀÒÔ,
áëîêèðóþòñÿ
ÀÒÔ-çàâèñèìûå
ìåòàáîëè÷åñêèå
ïðîöåññû
(ãëþêîíåîãåíåç, ñèíòåç æèðíûõ êèñëîò), â ðåçóëüòàòå ÷åãî ãèïîêñèÿ,
ñîïðÿæåííàÿ ñ èíãèáèðîâàíèåì ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé è
ðàçðóøåíèåì ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ, èíèöèèðóåò íåêðîç êëåòîê.
Ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ðàçëè÷íû â çàâèñèìîñòè îò ïðèðîäû
òîêñèêàíòà, äîçû, äëèòåëüíîñòè âîçäåéñòâèÿ è ò.ä. Íåçàâèñèìî îò
ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà ôîðìèðóåòñÿ îãðàíè÷åííîå êîëè÷åñòâî
ïàòîëîãè÷åñêèõ ðåàêöèé, ñðåäè êîòîðûõ âàæíåéøèìè ÿâëÿþòñÿ:
ñòåàòîç, íåêðîç, õîëåñòàç, ôèáðîç (öèððîç), êàíöåðîãåíåç.
Âûäåëÿþò 4 îñíîâíûõ êëèíè÷åñêèõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñèíäðîìà
ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè:
1. Ñèíäðîì öèòîëèçà (ò.å. ïðîÿâëåíèå íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ
êëåòîê), êîòîðûé îáóñëîâëåí íàðóøåíèåì ïðîíèöàåìîñòè ìåìáðàí
ãåïàòîöèòîâ è èõ îðãàíåëë è õàðàêòåðèçóåòñÿ âûäåëåíèåì
âíóòðèêëåòî÷íîãî ñîäåðæèìîãî â ìåæêëåòî÷íîå ïðîñòðàíñòâî è â
êîíå÷íîì èòîãå - â êðîâü. Äëÿ öèòîëèçà õàðàêòåðíû ïîâûøåíèå â
êðîâè à) àêòèâíîñòè èíäèêàòîðíûõ ôåðìåíòîâ íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ
êëåòîê (ÀëÀÒ, ÀñÀÒ, àëüäîëàçû, ãëóòàìàòäåãèäðîãåíàçû, ËÄÃ), á)
êîíöåíòðàöèè áèëèðóáèíà, â) âèòàìèíà Â12 è æåëåçà.
2. Ñèíäðîì õîëåñòàçà, îáóñëîâëåííûé íàðóøåíèåì
æåë÷åâûäåëèòåëüíîé ôóíêöèè ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ñ íàðóøåíèåì
îáðàçîâàíèÿ æåë÷íîé ìèöåëëû è ïîðàæåíèåì ìåëü÷àéøèõ
æåë÷íûõ ïðîòîêîâ. Ìîðôîëîãè÷åñêè õîëåñòàç, êàê ïðàâèëî, ñâÿçàí
ñ íàðóøåíèÿìè öèòîñêåëåòà ãåïàòîöèòîâ, êîòîðûå ïðèâîäÿò ê
èñ÷åçíîâåíèþ ìèêðîâîðñèíîê íà àïèêàëüíîé ïîâåðõíîñòè ýòèõ
êëåòîê, ñíèæåíèþ ñîêðàòèìîñòè êàíàëèêóëÿðíîé ìåìáðàíû, à
òàêæå ìîãóò ñëóæèòü ïðè÷èíîé ïðîíèöàåìîñòè ìåæêëåòî÷íûõ
ïëîòíûõ êîíòàêòîâ è ïðèâîäÿò ê îáðàòíîìó òîêó æåë÷è â
ñèíóñîèäû [4]. Äðóãèì âîçìîæíûì ìåõàíèçìîì õîëåñòàçà ÿâëÿåòñÿ
íàðóøåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî òðàíñïîðòà âåçèêóë, êîòîðîå òàêæå
ñâÿçàíî ñ ñîñòîÿíèåì öèòîñêåëåòà ãåïàòîöèòîâ. Ñèíäðîì õîëåñòàçà
165
ñîïðîâîæäàåòñÿ: (à) ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû,
ëåéöèíàìèíîïåïòèäàçû,
γ-ãëóòàìèëòðàíñïåïòèäàçû,
5'íóêëåîòèäàçû; (á) ãèïåðõîëåñòåðèíåìèåé; (â) ïîâûøåíèåì óðîâíÿ
ôîñôîëèïèäîâ è æåë÷íûõ êèñëîò; (ã) ãèïåðáèëèðóáèíåìèåé.
3. Ñèíäðîì ïå÷åíî÷íî-êëåòî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, êîòîðûé
îòðàæàåò èçìåíåíèÿ îñíîâíûõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñâîéñòâ ïå÷åíè:
ñèíòåòè÷åñêîé è ìåòàáîëèçèðóþùåé. Ïå÷åíî÷íî-êëåòî÷íàÿ
íåäîñòàòî÷íîñòü
âêëþ÷àåò:
ïå÷åíî÷íóþ
ãèïåðàçîòåìèþ;
íåäîñòàòî÷íîñòü ñèíòåòè÷åñêîé ôóíêöèè ïå÷åíè è ïàäåíèå
àêòèâíîñòè õîëèíýñòåðàçû â ñûâîðîòêå êðîâè.
4.
Èììóíîâîñïàëèòåëüíûé
ñèíäðîì,
îáóñëîâëåííûé
ñåíñèáèëèçàöèåé èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòîê è àêòèâàöèåé
ðåòèêóëîãèñòèîöèòàðíîé ñèñòåìû. Äëÿ íåãî õàðàêòåðíî: (à)
ïîâûøåíèå óðîâíÿ γ- è β-ãëîáóëèíîâ; (á) îáùåãî áåëêà ñûâîðîòêè
êðîâè; (â) èììóíîãëîáóëèíîâ À, G, Ì; (ã) ïîÿâëåíèå
íåñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë, â òîì ÷èñëå ê ÄÍÊ, áåëêàì
ãëàäêîìûøå÷íûõ âîëîêîí, ìèòîõîíäðèé; (ä) èçìåíåíèå êîëè÷åñòâà
è ñîîòíîøåíèÿ ñóáïîïóëÿöèé ëèìôîöèòîâ (õåëïåðîâ, ñóïðåññîðîâ).
 çàâèñèìîñòè îò ðÿäà ôàêòîðîâ (ïðèðîäû ïîâðåæäàþùåãî
àãåíòà, äëèòåëüíîñòè è õàðàêòåðà ïîâðåæäåíèÿ è ò.ä.) ïàòîãåíåç
ïîâðåæäåíèé â ïå÷åíè ñîïðîâîæäàåòñÿ èíäóöèðîâàííûì
àïîïòîçîì, íåêðîçîì, ñòåàòîçîì è êàíöåðîãåíåçîì. Òîêñè÷åñêèå
ãåïàòîïàòèè, êàê ïðàâèëî, íîñÿò ñìåøàííûé õàðàêòåð.
Ê ïîâðåæäàþùèì ôàêòîðàì, âûçûâàþùèì íàèáîëüøèé èíòåðåñ
ó èññëåäîâàòåëåé, îòíîñÿò âèðóñíûå, òîêñèêîëîãè÷åñêèå (â òîì
÷èñëå è ëåêàðñòâåííûå) è èììóíîëîãè÷åñêèå [5, 6 ].
Ãåïàòîòîêñèíû ìîãóò îêàçûâàòü êàê ïðÿìîå ïîâðåæäàþùåå
äåéñòâèå, òàê è îïîñðåäîâàííîå, ÷åðåç ïðîìåæóòî÷íûå ïðîäóêòû
èõ ìåòàáîëèçìà. Îáëèãàòíûå ãåïàòîòîêñèíû âûçûâàþò
íåîáðàòèìûå íåêðîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ (íàïðèìåð,
òîêñèíû áëåäíîé ïîãàíêè). Ôàêóëüòàòèâíûå ãåïàòîòîêñèíû ñàìè
ïî ñåáå íå âûçûâàþò íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, à â ïðîöåññå
áèîòðàñôîðìàöèé ïðåîáðàçîâûâàþòñÿ â ìåòàáîëèòû, îáëàäàþùèå
âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ (÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä,
ïîëèöèêëè÷åñêèå àðîìàòè÷åñêèå óãëåâîäîðîäû è ò. ä.) [7].
Ãåïàòîöèòû ïîäâåðæåíû âîçäåéñòâèþ ââîäèìûõ â îðãàíèçì
ëåêàðñòâåííûõ
ñîåäèíåíèé,
ïîñòóïàþùèõ
â
ïå÷åíü
íåïîñðåäñòâåííî îò îðãàíîâ ÆÊÒ è ñåëåçåíêè ÷åðåç âîðîòíóþ
âåíó, äîñòàâëÿþùóþ îêîëî 75% ïå÷åíî÷íîé êðîâè.
Òàêèå "ýêñòðåìàëüíûå" óñëîâèÿ, â êîòîðûõ ïîñòîÿííî íàõîäÿòñÿ
êëåòêè ïå÷åíè, ñ îäíîé ñòîðîíû, â êàêîé-òî ñòåïåíè
êîìïåíñèðóþòñÿ èõ óíèêàëüíîé ñïîñîáíîñòüþ ê ðåãåíåðàöèè. Ñ
äðóãîé ñòîðîíû, àêòèâíàÿ ðåãåíåðàöèÿ è ïðîëèôåðàöèÿ
166
ãåïàòîöèòîâ, ìàñêèðóÿ èíäóöèðîâàííûå ðàçëè÷íûìè ôàêòîðàìè
ïîâðåæäåíèÿ, äåëàåò ïå÷åíü îñîáåííî óÿçâèìîé äëÿ
êàíöåðîãåíåçà.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé òîò ôàêò, ÷òî, êàê è ó
ëþáîé ýóêàðèîòè÷åñêîé êëåòêè, ïîâðåæäåíèÿ ãåïàòîöèòîâ
èíäóöèðóþò àïîïòîç è/èëè íåêðîç, êîòîðûå â öåëîì ñîîòâåòñòâóþò
ïðèâåäåííûì âûøå îáùèì ñõåìàì (ñì. ãëàâó 4). Ìîðôîëîãè÷åñêèå
è êëèíè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè
ïîä äåéñòâèåì ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ ïîäðîáíî èçó÷åíû è
îïèñàíû [2, 8]. Íî áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû ðåàëèçàöèè ýòèõ
ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè, êàê áûëî îòìå÷åíî, èìåþò íåêîòîðûå
ñïåöèôè÷åñêèå îñîáåííîñòè, êîòîðûå åùå íå äî êîíöà âûÿñíåíû
[9]. Âàæíîñòü èçó÷åíèÿ ýòèõ ìåõàíèçìîâ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé ñ
îäíîé ñòîðîíû, â ñâÿçè ñ âîçðàñòàþùèì óðîâíåì çàáîëåâàåìîñòè
âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè â ìèðå [10, 11], à ñ äðóãîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ è ñâÿçàííîé ñ íåé
âîçðàñòàþùåé ñìåðòíîñòüþ [12, 13].
Ñðåäè ýíäîãåííûõ ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ, èíèöèèðóþùèõ
àïîïòîç è ñâÿçàííûõ ñ ôóíêöèîíàëüíûìè îñîáåííîñòÿìè ïå÷åíè,
ñóùåñòâåííîå ìåñòî çàíèìàþò æåë÷íûå êèñëîòû.
5.1. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè
êèñëîòàìè
Ïðè íàðóøåíèÿõ ñåêðåöèè æåë÷è â æåë÷íûé ïóçûðü, â ïå÷åíè
íàêàïëèâàþòñÿ ãèäðîôîáíûå æåë÷íûå êèñëîòû, îáëàäàþùèå
âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ [14, 15]. Èõ íàêîïëåíèå âíóòðè
ãåïàòîöèòîâ è çàäåðæêà ýêñêðåöèè æåë÷è ñîïðÿæåíû ñ àïîïòîçîì
êëåòîê [16, 17].  îñîáî îñòðûõ ñëó÷àÿõ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü
æåë÷íûõ êèñëîò ìîæåò ïðèâîäèòü ê ïîâðåæäåíèþ ïå÷åíè,
ðàçâèòèþ öèððîçà è ñìåðòè îò ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè [18,
19]. Íà êóëüòóðå êëåòîê ãåïàòîöèòîâ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
ôèçèîëîãè÷åñêèå êîíöåíòðàöèè (20-100 ìêÌ) ãèäðîôîáíîé
ãëèêîõåíîäåîêñèõîëåâîé (ÃÕÄÕ) æåë÷íîé êèñëîòû èíäóöèðóþò
àïîïòîç. Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ ñæàòèåì êëåòêè è ÿäðà, àêòèâàöèåé
êàñïàç,
ôðàãìåíòàöèåé
ÄÍÊ
è
ýêñòåðíàëèçàöèåé
ôîñôàòèäèëñåðèíà â íàðóæíûé ìîíîñëîé ïëàçìàòè÷åñêîé
ìåìáðàíû [20] (ñì. ãëàâó 4).  ãåïàòîöèòàõ æåë÷íûå êèñëîòû
èíèöèèðóþò íå ìèòîõîíäðèàëüíûé, à ïîâåðõíîñòíî-ðåöåïòîðíûé
ïóòü àïîïòîçà, âêëþ÷àþùèé Fas è TRAIL-R2 ðåöåïòîðû [21, 22].
Èçâåñòíî, ÷òî êëåòêè ïå÷åíè îáîãàùåíû òàêèìè "ðåöåïòîðàìè
ñìåðòè", êàê Fas, TNF-R1, à òàêæå TRAIL-R1 è -R2, ñîäåðæàùèìè
"äîìåí ñìåðòè", êîòîðûé ñïîñîáåí ñâÿçûâàòü ñõîäíóþ ñ êàñïàçîé-8
"ïðîòåàçó ñìåðòè" (death protease). Ñâÿçûâàíèå ñîîòâåòñòâóþùèõ
167
ëèãàíäîâ ñ ýòèìè ðåöåïòîðàìè è îëèãîìåðèçàöèÿ îáðàçóþùèõñÿ
êîìïëåêñîâ èíèöèèðóþò àïîïòîç. Æåë÷íûå êèñëîòû ñòèìóëèðóþò
òðàíñëîêàöèþ Fas èç öèòîïëàçìû [23] èëè èç âåçèêóë,
îáðàçîâàííûõ ïðè ó÷àñòèè àïïàðàòà Ãîëüäæè, ÷åðåç ñèñòåìó
ìèêðîòðóáî÷åê ê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå [22], ãäå Fasðåöåïòîðû, (âîçìîæíî, ñ ó÷àñòèåì ìåìáðàííûõ ðàôòîâ) çàïóñêàþò
àïîïòîçíûé ìåõàíèçì êëåòî÷íîé ñìåðòè [23].  òî æå âðåìÿ, â
ãåïàòîöèòàõ ìûøåé ñ îòñóòñòâèåì ãåíîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ Fas,
÷àñòè÷íî ñîõðàíÿëàñü (íà 50%) óñòîé÷èâîñòü ê èíäóöèðîâàííîìó
æåë÷íûìè êèñëîòàìè àïîïòîçó, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ñóùåñòâîâàíèè àëüòåðíàòèâíûõ ìåõàíèçìîâ, íåçàâèñèìûõ îò Fas
[21, 24]. Äåéñòâèòåëüíî, â äàëüíåéøåì ó òàêèõ ìûøåé ïðè
íàêîïëåíèè æåë÷íûõ êèñëîò áûëà âûÿâëåíà ïîâûøåííàÿ
ýêñïðåññèÿ è îëèãîìåðèçàöèÿ TRAIL-R2 [25, 26]. Àíàëîãè÷íûé
ðåçóëüòàò áûë ïîëó÷åí íà äðóãîé ìîäåëè ìûøåé, ñ ïåðåâÿçàííûì
æåë÷íûì ïóçûðåì, ïðè ââåäåíèè ýêçîãåííîãî TRAIL. Ïî âñåé
âåðîÿòíîñòè, ãåíåðàöèÿ TRAIL in vivo, îñóùåñòâëÿåìàÿ â îñíîâíîì
àêòèâèðîâàííûìè êóïôåðîâñêèìè êëåòêàìè [27], óñèëèâàåò
àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ è õîëåñòàòè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå ïå÷åíè. Â
íîðìå ó÷àñòèå TRAIL â àïîïòîçå êîíòðîëèðóåòñÿ, íî ïðè õîëåñòàçàõ
ýêñïðåññèÿ ýòîãî áåëêà ïîâûøàåòñÿ, è îí ñòàíîâèòñÿ
ãåïàòîòîêñè÷íûì [28].
Èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò ïîêàçàëè, ÷òî æåë÷íûå êèñëîòû
íå òîëüêî èíèöèèðóþò ëèãàíä-çàâèñèìóþ è ëèãàíä-íåçàâèñèìóþ
îëèãîìåðèçàöèþ "ðåöåïòîðîâ ñìåðòè", íî òàêæå ìîäóëèðóþò Bidçàâèñèìûå ñèãíàëüíûå ïóòè (ñì. ãëàâó 4), âûçûâàþùèå
äèñôóíêöèþ ìèòîõîíäðèé â ãåïàòîöèòàõ, íàêîïëåíèå ÀÔÊ è
îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ [21, 29, 30]. Áîëåå òîãî, áûë óñòàíîâëåí
èíäóöèðîâàííûé æåë÷íûìè êèñëîòàìè íåêðîç ãåïàòîöèòîâ,
âûçûâàåìûé ãëóáîêîé äèñôóíêöèåé ìèòîõîíäðèé, ñ îáðàçîâàíèåì
ïîð è âûõîäîì öèòîõðîìà ñ [19, 31]. Àâòîðû îòìå÷àþò, ÷òî âûáîð
ìîëåêóë-ìèøåíåé - ýôôåêòîðîâ ìèòîõîíäðèàëüíîãî ïóòè àïîïòîçà
ãåïàòîöèòîâ (íàïðèìåð, òàêèõ, êàê êàñïàçû 8/10, FADD, Bid è äð.),
áóäåò ñïîñîáñòâîâàòü ïîèñêó íàèáîëåå ýôôåêòèâíûõ èíãèáèòîðîâ
àïîïòîçà ïðè õîëåñòàçàõ.
Cëåäóåò
îòìåòèòü,
÷òî
ñóùåñòâåííîå
çíà÷åíèå
â
öèòîòîêñè÷åñêîì äåéñòâèè æåë÷íûõ êèñëîò èìååò ãèäðîôîáíîñòü,
îïðåäåëÿþùàÿ èõ ñïîñîáíîñòü âñòðàèâàòüñÿ â ìåìáðàíó. Íàïðèìåð,
íà êóëüòóðå êëåòîê Hep G2 ãåïàòîöèòîâ ÷åëîâåêà áûëî ïîêàçàíî,
÷òî õåíîäåçîêñèõîëåâàÿ êèñëîòà âûçûâàåò àïîïòîç êëåòîê. Åå
ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå óñèëèâàåòñÿ óðñîäåçîêñèõîëåâîé
êèñëîòîé, ïî-âèäèìîìó, çà ñ÷åò óâåëè÷åíèÿ ïðîíèöàåìîñòè
ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû, ÷òî âûçûâàåò íåêðîç ãåïàòîöèòîâ.
168
Äðóãàÿ æåë÷íàÿ êèñëîòà - òàóðîäåçîêñèõîëåâàÿ òàêîãî äåéñòâèÿ íå
îêàçûâàåò [32].
 ãåïàòîöèòàõ ñóùåñòâóþò ìåõàíèçìû çàùèòû îò
ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ æåë÷íûõ êèñëîò. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî
âîçðàñòàíèå óðîâíÿ õîëåñòåðèíà è ñôèíãîìèåëèíà â
êàíàëèêóëÿðíûõ ìåìáðàíàõ ó êðûñ, âûçâàííîå ââåäåíèåì
äèîñãåíèíà, îêàçûâàëî çàùèòíîå äåéñòâèå íà ìåìáðàíû ïðè
ïîñëåäóþùåì âíóòðèâåííîì ââåäåíèè òàóðîõîëàòà. Àâòîðû
ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îáîãàùåííàÿ "æåñòêèìè" ëèïèäàìè ìåìáðàíà
çàùèùàåò êëåòêó îò ïîâðåæäåíèé, èíäóöèðóåìûõ æåë÷íûìè
êèñëîòàìè [33].
5.2. Àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ.
Òðàäèöèîííî ñ÷èòàëîñü, ÷òî âèðóñû âûçûâàþò ãèáåëü êëåòîê â
ðåçóëüòàòå
áëîêèðîâàíèÿ
âíóòðèêëåòî÷íûõ
ìåõàíèçìîâ
òðàíñêðèïöèè è òðàíñëÿöèè, à òàêæå ðàçðóøåíèÿ êëåòî÷íîé
ìåìáðàíû, ïðèâîäÿ â èòîãå ê íåêðîçó ïàðåíõèìû. Íî îòêðûòèå
àïîïòîçà ïîçâîëèëî ïåðåñìîòðåòü âçãëÿäû íà ïàòîãåíåç
õðîíè÷åñêèõ
âèðóñíûõ
ãåïàòèòîâ
(ÕÂÃ).
Áîëüøèíñòâî
èññëåäîâàòåëåé ñ÷èòàþò, ÷òî èìåííî àïîïòîç ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì
ìåõàíèçìîì êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðè õðîíè÷åñêèõ ïîðàæåíèÿõ
ïå÷åíè, â òîì ÷èñëå ïðè èíôåêöèè ãåïàòîòðîïíûìè âèðóñàìè [34,
35]. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ïîñëåäíèõ ëåò ñâèäåòåëüñòâóþò î
òîì, ÷òî: (1) ó ïàöèåíòîâ ñ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè  è Ñ êîëè÷åñòâî
àïîïòîçíûõ ãåïàòîöèòîâ íàìíîãî áîëüøå, ÷åì ó çäîðîâûõ; (2)
ýêñïðåññèÿ Fas-R ñóùåñòâåííî ïîâûøåíà íà ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ,
èíôèöèðîâàííûõ âèðóñàìè Â è Ñ, è òåñíî êîððåëèðóåò ñ èõ
ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ; (3) óðîâåíü ýêñïðåññèè Fasàíòèãåíà â ãåïàòîöèòàõ òàêèõ áîëüíûõ êîððåëèðóåò ñî ñòåïåíüþ
âîñïàëåíèÿ ïå÷åíè; (4) ðàçâèòèå ôóëüìèíàíòíîãî ãåïàòèòà ïðè
èíôèöèðîâàíèè âèðóñàìè ãåïàòèòîâ Ñ è Â ñîïðîâîæäàåòñÿ
îáøèðíûì àïîïòîçîì ãåïàòîöèòîâ, à åãî èíãèáèðîâàíèå (íà
ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ìîäåëÿõ) ïîçâîëÿåò îñòàíîâèòü âîñïàëåíèå
[36-39]. Ýòè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ
õðîíè÷åñêîãî ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè, â òîì ÷èñëå ïðè èíôåêöèè
ãåïàòîòðîïíûìè âèðóñàìè, îñíîâíûì ìåõàíèçìîì ãèáåëè êëåòîê
ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç.
Çà ìíîãî ëåò äî îòêðûòèÿ àïîïòîçà áûë îïèñàí õàðàêòåðíûé
ãèñòîëîãè÷åñêèé ïðèçíàê âèðóñíîãî ãåïàòèòà - îêðóãëûå
ãîìîãåííûå ýîçèíîôèëüíûå îáðàçîâàíèÿ, ÷àñòî ñîäåðæàùèå
ïèêíîòè÷íîå ÿäðî.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ÿñíî, ÷òî ýòè îáðàçîâàíèÿ,
íàçâàííûå òåëüöàìè Êàóíñèëüìåíà, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé íå ÷òî
èíîå, êàê ãåïàòîöèòû â ñîñòîÿíèè àïîïòîçà [40].
Àïîïòîç, êàê ñ÷èòàþò ìíîãèå èññëåäîâàòåëè, ÿâëÿåòñÿ
169
çàùèòíûì ìåõàíèçìîì êëåòêè-õîçÿèíà ïðîòèâ âèðóñíîé
èíôåêöèè. Íî äëÿ òîãî ÷òîáû ýôôåêòèâíî èñïîëüçîâàòü æèâóþ
êëåòêó, âèðóñ äîëæåí èìåòü ìåõàíèçìû âîçäåéñòâèÿ íà ïðîöåññû,
ðåàëèçóþùèå çàïðîãðàììèðîâàííóþ ãèáåëü èíôèöèðîâàííîé
êëåòêè. Íàêîïëåííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî âèðóñû
ñïîñîáíû êàê óñèëèâàòü, òàê è áëîêèðîâàòü àïîïòîç, íî ÷àùå âñåãî
îíè,
âñòðàèâàÿñü
â
åñòåñòâåííûé
ïðîöåññ
àïîïòîçà,
"ïðèñïîñàáëèâàþò" åãî ïîä ñâîè çàäà÷è.
Ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî ìåõàíèçìîâ âîçäåéñòâèÿ âèðóñà íà
ïðîöåññ àïîïòîçà â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå.
1. Âîçäåéñòâèå íà îïðåäåëåííûé êðèòè÷åñêèé ýòàï àïîïòîçà ñ
ïîñëåäóþùåé àêòèâàöèåé èëè èíãèáèðîâàíèåì ýòîãî ïðîöåññà.
Íàïðèìåð, (à) áëîêèðîâàíèå Fas-ðåöåïòîðîâ íà ïîâåðõíîñòè
èíôèöèðîâàííîé êëåòêè; (á) âîçäåéñòâèå íà ãåíîì êëåòêè ñ öåëüþ
èíãèáèðîâàíèÿ ýêñïðåññèè ñèãíàëüíûõ áåëêîâ, "çàïóñêàþùèõ"
àïîïòîç, òàêèõ, êàê ïðîòåèíêèíàçû R (PKR, dsRNA-dependent serine/threonine protein kinase) [41] èëè, (â) ñòèìóëÿöèÿ àïîïòîçà è
âêëþ÷åíèå âèðóñà â àïîïòîçíûå òåëüöà.
2. Ãåíåðàöèÿ ìíîæåñòâà âèðèîíîâ äî ñôîðìèðîâàíèÿ
ôèçèîëîãè÷åñêîãî îòâåòà â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå.
3. Îòñóòñòâèå îòâåòà êëåòêè èç-çà ñïîñîáíîñòè âèðóñà ê
ëàòåíòíîìó ñóùåñòâîâàíèþ. Äàëüíåéøàÿ äèññèìèëÿöèÿ âèðóñà
ìîæåò, ïî-âèäèìîìó, îñóùåñòâëÿòüñÿ, áëàãîäàðÿ ôàãîöèòàðíîìó
äåéñòâèþ ñîñåäíèõ êëåòîê è ò.ä. [34, 42].
 íàñòîÿùåå âðåìÿ èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ïî êðàéíåé ìåðå,
äâà ìåõàíèçìà, ñ ïîìîùüþ êîòîðûõ âèðóñû ãåïàòèòà Â è Ñ
èíèöèèðóþò àïîïòîç: (1) ïóòåì ïðÿìîãî ïðîàïîïòîçíîãî äåéñòâèÿ
ñïåöèôè÷íûõ âèðóñíûõ áåëêîâ, îáðàçóþùèõñÿ â ïðîöåññå
ðåïëèêàöèè âèðóñà (Õ-áåëêè âèðóñà ãåïàòèòà Â è âíóòðåííèå coreáåëêè âèðóñà ãåïàòèòà Ñ) [43-46] è (2) ïóòåì ñâåðõýêñïðåññèè íà
ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ ðåöåïòîðîâ, ïåðåäàþùèõ ñèãíàë ê
èíäóêöèè àïîïòîçà, íàïðèìåð, Fas-ðåöåïòîðîâ (Fas-R, APO1/CD95) è óâåëè÷åíèÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòè êëåòîê ê ðàçëè÷íûì
ïðîàïîïòîòè÷åñêèì ñòèìóëàì, â ÷àñòíîñòè, ê TNF-α [47, 48].
Èç-çà îòñóòñòâèÿ êîððåëÿöèè ìåæäó êîíöåíòðàöèåé âèðóñà
(óðîâíåì âèðåìèè) è èíäåêñîì ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè (ÈÃÀ)
èëè àêòèâíîñòüþ ôåðìåíòîâ - ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè â
ñûâîðîòêå êðîâè áîëüøèíñòâî ãåïàòîëîãîâ äî ñèõ ïîð âûñêàçûâàþò
ñîìíåíèÿ îòíîñèòåëüíî öèòîïàòè÷åñêîé àêòèâíîñòè âèðóñà
ãåïàòèòà Ñ è îñîáåííî âèðóñà ãåïàòèòà Â â ðàçâèòèè òÿæåëîãî
ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè [49]. Ñóùåñòâîâàíèå õðîíè÷åñêèõ íîñèòåëåé
âèðóñîâ Â è Ñ ñ íîðìàëüíîé èëè áëèçêîé ê íîðìàëüíîé ãèñòîëîãèåé
ïå÷åíè ïðè âûñîêîì óðîâíå âèðóñíîé ðåïëèêàöèè òàêæå ñòàâèò ïîä
170
ñîìíåíèå çíà÷èìîñòü ýòèõ âèðóñîâ â ïîâðåæäåíèè ãåïàòîöèòîâ.
Îäíàêî åñëè èñõîäèòü èç òîãî, ÷òî ïðåîáëàäàþùèì âèäîì
êëåòî÷íîé ãèáåëè ïðè âèðóñíûõ ïîðàæåíèÿõ ïå÷åíè ÿâëÿåòñÿ
èìåííî àïîïòîç, ïðîòåêàþùèé áåç ðàçðóøåíèÿ êëåòî÷íîé
ìåìáðàíû è âûñâîáîæäåíèÿ òðàíñàìèíàç (ñì. ãëàâó 4), òî îòñóòñòâèå
êîððåëÿöèè ìåæäó áèîõèìè÷åñêèìè ïàðàìåòðàìè ñûâîðîòêè êðîâè
è ãèñòîëîãè÷åñêèìè ïîêàçàòåëÿìè ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê
ïðåäñòàâëÿåòñÿ åñòåñòâåííûì è íå îïðîâåðãàåò ïðåäñòàâëåíèé î
âìåøàòåëüñòâå âèðóñîâ â ïðîöåññû àïîïòîçà.
Èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âèðóñîâ
ãåïàòèòîâ Â è Ñ, à òàêæå âçàèìîäåéñòâèþ âèðóñ-"õîçÿèí" â
ïîñëåäíèå ãîäû ïîñâÿùåíî ìíîãî ðàáîò, íî äî êîíöà ýòè ïðîöåññû
åùå íå èçâåñòíû. Ñâÿçàíî ýòî êàê ñ òîíêèìè è çàïóòàííûìè
ìîëåêóëÿðíûìè ìåõàíèçìàìè âçàèìîäåéñòâèÿ âèðóñà è
èíôèöèðîâàííîé êëåòêè, òàê è ñ îòñóòñòâèåì àäåêâàòíûõ ìîäåëåé
äëÿ ëàáîðàòîðíûõ èññëåäîâàíèé. Òåì íå ìåíåå, îñíîâíàÿ
òåíäåíöèÿ öèòîïàòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âèðóñîâ ãåïàòèòîâ  è Ñ
(HBV è HCV) ïî ìíåíèþ ìíîãèõ èññëåäîâàòåëåé çàêëþ÷àåòñÿ âî
âíåäðåíèè âèðóñîâ ñ ïîìîùüþ êîäèðóåìûõ èìè áåëêîâ â
êëþ÷åâûå êëåòî÷íûå ïðîöåññû è ìîäóëÿöèÿ, â çàâèñèìîñòè îò ðÿäà
ôàêòîðîâ, ïðî- èëè àíòèàïîïòîçíûõ ïðîöåññîâ. Òàê, â ðÿäå
ýêñïåðèìåíòîâ áûëî ïîêàçàíî èíãèáèðîâàíèå àïîïòîçà â êëåòêàõ
ïå÷åíè âèðóñàìè HCV è HÂV, êîòîðîå îáúÿñíÿëîñü ñïîñîáíîñòüþ
êîäèðóåìûõ èìè áåëêîâ ïîäàâëÿòü ôóíêöèè ïðîàïîïòîãåííîãî
áåëêà ð53, èíàêòèâèðîâàòü êàñïàçû è âûçûâàòü óñèëåííóþ
ýêñïðåññèþ áåëêîâ ñåìåéñòâà bcl-2 - èíãèáèòîðîâ àïîïòîçà [50, 51].
Ýòè âûâîäû ïîäòâåðäèëèñü ïðè èçó÷åíèè îòäåëüíîãî âëèÿíèÿ íà
àïîïòîç îáîëî÷å÷íûõ (envelope) áåëêîâ êàïñèä è âíóòðåííèõ (core)
áåëêîâ âèðóñîâ. Òàê, Kountouras ñ ñîàâò. [39] îáíàðóæèëè ïðî- è
àíòèàïîïòîçíûå ñâîéñòâà êîð-áåëêà âèðóñà ãåïàòèòà Ñ, ïîêàçàâ,
÷òî ýòîò áåëîê ñïîñîáåí ñâÿçûâàòüñÿ ñ ïåðåäàþùåé ñèãíàë
îáëàñòüþ âíóòðèêëåòî÷íîãî äîìåíà "ðåöåïòîðîâ ñìåðòè" è
ìîäóëèðîâàòü ïåðåìåùåíèå ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë, èíèöèèðóþùèõ
àïîïòîç. Ýòîìó ñïîñîáñòâóåò âîçìîæíîñòü ëîêàëèçàöèè êîð-áåëêà
HCV â ìåìáðàíàõ ÝÐ è ìèòîõîíäðèé â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå
[52]. Ïî ìíåíèþ Basu ñ ñîàâò. [53], ýòîò áåëîê îêàçûâàåò âëèÿíèå íà
êëåòî÷íóþ ðåãóëÿöèþ è, êàê áûëî ïîêàçàíî äëÿ êîð-áåëêà
ãåíîòèïà 1à HCV, èíèöèèðóåò "âûæèâàíèå" àïîïòîçíûõ
ãåïàòîöèòîâ, ñòèìóëèðóÿ ãåïàòîêàíöåðîãåíåç. Òàêæå áûëî
ïîêàçàíî, ÷òî âíóòðåííèå áåëêè HCV ñïîñîáíû îñëàáëÿòü àïîïòîç,
âûçâàííûé öåðàìèäîì [54, 58] èëè ôàêòîðîì ðîñòà TGF-β è
ïðîÿâëÿþò îíêîãåííûå ñâîéñòâà [55].
Áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êîð-áåëîê HCV èíãèáèðóåò
171
èíäóöèðîâàííîå
TNF
ðàñùåïëåíèå
ïîëè(ÀÄÔ-ðèáîçî)ïîëèìåðàçû (òàê íàçûâàåìîãî "ñóáñòðàòà ñìåðòè"). Ïðåäïîëàãàþò,
÷òî îí èíãèáèðóåò àïîïòîç ïóòåì àêòèâàöèè ÿäåðíîãî ôàêòîðà
NFκB, ìîäóëèðóÿ ñèãíàëüíûå ïóòè, ÷òî ñîõðàíÿåò õðîíè÷åñêîå
óñòîé÷èâîå
ñîñòîÿíèå
èíôèöèðîâàííîé
êëåòêè
[56].
Èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå íà àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé TNF è
áóòèðàòîì, áûëî ïîêàçàíî äëÿ "íåñòðóêòóðíîãî áåëêà 5À" HCV,
êîòîðûé âîçäåéñòâîâàë íà êàñïàçó-8, íî íå âëèÿë íà NFκB [57].
Ïîêàçàíû òàêæå äðóãèå àíòèàïîïòîçíûå ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ
âíóòðåííåãî áåëêà HCV, íàïðèìåð, íà ìèòîõîíäðèàëüíîì óðîâíå,
÷åðåç ñíèæåíèå ýêñïðåññèè Bcl-x, ïðèâîäÿùåå ê èíãèáèðîâàíèþ
àêòèâàöèè êàñïàçû-3 [58], èëè ÷åðåç àêòèâàöèþ áåëêà,
ñâÿçûâàþùåãî ð53, èíãèáèðóÿ òåì ñàìûì àïîïòîç íà ãåííîì óðîâíå
(ñì. ãëàâó 4) [50]. Chou ñ ñîàâò. [59] ïîêàçàëè, ÷òî êîð-áåëîê HCV â
êóëüòóðå êëåòîê êàðöèíîìû ÷åëîâåêà Huh7 èíèöèèðóåò TRAIL(íî íå Fas)-çàâèñèìûé àïîïòîç ïî ìåõàíèçìó àêòèâàöèè êàñïàçû-8,
ãèäðîëèçà (èëè ðàñùåïëåíèÿ) Bid è íàðóøåíèÿ ôóíêöèé
ìèòîõîíäðèé (ñì. ãëàâó 4).
 öåëîì, â îïóáëèêîâàííûõ â ïîñëåäíèå ãîäû ðàáîòàõ
ïîä÷åðêèâàåòñÿ ïîëèôóíêöèîíàëüíîñòü êîð-áåëêà HCV. Îí
ñïîñîáåí êàê èíãèáèðîâàòü TNF-èíäóöèðîâàííûé àïîïòîç, òàê è
ñòèìóëèðîâàòü åãî, ïðèâîäÿ ê ïåðñèñòåíöèè âèðóñà è, âîçìîæíî, ê
ãåïàòîêàíöåðîãåíåçó [60]. Äëÿ îáúÿñíåíèÿ òàêîãî ðåãóëÿòîðíîãî
âëèÿíèÿ êîð-áåëêà HCV íà ïðîöåññû àïîïòîçà êëåòîê ïå÷åíè
ðàññìàòðèâàåòñÿ åãî âëèÿíèå íà ÿäåðíûé ôàêòîð NFκB, äëÿ
êîòîðîãî, â ñâîþ î÷åðåäü, â ðàçíûõ ðàáîòàõ ïîëó÷åíû
ïðîòèâîðå÷èâûå äàííûå [41, 62 - 64]. Òàê, Chiao ñ ñîàâò.
ïðåäïîëàãàþò âîçìîæíîñòü êàê àêòèâàöèè, òàê è èíãèáèðîâàíèÿ
àïîïòîçà ýòèì ÿäåðíûì ôàêòîðîì, ÷òî òðåáóåò äàëüíåéøèõ
èññëåäîâàíèé [64]. Êàê ñ÷èòàþò Bantel ñ ñîàâò. [61], ìåõàíèçìû,
ëåæàùèå â îñíîâå ïðîòèâîïîëîæíî íàïðàâëåííûõ âëèÿíèé
âèðóñíûõ áåëêîâ åùå íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíû, è â öåëîì ìîãóò áûòü
îáîçíà÷åíû êàê "äèñðåãóëÿöèÿ".
Îáîëî÷å÷íûé áåëîê HCV òàêæå âêëþ÷àåòñÿ â ïðîöåññû
àïîïòîçà, íî åãî âëèÿíèå áîëåå îäíîçíà÷íî è ñâÿçàíî ñ èíäóêöèåé
ãèáåëè êëåòêè [65], òàê æå êàê è äëÿ îáîëî÷å÷íîãî áåëêà âèðóñà
ÂÈ× 1. Ïîëàãàþò, ÷òî ýòè ýôôåêòû ñâÿçàíû ñ ôîñôîðèëèðîâàíèåì
áåëêà ð53 [66].
Àíòèàïîïòîçíûìè ýôôåêòàìè îáëàäàåò è âèðóñ ãåïàòèòà À ïðè
âîçäåéñòâèè íà ïóòè, ñâÿçàííûå ñ PK R è dsÐÍÊ (äâóõöåïî÷å÷íîé
ÐÍÊ) [41]. Èíòåðåñíî, ÷òî íà ïîçäíåé ñòàäèè èíôåêöèè â êëåòêå
íàêàïëèâàåòñÿ ñîáñòâåííàÿ âèðóñíàÿ dsÐÍÊ, êîòîðàÿ ìîæåò
àêòèâèðîâàòü PK R, òåì ñàìûì êàê áû íèâåëèðóÿ äåéñòâèå âèðóñà.
172
Ïðîòèâîäåéñòâóÿ ýòîìó, âèðóñ îñëàáëÿåò ðåïëèêàöèþ, à òåì ñàìûì
è ãåíåðàöèþ ñîáñòâåííîé dsÐÍÊ. Ðåïëèêàöèÿ ïðèîáðåòàåò
óìåðåííûé õàðàêòåð, èíãèáèðóÿ àíòèâèðóñíûå ìåõàíèçìû è
ïîääåðæèâàÿ ïåðñèñòåíòíîå ñîñòîÿíèå èíôåêöèè âèðóñíîãî
ãåïàòèòà À [67].
Äëÿ Õ-áåëêà HÂV ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü èíäóöèðîâàòü àïîïòîç â
êóëüòóðå êëåòîê ãåïàòîöèòîâ ïóòåì àêòèâàöèè áåëêîâ êëåòî÷íîãî
ñòðåññà JNK (c-Jun N-terminal kinase) è p38 MAPK [68], à òàêæå
êàëüöèé-çàâèñèìûõ ñèãíàëüíûõ ïðîöåññîâ [69]. Îáíàðóæåíî
âëèÿíèå ãåíîòèïà HÂV è ìóòàöèé Õ-áåëêà íà ýòè ïðîöåññû [70].
Ïîìèìî ïðÿìîé èëè êîñâåííîé èíäóêöèè àïîïòîçà âèðóñàìè,
íåïîñðåäñòâåííî äåéñòâóþùèìè íà êëåòêè ïå÷åíè, äðóãèì, íå
ìåíåå ñóùåñòâåííûì ìåõàíèçìîì ãèáåëè èíôèöèðîâàííûõ
ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé êëåòî÷íûì
èììóííûì
îòâåòîì,
â
îñîáåííîñòè,
îïîñðåäîâàííûé
öèòîòîêñè÷åñêèìè Ò-ëèìôîöèòàìè è NK-êëåòêàìè [71-77].
Èììóííîå ïîâðåæäåíèå ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ïðè õðîíè÷åñêèõ
âèðóñíûõ áîëåçíÿõ ïå÷åíè îáóñëîâëåíî, âî-ïåðâûõ, ïðèñóòñòâèåì
â íèõ àíòèãåíîâ âèðóñîâ, âî-âòîðûõ - òðàíñôîðìàöèåé êëåòîê ïîä
äåéñòâèåì ïå÷åíî÷íûõ àóòîàíòèãåíîâ, ê ÷èñëó êîòîðûõ îòíîñÿòñÿ
ÿäåðíûé "å"-àíòèãåí (HBeAg) è ïîâåðõíîñòíûé àíòèãåí (HBsAg)
âèðóñà ãåïàòèòà Â. Ðåàëèçàöèÿ èììóííîãî öèòîëèçà ãåïàòîöèòîâ
ïðîèñõîäèò â âèäå ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî
òèïà. Ëèìôîòîêñè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü Ò-êèëëåðîâ íàïðàâëåíà
ïðîòèâ HBeAg, à ãåïàòîöèòû, ïîçèòèâíûå ê HBsAg îáû÷íî
îêðóæåíû CD8+-ëèìôîöèòàìè, îáåñïå÷èâàþùèìè ôîêàëüíûé
íåêðîç èíôèöèðîâàííûõ êëåòîê.
Ñ÷èòàþò, ÷òî öèòîòîêñè÷åñêèå Ò-ëèìôîöèòû (ÖÒË), ñ îäíîé
ñòîðîíû èíäóöèðóþò àïîïòîç èíôèöèðîâàííûõ êëåòîê, à ñ äðóãîé
- âîçäåéñòâóþò íà ïðîöåññû òðàíñêðèïöèè è ðåïëèêàöèè âèðóñà â
êëåòêå, ñòèìóëèðóÿ ñåêðåöèþ ðÿäà öèòîêèíîâ, íàïðèìåð,
èíòåðôåðîíà-γ (ÈÔÍ-γ), TNF-α è äð. [78 72], ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê
êîòîðûì â èíôèöèðîâàííîé êëåòêå ïîâûøåíà [79-81].  ÷àñòíîñòè,
ñâÿçûâàíèå ÈÔÍ ñî ñïåöèôè÷åñêèìè ðåöåïòîðàìè êëåòêè
ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ôåðìåíòîâ, íàïðèìåð,
2',5'-îëèãîàäåíèëàòñèíòàçû, è ýôôåêòîðíûõ áåëêîâ, êîòîðûå, â
ñâîþ î÷åðåäü, àêòèâèðóþò âíóòðèêëåòî÷íûå ðèáîíóêëåàçû,
ðàçðóøàþùèå âèðóñíóþ ÐÍÊ. ÈÔÍ èíãèáèðóþò òàêæå ïðîöåññû
"ðàçäåâàíèÿ", òðàíñëÿöèè è ñáîðêè âèðóñîâ â ïðîöåññå
ðåïëèêàöèè. Îäèí èç íàèáîëåå èçâåñòíûõ ÈÔÍ-èíäóöèðóåìûõ
áåëêîâ, PK R, ñòèìóëèðóåò àïîïòîç, èíäóöèðîâàííûé ìíîãèìè
ðàçëè÷íûìè ýôôåêòîðàìè, âêëþ÷àÿ TNF-α è âèðóñû. Èçó÷åíèå
ìåõàíèçìîâ èíäóêöèè àïîïòîçà èíòåðôåðîíîâîé PK R íåîáõîäèìî
173
äëÿ
ðàöèîíàëüíîé
îïòèìèçàöèè
ñõåì
êëèíè÷åñêîé
èíòåðôåðîíîòåðàïèè [41].
Ñ÷èòàþò, ÷òî ÖÒË èíèöèèðóþò àïîïòîç â èíôèöèðîâàííûõ
êëåòêàõ ïå÷åíè äâóìÿ ïóòÿìè. Ïåðâûé ðåàëèçóåòñÿ çà ñ÷åò âûáðîñà
èç Ò-êëåòîê ïåðôîðèíà, êîòîðûé îáðàçóåò ïîðû â ïëàçìàòè÷åñêèõ
ìåìáðàíàõ ãåïàòîöèòîâ. ×åðåç íèõ â êëåòêè ïðîíèêàþò ãðàíçèìû ïðîòåàçû Ò-ëèìôîöèòàðíûõ ãðàíóë, âûçûâàþùèå ðàñùåïëåíèå
ðÿäà âíóòðèêëåòî÷íûõ ôåðìåíòîâ, â òîì ÷èñëå êàñïàç,
çàïóñêàþùèõ àïîïòîçíûé êàñêàä (ñì. ãëàâó 4). Âòîðîé ïóòü ñâÿçàí ñ
ïîâûøåíèåì ýêñïðåññèè Fas- ðåöåïòîðîâ íà ïîâåðõíîñòè
èíôèöèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ ïîä âîçäåéñòâèåì àêòèâèðîâàííûõ
Ò-ëèìôîöèòîâ. Êàê óæå óïîìèíàëîñü, Fas-R óñèëåííî
ýêñïðåññèðóåòñÿ íà ìåìáðàíå èíôèöèðîâàííûõ âèðóñàìè
ãåïàòîöèòîâ, íî îñîáåííî ÷àñòî èõ îáíàðóæèâàþò íà ãåïàòîöèòàõ,
îêðóæåííûõ ëèìôîöèòàìè íà ãðàíèöå ñòóïåí÷àòîãî íåêðîçà è
ïàðåíõèìû [37].  ñâîþ î÷åðåäü, íà ñîîòâåòñòâóþùèõ ëèìôîöèòàõ
âûÿâëÿåòñÿ ïîâûøåííàÿ ýêñïðåññèÿ Fas-L, ÷òî ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ
çàïóñêà àïîïòîçíîãî êàñêàäà.
Èçâåñòíî, ÷òî Fas-R (APO-1/CD95) ýêñïðåññèðóåòñÿ â ïå÷åíè íà
ãåïàòîöèòàõ, õîëàíãèîöèòàõ, àêòèâèðîâàííûõ çâåçä÷àòûõ
ðåòèêóëîýíäîòåëèîöèòàõ è êóïôåðîâñêèõ êëåòêàõ è ñóùåñòâóåò â
ìåìáðàíîñâÿçàííîé è ðàñòâîðèìîé ôîðìàõ. Ðàñòâîðèìàÿ ôîðìà
Fas-R, âåðîÿòíî, ñëóæèò äëÿ ñâÿçûâàíèÿ Fas-L íå òîëüêî íà ÑD8+öèòîòîêñè÷åñêèõ ëèìôîöèòàõ è NK-êëåòêàõ, íî è ÑD4+-Òëèìôîöèòàõ-õåëïåðàõ 1-ãî òèïà, êîòîðûå, êàê áûëî íåäàâíî
óñòàíîâëåíî, òàêæå ìîãóò ïðîÿâëÿòü öèòîòîêñè÷åñêèå ñâîéñòâà
[82]. Ýêñïðåññèÿ Fas-R íà ìåìáðàíå ãåïàòîöèòîâ èíäóöèðóåòñÿ
ðÿäîì ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ, òàêèõ êàê èíòåðëåéêèíû
(IL-1, -2, -6), èíòåðôåðîíû (ÈÔÍ-γ), ôàêòîðû íåêðîçà îïóõîëè
(TNF-α) è äð., ñåêðåöèÿ êîòîðûõ ñòèìóëèðóåòñÿ öèòîòîêñè÷åñêèìè
ëèìôîöèòàìè.
Òàêèì îáðàçîì, âåðîÿòíî, ÷òî âîñïàëåíèå ëþáîé ïðèðîäû
ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü Fas-R-çàâèñèìîìó ïîâðåæäåíèþ ïå÷åíè.
Áîëåå òîãî, öèòîêèíû ñòèìóëèðóþò óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà
ìîëåêóë Fas-L íà Ò- è NK-ëèìôîöèòàõ. Îñíîâíûì ìåõàíèçìîì
èíèöèàöèè êàê ôèçèîëîãè÷åñêîãî, òàê è ïàòîëîãè÷åñêîãî àïîïòîçà
êëåòîê ïå÷åíè ñ÷èòàþò ïîñëåäîâàòåëüíûé ïðîöåññ ñâÿçûâàíèÿ FasR, îëèãîìåðèçàöèþ êîìïëåêñà è àêòèâàöèþ àäàïòîðíîãî áåëêà
FADD, ÷òî âûçûâàåò àêòèâàöèþ êàñïàçû-8. Íà ýòîì ýòàïå
äàëüíåéøåå ðàçâèòèå àïîïòîçà ìîæåò áûòü çàáëîêèðîâàíî
àêòèâàöèåé ðÿäà ôàêòîðîâ, òàêèõ êàê I-FLICE (ýíäîãåííàÿ
äîìèíàíòíî-íåãàòèâíàÿ ôîðìà êàñïàçû-8), bcl-2 è äð.[24, 40, 83]
(ñì. ãëàâó 4).
174
Èíòåðåñíûå äàííûå áûëè ïîëó÷åíû â ðàáîòå, â êîòîðîé
êóëüòóðó êðûñèíûõ ãåïàòîöèòîâ ïîäâåðãàëè âîçäåéñòâèþ
àêòèâèðîâàííûõ
èíòåðëåéêèíîì-2
NK-êëåòîê
è
ýêñïåðèìåíòàëüíûõ èíãèáèòîðîâ êàñïàç. Ïîäàâëåíèå àêòèâíîñòè
êàñïàç ïðåäîòâðàùàëî àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ, íî ïðè ýòîì
óñèëèâàëàñü èõ ãèáåëü ïîñðåäñòâîì íåêðîçà, ÷òî óêàçûâàåò íà
îïðåäåëåííûé áàëàíñ ìåæäó ýòèìè ïóòÿìè ýëèìèíàöèè êëåòîê,
îñóùåñòâëÿåìûìè èììóííîé ñèñòåìîé [24, 84].
Åùå îäíèì èíäóêòîðîì àïîïòîçà è îáùèì ìåäèàòîðîì
öèòîòîêñè÷íîñòè Ò-ëèìôîöèòîâ è ýíäîòîêñèíîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè
ÿâëÿåòñÿ
TNF-γ.
Ïîêàçàíà
èíòåíñèâíàÿ
ýêñïðåññèÿ
âíóòðèêëåòî÷íîãî äîìåíà åãî ðåöåïòîðà, TNF-R1, â ãåïàòîöèòàõ è
êóïôåðîâñêèõ êëåòêàõ, ïðè ãåïàòèòå ëþáîé ýòèîëîãèè (âèðóñíûé,
àëêîãîëüíûé,
àóòîèììóííûé
è
äð.)
[85].
Àïîïòîç,
èíäóöèðîâàííûé ñâÿçûâàíèåì TNF-γ ñ TNF-R1, ïîäîáíî
âçàèìîäåéñòâèþ Fas-R - Fas-L, òðåáóåò îëèãîìåðèçàöèè ðåöåïòîðà
è ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ÷åðåç ïóòü FADD - êàñïàçà-8, à òàêæå
ñõîäíûé ñ íèì áåëîê TRADD (ñì ãëàâó 4). Èíòåðåñíî, ÷òî
ãèïåðýêñïðåññèÿ TRADD âåäåò íå òîëüêî ê çàïóñêó ïðîöåññîâ
àïîïòîçà, íî è ê àêòèâàöèè ÿäåðíîãî ôàêòîðà NFêÂ, êîòîðûé
ïðåäîòâðàùàåò TNF-èíäóöèðîâàííóþ ãèáåëü êëåòêè [62, 86].
Îòìå÷àþò, ÷òî äàæå â çäîðîâîé ïå÷åíè NK- è CD8+-T-ëèìôoöèòû
ïå÷åíî÷íûõ ñèíóñîèäîâ ñîäåðæàò áîëüøå ìÐÍÊ IL-15, -18, TNF-α,
ÈÔÍ-γ ïî ñðàâíåíèþ ñ ïåðèôåðè÷åñêèìè êëåòêàìè, ÷òî
ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîâûøåííîé ãîòîâíîñòè ê îñóùåñòâëåíèþ
àïîïòîçà ãåïàòîöèòîâ â ñëó÷àå âîçíèêíîâåíèÿ èõ èçìåíåíèé,
íàïðèìåð, ïðè èíôèöèðîâàíèè âèðóñîì [8].
5.3. Õåìîêèíû, ìîëåêóëû àäãåçèè è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ
ïðè âîñïàëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè ïå÷åíè.
Cóùåñòâåííàÿ ðîëü â ïîâðåæäåíèè ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê
ïðèíàäëåæèò âîñïàëèòåëüíûì ïðîöåññàì, ñîïðîâîæäàþùèì
ìíîãèå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè, òàêèå, êàê àëêîãîëüíûé è òîêñè÷åñêèé
ãåïàòèòû, èøåìè÷åñêîå/ðåïåðôóçèîííîå ïîâðåæäåíèÿ, ñåïñèñ è
äð. Ïðè ýòîì ìàêðîôàãè è íåéòðîôèëû òðàíñïîðòèðóþòñÿ â
ñèñòåìó êðîâåíîñíûõ ñîñóäîâ ïå÷åíè, ÷òî ñîïðÿæåíî ñ ðàçâèòèåì
ëîêàëüíûõ ïîâðåæäåíèé òêàíè èç-çà ïîñòîÿííîãî âîçäåéñòâèÿ
ìåäèàòîðîâ âîñïàëåíèÿ (òàêèõ, êàê TNF-α, èíòåðëåéêèíû, ôàêòîðû
êîìïëåìåíòà, PAF è äð.), âëèÿþùèõ íà ðåãóëÿöèþ β2-èíòåãðèíîâ
íåéòðîôèëîâ [88] è ãåíåðàöèþ ãåïàòîöèòàìè ðàçëè÷íûõ
õåìîêèíîâ (ÑÕÑ, ÑÑ, Ñ è äð.) [89]. Õåìîêèíû - íèçêîìîëåêóëÿðíûå
áåëêè, ðåãóëÿòîðû âîñïàëåíèÿ, õåìîòàêñèñà ëåéêîöèòîâ è
äèôôåðåíöèðîâêè èììóííûõ êëåòîê [90]. Õåìîêèíû è èõ
175
ðåöåïòîðû ÿâëÿþòñÿ âàæíûìè ðåãóëÿòîðàìè èììóíèòåòà,
îñîáåííî ïðè ìèãðàöèè è ëîêàëèçàöèè öèðêóëèðóþùèõ
ëåéêîöèòîâ. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðàêòè÷åñêè ïðè ëþáûõ ïàòîëîãèÿõ
ïå÷åíè íàáëþäàåòñÿ ãèïåðýêñïåññèÿ ðàçëè÷íûõ âèäîâ ýòèõ áåëêîâ
â çàâèñèìîñòè îò îïðåäåëåííîãî ïîäêëàññà ëåéêîöèòîâ. Âûñîêèé
óðîâåíü õåìîêèíîâ îïðåäåëåí â òêàíÿõ è ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ
àëêîãîëüíûì ãåïàòèòîì, àëêîãîëüíûì öèððîçîì è âèðóñíûìè
ãåïàòèòàìè [91]. Íà ðàííèõ ñòàäèÿõ àëêîãîëüíîãî ïîðàæåíèÿ
ïå÷åíè äîìèíèðóþò ÑÕÑ èëè α-õåìîêèíû â ñî÷åòàíèè ñ
íåéòðîôèëàìè, íà áîëåå ïîçäíåé ñòàäèè âîçðàñòàåò óðîâåíü ÑÑ èëè
β-õåìîêèíîâ [92, 93]. Òàê, Biosvert ñ ñîàâò. [94] ïîêàçàëè, ÷òî íà
êîíå÷íîé ñòàäèè HCV-èíôåêöèè â ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè
ïðèñóòñòâîâàëè èíôèëüòðèðîâàííûå ëèìôîöèòû, íà êîòîðûõ áûëè
îáíàðóæåíû â îñíîâíîì ðåöåïòîðû õåìîêèíîâ CCR5, CXCR3 è
CXCR6. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòè âîñïàëèòåëüíûå õåìîêèíû
êîíòðîëèðóþò èíôèëüòðàöèþ Ò-êëåòîê, Â-êëåòîê è NK-êëåòîê â
ïîðàæåííóþ ïå÷åíü [94].
Èçâåñòíî, ÷òî íåéòðîôèëû â ïå÷åíè àêêóìóëèðóþòñÿ â
ñèíóñîèäàõ, àäãåçèðóÿ ê ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì ñîñóäîâ;
ïîêàçàíà âûñîêàÿ öèòîòîêñè÷íîñòü òàêèõ íåéòðîôèëîâ, ñâÿçàííàÿ ñ
èõ ñïîñîáíîñòüþ â îòâåò íà õåìîòàêòè÷åñêèé ñèãíàë ìèãðèðîâàòü â
ìåæñèíóñîèäàëüíóþ (subsinusoidal) îáëàñòü, âûçûâàÿ ïîâðåæäåíèå
òêàíè. Öèòîòîêñè÷íîñòü íåéòðîôèëîâ ïî îòíîøåíèþ ê
ãåïàòîöèòàì îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ó÷àñòèåì ñïåöèôè÷åñêèõ ìîëåêóë
àäãåçèè (ICAM, VCAM, E-ñåëåêòèíà è äð.) [95], êîòîðûå âëèÿþò íà
îòäåëüíûå ýòàïû àäãåçèè è òðàíñìèãðàöèè íåéòðîôèëîâ. [96]. Ïðè
ýòîì ðàçëè÷íûì òèïàì ïå÷åíî÷íûõ êëåòîê ñâîéñòâåííà ðàçíàÿ
ýêñïðåññèÿ êëåòî÷íî-àäãåçèâíûõ ìîëåêóë (ÑÀÌ's) è ðàçíûé
õàðàêòåð èíäóêöèè öèòîêèíîâ [95]. Òàê, äëÿ ñèíóñîèäàëüíûõ
ýíäîòåëèàëüíûõ
êëåòîê
àêòèâàöèÿ
íåéòðîôèëîâ
ïðè
òðàíñìèãðàöèè ñîïðÿæåíà ñ ýêñïðåññèåé Å-ñåëåêòèíà. Â êëåòêàõ
ïîñòñèíóñîèäàëüíûõ âåíóë äâèæåíèå è àäãåçèÿ íåéòðîôèëîâ
çàâèñÿò îò Ð- èëè L-ñåëåêòèíà è ICAM-1.
Äëÿ
ëåéêîöèòîâ
âàæíóþ
ðîëü
â
ïîâðåæäåíèÿõ,
èíäóöèðîâàííûõ íåéòðîôèëàìè, èãðàþò ñîåäèíåíèÿ ñåìåéñòâà β2(ÑD18)-èíòåãðèíîâ, à äëÿ ãåïàòîöèòîâ òðàíñìèãðàöèÿ è àäãåçèÿ
íåéòðîôèëîâ ïðîèñõîäèò ñ ó÷àñòèåì öèòîêèíîâ LFA-1
(CD11a/CD18) è Mac-1 (CD11b/CD18). Íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýòèõ
öèòîêèíîâ, â ÷àñòíîñòè, óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ Mac-1,
ñïîñîáñòâóåò ïîâûøåíèþ àäãåçèè íåéòðîôèëîâ ê êëåòêàììèøåíÿì ÷åðåç ýòîò òðèããåð, à, ñëåäîâàòåëüíî, è ïîâûøåíèþ èõ
öèòîòîêñè÷íîñòè [95].
Ìåõàíèçìû ãåïàòîòîêñè÷íîñòè íåéòðîôèëîâ äî êîíöà íå
176
âûÿñíåíû. Ïîëàãàþò, ÷òî îíè ìîãóò áûòü ñâÿçàíû ñ äåéñòâèåì
ïðîòåàç (íàïðèìåð, ñåðèíîâîé ïðîòåàçû 4) [97] èëè îáðàçîâàíèåì
ÀÔÊ. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî ãåíåðèðóåìûå íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ, ìîãóò
âûçûâàòü îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ â ãåïàòîöèòàõ, "çàïóñêàÿ" íåêðîç
êëåòîê ìåíåå, ÷åì çà 1 ÷àñ [98]. Ìåõàíèçì ïîâðåæäåíèé ìîæåò
âêëþ÷àòü óâåëè÷åíèå ìåìáðàííîé ïðîíèöàåìîñòè, îòêðûòèå
òðàíçèòíûõ ïîð è ðàçðûâ ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû (ñì. ãëàâó
4) [99]. Êðîìå òîãî, ïðîäóöèðîâàííûå íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ
ñïîñîáñòâóþò ðàçâèòèþ âîñïàëåíèÿ â ïå÷åíè ÷åðåç àêòèâàöèþ
òðàíñêðèïöèîííîãî ÿäåðíîãî ôàêòîðà NFκB, êîíòðîëèðóþùåãî
îáðàçîâàíèå öèòîêèíîâ, õåìîêèíîâ è ìîëåêóë àäãåçèè [88, 95].
Öèòîòîêñè÷åñêàÿ ðîëü íåéòðîôèëîâ îò÷åòëèâî âûðàæåíà ïðè
àëêîãîëüíûõ ãåïàòèòàõ, êîãäà àïîïòîçíûå ãåïàòîöèòû îêàçûâàþòñÿ
ñîëîêàëèçîâàííûìè ñ íåéòðîôèëàìè, ÷òî êîððåëèðóåò ñî ñòåïåíüþ
âûðàæåííîñòè òêàíåâîãî ïîðàæåíèÿ [100]. Â ñâÿçè ñ ýòèì
èññëåäîâàòåëè ïîëàãàþò, ÷òî, ýêñòðàâàçàöèÿ íåéòðîôèëîâ è
àïîïòîç ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿþòñÿ êëþ÷åâûìè ïðîöåññàìè â
àëêîãîëüíîì ïîðàæåíèè ïå÷åíè.
Êóïôåðîâñêèå êëåòêè èãðàþò âàæíóþ ðîëü â ïîâðåæäåíèè
ïå÷åíè. Îíè âìåñòå ñ íåéòðîôèëàìè àêòèâèðóþòñÿ ïðè ðàçëè÷íûõ
ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ îðãàíèçìà. Õîðîøåé ìîäåëüþ äëÿ
èçó÷åíèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ ýòèõ òèïîâ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ ñåïòè÷åñêîå
ïîâðåæäåíèå,
ïðè
êîòîðîì
îòìå÷àþò
ñëåäóþùóþ
ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ñîáûòèé: (1) ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè
ïîñòóïèâøåãî ÷åðåç âîðîòíóþ âåíó ýíäîòîêñèíà; (2) àêòèâàöèÿ
êóïôåðîâñêèõ êëåòîê è âûñâîáîæäåíèå èç íèõ ïðîâîñïàëèòåëüíûõ
ìåäèàòîðîâ, òàêèõ êàê õåìîêèíû, öèòîêèíû, âêëþ÷àÿ èíòåðëåéêèíû,
ëåéêîòðèåí Â4 è äð.; (3) âûõîä íåéòðîôèëîâ èç êðîâÿíîãî ðóñëà; (4)
ïðèñîåäèíåíèå àêòèâèðîâàííûõ íåéòðîôèëîâ ê ñèíóñîèäàëüíûì
ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì; ïðè ýòîì ìîëåêóëû àäãåçèè ICAM-1 è
ÅÑÀÌ-1 ñïîñîáñòâóþò ìèãðàöèè ëåéêîöèòîâ â ïàðåíõèìó ïå÷åíè; (5)
ãåíåðàöèÿ àêòèâèðîâàííûìè íåéòðîôèëàìè ÀÔÊ, âûçûâàþùèõ
ïîâðåæäåíèÿ ðàçíîãî òèïà, â òîì ÷èñëå àêòèâàöèþ ïåðåêèñíîãî
îêèñëåíèÿ â ìåìáðàíàõ; (6) ïðîäóöèðîâàíèå ìàêðîôàãàìè ïå÷åíè
ðàçëè÷íûõ òîêñè÷åñêèõ ìåäèàòîðîâ, âûçûâàþùèõ àãðåãàöèþ
òðîìáîöèòîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê ìèêðîòðîìáîçàì; (7) ïîÿâëåíèå â óçêèõ
ñèíóñîèäàõ òðîìáîâ (àãðåãàòîâ èç íåéòðîôèëîâ è òðîìáîöèòîâ) è
ðàçâèòèå ëîêàëüíîé ãèïîêñèè; (8) ïîÿâëåíèå ëîáóëÿðíûõ
íåêðîòè÷åñêèõ ïîðàæåíèé [101].
 öåëîì, öèòîòîêñè÷íîñòü ðÿäà ãóìîðàëüíûõ ôàêòîðîâ ñâÿçàíà ñ
îñîáåííîñòÿìè ñèíóñîèäàëüíûõ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, êîòîðûå,
â îòëè÷èå îò êëåòîê äðóãèõ âèäîâ ýíäîòåëèÿ, ôåíåñòðèðîâàíû è íå
èìåþò áàçàëüíîé ìåìáðàíû.
177
Ïðè íåêîòîðûõ ïîðàæåíèÿõ ïå÷åíè (âåíîçíî-îêêëþçèîííûå
çàáîëåâàíèÿ,
ëåêàðñòâåííûå
ïîðàæåíèÿ)
ïîâðåæäåíèå
ñèíóñîèäàëüíûõ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ íà÷àëüíûì
ýòàïîì èììóííîé ðåàêöèè, îïîñðåäîâàííîé Ò-ëèìôîöèòàìè.
Ñóæåíèå ìàëûõ âíóòðèïå÷åíî÷íûõ âåí ñ ðàçâèòèåì
ìèêðîòðîìáîçîâ âåäåò ê íàðóøåíèþ îòòîêà êðîâè è ðàçâèòèþ
èøåìèè ïå÷åíè ñ âòîðè÷íûì ïîâðåæäåíèåì ãåïàòîöèòîâ.
Òàêèì îáðàçîì, âîñïàëèòåëüíûå ïðîöåññû, ñîïðîâîæäàþùèå
ìíîãèå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè, ÷åðåç àêòèâàöèþ ëèìôîöèòîâ,
íåéòðîôèëîâ, åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ è ñòèìóëÿöèþ ñèíòåçà
ñîîòâåòñòâóþùèõ ìåäèàòîðîâ (öèòîêèíîâ, õåìîêèíîâ) óñóãóáëÿþò
ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè, âûçâàííûå ïåðâîíà÷àëüíî âèðóñàìè,
ýíäî- èëè ýêçîòîêñèíàìè. Ýòè ïîâðåæäåíèÿ ìîãóò ïðèâîäèòü ê
íåêðîçó êëåòîê ïå÷åíè, îñîáåííî åñëè â íèõ âîâëå÷åíû
àêòèâèðîâàííûå íåéòðîôèëû, âëèÿíèþ êîòîðûõ íà ãåïàòîöèòû
ñïîñîáñòâóþò ìîëåêóëû àäãåçèè. Ïîýòîìó òåðàïèÿ, íàïðàâëåííàÿ
íà êîððåêöèþ èììóííîé ñèñòåìû, ìîæåò îêàçàòü âûðàæåííîå
äåéñòâèå ïðè çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè, ñíèæàÿ êëåòî÷íûå
ïîâðåæäåíèÿ è ïðåäîòâðàùàÿ íåêðîç ãåïàòîöèòîâ.
5.4. Ãåïàòîòîêñè÷íîñòü, âûçûâàåìàÿ äèñôóíêöèåé
ìèòîõîíäðèé.
Ñðåäè ðàçëè÷íûõ ôîðì ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè îïðåäåëåííîå ìåñòî
çàíèìàþò ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç (æèðîâàÿ äèñôóíêöèÿ),
íåàëêîãîëüíûé ñòåàòîãåïàòèò è öèòîëèòè÷åñêèé ãåïàòèò [102, 103].
Ýòè ïîâðåæäåíèÿ ñâÿçàíû ñ ïåðâè÷íûìè è âòîðè÷íûìè
äèñôóíêöèÿìè ìèòîõîíäðèé. Íàðóøåíèå ìèòîõîíäðèàëüíîãî βîêèñëåíèÿ ÆÊ â ãåïàòîöèòàõ âûçûâàåò ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç,
õàðàêòåðèçóþùèéñÿ íàêîïëåíèåì â öèòîïëàçìå ìåëü÷àéøèõ
ëèïèäíûõ âåçèêóë òðèãëèöåðèäîâ. Ïîñëåäíèå îáðàçóþòñÿ
âñëåäñòâèå íàêîïëåíèÿ (èç-çà äåôèöèòà îêèñëåíèÿ) ñâîáîäíûõ ÆÊ,
êîòîðûå, ñ îäíîé ñòîðîíû, ýòåðèôèöèðóþòñÿ â òðèãëèöåðèäû, à ñ
äðóãîé, - îáëàäàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè, ñïîñîáñòâóþò
ýìóëüãèðîâàíèþ îáðàçóþùèõñÿ íåïîëÿðíûõ òðèãëèöåðèäîâ,
"îêðóæàÿ" èõ è ñîáèðàÿ â ìåëêèå ëèïèäíûå âåçèêóëû.
Ìèêðîâåçèêóëÿðíûé ñòåàòîç ÿâëÿåòñÿ ãèñòîëîãè÷åñêèì ìàðêåðîì
âûðàæåííûõ ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé, ñâÿçàííûõ ñ îñëàáëåíèåì
ñèíòåçà ÀÒÔ ìèòîõîíäðèÿìè. Èòîãîì äåôèöèòà ýíåðãåòè÷åñêèõ
ñóáñòðàòîâ ìîæåò áûòü ïî÷å÷íîå âîñïàëåíèå, ïàíêðåàòèò, êîìà è
ñìåðòü. Ýòîìó ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü è ñîïóòñòâóþùåå ðàçâèòèå
íåàëêîãîëüíîãî ñòåàòîãåïàòèòà, ñîïðîâîæäàþùåãîñÿ, ïîìèìî
íàçâàííûõ íàðóøåíèé, àêòèâàöèåé ÏÎË [104].
Ðåçêîå ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè âíóòðåííåé ìåìáðàíû
178
ìèòîõîíäðèé äëÿ ýëåêòðîëèòîâ è íèçêîìîëåêóëÿðíûõ ìîëåêóë
îáû÷íî ñî÷åòàåòñÿ ñ êëåòî÷íûì íåêðîçîì, íåçàâèñèìî îò
âíóòðåííåé êîíöåíòðàöèè ÀÒÔ. Íåñïåöèôè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå
âíóòðåííåé ìèòîõîíäðèàëüíîé ìåìáðàíû ÷àùå âñåãî âûçûâàåòñÿ
àêòèâàöèåé ÏÎË èëè äåéñòâèåì ôîñôîëèïàç (ñì. ãëàâó 4).
Ìèòîõîíäðèàëüíûå
öèòîïàòèè
÷àñòî
ñâÿçàíû
ñ
ãåïàòîòîêñè÷íîñòüþ ðÿäà ëåêàðñòâ, òàêèõ, êàê àíòèáèîòèêè
òåòðàöèêëèíîâîãî ðÿäà (äîêñèöèêëèí, õëîðòåòðàöèêëèí,
ìåòàöèêëèí), àíàëîãè íóêëåîçèäîâ, ïðèìåíÿåìûå äëÿ ëå÷åíèÿ
âèðóñíûõ èíôåêöèé (äèäàíîçèí, çàëüöèòàáèí, çèäîâóäèí,
âàëüïðîàò íàòðèÿ). Ìåõàíèçì äàííîãî òèïà ëåêàðñòâåííîãî
ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè îáóñëîâëåí, â îñíîâíîì, òîêñè÷åñêèì
äåéñòâèåì ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íà ìèòîõîíäðèè, à òî÷íåå áëîêàäîé ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè. Íåïîñðåäñòâåííûé
ìåõàíèçì ïîäàâëåíèÿ ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè ó
ïåðå÷èñëåííûõ âûøå ïðåïàðàòîâ ðàçëè÷åí: îò ïðÿìîãî ïîäàâëåíèÿ
(2-ïðîïèëïåíòàíîåâîé êèñëîòîé, ìåòàáîëèòîì âàëüïðîàòà íàòðèÿ)
äî îïîñðåäîâàííîãî (ïðîòèâîâèðóñíûå àíàëîãè íóêëåîçèäîâ).
5.5. Òîêñè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè.
Îñíîâíûå ôîðìû òîêñè÷åñêîãî ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè ìîãóò
áûòü
îñòðûìè
è
õðîíè÷åñêèìè.
Îíè
ïðîÿâëÿþòñÿ
öèòîòîêñè÷åñêèì è õîëåñòàòè÷åñêèì ýôôåêòàìè. Êëèíèêîìîðôîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ òîêñè÷åñêèõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè
âåñüìà ìíîãîîáðàçíû è ïîäðîáíî îïèñàíû â ëèòåðàòóðå [2, 10 - 12,
101, 105 è äð.]. Öèòîëèòè÷åñêèå ïîâðåæäåíèÿ, êàê ïðàâèëî,
ñîïðîâîæäàþòñÿ ñòåàòîçîì è íåêðîçîì ãåïàòîöèòîâ, à
õîëåñòàòè÷åñêèå - ãåïàòîêàíàëèêóëÿðíîé èëè êàíàëèêóëÿðíîé
æåëòóõîé. Õðîíè÷åñêèå ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ïðîÿâëÿþòñÿ
õðîíè÷åñêèì àêòèâíûì ãåïàòèòîì, ñòåàòîçîì, ôîñôîëèïèäîçîì,
öèððîçîì, âåíî-àêêëþçèîííûì ñîñòîÿíèåì, îïóõîëÿìè è ò.ä.
Òîêñè÷åñêèå, â òîì ÷èñëå ëåêàðñòâåííûå, ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè
ñîñòàâëÿþò îêîëî 5% âñåõ åå âîñïàëèòåëüíûõ ïîðàæåíèé, íî
çàíèìàþò ëèäèðóþùèå ïîçèöèè ñðåäè ïðè÷èí îñòðîé
íåäîñòàòî÷íîñòè ïå÷åíè. Ñåãîäíÿ äîêàçàíà ñïîñîáíîñòü ïîâðåæäàòü
ïå÷åíü ó áîëåå ÷åì òðåõñîò ìåäèêàìåíòîâ è íåñêîëüêèõ ìèëëèîíîâ
õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé. Âñå êñåíîáèîòèêè, âûçûâàþùèå
ïîðàæåíèå ïå÷åíè, óñëîâíî ïîäðàçäåëÿþò íà îáëèãàòíûå è
ôàêóëüòàòèâíûå. Ïåðâûå ñïîñîáíû ïîâðåæäàòü ïàðåíõèìó ïå÷åíè â
ñòàíäàðòíûõ äîçàõ; óâåëè÷åíèå äîçû ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîâûøåíèåì
òîêñè÷íîñòè. Ê òàêèì ñîåäèíåíèÿì îòíîñÿòñÿ ÷åòûðåõõëîðèñòûé
óãëåðîä, ïðåïàðàòû ôîñôîðà, õëîðîôîðì, ìóñêàðèí è äð. Ê
îáëèãàòíûì ãåïàòîòîêñèíàì îòíîñÿòñÿ òàêæå ñîåäèíåíèÿ, íå
179
îáëàäàþùèå ïðÿìûì òîêñè÷åñêèì äåéñòâèåì íà ïå÷åíü, íî
ñïîñîáíûå: (1) âûçûâàòü ãåïàòîìåãàëèþ çà ñ÷åò èíäóêöèè
ïå÷åíî÷íûõ ôåðìåíòîâ (ôåíîáàðáèòàë); (2) âûçûâàòü ñòåàòîç èëè
æèðîâóþ
èíôèëüòðàöèþ
ïå÷åíè
(êîðòèçîí);
(3)
òðàíñôîðìèðîâàòüñÿ â ïðîöåññå ìåòàáîëèçìà â ïðîìåæóòî÷íûå
ñîåäèíåíèÿ, îáëàäàþùèå âûñîêîé òîêñè÷íîñòüþ (íàïðèìåð,
ñàëèöèëàòû, ïîëèöèêëè÷åñêèå óãëåâîäîðîäû è äð. [106]).
Äåéñòâèå íà ïå÷åíü ôàêóëüòàòèâíûõ ñîåäèíåíèé íåçàâèñèìî îò
äîçû âûçûâàåò èììóíîîïîñðåäîâàííûå ðåàêöèè, êîòîðûå ëåæàò â
îñíîâå èäèîñèíêðàçèè (íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè ñ÷èòàþò ýòî
àëëåðãè÷åñêîé ðåàêöèåé íà ëåêàðñòâà èëè õèìè÷åñêèå
ñîåäèíåíèÿ). Ê ëåêàðñòâåííûì ïðåäñòàâèòåëÿì ýòîé ãðóïïû
îòíîñÿò òàêèå èçâåñòíûå ñîåäèíåíèÿ, êàê ôòîðîòàí, ìåòèëäîôà,
äîïåãèò, àìèíàçèí, òåòðàöèêëèí, ýðèòðîìèöèí, ôëóêëîêñàöèëëèí,
òðèìåòîïðèì (êîìïîíåíò áèñåïòîëà), ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûå
ñðåäñòâà (èçîíèàçèä, îñîáåííî â ñî÷åòàíèè ñ ðèôàìïèöèíîì) è äð.
Íà÷àëüíûì ýòàïîì èäèîñèíêðàçèè êàê ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî
ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè íà óðîâíå ãåïàòîöèòà ÿâëÿåòñÿ ñâÿçü
ëåêàðñòâåííûõ âåùåñòâ èëè èõ êîìïîíåíòîâ ñ ìåìáðàíîé. Äàëåå
ìåìáðàííûå áåëêè (â ò.÷., öèòîõðîì Ð450), ìîäèôèöèðîâàííûå ïîä
äåéñòâèåì ýòèõ ñîåäèíåíèé, âîñïðèíèìàþòñÿ îðãàíèçìîì â
êà÷åñòâå àíòèãåíà, çàïóñêàþùåãî èììóííûé îòâåò. Îòìå÷åíî, ÷òî
ïîäîáíûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ðàçâèâàþòñÿ ó ëèö ñ ïîâûøåííîé
÷óâñòâèòåëüíîñòüþ, â òîì ÷èñëå îáóñëîâëåííîé ãåíåòè÷åñêè.
 ñëó÷àå èäèîñèíêðàçèè, îòìå÷àþò íåñêîëüêî îñíîâíûõ
ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè èììóíîîïîñðåäîâàííûìè
ðåàêöèÿìè: (1) àêòèâàöèÿ öèòîëèòè÷åñêèõ ëèìôîöèòîâ è NKêëåòîê, îáðàçîâàíèå êëåòî÷íûõ àññîöèàöèé (íàïðèìåð, àäãåçèÿ
íåéòðîôèëîâ ê ñèíóñîèäàëüíûì ýíäîòåëèàëüíûì êëåòêàì,
àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ è äð.); (2) îáðàçîâàíèå íåîàíòèãåíîâ è
àóòîàíòèòåë (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå íîâûõ àíòèãåííûõ
äåòåðìèíàíò ïðè îêèñëèòåëüíîì ïîâðåæäåíèè áåëêîâ, ÷òî ìîæåò
èíèöèèðîâàòü îáðàçîâàíèå öèðêóëèðóþùèõ àíòèòåë); (3) äåéñòâèå
ìåäèàòîðîâ (öèòîêèíû, õåìîêèíû, îêñèä àçîòà); (4) àêòèâàöèÿ
ñèñòåìû êîìïëåìåíòà.
Ìåòàáîëèçì êñåíîáèîòèêîâ â ïå÷åíè ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü
íà òðè ôàçû:
1. Ìåòàáîëèçì ñîåäèíåíèé ñ ó÷àñòèåì ôåðìåíòîâ ÝÐ
(ìèêðîñîìàëüíîé ôðàêöèè ãåïàòîöèòîâ), ìîíîîêñèãåíàç, öèòîõðîì
ñ-ðåäóêòàçû è öèòîõðîìà Ð450, à òàêæå âîññòàíîâëåííîãî ÍÀÄÔ â
êà÷åñòâå êîôàêòîðà.
2. Áèîòðàíñôîðìàöèÿ êñåíîáèîòèêîâ èëè èõ ìåòàáîëèòîâ,
êîòîðàÿ çàêëþ÷àåòñÿ â êîíúþãàöèè ñîåäèíåíèé ñ ýíäîãåííûìè
ìîëåêóëàìè. Ïðîöåññû êîíúþãàöèè êàòàëèçèðóþò ÷àùå âñåãî
180
ÓÄÔ-ãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçà
è
ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçà.
Ïîñëåäíÿÿ îñîáåííî âàæíà äëÿ íåñòàáèëüíûõ ýëåêòðîôèëüíûõ
ìîëåêóë. Ãëþêóðîíèçàöèÿ ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì âèäîì êîíúþãàöèè
ïðè äåòîêñèêàöèè ñîåäèíåíèé. Ñóëüôàòèðîâàíèå, êàê ïðàâèëî,
îáåñïå÷èâàåò ñíèæåíèå òîêñè÷íîñòè è óñêîðåíèå âûâåäåíèÿ
êñåíîáèîòèêîâ. Ìèêðîñîìàëüíàÿ ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçà òåñíî
ñâÿçàíà ñ ñèñòåìîé öèòîõðîìà Ð450, ÷òî ñïîñîáñòâóåò áûñòðîé
èíàêòèâàöèè ðåàêöèîííûõ ìåòàáîëèòîâ êñåíîáèîòèêîâ.
3. Àêòèâíûé òðàíñïîðò è ýêñêðåöèÿ áèîòðàíñôîðìèðîâàííûõ
ïðîäóêòîâ ñ æåë÷üþ è ìî÷îé.
Ïðÿìîå òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå êñåíîáèîòèêîâ èëè èõ àêòèâíûõ
ìåòàáîëèòîâ íà ïå÷åíî÷íûå êëåòêè âûçûâàåò íåêðîç, ðåæå àïîïòîç êëåòîê, è/èëè íàðóøåíèå îáìåíà áèëèðóáèíà íà âñåõ
ýòàïàõ åãî ñèíòåçà èç ãåìà äî ýêñêðåöèè â æåë÷íûå ïðîòîêè,
äèëàòàöèþ ñèíóñîèäîâ èëè âåíîîêêëþçèþ.
Ãåíåç ëåêàðñòâåííûõ ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè ÷àñòî ñîïðÿæåí ñ
ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû,
èíäóöèðóþùèì õàðàêòåðíûå ìåìáðàííûå, à çàòåì è êëåòî÷íûå
íàðóøåíèÿ, âêëþ÷àÿ àêòèâàöèþ ôîñôîëèïàç è ïðîòåàç, ñ
ïîâðåæäåíèåì ìèêðîôèëàìåíòîâ çà ñ÷åò íàðóøåíèÿ èõ ôèêñàöèè ê
ìåìáðàíå è ðåñòðóêòóðèçàöèè àêòèíà, ïðèâîäÿùèå ê
íåêðîòè÷åñêîìó ïîâðåæäåíèþ êëåòêè (ñì. ãëàâó 4). Ïî òàêîìó
ìåõàíèçìó
äåéñòâóþò
ìíîãèå
òîêñè÷íûå
ñîåäèíåíèÿ,
ìåòàáîëèçèðóåìûå ñ ó÷àñòèåì ýòàíîë-èíäóöèðóåìîé ôîðìû
öèòîõðîìà Ð450 2Å1 (CYP2E1), ÷òî ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ
îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà ÷åðåç ãåíåðàöèþ ÀÔÊ. Ïîãèáøèå
ãåïàòîöèòû è êóïôåðîâñêèå êëåòêè îêàçûâàþòñÿ äàëüíåéøèìè
èñòî÷íèêàìè ýíäîòîêñèíîâ.
 ïîâðåæäåíèå ïå÷åíè ïîä âëèÿíèåì ýòàíîëà è äðóãèõ
òîêñèêàíòîâ ìîæåò âíîñèòü âêëàä àêòèâàöèÿ áèîñèíòåçà êîëëàãåíà
ñòåëëàòíûìè êëåòêàìè, ñïîñîáñòâóþùàÿ ðàçâèòèþ ôèáðîçà.
Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòà àêòèâàöèÿ îñóùåñòâëÿåòñÿ ïóòåì
ãåíåðèðèðîâàíèÿ ìåäèàòîðîâ, äèôôóíäèðóþùèõ èç ãåïàòîöèòîâ, à
òàêæå â ðåçóëüòàòå èíäóöèðîâàííîé ýêñïðåññèè öèòîõðîìà Ð450
(CYP2E1) [107, 108].
Äëÿ òîêñèêàíòîâ, ñïîñîáíûõ îáðàçîâûâàòü áåëêîâûå àääóêòû
(íàïðèìåð, àöåòàìèíîôåí), âîçìîæåí è äðóãîé ìåõàíèçì
öèòîòîêñè÷íîñòè, ñîïðÿæåííûé ñ íèòðèðîâàíèåì òèðîçèíà
ïåðîêñèíèòðèòîì, îáðàçóþùèìñÿ â ðåàêöèÿõ îêñèäà àçîòà c
ñóïåðîêñèäíûì ðàäèêàëîì (ñì. ãëàâó 4). Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
ãåïàòîöèòû è ñòåëëàòíûå êëåòêè ñïîñîáíû ýêñïðåññèðîâàòü
èíäóöèáåëüíóþ NO-ñèíòàçó (iNOS) [109], ïðè÷åì àöåòîìèíîôåí
èíäóöèðîâàë ýòîò ôåðìåíò â ãåïàòîöèòàõ êðûñ. Ýòîò ïðîöåññ
ñóììèðóåòñÿ ñ ýêñïðåññèåé ýíäîòåëèàëüíûìè êëåòêàìè äðóãîé
181
ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû (åNOS) è ãåíåðàöèåé ñóïåðîêñèäíîãî
ðàäèêàëà, ÷òî ïðèâîäèò ê îáðàçîâàíèþ ïåðîêñèíèòðèòà,
ñïîñîáíîãî îêèñëÿòü ìîëåêóëû, âûçûâàÿ ìíîæåñòâåííûå
êëåòî÷íûå ïîâðåæäåíèÿ.
NO ìîæåò èíäóöèðîâàòü ëèáî ìåõàíèçì èíòîêñèêàöèè, ëèáî äåòîêñèêàöèè [110, 111]. Ñ ãåïàòîòîêñèíàìè, ïîäîáíûìè
àöåòàìèíîôåíó, áðîìáåíçîëó, õëîðîôîðìó, àëëèëüíûì ñïèðòàì,
êîòîðûå èñòîùàþò ñîäåðæàíèå ãëóòàòèîíà â ïå÷åíî÷íûõ êëåòêàõ,
ïåðîêñèíèòðèò ïðîÿâëÿåò ñâîéñòâà ïðîìîòîðà òîêñè÷íîñòè.
Îäíàêî ñ ãåïàòîòîêñèíàìè, èíäóöèðóþùèìè ÏÎË, íî íå
îêàçûâàþùèìè âëèÿíèå íà ñîäåðæàíèå ãëóòàòèîíà (íàïðèìåð,
CCl4), NO ìîæåò íåéòðàëèçîâàòü ñóïåðîêñèä (ñì. ãëàâó 4), îáðàçóÿ
ïåðîêñèíèòðèò, êîòîðûé çàòåì îáåçâðåæèâàåòñÿ ãëóòàòèîíîì.
Íåäàâíî ïîêàçàíî, ÷òî àêòèâàöèÿ èçîôîðìû iNOS ïðîèñõîäèò
òàêæå â óñëîâèÿõ âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ, è ýòî ïðèâîäèò ê
ïîâûøåíèþ ðàñùåïëåíèÿ ÄÍÊ è ÷àñòîòû ìóòàöèé ãåíîâ â
ãåïàòîöèòàõ, ÷òî ñ÷èòàþò ñóùåñòâåííûì â ïðîãðåññèðîâàíèè
çàáîëåâàíèÿ [112].
Òàêèì îáðàçîì, â çàâèñèìîñòè îò õèìè÷åñêîãî ñòðîåíèÿ
òîêñèêàíòà, à òàêæå äîçû, êðàòíîñòè è äëèòåëüíîñòè âîçäåéñòâèÿ,
ôîðìû ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ìîãóò áûòü ðàçëè÷íûìè. Äåéñòâóÿ â
âûñîêîé äîçå, êñåíîáèîòèê ìîæåò âûçâàòü îñòðîå öèòîòîêñè÷åñêîå
ïîðàæåíèå ïå÷åíè. Ïîäîñòðîå, õðîíè÷åñêîå äåéñòâèå òîêñèêàíòà
ñîïðîâîæäàåòñÿ ôîðìèðîâàíèåì âÿëîòåêóùåãî ïðîöåññà,
ïðèâîäÿùåãî íåðåäêî ê ôèáðîçó, ðóáöîâûì èçìåíåíèÿì â îðãàíå,
íîâîîáðàçîâàíèÿì.
5.6. Ëåêàðñòâåííàÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòü.
 ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå ñîîáùåíèé î
ãåïàòîòîêñè÷íîñòè ðÿäà ëåêàðñòâ, ÷òî ïðèâîäèò äàæå ê èõ îòçûâó ñ
ðûíêà è ñíÿòèþ ñ ïðîèçâîäñòâà. Ïîýòîìó äàííîé ïðîáëåìå â
ïîñëåäíèå ãîäû óäåëÿåòñÿ âñå áîëüøå âíèìàíèÿ [1, 12, 13, 113, 114].
Äëÿ ìíîãèõ ëåêàðñòâ ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè íàáëþäàþòñÿ ðåäêî. Îíè
âîçìîæíû òîëüêî â ñëó÷àÿõ èíäèâèäóàëüíîé íåïåðåíîñèìîñòè
(èäèîñèíêðàçèè), êîòîðàÿ ïðè ïðèìåíåíèè ëåêàðñòâà â
òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ, âñòðå÷àåòñÿ ñ ÷àñòîòîé îò 1 íà 1000 ïàöèåíòîâ
äî 1 íà 100 000 ïàöèåíòîâ. Äëÿ ðÿäà ëåêàðñòâ íàáëþäàåòñÿ ëàòåíòíûé
ïåðèîä ïðîÿâëåíèÿ ãåïàòîòîêñè÷íîñòè (îò 5 äî 90 äíåé).
Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ñîñòàâëÿþò îêîëî 10% îò
âñåõ ïîáî÷íûõ ðåàêöèé îðãàíèçìà, ñâÿçàííûõ ñ ïðèìåíåíèåì
ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ. Íàïðèìåð, â ÑØÀ îíè ÿâëÿþòñÿ
ïðè÷èíîé 2,5-3,0% âñåõ ñëó÷àåâ îñòðî ðàçâèâøåéñÿ æåëòóõè, â
Åâðîïå ýòîò ïîêàçàòåëü íåñêîëüêî âûøå è ñîñòàâëÿåò 3,0-4,0%.
182
Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè ñîñòàâëÿþò 25-28% âñåõ ñëó÷àåâ
ôóëüìèíàíòíîé ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, çàíèìàÿ âòîðîå
ìåñòî ïîñëå âèðóñíûõ çàáîëåâàíèé. Ïîñêîëüêó ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ
îäíèì èç îñíîâíûõ çâåíüåâ áèîòðàíñôîðìàöèè ëåêàðñòâ,
ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ åå âñòðå÷àþòñÿ, ïî-âèäèìîìó, äàæå
÷àùå, ÷åì ïî äàííûì îôèöèàëüíîé ìåäèöèíñêîé ñòàòèñòèêè. Ýòî
îáóñëîâëåíî ðÿäîì ôàêòîðîâ, ñðåäè êîòîðûõ: âîçìîæíîñòü
ëàòåíòíîãî òå÷åíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè,
íåàäåêâàòíàÿ òðàêòîâêà êëèíè÷åñêîé ñèìïòîìàòèêè è êëèíèêîëàáîðàòîðíûõ ïîêàçàòåëåé, íåäîñòàòî÷íî âíèìàòåëüíûé ñáîð è
àíàëèç àíàìíåçà è äð.
Ðåàêöèÿ ïå÷åíè íà ëåêàðñòâî çàâèñèò îò ìíîãèõ ôàêòîðîâ,
òàêèõ, íàïðèìåð, êàê âîçðàñò è ïîë áîëüíîãî, äîçèðîâêà ïðåïàðàòà,
ñïîñîáû ââåäåíèÿ, èñõîäíîå ñîñòîÿíèå ôóíêöèè ïå÷åíè,
íàñëåäñòâåííîñòü è ò.ä. Õîòÿ ïðè áîëüøèíñòâå ãåïàòîòîêñè÷åñêèõ
ðåàêöèé íàáëþäàåòñÿ íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, ðÿä ëåêàðñòâ
ïîâðåæäàþò æåë÷íûå êàíàëüöû èëè ïðîòîêè, âûçûâàÿ õîëåñòàç áåç
ñåðüåçíîãî èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ. Äðóãèå ëåêàðñòâåííûå
ñðåäñòâà ïîâðåæäàþò ñèíóñîèäàëüíûå èëè ýíäîòåëèàëüíûå
êëåòêè, ÷òî ïðèâîäèò ê âåíîîêêëþçèîííîé áîëåçíè è ñïîñîáñòâóåò
ôîðìèðîâàíèþ ôèáðîçà ïå÷åíè. Ïðè êîìïëåêñíîé òåðàïèè
áèîòðàíñôîðìàöèÿ îäíîãî ëåêàðñòâà ìîæåò íàñëàèâàòüñÿ íà
áèîòðàíñôîðìàöèþ äðóãîãî, ïîýòîìó ëåêàðñòâåííûå êîìáèíàöèè
îáóñëàâëèâàþò âûñîêèé ðèñê áîëåå ñåðüåçíûõ òîêñè÷åñêèõ
ðåàêöèé (íàïðèìåð, èçîíèàçèä - ðèôàìïèöèí, àìîêñèöèëëèí êëàâóëèíîâàÿ êèñëîòà). Â ïàòîãåíåçå ïîâðåæäåíèå èíäóêöèè
ôåðìåíòîâ öèòîõðîìà Ð450 îäíèì èç ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ
ïðèâîäèò ê áûñòðîìó ôîðìèðîâàíèþ òîêñè÷åñêèõ ìåòàáîëèòîâ
äðóãîãî ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà.
Ñîãëàñíî Lee [12], ê íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àþùèìñÿ ìåõàíèçìàì
ëåêàðñòâåííîãî ïîâðåæäåíèÿ êëåòîê ïå÷åíè îòíîñÿò:
1) Äåãðàäàöèÿ ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ñ ó÷àñòèåì öèòîõðîìà
Ð450 è îáðàçîâàíèå ðåàêòèâíûõ ìåòàáîëèòîâ, ñïîñîáíûõ
îáðàçîâûâàòü êîíúþãàòû ñ âíóòðèêëåòî÷íûìè áåëêàìè, âûçûâàÿ
äèñôóíêöèþ âíóòðèêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, íàðóøåíèå èîííîãî
ãðàäèåíòà (ãîìåîñòàçà), ñíèæåíèå óðîâíÿ ÀÒÔ, äåãðàäàöèþ àêòèíà,
íàáóõàíèå è ëèçèñ êëåòêè (íåêðîç).
2) Âîçäåéñòâèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íà òðàíñïîðòíûå
áåëêè êàíàëèêóëÿðíîé ìåìáðàíû è èíèöèàöèÿ õîëåñòàçà ñ
ïîñëåäóþùåé ñòèìóëÿöèåé àïîïòîçà ãåïàòîöèòîâ.
3) Îáðàçîâàíèå àääóêòîâ - êîâàëåíòíîå ïðèñîåäèíåíèå
ìåòàáîëèòîâ, îáðàçóþùèõñÿ â ïðîöåññå äåãðàäàöèè ëåêàðñòâåííîãî
ïðåïàðàòà ê ìîëåêóëå öèòîõðîìà Ð450, èíàêòèâèðóþùåå ôåðìåíò.
183
4) Ìèãðàöèÿ àääóêòîâ ê êëåòî÷íîé ïîâåðõíîñòè è
èíèöèèðîâàíèå èììóííûõ ðåàêöèé (íàïðèìåð, îáðàçîâàíèå
ãàïòåíîâ è àíòèòåë, ïðÿìîå öèòîëèòè÷åñêîå äåéñòâèå NK- è Òêëåòîê).
5) Ðàçâèòèå âòîðè÷íîãî öèòîêèíîâîãî îòâåòà, êîòîðûé, â ñâîþ
î÷åðåäü, èíèöèèðóåò âîñïàëåíèå è äîïîëíèòåëüíûé êàñêàä
èììóííîîïîñðåäîâàííûõ ðåàêöèé, ïðèâîäÿùèõ ê àïîïòîçó
ãåïàòîöèòîâ ñ ó÷àñòèåì Fas è TNF.
6) Âîçäåéñòâèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà íåïîñðåäñòâåííî íà
ìèòîõîíäðèè,
èíèöèèðóþùåå
ðàçîáùåíèå
ðåàêöèé
îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ, èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà ÀÒÔ
è îêèñëåíèÿ æèðíûõ êèñëîò ñ ïîñëåäóþùèì ðàçâèòèåì àöèäîçà è
âíóòðèêëåòî÷íîãî
íàêîïëåíèÿ
òðèãëèöåðèäîâ
â
âèäå
ìèêðîâåçèêóë.
Äî ñèõ ïîð íå âïîëíå ÿñíî, ïî÷åìó ëåêàðñòâî, ïðîâåðåííîå
ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì òðåáîâàíèÿì è ÿâëÿþùååñÿ áåçâðåäíûì äëÿ
áîëüøèíñòâà ïàöèåíòîâ, âäðóã îêàçûâàåòñÿ äëÿ êîãî-òî
ãåïàòîòîêñè÷íûì.  êà÷åñòâå ïðè÷èí îòìå÷àþò âîçìîæíûå
ãåíåòè÷åñêèå âàðèàöèè â èçîôåðìåíòàõ, ñïîñîáñòâóþùèå
îáðàçîâàíèþ
òîêñè÷íûõ
ïîáî÷íûõ
ïðîäóêòîâ,
èëè
êîíôîðìàöèîííûå âàðèàöèè íåêîòîðûõ áåëêîâ, ñïîñîáñòâóþùèå
îáðàçîâàíèþ àääóêòîâ. Òàê, ïðè÷èíó ðàçâèòèÿ èäèîñèíêðàçèè íà
ââîäèìûé ïðåïàðàò ÷àñòè÷íî îáúÿñíÿþò âûÿâëåííûìè â
ïîñëåäíåå âðåìÿ ãåíåòè÷åñêèìè ðàçëè÷èÿìè â êàòàëèòè÷åñêîé
àêòèâíîñòè Ð450 [115]. Íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè ïðåäïîëàãàþò,
÷òî ôàðìàêîãåíîìíûé ïîäõîä â áóäóùåì ïîçâîëèò èñêëþ÷èòü
âîçìîæíûé ðèñê èäèîñèíêðàçèè íà òî èëè èíîå ëåêàðñòâî [12, 116].
 íàñòîÿùåå æå âðåìÿ åäèíñòâåííûì ïóòåì îêàçûâàåòñÿ ñíÿòèå ñ
ðûíêà ëåêàðñòâ ñ ÷àñòûìè ãåïàòîòîêñè÷åñêèìè ïîñëåäñòâèÿìè,
ðåãóëÿðíûé êîíòðîëü ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (ïî ìîíèòîðèíãó
àìèíîòðàíñôåðàç ñûâîðîòêè), íàðÿäó ñ èñïîëüçîâàíèåì
ãåïàòîïðîòåêòîðîâ.
 öåëîì, ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå óíèêàëüíóþ ñïîñîáíîñòü
ïå÷åíè ê ðåãåíåðàöèè, îòìå÷àþò, ÷òî îñòðàÿ ïå÷åíî÷íàÿ
íåäîñòàòî÷íîñòü â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ðàçëè÷íûõ ïîâðåæäàþùèõ
ôàêòîðîâ âîçíèêàåò îáû÷íî â óñëîâèÿõ äèñáàëàíñà ìåæäó
ðåãåíåðàöèåé è ãèáåëüþ êëåòîê [117, 118]. Ñòåïåíü âûðàæåííîñòè
ïîðàæåíèÿ, îñòðîòà âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè çàâèñÿò îò òîãî, ïî
êàêîìó ïóòè èäåò ïîâðåæäåíèå êëåòêè - àïîïòîçà èëè íåêðîçà.
Ïîâðåæäåíèå è ãèáåëü êëåòîê ïå÷åíè îñóùåñòâëÿåòñÿ ÷åðåç
êîìïëåêñ ñëîæíûõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ è ñóùåñòâåííî
óñèëèâàåòñÿ
èììóíîëîãè÷åñêèìè,
âîñïàëèòåëüíûìè
êîìïîíåíòàìè, à òàêæå êñåíîáèîòèêàìè, â òîì ÷èñëå è ëåêàðñòâàìè
184
[114, 119]. Òåì íå ìåíåå, ìíîãî÷èñëåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå
äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá îáðàòèìîñòè êëåòî÷íûõ ïîâðåæäåíèé.
Ðåãåíåðàöèÿ êëåòêè ÷àñòî çàâèñèò îò òåõ æå ïðîöåññîâ, êîòîðûå
âîâëå÷åíû â åå ïîâðåæäåíèå, è íàèáîëåå ñóùåñòâåííûì ôàêòîðîì
â âîññòàíîâëåíèè ôóíêöèé ãåïàòîöèòîâ è ïå÷åíè â öåëîì ÿâëÿåòñÿ
ðåãåíåðàöèÿ è ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí. Ïîíèìàíèå
ìåõàíèçìîâ ýòèõ ïðîöåññîâ ñïîñîáñòâóåò íàïðàâëåííîé
ðàöèîíàëüíîé òåðàïèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 5
1. Lee W.M., Drug-induced hepatotoxity. New Engl J Med. 1995,
333, 118-127.
2. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. Ìåäèöèíà. Ì.1993.
3. Áóåâåðîâ À.Î. Îêñèäàòèâíûé ñòðåññ è åãî ðîëü â
ïîâðåæäåíèÿõ ïå÷åíè. Ðîñ æóðí ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë
êîëîïðîêòîë. 2002, 4, 21-25.
4. Trauner M., Fickert P., Zollner G. Genetic disorders and molecular mechanisms in cholestatic liver disease-a clinical approach. Semin
Gastrointest Dis. 2001, 12, 66-88.
5. Ìèíóøêèí Î.Í. Íåêîòîðûå ãåïàòîïðîòåêòîðû â ëå÷åíèå
çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Ëå÷àùèé âðà÷. 2002, 6, 55-58.
6. Ëîïàòêèíà Ò.Í. Êëèíèêà ãåïàòèòà Ñ. Âèðóñíûå ãåïàòèòû:
äîñòèæåíèÿ è ïåðñïåêòèâû. 1997, 1, 12-16.
7. Òîïîðêîâ À.Ñ. Àëãîðèòì äèàãíîñòèêè è ëå÷åíèÿ òîêñè÷åñêèõ
è àëêîãîëüíûõ ïîðàæåíèé ïå÷åíè. ÐÌÆ. 2004, 12, 445-447.
8. Syntichaki P., Tavernakis N. Death by necrosis. Uncontrollable
catastrophe, or is there order behind the chaos? EMBO Reports. 2002,
3, 604-609.
9. ×èðêèí À.Â. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè.
www.NATURE. ru/db/msg.html.
10. Ó÷àéêèí Â.Ô. Âèðóñíûå ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì. 1994, 89-96.
11. Ëîãèíîâ À.Ñ., Áëîê Þ.Å. Õðîíè÷åñêèå ãåïàòèòû è öèððîçû
ïå÷åíè. Ìåäèöèíà. Ì. 1987.
12. Lee W.M. Drug-induced hepatotoxity. New Engl J Med. 2003,
349, 474-485.
13. Lazarou J., Pomeranz B.H., Corey P.N. Incidence of adverse drug
reactions in hospitalized patients. JAMA. 1998, 279, 1200-1205.
14. Rolo A.P., Palmeira C.M., Holy J.M., Wallace KB. Role of mitochondrial dysfunction in combined bile acid-induced cytotoxicity: the
switch between apoptosis and necrosis. Toxicol Sci. 2004, 79, 196-204.
15. Granato A., Gores G., Vilei M.T., Tolando R., Ferraresso C.,
Muraca M. Bilirubin inhibits bile acid induced apoptosis in rat hepatocytes. Gut. 2003, 52, 1774-1778.
185
16. Patel T., Gores G.J. Inhibition of bile-salt-induced hepatocyte
apoptosis by the antioxidant lazaroid U83836E. Toxicol Appl
Pharmacol. 1997, 142, 116-122.
17. Patel T., Roberts R.L., Jones B.A., Gores G.J. Dysregulation of
apoptosis as a mechanism of liver disease: an overview. Semin Liver Dis.
1998, 18, 105-114.
18. Guicciardi M.E., Gores G.J. Bile acid-mediated hepatocyte apoptosis and cholestatic liver disease. Dig Liver Dis. 2002, 34, 387-392.
19. Higuchi H., Gores G.J. Bile acid regulation of hepatic physiology: IV. Bile acids and death receptors. Am J Physiol Gastrointest Liver
Physiol. 2003, 284, G734-738.
20. Patel T., Bronk S.F., Gores G.J. Increases of intracellular magnesium promote glycodeoxycholate-induced apoptosis in rat hepatocytes.
J Clin Invest. 1994, 94, 2183-2192.
21. Miyoshi H., Rust C., Roberts P.J., Burgart L.J., Gores G.J.
Hepatocyte apoptosis after bile duct ligation in the mouse involves Fas.
Gastroenterology. 1999, 117, 669-677.
22. Sodeman T., Bronk S.F., Roberts P.J., Miyoshi H., Gores G.J. Bile
salts mediate hepatocyte apoptosis by increasing cell surface trafficking
of Fas. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2000, 278, G992-999.
23. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I., Hinson J.A., Pessayre
D., Lemasters J.J. Mechanisms of hepatotoxicity. Toxicol Sci. 2002, 65,
166-176.
24. Faubion W.A., Gores G.J. Death receptors in liver biology and
pathobiology. Hepatology. 1999, 29, 1-4.
25. Higuchi H., Bronk S.F., Takikawa Y., Werneburg N., Takimoto
R., El-Deiry W., Gores G.J. The bile acid glycochenodeoxycholate
induces trail-receptor 2/DR5 expression and apoptosis. J Biol Chem.
2001, 276, 38610-38618.
26. Higuchi H., Bronk S.F., Taniai M., Canbay A., Gores G.J.
Cholestasis increases tumor necrosis factor-related apoptotis-inducing
ligand (TRAIL)-R2/DR5 expression and sensitizes the liver to TRAILmediated cytotoxicity. J Pharmacol Exp Ther. 2002, 303, 461-467.
27. Fischer R., Cariers A., Reinehr R., Haussinger D. Caspase 9dependent killing of hepatic stellate cells by activated Kupffer cells.
Gastroenterology. 2002, 123, 845-861.
28. Gores G.J., Kaufmann S.H. Is TRAIL hepatotoxic? Hepatology.
2001, 34, 3-6.
29. Sokol R.J., Straka M.S., Dahl R., Devereaux M.W., Yerushalmi
B., Gumpricht E., Elkins N., Everson G. Role of oxidant stress in the
permeability transition induced in rat hepatic mitochondria by
hydrophobic bile acids. Pediatr Res. 2001, 49, 519-531.
30. Fang Y., Han S.I., Mitchell C., Gupta S., Studer E., Grant S.,
186
Hylemon P.B., Dent P. Bile acids induce mitochondrial ROS, which
promote activation of receptor tyrosine kinases and signaling pathways
in rat hepatocytes. Hepatology. 2004, 40, 961-971.
31. Borgognone M., Perez L.M., Basiglio C.L., Ochoa J.E., Roma
M.G. Signaling modulation of bile salt-induced necrosis in isolated rat
hepatocytes. Toxicol Sci. 2005, 83, 114-125.
32. Schoemaker M.H., Conde de la Rosa L., Buist-Homan M.,
Vrenken T.E., Havinga R., Poelstra K., Haisma H.J., Jansen P.L.,
Moshage H. Tauroursodeoxycholic acid protects rat hepatocytes from
bile acid-induced apoptosis via activation of survival pathways.
Hepatology. 2004, 39, 1563-1573.
33. Amigo L., Mendoza H., Zanlungo S., Miquel J.F., Rigotti A.,
Gonzalez S., Nervi F. Enrichment of canalicular membrane with cholesterol and sphingomyelin prevents bile salt-induced hepatic damage. J
Lipid Res. 1999, 40, 533-542.
34. Äìèòðèåâà Å.Â., Ìîñêàëåâà Å.Þ., Ñåâåðèí Å.Ñ. Ðîëü àïîïòîçà
â ïàòîãåíåçå õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ  è Ñ. Ðîñ æóðí
ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë êîëîïðîêòîë. 2003, 5, 7-12.
35. Brake A., Gores J., Gores G. Physiology and pathophysiology of
apoptosis in epithelial cells of liver, pancreas and intestine. Am J
Physiol. 1997, 273, 1174-1188.
36. Liu D., Huang Z. Synthetic peptides and non-peptidic molecules
as probes of structure and function of Bcl-2 family proteins and modulators of apoptosis. Apoptosis. 2001, 6, 453-462.
37. Hayashi N., Mita E. Fas system and apoptosis in viral hepatitis.
J Gastroenterol Hepatol. 1997, 12, 223-226.
38. Rivero M., Crespo J., Fabrega E., Casafont F., Mayorga M.,
Gomez-Fleitas M., Pons-Romero F. Apoptosis mediated by the Fas system in the fulminant hepatitis by hepatitis B virus. J Viral Hepat. 2002,
9, 107-113.
39. Kountouras J., Zavos C., Chatzopoulos D. Apoptosis in hepatitis
C. J Viral Hepat. 2003, 10, 335-342.
40. Àðóèí Ë.È. Àïîïòîç è ïàòîëîãèÿ ïå÷åíè. Ðîñ æóðí
ãàñòðîýíòåðîë ãåïàòîë êîëîïðîêòîë. 1998, 2, 6-10.
41. Gil J., Esteban M. Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent proteinkinase R (PKR): mechanism of action. Apoptosis. 2000, 5,
107-114.
42. Freise M., Barth K., Kaul A., Lohman V., Schwarzle V.,
Bartenschlager R. Hepatitis C virus RNA replication is resistant to
tumor necrosis factor-alpha. J Gen Virol. 2003, 84, 1253-1259.
43. Kim H., Lee H., Yun Y. X-gene product of hepatitis B virus
induces apoptosis in liver cells. J Biol Chem. 1998, 273, 381-385.
44. Pollicino T., Terradilos O., Lecoeur H. Gougeon M.L., Buendia
187
M.A. Pro-apoptotic effect of the hepatitis B virus X gene. Biomed
Pharmacother. 1998, 52, 363-368.
45. Honda M., Kaneko S., Shimazaki T., Matsushita E., Kobayashi K.,
Ping L.H., Zhang H.C., Lemon S.M. Hepatitis C virus core protein
induces apoptosis and impairs cell cycle regulation in stably transformed Chinese hamster ovary cells. Hepatology. 2000, 31, 1351-1359.
46. Kalkeri G., Khalap N., Garry R.F., Fermin C.D., Dash S. Hepatitis
C virus protein expression induces apoptosis in HepG2 cells. Virology.
2001, 282, 26-37.
47. Hiramatsu N., Hayashi N., Katayama K. Mochizuki K.,
Kawanishi Y., Kasahara A., Fusamoto H., Kamada T.
Immunohistochemical detection of Fas antigen in liver tissue of patients
with chronic hepatitis C. Hepatology. 1994, 19, 1354-1359.
48. Oksuz M., Akkiz H., Isiksal Y.F., Saydaogluc G., Serin M.,
Kayaselcuk F., Abayli B., Tuncer I. Expression of Fas antigen in liver tissue of patients with chronic hepatitis B and C. Eur J Gastroenterol
Hepatol. 2004, 16, 341-345.
49. Crawford J.M. The liver and the biliary tract. In: Robbins
Pathologic Basis of Disease, 6th edition. (Cotran R.S. ed.). W.B.Sanders,
Philadelphia. 1999, 845-901.
50. Cao Y., Hamada T., Matsui T., Date T., Iwabuchi K. Hepatitis C
core protein interacts with p53-binding protein, 53P2/Bbp/ASPP2, and
inhibits p53-mediated apoptosis. Biochem Biophys Res Commun. 2004,
315, 788-795.
51. Zuckerman E., Zuckerman T., Sahar D ., Streichman S., Attias
D., Sabo E., Yeshurun D., Rowe J. Bcl-2 and immunoglobulin gene
rearrangement in patients with hepatitis C virus infection. Br J
Haematol. 2001, 112, 364-369.
52. Basu A., Meyer K., Ray R.B., Ray R. Hepatitis C virus core protein is necessary for the maintenance of immortalized human hepatocytes. Virology. 2002, 20, 298, 53-62.
53. Cheng P.L., Chang M.H., Chao C.H., Lee Y.H. Hepatitis C viral
proteins interact with Smad3 and differentially regulate TGFbeta/Smad3-mediated transcriptional activation. Oncogene. 2004, 23,
7821-7838.
54. MacEwan D.J. TNF ligands and receptors-a matter of life and
death. Brit J Pharmacol. 2002, 135, 855-875.
55. Miyasaka Y., Enomoto N., Kurosaki M., Sakamoto N., Kanazawa
N., Kohashi T., Ueda E., Maekawa S., Watanabe H., Izumi N., Sato C.,
Watanabe M. Hepatitis C virus nonstructural protein 5A inhibits tumor
necrosis factor-alpha-mediated apoptosis in Huh7 cells. J Infect Dis.
2003, 188, 1537-1544.
56. Otsuka M., Kato N., Taniguchi H., Yoshida H., Goto T., Shiratori
188
Y., Omata M. Hepatitis C virus core protein inhibits apoptosis via
enhanced Bcl-xL expression.Virology. 2002, 296, 84-93.
57. Schwer B., Ren S., Pietschmann T., Kartenbeck J., Kaehlcke K.,
Bartenschlager R., Yen T.S., Ott M. Targeting of hepatitis C virus core
protein to mitochondria through a novel C-terminal localization motif.
J Virol. 2004, 78, 7958-7968.
58. Kim J.S., Ryu J., Hwang S.B., Lee S.Y., Choi S.Y., Park J.
Suppression of ceramide-induced cell death by hepatitis C virus core
protein. J Biochem Mol Biol. 2004, 37, 192-198.
59. Chou A.H., Tsai H.F., Wu Y.Y., Hu C.Y., Hwang L.H., Hsu P.I.,
Hsu P.N. Hepatitis C virus core protein modulates TRAIL-mediated
apoptosis by enhancing bid cleavage and activation of mitochondria
apoptosis signaling pathway. J Immunol. 2005, 174, 2160-2166.
60. Tai D.I., Tsai S.L., Chen Y.M., Chuang Y.L., Peng C.Y., Sheen
I.S., Yeh C.T., Chang K.S., Huang SN, Kuo GC, Liaw YF. Activation of
nuclear factor kappaB in hepatitis C virus infection: implications for
pathogenesis and hepatocarcinogenesis. Hepatology. 2000, 31, 656-664.
61. Bantel H., Schulze-Osthoff K. Apoptosis in hepatitis C virus
infection. Cell Death Differ. 2003, 10, 48-58.
62. OsawaY., Nagaki M., Banno Y., Brenner D., AsanoB., Nozawa Y.,
Mriwaki H., Nakashima S. Tumor necrosis factor alpha-induced interleukin-8 production via NFkB and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt
pathways inhibits cell apoptosis in human hepatocytes. Infect Immun.
2002, 70, 6294-6301
63. Cataldegirmen G., Zeng S., Feirt N., Ippagunta N., Dun H., Qu
W., Rong L.L., Hofmann M.A., Kisinger T. Pachydaki S.I., Jenkins D.G.,
Weinberg A., Lefkowitch J., Rogiers X., Yan S.F., Schmidt A.M., Emond
J.C. RAGE limits regeneration after massive liver injury by coordinated
suppression of TNF-alpha and NF-kappaB. J Exp Med. 2005, 201, 473484.
64. Chiao P.J., Na R., Niu J., Sclabas G.M., Dong Q., Curley S.A. Role
of Rel/NF-kappaB transcription factors in apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells. Cancer. 2002, 95, 1696-1705.
65. Zhu L.X., Liu J., Xie Y.H., Kong Y.Y., Ye Y., Wang C.L., Li G.D.,
Wang Y. Expression of hepatitis C virus envelope protein 2 induces
apoptosis in cultured mammalian cells. World J Gastroenterol. 2004, 10,
2972-2978.
66. Castedo M., Ferri KF., Blanco J., Roumier T., Larochette N.,
Barretina J., Amendola A., Nardacci R., Metivier D., Este J.A.,
Piacentini M., Kroemer G. Human immunodeficiency virus 1 envelope
glycoprotein complex-induced apoptosis involves mammalian target of
rapamycin/FKBP12-rapamycin-associated protein-mediated p53 phosphorylation. J Exp Med. 2001, 194, 1097-1110.
189
67. Brack K., Berk I., Magulski T., Lederer J., Dotzauer A.,
Vallbracht A. Hepatitis A virus inhibits cellular antiviral defense mechanisms induced by double-stranded RNA. J Virol. 2002, 76, 1192011930.
68. Chang L., Karin M. Mammalian MAP kinase signaling cascades.
Nature. 2001, 410, 37-40.
69. Oh J.C., Jeong D.L., Kim IK., Oh S.H. Activatioon of calcium signaling by hepatitis B virus X protein in liver cells. Exp Mol Med. 2003,
35, 3401-3409.
70. Kanda T., Yokosuka O., Imazeki F., Yamada Y., Yamamura T.,
Fukai K., Nagao K., Saisho H. Hepatitis B virus X protein (HBx)induced apoptosis in HuH-7 cells: influence of HBV genotypeand basal
core promoter mutations. Scand J Gastroenterol. 2004, 39, 478-485.
71. Chizari F.V., Ferrari C. Hepatitis B virus immunopathogenesis.
Ann Rev Immunol. 1995, 13, 29-60.
72. Koziel M.J. The role of immune response in the pathogenesis of
hepatitis C virus infection. J Viral Hepat. 1997, 4, 31-41.
73. Schweyer S., Mihm S., Radzun H.J., Hartmann H., Fayyazi A.
Liver infiltrating T lymphocytes express interferon gamma and
inducible nitric oxide synthase in chronic hepatisis C virus infections.
Gut. 2000, 46, 255-259.
74. Bonder C.S., Kubes P. The future of GI and liver research: editorial perspectives. II. modulating leucocyte recruitment to splanchnic
organs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2003, 284, 729-733.
75. Lehoux M., Jacques A., Lusignan S., Lamontagne L. Murine viral
hepatitis involves NK cell depletion associated with virus-induced
apoptosis. Clin Exp Immunol. 2004, 137, 41-51.
76. Lamontagne L., Lusignan S., Page C. Recovery from mouse hepatitis virus infection depends on recruitment of CD8(+) cells rather than
activation of intrahepatic CD4(+)alphabeta(-)TCR(inter) or NK-T cells.
Clin Immunol. 2001, 101, 345-356.
77. Jonsson J.R., Edwards-Smith C.J., Catania S.C., Morotomi Y ,
Hogan P.G., Clouston A.D., Bansal A.S., Lynch SV., Strong R.W.,
Powell EE. Expression of cytokines and factors modulating apoptosis by
human sinusoidal leucocytes. J Hepatol. 2000, 32, 392-398.
78. Rehermann B.B., Lau D., Hoofnage .JH., Chizari F.V. Cytotoxic
T lymphocytes responsiveness after resolution of chronic hepatitis B
virus infection. J Clin Invest. 1996, 97, 1655-1665.
79. Su F., Schneider R.J. Hepatitis B virus HBx protein sensitizes
cells to apoptotic killing by tumor necrosis factor alpha. Proc Natl Acad
Sci USA. 1997, 94, 8744-8749.
80. Terradillos O., Pollicino T., Lecoeur H., Tripodi M., Gougeon
M.L., Tiollais P., Buendia M.A. p-53 independent apoptotic effects of
190
the hepatitis B virus HBx protein in vivo and in vitro. Oncogene. 1998,
17, 2115-2123.
81. Zhu N., Khoshnan A., Schneider R., Matsumoto M., Dennert G.,
Ware C., Lai M.M. Hepatitis C virus core protein binds to cytoplasmic
domain of tumor necrosis factor (TNF) receptor 1 and enhances TNFinduced apoptosis. J Virol. 1998, 72, 3691-3697.
82. O'Connell J. Fas ligand and the fate of antitumour cytotoxic T
lymphocytes. Immunology. 2002, 105, 263-266.
83. Àááàñîâà Ñ.Ã., Ëèïêèí Â.Ì., Òðàïåçíèêîâ Í.Í., Êóøëèíñêèé
Í.Å. Ñèñòåìà FAS-FASL â íîðìå è ïàòîëîãèè. Âîïð áèîë ìåä ôàðì
õèìèè. 1999, 3, 3-17.
84. Rust C., Gores G.J. Apoptosis and liver disease. Am J Med. 2000,
108, 567-574.
85. Jo M., Kim T.H., Seol D.W., Esplen J.E., Dorko K., Billiar T.R.,
Strom S.C. Apoptosis induced in normal human hepatocytes by tumor
necrosis factor-related apoptosis-induced ligand. Nat Med. 2000, 6, 564567.
86. Morgan M., Thorburn J., Pandolfi PP., Thorburn A. Nuclear and
cytoplasmic shuttling of TRADD indyces apoptosis via different mechanisms. J Cell Biol. 2002, 157, 975-984.
87. Kmiec Z. Cooperation of liver cells in health and disease. Adv
Anat Embryol Cell Biol. 2001, 161, 1-151.
88. Jaeschke H., Smith C.W. Mechanism of neutrophyl-induced
parenchymal cell injury. J Leukoc Biol. 1997, 61, 647-653.
89. Lawson J.A., Farhood A., Hopper R.D., Bajt M.L., Jaeschke H.
The hepatic inflammatory response after acetaminophen overdose. Role
of neutrophils. Toxicol Sci. 2000, 54, 509-516.
90. Olson T.S., Ley K. Chemokines and chemokine receptors in
leukocyte trafficking. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2002,
283, 7-28.
91. McClain C.J., Song Z., Barve S.S., Hill D.B. Deaciuc I. Recent
advances in alcoholic liver disease. IV. Dysregulated cytokine metabolism in alcoholic liver disease. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.
2004, 287, 497-502.
92. Bone-Larson C.L., Simpson K.J., Colletti L.M., Lukacs N.W,
Chen S.C., Lira S., Kunkel S.L., Hogaboam C.M. The role of chemokines
in the immunopathology of liver. Immunol Rev. 2000, 177, 8-20.
93. Bautista A.P. Impact of alcohol on the ability of Kupffer cells to
produce chemokines and its role in alcoholic liver disease. J
Gastroenterol Hepatol. 2000, 15, 349-356.
94. Boisvert J., Kunkel E.J., Campbell J.J., Keeffe E.B., Butcher E.C.,
Greenberg H.B. Liver-infiltrating lymphocytes in end-stage hepatitis C
virus: subsets, activation status, and chemokine receptor phenotypes. J
191
Hepatol. 2003, 38, 67-75.
95. Jaeshke H. Cellular adhesive molecules: regulation and functional significance in the pathogenesis of liver diseases. Am J Physiol
Gastrointest Liver Physiol. 1997, 273, 602-611.
96. Essani N.A., Bajt M.L., Vondervecht S.L., Farhood A., Jaeschke
H. Transcriptional activation of vascular ell adhesive molecule-1
(VCAM-1) gene in vivo and its role in the pathophysiology of neutrophil-induced liver injury in murine endotoxin shock. J immunol.
1997, 158, 5941-5948.
97. Patel T., Gores G., Kaufmann S.H. The role of proteases during
apoptosis. FASEB J. 1996, 10, 587-597.
98. Shibuya H., Ohkohchi N., Tsukamoto S., Satomi S. Tumor necrosis factor-induced, superoxide-mediated neutrophil accumulation in
cold ischemic/reperfused rat liver. Hepatology. 1997, 26, 113-120.
99. Lemasters J.J. V. Necrapoptosis and mitochondrial permeability
transition: shared pathways to necrosis and apoptosis. Am J Physiol.
1999, 276, 1-6.
100. Ziol M., Tepper M., Lohez M., Arcangeli G., Ganne N.,
Christidis C., Trinchet J.C., Beaugrand M., Guillet J.G., Guettier C.
Clinical and biological relevance of hepatocyte apoptosis in alcoholic
hepatitis. J Hepatol. 2001, 34, 254-260.
101. Losser M.R., Payen D. Mechanisms of liver damage. Semin
Liver Dis. 1996, 16, 357-367.
102. Èâàøêèí Â.Ò., Øóëüïåêîâà Þ.Î. Íåàëêîãîëüíûé
ñòåàòîãåïàòèò. ÐÌÆ. Áîëåçíè îðãàíîâ ïèùåâàðåíèÿ. 2000, 2, 41-45.
103. James O., Day C.P. Non-alcoholic steatohepatitis (NASH): a disease of emerging identity and importance. J Hepatol. 1998, 29, 495-501.
104. Pessayre D., Berson A., Fromenty B., Mansouri A.
Mitochondria in steatohepatitis. Semin Liver Dis. 2001, 21, 57-69.
105. Íèêèòèí È. Ã., Ñòîðîæàêîâ Ã. È. Ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ
ïå÷åíè. ÐËÑ. Áîëåçíè ïå÷åíè è æåë÷åâûâîäÿùèõ ïóòåé. Ì. 2002,
Èç-âî "Èçäàòåëüñêèé äîì".
106. Øåðëîê Ø., Äóëè Äæ. Çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè è æåë÷íûõ
ïóòåé. Ìåäèöèíà, Ì. 1999, 540-548.
107. Mari M., Wu D., Nieto N., Cederbaum A.L. CYP2E1-dependent toxicity and up-regulation of antioxidant genes. J Biomed. 2001, 8,
52-58.
108. Liu H., Jones B.E., Bradham C., Czaja M. Increased cytochrome
P-450 2E1 expression sensitizes hepatocytes to c-Jun-mediated cell
death from TNF-alpha. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002,
282, 257-266.
109. Muriel P. Regulation of nitric oxide synthesis in the liver. J
Appl Toxicol. 2000, 20, 189-195.
192
110. Gumpricht E., Dahl R., Yerushalmi B., Devereaux M.V., Sokol
R.J. Nitric oxide ameliorates hydrophobic bile acid-induced apoptosis in
isolated rat hepatocytes bynon-mitochondrial pathways. J Biol Chem.
2002, 277, 25823-25830.
111. Kurose I., Miura S., Higuchi Y., Watanabe N., Kamegaya Y.,
Takaishi M., Tomita K., Fukumura D., Kato S., Ishii H. Increased nitric
oxide synthase activity as a cause of mitochondrial dysfunction in rat
hepatocytes: roles for tumor necrosis factor alpha. Hepatology, 1996, 24,
1185-1192.
112. Machida K., Cheng K.T., Sung V.M., Lee K.J., Levine A.M., Lai
M.M. Hepatitis C virus infection activates the immunologic (type II)
isoform of nitric oxide synthase and thereby enhances DNA damage
and mutations of cellular genes. J Virol. 2004, 78, 8835-8843.
113. Meadows M. Serious liver injury: Leading reason for drug
removals, restrictions. FDA Consum. 2001, 35, 8-9.
114. Bissell D.M., Cores G.J., Laskin D.L., Hoofnage J.H. Druginduced liver injury: mechanism and test systems. Hepatology. 2001,
33, 1009-1013.
115. Morgan E.T. Regulation of cytochrome p450 by inflammatory
mediators: why and how? Drug Metab Dispos. 2001, 29, 207-212.
116. Chin K., Kong A.N. Application of DNA microarrays in pharmacogenomics and toxicogenomics. Pharm Res. 2002, 19, 1773-1778.
117. Thomson R.K., Arthur M.J. Mechanisms of liver cell damage
and repair. Eur J Gastroenterol Hepatol. 1999, 11, 949-955.
118. Riordan S.M., Williams R. Mechanisms of hepatocyte injury,
multiorgan failure, and prognostic criteria in acute liver failure. Semin
Liver Dis. 2003, 23, 203-215.
119. Ding W.X., Yin X.M. Dissection of the multiple mechanisms of
TNF-alpha-induced apoptosis in liver injury. J Cell Mol Med. 2004, 8,
445-454.
120. Øàãèäóëèí Ì.Þ, Ïðîòèâîèøåìè÷åñêàÿ çàùèòà
ïå÷åíî÷íîãî
òðàíñïëàíòàíòà
ñ
ïîìîùüþ
ëèïèíà
âîäîðàñòâîðèìîãî ïðåïàðàòà ëèïèäíîé ïðèðîäû. Àâòîðåôåðàò
äèññ. êàíä. Ì. 2005 ã.
193
6. ÌÅÌÁÐÀÍÍÛÅ ÔÅÐÌÅÍÒÍÛÅ ÑÈÑÒÅÌÛ:
ÈÕ ÏÎÂÐÅÆÄÅÍÈÅ È ÐÅÏÀÐÀÖÈß
6.1. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì áèîìåìáðàí.
Ïîâðåæäåíèÿ áèîìåìáðàí è ñîïðÿæåííûõ ñ íèìè ôóíêöèé
áîëüøèíñòâà èíòåãðàëüíûõ è ïðèìåìáðàííûõ áåëêîâ, âêëþ÷àÿ
ðåöåïòîðû, òðàíñïîðòíûå è ñòðóêòóðîîáðàçóþùèå áåëêè,
ôåðìåíòû è ôåðìåíòíûå ñèñòåìû, êàê ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû,
òàê è ìåìáðàí ðàçëè÷íûõ ñóáêëåòî÷íûõ îðãàíåëë, íàðóøàþò
òå÷åíèå ìíîãèõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ è ôóíêöèîíèðîâàíèå êëåòêè
â öåëîì. Â ïîñëåäíèå ãîäû ïîÿâëÿåòñÿ âñå áîëüøå äàííûõ,
äîêàçûâàþùèõ, ÷òî ýôôåêòû ÏÎË ëåæàò â îñíîâå ìíîãèõ
ïîâðåæäàþùèõ ìåõàíèçìîâ, âêëþ÷àÿ ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí è
âñòðîåííûõ â íèõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì. Èíòåðåñ ê ýòèì ïðîöåññàì
îñîáåííî âîçðîñ â ñâÿçè ñ âûÿñíåíèåì èõ ðîëè â ïàòîãåíåçå ìíîãèõ
çàáîëåâàíèé [1].
Îáðàáîòêà ìåìáðàííûõ ïðåïàðàòîâ in vitro ðåàãåíòàìè,
óäàëÿþùèìè èëè ïîâðåæäàþùèìè ìåìáðàííûå ôîñôîëèïèäû
(ýêñòðàêöèÿ îðãàíè÷åñêèìè ðàñòâîðèòåëÿìè, äåçîêñèõîëàòîì èëè
äåéñòâèå ôîñôîëèïàç) ïðèâîäèò ê ðåçêîé èíàêòèâàöèè
ìåìáðàííîñâÿçàííûõ ôåðìåíòîâ. In vivo ïîä äåéñòâèåì
ïîâðåæäàþùèõ ôàêòîðîâ ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ÏÎË.
Âçàèìîäåéñòâèå ïðîäóêòîâ ÏÎË ñ áåëêîâûìè ñòðóêòóðàìè
ïðèâîäèò ê èíàêòèâàöèè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ è ôåðìåíòíûõ
êîìïëåêñîâ, òàêèõ êàê ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçà, öèòîõðîì Ð450,
òðàíñïîðòíûå ÀÒÔ-àçû, àäåíèëàòöèêëàçà, ïåðåíîñ÷èêè ýëåêòðîíîâ
äûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé è äð. [2]. Íàèáîëåå ÷óâñòâèòåëüíû
ê ïåðåêèñíîìó ïîâðåæäåíèþ ìåìáðàííûå ôåðìåíòû, ñîäåðæàùèå
SÍ-ãðóïïû â àêòèâíîì öåíòðå, â ïåðâóþ î÷åðåäü Ca2+-ÀÒÔàçû. Èõ
èíàêòèâàöèÿ èãðàåò áîëüøóþ ðîëü â ïàòîëîãèè êëåòêè, òàê êàê
âûçûâàåò çàìåäëåíèå "îòòîêà" èîíîâ êàëüöèÿ èç êëåòêè,
âûðàâíèâàíèå êîíöåíòðàöèé èîíîâ Ñà2+ âî âíóòðè- è
ìåæêëåòî÷íîì ïðîñòðàíñòâå, íàðóøåíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî
ãîìåîñòàçà è ðàçâèòèå ïîâðåæäåíèé âíóòðèêëåòî÷íûõ è
ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàí (ñì. ãëàâó 4).
 çàâèñèìîñòè îò îáëàñòè ïîðàæåíèÿ ìåõàíèçìû ïîâðåæäåíèÿ
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ìîæíî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà äâå ãðóïïû:
(1) ïîâðåæäåíèå ñàìîãî ôåðìåíòíîãî áåëêà è (2) ïîâðåæäåíèå
ìèêðîîêðóæåíèÿ ôåðìåíòà, âëèÿþùåãî íà àêòèâíîñòü ïîñëåäíåãî.
Ïîìèìî ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, â ïîñëåäíèå ãîäû â
êà÷åñòâå ïðè÷èíû ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòíûõ áåëêîâ
îòìå÷àþò òàêæå ãëèêèðîâàíèå (íàïðèìåð, ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå)
[3]. Ïðè ýòîì â îðãàíèçìå â êà÷åñòâå êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèè
ìîæåò íàáëþäàòüñÿ íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ãåíîâ
194
ôåðìåíòîâ è ñîîòâåòñòâåííîå èçìåíåíèå èõ êîëè÷åñòâà. Â
÷àñòíîñòè, ýòî ïîêàçàíî äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî
ðåòèêóëóìà ìûøå÷íîé òêàíè ïðè àëêîãîëüíîé ìèîïàòèè.
Ïàòîëîãè÷åñêîå óâåëè÷åíèå êàê êîëè÷åñòâà, òàê è àêòèâíîñòè
ôåðìåíòà ñâÿçûâàþò ñ êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèåé íà
èíäóöèðîâàííûå àëêîãîëåì ìåìáðàííûå ïîâðåæäåíèÿ, âûçâàííûå
îáðàçîâàíèåì àääóêòîâ ìåìáðàííûõ áåëêîâ ñ àöåòàëüäåãèäîì [4].
Íàðóøåíèå ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ãåíîâ ôåðìåíòîâ (ñ
ñîîòâåòñòâóþùèì ïîâûøåíèåì ñèíòåçà) ïîêàçàíî è äëÿ
ïðèìåìáðàííûõ ("çàÿêîðåííûõ") ñåðèíîâûõ ïðîòåàç â óñëîâèÿõ
îïóõîëåâîãî ðîñòà. Â íîðìàëüíûõ êëåòêàõ àêòèâíîñòü ýòèõ
ôåðìåíòîâ íå îáíàðóæèâàåòñÿ [5].
Ïîâðåæäåíèå ìåìáðàííûõ áåëêîâ íàáëþäàëè â êëåòêàõ ìèîêàðäà
ïðè èøåìèè è ðåïåðôóçèè. Ïðè ýòîì ïðîèñõîäèëî ðàçîáùåíèå
îñîáåííî âàæíûõ äëÿ ñîêðàòèòåëüíîé äåÿòåëüíîñòè ìèîêàðäà Ñà2+- è
Na+,K+-ÀÒÔàç - â ðåçóëüòàòå êàê àíîêñèè, òàê è äåéñòâèÿ
ñóïåðîêñèäîâ, ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, è ïåðîêñèíèòðèòîâ,
îáðàçóþùèõñÿ ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñóïåðîêñèäîâ ñ îêñèäîì àçîòà [6].
 íàñòîÿùåå âðåìÿ âîçäåéñòâèå ÀÔÊ ñ÷èòàþò óíèâåðñàëüíûì
ìåõàíèçìîì ïîâðåæäåíèÿ êàê áåëêîâûõ, òàê è ëèïèäíûõ
êîìïîíåíòîâ ìåìáðàíû [7] (ñì. ãëàâó 4). Îñîáåííî ñóùåñòâåííûì
ÿâëÿåòñÿ â ýòîì îòíîøåíèè ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå ëåãêî
äèôôóíäèðóþùåé ìîëåêóëû Í2Î2. Îêèñëèòåëüíûå ïîâðåæäåíèÿ
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ñóììèðóþòñÿ ñ èíãèáèðóþùèì äåéñòâèåì
íà èõ àêòèâíîñòü èçìåíåíèé ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ
ëèïèäíîãî ñëîÿ ìåìáðàí (âêëþ÷àÿ àííóëÿðíûå ëèïèäû), êîòîðûå
ïðîèñõîäÿò çà ñ÷åò ïðîöåññîâ ÏÎË è âîçäåéñòâèÿ ýíäîãåííûõ
ôîñôîëèïàç [7, 8] (ñì. ãëàâó 4).
 îñíîâå íàðóøåíèÿ àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ïðè
ïîâðåæäåíèè ôîñôîëèïèäíîãî áèñëîÿ ëåæàò ðàçëè÷íûå
ìåõàíèçìû. Îíè çàâèñÿò îò ñëîæíîñòè ñòðîåíèÿ ôåðìåíòà, åãî
ëîêàëèçàöèè â ìåìáðàíå, õàðàêòåðà êàòàëèçèðóåìîé ðåàêöèè è äð.
Òàê, äëÿ ôåðìåíòîâ, ïðåâðàùàþùèõ ãèäðîôîáíûå ñóáñòðàòû,
ôîñôîëèïèäíûé áèñëîé ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìîé ñðåäîé äëÿ
ðåàêöèè è åãî èçìåíåíèÿ (íàïðèìåð, óñèëåíèå ðèãèäíîñòè ïîä
äåéñòâèåì ÏÎË), ñóùåñòâåííî âëèÿþò íà ýôôåêòèâíîñòü
ôåðìåíòàòèâíûõ ðåàêöèé [9]. Äëÿ îëèãîìåðíûõ ôåðìåíòîâ
ìåìáðàííàÿ ëèïèäíàÿ ìàòðèöà âûïîëíÿåò ðîëü "îðãàíèçàòîðà"
ñóáúåäèíèö, ïîýòîìó åå ïîâðåæäåíèå íàðóøàåò ïðîñòðàíñòâåííîå
âçàèìîðàñïîëîæåíèå ïðîòîìåðîâ è êîîðäèíàöèþ îòäåëüíûõ
çâåíüåâ ôåðìåíòàòèâíîãî ïðîöåññà. Ýòî ïîêàçàíî, íàïðèìåð, äëÿ
ìèêðîñîìàëüíîé
ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû,
ñîñòîÿùåé
èç
êàòàëèòè÷åñêîãî è òðàíñïîðòíîãî áåëêîâ, äëÿ ïðîÿâëåíèÿ
195
àêòèâíîñòè êîòîðûõ íåîáõîäèìû ÔÕ è ÔÝ ñîîòâåòñòâåííî;
ãèäðîëèç ýòèõ ÔË ôîñôîëèïàçàìè èíàêòèâèðóåò äàííûé ôåðìåíò
[10].
Êëàññè÷åñêèì ïðèìåðîì ìåìáðàííîãî ëèïèä-çàâèñèìîãî
ôåðìåíòà ÿâëÿåòñÿ Na+,K+-ÀÒÔàçà, õîòÿ òðåáîâàíèÿ ê ëèïèäíîìó
îêðóæåíèþ äëÿ íåå íå ñòîëü ñïåöèôè÷íû è îãðàíè÷èâàþòñÿ
íåîáõîäèìîñòüþ îáåñïå÷åíèÿ àìôèôèëüíîñòè îêðóæåíèÿ è
íèçêîé ìèêðîâÿçêîñòè [11]. Ýòîò ôåðìåíò âêëþ÷àåò êàê
âîäîðàñòâîðèìûå, òàê è òðàíñìåìáðàííûå ñóáúåäèíèöû, êîòîðûå
ïðè ïîâðåæäåíèÿõ ìåìáðàíû ðàçîáùàþòñÿ, èíàêòèâèðóÿ òåì
ñàìûì ôåðìåíò.
Íàðóøåíèå ñòðóêòóðíîé îðãàíèçàöèÿ ëèïèäíîãî áèñëîÿ ìîæåò
òàêæå çàòðóäíÿòü âçàèìîäåéñòâèå ôåðìåíòà ñ ñóáñòðàòàìè,
íàõîäÿùèìèñÿ â âîäíîé ôàçå [9]. Âîçìîæíî è ïðÿìîå âîçäåéñòâèå
ïîâðåæäåííîãî ó÷àñòêà ìåìáðàíû íà ôåðìåíò, ïðèâîäÿùåå ê
èçìåíåíèþ ïîëîæåíèÿ àêòèâíîãî öåíòðà è åãî äîñòóïíîñòè äëÿ
ñóáñòðàòà.
Ýòîò ôàêò îñîáåííî âàæåí äëÿ òàêèõ èíòåãðàëüíûõ ìåìáðàííûõ
áåëêîâ-ôåðìåíîâ,
êàê
β-ãëþêîöåðåáðîçèäàçà,
ÓÄÔãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçà, ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçà, ñòåàðîèë-ÊîÀäåñàòóðàçà è ðÿäà äðóãèõ [12].
Àíàëîãè÷íûì âîçäåéñòâèÿì ïðè ïîâðåæäåíèÿõ ìåìáðàí
ïîäâåðãàþòñÿ è äðóãèå ìåìáðàííûå áåëêè, ó÷àñòâóþùèå â
òðàíñìåìáðàííîì ïåðåíîñå âåùåñòâ è ëèãàíä-ðåöåïòîðíûõ
âçàèìîäåéñòâèÿõ, ÷òî ïðèâîäèò ê íàðóøåíèþ ôóíêöèè êëåòîê.
Íåêîòîðûå èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò âîçìîæíîñòü àäàïòàöèè
êëåòêè, âêëþ÷àÿ ðàáîòó ìåìáðàííûõ áåëêîâ, ê òàêèì
ïîâðåæäåíèÿì çà ñ÷åò ðåàêöèé, îñóùåñòâëÿåìûõ PK C, ÌÀÐÊ è
ìèòîõîíäðèàëüíûìè ÀÒÔ-çàâèñèìûìè êàëüöèåâûìè êàíàëàìè.
Îòêðûòèå ýòèõ êàíàëîâ, íàïðèìåð, âûçûâàåò äåïîëÿðèçàöèþ
ìèòîõîíäðèé, ñíèæàÿ èçáûòî÷íîå íàêîïëåíèå Ñà2+ ïðè
ðåïåðôóçèè, ÷òî ñïîñîáñòâóåò ðåãåíåðàöèè êëåòîê ìèîêàðäà [13]. Â
ñëó÷àå ãëóáîêî çàøåäøåãî ïðîöåññà íàðóøåíèå àêòèâíîñòè
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ìîæåò âûçâàòü òàêèå èçìåíåíèÿ
êëåòî÷íîãî ìåòàáîëèçìà, êîòîðûå ïðèâåäóò ê íåêðîòè÷åñêîé èëè
àïîïòîòè÷åñêîé ãèáåëè êëåòêè è ðàçâèòèþ ïàòîëîãèè â öåëîì.
 ïîñëåäíèå ãîäû îñîáîå âíèìàíèå óäåëÿåòñÿ ðîëè ïðîöåññîâ
âíóòðèêëåòî÷íîé ñèãíàëèçàöèè â ðåãóëÿöèè àêòèâíîñòè
íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Ýòî ïîêàçàíî, â ÷àñòíîñòè, äëÿ
êëþ÷åâîãî
ôåðìåíòà
ïðîöåññîâ
êîàãóëÿöèè
êðîâè
òðàíñìåìáðàííîãî ãëèêîïðîòåèíà, íàçûâàåìîãî "òêàíåâûì
ôàêòîðîì". Ýòîò ôåðìåíò îáíàðóæåí â àäâåíòèöèè êðîâåíîñíûõ
ñîñóäîâ è âî âíóòðåííåé îáëàñòè àòåðîñêëåðîòè÷åñêîé áëÿøêè.
196
Òêàíåâûé ôàêòîð, ýêñïðåññèðîâàííûé íà ìåìáðàíàõ ìîíîöèòîâ è
ìàêðîôàãîâ, ìîæåò ó÷àñòâîâàòü â âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññàõ è â
äåñòàáèëèçàöèè áëÿøêè. Îòìå÷àþò åãî ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê
èíãèáèòîðàì, ñèíòåçèðóåìûì ýíäîòåëèàëüíûìè êëåòêàìè ñîñóäîâ
â ïðîöåññå ñèãíàëèíãà [14].
 áîëüøèíñòâå ðàáîò, îïóáëèêîâàííûõ â îñíîâíîì â 80õ-90-õ ãîäàõ
ïðîøëîãî âåêà, ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü âîññòàíîâëåíèÿ àêòèâíîñòè
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Íàïðèìåð, äîáàâëåíèå ÔÕ
èëè ñìåñè ÔÕ è ëèçîÔÕ ê ïðåïàðàòàì ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñû,
îáðàáîòàííûõ in vitro ôîñôîëèïàçàìè À èëè Ñ, âîññòàíàâëèâàëî
àêòèâíîñòü Ñà2+-ÀÒÔàçû, Na+,K+-ÀÒÔàçû, ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû,
öèòîõðîì b5-ðåäóêòàçû, ÓÄÔ-ãëþêóðîíèëòðàíñôåðàçû, ñòåàðîèëÊîÀ-äåñàòóðàçû, ëèïàçû, ôåíèëàëàíèíãèäðîêñèëàçû; ïîäîáíûå
ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è äëÿ ñôèíãîìèåëèíàçû ìîçãà, β-îêñèáóòèðàòäåãèäðîãåíàçû ìèòîõîíäðèé ñåðäöà áûêà, àöåòèëõîëèíýñòåðàçû
ýðèòðîöèòîâ [15, 16].
 áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ âîññòàíîâëåíèå ôîñôîëèïèäàìè
àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, ïî-âèäèìîìó, íîñèò
íåñïåöèôè÷åñêèé õàðàêòåð, ò.å. äëÿ áîëüøèíñòâà ôåðìåíòîâ íå
ñóùåñòâóåò ñïåöèôè÷åñêîé ïîòðåáíîñòè â îïðåäåëåííîì òèïå ÔË,
è ðåïàðèðóþùóþ ôóíêöèþ ìîãóò âûïîëíÿòü ðàçíûå òèïû ÔË è èõ
ñìåñè [17]. Äëÿ àêòèâíîñòè æå íåêîòîðûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ
îêàçàëñÿ âàæíûì æèðíîêèñëîòíûé ñîñòàâ äîáàâëÿåìûõ ÔË, ÷òî
áûëî ïîêàçàíî äëÿ Ñà2+-ÀÒÔàçû ñàðêîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà
[18]. Àâòîðû ïîëó÷àëè ÷àñòè÷íî î÷èùåííóþ ÀÒÔàçó â êîìïëåêñå ñ
ôîñôîëèïèäàìè, à çàòåì ìîäèôèöèðîâàëè âõîäÿùèå â ñîñòàâ
êîìïëåêñà ÔË. Ïîêàçàíî, ÷òî çàìåíà ñîáñòâåííûõ ÔË íà ÄÏÔÕ
ñíèæàëà àêòèâíîñòü â 8 ðàç ïî ñðàâíåíèþ ñ ÷àñòè÷íî
äåëèïèäèðîâàííûì ôåðìåíòîì, à ïðè çàìåíå íà äèîëåîèë-ÔÕ
ñêîðîñòü ðåàêöèè, íàîáîðîò, âîçðàñòàëà. Äðóãèå àâòîðû òàêæå
îòìå÷àþò ñóùåñòâåííîå òðåáîâàíèå ê âûñîêîé ïîäâèæíîñòè
óãëåâîäîðîäíûõ öåïåé äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ àêòèâíîñòè
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, à â ðÿäå ñëó÷àåâ - ê íàëè÷èþ
îïðåäåëåííîãî ïîâåðõíîñòíîãî çàðÿäà [19].
 ýêñïåðèìåíòàõ in vivo áûëà ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü
âîññòàíîâëåíèÿ ìåìáðàí êëåòîê ïå÷åíè ñ ïîìîùüþ äèåòû,
ñîäåðæàùåé íåíàñûùåííûå ÔË. Òàê, äèåòà ñ ðàñòèòåëüíûì ÔÕ
ïðåäîòâðàùàåò ðàçâèòèå ó æèâîòíûõ õîëåñòàçà, âûçâàííîãî
öèêëîñïîðèíîì À; åãî äåéñòâèå ñâÿçàíî ñ èíãèáèðîâàíèåì ÀÒÔàç
(Na+,K+-, Ca2+-, Mg2+-) [20]. Ïîäîáíûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è äëÿ
äðóãèõ, ìåíåå èçó÷åííûõ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Íàïðèìåð,
îòìå÷àåòñÿ àêòèâèðóþùèé ýôôåêò êèñëûõ ôîñôîëèïèäîâ (ÔÑ, ÔÈ
è ÔÊ) íà ìèîçèíîâóþ ôîñôàòàçó òêàíè ãîðòàíè [21]. Ïîêàçàíà
197
ñïîñîáíîñòü àíèîííûõ ÔË (îñîáåííî ÔÑ) àêòèâèðîâàòü 5ìîíîäåãèäðîãåíàçó ïëàöåíòû ÷åëîâåêà [22], à òàêæå
äåëèïèäèðîâàííóþ ìàëàòäåãèäðîãåíàçó ìèêîáàêòåðèé. Â
ïîñëåäíåì ñëó÷àå îáðàçóåòñÿ àêòèâíûé êîìïëåêñ ôåðìåíòà ñî
ñìåñüþ êàðäèîëèïèíà è ÔÝ [23]. Ñîîáùàåòñÿ òàêæå îá
àêòèâèðóþùåì äåéñòâèè àíèîííûõ ÔË íà ïåðèôåðè÷åñêèå
ìàêðîôàãè [24]. Íà äîáàâëåíèå ôîñôîëèïèäîâ ðåàãèðóåò è
ñîïðÿæåííàÿ ñ G-áåëêîì ðåöåïòîðíàÿ êèíàçà [25].
Òàêèì îáðàçîì, ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí âûçûâàþò èçìåíåíèÿ â
àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, ÷òî ïðèâîäèò ê íàðóøåíèþ
êëåòî÷íûõ ôóíêöèé è ðàçâèòèþ ïàòîëîãèè. Äîáàâëåíèå
ôîñôîëèïèäîâ, êàê ïîêàçàíî â ðÿäå ðàáîò, ñïîñîáñòâóåò
âîññòàíàâëåíèþ àêòèâíîñòè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ.
6.2. Èíàêòèâàöèÿ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ìåìáðàí ÝÐ êàê
ïîêàçàòåëü ïîâðåæäåíèÿ ïå÷åíè è èõ ðåïàðàöèÿ
ôîñôîëèïèäàìè.
 ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ïîêàçàíî ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå
ðàçëè÷íûõ òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ íà ìåìáðàíû ÝÐ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, êëåòîê
ïå÷åíè, è çàùèòíîå äåéñòâèå ÔÕ íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû, â ÷àñòíîñòè
íà öèòîõðîì Ð450 - êëþ÷åâîé ôåðìåíò ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû ïå÷åíè,
ó÷àñòâóþùåé â äåòîêñèêàöèîííûõ è áèîñèíòåòè÷åñêèõ ïðîöåññàõ.
Èçó÷åíèå ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ,
âçàèìîñâÿçè ïîâðåæäåíèÿ ôîñôîëèïèäíîãî êîìïîíåíòà è ñîïóòñòâóþùåé
èíàêòèâàöèè ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ÿâëÿåòñÿ âàæíåéøåé ïðåäïîñûëêîé
äëÿ ïîèñêà ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è
ôóíêöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí [26 - 31]
Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè íàêîïëåíî ìíîãî äàííûõ, ñâèäåòåëüñòâóþùèõ
î òîì, ÷òî ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè, ñîïðîâîæäàþùèåñÿ
èíàêòèâàöèåé öèòîõðîìà Ð450 è îäíîâðåìåííûì íàðóøåíèåì ïðîöåññîâ
ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ ýêçîãåííûõ (ëåêàðñòâà, ÿäû, ïèùåâûå äîáàâêè,
êàíöåðîãåíû è ò. ä.) è ýíäîãåííûõ ñóáñòðàòîâ (ñòåðîèäû, õîëåñòåðèí,
ïðîñòàãëàíäèíû, æèðíûå êèñëîòû), âûçûâàþò íàðóøåíèå ôóíêöèé
ïå÷åíè ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ [29, 32-35].
Ìîíîîêñèãåíàçíàÿ ñèñòåìà ïå÷åíè îêàçàëàñü ÷óâñòâèòåëüíîé ê
äåéñòâèþ öåëîãî ðÿäà òîêñè÷åñêèõ àãåíòîâ, òàêèõ êàê ÷åòûðåõõëîðèñòûé
óãëåðîä (ÑÑl4), ãåëèîòðèí, òèîàöåòàìèä, àëêèëèðóþùèå ñîåäèíåíèÿ,
ðàäèàöèÿ è ò. ä. [29, 36-39].
Õðîíè÷åñêîå ââåäåíèå æèâîòíûì ÑÑl4 øèðîêî èñïîëüçóåòñÿ â êà÷åñòâå
ìîäåëè ïðè èññëåäîâàíèÿõ ðàçâèòèÿ ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè.
Îñîáåííîñòè ïðîÿâëåíèÿ äåéñòâèÿ ýòîãî ÿäà, äàâíî çàèíòåðåñîâàâøèå
èññëåäîâàòåëåé, çàêëþ÷àþòñÿ â åãî âûñîêîé ãåïàòîòîêñè÷íîñòè. Èçâåñòíî,
÷òî êëþ÷åâûì èëè ðåøàþùèì â ïîâðåæäàþùåì ýôôåêòå ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ
198
âîçäåéñòâèå åãî ìåòàáîëèòîâ, âåðîÿòíåå âñåãî, ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, êàê
íàèáîëåå ðåàêöèîííîñïîñîáíûõ ìîëåêóë. Îñíîâíûì ìåõàíèçìîì
ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ ýòîãî ÿäà íà ïå÷åíü ÿâëÿåòñÿ óñêîðåííîå
îáðàçîâàíèå ïåðåêèñåé ëèïèäîâ. Ïðîöåññû ïðåâðàùåíèÿ ÑÑl4 ïðîòåêàþò â
ìåìáðàíàõ ÝÐ ïå÷åíè â ïðèñóòñòâèè ÍÀÄÔÍ [29, 38]. Óñòàíîâëåíî, ÷òî
ââåäåííûé ýêñïåðèìåíòàëüíûì æèâîòíûì ÑÑl4 îáíàðóæèâàåòñÿ âî âñåõ
ìåìáðàíàõ ïå÷åíî÷íîé êëåòêè, íî íàèáîëüøåå åãî êîëè÷åñòâî íàõîäèòñÿ â
ìåìáðàíàõ ÝÐ. ÑÑl4 ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, êàê ñ àïîôåðìåíòîì,
òàê è ñ æåëåçîì ãåìà, ïî òèïó ÑÎ. Ñïåêòðàëüíàÿ êîíñòàíòà ñâÿçûâàíèÿ ÑÑl4
ñ ãèäðîôîáíûì ó÷àñòêîì ñîñòàâëÿåò 0,5 ìÌ, à ñ æåëåçîì - 0,4 ìÌ [40].
Ñâÿçûâàíèå ÿäà ñ öèòîõðîìîì Ð450 èìååò ðåøàþùåå çíà÷åíèå â
ìåõàíèçìå åãî ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ, òàê êàê ÑÑl4 â ïðèñóòñòâèè
ÍÀÄÔÍ âîññòàíàâëèâàåòñÿ äî òðèõëîðìåòèëîâîãî ðàäèêàëà (ÑÑl•3),
êîòîðûé èãðàåò ðîëü èíèöèàòîðà ïðîöåññîâ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ
ÏÍÆÊ â ìåìáðàíàõ. Ïîâðåæäåíèå ñàìîãî öèòîõðîìà Ð450 ïðîèñõîäèò çà
ñ÷åò äâóõ âçàèìîäîïîëíÿþùèõ ìåõàíèçìîâ: (1) íåïîñðåäñòâåííîãî
ïîâðåæäåíèÿ áåëêà ÑÑl•3 ðàäèêàëàìè è (2) ïîâðåæäåíèÿ åãî ëèïèäíîãî
îêðóæåíèÿ â ìåìáðàíå ÝÐ [31, 39]. Ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçîâàííûé íà
öèòîõðîìå Ð450 ðàäèêàë ÑÑl•3 ìîæåò àòàêîâàòü äâîéíûå ñâÿçè
íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò ("ìåòèëåíîâûå ìîñòèêè"), ïðèñîåäèíÿòü
àòîì âîäîðîäà, ïåðåõîäÿ ïðè ýòîì â èíåðòíóþ ìîëåêóëó õëîðîôîðìà
(ÑÍÑl3) è ãåíåðèðóÿ ëèïèäíûå ðàäèêàëû; ïîñëåäíèå, èíèöèèðóÿ öåïü
ïðîöåññîâ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ, ïîâðåæäàþò ìåìáðàíû (ñì.
ãëàâó 4) [37].
Î âîññòàíîâëåíèè ÑÑl4 öèòîõðîìîì Ð450 ñ ó÷àñòèåì ÍÀÄÔÍçàâèñèìîé öåïè ïåðåíîñà ýëåêòðîíîâ ñâèäåòåëüñòâóþò ìíîãî÷èñëåííûå
ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñïåöèôè÷íûå
èíãèáèòîðû öèòîõðîìà Ð450, òàêèå êàê öèàíèä íàòðèÿ èëè SKF-525 À (β,βäèýòèëàìèíîýòèëäèôåíèëïðîïèëàöåòàò), îêàçûâàþò óãíåòàþùåå
äåéñòâèå íà ñêîðîñòü ïðåâðàùåíèÿ ÑÑl4 â ïðåïàðàòàõ ìèêðîñîì è â îïûòàõ
íà æèâîòíûõ [37, 41]. Òàêæå áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî æèâîòíûå, íàõîäÿùèåñÿ
íà ìàëîáåëêîâîé äèåòå, à òàêæå íîâîðîæäåííûå êðûñÿòà è ýìáðèîíû
÷åëîâåêà, â ïå÷åíè êîòîðûõ ñíèæåíî ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà Ð450,
îáëàäàþò íèçêîé ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ ê äåéñòâèþ ÑÑl4 [42]. Â òî æå âðåìÿ,
èíäóêöèÿ ÍÀÄÔÍ-ñïåöèôè÷íîé ñèñòåìû ìåòàáîëèçìà è óâåëè÷åíèå
ýêñïðåññèè öèòîõðîìà Ð450 ïðè ââåäåíèè ôåíîáàðáèòàëà è áåíçïèðåíà,
ðåçêî óñèëèâàþò òîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÑÑl4 [29, 36, 37].
Ïðîîêñèäàíòíîå äåéñòâèå ðàäèêàëîâ, îáðàçóþùèõñÿ èç ÑÑl4, áûëî
ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîäòâåðæäåíî ïðè èññëåäîâàíèè ñêîðîñòè íàêîïëåíèÿ
ìàëîíîâîãî äèàëüäåãèäà â ÍÀÄÔÍ- è àñêîðáàò-çàâèñèìûõ ñèñòåìàõ
ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ÏÍÆÊ â ìèêðîñîìàõ. Ââåäåíèå â èíêóáàöèîííóþ
ñìåñü òåòðàõëîðìåòàíà ñîïðîâîæäàëîñü ïîÿâëåíèåì, â ñëó÷àå ÍÀÄÔÍçàâèñèìîé ñèñòåìû ÏÎË, ïåðåêèñíûõ ïðîäóêòîâ âñëåäñòâèå ðåçêîãî
199
óñèëåíèÿ ðåàêöèé ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ÏÍÆÊ ÑÑl•3 ðàäèêàëàìè [32,
33, 35].
Òàêèì îáðàçîì, îäíèì èç âàæíåéøèõ ýôôåêòîâ ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ
ïðîîêñèäàíòíîå äåéñòâèå åãî ìåòàáîëèòîâ è èíòåíñèôèêàöèÿ ïðîöåññîâ
ÏÎË.  ïå÷åíè óæå â ðàííèå ñðîêè ïîñëå ââåäåíèÿ ÿäà îáíàðóæèâàþòñÿ
ïðîäóêòû ðåàêöèé ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ è ðåçêîå ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ
àðàõèäîíîâîé è äåêîçîãåêñàåíîâîé êèñëîò â sn-2 ïîëîæåíèè îñíîâíûõ
ôîñôîëèïèäíûõ êîìïîíåíòîâ ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà
- ÔÕ è ÔÝ. Îêàçàëîñü òàêæå, ÷òî äàæå íåáîëüøîãî ñíèæåíèÿ ñîäåðæàíèÿ
ýòèõ äâóõ íåíàñûùåííûõ êèñëîò (íà 8-10%) äîñòàòî÷íî äëÿ âûðàæåííîãî
(50%-íîãî) èíãèáèðîâàíèÿ äðóãîãî ìèêðîñîìàëüíîãî ìåìáðàííîãî
ôåðìåíòà - ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû [43]. Ïîêàçàíî, ÷òî ýòîò ôåðìåíò òåðÿåò
ñâîþ àêòèâíîñòü ïîä âëèÿíèåì ÑÑl4 êàê in vitro, òàê è in vivo [44], è ýòîò
ôàêò ñ÷èòàþò ñëåäñòâèåì íàðóøåíèÿ ñòðóêòóðû ãèäðîôîáíûõ ó÷àñòêîâ
ìåìáðàí â ïðîöåññå ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ íåíàñûùåííûõ æèðíûõ
êèñëîò ÔË, êîòîðîå ìîæåò áûòü ÷àñòè÷íî âîññòàíîâëåíî ïóòåì èíêóáàöèè
ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäàìè. Òàê, íà ðèñ. 6.2.1 ïîêàçàíî, ÷òî àêòèâíîñòü
ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû â ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ñíèæåíà è
ñîñòàâëÿåò ~ 25% îò àêòèâíîñòè ôåðìåíòà ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ.
Èíêóáàöèÿ ìèêðîñîì ïå÷åíè îòðàâëåííûõ æèâîòíûõ ñ ôîñôîëèïèäàìè
(ÔÕ) âîññòàíàâëèâàåò àêòèâíîñòü ýòîãî ôåðìåíòà, íî íå ïîëíîñòüþ, à ~ äî
70% îò êîíòðîëÿ [27, 28, 32, 38, 45].
Ðèñ. 6.2.1. Àêòèâíîñòü ãëþêîçî-6
6-ô
ôîñôàòàçû ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ
ÑÑI4, è åå âîññòàíîâëåíèå ïîñëå èíêóáàöèè
in vitro ñ ôîñôîëèïèäàìè
Êðûñàì âíóòðèáðþøèííî îäíîêðàòíî ââîäèëè CCl4 â äîçå 0,1 ìë/100 ã ìàññû. ×åðåç 60 ìèí
àíàëîãè÷íî ââîäèëè ôîñôîëèïèäû â âèäå ëèïîñîì â äîçå 10 ìã/100 ã ìàññû. ×åðåç 24 ÷àñà
æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè.  ìèêðîñîìàõ îïðåäåëÿëè
àêòèâíîñòü ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû, â ñðàâíåíèè ñ òàêîâîé â ìèêðîñîìàõ çäîðîâûõ æèâîòíûõ [45].
1 - êîíòðîëü; 2 - ââåäåíèå CCl4; 3 - ââåäåíèå CCl4 è ôîñôîëèïèäîâ â âèäå ëèïîñîì.
200
Àíàëèç ðåçóëüòàòîâ èññëåäîâàíèé âëèÿíèÿ ÑÑl4 íà êîìïîíåíòû
ýëåêòðîí-òðàíñïîðòíûõ ñèñòåì ïîêàçûâàåò, ÷òî íàèáîëåå
÷óâñòâèòåëüíûì ê äåéñòâèþ äàííîãî ÿäà ÿâëÿåòñÿ öèòîõðîì Ð450.
Äðóãèå êîìïîíåíòû ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû, ÍÀÄÔÍçàâèñèìûå ðåäóêòàçû, èçìåíÿþòñÿ â ãîðàçäî ìåíüøåé ñòåïåíè.
Ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ó æèâîòíûõ, îòðàâëåííûõ
ÑÑl4, íàñòóïàåò î÷åíü áûñòðî è õîðîøî êîððåëèðóåò ñ ïàäåíèåì åãî
äåìåòèëàçíîé àêòèâíîñòè. Òàêîå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå íà
öèòîõðîì Ð450 çàâèñèò îò ïðîîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà ÑÑl4, î ÷åì
ñâèäåòåëüñòâóåò ïàðàëëåëüíîå íàðàñòàíèå ñîäåðæàíèÿ ïðîäóêòîâ
ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ [30 - 33].
Îäíàêî, êðîìå ýòîãî ìåõàíèçìà, äîêàçàíà âîçìîæíîñòü
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 âñëåäñòâèå ïðÿìîãî âîçäåéñòâèÿ íà
íåãî ïðîäóêòîâ ìåòàáîëèçìà ýòîãî ÿäà. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
àíòèîêñèäàíòû, ïðåïÿòñòâóÿ ðàçâèòèþ â ïå÷åíè íåêðîçà è æèðîâîé
äèñòðîôèè, íå ïðåäîòâðàùàþò óìåíüøåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà
Ð450 è ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû - ôåðìåíòîâ, êîòîðûå ïåðâûìè
ïîäâåðãàþòñÿ äåéñòâèþ äàííîãî ÿäà. Â òî æå âðåìÿ SKF 525A íàèáîëåå
òèïè÷íûé
èíãèáèòîð
ìèêðîñîìàëüíîãî
ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ è ìåòàáîëèçìà ÑÑl4 - îêàçûâàåò âûðàæåííîå
çàùèòíîå äåéñòâèå íà öèòîõðîì Ð450, íî ãîðàçäî ìåíüøåå - íà
íåêðîç è æèðîâóþ èíôèëüòðàöèþ. Ýòè äàííûå ìîæíî îáúÿñíèòü
òåì, ÷òî äåéñòâèå òåòðàõëîðìåòàíà ñâÿçàíî íå òîëüêî ñ
îáðàçîâàíèåì âûñîêîðåàêöèîííûõ ëèïèäíûõ ïåðåêèñåé, íî è ñ
ïðÿìûì âëèÿíèåì ìåòàáîëèòîâ ÑÑl4, è, â ïåðâóþ î÷åðåäü, ÑÑl•3
ðàäèêàëà íà ìåìáðàííûå ôåðìåíòû [38, 40, 46].
Òàêèì îáðàçîì, ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè è èõ
ôåðìåíòíûõ ñèñòåì ïðè îòðàâëåíèè ÑÑl4 ÿâëÿåòñÿ ïðèìåðîì
ïàòîëîãèè, ïðè êîòîðîé îáðàçóþùèåñÿ â ìèêðîñîìàëüíîé
ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìå ñâîáîäíîðàäèêàëüíûå ïðîäóêòû
âûçûâàþò íàðóøåíèÿ ëèïèäíîãî è áåëêîâîãî êîìïîíåíòà ìåìáðàí,
âñëåäñòâèå ÷åãî íàðóøàåòñÿ è àêòèâíîñòü âñåé ìîíîîêñèãåíàçíîé
ñèñòåìû. Íàðóøåíèå àêòèâíîñòè ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû â
ñâîþ
î÷åðåäü
ïðèâîäèò
ê
äèñôóíêöèè
ìåìáðàííûõ
âíóòðèêëåòî÷íûõ ñòðóêòóð ãåïàòîöèòîâ, âêëþ÷àÿ ìèòîõîíäðèè,
÷òî óñèëèâàåò ïîâðåæäåíèå êëåòêè â öåëîì [47] (ñì. ãëàâó 4).
Âîçìîæíîñòü
ïîâðåæäàþùåãî
äåéñòâèÿ
ìåòàáîëèòîâ,
îáðàçóþùèõñÿ íà öèòîõðîìå Ð450, ïîêàçàíà è äëÿ äðóãîãî
ãåïàòîòðîïíîãî ÿäà - ãåëèîòðèíà, êîòîðûé, ïîïàäàÿ ñ çåðíîì
õëåáíûõ çëàêîâ â ïèùó ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ, ìîæåò âûçûâàòü
òÿæåëûå ãåíåðàëèçîâàííûå îòðàâëåíèÿ è ïîðàæåíèÿ îòäåëüíûõ
îðãàíîâ è ñèñòåì, îñîáåííî ïå÷åíè.  ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ
áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ââåäåíèå ãåëèîòðèíà ñîïðîâîæäàåòñÿ
201
ðàçâèòèåì òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, à ïðè õðîíè÷åñêîì îòðàâëåíèè öèððîçà ïå÷åíè, ÷òî ñâÿçàíî, êàê è â ñëó÷àå ñ ÑÑl4, ñ ïîâðåæäåíèåì
öèòîõðîìà Ð450 [48]. Ïîä äåéñòâèåì ãåëèîòðèíà íàáëþäàëîñü
ñíèæåíèå ÍÀÄÔÍ-çàâèñèìîé ñêîðîñòè îêèñëåíèÿ ðàçëè÷íûõ
ñóáñòðàòîâ ýòîãî ôåðìåíòà [39, 48]. Ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î
òîì, ÷òî ïðè îòðàâëåíèè ãåëèîòðèíîì, òàê æå êàê è ÑÑl4,
ïðîèñõîäèò
ïîâðåæäåíèå
ìåìáðàí
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî
ðåòèêóëóìà, ÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîòåðåé èìè ôóíêöèîíàëüíîé
àêòèâíîñòè. Ãåëèîòðèí ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450, ñ âûñîêîé
ñïåêòðàëüíîé êîíñòàíòîé ñðîäñòâà (Ês = 35 ìêÌ). Ïðè ýòîì
ïðîèñõîäèò óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè ÏÎË â ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì
ïå÷åíè îòðàâëåííûõ æèâîòíûõ [39]. Ñëåäîâàòåëüíî, ñòèìóëÿöèÿ
ãåëèîòðèíîì ïðîöåññîâ ÏÎË ìåìáðàí ìîæåò áûòü îäíèì èç
ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí ÝÐ è åãî ôåðìåíòíûõ ñèñòåì.
Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû è ïðè èçó÷åíèè äåéñòâèÿ
ôåíîáàðáèòàëà - èíäóêòîðà öèòîõðîìà Ð450 [49].
Äàííûå î âëèÿíèè ÑÑl4, ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà,
ââåäåííûõ êðûñàì, íà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ñ
ïðåâðàùåíèåì åãî â öèòîõðîì Ð420 ïðèâåäåíû íà ðèñ. 6.2.2.
Êðûñàì-ñàìöàì (n=4 â êàæäîé ãðóïïå) ââîäèëè
âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,1 ìë/100 ã ìàññû, èëè
ãåëèîòðèí ïî 20 ìã/100 ã, èëè â òå÷åíèå òðåõ äíåé
ôåíîáàðáèòàë ïî 8 ìã/êã. ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûõ çàáèâàëè,
âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè [49]. Ðåãèñòðèðîâàëè
äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ öèòîõðîìà Ð450
ïðè 37îÑ [52]. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü
öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-ÍÑl áóôåðà, ðÍ 7,4. Îá
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ñóäèëè ïî ïîâûøåíèþ
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè åãî êàðáîêñèêîìïëåêñà ïðè 420 íì.
Ìåäëåííîå âîçðàñòàíèå âåëè÷èíû ∆À(420 - 450)/íìîëü Ð450 â
ìèêðîñîìàõ êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ (êðèâàÿ 1)
ñâèäåòåëüñòâóåò î ñòàáèëüíîñòè öèòîõðîìà Ð450 â
íåïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàíàõ.
Çäåñü è äàëåå (çà èñêëþ÷åíèåì îñîáî îãîâîðåííûõ ñëó÷àåâ)
îøèáêà ñðåäíåé íå ïðåâûøàëà 5%.
Ðèñ. 6.2.2. Âëèÿíèå ââåäåíîãî êðûñàì ÑÑl 4, ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà íà
ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450
Îò÷åòëèâî âèäíî, ÷òî ïðè èíêóáàöèè èçîëèðîâàííûõ
ìèêðîñîì ïå÷åíè ïðè òåìïåðàòóðå 37°Ñ íàáëþäàåòñÿ
îáðàçîâàíèå íåàêòèâíîé ôîðìû ôåðìåíòà - öèòîõðîìà Ð420.
Ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ôåðìåíòà ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ
ÑÑl 4 , ãåëèîòðèí è ôåíîáàðáèòàë, âî ìíîãî ðàç âûøå ïî
ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè.
Òàêèì
îáðàçîì,
âî
âñåõ
ñëó÷àÿõ
îòðàâëåíèÿ
202
ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450
ñëåäóåò
ðàññìàòðèâàòü
êàê
ïîêàçàòåëü
ïðîöåññîâ
ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí. Ìåòîä èçìåðåíèÿ ñêîðîñòè
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûë â äàëüíåéøåì èñïîëüçîâàí
äëÿ ìîíèòîðèíãà ïðîöåññà âîññòàíîâëåíèÿ ïîâðåæäåííûõ
ìåìáðàí ÝÐ ôîñôîëèïèäàìè [50]. Èñïîëüçîâàíèå ýòîãî òåñòà
îêàçàëîñü ïåðñïåêòèâíûì ïðè èññëåäîâàíèè âëèÿíèÿ
ðàçëè÷íûõ ëåêàðñòâåííûõ ñîåäèíåíèé íà ìîíîîêñèãåíàçíóþ
ñèñòåìó è íà ìåìáðàíû ÝÐ [51].
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî èçó÷åíèå ìîëåêóëÿðíûõ
ìåõàíèçìîâ ïîâðåæäåíèÿ ÝÐ, âçàèìîñâÿçè ïîâðåæäåíèÿ
ôîñôîëèïèäíîãî
êîìïîíåíòà
ñ
ñîïóòñòâóþùåé
èíàêòèâàöèåé ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ ñîçäàëî ðåàëüíûå
ïðåäïîñûëêè äëÿ ïîèñêà ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ
âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè ïîâðåæäåííûõ
ìåìáðàí.
Ñ ïîìîùüþ îïèñàííîãî âûøå ìåòîäà îöåíêè ñêîðîñòè
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûëî äîêàçàíî, ÷òî ëèïèäíûé
áèñëîé îêàçûâàåò ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà àêòèâíîñòü
ýòîãî ãåìîïðîòåèíà.  ÷àñòíîñòè, îáíàðóæåíî, ÷òî ñêîðîñòü
èíàêòèâàöèè âîññòàíîâëåííîãî öèòîõðîìà Ð450 ðåçêî
çàìåäëÿåòñÿ ïðè âñòðàèâàíèè åãî â èñêóññòâåííûé áèñëîé,
ñôîðìèðîâàííûé èç ÔÕ èëè èç ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ
ôîñôîëèïèäîâ. Íàèáîëåå ñòàáèëüíûì äàííûé ôåðìåíò áûë
â ïðèñóòñòâèè âåçèêóë, ïðèãîòîâëåííûõ èç ôîñôîëèïèäîâ
ìåìáðàí ìèêðîñîì [28, 52].
Èñõîäÿ èç íåîáõîäèìîñòè ÔË äëÿ àêòèâíîñòè ðÿäà
ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ, áûëè ïðîâåäåíû ýêñïåðèìåíòû ïî
èõ èñïîëüçîâàíèþ äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí
ÝÐ. Ìåìáðàíî-ðåïàðèðóþùåå äåéñòâèå ÔË îöåíèâàëè ïî èõ
ñïîñîáíîñòè çàìåäëÿòü èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450.
Îêàçàëîñü, ÷òî èíêóáàöèÿ ìèêðîñîì èç ïå÷åíè êðûñ,
ïîäâåðãíóòûõ äåéñòâèþ ÷åòûðåõõëîðèñòîãî óãëåðîäà èëè
ãåëèîòðèíà,
ñ
ôîñôàòèäèëõîëèíîâûìè
ëèïîñîìàìè
ïðèâîäèò ê ðåçêîìó çàìåäëåíèþ ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè
äàííîãî ãåìîïðîòåèíà (ðèñ. 6.2.3) [51]. Êàê âèäíî èç
ðèñóíêà, ïðåèíêóáàöèÿ ìèêðîñîì âûäåëåííûõ èç ïå÷åíè
êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl 4 (À) èëè ãåëèîòðèíîì (Á), ñ
ëèïîñîìàìè ïî÷òè â 2 ðàçà çàìåäëÿëà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè
öèòîõðîìà Ð450.
Ïîäîáíûì ýôôåêòîì îáëàäàëè òàêæå ëèïîñîìû,
ïðèãîòîâëåííûå èç ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ ÔË. Áîëåå òîãî,
èíàêòèâèðîâàííûé ïîñëå ýêñòðàêöèè ôîñôîëèïèäîâ
203
Ðèñ. 6.2.3. Äåéñòâèå in vitro ôîñôîëèïèäîâ íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450
ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 (À) è ãåëèîòðèíîì (Á).
Êðûñàì-ñàìöàì (n=4 â êàæäîé ãðóïïå) ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,1 ìë/100 ã ìàññû,
èëè ãåëèîòðèí ïî 20 ìã/100 ã, èëè â òå÷åíèå òðåõ äíåé ôåíîáàðáèòàë ïî 8 ìã/êã. ×åðåç 24 ÷àñà
æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè [49]. Ìèêðîñîìû ïðåèíêóáèðîâàëè ñ
ÔË â ôîðìå ëèïîñîì, 5 ìã ÔË/íìîëü öèòîõðîìà Ð450, 60 ìèíóò ïðè 4îÑ. Ðåãèñòðèðîâàëè
äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ öèòîõðîìà Ð450 ïðè 37îÑ [52]. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü
ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-ÍÑl áóôåðà, ðÍ 7,4. Îá èíàêòèâàöèè
öèòîõðîìà Ð450 ñóäèëè ïî ïîâûøåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè åãî êàðáîêñèêîìïëåêñà ïðè 420
íì. Ìåäëåííîå âîçðàñòàíèå âåëè÷èíû ∆À(420 - 450)/íìîëü Ð450 â ìèêðîñîìàõ êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ
(êðèâàÿ 1) ñâèäåòåëüñòâóåò î ñòàáèëüíîñòè öèòîõðîìà Ð450 â íåïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàëüíûõ
ìåìáðàíàõ [51, 52].
öèòîõðîì Ð450 ìèêðîñîì, âîññòàíàâëèâàë ñâîþ àêòèâíîñòü
ïðè äîáàâëåíèè ñìåñè ìèêðîñîìàëüíûõ ÔË èëè ÔÕ [51].
Ìåìáðàíû ÝÐ ìîãóò áûòü âîññòàíîâëåíû ôîñôîëèïèäàìè
íå òîëüêî ïðè èíêóáàöèè âûäåëåííûõ ìèêðîñîì in vitro , íî
è ïðè èõ ââåäåíèè æèâîòíûì. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ
ãðàôèêîâ (ðèñ 6.2.4), òðåõêðàòíîå âíóòðèáðþøèííîå
ââåäåíèå ÔË êðûñàì, îòðàâëåííûì ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè,
ïðèâîäèò ê âûðàæåííîìó çàìåäëåíèþ èíàêòèâàöèè
ôåðìåíòà, ÷òî îñîáåííî íàãëÿäíî ïðîÿâëÿåòñÿ ïðè
îòðàâëåíèè ÑÑl 4 . Õîòÿ ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ó ïîëó÷àâøèõ
ÔË æèâîòíûõ íå âîçâðàùàëàñü ïîëíîñòüþ ê íîðìàëüíîìó
óðîâíþ, íî îíà âäâîå ñíèçèëàñü ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâîé ó íå
ëå÷åííûõ æèâîòíûõ.  îñíîâå ýòîãî ýôôåêòà ëåæèò
ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ÑÑl 4 ìåìáðàí ôîñôîëèïèäàìè.
Òàêèì îáðàçîì, ÔË, è, â ÷àñòíîñòè, ÔÕ, îáëàäàþò
ðåïàðèðóþùèìè ñâîéñòâàìè è, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450,
ñòàáèëèçèðóþò è åãî, è ñàìó ìåìáðàíó, ÷òî ñíèæàåò ñêîðîñòü
èíàêòèâàöèè ôåðìåíòà. Ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëÿþò
ñ÷èòàòü ýòîò êëàññ ñîåäèíåíèé ïåðñïåêòèâíûì äëÿ ðåïàðàöèè
204
Ðèñ. 6.2.4. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäîâ in vivo íà èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450
ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ CCl4 (À) èëè ãåëèîòðèíîì (Á)
Êðûñàì-ñàìöàì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,2 ìë/100 ã ìàññû (À), èëè ãåëèîòðèí ïî 30 ìã/100 ã (Á).
×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ôîñôîëèïèäû â ôîðìå ëèïîñîì â äîçå 20 ìã ÔË/100 ã,
â òå÷åíèå òðåõ äíåé. ×åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè, ïîëó÷àëè ôðàêöèþ
ìèêðîñîì ïå÷åíè. Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 â
îáëàñòè 400-500 íì ðåãèñòðèðîâàëè â òå÷åíèå 20 ìèíóò ïðè 37îÑ â ñðåäå, ñîäåðæàùåé 0.33 íìîëü
öèòîõðîìà Ð450/ìë, è ðàññ÷èòûâàëè ðàçíèöó ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ àêòèâíîé è íåàêòèâíîé ôîðì
öèòîõðîìà [49, 52].
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí [28, 48, 51, 52].
Íà ýôôåêòèâíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ ÔÕ äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ
ìåìáðàí óêàçûâàëî è åãî ïîçèòèâíîå âëèÿíèå íà àêòèâíîñòü äðóãèõ
ôåðìåíòîâ ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 [44, 53]. Òàê, â
ýêñïåðèìåíòàõ in vivo íà ìîäåëè ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ÑÑl4 áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ëèïîñîìû
èç ÿè÷íîãî ÔÕ ñïîñîáñòâóþò ñòàáèëèçàöèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà
ìåìáðàí, çàìåäëåíèþ èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450, íîðìàëèçàöèè
åãî ãèäðîêñèëàçíîé àêòèâíîñòè, âîññòàíîâëåíèþ àêòèâíîñòè
ãëþêîçî-6-ôîñôàòàçû. Óìåíüøåíèå ãèïåðôåðìåíòåìèè â
ñûâîðîòêå êðîâè ïðè ââåäåíèè êðûñàì, îòðàâëåííûì ÑÑl4,
ëèïîñîì èç ÔÕ óêàçûâàëî íà ñíèæåíèå íåêðîòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ â
ïå÷åíè [54, 55].
 öåëîì, ìíîãî÷èñëåííûìè èññëåäîâàíèÿìè 60-õ - 90-õ ãîäîâ
íà ðàçëè÷íûõ ìîäåëÿõ ãåïàòèòîâ ïîêàçàíî (1) àêòèâíîå âêëþ÷åíèå
ââåäåííîãî ÔÕ â ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ, (2) óñòîé÷èâîñòü òàêèõ
îáîãàùåííûõ ÔÕ ìåìáðàí ê òîêñè÷åñêèì àãåíòàì (ýòàíîë, ÑÑl4,
îðãàíè÷åñêèå ðàñòâîðèòåëè, âûñîêîæèðîâîé ðàöèîí è äð), (3)
ñíèæåíèå ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â ïå÷åíè [51, 54-56].
Òàêèì îáðàçîì, ÔË, â ÷àñòíîñòè, ÔÕ, ìîãóò áûòü ýôôåêòèâíûìè
ñðåäñòâàìè äëÿ ðåïàðàöèè ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí. Êàê ïîêàçàëè
èññëåäîâàíèÿ, íàèáîëåå ïåðñïåêòèâíûìè äëÿ ðåïàðàöèè
205
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿþòñÿ ôîñôîëèïèäû
ðàñòèòåëüíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ (ñîÿ, õëîï÷àòíèê), ñîäåðæàùèå â
áîëüøîì êîëè÷åñòâå ëèíîëåâóþ êèñëîòó [45, 48, 51, 52, 56].
Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè ìîæíî âûäåëèòü íåñêîëüêî ñïîñîáîâ
çàùèòû ìåìáðàííûõ áåëêîâ è ÔË ãåïàòîöèòîâ îò ðàçëè÷íûõ
ïîâðåæäåíèé. Ïåðâûé èç íèõ âêëþ÷àåò ïðèìåíåíèå
àíòèîêñèäàíòíîé òåðàïèè. Âòîðîé ïðåäóñìàòðèâàåò èñïîëüçîâàíèå
SH-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé, è òðåòèé - èñïîëüçîâàíèå ñîáñòâåííî
ôîñôîëèïèäîâ äëÿ ðåïàðàöèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà ìåìáðàí è
ìèêðîîêðóæåíèÿ ìåìáðàííûõ ôåðìåíòîâ. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî
ïðèìåíåíèå àíòèîêñèäàíòîâ è SH-ñîäåðæàùèõ ñîåäèíåíèé
îêàçûâàåò â îñíîâíîì ïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå, òî åñòü îíè
ýôôåêòèâíû, êîãäà SH-ñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ è àíòèîêñèäàíòû
ââîäÿòñÿ äî èëè âìåñòå ñ ÿäîì. Òàê êàê ÷àùå âñåãî ïðè ðàçëè÷íûõ
ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ ìû èìååì äåëî ñ óæå ïîâðåæäåííûìè
ìåìáðàíàìè è ôåðìåíòíûìè ñèñòåìàìè ãåïàòîöèòîâ, òî
íåîáõîäèìîñòü
ïîèñêà
ïðåïàðàòîâ,
ñïîñîáñòâóþùèõ
âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèè óæå ïîâðåæäåííûõ
ìåìáðàí î÷åâèäíà. Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî â êà÷åñòâå
ãåïàòîïðîòåêòîðîâ â íàñòîÿùåå âðåìÿ èñïîëüçóåòñÿ ðÿä ïðåïàðàòîâ
ðàçëè÷íûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ãðóïï, òàêèõ, êàê êîðñèë, ãåïòðàë,
ëåãàëîí, ãåïàòîôàëüê, ýññåíöèàëå è äð., ýôôåêòèâíîñòü èõ îñòàåòñÿ
íåâûñîêîé, ÷òî îïðàâäûâàåò ïîèñê íîâûõ ñîåäèíåíèé äëÿ
âîññòàíîâëåíèÿ ñòðóêòóðû è ôóíêöèé ïîâðåæäåííûõ êëåòîê
ïå÷åíè.
Íàêîïëåííûå ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè äàííûå î ðîëè
áèîìåìáðàí â æèçíåäåÿòåëüíîñòè êëåòêè è îá óíèâåðñàëüíîì
õàðàêòåðå ïîâðåæäåíèé ìåìáðàí ïðè øèðîêîì ñïåêòðå
ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé, ïîçâîëÿþò ïðåäïîëàãàòü, ÷òî:
1) ðåïàðàöèÿ ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí, íåçàâèñèìî îò
ïîâðåæäàþùåãî ôàêòîðà, áóäåò íåñïåöèôè÷íî ïðèâîäèòü ê
íîðìàëèçàöèè êëåòî÷íûõ ôóíêöèé;
2) òàêóþ íåñïåöèôè÷íóþ "ìåìáðàííóþ òåðàïèþ" öåëåñîîáðàçíî
âêëþ÷àòü â ñõåìó ëå÷åíèÿ ìíîãèõ çàáîëåâàíèé, â êîìáèíàöèè ñ
ñîîòâåòñòâóþùåé ñïåöèôè÷åñêîé òåðàïèåé, íàïðàâëåííîé íà
ïðåêðàùåíèå äàííîãî ïàòîëîãè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ.
Ïðè ýòîì íàèáîëåå óíèâåðñàëüíûì ìåìáðàíî-ðåïàðèðóþùèì
àãåíòîì, ñïîñîáíûì âîññòàíàâëèâàòü ëîêàëüíûå äåôåêòû
ìåìáðàíû è òåì ñàìûì âîññòàíàâëèâàòü åå ôóíêöèè è ôóíêöèè
êëåòêè â öåëîì, ÿâëÿþòñÿ èìåííî ôîñôîëèïèäû - êàê
åñòåñòâåííûé ñòðóêòóðîîáðàçóþùèé è ôóíêöèîíàëüíûé
êîìïîíåíò âñåõ áèîìåìáðàí, îñîáåííî íåîáõîäèìûé äëÿ òàêîãî
îðãàíà êàê ïå÷åíü â ñèëó åå óíèêàëüíîé (âûñîêîé)
206
ðåãåíåðèðóþùåé ñïîñîáíîñòè [46].
Ñ äðóãîé ñòîðîíû, äëÿ ïðàêòè÷åñêîé ìåäèöèíû îäíîé èç
àêòóàëüíûõ çàäà÷ ÿâëÿåòñÿ ñîçäàíèå íîâûõ âûñîêîýôôåêòèâíûõ
ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, äëÿ ëå÷åíèÿ òàê
íàçûâàåìûõ "ñîöèàëüíî-çíà÷èìûõ" çàáîëåâàíèé, â ÷àñòíîñòè,
çàáîëåâàíèé ïå÷åíè, è ïðåæäå âñåãî - âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ.
Êàêèì æå äîëæíî áûòü âûñîêîýôôåêòèâíîå ëåêàðñòâî äëÿ
ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ? Ñ îäíîé ñòîðîíû, îíî äîëæíî
âîññòàíàâëèâàòü ñòðóêòóðó è öåëîñòíîñòü ïîâðåæäåííûõ
ãåïàòîöèòîâ, ñ äðóãîé - îáëàäàòü ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòüþ.
Åñëè â îòíîøåíèè ôîñôîëèïèäîâ êàê íàèáîëåå àêòèâíûõ
ñîåäèíåíèé, âîññòàíàâëèâàþùèõ ñòðóêòóðó è ôóíêöèþ
áèîìåìáðàí, íà îñíîâàíèè ïðèâåäåííûõ âûøå äàííûõ, ñîìíåíèé
íå ñóùåñòâóåò, òî â îòíîøåíèè âòîðîãî êîìïîíåíòà ëåêàðñòâà,
îáëàäàþùåãî ïðîòèâîâèðóñíûì ýôôåêòîì, òàêîãî ïðîñòîãî
ðåøåíèÿ íåò. ×èñëî ñîåäèíåíèé ñ ïðîòèâîâèðóñíûì ýôôåêòîì
îãðîìíî [56]. Íàìè íà îñíîâàíèè äåòàëüíîãî àíàëèçà ëèòåðàòóðû, â
êà÷åñòâå òàêîâîãî áûëà âûáðàíà ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà,
îñîáåííîñòè ñâîéñòâ êîòîðîé ðàññìàòðèâàþòñÿ â ñëåäóþùåé ãëàâå.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 6
1. Tampo Y. Studies on membrane factors in iron-supported lipid
peroxidation. Yakugaku Zasshi. 2000, 120, 387-396.
2. Âëàäèìèðîâ Þ.À. Ñâîáîäíûå ðàäèêàëû â áèîëîãè÷åñêèõ
ñèñòåìàõ. Ñîðîñîâñêèé îáðàçîâàòåëüíûé æóðíàë. 2000, 12, 13-19.
3. Jakus V. The role of nonenzymatic glycation and glyco-oxidation
in the development of diabetic vascular complications. Cesk Fysiol.
2003, 52, 51-65.
4. Adachi J., Asano M., Ueno Y., Niemela O., Ohlendieck K., Peters
T.J., Preedy V.R. Alcoholic muscle disease and biomembrane perturbations. J Nutr Biochem. 2003, 14, 616-625.
5. Netzel-Arnett S., Hooper J.D., Szabo R., Madison E.L., Quigley
J.P., Bugge T.H., Antalis T.M. Membrane anchored serine proteases: a
rapidly expanding group of cell surface proteolytic enzymes with
potential roles in cancer. Cancer Metastasis Rev. 2003, 22, 237-258.
6. Salvemini D., Cuzzocrea S. Oxidative stress in septic shock and
disseminated intravascular coagulation. Free Radic Biol Med. 2002, 33,
1173-1185.
7. Bergamini C.M., Gambetti S., Dondi A., Cervellati C. Oxygen,
reactive oxygen species and tissue damage. Curr Pharm Des. 2004, 10,
1611-1626.
8. Palsdottir H., Hunte C. Lipids in membrane protein structures.
Biochim Biophys Acta. 2004, 1666, 2-18.
207
9. Lee A.G. How lipids affect the activities of integral membrane
proteins. Biochim Biophys Acta. 2004, 1666, 62-87.
10. Gelb M.H., Min J.H., Jain M.K. Do membrane-bound enzymes
access their substrates from the membrane or aqueous phase: interfacial
versus non-interfacial enzymes. Biochim Biophys Acta. 2000, 1488, 2027.
11. Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ìåìáðàíû, ìîëåêóëû, êëåòêè. Íàóêà, Ì.
1982.
12. Êðàâöîâ À.Â., Àëåêñååíêî È.Ð. Ìåõàíèçìû ðåãóëÿöèè
âåêòîðíûõ ôåðìåíòîâ áèîìåìáðàí. Êèåâ. 1990.
13. Bracey M.H., Cravatt B.F., Stevens R.C. Structural commonalities among integral membrane enzymes. FEBS Lett. 2004, 567, 159-165.
14. Asano Y., Kim J., Ogai A., Takashima S., Shintani Y., Minamino
T., Kitamura S., Tomoike H., Hori M., Kitakaze M. A calcium channel
blocker activates both ecto-5'-nucleotidase and NO synthase in
HUVEC. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 311, 625-628.
15. Grybauskas P. Role of tissue factor in atherothrombosis.
Medicina (Kaunas). 2003, 39, 1165-1170.
16. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane
therapeutic. Publisher Polish Section of European Society of biochemical pharmacology. Szczecin. 1993.
17. Èâêîâ Â.Ã., Áåðåñòîâñêèé Ã.Í. Ëèïèäíûé áèñëîé
áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàí. Íàóêà, Ì. 1982.
18. Hidalgo C., Ikemoto N., Gergely J. Role of phospholipids in the
calcium-dependent ATPase of the sapcoplasmatic reticulum. J Biol
Chem. 1976, 251, 4224-4232.
19. Hjelmstad R.H., Bell R.M. Molecular insights into enzymes of
membrane bilayer assembly. Biochemistry. 1991, 30, 1731-1740.
20. Chanussot F., Benkoel L. Prevention by the dietary (n-6)
polyunsaturated phosphatidylcholines of intrahepatic cholestasis
induced by ciclosporine A in animals. Life Sci. 2003, 73, 381-392.
21. Ito M., Feng J., Tsujino S., Inagaki N., Inagaki M., Tanaka J.,
Ichikava K., Hartshorne D.J., Nakano T. Interaction of smooth muscle
myosin phosphatase with phospholipids. Biochemistry. 1997, 36, 76077614.
22. Santini F., Chopra I.J., Solomon D.H., Chua Teco G.N. Evidence
that the human placental monodeiodinase is phospholipid-requiring
enzyme. J Clin Endocrinol Metab. 1992, 74, 1366-1371.
23. Imai T., Kageyama Y., Tobari J. Mycobacterium smegmatis
malate dehydrogenase: activation of the lipid-depleted enzyme by
anionic phospholipids and phosphatidylethanolamine. Biochim
Biophys Acta. 1995, 1246, 189-196.
24. Yui S., Yamazaki M. Relationship of ability of phospholipids to
208
stimulate growth and bind to macrophages. J Leukocyte Biol. 1987, 41,
392-399.
25. Carman C.V., Barak L.S., Chen C., Liu-Chen L.-Y., Onorato J.J.,
Kennedy S.P., Caron M.G., Benovic J.L. Mutational analysis of
Gbetagamma and phospholipid interaction with G protein-coupled
receptor kinase 2. J Biol Chem. 2000, 275, 10443-10452.
26. Archakov A.I., Bachmanova G.I. Influence of phospholipid
bilayer on structure and catalytic properties of cytochromes P-450 and
b5. In: Microsomes, drug oxidation and drug toxicity. (Sato R., Kato R.
eds). Japan Scientific Press, Wiley-Interscience Tokyo, N.-Y. 1982, 6774.
27. Àð÷àêîâ À.È., Áîðîäèí Å.À. Èíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â
ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ Fe-àñêîðáàò-çàâèñèìûì
ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ. Áèîëîãè÷åñêèå íàóêè. 1986, 5,
30-34.
28.
Àð÷àêîâ
À.È.,
Áîðîäèí
Å.À.
Âîññòàíîâëåíèå
ôîñôîëèïèäàìè ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ Få-àñêîðáàòçàâèñèìûì ïåðåêèñíûì îêèñëåíèåì ëèïèäîâ. Áèîëîãè÷åñêèå
íàóêè, 1986, 7, 30-35.
29. Àrchakov A.I., Bachmanova G.I. Cytochrome P450 and active
oxygen. Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990.
30. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È., Àäðèàíîâ Í.Â. Öèòîõðîì Ð450
è îêèñëèòåëüíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ìàêðîìîëåêóë. Âåñòíèê ÀÌÍ
ÑÑÑÐ. 1990, 2, 21-27.
31. Êàðóçèíà È.È., Àð÷àêîâ À.È. Öèòîõðîì Ð450.  êí: Áåëêè è
ïåïòèäû (Èâàíîâà Â.Ò., Ëèïêèíà Â.Ì. ðåä.) Íàóêà. Ì. 1995, 7-29.
32. Karuzina I.I., Archakov A.I. The oxidative inactivation of
cytochrome P450 in monooxygenase reactions. Free Radic Biol Med.
1994, 16, 73-97.
32. Karuzina I.I., Archakov A.I. Hydrogen peroxide-mediated inactivation of microsomal cytochrome P450 during monooxygenase reactions. Free Radic Biol Med. 1994, 17, 557-567.
34. Êàðóçèíà È.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Àð÷àêîâ À.È.
Ñàìîèíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â êàòàëèòè÷åñêîì öèêëå.
Âåñòíèê ÐÀÌÍ. 1995, 2, 17-29.
35. Archakov A. I., Karuzina I. I., Petushkova N.A, Lisitsa A. V.,
Zgoda V. G. Production of carbon monoxide by cytochrome P 450 during iron-dependent lipid peroxidation. Toxicol In Vitro. 2002, 16, 1-10.
36. McLean A.E. Effect of hexane and carbon tetrachloride on
microsomal cytochrome (P450). Biochem Pharmacol. 1967, 16, 20302033.
37. Âëàäèìèðîâ Þ.À., Àð÷àêîâ À.È. Ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå
ëèïèäîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ìåìáðàíàõ. Íàóêà, Ì. 1972.
209
38. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû
âçàèìîäåéñòâèÿ ÷åòûðåõõëîðèñòîãî óãëåðîäà ñ ìåìáðàíàìè
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ïå÷åíè. Óñï ãåïàòîëîãèè. 1973,
7, 39-59.
39. Ñàâèí È.Ã., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Êàðóçèíà È.È., Ñêîöåëÿñ Å.Ä.,
Àíòîíîâà Ã.Í., Æèðíîâ Ã.Ô., Êàðÿêèí À.Â., Àðèïîâ À.Í., Àð÷àêîâ
À.È. Âëèÿíèå ãåëèîòðèíà íà ñèñòåìó ìèêðîñîìàëüíîãî îêèñëåíèÿ
ïå÷åíè êðûñ. Âîïðîñû ìåä õèìèè. 1983, 29, 49-52.
40. Reiner O., Uehleke H. Bindung of carbon tetrachloride to
reduced microsomal cytochrome P-450 and to heme. Hoppe Seylers Z
Physiol Chem. 1971, 352, 1048-1052.
41. Rao K.S., Glende E.A., Recknagel R.O. Effect of drug pretreatment on carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation in rat liver
microsomal lipids. Exp Mol Pathol. 1970, 12, 324-331.
42. Payne E., Smith J.F., Cope B.C, McGowan L.T. Studies on the
role of liver cytochrome P-450 and oestradiol metabolism in the effects
of nutrition and phenobarbital on ovulation rate in the ewe. Reprod
Fertil Dev. 1991, 3, 725-736.
43. Chaudhury S., Mehendale H.M. Amplification of CCl4 toxicity
by chlordecone: destruction of rat hepatic microsomal cytochrome P450 subpopulation. J Toxicol Environ Health. 1991, 32, 277-294.
44. Wills E. Effect of lipid peroxidation on membrane bound
enzymes of endoplasmatic reticulum. Biochem J. 1971, 123, 983-987.
45. Áîëäàíîâà Í. Á., Äîáðûíèíà Î. Â., Ìèãóøèíà Â. Ë., Àð÷àêîâ
À. È. Çàùèòíûå äåéñòâèÿ ôîñôàòèäèëõîëèíîâûõ ëèïîñîì ïðè
ýêñïåðèìåíòàëüíîì òîêñè÷åñêîì ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986,
42, 65-67.
46. Archakov A.I. Reconstitution and repair of microsomal
monooxygenase system of the liver. In: Physico-chemical aspects of
medicine. Amsterdam. 1988, 130-205.
47. Ahr H.J., King H.J., Nastainczyk W., Ullrich V. The mechanism
of reductive dehalogenation of halothane by liver cytochrome P-450.
Biochem Pharmacol. 1982, 31, 383-390.
48. Jaeschke H., Gores G.J., Cederbaum A.I., Hinson J.A., Pessayre
D., Lemasters J.J. Mechanisms of hepatotoxity. Òoxicol Sci. 2002, 65,
166-176.
49. Äîáðûíèíà Î.Â., Øàòèíèíà Ñ.Ç., Àð÷àêîâ À.È. Ðåïàðàöèÿ
ôîñôàòèäèëõîëèíîì ïîâðåæäåíèÿ ãåëèîòðèíîì ìåìáðàí
ãåïàòîöèòîâ. Áþëë ýêñï áèîëîãèè è ìåäèöèíû. 1987, 103, 413-415.
50. Ãðèøàíîâà À.Þ., Ãóòêèíà Í.È., Ìèøèí Â.Ì. Ñðàâíèòåëüíîå
èññëåäîâàíèå èçîëèðîâàííûõ
èçîôîðì
öèòîõðîìà Ð-450,
èíäóöèðóåìûõ ôåíîáàðáèòàëîì è ïåðôòîðäåêàëèíîì. Áèîõèìèÿ.
1988, 53, 368-376.
210
51. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ïîãîäèíà Î.Ê., Äîáðûíèíà
Î.Â., Ìèãóøèíà Â.Ë., Ñàâèí È.Ã. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ äåñòðóêöèè
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà êëåòîê ïå÷åíè. Àâòîðñêîå
ñâèäåòåëüñòâî ¹1142802 (1.11.1984).
52. Bachmanova G.I., Abdugafurova M.A., Li V.S., Dobrynina O.V.,
Shatinina S.Z., Archakov A.I. Reparation of damaged rat liver cells,
microsomal membranes and cytochrome P450-dependent monooxygenase system by phospholipids. In: Phosphatidylcholine (polyenephosphatidylcholine/PPC): effects on cell membranes and transport of cholesterol. (Archakov A.I., Gunderman K.J. eds). Cologne, wbn-Verlag.
Bingen/Rhein. 1989, 137-145.
53. Bachmanova G.I., Kanaeva I.P., Sevrukova I.F., Archakov A.I.
Reconstitution of membrane microsomal monooxygenase system from
purified enzymes in solutions. Abstr. of 2-nd IUBMB Conference,
Biochemistry of Cell Membranes. Bari, Italy. 1993, 272.
54. Archakov A.I., Uvarov V.Yu. Action of phospholipids on
hydrophobic microsomal proteins. In: Phosphatidylcholine (polyenephosphatidylcholine/PPC): effects on cell membranes and transport
of cholesterol. (Archakov A.I., Gunderman K.J. eds). Cologne, wbnVerlag. Bingen/Rhein. 1989, 127-136.
55. Panos M.Z., Polson R., Johnson R., Portman B., Williams R.
Activity of polyunsaturated phosphatidylcholine in HbsAg negative
chronic active hepatitis. In: 50th anniversary of phospholipid research
(EPL). (Gunderman K.J., Schumacher R. eds). Wbn Press,
Bingen/Rhein, 1990, 103-110.
56. Kuntz E. The "essential" phospholipids in hepatology-50 years of
experimental and clinical experience. Ibid. 49-69.
57. Magden J., Kaariainen L., Ahola T. Inhibitors of virus replication: recent developments and prospects. Appl Microbiol Biotechnol.
2005, 66, 612-621.
211
ÃËÀÂÀ 7. ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÀß ÊÈÑËÎÒÀ: ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ
ÑÂÎÉÑÒÂÀ È ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ Â ÌÅÄÈÖÈÍÅ Â ÊÀ×ÅÑÒÂÅ
ÏÐÎÒÈÂÎÂÈÐÓÑÍÎÃÎ ÀÃÅÍÒÀ
Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà (ÃÊ) ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûì àêòèâíûì
êîìïîíåíòîì êîðíÿ ñîëîäêè, èçâåñòíîãî ñâîèìè öåëåáíûìè
ñâîéñòâàìè. Îíà ïðèñóòñòâóåò áîëåå ÷åì â 10 ðàçíîâèäíîñòÿõ
ñîëîäêè.  Ðîññèè èñòî÷íèêàìè åå ÿâëÿþòñÿ ñîëîäêà ãîëàÿ
(Glycyrrhiza glabra L), ñîëîäêà óðàëüñêàÿ (Gl. Uralensis Fish) è
ñîëîäêà Êîðæèíñêîãî (Gl.Korshinski G.) [1-8].
Êîðåíü ñîëîäêè èñïîëüçóåòñÿ â ìåäèöèíå óæå áîëåå 3000 ëåò.
Ñâåäåíèÿ î íåì íàõîäÿò â äðåâíåéøèõ êèòàéñêèõ êíèãàõ ïî
ìåäèöèíå. Êîðåíü ñîëîäêè âûñîêî öåíèëè äðåâíåãðå÷åñêèå è
ðèìñêèå âðà÷è. Ñîëîäêà óïîìèíàåòñÿ â äðåâíåéøåé ìåäèöèíñêîé
ýíöèêëîïåäèè - ïàïèðóñå Ýáåðñà. Åå øèðîêî èñïîëüçîâàëè â ñâîåé
ïðàêòèêå Ãèïïîêðèò è Ãàëåí. Âûñîêî îöåíèâàë ñâîéñòâà êîðíÿ
ñîëîäêè Àâèöåííà. Êèòàéñêèå âðà÷è ñ÷èòàþò ñîëîäêó îäíèì èç
òðåõ íàèâàæíåéøèõ ëåêàðñòâåííûõ ðàñòåíèé è óíèêàëüíîé ïî
áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè. ÃÊ âõîäèò â ñîñòàâ áîëåå 70%
ïðåïàðàòîâ òðàäèöèîííîé êèòàéñêîé ìåäèöèíû [9, 10]. Â Êèòàå ÃÊ
âêëþ÷àþò â ñîñòàâ ïðåïàðàòîâ íå òîëüêî èç-çà åå âûñîêîé
áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè, à òàêæå êàê ñîåäèíåíèå, ñïîñîáíîå
óñèëèâàòü äåéñòâèå äðóãèõ êîìïîíåíòîâ, ñíèæàòü èõ òîêñè÷íîñòü è
ïîáî÷íûå ýôôåêòû.
Òðàäèöèîííî ýêñòðàêò êîðíÿ ñîëîäêè ïðèìåíÿëè â êà÷åñòâå
îòõàðêèâàþùåãî, ñëàáèòåëüíîãî, ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî è
ñïàçìîëèòè÷åñêîãî ñðåäñòâà.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ýêñòðàêò êîðíÿ
ñîëîäêè øèðîêî ïðèìåíÿåòñÿ êàê â ìåäèöèíå (â ñîñòàâå ëå÷åáíûõ è
ïðîôèëàêòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ), òàê è â ïèùåâîé ïðîìûøëåííîñòè
(êàê ïîäñëàñòèòåëü è ïåíîîáðàçîâàòåëü). Ìåäèöèíñêîå ïðèìåíåíèå
ñîëîäêè è âûäåëÿåìûõ èç íåå êîìïîíåíòîâ îñîáåííî øèðîêî
ðàçâèòî â ñòðàíàõ þãî-âîñòî÷íîé Àçèè, è èìåííî òàì ïðîâîäÿòñÿ
áîëüøèíñòâî ñîâðåìåííûõ èññëåäîâàíèé ïî èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ
åå ìíîæåñòâåííûõ áèîëîãè÷åñêèõ àêòèâíîñòåé [11, 12].
Íàèáîëüøèé èíòåðåñ èç êîìïîíåíòîâ êîðíÿ ñîëîäêè âûçûâàåò
ãëèöèððèçèí - èíãðåäèåíò, ïðèäàþùèé åé ñïåöèôè÷åñêèé ñëàäêèé
âêóñ è ïðåäñòàâëÿþùèé ñîáîé ñìåøàííûå êàëèåâóþ è êàëüöèåâóþ
ñîëè òðåõîñíîâíîé ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû [5, 13-17].
Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå è íàçâàíèå Glycyrrhiza (îò ëàòèíñêîãî) áûëî
óñòàíîâëåíî â êîíöå 30-õ ãîäîâ ÕÕ âåêà ÷åøñêèì èññëåäîâàòåëåì
Ðóæå÷êîé ñ ñîàâòîðàìè [15]. Îíè ïîêàçàëè, ÷òî ãëèöèððèçèíîâàÿ
êèñëîòà ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé âîäîðàñòâîðèìûé òðèòåðïåíîâûé
ãëèêîçèä, îáðàçîâàííûé îäíîé ìîëåêóëîé ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû
(ÃÒ) è äâóìÿ ìîëåêóëàìè ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû (ðèñ. 7.1).
212
Ðèñ. 7.1 Õèìè÷åñêîå ñòðîåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû
Ïðè îòùåïëåíèè óãëåâîäíîãî êîìïîíåíòà (ãëèêàíà), êîòîðîå, â
÷àñòíîñòè, ïðîèñõîäèò ïîä âëèÿíèåì áàêòåðèàëüíîé ôëîðû â
êèøå÷íèêå ïðè ïåðîðàëüíîì ïðèåìå ÃÊ, îñòàåòñÿ àãëèêîí (ÃÒ),
òàêæå îáëàäàþùèé øèðîêèì ñïåêòðîì áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ
[16, 18, 19, 20].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÃÊ îêàçûâàåò ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå,
ïðîòèâîàëëåðãè÷åñêîå, ïðîòèâîâèðóñíîå, ãåïàòîïðîòåêòîðíîå,
èììóíîìîäóëèðóþùåå, ïðîòèâîÿçâåííîå äåéñòâèÿ, îáëàäàåò
àíòèîêñèäàíòíûìè ñâîéñòâàìè [4 - 6, 10, 17, 18]. Êðîìå òîãî,
íàëè÷èå â ìîëåêóëå ÃÊ ãèäðîôèëüíîãî (äèãëþêóðîíèäíîãî) è
ãèäðîôîáíîãî (òðèòåðïåíîâîãî) ôðàãìåíòîâ ïðèäàåò åé
óíèêàëüíûå ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûå è ãåëåîáðàçóþùèå ñâîéñòâà,
êîòîðûå îáúÿñíÿþò øèðîêèé äèàïàçîí åå èñïîëüçîâàíèÿ.
7.1. Îñíîâíûå áèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ÃÊ.
7.1.1. Èììóíîìîäóëèðóþù
ùèå ñâîéñòâàà ÃÊ.
Êàê ïîêàçàíî âî ìíîãèõ ðàáîòàõ, èìóíîìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå
ÃÊ îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ñòèìóëÿöèè îáðàçîâàíèÿ Ò-ëèìôîöèòîâ
è ïðîòèâîñóïðåññîðíûõ âíå-òèìóñíûõ êëåòîê - åñòåñòâåííûõ
êèëëåðîâ (ÅÊ) è Ò-êëåòîê àíòè-òèïà 2, à òàêæå âîçäåéñòâèåì íà
ñèñòåìó öèòîêèíîâ. Èíäóêöèÿ Ò-ëèìôîöèòîâ ïðèâîäèò ê
àêòèâàöèè ïðîäóêöèè γ-èíòåðôåðîíà (ÈÔÍ-γ) è îáðàçîâàíèþ
àíòèòåë, óñèëåíèþ èììóííûõ ìåõàíèçìîâ êëåòêè. Ïîâûøåíèå
ñåêðåöèè ÅÊ è âíå-òèìóñíûõ Ò-êëåòîê, èõ àêòèâàöèÿ òàêæå
ñîïðîâîæäàåòñÿ äàëüíåéøåé èíäóêöèåé ñèíòåçà ÈÔÍ-γ. Òåì
ñàìûì îðãàíèçì ìîäóëèðóåò íåñïåöèôè÷åñêèé èììóííûé îòâåò,
îñîáåííî íà íà÷àëüíûõ ñòàäèÿõ áîëåçíè [4, 5,17, 21-25] (ðèñ. 7.1.1).
Èññëåäîâàíèå äåéñòâèÿ ÃÊ íà èììóííóþ ñèñòåìó ó ìûøåé
ïîêàçàëî, ÷òî íà 9-é äåíü ïîñëå åå âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ â
213
Ðèñ. 7.1.1. Ìåõàíèçì èììóíîìîäóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû.
êðîâè æèâîòíûõ ïîâûøàëîñü îáùåå êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ. Ïðè
îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè ÃÊ è àíòèãåíà ïîâûøàëñÿ
ñïåöèôè÷åñêèé òèòð àíòèòåë è êîëè÷åñòâî òðîìáîöèòîâ è
òðîìáîöèò-îáðàçóþùèõ êëåòîê â ñåëåçåíêå. Ýòè èçìåíåíèÿ
óêàçûâàþò íà èììóíîìîäóëèðóþùóþ àêòèâíîñòü ÃÊ [26]. Ïîêàçàíî
òàêæå, ÷òî ââåäåíèå ÃÊ ñïîñîáñòâîâàëî íîðìàëèçàöèè ôîðìóëû
êðîâè è êîëè÷åñòâà ëåéêîöèòîâ ïðè àãðàíóëîöèòîçå,
ðàçâèâàþùåìñÿ
â
ðåçóëüòàòå
ïîáî÷íîãî
äåéñòâèÿ
ïðîòèâîòóáåðêóëåçíîé òåðàïèè [27].
 ðàáîòå Takahara ñ ñîàâò. [28] ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ ïîäàâëÿåò
ñåêðåöèþ áåëêà-àíòèãåíà âèðóñíîãî ãåïàòèòà Â - HÂsAg (hepatitis B
surface antigen) â êëåòêàõ ãåïàòîêàðöèíîìû ÷åëîâåêà, ëèíèè
PLC/PRF/5, ýêñïðåññèðóþùèõ HÂsAg, è âûçûâàåò äîçîçàâèñèìîå
íàêîïëåíèå àíòèãåíà â âàêóîëÿõ öèòîïëàçìû â îáëàñòè àïïàðàòà
Ãîëüäæè. Ïðè èññëåäîâàíèè ìåõàíèçìà ýòîãî ýôôåêòà íà êëåòêàõ,
èíôèöèðîâàííûõ ðåêîìáèíàíòíûì âèðóñîì âåòðÿíîé îñïû,
ýêñïðåññèðóþùèì HÂsAg, áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ÃÊ èíãèáèðóåò
ñèàëèðîâàíèå HÂsAg. Ïîñêîëüêó äåñèàëèðîâàííûé HÂsAg
ïðîÿâëÿåò ëó÷øóþ èììóíîãåííîñòü, óñèëèâàÿ ãåíåðàöèþ
ãóìîðàëüíûõ àíòèòåë è êëåòî÷íî-îïîñðåäîâàííîãî îòâåòà, àâòîðû
ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÃÊ ìîæåò òàêèì îáðàçîì óëó÷øàòü
èììóíîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ áîëüíûõ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè [29].
Abe ñ ñîàâò. [30] îáíàðóæèëè, ÷òî âíóòðèâåííîå ââåäåíèå ÃÊ
ìûøàì â äîçå 20 ìã/êã ÷åðåç 2 è 18 ÷àñîâ ïîñëå ââåäåíèÿ äàåò äâà
ïèêà èíäóêöèè ÈÔÍ-γ ñ ó÷àñòèåì Ò-êëåòîê è ìàêðîôàãîâ.
Ââåäåíèå ÃÒ (àãëèêîíà ÃÊ) â ìåíüøåé äîçå (5 ìã/êã) òàêæå
214
èíäóöèðóåò ñèíòåç ÈÔÍ-γ, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ îäíèì ïèêîì (ìåíåå
÷åì ÷åðåç 2 ÷àñà) ñ âäâîå ìåíüøåé èíòåíñèâíîñòüþ. Ýòî ìîæåò
óêàçûâàòü íà áîëåå âûñîêóþ èíòåðôåðîí-èíäóöèðóþùóþ
ñïîñîáíîñòü ÃÒ.
Ïîäêîæíîå ââåäåíèå ÃÊ ìûøàì âûçûâàëî ýêñòðàòèìè÷åñêóþ
äèôôåðåíöèàöèþ Ò-êëåòîê â ïå÷åíè. Äàæå ïðè îäíîêðàòíîì
ââåäåíèè ÃÊ ó æèâîòíûõ îòìå÷àëè íå òîëüêî óâåëè÷åíèå
êîëè÷åñòâà ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòîê â ïå÷åíè, íî òàêæå è
ïîâûøåíèå êîëè÷åñòâà ôóíêöèîíàëüíî íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ
Ò-êëåòîê.  îòëè÷èå îò äðóãèõ ïðåïàðàòîâ, èñïîëüçîâàííûõ â ýòèõ
ýêñïåðèìåíòàõ (ëèìôîòîêñèí è ýñòðîãåí), ÃÊ íå èçìåíÿëà
ñîîòíîøåíèå Ò-êëåòîê ðàçëè÷íûõ êëàññîâ â òèìóñå [31].
Ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ ìîæåò ñëóæèòü èíäóêòîðîì CD4+, CD28+, αβÒ-êëåòîê. Òàê, ó ìûøåé ñ ýêñïåðèìåíòàëüíî èíäóöèðîâàííîé
ìåòàñòàçèðóþùåé ìåëàíîìîé ëåãêèõ ÃÊ àêòèâèðîâàëà ñèíòåç αβ-Òêëåòîê èìåþùèõ ìàðêåðû CD4+ è CD28+, à òàêæå îïîñðåäîâàííî
èíãèáèðîâàëà ñèíòåç öèòîêèíîâ Ò-õåëïåðíûìè êëåòêàìè 2-ãî òèïà
[32]. Ó ìûøåé ñ ìîäåëüþ ãåïàòèòà, èíäóöèðîâàííîãî
êîíêàíàâàëèíîì À, ÃÊ ïîâûøàëà ïðîäóêöèþ èíòåðëåéêèíà-10 (IL10) äåíäðèòíûìè êëåòêàìè ïå÷åíè [33]. Èçó÷àÿ ìåõàíèçìû
èììóíîìîäóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÃÊ, Dai ñ ñîàâò. [34] îáíàðóæèëè
åå âëèÿíèå íà èíäóöèðóåìóþ ëèïîïîëèñàõàðèäîì ïðîäóêöèþ
ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè ðàçëè÷íûõ òèïîâ IL-12,
ïðåäñòàâëÿþùèõ ñîáîé ãåòåðîäèìåð: IL-12 ð40, IL-12 ð70 è äð.
Óâåëè÷åíèå ïðîäóêöèè IL-12, îáóñëîâëåííîå óñèëåíèåì
òðàíñêðèïöèè ìÐÍÊ IL-12 ð35 è ð40, áûëî ñâÿçàíî ñ ÃÊ-çàâèñèìîé
àêòèâàöèåé ÿäåðíîãî ôàêòîðà NF-kB. Òàêîå æå äåéñòâèå ÃÊ
îêàçûâàëà è íà ïðîäóêöèþ IL-12 ó ìûøåé, íîêàóòíûõ ïî ÈÔÍ-γ.
Ýòè äàííûå óêàçûâàþò íà ñïîñîáíîñòü ÃÊ ïîâûøàòü
èíäóöèðîâàííóþ
ëèïîïîëèñàõàðèäîì
ãåíåðàöèþ
IL-12
ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè, êîòîðàÿ íå çàâèñåëà îò ñèíòåçà γèíòåðôåðîíà.
Utsonomiya ñ ñîàâò [35] èçó÷àëè âëèÿíèå ÃÊ íà ïðîäóêöèþ IL-12
ó ìûøåé ïîñëå òåðìè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ. ×åðåç 6 äíåé ïîñëå
òàêîé îáðàáîòêè ìûøè òåðÿëè ñïîñîáíîñòü ê èíäóöèðîâàííîé
ëèïîïîëèñàõàðèäîì ãåíåðàöèè IL-12. Îäíàêî, åñëè ìûøàì
ïðåäâàðèòåëüíî ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ÃÊ (10 ìã/êã), òî ó íèõ
óðîâåíü IL-12 â ñûâîðîòêå êðîâè ïîñëå òåðìè÷åñêîãî âîçäåéñòâèÿ
áûë äàæå âûøå, ÷åì ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ. Êðîìå òîãî,
îáíàðóæåíî, ÷òî èíîêóëÿöèÿ íîðìàëüíûì ìûøàì Ò-êëåòîê òèïà 2
(ïðîäóöèðóþùèõ IL-4 è IL-10) èç ñåëåçåíêè ìûøåé, ïîäâåðãíóòûõ
òåðìè÷åñêîìó
âîçäåéñòâèþ,
ïîäàâëÿëà
ñïîñîáíîñòü
ê
ñòèìóëèðîâàííîìó ëèïîïîëèñàõàðèäîì ñèíòåçó IL-12. Â òî æå
215
âðåìÿ, èíîêóëÿöèÿ CD4+Ò-êëåòîê èç ñåëåçåíêè íîðìàëüíûõ
ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ ÃÊ, íàîáîðîò, ïîâûøàëà ãåíåðàöèþ IL-12,
ñòèìóëèðîâàííóþ ëèïîïîëèñàõàðèäîì ó ìûøåé, ïîäâåðãíóòûõ
òåðìè÷åñêîìó âîçäåéñòâèþ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîçâîëèëè
àâòîðàì ïðåäïîëîæèòü, ÷òî èíãèáèðîâàííûé â ðåçóëüòàòå
òåðìè÷åñêîé îáðàáîòêè ïóòü ñèíòåçà IL-12 âîññòàíàâëèâàåòñÿ, ïîâèäèìîìó, çà ñ÷åò âîçäåéñòâèÿ ÃÊ íà ôàêòîðû, ðåãóëèðóþùèå Òêëåòî÷íûé îòâåò.
Àíàëèçèðóÿ çíà÷åíèå äëÿ îðãàíèçìà ñïîñîáíîñòè ÃÊ âëèÿòü íà
ãåíåðàöèþ èíòåðëåéêèíîâ, ñëåäóåò èìåòü â âèäó, ÷òî
èíòåðëåéêèíû â ïîñëåäíèå ãîäû âûçûâàþò áîëüøîé èíòåðåñ êàê
êëþ÷åâûå öèòîêèíû èììóííîé ðåãóëÿöèè. Îíè àêòèâèðóþò
åñòåñòâåííûå êèëëåðû è öèòîòîêñè÷åñêèå ëèìôîöèòû è ÿâëÿþòñÿ
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûìè öèòîêèíàìè. Ïîêàçàíà ñîïðÿæåííîñòü
ïðîäóêöèè IL-12 è îñíîâíîãî àêòèâàòîðà ìàêðîôàãîâ ÈÔÍ-γ.
Ïîñëåäíèé ìîæåò ñòèìóëèðîâàòü ïðîäóêöèþ IL-12 ÷åðåç
àêòèâàöèþ êëåòî÷íîãî ñèãíàëà ñ ó÷àñòèåì òèðîçèíîâîé
ïðîòåèíêèíàçû [36]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû IL-12, äåéñòâóÿ íà
ïîêîÿùèåñÿ êëåòêè ÅÊ, ñòèìóëèðóåò ïðîäóêöèþ èìè ÈÔÍ-γ,
ñòèìóëèðóþùåãî, â ñâîþ î÷åðåäü, ôóíêöèè ìàêðîôàãîâ. Â
ïðèñóòñòâèè IL-12 êëåòêè ÅÊ ñïîñîáíû äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â
ñóáïîïóëÿöèè - ÅÊ1 è ÅÊ2; ÅK1 ïðîäóöèðóåò ÈÔÍ- γ, à ÅÊ2 äðóãèå èíòåðëåéêèíû (IL-5 è IL-13). ÅK1 áîëåå ÷óâñòâèòåëüíû ê
àïîïòîçó è îòâå÷àþò íà IL-12 ÷åðåç àêòèâàöèþ ÿäåðíûõ ôàêòîðîâ
[37]. IL-12 òàêæå óñêîðÿåò ïðîëèôåðàöèþ CD30+ ëèìôîöèòîâ Th1
êëåòîê, ïðîäóöèðóþùèõ ÈÔÍ-γ. IL-12 àêòèâèðóåò ïðîëèôåðàöèþ
è äèôôåðåíöèðîâêó ÅÊ è Ò-ëèìôîöèòîâ, ïîâûøàåò èõ
öèòîòîêñè÷åñêèé ýôôåêò è ïðîäóêöèþ äðóãèõ öèòîêèíîâ.
Îñíîâíîé ðåçóëüòàò ýòèõ ïðîöåññîâ - èíäóêöèÿ ñèíòåçà ÈÔÍ-γ. Â
ñâîþ î÷åðåäü, ÈÔÍ-γ àêòèâèðóåò ìíîæåñòâåííûå çàùèòíûå
ôóíêöèè ìàêðîôàãîâ, âêëþ÷àÿ ñèíòåç ñàìîãî IL-12 [38]. ÃÊ ìîæåò
âêëþ÷àòüñÿ â ýòîò êàñêàä ðåàêöèé, èíäóöèðóÿ ïðîäóêöèþ IL-12 è
òåì ñàìûì è γ-èíòåðôåðîíà [36], èëè íåïîñðåäñòâåííî âëèÿÿ íà Òêëåòêè [35, 39].
Èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî îäíîêðàòíîå ââåäåíèå æèâîòíûì
íåîìèíîôàãåíà Ñ (ïðåïàðàòà, îñíîâíûì äåéñòâóþùèì íà÷àëîì
êîòîðîãî ÿâëÿåòñÿ ÃÊ è êîòîðûé øèðîêî èñïîëüçóåòñÿ â ßïîíèè
äëÿ ëå÷åíèÿ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ [40]) àêòèâèðóåò ñèñòåìû ÈÔÍ-γ
è IL-12 [39]. Ïðè ââåäåíèè ìûøàì ïðåïàðàòà íàáëþäàëè
çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå â ïå÷åíè àêòèâíîñòè êëåòîê ÅÊ è α-TNF.
Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî â öåëîì öèòîòîêñè÷åñêàÿ ôóíêöèÿ,
ñòèìóëèðóåìàÿ ïå÷åíî÷íûìè ëèìôîöèòàìè, óñèëèâàåòñÿ ïîä
äåéñòâèåì ÃÊ [39].
216
Òàêèì îáðàçîì, îäíèì èç ïðîÿâëåíèé èììóíîìîäóëèðóþùåãî
äåéñòâèÿ ÃÊ ÿâëÿåòñÿ åå âëèÿíèå íà ïðîäóêöèþ öèòîêèíîâ, â
÷àñòíîñòè IL-12, è, âîçìîæíî, ÷åðåç íèõ - íà ñèñòåìó γèíòåðôåðîíà.
7.1.2. Ïðîòèâîâîñïààëèòåëüíîå äåéñòâèå.
Äðóãèì, ÷ðåçâû÷àéíî âàæíûì ñâîéñòâîì ÃÊ, ñîïðÿæåííûì ñ
èììóíîìîäóëèðóþùèì ýôôåêòîì è îáóñëàâëèâàþùèì åå øèðîêîå
ëåêàðñòâåííîå ïðèìåíåíèå, ÿâëÿåòñÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå
äåéñòâèå. ÃÊ è åå ïðîèçâîäíûå èíãèáèðóþò ãèñòàìèíîâóþ,
ñåðîòîíèíîâóþ, áðàäèêèíèíîâóþ, ôîðìàëèíîâóþ è äðóãèå
âîñïàëèòåëüíûå ðåàêöèè, óìåíüøàþò ñîñóäèñòóþ ïðîíèöàåìîñòü,
îáëàäàþò âûðàæåííûì àíòèïðîëèôåðàòèâíûì äåéñòâèåì è
àíòèêèíèíîâûì ýôôåêòîì [5, 10, 17]. Íàïðèìåð, ñîëè ÃÊ â
ýêñïåðèìåíòå ñíèæàþò ôîðìàëèíîâûé îòåê êàê ó èíòàêòíûõ, òàê è
ó
àäðåíîýêòîìèðîâàííûõ
æèâîòíûõ
[10,
41].
Ïðè
âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè ÃÊ ïîäàâëÿåò îáðàçîâàíèå ãðàíóëåìû
ó ìîðñêèõ ñâèíîê è îêàçûâàåò ñèëüíîå ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå
äåéñòâèå ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì êîíúþíêòèâèòå ó êðîëèêîâ.
Ïîêàçàí ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûé ýôôåêò ÃÊ ó ëàêòèðóþùèõ êîðîâ
ïðè èíäóöèðîâàííîì ñòàôèëîêîêêîì ìàñòèòå [42]. Ïî
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîé àêòèâíîñòè Na- è Ê-ñîëè ÃÊ íå óñòóïàþò
âîëüòàðåíó [10].
Ïðåäïîëàãàåòñÿ
íåñêîëüêî
ìåõàíèçìîâ
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ. Èçâåñòíî, ÷òî ðåöåïòîðû
ëåéêîöèòîâ ÑD4 áëîêèðóþòñÿ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ, ÷òî, â ñâîþ
î÷åðåäü, ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ. ÃÊ
ñïîñîáíà èíãèáèðîâàòü PK Ñ, âîññòàíàâëèâàÿ èììóííûå ñâîéñòâà
èëè èììóííûé îòâåò êëåòêè è ïðåïÿòñòâóÿ òåì ñàìûì ðàçâèòèþ
âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà [43].
Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ ñâÿçûâàþò ñ åå ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûì
ýôôåêòîì:
ÃÊ
èíãèáèðóåò
11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçó (êàòàëèçèðóþùóþ ïåðåõîä êîðòèçîëà â
êîðòèçîí), ÷òî ïðèâîäèò ê óâåëè÷åíèþ êîðòèçîëà â êðîâè è
èíàêòèâàöèè èììóíîñóïðåññîðíîãî äåéñòâèÿ êîðòèçîíà [44].
Êðîìå òîãî, â ðÿäå èññëåäîâàíèé ïîêàçàíî, ÷òî
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ áëèçêî ê äåéñòâèþ
ãèäðîêîðòèçîíà è ïðåäíèçîëîíà (èç-çà ñõîäñòâà ñî ñòðóêòóðàìè
ïîñëåäíèõ). Ïîêàçàíî ñîõðàíåíèå ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî
äåéñòâèÿ ÃÊ ïðè ââåäåíèè æèâîòíûì â òå÷åíèå 6 ÷àñîâ. ÃÊ
ÿâëÿåòñÿ òàêæå ñèíåðãèñòîì ïðåäíèçîëîíîâûõ ïðåïàðàòîâ (èç-çà
èíãèáèðîâàíèÿ ðàñùåïëÿþùèõ èõ ôåðìåíòîâ).
Ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå äåéñòâèå ÃÊ òàêæå ñâÿçûâàþò ñ
217
èíãèáèðîâàíèåì àêòèâíîñòè PLA â ëèçîñîìàõ, ÷òî, â ñâîþ î÷åðåäü,
ïðåïÿòñòâóåò îñâîáîæäåíèþ èç ëèçîñîì ïðîòåîëèòè÷åñêèõ
ôåðìåíòîâ è êèñëûõ ôîñôàòàç, íàêîïëåíèå êîòîðûõ â òêàíÿõ
ïðèâîäèò ê ïîâðåæäåíèþ êëåòîê è ðàçâèòèþ âîñïàëèòåëüíîãî
ïðîöåññà.
Íåäàâíî ïîêàçàíî, ÷òî ñåêðåòîðíàÿ ôîñôîëèïàçà À2 òèïà IIà
(sPLA2), î÷èùåííàÿ èç ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè áîëüíûõ ñ
ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì, ñïîñîáíà ñâÿçûâàòü ãëèöèððèçèí è
ôóíêöèîíèðîâàòü êàê ãëèöèððèçèí-ñâÿçûâàþùèé áåëîê [45]. Ïðè
ýòîì ÃÊ èíãèáèðóåò èíèöèèðóåìóþ ïðîòåèíêèíàçîé Ñ àêòèâíîñòü
sPLA2, à ÃÒ â ýòîì îòíîøåíèè îêàçàëàñü â òðè ðàçà àêòèâíåå.
Íà ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîì ýôôåêòå îñíîâàíî ïðèìåíåíèå ÃÊ â
ôîðìå ãåëÿ äëÿ ëå÷åíèÿ êîæíûõ çàáîëåâàíèé, íàïðèìåð,
õðîíè÷åñêîãî äåðìàòèòà [46]. Ðàçðàáîòàíà òàêæå êîìïîçèöèÿ ÃÊ ñ
ñîåâûì ÔÕ èëè ãèäðèðîâàííûì ñîåâûì ÔÕ â ëèïîñîìàëüíîé
ôîðìå ñ ðàçìåðîì ëèïîñîì 90-120 íì. Óñòàíîâëåíî îïòèìàëüíîå
äëÿ ïðîíèêíîâåíèÿ â êîæó ñîîòíîøåíèå ëèïèä:ÃÊ - 4:1 [47].
Sakamoto ñ ñîàâò [48] ïîêàçàëè in vitro èíãèáèðóþùèé ýôôåêò
ÃÊ íà ôîñôîðèëèðîâàíèå è ÄÍÊ-ñâÿçûâàþùóþ ñïîñîáíîñòü
áåëêîâ HMG1 è HMG2 (high mobility group proteins -1, -2),
ñîäåðæàùèõ âûñîêî ðåàêòèâíûå ñàéòû ôîñôîðèëèðîâàíèÿ äëÿ
äâóõ ïðîòåèíêèíàç - Ñ è Ê. ÃÊ êîíêóðåíòíî ñâÿçûâàåòñÿ ñ ýòèìè
áåëêàìè, ïðåïÿòñòâóÿ èõ ôîñôîðèëèðîâàíèþ è ïðèñîåäèíåíèþ ê
ÄÍÊ. Ïî ìíåíèþ àâòîðîâ èíäóöèðîâàííîå ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòîé èíãèáèðîâàíèå ôèçèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè HMG1/2
ñïîñîáñòâóåò ïðîÿâëåíèþ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ in
vivo [48].
7.1.3. Àíòèîêñèäààíòíûå ñâîéñòâàà ãëèö
öèððèçèíîâîé êèñëîòû.
ÃÊ îáëàäàåò àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòüþ [49], êîòîðóþ
ñâÿçûâàþò ñ èíãèáèðîâàíèåì PK C, óñèëèâàþùåé ïåðåêèñíîå
îêèñëåíèå ëèïèäîâ (ÏÎË) ÷åðåç ôîñôîðèëèðîâàíèå 5ëèïîêñèãåíàçû. Äåéñòâèå ÃÊ òîðìîçèò ýòîò ïðîöåññ. Êðîìå òîãî ÃÊ
ñïîñîáíà ñâÿçûâàòüñÿ ñ ïðîîêñèäàíòîì ïðîñòàãëàíäèíîì Å2.
 ãåïàòîöèòàõ ÃÊ ñïîñîáíà èíàêòèâèðîâàòü ôåðìåíòû,
èíèöèèðóþùèå ÏÎË, ñ ÷åì ñâÿçûâàþò åå ãåïàòîïðîòåêòîðíîå
äåéñòâèå [50].
7.1.4. Ãåïààòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâàà.
Åùå áîëåå 10 ëåò íàçàä áûë îáíàðóæåí âûñîêèé òðîïèçì ÃÊ ê
ïå÷åíè, ãäå ÷åðåç 1-2 ÷àñà ïîñëå âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ
îáíàðóæèâàëîñü áîëüøàÿ åå ÷àñòü [15]. Ñêîðîñòü çàõâàòà ÃÊ
ïå÷åíüþ çàâèñèò îò ôóíêöèè è ýêñïðåññèè îñîáîãî êëàññà
ãåïàòîöåëëþëÿðíûõ
áåëêîâ
"îðãàíè÷åñêèõ
àíèîí218
òðàíñïîðòèðóþùèõ ïîëèïåïòèäîâ", êîäèðóåìûõ ñåìåéñòâîì ãåíîâ
SLC21A [51]. Âûñîêàÿ ñêîðîñòü çàõâàòà ÃÊ ïå÷åíüþ ñîçäàåò óñëîâèÿ
äëÿ ïðîÿâëåíèÿ âûðàæåííîé ãåïàòîïðîòåêòîðíîé àêòèâíîñòè,
ñâîéñòâåííîé êàê ÃÊ, òàê è åå àãëèêîíó - ÃÒ [10, 15, 52]. Íà ìîäåëè
îòðàâëåíèÿ æèâîòíûõ D-ãàëàêòîçàìèíîì áûëî ïîêàçàíî, ÷òî
ñóùåñòâåííî ìåíüøèå äîçû ÃÒ ïî ñðàâíåíèþ ñ ÃÊ îñòàíàâëèâàëè
óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè àìèíîòðàíñôåðàç â ñûâîðîòêå êðîâè,
ñâÿçàííîå ñ ïîâðåæäåíèåì ãåïàòîöèòîâ [52]. Íèçêèå êîíöåíòðàöèè
ÃÒ (5-50 ìêã/ìë) ïðåäîòâðàùàëè âûçâàííûé äåéñòâèåì ÑÑ14 íà
ïåðâè÷íóþ êóëüòóðó ãåïàòîöèòîâ âûõîä àìèíîòðàíñôåðàç èç
êëåòîê. Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà îêàçûâàëà òàêîé ýôôåêò ïðè
êîíöåíòðàöèÿõ íå ìåíåå 1000 ìêã/ìë. Áîëåå âûðàæåííûå
ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû àâòîðû
ñâÿçûâàþò ñ âûñîêîé åå àäñîðáöèåé íà ãåïàòîöèòàõ [52].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè ïðÿìîì âîçäåéñòâèè òîêñèíîâ
(àëëèëôîðìèàò, ÷åòûðåõõëîðèñòûé óãëåðîä, ãàëàêòîçàìèí) ÃÊ
ïðåïÿòñòâóåò ïîâðåæäåíèþ ãåïàòîöèòîâ ïå÷åíè êðûñ [15, 53].
Êîìïëåêñ ÃÊ ñ ìåòèîíèíîì èíãèáèðóåò ðàçâèòèå ó æèâîòíûõ
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà. Íà ìûøàõ ñ ìîäåëüþ ãåïàòèòà,
èíäóöèðîâàííîãî âåäåíèåì êîíêàíàâàëèíà À, ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü
ÃÊ èíãèáèðîâàòü ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀò â êðîâè [54-56].
Íà ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ôèáðîçà ïå÷åíè êðûñ,
âûçâàííîãî ïîäêîæíûìè èíúåêöèÿìè ÑCl4, Cai ñ ñîàâò [57] èçó÷àëè
âîçäåéñòâèå ÃÊ íà ýêñïðåññèþ ãåíîâ. Ñ ïîìîùüþ RT-PCR-àíàëèçà
(reverse transcription - polymerase chain reaction èëè RT-ÏÖÐàíàëèç) áûëî ïîêàçàíî óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè ðÿäà ãåíîâ (smurf2,
RTAFR, CYP2D6, FGG), ñâÿçàííûõ ñ âîñïàëåíèåì. Òàêèõ èçìåíåíèé
íå íàáëþäàëè ïðè ïàðàëëåëüíîì ñ ãåïàòîòîêñèíîì ââåäåíèè
êðûñàì ÃÊ. Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ àâòîðû
ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ÃÊ ñïîñîáíà îêàçûâàòü àíòèôèáðîçíîå
äåéñòâèå [57].
Ãåïàòîïðîòåêòîðíûå ñâîéñòâà ÃÊ ïðîÿâëÿþòñÿ òàêæå â ñíèæåíèè
óðîâíÿ ñûâîðîòî÷íûõ òðàíñàìèíàç è êîëè÷åñòâà ïðîäóêòîâ ÏÎË â
ïå÷åíè.
Áîëüøèíñòâî
èññëåäîâàòåëåé
ñ÷èòàþò,
÷òî
ãåïàòîïðîòåêòîðíûé ýôôåêò ÃÊ îáóñëîâëåí åå àíòèîêñèäàíòíûìè
ñâîéñòâàìè è îñîáåííîñòüþ õèìè÷åñêîãî ñòðîåíèÿ ìîëåêóëû, à
èìåííî, êîíöåâûì ðàñïîëîæåíèåì ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû â
óãëåâîäíîé öåïè ìîëåêóëû ãëèêîçèäà [58].
Jeong ñ ñîàâò. [59], èçó÷àÿ ãåïàòîçàùèòíîå äåéñòâèå 18-βãëèöèððåòîâîé
êèñëîòû
ïðè
ïîâðåæäåíèè
ïå÷åíè,
èíäóöèðîâàííîì ÑCl4, óñòàíîâèëè èíãèáèðîâàíèå ýêñïðåññèè
öèòîõðîìà Ð450 2EI. Â äàííîé ðàáîòå ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå
æèâîòíûì ÃÒ ñäåðæèâàëî ðîñò àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â
219
ñûâîðîòêå êðîâè, à òàêæå ÏÎË â ïå÷åíè. Ãèäðîêñèëàçíàÿ
àêòèâíîñòü öèòîõðîìà Ð450 2EI, âûäåëåííîãî èç ïå÷åíè ìûøåé
ïîñëå ââåäåíèÿ ÃÒ, çíà÷èòåëüíî ñíèæàëàñü. Ãëèöèððåòîâàÿ
êèñëîòà ïðîÿâëÿëà òàêæå àíòèîêñèäàíòíóþ àêòèâíîñòü,
ñóùåñòâåííî ñíèæàÿ ÏÎË â ãîìîãåíàòàõ ïå÷åíè ìûøåé,
èíäóöèðîâàííîå FeCl2-àñêîðáàòîì. Àâòîðû ïîëàãàþò, ÷òî ÃÊ è åå
ìåòàáîëèò - ÃÒ, îáëàäàþò ãåïàòîïðîòåêòîðíûìè ñâîéñòâàìè,
îñëàáëÿÿ öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå ÑCl4 ïóòåì ïîäàâëåíèÿ
ýêñïðåññèè è àêòèâíîñòè èçîôîðìû öèòîõðîìà Ð450 2EI, à òàêæå
ñïîñîáñòâóÿ óäàëåíèþ îáðàçóåìûõ èì ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ [59].
Kimura ñ ñîàâò. [60] ïîêàçàëè, ÷òî ÃÊ è åå àíàëîãè, îñîáåííî 18α-ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà (18-α-ÃÒ), èíäóöèðóþò ðîñò êóëüòóðû
ãåïàòîöèòîâ êðûñû, âîçäåéñòâóÿ íà ðåöåïòîð ýïèäåðìàëüíîãî
ôàêòîðà ðîñòà. Ýòè ñîåäèíåíèÿ ñòèìóëèðîâàëè ñèíòåç ÄÍÊ è
ïðîëèôåðàöèþ ãåïàòîöèòîâ âçðîñëûõ êðûñ â ïåðâè÷íîé êóëüòóðå,
à òàêæå ôîñôîðèëèðîâàíèå îñòàòêîâ òèðîçèíà â EGF-ðåöåïòîðå è â
ð42 ÌÀÐÊ. Ýôôåêòû ïîäàâëÿëèñü ìîíîêëîíàëüíûìè àíòèòåëàìè
ïðîòèâ ðåöåïòîðà ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Ñïåöèôè÷åñêèå
èíãèáèòîðû òðàíñäóêöèè ñèãíàëîâ, ñâÿçàííûõ ñ ðîñòîì êëåòîê ãåíèñòåèí, 2-àìèíî-3-ìåòîêñèôëàâîí è ðàïàìèöèí - ïîëíîñòüþ
áëîêèðîâàëè èíäóöèðîâàííûé ÃÊ ñèíòåç ÄÍÊ è ïðîëèôåðàöèþ
ãåïàòîöèòîâ. Àâòîðû ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ãëèöèððèçèí è íåêîòîðûå
åãî àíàëîãè ÿâëÿþòñÿ ìèòîãåíàìè äëÿ êóëüòóðû ãåïàòîöèòîâ.
Ìåõàíèçì èõ äåéñòâèÿ, âîçìîæíî, ñâÿçàí ñ ïðèñîåäèíåíèåì
ãëèöèððèçèíà è/èëè åãî àíàëîãîâ ê EGF-ðåöåïòîðàì è
ïîñëåäóþùåé ñòèìóëÿöèåé êàñêàäà ðåàêöèé ñ ó÷àñòèåì
ðåöåïòîðíîé òèðîçèíêèíàçû è ÌÀÐÊ; ïîñëåäíÿÿ èíäóöèðóåò
ñèíòåç ÄÍÊ è ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê [60]. Ãåïàòîïðîòåêòîðíîå
äåéñòâèå ÃÊ ïðîäåìîíñòðèðîâàíî è â êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ
- ââåäåíèå åå áîëüíûì ñ èíäóöèðîâàííûì ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûìè
ëåêàðñòâàìè ãåïàòèòîì, ïðèâîäèëî ê óëó÷øåíèþ ñîñòîÿíèÿ
ïå÷åíè [61].
7.1.5. Ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò.
ÃÊ ìîæåò îêàçûâàòü ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíûé ýôôåêò, êîòîðûé
ïðîÿâëÿåòñÿ â ïîâûøåíèè óðîâíÿ ãëþêîêîðòèêîñòåðîèäîâ è
ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäîâ â êðîâè çà ñ÷åò èíãèáèðîâàíèÿ äåéñòâèÿ
11-β-îêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû (òèï 2) è 5-α-ðåäóêòàçû [44, 62].
Èíãèáèðîâàíèå ýòèõ ôåðìåíòîâ ïðèâîäèò ê óâåëè÷åíèþ â êðîâè
ñîäåðæàíèÿ êîðòèçîëà è àêòèâàöèè ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäíûõ
ðåöåïòîðîâ. Çà ñ÷åò ýòîãî äåéñòâèÿ ÃÊ, âûçâàííîãî, êàê ñ÷èòàþò,
ñòðóêòóðíûì ñõîäñòâîì åå àãëèêîíà è 11-êåòî-ñòåðîèäîâ,
ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà, ïîäîáíî ãîðìîíàì êîðû íàäïî÷å÷íèêîâ,
220
îêàçûâàåò âëèÿíèå íà âîäíî-ñîëåâîé îáìåí, óñèëèâàÿ çàäåðæêó íàòðèÿ
è óìåíüøàÿ ñîäåðæàíèå êàëèÿ â îðãàíèçìå, ÷òî ìîæåò ïðèâîäèòü ê
ïîâûøåíèþ êðîâÿíîãî äàâëåíèÿ [63-66].
Ìèíåðàëîêîðòèêîñòåðîèäíîå äåéñòâèå ÃÊ è åå àãëèêîíà, ïîõîæåå
íà ñèíäðîì èçáûòêà ìèíåðàëîêîðòèêîèäíûõ ãîðìîíîâ, ïîëó÷èëî
íàçâàíèå "ïñåâäîàëüäîñòåðîíèçì" [65]. Èíãèáèðîâàíèå 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû ïðèâîäèò ê íàêîïëåíèþ êîðòèçîíà â
êðîâè, à àêòèâàöèÿ ðåöåïòîðîâ ïðåïÿòñòâóåò èíàêòèâàöèè
ãëþêîêîðòèêîèäîâ è ìèíåðàëîêîðòèêîèäîâ, ÷òî âëèÿåò íà áàëàíñ
ýëåêòðîëèòîâ â îðãàíèçìå [4, 5, 62, 67-70]. Ýòî, â ñâîþ î÷åðåäü, ñâÿçàíî
ñ èíãèáèðîâàíèåì Na+,K+-ÀÒÔàçû, ïîòåðåé Ê+ è çàäåðæêîé Na+,
ñìåùåíèåì êèñëîòíî-ùåëî÷íîãî áàëàíñà, óäåðæèâàíèåì âîäû. Ïðè
ýòîì íàèáîëüøóþ àêòèâíîñòü (~ â 200 ðàç âûøå) èíãèáèðîâàíèÿ 11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû ïðîÿâëÿåò ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà [69].
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî äëÿ ðàçâèòèÿ ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíîãî
ýôôåêòà íåîáõîäèìî ëèáî 2-3-õ íåäåëüíîå ïîòðåáëåíèå î÷åíü âûñîêèõ
äîç ÃÊ (ñâûøå 1,5 ãðàììà â äåíü), ëèáî äëèòåëüíîå, ìíîãî ìåñÿ÷íîå
ïîòðåáëåíèå ïðåäåëüíî-äîïóñòèìûõ äîç ÃÊ (700-900 ìã â ñóòêè).
Ñ äðóãîé ñòîðîíû, èíãèáèðîâàíèå ïðåâðàùåíèÿ êîðòèçîëà â
êîðòèçîí îêàçûâàåò ýôôåêòèâíîå èììóíîìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå,
ïîñêîëüêó êîðòèçîí ÿâëÿåòñÿ ñèëüíûì èììóííîñóïðåññîðîì.
Íåäàâíî ïîÿâèëèñü äîïîëíèòåëüíûå äàííûå î ìåõàíèçìå
ïñåâäîêîðòèêîñòåðîèäíîãî ýôôåêòà ÃÊ. Ïîêàçàíî, ÷òî ýòî âëèÿíèå
îñóùåñòâëÿåòñÿ
÷åðåç
ýêñïðåññèþ
ðåöåïòîðîâ
11-βîêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû è CRF (corticotrophin releasing factor êîðòèêîòðîïèí-ðåëèçèíã ôàêòîð) [71]. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî çàäåðæêà
ñîëåé è âîäû ïðè èçáûòî÷íîì ââåäåíèè ÃÊ êðûñàì (200 ìã/êã) ñâÿçàíà,
ïî êðàéíåé ìåðå ÷àñòè÷íî, ñ ïîâûøåíèåì ýêñïðåññèè àêâàïîðèíà-2 è
-3 â ïî÷êàõ. Ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÃÊ 0.5, 1 è 2 íåäåëè, ñ ïîìîùüþ
Âåñòåðí-áëîò àíàëèçà áûëî îáíàðóæåíî óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè
àêâàïîðèí-2 è -3 âîäíûõ êàíàëîâ âî âíóòðåííåì è âíåøíåì
ìåäóëëÿðíîì ñëîå ïî÷åê [72].
Yoh ñ ñîàâò. [73] ïîêàçàëè ýôôåêò ÃÊ íà ãëþêîêîðòèêîèäíûé
ñèãíàëüíûé ïóòü â ãåïàòîöèòàõ. ÃÊ ñíèæàëà àêòèâíîñòü
ãëþêîêîðòèêîèäíûõ ðåöåïòîðîâ ãåïàòîöèòîâ êðûñû ÷åðåç ñíèæåíèå
ýêñïðåññèè HSP90, íî ïîâûøàëà ýêñïðåññèþ ãëþêîêîðòèêîèäèíäóöèðîâàííîãî ÒÀÒ-ãåíà.
7.1.6. Àíòèêààíö
öåðîãåííîå äåéñòâèå ãëèö
öèððèçèíîâîé êèñëîòû.
Ê ìíîãî÷èñëåííûì ýôôåêòàì ÃÊ íåäàâíî äîáàâèëîñü åùå îäíî
- àíòèêàíöåðîãåííîå. Ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ, 18-β-ÃÒ êèñëîòà è 18-α-ÃÒ
ìîãóò èíãèáèðîâàòü ðîñò íåêîòîðûõ îïóõîëåé ó ìûøåé [74, 75]. Â
áîëüøèíñòâå ðàáîò ðå÷ü èäåò íå î ïðÿìîì ïðîòèâîîïóõîëåâîì
221
ýôôåêòå, à îá îïîñðåäîâàííîì, çàùèòíîì ýôôåêòå ïðîòèâ äåéñòâèÿ
êàíöåðîãåííûõ ñîåäèíåíèé. Òàê, áûëî ïîêàçàíî çàùèòíîå äåéñòâèå
ÃÊ ïðîòèâ èíäóöèðîâàííîãî êàíöåðîãåíàìè ïîâðåæäåíèÿ ÄÍÊ, à
òàêæå âîçìîæíîñòü ïîíèæàþùåé (down) ðåãóëÿöèè ðåöåïòîðà
ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà. Èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò, ÷òî
âõîäÿùèå â ñîñòàâ ñîëîäêè ïîëèôåíîëû (âêëþ÷àÿ ÃÊ) èíäóöèðóþò
àïîïòîç ðàêîâûõ êëåòîê [76].
ÃÊ çàùèùàåò êëåòêè îò èíäóöèðîâàííîãî àôëàòîêñèíîì
îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà, ÷òî ìîæåò âíîñèòü âêëàä â åå
àíòèêàíöåðîãåííîå äåéñòâèå. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ýòîò ýôôåêò
ñâÿçàí ñî ñïîñîáíîñòüþ ÃÊ èíãèáèðîâàòü ìåòàáîëèçì
ãåïàòîòîêñèíà, ïðèâîäÿùèé ê îáðàçîâàíèþ ìåòàáîëèòà,
îáëàäàþùåãî êàíöåðîãåííûì ýôôåêòîì [77].
Kobayashi ñ ñîàâò. [78] íàáëþäàëè èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ
íà ðàçâèòèå ëåãî÷íûõ ìåòàñòàçîâ ó ìûøåé ïîñëå èíîêóëÿöèè Â16
ìåëàíîìû, êîòîðîå îñóùåñòâëÿåòñÿ, êàê ïîëàãàþò àâòîðû, ÷åðåç
ðåãóëÿöèþ Ò-õåëïåðíûõ êëåòîê òèïà 2 (Th2).
ÃÊ ðåãóëèðóåò àêòèâíîñòü àêòèâàòîðíîãî áåëêà 1 (ÀÐ-1) ÿäåðíîãî òðàíñêðèïöèîííîãî ôàêòîðà, áëîêèðîâàíèå êîòîðîãî â
îïóõîëåâîé êëåòêå ìîæåò èíãèáèðîâàòü èíäóöèðîâàííóþ
êëåòî÷íóþ
òðàíñôîðìàöèþ.
Èçó÷åíèå
ìåõàíèçìà
àíòèêàíöåðîãåííîãî äåéñòâèÿ ÃÊ â êëåòêàõ Hep G2 è Vero ïîêàçàëî
âëèÿíèå ÃÊ íà àêòèâíîñòü ÀÐ-1 [79].
Kao ñ ñîàâò. [80] èçó÷àëè âëèÿíèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà
BZYQT, âêëþ÷àþùåãî ðÿä ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé, òàêèõ êàê
àñòðàãàëîçèä IV, ãèíçåíîçèä Rb1 è Rg1, càéêîñàïîíèíû à è ñ,
ãëèöèððèçèí, íà ïðîëèôåðàöèþ ðàêîâûõ êëåòîê. Ñóùåñòâåííîå
èíãèáèðîâàíèå ïðîëèôåðàöèè îòìå÷åíî òîëüêî äëÿ èñõîäíîãî
ïðåïàðàòà, òîãäà êàê îòäåëüíûå êîìïîíåíòû, â òîì ÷èñëå è ÃÊ, íå
îáëàäàëè ïîäîáíûì äåéñòâèåì.
Chan ñ ñîàâò. [81] ïîêàçàëè èíãèáèðîâàíèå ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòîé öèòîòîêñè÷íîñòè, âûçâàííîé àôëàòîêñèíîì Â1 â êëåòêàõ
ãåïàòîìû Hep G2. Àôëàòîêñèí Â1 âûçûâàåò îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ
è îáðàçîâàíèå ÀÔÊ, à ÃÊ ñòèìóëèðóåò ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè
CYP1A1 è ãëóòàòèîí-S-òðàíñôåðàçû â êóëüòóðå êëåòîê, ïðîÿâëÿÿ
òåì ñàìûì çàùèòíûå ñâîéñòâà. Ïðåäâàðèòåëüíàÿ îáðàáîòêà êëåòîê
ÃÊ òàêæå îáåñïå÷èâàëà çàùèòíîå äåéñòâèå è ïîâûøàëà âûæèâàíèå
êëåòîê. Àâòîðû ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ îáëàäàåò ñâîéñòâàìè,
çàùèùàþùèìè êëåòêó îò îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà, âûçûâàåìîãî
àôëàòîêñèíîì, à òàêæå, âîçìîæíî, ïðîòèâîîïóõîëåâîé
àêòèâíîñòüþ [81].
Ïðîèçâîäíûå ãëèöèððèçèíà â ýêñïåðèìåíòàõ íà êóëüòóðå
êëåòîê ñåëåêòèâíî òîðìîçèëè ðîñò îïóõîëåâûõ êëåòîê ÷åëîâåêà
222
[82]. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ è 18-α-ÃÒ ÿâëÿþòñÿ õîðîøèìè
àíòèïðîëèôåðàòèâíûìè àãåíòàìè, îñîáåííî íà êëåòêàõ ñ
ïîíèæåííîé ñêîðîñòüþ ðåïëèêàöèè. Àíòèïðîëèôåðàòèâíûé
ýôôåêò ýòèõ ñîåäèíåíèé áûë ÿâíî âûðàæåí íà ìåäëåííî ðàñòóùåé
ëèíèè êëåòîê MCF-7. Ñ ïîìîùüþ ðàçðàáîòàííîãî àâòîðàìè òåñòà
áûëî ïîêàçàíî, ÷òî îáðàáîòêà êëåòîê MCF-7 ðàçíûìè äîçàìè ÃÊ è
18-α-ÃÒ âûçûâàëà â íèõ àïîïòîç. Ýòî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî
äàííûå ïðèðîäíûå ôèòîýñòðîãåíû ìîæíî ðàññìàòðèâàòü â êà÷åñòâå
íîâûõ èíòåðåñíûõ àãåíòîâ äëÿ òåðàïèè ðàêà [82].
7.1.7. Âëèÿÿíèå íàà îáðààçîâààíèå NO.
 ñâÿçè ñ äàííûìè ïîñëåäíèõ ëåò î âàæíîé ôèçèîëîãè÷åñêîé
ðîëè NO è îáðàçóþùèõ åãî ôåðìåíòîâ NO-ñèíòàç [83] (ñì. ãëàâó 3),
èçó÷àëè âëèÿíèå ÃÊ íà ôóíêöèîíèðîâàíèå ýòîé áèîëîãè÷åñêè
âàæíîé ñèñòåìû.
Õàðàêòåð âëèÿíèÿ ÃÊ íà ãåíåðàöèþ NO çàâèñåë îò óñëîâèé è
ñõåìû ýêñïåðèìåíòà. Òàê, ÃÊ ñòèìóëèðîâàëà ãåíåðàöèþ NO
ìàêðîôàãàìè, èíèöèèðîâàííóþ ðàçëè÷íûìè âîçäåéñòâèÿìè,
âêëþ÷àÿ ÈÔÍ-γ, ÷òî óñèëèâàëî ñïîñîáíîñòü ìàêðîôàãîâ óáèâàòü
îïóõîëåâûå êëåòêè [84]. Èìåþòñÿ äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå îá
àêòèâàöèè â ìàêðîôàãàõ 18-β-ãëèöèððåòîâîé êèñëîòîé ýêñïðåññèè
èíäóöèáåëüíîé NO-ñèíòàçû (iNOS) [85] è óâåëè÷åíèè ïðîäóêöèè
ìÐÍÊ NO-ñèíòàçû. Ïîñêîëüêó òðàíñêðèïöèÿ iNOS íàõîäèòñÿ ïîä
êîíòðîëåì ðåãóëÿòîðîâ, àññîöèèðîâàííûõ ñ ÿäåðíûì ôàêòîðîì NFkB, áûëî èçó÷åíî âëèÿíèå ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû íà àêòèâàöèþ
ïîñëåäíåãî. Àâòîðû ïîêàçàëè, ÷òî 18-β-ÃÒ àêòèâèðóåò ñâÿçûâàíèå
NF-kB ñ áåëêàìè è ÄÍÊ, è ñäåëàëè âûâîä, ÷òî ýòî ïîâûøàåò
ýêñïðåññèþ iNOS ÷åðåç òðàíñàêòèâàöèþ NF-kB, ñòèìóëèðóÿ
ïðîäóêöèþ NO â ìàêðîôàãàõ [85]. Â îïûòàõ íà êðîëèêàõ ïîñëå
èøåìè÷åñêîãî-ðåïåðôóçèîííîãî
ïîâðåæäåíèÿ
ìèîêàðäà
(ñíèæàþùåãî óðîâåíü NO), ââåäåíèå ÃÊ âîññòàíàâëèâàëî åãî
ïðîäóêöèþ è ïîñòóïëåíèå â ïëàçìó. Àâòîðû ðàññìàòðèâàþò ÃÊ â
êà÷åñòâå
ïðîòåêòèâíîãî
ôàêòîðà
ñ
òî÷êè
çðåíèÿ
âàçîäèëÿòèðóþùåãî ýôôåêòà NO [86].
Ñ äðóãîé ñòîðîíû, Quaschning ñ ñîàâò. íàáëþäàëè ñíèæåíèå
êîëè÷åñòâà ôåðìåíòíîãî áåëêà ýíäîòåëèàëüíîé NO-ñèíòàçû
(åNOS) â òêàíè àîðòû ó êðûñ ïðè êîðîòêîì êóðñîâîì ââåäåíèè
î÷åíü âûñîêèõ äîç ÃÊ (100 ìã/êã, 7 äíåé) [87, 88]. Ýòè ýôôåêòû
àâòîðû ñâÿçàëè ñ èíàêòèâàöèåé 11-β-îêñèñòåðîèääåãèäðîãåíàçû è
ïîêàçàëè âîçìîæíîñòü èõ ïðåäîòâðàùåíèÿ àíòàãîíèñòàìè
àëüäîñòåðîíîâûõ ðåöåïòîðîâ (ñïèðîíîëàêòîíîì è ýïëåðåíîíîì).
Èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ íà îáðàçîâàíèå NO â ýêñòðåìàëüíûõ
äëÿ êëåòêè óñëîâèÿõ íàáëþäàëè â ñòèìóëèðîâàííîé
223
ëèïîïîëèñàõàðèäîì ïåðâè÷íîé êóëüòóðå ãåïàòîöèòîâ êðûñ,
êîòîðûì ââîäèëè âàêöèíó ÁÖÆ [89]. Ïðè ýòîì äîáàâëåíèå â ñðåäó
ÃÊ ïðåäîòâðàùàëî îáðàçîâàíèå êëåòêàìè èçáûòêà NO, çàùèùàÿ
êëåòêè îò àêòèâèðóåìîãî èì îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà ÷åðåç
îáðàçîâàíèå ïåðîêñèíèòðèëîâ [90]. Ðåçóëüòàòû ýòèõ èññëåäîâàíèé
ïîêàçûâàþò, ÷òî ÃÊ îêàçûâàåò ïîçèòèâíîå âëèÿíèå íà ñèñòåìó
ñèíòåçà NO, êîòîðîå, âñëåäñòâèå ìíîãîñòîðîííîñòè áèîëîãè÷åñêèõ
ýôôåêòîâ ïîñëåäíåãî, ìîæåò ïðîÿâëÿòüñÿ ÷åðåç ðàçëè÷íûå
ìåõàíèçìû.
7.2. Ïðèìåíåíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå.
7.2.1. Ïðîòèâîâèðóñíààÿ àêòèâíîñòü ÃÊ.
Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî èññëåäîâàíèé ÃÊ ñâÿçàíî ñ ðàçëè÷íûìè
ïðîÿâëåíèÿìè åå ïðîòèâîâèðóñíîé àêòèâíîñòè. Â ýòîì àñïåêòå ÃÊ â
ïîñëåäíèå ãîäû ïðèâëåêàåò áîëüøîå âíèìàíèå íå òîëüêî áèîõèìèêîâ, íî
è êëèíèöèñòîâ. Òàê, áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ è åå ñîëè â êîíöåíòðàöèÿõ 0,001
- 5% ïîëíîñòüþ èíãèáèðóþò in vitro ðåïðîäóêöèþ ÄÍÊ è ÐÍÊñîäåðæàùèõ âèðóñîâ è íåêîòîðûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ, òàêèõ êàê
öèòîìåãàëîâèðóñû, âèðóñû ãåðïåñà [91], ãåïàòèòîâ À, Â, Ñ, âèðóñ ÂÈ×, à
òàêæå âîçáóäèòåëü òóáåðêóëåçà, è ò. ä. [10, 15, 22, 39, 92 - 98].
Îïóáëèêîâàí öåëûé ðÿä ðàáîò, ïîñâÿùåííûõ âëèÿíèþ ÃÊ è åå
ïðîèçâîäíûõ íà ðåïðîäóêöèþ âèðóñà èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà
(ÂÈ×).  ÷àñòíîñòè, ïîêàçàíî, ÷òî ÃÊ ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ
ïîäàâëÿëà ïðîäóêöèþ ÂÈ× â õîäå ïåðâûõ ÷åòûðåõ ïåðåñåâîâ, à ïðè
ïîñëåäóþùèõ ïåðåñåâàõ (âïëîòü äî 20) ïðîäóêöèÿ âèðóñà
ñíèæàëàñü íà 60% ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì [99]. Ïîêàçàí ýôôåêò
ÃÊ íà ðåïëèêàöèþ ÂÈ× â êóëüòóðå ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòîê
ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (PBMC) ÷åëîâåêà ñ ïîëîæèòåëüíîé
ðåàêöèåé íà ÂÈ× [100].
Ïîêàçàíà àíòèâèðóñíàÿ àêòèâíîñòü ÃÊ ïî îòíîøåíèþ ê âèðóñàì
CHIKV è SFV, îòíîñÿùèõñÿ ê òèïó àëüôà-âèðóñîâ [101].
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ÃÊ ïîäàâëÿåò ðåïëèêàöèþ âèðóñà ÝïøòåéíàÁàððà in vitro â èíôèöèðîâàííûõ êëåòêàõ Raji. Ñ÷èòàþò, ÷òî ÃÊ
äåéñòâóåò íà ðàííåé ñòàäèè öèêëà ðåïëèêàöèè âèðóñà. Îíà íå
âëèÿåò íè íà àäñîðáöèþ âèðóñà, íè íà åãî àêòèâíîñòü. Ïî ìíåíèþ
àâòîðîâ, ÃÊ ÿâëÿåòñÿ íîâûì êëàññîì àíòè-Ýïøòåéí-Áàðð-âèðóñíûõ
ñîåäèíåíèé ñ ìåõàíèçìîì äåéñòâèÿ, îòëè÷íûì îò èíãèáèðîâàíèÿ
âèðóñíîé ÄÍÊ-ïîëèìåðàçû íóêëåîçèäíûìè àíàëîãàìè [102].
Ïîÿâèëèñü òàêæå ñîîáùåíèÿ îá ýôôåêòèâíîñòè ÃÊ ïðîòèâ
âèðóñîâ SARS (àòèïè÷íîé ïíåâìîíèè). Àâòîðû ñðàâíèâàëè
äåéñòâèå ÃÊ, ðèáàâèðèíà, àçàóðèäèíà, ïèðàçîôóëèíà è
ìèêîôåíîëîâîé êèñëîòû ïðîòèâ äâóõ êëèíè÷åñèõ èçîëÿòîâ
êîðîíàâèðóñîâ (FFM-1 è FFM-2), êîòîðûå áûëè ïîëó÷åíû îò
224
ïàöèåíòîâ ñ SARS. ÃÊ îêàçàëàñü íàèáîëåå ýôôåêòèâíîé èç íèõ
[103]. Ïîäîáíûé ðåçóëüòàò áûë ïîëó÷åí è äëÿ ïàòîãåííûõ
ôëàâèâèðóñîâ [104].
Îáîáùàÿ ìíîãî÷èñëåííûå äàííûå ëèòåðàòóðû, ìîæíî
ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ìåõàíèçì àíòèâèðóñíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ
ñêëàäûâàåòñÿ èç:
- ïðÿìîãî ïðèñîåäèíåíèÿ ê ïîâåðõíîñòè âèðóñà. Ïîäîáíî
äðóãèì ïîëèñàõàðèäàì, ÃÊ ñïîñîáíà íåïîñðåäñòâåííî
ïðèñîåäèíÿòüñÿ ê âíåøíåé ñòîðîíå ìåìáðàíû âèðóñîâ è
ìèêðîîðãàíèçìîâ, îáîãàùåííîé ãëèêîëèïèäàìè èëè ëèïîèäíûìè
ñîåäèíåíèÿìè, îáâîëàêèâàòü è èíàêòèâèðîâàòü èõ;
- ñâÿçûâàíèÿ ðåöåïòîðîâ êëåòîê-õîçÿèíà, ïðåïÿòñòâóÿ òåì
ñàìûì ïðîíèêíîâåíèþ âèðóñíûõ ÷àñòèö âíóòðü êëåòêè. Ìåõàíèçì
òî÷íî íå âûÿñíåí, íî ýòè ýôôåêòû óñòàíîâëåíû in vitro äëÿ öåëîãî
ðÿäà âîçáóäèòåëåé;
- âîçäåéñòâèÿ íà âíóòðèêëåòî÷íûå ïðîöåññû, ïðåäîòâðàùàÿ
îñâîáîæäåíèå èç êëåòêè-õîçÿèíà âíîâü ðåïëèöèðîâàííûõ
âèðóñíûõ ÷àñòèö èëè êîìïîíåíòîâ âèðóñà. Óñòàíîâëåíî
èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå ÃÊ íà êàçåèíêèíàçó II, êàçåèíêèíàçó Ñ è
ïðîòåèí-êèíàçó Ñ.
 öåëîì, ÃÊ àêòèâèðóåò êëåòêè-êèëëåðû è îáðàçîâàíèå
íåòèìóñíûõ Ò-êëåòîê è èíãèáèðóåò ðåïëèêàöèþ âèðóñà íà ðàííåé
ñòàäèè, áëîêèðóåò îñâîáîæäåíèå TNF, èíäóöèðóåò ïðîäóêöèþ γèíòåðôåðîíà. Âñå ýòî ïðåïÿòñòâóåò òðàíñêðèïöèè è ðåïëèêàöèè
âèðóñà âíóòðè êëåòêè-õîçÿèíà [4, 5, 15].
Êðîìå ýòîãî, êàê óæå óïîìèíàëîñü âûøå, ñïîñîáíîñòü ÃÊ
ñâÿçûâàòüñÿ ñ áåëêàìè è ôåðìåíòàìè, èìåþùèìè ñðîäñòâî ê
ñòåðîèäíûì ãîðìîíàì, â ÷àñòíîñòè, ñ ðàçëè÷íûìè êèíàçàìè, òàêæå
ïðèâîäèò ê âûðàæåííîìó ïðîòèâîâèðóñíîìó ýôôåêòó.
Ôîñôîðèëèðîâàíèå ýòèìè êèíàçàìè ñïåöèôè÷åñêèõ áåëêîâ
ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà, ê ðåïëèêàöèè è
òðàíñêðèïöèè ñàìîãî âèðóñà è ðàçâèòèþ âîñïàëåíèÿ. Íàïðèìåð,
êàçåèíêèíàçà II ôîñôîðèëèðóåò ñïåöèôè÷åñêèå áåëêè
èíôèöèðîâàííîé êëåòêè, íåïîñðåäñòâåííî âèðóñíûå áåëêè, â òîì
÷èñëå îáðàòíóþ òðàíñêðèïòàçó. ÃÊ èíãèáèðóåò êàçåèíêèíàçó II,
òåì ñàìûì ïðåïÿòñòâóÿ ïðîöåññó ðåïëèêàöèè âèðóñà. Äðóãàÿ
êèíàçà - êàçåèíêèíàçà Ñ - ôîñôîðèëèðóåò ÿäåðíûé ôàêòîð NF-kÂ,
êîòîðûé, â ñâîþ î÷åðåäü, ôîñôîðèëèðóåò âèðóñíûå áåëêè è
àêòèâèðóåò èíôèöèðîâàííóþ êëåòêó-õîçÿèíà. Èíãèáèðóÿ
êàçåèíêèíàçó Ñ, ÃÊ ïðåïÿòñòâóåò òðàíñêðèïöèè âèðóñà [34, 37].
 êóëüòóðå êëåòîê ÃÊ, êàê è èíòåðôåðîí-α, ðèáàâèðèí è 6àçàóðèäèí, èíãèáèðóþò ðåïëèêàöèþ 11 ïàòîãåííûõ ôëàâèâèðóñîâ.
Ïðè ýòîì ïðåèìóùåñòâî ÃÊ çàêëþ÷àåòñÿ â âîçìîæíîñòè ïîâûøåíèÿ
225
êîíöåíòðàöèè áåç öèòîñòàòè÷åñêîãî ýôôåêòà. Íåêîòîðûå
ïðîèçâîäíûå ÃÊ (ýôèðû, àìèäû, ãëèêîïåïòèäû è äð.) òàêæå
îáëàäàþò ðàçëè÷íûìè âèäàìè àêòèâíîñòè, â ÷àñòíîñòè,
ñïîñîáíîñòüþ èíãèáèðîâàòü ÂÈ× è äð. [105].
Curelli ñ ñîàâò. [106] èçó÷àëè ìåõàíèçì äåéñòâèÿ ÃÊ íà âèðóñ
ãåðïåñà, ñâÿçàííûé ñ ñàðêîìîé Êàïîøè. Ýòîò âèðóñ, ïîäîáíî
äðóãèì ãåðïåñ-âèðóñàì, ñòàíîâèòñÿ ëàòåíòíûì â èíôèöèðîâàííîé
êëåòêå, ÷òî äåëàåò åãî íåäîñòóïíûì äëÿ òåðàïèè. Áûëî ïîêàçàíî,
÷òî ÃÊ, ïîäàâëÿÿ ýêñïðåññèþ ÿäåðíûõ àíòèãåíîâ LANA (latencyassociated nuclear antigen), ñíèìàåò ëàòåíòíîñòü âèðóñà â Âëèìôîöèòàõ è èíäóöèðóåò ãèáåëü èíôèöèðîâàííîé êëåòêè.
Àâòîðû óñòàíîâèëè, ÷òî ñíèæåíèå LANA ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè
ð53, ïîâûøåíèþ óðîâíÿ ÀÔÊ, ìèòîõîíäðèàëüíîé äèñôóíêöèè è
ôðàãìåíòàöèè
ÄÍÊ,
÷òî
âûçûâàåò
àïîïòîç
êëåòêè,
ïðåïÿòñòâóþùèé ïåðñèñòåíöèè âèðóñà.
Íàèáîëåå ðåïðåçåíòàòèâíûé ñòàòèñòè÷åñêèé ìàòåðèàë íàêîïëåí ïî
óñïåøíîìó ïðèìåíåíèþ ÃÊ, â îñíîâíîì, â ñîñòàâå ïðåïàðàòà
íåîìèíîôàãåíà Ñ (ßïîíèÿ) ïðè ëå÷åíèè âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ [29, 92].
7.2.2. Ðåçóëüòààòû êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿÿ ãëèö
öèððèçèíîâîé
êèñëîòû ïðè âèðóñíûõ ãåïààòèòààõ.
Áîëüøèíñòâî èññëåäîâàíèé äåéñòâèÿ ÃÊ êàê â ñîñòàâå
íåîìèíîôàãåíà Ñ, òàê è ðàçëè÷íûõ òðàâÿíûõ ñìåñåé, ñîäåðæàùèõ
ñîëîäêó, ïðîâîäèëîñü â ßïîíèè, ãäå áîëåå 50% çàáîëåâàíèé
âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè ñîñòàâëÿåò ãåïàòèò Ñ, ïðè÷åì ó 20%
áîëüíûõ ÷åðåç 20-30 ëåò ðàçâèâàåòñÿ öèððîç ïå÷åíè, à ó 5%
áîëüíûõ â ãîä ðàçâèâàåòñÿ ãåïàòîêëåòî÷íàÿ êàðöèíîìà [107].
Ïîëîæèòåëüíûé îòâåò íà ëå÷åíèå èíòåðôåðîíîì äàþò òîëüêî 3040% áîëüíûõ, ó êîòîðûõ, êàê ïîêàçàíî, ïðèñóòñòâóåò 1b ãåíîòèï
âèðóñà.
 òî æå âðåìÿ ïîêàçàí ïðåâåíòèâíûé ýôôåêò äëèòåëüíîãî
ïðèìåíåíèÿ ÃÊ, ïðåäóïðåæäàþùèé ðàçâèòèå ãåïàòîêëåòî÷íîé
êàðöèíîìû ïðè õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ  è Ñ; ýòîò
ýôôåêò íå çàâèñåë îò ãåíîòèïà âèðóñà è íàáëþäàëñÿ â òîì ÷èñëå ó
áîëüíûõ, íå÷óâñòâèòåëüíûõ ê ëå÷åíèþ êîìáèíàöèåé èíòåðôåðîíà
ñ ðèáàâèðèíîì [29, 75, 108-110]. Y. Arase ñ ñîàâò. [108] íàáëþäàëè
áîëüíûõ ñ ÕÃÑ, èç êîòîðûõ 84-ì (I ãðóïïà) ïðîâîäèëè
âíóòðèâåííóþ òåðàïèþ íåîìèíîôàãåíîì Ñ (2-7 ðàç â íåäåëþ ïî
100 ìë), à äðóãèì 109 áîëüíûì (II ãðóïïà) äàâàëè ðàçëè÷íûå
ïðåïàðàòû ðàñòèòåëüíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. ×åðåç 10 ëåò
íàáëþäåíèé ïðîöåíò ðàçâèòèÿ ãåïàòîöåëëþëÿðíîé êàðöèíîìû
ñîñòàâèë 7% ó áîëüíûõ I ãðóïïû è 12% - II ãðóïïû, à ÷åðåç 15 ëåò ýòî ðàçëè÷èå âîçðîñëî (12% è 25% ñîîòâåòñòâåííî, p<0,05).
226
Êëèíè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî äëèòåëüíîå ëå÷åíèå
áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ ÃÊ â ñîñòàâå íåîìèíîôàãåíà Ñ
ïðåäîòâðàùàëî ðàçâèòèå íå òîëüêî ãåïàòîêëåòî÷íîé êàðöèíîìû, íî
è öèððîçà. Îòìå÷àåòñÿ ýôôåêòèâíîñòü áîëåå ÷åì 40 ëåòíåãî
ïðèìåíåíèÿ íåîìèíàôàãåíà Ñ â ëå÷åíèè àëëåðãè÷åñêèõ è âèðóñíûõ
ãåïàòèòîâ â ßïîíèè. Ó ðÿäà áîëüíûõ ñ öèððîçîì íàáëþäàëîñü
óëó÷øåíèå ñîñòîÿíèÿ ñ ïåðåõîäîì â õðîíè÷åñêóþ ôîðìó ãåïàòèòà Ñ
[107, 111]. Ïîäîáíûé ïåðåõîä öèððîçà ïå÷åíè â õðîíè÷åñêèé
ãåïàòèò Ñ ïîñëå äâóõëåòíåãî êóðñà èíúåêöèé ÃÊ îòìå÷àëè è äðóãèå
àâòîðû [112].
Â
ðàíäîìèçèðîâàííûõ
êîíòðîëèðóåìûõ
èñïûòàíèÿõ,
ðåçóëüòàòû êîòîðûõ ïðèâåäåíû â îáçîðå van Rossum ñ ñîàâò. [29],
ÃÊ âûçûâàëà çíà÷èòåëüíîå ñíèæåíèå àìèíîòðàíñôåðàç ñûâîðîòêè
è óëó÷øåíèå ãèñòîëîãè÷åñêîé õàðàêòåðèñòèêè ïå÷åíè ïî
ñðàâíåíèþ ñ ïëàöåáî. Òàê, â óñëîâèÿõ äâîéíîãî ñëåïîãî,
êîíòðîëèðóåìîãî ïëàöåáî, èññëåäîâàíèÿ 57 áîëüíûõ ñ ãåïàòèòîì
Ñ, ðåçèñòåíòíûõ ê α-èíòåðôåðîíó, ââåäåíèå 80-240 ìã ÃÊ
âíóòðèâåííî 3 ðàçà â íåäåëþ ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè
ÀëÀÒ ïðè îòñóòñòâèè ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ. Ïî äàííûì Abe ñ ñîàâò.
[113] ñðåäè áîëüíûõ ÕÃÑ, ïîëó÷àâøèõ èíòåðôåðîí âìåñòå ñ ÃÊ
(âíóòðèâåííî â òå÷åíèå 12 íåäåëü), íîðìàëèçàöèÿ àêòèâíîñòè
ÀëÀÒ â ñûâîðîòêå êðîâè íàñòóïèëà â 64,3% ñëó÷àåâ, òîãäà êàê ó
ëå÷åííûõ òîëüêî èíòåðôåðîíîì - â 33,3%. Ïðè ýòîì èñ÷åçíîâåíèå
ÐÍÊ HCV îïðåäåëÿëîñü â 38,5% è 13,3% ñîîòâåòñòâåííî.
 ìåäèöèíå Êèòàÿ, ãäå îñíîâíîå çíà÷åíèå â ëå÷åíèè ïðèäàåòñÿ èìåííî
âîññòàíîâëåíèþ èììóííîé ðåãóëÿöèè ñ ïîìîùüþ åñòåñòâåííûõ
ðàñòèòåëüíûõ èñòî÷íèêîâ, ÃÊ â âèäå ýêñòðàêòà ñîëîäêè îáÿçàòåëüíî
âêëþ÷àþò â ôîðìóëû ñìåñåé òðàâ äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ  è Ñ [14]. Ïðè
ëå÷åíèè òàêèìè ñìåñÿìè áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ âûðàæåííîå óëó÷øåíèå
ñîñòîÿíèÿ íàáëþäàëè ó áîëüøèíñòâà ïàöèåíòîâ, â òî âðåìÿ êàê â òàêîé æå
ãðóïïå, ïîëó÷àâøåé ëå÷åíèå ïî òðàäèöèîííîé åâðîïåéñêîé ñõåìå - αèíòåðôåðîíîì - ïîëîæèòåëüíûé ýôôåêò áûë îòìå÷åí ëèøü â ìåíåå
ïîëîâèíû ñëó÷àåâ [114].
Âîçìîæíîñòü âëèÿíèÿ ãåíåòè÷åñêîé ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê
ïîëîæèòåëüíîìó îòâåòó íà ÃÊ òîëüêî ó æèòåëåé þãî-âîñòî÷íîé
Àçèè áûëà èñêëþ÷åíà ñïåöèàëüíûì èññëåäîâàíèåì, ïîêàçàâøèì
ñíèæåíèå ÀëÀÒ ïîä äåéñòâèåì âíóòðèâåííî ââîäèìîé ÃÊ ïðè
õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå Ñ ó åâðîïåéñêèõ ïàöèåíòîâ, íå
÷óâñòâèòåëüíûõ ê ëå÷åíèþ èíòåðôåðîíîì [115].
Íåëüçÿ íå îòìåòèòü ðåçóëüòàòû èñïîëüçîâàíèÿ ÃÊ íà 517
ïàöèåíòàõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Ñ ñ èñïîëüçîâàíèåì
ðàçëè÷íûõ ìåäèöèíñêèõ òðàâ è èõ ñìåñåé [116]. Àâòîðû ñîîáùàþò
î ñíèæåíèè àêòèâíîñòè ÀëÀÒ ïîä âëèÿíèåì ÃÊ, îäíàêî áîëüøèé
227
ýôôåêò íàáëþäàëñÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè äðóãèõ êîìáèíàöèé, â
÷àñòíîñòè, îòìå÷àåòñÿ âûñîêàÿ ýôôåêòèâíîñòü áèîôëàâîíîèäà
ñèëèáèíà (silybin). Ïîä÷åðêèâàåòñÿ òàêæå íåîáõîäèìîñòü
ðàñøèðåíèÿ ðàíäîìèçèðîâàííûõ èññëåäîâàíèé. Íà íàø âçãëÿä,
ïîëó÷åííûé íåâûñîêèé ýôôåêò ÃÊ â ýòîé ðàáîòå ñâÿçàí ñ åå
ïåðîðàëüíûì ââåäåíèåì (âñëåäñòâèå åå íèçêîé âñàñûâàåìîñòè â
êèøå÷íèêå).
Âíèìàíèå ê "òðàâÿíîé" ìåäèöèíå ïîâûñèëîñü â ïîñëåäíåå
âðåìÿ è â ÑØÀ - â ñâÿçè ñ òåì, ÷òî áîëåå òðåòè ïàöèåíòîâ
ïðåäïî÷èòàþò èìåííî òàêîé ñïîñîá ëå÷åíèÿ [114]. Ïðè ýòîì
îòìå÷àþò õîðîøèå ýôôåêòû, ïîëó÷åííûå ïðè ëå÷åíèè ïå÷åíè â
îñíîâíîì äâóìÿ ðàñòèòåëüíûìè ñîåäèíåíèÿìè - ñèëèìàðèíà è ÃÊ.
Ïîêàçàíà ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ ïðè ââåäåíèè áîëüíûì ñïîðàäè÷åñêèì
âèðóñíûì ãåïàòèòîì Å. Ó íèõ îòìå÷àëè çàìåòíîå êëèíè÷åñêîå
óëó÷øåíèå ïîñëå 7-äíåâíîãî êóðñà âíóòðèâåííîãî ëå÷åíèÿ,
ñîïðîâîæäàþùååñÿ ñíèæåíèåì óðîâíåé ÀñÀÒ è ÀëÀÒ [117].
ÃÊ, îñîáåííî â êîìáèíàöèè ñ ëàìèâóäèíîì, îêàçàëñÿ
ýôôåêòèâíûì ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì Â,
ïîäàâëÿÿ ðåïëèêàöèþ âèðóñà [118, 119]. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî
èíòåðôåðîí ÷àñòî íå ýôôåêòèâåí ïðè ëå÷åíèè ãåíîòèïà À ýòîãî
âèðóñà.
Ïðåäïðèíèìàëèñü
ðàçëè÷íûå
ïîïûòêè
ïîâûñèòü
ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè. Íàïðèìåð, ââåäåíèå
êðîëèêàì ÃÊ ñ äîáàâëåíèåì ìåäà ïîâûøàëî ïëîùàäü ïîä êðèâîé
"êîíöåíòðàöèÿ â ïëàçìå - âðåìÿ" (AUC, area under curve) äëÿ
ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû, íå âëèÿÿ, îäíàêî, íà âñàñûâàåìîñòü ñàìîé
ÃÊ [120]. Ïîêàçàíî, ÷òî èçìåíåíèå ðÍ â ïðåäåëàõ 5,6 - 7 íå âëèÿåò
íà ãèäðîëèç ÃÊ êèøå÷íîé ôëîðîé äî ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû [121].
 òî æå âðåìÿ åñòü ìíîãîîáåùàþùèå äàííûå ïî ââåäåíèþ êðûñàì
ÃÊ â ñìåñè ñ ðàçëè÷íûìè æèðíûìè êèñëîòàìè (Ñ8:0, Ñ10:0, Ñ12:0 è
Ñ18:1) - â âèäå íàòðèåâûõ ñîëåé. Îêàçàëîñü, ÷òî ïðè èõ
àäüþâàíòíîì ââåäåíèè âìåñòå ñ ÃÊ (êðîìå Ñ8:0) âñàñûâàíèå
ïîñëåäíåé óâåëè÷èâàëîñü â 3 - 40 ðàç [122]. Ïîâûøåíèå âñàñûâàíèÿ
ÃÊ â êèøå÷íèêå ïðè îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè æèðíûõ êèñëîò
íàáëþäàëè è äðóãèå àâòîðû [123], ïðè÷åì ýôôåêò óâåëè÷èâàëñÿ ñ
óâåëè÷åíèåì äëèíû öåïè è áûë ìàêñèìàëüíûì äëÿ îëåàòà íàòðèÿ.
Òî åñòü, æèðíûå êèñëîòû ìîãóò ñëóæèòü ôàêòîðàìè,
óâåëè÷èâàþùèìè âñàñûâàíèå ÃÊ â êèøå÷íèêå.  ýòîé æå ðàáîòå ñ
öåëüþ ïîèñêà âîçìîæíîñòè ïîâûøåíèÿ áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ
ñðàâíèâàëèñü è äðóãèå ïóòè åå ââåäåíèÿ. Òàê, ïðè ïåðîðàëüíîì
ââåäåíèè êðûñàì (30 ìã/êã) êîíöåíòðàöèÿ ÃÊ â ïëàçìå áûëà î÷åíü
228
íèçêîé. Íî ïðè ðåêòàëüíîì èëè íàçàëüíîì ââåäåíèè ðàñòâîðà ÃÊ â
òîé æå äîçå ïëàçìåííàÿ ÀUC óâåëè÷èâàëàñü (ò.å. íàáëþäàëàñü
áîëåå âûñîêàÿ êîíöåíòðàöèÿ â òå÷åíèå áîëåå äëèòåëüíîãî
âðåìåíè). Àáñîëþòíàÿ áèîäîñòóïíîñòü ÃÊ ïîñëå íàçàëüíîãî
ââåäåíèÿ ñîñòàâëÿëà 20%, ÷òî ïðèìåðíî â 80 ðàç âûøå, ÷åì ïðè
ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè.
Ïðåäïðèíèìàëèñü ïîïûòêè ïîèñêà ðàçëè÷íûõ ýôôåêòèâíûõ
ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ÃÊ. Òàê, ââåäåíèå ÃÊ â âèäå ñóïïîçèòîðèÿ
îêàçàëîñü ýôôåêòèâíûì äëÿ áîëüíûõ ñ ãåïàòèòîì Ñ, îñîáåííî íå
îòâå÷àþùèõ íà ÈÔÍ-òåðàïèþ. Ýôôåêòèâíîñòü çà 12 íåäåëü
ëå÷åíèÿ, êîòîðóþ îöåíèâàëè ïî ñíèæåíèþ ÀëÀÒ, îêàçàëàñü ðàâíîé
òàêîâîé äëÿ âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ ÃÊ [124].
Shibata ñ ñîàâò. [125] äîáèâàëèñü ïîâûøåíèÿ áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ
â êèøå÷íèêå ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè. Òàê, ïðè ââåäåíèè
ñîáàêàì êàïñóë, ñîäåðæàùèõ ÃÊ è ëàáðàçîë (ïîëèìåðíûé êîìïëåêñ
ïîëèãëèêîëèçèðîâàííîãî ãëèöåðèäà è ÏÝÃ), ÷åðåç 24 ÷àñà
íàáëþäàëè 10-êðàòíîå ïîâûøåíèå áèîäîñòóïíîñòè ÃÊ.
Ïðèâåäåííûå äàííûå, óêàçûâàþùèå íà âûñîêóþ ýôôåêòèâíîñòü
ÃÊ â ëå÷åíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè è ïðèíöèïèàëüíóþ âîçìîæíîñòü
ïîâûøåíèÿ åå áèîäîñòóïíîñòè, ïîñëóæèëè íàì îñíîâàíèåì äëÿ
êîìáèíèðîâàííîãî èñïîëüçîâàíèÿ ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû
âìåñòå ñ ôîñôîëèïèäàìè â ñîñòàâå íîâîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî
ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 7.
1. Blumenthal M., Busse W.R., Goldberg A. The Complete
Commission E Monographs: Therapeutic Guide to Herbal Medicines.
Boston MA: Integrative Medicine Communications, 1998.
2. Duke J.A. CRC Handbook of Medicinal Herbs. Boca Raton,
Florida, CRC Press. 1985
3. Àâèöåííà. Êàíîí âðà÷åáíîé íàóêè. Òàøêåíò, ÔÀÍ. 1956.
4. Foster S. Licorice. http://www.stevenfoster.com/education/monograph/licorice.html
5. Ñîëîäêà ãîëàÿ (Glycyrrhiza glabra) http://www.floranimal.
ru/pages/flora/s/6092.html
6. Ýíöèêëîïåäèÿ ëåêàðñòâåííûõ ðàñòåíèé. Ñîëîäêà
Êîðæèíñêîãî http://www.bioshelf.ru/ru/enc/lekr/solo.shtml
7. Kusano G., Shibano M., Watanabe H., Ozaki K. Pharmaceutical
botanical studies on some glycyrrhiza species. Yakugaku Zasshi. 2003,
123, 619-631.
8. Liut H.M., Akiyama T., Sugimoto N., Maitani T. Isolation and
identification of main constituents in an enzymatically hydrolysed
229
licorice extract sweetener. Food Addit Contam. 2001, 18, 281-284.
9. Ëèòâèíåíêî Â.È., Ïîïîâà Ò.Ï., Àìîñîâ À.Ñ.  êí: Èçó÷åíèå è
èñïîëüçîâàíèå ñîëîäêè â íàðîäíîì õîçÿéñòâå ÑÑÑÐ. Àëìà-Àòà,
1991.
10. Òîëñòèêîâ Ã.À., Áàëòèíà Ë.À., Øóëüö Ý.Ý., Ïîêðîâñêèé À.Ã.
Ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà. Áèîîðãàíè÷åñêàÿ õèìèÿ. 1997, 23, 691709.
11. Yamamoto Y., Majima T., Saiki I., Tani T. Pharmaceutical evaluation of glycyrrhiza uralensis roots cultivated in eastern Nei-Meng-Gu
of China. Biol Pharm Bull. 2003, 26, 1144-1149.
12. Ueno T., Sata M. Forefront of therapy for hepatic fibrosis.
Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 2002, 99, 365-378.
13. Ãðàíêèíà Â.Ï., Íàäåæäèíà Ã.Ï. Ñîëîäêà óðàëüñêàÿ. Íàóêà,
Íîâîñèáèðñê. 1991.
14 Àðòèøåâñêàÿ Ý.Â., Çåìöîâ Ð.Í., Äàðãàåâà Ò.Ä. Òèáåòñêàÿ
ìåäèöèíà: èñòîðèÿ, ìåòîäîëîãè÷åñêîå èçó÷åíèå è ïåðñïåêòèâû
èñïîëüçîâàíèÿ. Óëàí-Óäý. 1989.
15. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè
õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîëîãèÿ è òåðàïèÿ.
2000, 9, 39-41.
16. Glycosides. http://www.friedli.com/herbs/phytochem/glycosides. html#licorice
17. Wedell L., Combest P. Herbal Pharmacy: Licorice.
http://www.uspharmacist.com.
18. Leung A.Y., Foster S. Encyclopedia of ñommon natural ingredients used in foods, drugs and cosmetics. John Wiley&Sons, New York.
1996.
19. Shim S.B., Kim N.J., Kim D.H. Beta-glucuronidase activity and
hepatoprotective effect of 18-β-glycyrrhetic acid from the rhizomes of
Gglycyrrhiza uralensis. Planta Med. 2000, 66, 40-43
20. Teelucksingh S., Mackie A.D., Burt D., McIntyre M.A., Brett L.,
Edwards C.R. Potentiation of hydrocortisone activity in skin by glycyrrhetinic acid. Lancet. 1990, 335, 1060-1063.
21. Zimmerman Ì. Immune Enhancers. http://www.newhope.
com/nutritionsciencenews/NSN_backs/Feb_99.
22. Numazaki K., Nagata N., Sato T., Chiba S. Effect of glycyrrhizin,
cyclosporin and tumor necrosis factor alpha on infection of U-937 and
MRC-5 cells by human cytomegalovirus. J Leukoc Biol. 1994, 55, 24-28.
23. Beil W., Birkholz C., Sewing K.F. Effects of flavonoids on parietal cell acid secretion, gastric mucosal prostaglandin production and
230
Helicobacter pylori growth. Arzneimittelforschung. 1995, 45, 697-700.
24. Paolini M., Pozzetti L., Sapone A., Cantelli-Forti G. Effect of
licorice and glycyrrhizin on murine liver CYP-dependent monooxygenases. Life Sci. 1998, 62, 571-582.
25. Nakajima N., Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N.,
Pollard R.B., Suzuki F. In vitro induction of anti-type 2T cells by glycyrrhizin. Burns. 1996, 22, 612-617.
26. Raphael T., J., Kuttan G. Effect of naturally occurring triterpenoids glycyrrhizic acid, ursolic acid, oleanolic acid and nomilin on
the immune system. Phytomedicine. 2003, 10, 483-489.
27. Shishido Y., Nagayama N., Masuda K., Baba M., Tamura A.,
Nagai H., Akagawa S., Kawabe Y., Machida K., Kurashima A., Komatsu
H., Yotsumoto H. Agranulocytosis due to anti-tuberculosis drugs
including isoniazid (INH) and rifampicin (RFP) - a report of four cases
and review of the literature. Kekkaku. 2003, 78, 683-689.
28. Takahara T., Watanabe A., Shiraki K. Effects of glycyrrhizin on
hepatitis B surface antigen: a biochemical and morphological study. J
Hepatol. 1994, 21, 601-609.
29. van Rossum T.G., J., Vulto A.G., De Man R.A., Droiwer J.T.,
Schalm S.W. Review article: glycyrrhizin as a potential treatment for
chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205.
30. Abe N., Ebina T., Ishida N. Interferon induction by glycyrrhizin
and glycyrrhetinic acid in mice. Microbiol Immunol. 1982, 26, 535-539.
31. Kimura M., Watanabe H., Abo T. Selective activation of
extrathumic T-cells in the liver by glycyrrhizin. Biotherapy. 1992, 5,
167-176.
32. Kobayashi M., Fujita K., Katakura T., Utsunomiya T., Pollard R.B.,
Suzuki F. Inhibitory effect of glycyrrhizin on experimental pulmonary
metastasis in mice inoculated with B16 melanoma. Anticancer Res. 2002,
22, 4053-4058
33. Abe M., Akbar F., Hasebe A., Horiike N., Onji M. Glycyrrhizin
enhances interleukin-10 production by liver dendritic cells in mice
with hepatitis. J Gastroenterol. 2003, 38, 962-967.
34. Dai J.H., Iwatani Y., Ishida T., Terunuma H., Kasai H., Iwakula
Y., Fujiwara H., Ito M. Glycyrrhizin enhances interleukin-12 production in peritoneal macrophages. Immunology. 2001, 103, 235-243.
35. Utsunomiya T., Kobayashi M., Ito M., Herndon D.N., Pollard
R.B., Suzuki F. Glycyrrhizin restores the impaired IL-12 production in
thermally injured mice. Cytokine. 2001, 14, 49-55.
36. Collins R., Howard C., Duggan S., Werling D. Bovine interleukin-12 and modulation of IFN gamma production. Vet Immunol
Immunopathol. 1999, 68, 193-207.
37. Du C., Sriram S. Induction of interleukin-12/p40 by superantigens in macrophages is mediated by activation of nuclear factor231
kappaB. Cell Immunol. 2000, 199, 50-57.
38. Rosenzweig S.D., Holland S.M. Congenital defects in the interferon-gamma/interleukin-12 pathway. Curr Opin Pediatr. 2004, 16, 38.
39. Miyaji C., Miyakawa R., Watanabe H., Kawamura H., Abo T.
Mechanisms underlying the activation of cytotoxic function mediated
by hepatic lymphocytes following the administration of glycyrrhizin.
Int Immunopharmacol. 2002, 2, 1079-1086.
40. Miyake K., Tango S., Ota Y., Mitamura K., Yoshiba M., Kako M.,
Hayashi S., Ikeda Y., Hayashida N., Iwabuchi S., Sato Y., Tomi T.,
Funaki N., Hashimoto N., Umeda T., Miyazaki J., Tanaka K., Endo Y.,
Suzuki H. Efficacy of Stronger Neo-Minophagen C compared between
two doses administered three times a week on patients with chronic
viral hepatitis background. J Gastroenterol Hepatol. 2002, 17, 11981204.
41. Darnofall M., Eckard S. Licorice. http://www.geocities.com/
chadrx/licorice.html
42. Kai K., Komine K., Asai K., Kuroishi T., Komine Y., Kozutsumi
T., Itagaki M., Ohta M., Endo Y., Kumagai K. Antiinflammatory effects
of intramammary infusions of glycyrrhizin in lactating cows with mastitis caused by coaulase-negative staphylococci. Am J Vet Res. 2003, 64,
1213-1220.
43. Ito M., Sato A., Hirabayashi K., Tanabe F., Shigeta S., Baba M.,
De Clercq E., Nakashima H., Yamamoto N. Mechanism of inhibitory
effect of glycyrrhizin on replication of human immunodeficiency virus
(HIV). Antiviral Res. 1988, 10, 289-298.
44. Tanahashi T., Mune T., Morita H., Tanahashi H., Isomura Y.,
Suwa T., Daido H., Gomez-Sanchez C.E., Yasuda K. Glycyrrhizic acid
suppresses type 2 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase expression in
vivo. J Steroid Biochem Mol Biol. 2002, 80, 441-447.
45. Shimoyama Y., Sakamoto R., Akaboshi T., Tanaka M., Ohtsuki
K. Characterization of secretory type IIA phospholipase A2 (sPLA2-IIA)
as a glycyrrhizin (GL)-binding protein and the GL-induced inhibition
of the CK-II-mediated stimulation of sPLA2-IIA activity in vitro. Biol
Pharm Bull. 2001, 24, 1004-1008.
46. Saeedi M., Morteza-Semnani K., Ghoreishi M.R. The treatment
of atopic dermatitis with licorice gel. J Dermatolog Treat. 2003, 14, 153157.
47. Trotta M., Peira E., Debernardi F., Gallarate M. Elastic liposomes
for skin delivery of dipotassium glycyrrhizinate. Int J Pharm. 2002, 241,
319-327.
232
48. Sakamoto R., Okano M., Takena H., Ohtsuki K. Inhibitory effect
of glycyrrhizin on the phosphorylation and DNA-binding abilities of
high mobility group proteins I and 2 in vitro. Biol Pharm Bull. 2001, 24,
906-911.
49. Dragland S., Senoo H., Wake K., Holte K., Blomhoff R. Several
culinary and medicinal herbs are important sources of dietary antioxidants. J Nutr. 2003, 133, 1286-1290.
50. Kinjo J., Hirakawa T., Tsuchihashi R., Nagao T., Okawa M.,
Nohara T., OkabeH. Hepatoprotective constituents in plants. 14. Effects
of soyasapogenol B, sophoradiol, and their glucuronides on the cytotoxicity of tert-butyl hydroperoxide to HepG2 cells. Biol Pharm Bull. 2003,
26, 1357-1260.
51. Ismair M.G., Stanca C., Ha H.R., Renner E.L., Meier P.J., KullakUblick G.A. Interactions of glycyrrhizin with organic anion transporting polypeptides of rat and human liver. Hepatol Res. 2003, 26, 343-347.
52. Nose M., Ito M., Kamimura K., Shimizu M., Ogihara Y. A comparison of the antihepatotoxic activity between glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid. Planta Med. 1994, 60, 136-139.
53. Dehpour A.R., Zahedi H., Amini S. Effects of glycyrrhiza derivatives against acetaminophen-induced hepatotoxicity. Irn J Med Sci.
1999, 24, 26-33.
54. Okamoto T., Kanda T. Glycyrrhizin protects mice from conconavalin A-induced hepatitis without affecting cytokine expression.
Int J Mol Med. 1999, 4, 149-152.
55. Okamoto T., Kajino K., Hino O. Hepatoprotective drugs for the
treatment of virus-induced chronic hepatitis: from hypercarcinogenic
state to hypocarcinogenic state. Jpn J Pharmacol. 2001, 87, 177-180.
56. Okamoto T., Okabe S. Development of anorexia in conconavalin
A-induced hepatitis in mice. Jnt J Mol Med. 2001, 7, 169-172.
57. Cai Y., Shen X.Z., Wang J.Y. Effects of glycyrrhizin on genes
expression during the process of liver fibrosis. Zhonghua Yi Xue Za Zhi.
2003, 83,1122-1125.
58. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J.,
DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by
physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism
Rewiev. 2001, 33, 125-147.
59. Jeong H.G., You H.J., Park S.J., Moon A.R., Chung Y.C., Kang
S.K., Chun H.K. Hepatoprotective effects of 18-β-glycyrrhetinic acid on
carbon tetrachloride-induced liver injury: inhibition of cytochrome
P450 2E1 expression. Pharmacol Res. 2002, 46, 221-227.
60. Kimura M., Inoue H., Hirabayashi K., Natsume H., Ogihara M.
233
Glycyrrhizin and some analogues induce growth of primary cultured
adult rat hepatocytes via epidermal growth factor receptors. Eur J of
Pharmacol. 2001, 431, 151-161.
61. Miyazawa N., Takahashi H., Yoshiike Y., Ogura T., Watanuki Y.,
Sato M., Kakemizu N., Yamakawa Y., U C.H., Goto H., Odagiri S. Effect
of glycyrrhizin on anti-tuberculisis drug-induced hepatitis. Kekkaku,
2003, 78, 15-19.
62. Kato H., Kanaoka M., Yano S., Kobayashi M. 3-Monoglucuronylglycyrrhetinic acid is a major metabolite that causes licorice-induced
pseudoaldosteronism. J Clin Endocrinol Metab. 1995, 80, 1929-1933.
63. Edwards C.R., Benediktsson R., Lindsay R.S., Seckl J.R. 11-βhydroxysteroid dehydrogenases: key enzymes in determining tissuespecific glucocorticoid effects. Steroids. 1996, 61, 263-269.
64. Heikens J., Fliers E., Endert E., Ackermans M., van Montfrans G.
Liquorice-induced hypertension - a new understanding of an old disease: case report and brief review. Neth J Med. 1995, 47, 230-234.
65. van Rossum T.G., de Jong F.H., Hop W.C., Boomsma F., Schalm
S.W. "Ðseudo-aldosteronism" induced by intravenous glycyrrhizin
treatment of chronic hepatitis C patients. J Gastroenterol Hepatol. 2001,
16, 789-795.
66. Shimojo M., Stewart P.M. Apparent mineralocorticoid excess
syndromes. J Endocrinol Invest. 1995, 18, 518-532.
67. Negro A., Rossi E., Regolisti G., Perazzoli F. Liquorice-induced
sodium retention. Merely an acquired condition of apparent mineralocorticoid excess? A case report. Ann Ital Med Int 2000, 15, 296-300.
68. Soma R., Ikeda M., Morise T., Miyamori I., Takeda R. Effect of
glycyrrhizin on cortisol metabolism in humans. Endocr Regul. 1994, 28,
31-34.
69. Morris D.J., Lo Y.H., Lichtfield W.R., Williams G.H. Impact of
dietary Na on glycyrrhetinic acid-like factors (kidney 11beta-(HSD2)GALFs) in human essential hypertension. Hypertension. 1998, 31(1
Pt2), 469-472.
70. Stewart P.M., Wallace A.M., Valentino R., Burt D., Shackleton
C.H., Edwards C.R. Mineralocorticoid activity of licorice: 11-beta-îxysterid dehydrogenase deficiency comes of age. Lancet. 1987, 2, 821-824.
71. Hanafusa J., Mune T., Tanayashi T., Isomura Y., Suwa T., Isaji
M., Daido H., Morita H., Murayama M., Yasuda K. Altered corticosteroid metabolism differentially affects pituitary corticotropin response.
Am J Physiol Endocrinol Metab. 2002, 282, 466-473.
72. Kang D.G., Sohn E.J., Lee H.S. Effects of glycyrrhizin on renal
functions in association with the regulation of water channels. Am J
234
Chin Med. 2003, 31, 403-413.
73. YohT., Nakashima T., Sumida Y., Kakisaka Y., Nakajima Y.,
Ishikawa H., Sakamoto Y., Okanoue,T., Mitsuyoshi H. Effects of glycyrrhizin on glucocorticoid signaling pathway in hepatocytes. Dig Dis
Sci. 2002, 47, 1775-1781.
74. Agarwal R., Wang Z.Y., Mukhtar H. Inhibition of mouse skin
tumor-initiating activity of DMBA by chronic oral feeding of glycyrrhizin in drinking water. Nutr Cancer. 1991, 15, 187-193.
75. Guyton K.Z., Kensler T.W. Prevention of liver cancer. Curr
Oncol Rep. 2002, 4, 464-470.
76. Wang Z.Y., Nixon D.W. Licorice and cancer. Nutr Cancer. 2001,
39, 1-11.
77. Nakamura T., Fujii T., Ichihara A., Enzyme leakage due to
change of membrane permeability of primary cultured rat hepatocytes
treated with various hepatotoxins and its prevention by glycyrrhizin.
Cell Biol Toxico. 1985, 1, 285-295.
78. Kobayashi M., Fujita K., Katakura T., Utsunomiya T., Pollard
R.B., Suzuki F. Inhibitory effect of glycyrrhizin on experimental pulmonary metastasis in mice inoculated with B16 melanoma. Anticancer
Res. 2002, 22, 4053-4058.
79. Hsiang C.Y., Lai I.L., Chao D.C., Ho T.Y. Differential regulation
of activator protein 1 activity by glycyrrhizin. Life Sci. 2002, 70, 16431656.
80. Kao S.T., Yang S.L., Hsieh C.C., Yang M.D, Wang T.F., Lin J.G.
Immunomodulation of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang on in vitro granulocyte
colony-stimulating-factor and tumor necrosis factor-alpha production
by peripheral blood mononuclear cells. Immunopharmacol
Immunotoxicol. 2000, 22, 711-720.
81. Chan H.T., Chan C., Ho J.W. Inhibition of glycyrrhizic acid on
aflatoxin Bl-induced cytotoxicity in hepatoma cells. Toxicology. 2003,
188, 211-217.
82. Rossi T., Castelli M., Zandomeneghi G., Ruberto A., Benassi L.,
Magnoni C., Santachiara S., Baggio G. Selectivity of action of glycyrrhizin derivatives on the growth of MCF-7 and HEP-2 cells.
Anticancer Res. 2003, 23, 3813-3818.
83. Stuart-Smith K. Demystified nitric oxide. J Clin Patol: Mol
Pathol. 2002, 55, 360-366.
84. Yi H., Nakashima I., Isobe K. Enhancement of nitric oxide production from activated macrophages by glycyrrhizin. Am J Chin Med.
1996, 24, 271-278.
235
85. Jeong H.G., Kim J.Y. Induction of inducible nitric oxide synthase
expression by 18-beta-glycyrrhetinic acid in macrophages. FEBS Lett.
2002, 513, 208-212.
86. Li Y, Cai H. Effect of glycyrrhizin on plasma endothelin and
serum nitric oxide in myocardial ischemia reperfusion rabbits. Hunan
Yi Ke Da Xue Xue Bao. 1999, 24, 377-378.
87. Quaschning T., Ruschitzka F., Shaw S., Luscher T.F. Aldosteron
receptor antagonism normalizes vascular function in liquorice-induced
hypertension. Hypertension. 2001, 37, 801-805.
88. Ruschitzka F., Quaschning T., Noll G., deGottardi A., Rossier
M.F., Enseleit F., Hurlimann D., Luscher T.F., Shaw S.G. Endothelin 1
type a receptor antagonism prevents vascular dysfunction and hypertension induced by 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase inhibition:
role of nitric oxide. Circulation. 2001, 103, 3129-3135.
89. Zheng Q.Z., Lou Y.J. Pathologic characteristics of immunologic
injury in primary cultured rat hepatocytes and protective effect of glycyrrhizin in vitro. Acta Pharmacol Sin. 2003, 24, 771-777.
90. Szabo C. Multiple pathways of peroxynitrite cytotoxicity.
Toxicol Lett. 2003, 140-141, 105-112.
91. Lampi G., Deidda D., Pinza M., Pompei R. Enhancement of antiherpetic activity of glycyrrhizic acid by physiological proteins. Antivir
Chem Chemother. 2001, 12, 125-131.
92. Iino S., Tango T., Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K.,
Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic
effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40.
93. Crance J.M., Scaramozzino N., Jouan A., Garin D. Interferon,
ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin: antiviral compounds against
flaviviruses. Antiviral Res. 2003, 58, 73-79.
94. Smith D. Glycyrrhizin: Research still promising still limited.
AIDS Treatment News. San Francisco. 1990, 103, 2-3.
95. Tochikura T.S., Nakashima H., Yamamoto N. Antiviral agents
with activity against human retroviruses. J Acquir Immune Defic
Syndr. 1989, 2, 441-447.
96. Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N., Pollard R.B.,
Suzuki F. Effects of glycyrrhizin, an active component of licorice roots,
on Candida albicans infection in thermally injured mice. Clin. Exp.
Immunol. 1999, 116, 291-298.
97. Badam L. In vitro antiviral activity of indigenous glycyrrhizin,
licorice and glycyrrhizic acid on Japanese encephalitic virus. J Commun
236
Dis. 1997, 29, 91-99.
98. Utsunomiya T., Kobayashi M., Pollard R.B., Suzuki F.
Glycyrrhizin, an active component of licorice roots, reduces morbidity
and mortality of mice infected with lethal doses of influenza virus.
Antimicrob Agents Chemother. 1997, 41, 551-556.
99. Ïîêðîâñêèé À.Ã., Ïëÿñóíîâà Î.À., Ãàøíèêîâà Í.Ì., Ìàìàåâà
Î.À., Ôåäþê Í.Â. Õðîíè÷åñêè èíôèöèðîâàííàÿ HIV-1 êóëüòóðà
ìîíîöèòîâ ÷åëîâåêà U937 êàê ìîäåëü äëÿ èñïûòàíèÿ
ýôôåêòèâíîñòè àãåíòîâ ïðîòèâ ÂÈ×. Âîïð âèðóñîë. 2001, 46, 38-42.
100. Sasaki H., Takei M., Kobayashi M., Pollard R.B., Suzuki F.
Effect of glycyrrhizin, an active component of licorice roots, on HIV
replication in cultures of peripheral blood mononuclear cells from HIVseropositive patients. Pathobiology. 2002-2003, 70, 229-236.
101. Briolant S., Garin D., Scaramozzino N., Jouan A., Crance J.M. In
vitro inhibition of Chikungunya and Semliki Forest viruses replication
by antiviral compounds: synergistic effect of interferon-alpha and ribavirin combination. Antiviral Res. 2004, 61, 111-117.
102. Lin J.C. Mechanism of action of glycyrrhizic acid in inhibition
of Epstein-Barr virus replication in vitro. Antiviral Res. 2003, 59, 41-47.
103. Cinati J., Morgenstern B., Bauer G., Chrandra P., Rabenau H.,
Doerr H.W. Glycyrrhizin as an active component of liquorice roots, and
replication of SARS-assotiated coronavirus. Lancet. 2003, 361, 20452046.
104. Crance J.M., Scaramozzino N., Jouan A., Garin D. Interferon,
ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin: antiviral compounds active
against pathogenic flaviviruses. Antiviral Res. 2003, 58, 73-79.
105. Baltina L.A. Chemical modification of glycyrrhizic acid as a
route to new bioactive compounds for medicine. Curr Med Chem. 2003,
10, 155-171.
106. Curelli F., Friedman-Kien A.E., Flore O. Glycyrrhizic acid alters
Kaposi sarkoma-associated herpesvirus latencym tryggering p53-mediated
apoptosis in transformed B lymphocytes. J Clin Invest. 2005, 115, 642-652.
107. Nissen, N.N., Martin P. Hepatocellular carcinoma: the highrisk patient. J Clin Gastroenterol. 2002, 35, 79-85.
108. Arase Y., Ikeda K., Murashima N., Chayama K., Tsubota A.,
Koida I., Suzuki Y., Saitoh S., Kobayashi M., Kumada H. The long term
efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients. Cancer. 1997,
79, 494-500.
109. Chayama K. Management of chronic hepatitis C and prevention
of hepatocellular carcinoma. J Gastroenterol. 2002, 37, 69-73.
237
110. Okuno M., Kojima S., Morivaki H. Chemoprevention of hepatocellular carcinoma: concept, progress and perspectives. J
Gastroenterol Hepatol. 2001, 16, 1329-1335.
111. Kumada H. Long-term treatment of chronic hepatitis C with
glycyrrhizin [stronger neo-minophagen C (SNMC)] for preventing liver
cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Oncology. 2002, 62, 94-100.
112. Watanabe M., Uchida Y., Sato S., Moritani M., Hamamoto S.,
Mishiro T., Akagi S., Kinoshita Y., Kohge N. Report of case showing
recovery from liver cirrhosis to chronic hepatitis, type C, after glycyrrhizin injection for 2 years and a sustained response by the following interferon therapy. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 1947-1949.
113. Abe Y., Ueda T., Kato T., Kohli Y. Effectiveness of interferon,
glycyrrhizin combination therapy in patients with chronic hepatitis C.
Nippon Rinsho. 1994, 52, 1817-1822.
114. Liu J.P., Manheimer E., Tsutani K., Gluud C. Medicinal herbs
for hepatitis C virus infection. Cochrane Database Syst Rev. 2001, 4,
CD003183
115. van Rossum T.G., Vulto A.G., Hop W.C., Schalm S.W.
Glycyrrhizin-induced reduction of ALT in European patients with
chronic hepatitis C. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 2432-2437.
116. Bean P. The use of alternative medicine in the treatment of
hepatitis C. Am Clin Lab. 2002, 21, 19-21.
117. Tandon A., Tandon B.N., Bhujwala R.A. Clinical spectrum of
acute sporadic hepatitis E and possible benefit of glycyrrhizin therapy.
Hepatol Res. 2002, 23, 55-61.
118. Matsuo K., Takenaka K., Shimomora H., Fujii N., Shinagawa K.,
Kiura K., Harada M. Lamivudine and glycyrrhizin for treatment of
chemotherapy-induced hepatitis B virus (HBV) hepatitis in a chronic YBV
carrier with non-Hodgkin lymphoma. Leuk Lymphoma. 2001, 41, 191195.
119. Tandon A., Tandon B.N., Bhujwala R.A. Treatment of subacute
hepatitis with Lamivudine and intravenous glycyrrhizin: a pilot study.
Hepatol Res. 2001, 20, 1-8.
120. Ching H., Hou Y.C., Hsiu S.L., Tsai S.Y., Chao P.D. Influence of
honey on the gastrointestinal metabolism and disposition of glycyrrhizin and glycyrrhetic acid in rabbits. Biol Pharm Bull. 2002, 25,
87-91.
121. Akao T. Effect of PH on metabolism of glycyrrhizin, glycyrrhetic acid and glycyrrhetic acid monoglucuronide by collected
human intestinal flora. Biol Pharm Bull. 2001, 24, 1108-1112
238
122. Higaki K., Yata T., Sone M., Ogawara K., Kimura T. Estimation
of absorption enhancement by medium-chain fatty acids in rat large
intestine. Res Commun Mol Pathol Pharmacol. 2001, 109, 231-240.
123. Sasaki K., Yonebayashi S., Yoshida M., Shimuzu K., Aotsuka T.,
Takayama K. Improvement in the bioavailability of poorly absorbed
glycyrrhizin via various non-vascular administration routes in rats. Int
J Pharm. 2003, 265, 95-102.
124. Fujioka T., Kondou T., Fukuhara A., Tounou S., Mine M.,
Mataki N., Hanada K., Ozaka M., Mitani K., Nakaya T., Iwai T.,
Miyakawa H. Efficacy of a glycyrrhizin suppository for the treatment of
chronic hepatitis C: a pilot study. Hepatol Res. 2003, 26, 10-14.
125. Shibata N., Ohno T., Shimokawa T., Hu Z., Yoshikawa Y., Koga
K., Murakami M., Takada K. Application of pressure-controlled colon
delivery capsule to oral administration of glycyrrhizin in dogs. J Pharm
Pharmacol. 2001, 53, 441-447.
239
ÃËÀÂÀ 8. ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÀß ÊÎÌÏÎÇÈÖÈß ÍÀ ÎÑÍÎÂÅ
ÃËÈÖÈÐÐÈÇÈÍÎÂÎÉ ÊÈÑËÎÒÛ È ÔÎÑÔÀÒÈÄÈËÕÎËÈÍÀ
ÑÎÈ: ÌÅÕÀÍÈÇÌ ÄÅÉÑÒÂÈß È ÒÅÕÍÎËÎÃÈß ÏÎËÓ×ÅÍÈß
C êîíöà 60-õ ãîäîâ ïðîøëîãî âåêà îäíèì èç ñïîñîáîâ ðåïàðàöèè
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå
áûëî èñïîëüçîâàíèå ðàñòèòåëüíûõ ÔË [1]. Ïåðâûì ïðåïàðàòîì,
äåéñòâóþùèì ïî òàêîìó ìåõàíèçìó, áûë ýññåíöèàëå ("Nattermann",
Ãåðìàíèÿ) [1-5], èíúåêöèîííàÿ ôîðìà êîòîðîãî ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé
ñìåñü ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà (ÑÔÕ) è ñîëåé æåë÷íûõ êèñëîò.
Îäíàêî èçâåñòíî, ÷òî æåë÷íûå êèñëîòû, â ÷àñòíîñòè, äåçîêñèõîëàò,
ÿâëÿþòñÿ ñèëüíûìè äåòåðãåíòàìè è îêàçûâàþò ïîáî÷íûå
òîêñè÷åñêèå ýôôåêòû, ïîýòîìó ìíåíèÿ êëèíèöèñòîâ â îòíîøåíèè
ýôôåêòèâíîñòè ýòîãî ïðåïàðàòà ïðîòèâîðå÷èâû.  ñâÿçè ñ ýòèì
ïðîáëåìà ðàçðàáîòêè íîâûõ ýôôåêòèâíûõ ïðåïàðàòîâ ìåìáðàíîðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè,
îñîáåííî âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ, ó÷èòûâàÿ èõ âûñîêóþ
ðàñïðîñòðàíåííîñòü, îñòàåòñÿ ïî-ïðåæíåìó àêòóàëüíîé [2, 6].
Ìíîãî÷èñëåííûìè èññëåäîâàíèÿìè 60-õ - 90-õ ãîäîâ áûëî
ïîêàçàíî, ÷òî ýôôåêòèâíîñòü ôîñôîëèïèäíîé òåðàïèè ïå÷åíè
îáóñëîâëåíà òåì, ÷òî ââîäèìûå â êðîâü ôîñôîëèïèäû áûñòðî
ïîãëîùàþòñÿ êëåòêàìè ïå÷åíè, íîðìàëèçóþò àêòèâíîñòü êëåòî÷íûõ
ôåðìåíòíûõ ñèñòåì è ïîâûøàþò äåòîêñèöèðóþùóþ ôóíêöèþ
îðãàíà [1, 7].
Îäíàêî âîçìîæíîñòü èõ øèðîêîãî ïðèìåíåíèÿ â êëèíèêå
îãðàíè÷åíà ñóùåñòâîâàíèåì åäèíñòâåííîãî ôîñôîëèïèäíîãî
ïðåïàðàòà (ýññåíöèàëå) è îòñóòñòâèåì îòå÷åñòâåííûõ àíàëîãîâ, ÷òî
è îáóñëàâëèâàåò ðàçðàáîòêó è âíåäðåíèå â êëèíè÷åñêóþ ïðàêòèêó
íîâûõ ëåêàðñòâ íà ôîñôîëèïèäíîé îñíîâå, ñïîñîáñòâóþùèõ
âîññòàíîâëåíèþ ñòðóêòóðû è ôóíêöèé ïîâðåæäåííûõ êëåòîê
ïå÷åíè.
 ìèðîâîé ëèòåðàòóðå õîðîøî îáîñíîâàíà ýôôåêòèâíîñòü
ïðèìåíåíèÿ ÃÊ. Îñîáî íåîáõîäèìî îòìåòèòü åå ïðîòèâîâèðóñíîå
äåéñòâèå, îñíîâàííîå íà ìîäóëÿöèè èììóííûõ ñâîéñòâ â
îðãàíèçìå è èíäóêöèè ÈÔÍ-γ (ñì. ãëàâó 7). Â âèäå ïðåïàðàòà
íåîìèíàôàãåí Ñ ÃÊ ïðèìåíÿåòñÿ â ßïîíèè äëÿ ëå÷åíèè
"àëëåðãè÷åñêèõ" è âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ óæå áîëåå 30 ëåò [8-10]. Â
Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè ýòîò ïðåïàðàò íå
çàðåãèñòðèðîâàí.
Èññëåäîâàíèÿ ïî âûÿñíåíèþ ðîëè ôîñôàòèäèëõîëèíà è ÃÊ â
ðåïàðàöèè ãåïàòîöèòîâ è âîññòàíîâëåíèè èõ ôóíêöèîíàëüíîé
àêòèâíîñòè áûëè íà÷àòû â íàøåé ñòðàíå â ÍÈÈ ôèçèêîõèìè÷åñêîé ìåäèöèíû ÌÇ ÐÔ è çàòåì ïðîäîëæåíû â ÃÓ ÍÈÈ
áèîìåäèöèíñêîé õèìèè ÐÀÌÍ â ïåðèîä 1975-1985 ã.ã. [11].
240
Âïåðâûå êîìïîçèöèÿ, ñîñòîÿùàÿ èç ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû è
ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà è îáëàäàþùàÿ ñïîñîáíîñòüþ
âîññòàíàâëèâàòü ìåìáðàíû êëåòîê ïå÷åíè, àêòèâíîñòü èõ
ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû, áûëà ïðåäëîæåíà íàìè â 1988 ã. [7].
Ýòîìó ïðåäøåñòâîâàëî èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ÑÔÕ (ñì. ãëàâó 6) è ÃÊ íà
ïðîöåññû ðåïàðàöèè ìåìáðàí.
8.1. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ è
ýôôåêòèâíîñòè çàùèòíîãî äåéñòâèÿ ÃÊ íà ìèêðîñîìàëüíóþ
ñèñòåìó ïå÷åíè.
Íåñìîòðÿ íà ìíîãî÷èñëåííûå èññëåäîâàíèÿ, ïîñâÿùåííûå
ôàðìàêîëîãè÷åñêèì ñâîéñòâàì ÃÊ è åå ïðîèçâîäíûõ [8, 12], ìàëî
÷òî èçâåñòíî î åå àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòè è âëèÿíèè íà
ìèêðîñîìàëüíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè.
 ñâÿçè ñ ýòèì áûëè ïðîâåäåíû ýêñïåðèìåíòû ïî îöåíêå
àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòè ñîëåé ÃÊ (Na1ÃÊ, Na3ÃÊ è K3ÃÊ), â
êîòîðûõ ïîêàçàíî, ÷òî èõ äîáàâëåíèå ê ãåïàðèíèçèðîâàííîé êðîâè
âûçâàëî òóøåíèå èíèöèèðîâàííîé èîíàìè Fe2+ õåìèëþìèíåñöåíöèè
(ÕË) ïëàçìû êðîâè íà 76 ± 4,2 %; 78 ± 5,5 % è 81 ± 6,0 % [13].
Ýôôåêòèâíîñòü òóøåíèÿ áûëà ïðèáëèçèòåëüíî îäèíàêîâîé ïðè
äîáàâëåíèè ñîëåé ÃÊ â íà÷àëå èëè íà ìàêñèìóìå ÕË
Àíòèîêèñëèòåëüíàÿ àêòèâíîñòü ñîëåé ÃÊ áûëà ñîïîñòàâèìà ñ
àêòèâíîñòüþ æèðîðàñòâîðèìîãî àíòèîêñèäàíòà èîíîëà (70 ± 5,0 %) è
áîëåå, ÷åì â 3 ðàçà ïðåâûøàëà àêòèâíîñòü âîäîðàñòâîðèìîãî
àíòèîêñèäàíòà ìàííèòîëà (24 ± 3,5%) â ýòèõ æå óñëîâèÿõ [13, 14]. Ýòè
ðåçóëüòàòû ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îòìå÷åííîå â ðÿäå ðàáîò
çàùèòíîå äåéñòâèå ÃÊ íà êëåòêè ãåïàòîöèòîâ, ïîâðåæäåííûõ ÑÑ14 â
ýêñïåðèìåíòàõ in vitro, ñâÿçàíî ñ åå àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòüþ,
ïîñêîëüêó íà÷àëüíûì ýòàïîì â ìåõàíèçìå öèòîòîêñè÷åñêîãî
äåéñòâèÿ ÑÑ14 ÿâëÿåòñÿ åãî öèòîõðîì Ð450-çàâèñèìàÿ
ìåòàáîëè÷åñêàÿ àêòèâàöèÿ â ïå÷åíè ñ îáðàçîâàíèåì·ÑÑ1•3-ðàäèêàëà,
èíèöèèðóþùåãî ÏÎË (ñì. ãëàâó 6) [15].
Ïðè àíàëèçå ñâÿçûâàíèÿ Na3ÃÊ ñ öèòîõðîìîì Ð450 ìèêðîñîì
ïå÷åíè êðûñ áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ãëèöèððèçèíàò îáðàçóåò ñ
îêèñëåííûì ãåìîïðîòåèíîì êîìïëåêñ, õàðàêòåðèçóþùèéñÿ
äèôôåðåíöèàëüíûì ñïåêòðîì ïîãëîùåíèÿ 1 òèïà ñ max = 374 íì è
min = 418 íì. Ñïåêòðàëüíàÿ êîíñòàíòà ñâÿçûâàíèÿ öèòîõðîìà Ð450
ñ Na3ÃÊ ñîñòàâëÿëà 0,32 ± 0,05 ìÌ [13]. Ýòè ðåçóëüòàòû ñîãëàñóþòñÿ
ñ ïîëó÷åííûìè ðàíåå äàííûìè î òîì, ÷òî ñóáñòðàòû 1 òèïà
ñïîñîáíû çàìåäëÿòü èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 [16, 18, 19].
Âëèÿíèÿ ÃÊ íà ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó áûëî èññëåäîâàíî
êàê in vitro, òàê è in vivo. Ïðè èññëåäîâàíèè äåéñòâèÿ ÃÊ íà
èíàêòèâàöèþ èçîëèðîâàííîãî ãåìîïðîòåèíà, öèòîõðîì Ð450 2Â4
241
âûäåëÿëè èç ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ è ðàçâîäèëè äî êîíöåíòðàöèè
1 íìîëü/ìë 100 ìÌ ôîñôàòíîãî áóôåðà, ðÍ 7,4. Äîáàâëÿëè ðàñòâîð
Na3ÃÊ â òîì æå áóôåðå äî êîíöåíòðàöèè 20 ìêÌ, è
ïðåèíêóáèðîâàëè 5 ìèí ïðè 30°Ñ, ïîñëå ÷åãî â òå÷åíèå 20 ìèí
ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ
êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450, îöåíèâàÿ âðåìÿ åãî
èíàêòèâàöèè ïî íàêîïëåíèþ íåàêòèâíîé ôîðìû (ðàçíèöà
îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé ïðè 420 è 450 íì) [7, 17]. Êàê èçâåñòíî,
êîëè÷åñòâåííîé õàðàêòåðèñòèêîé èíàêòèâàöèè ãåìîïðîòåèíà
ñëóæèò âðåìÿ åãî ïîëóèíàêòèâàöèè (t1/2). Â îòñóòñòâèå ÃÊ t1/2
ãåìîïðîòåèíà ñîñòàâëÿëî 4 ìèí, à ïðè äîáàâëåíèè Na3ÃÊ - 9 ìèí,
ò.å. ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè ãåìîïðîòåèíà â ïðèñóòñòâèè ÃÊ
ñíèæàëàñü áîëåå, ÷åì â 2 ðàçà. Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ñòàáèëèçèðóþùåì âëèÿíèè ÃÊ íà öèòîõðîì Ð450 è ñîãëàñóåòñÿ ñ
ðàíåå ïîëó÷åííûìè äàííûìè î çàùèòíîì äåéñòâèè íåêîòîðûõ
àíòèîêñèäàíòîâ íà öèòîõðîì Ð450 [18-20].
Âëèÿíèå Na3ÃÊ íà ìèêðîñîìàëüíóþ ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó
ïå÷åíè
êðûñ
èçó÷àëè
ïîñëå
êîðîòêîãî
êóðñîâîãî
âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ â äîçå 2 ìã/100 ã â òå÷åíèå òðåõ äíåé.
 ìèêðîñîìàõ, âûäåëåííûõ èç ïå÷åíè ýòèõ æèâîòíûõ, îòìå÷åíî
íåêîòîðîå óâåëè÷åíèå ñêîðîñòè ðåàêöèé ãèäðîêñèëèðîâàíèÿ
àíèëèíà è N-äåìåòèëèðîâàíèÿ àìèíîïèðèíà ïî ñðàâíåíèþ ñ
ìèêðîñîìàìè èç ïå÷åíè èíòàêòíûõ êðûñ. Îíî áûëî îáóñëîâëåíî
íåáîëüøîé èíäóêöèè öèòîõðîìà Ð450 ïîä äåéñòâèåì Na3ÃÊ
(ïðèáëèçèòåëüíî íà 35%), áëàãîäàðÿ êîòîðîé â ìèêðîñîìàõ èç
ïå÷åíè êðûñ îïûòíîé ãðóïïû âîçðàñòàëî óäåëüíîå ñîäåðæàíèå
öèòîõðîìà Ð450. Óäåëüíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà b5 è àêòèâíîñòü
ÍÀÄÍ-ôåððèöèàíèäðåäóêòàçû îñòàâàëèñü áåç èçìåíåíèé [13].
Ïðåäñòàâëåííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî
íàòðèåâàÿ
ñîëü
ãëèöèððèçèíîâîé
êèñëîòû
îáëàäàåò
àíòèîêèñëèòåëüíîé àêòèâíîñòüþ, ñâÿçûâàåòñÿ ñ öèòîõðîìîì Ð450,
îáðàçóÿ êîìïëåêñû 1 òèïà, îêàçûâàåò ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå
íà âîññòàíîâëåííûé ãåìîïðîòåèí è ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü
ìåìáðàí ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà è ïîâûøàåò ñîäåðæàíèå
öèòîõðîìà Ð450 â êëåòêàõ ïå÷åíè.
Òàêèì îáðàçîì, èìåþùèåñÿ ëèòåðàòóðíûå äàííûå è ðåçóëüòàòû
ñîáñòâåííûõ èññëåäîâàíèé îáîñíîâûâàþò âêëþ÷åíèå íàòðèåâîé
ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ñîñòàâ ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòîâ, ïðåäíàçíà÷åííûõ äëÿ ëå÷åíèÿ òîêñè÷åñêèõ è
âèðóñíûõ ïîâðåæäåíèé ïå÷åíè, ÷òî äîëæíî ñïîñîáñòâîâàòü
óâåëè÷åíèþ ýôôåêòèâíîñòè èõ äåéñòâèÿ íà ïîâðåæäåííûå
ìåìáðàíû ÝÐ ïå÷åíè. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ñî÷åòàíèå
ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ÑÔÕ íà ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ è
ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà è
242
Na3ÃÊ, àêòèâèðóþùåé èììóííóþ è èíòåðôåðîíîâóþ ñèñòåìû, à
òàêæå ñòàáèëèçèðóþùåé ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìåáðàí ÝÐ,
îêàæåòñÿ ýôôåêòèâíûì äëÿ ñîçäàíèÿ ïðèíöèïèàëüíî íîâîãî
ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà, ñî÷åòàþùåãî â ñåáå ìåõàíèçìû
äåéñòâèÿ ýòèõ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ ïðèðîäíûõ ñîåäèíåíèé.
8.2. Èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ.
8.2.1. Ñðààâíèòåëüíààÿ õààðààêòåðèñòèêàà ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïààðààòîâ.
Ïðè èññëåäîâàíèè ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ
ñìåñè ñîåâîãî ôîñôàòèäèëõîëèíà è íàòðèåâîé ñîëè
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû (ÔÕÃÊ) íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû
ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ â êà÷åñòâå ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ áûëè
èñïîëüçîâàíû: (1) ÑÔÕ - ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí, (2) ÔÕÌ ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí ñ äîáàâëåíèåì ìàëüòîçû ôèðìû
Nattermann, Ãåðìàíèÿ (ñîãëàñíî äîãîâîðó î íàó÷íîì
ñîòðóäíè÷åñòâå) è (3) ýññåíöèàëå, øèðîêî ïðèìåíÿåìûé â
êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå äëÿ ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè.
Ìîðôîëîãèÿÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïààðààòîâ. Óëüòðàñòðóêòóðó
ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö èññëåäóåìîé ñìåñè, ïîëó÷åííûõ ñ
ïîìîùüþ óëüòðàçâóêîâîãî äåçèíòåãðàòîðà, à òàêæå ïðåïàðàòîâ
ñðàâíåíèÿ (ÑÔÕ, ÔÕÌ è ýññåíöèàëå), èññëåäîâàëè ìåòîäîì
ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè [21]. Ñìåñü ÔÕÃÊ ñîñòîÿëà â îñíîâíîì
èç ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö äèàìåòðîì îò 10 äî 100 íì,
îñíîâíóþ ÷àñòü êîòîðûõ (90 %) ñîñòàâëÿëè ÷àñòèöû äèàìåòðîì 3545 íì. Ëèïîñîìû èç ÑÔÕ èìåëè ñðåäíèé äèàìåòð 200-250 íì, à
ïðåïàðàò ÔÕÌ áûë ïðåäñòàâëåí íàíî÷àñòèöàìè äèàìåòðîì îò 25 äî
100 íì, îñíîâíàÿ ÷àñòü êîòîðûõ (95 %) èìåëà äèàìåòð 75-100 íì.
Ýññåíöèàëå ïðåäñòàâëÿë ñîáîé òàêæå òîíêóþ ýìóëüñèþ
ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö äèàìåòðîì îò 4 äî 50 íì.
Ñîñòààâ è ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå ñâîéñòâàà ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïààðààòîâ. Â ñâÿçè ñ ñóùåñòâóþùèìè îïðåäåëåííûìè
òðåáîâàíèÿìè Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî êîìèòåòà ê ïðåïàðàòàì íà
ôîñôîëèïèäíîé îñíîâå (ðÍ, îñìîëÿðíîñòü, ðàçìåð ÷àñòèö è äð.)
áûëà ðàçðàáîòàíà òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ â ëàáîðàòîðíûõ óñëîâèÿõ
ñìåñè ÔÕÃÊ, îòâå÷àþùåé ýòèì òðåáîâàíèÿì. Ñîñòàâ è ôèçèêîõèìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè èññëåäóåìûõ ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòîâ ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 8.2.1.
Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 8.2.1, èíäåêñ
îêèñëåííîñòè ïðåïàðàòîâ, èçìåðÿåìûé êàê îòíîøåíèå ïîãëîùåíèÿ ïðè
233 íì (ìàêñèìóì ïîãëîùåíèÿ äèåíîâûõ êîíúþãàòîâ) ê ïîãëîùåíèþ ïðè
215 íì, íå ïðåâûøàë 0,32 äëÿ ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå, íî îêàçàëñÿ â 2 ðàçà âûøå
ó ÔÕÌ è ÑÔÕ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïðèñóòñòâèè ïðîäóêòîâ îêèñëåíèÿ
243
Òàáëèöà 8.2.1.
Ñîñòàâ è ôèçèêî-õõèìè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ*
Ïðåïàðàò
Ñîñòàâ
0,32 ± 0,09
7,3±0,25
Ñðåäíèé
äèàìåòð
íàíî÷àñòèö
35 – 45 íì
Èíäåêñ
ðÍ
îêèñëåííîñòè
ÔÕÃÊ
ÑÔÕ – 50 ìã/ìë;
Na3ÃÊ – 5 ìã/ìë
Îñìîëÿð íîñòü
230 ± 9,5
ìîñì/ë
ÑÔÕ
ÑÔÕ – 50 ìã/ìë;
0,65 ± 0,12
6,7±0,2
200 – 250 íì
-
ÔÕÌ
ÑÔÕ – 50 ìã/ìë;
0,68 ± 0,11
6,6±0,3
75 – 100 íì
-
0,31 ± 0,08
7,2±0,28
10 – 45 íì
210 ±11,4
(«Nattermann »,
Ãåðìàíèÿ )
Ýññåíöèàëå
ìàëüòîçà
–
200
ìã/ìë
ÑÔÕ – 50 ìã/ìë;
Ñîäåðæàíèå
ìîñì/ë
õîëåâîé êèñëîòû â
ïðåïàðàòå
íå
óêàçàíî
* - çäåñü è äàëåå (çà èñêëþ÷åíèåì îñîáî îãîâîðåííûõ ñëó÷àåâ) îøèáêà ñðåäíåé íå ïðåâûøàëà 510%.
ôîñôîëèïèäîâ. Çíà÷åíèå ðÍ ýìóëüñèè ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå íå ïðåâûøàëî
7,2-7,3, íî áûëî íèæå ó ÔÕÌ è ÑÔÕ (6,4-6,6).
Îñìîëÿðíîñòü, èëè ìîëÿðíîå êîëè÷åñòâî îñìîòè÷åñêè àêòèâíûõ
÷àñòèö íà ëèòð ðàñòâîðà (ìîñì/ë), êîíòðîëèðîâàëè ìåòîäîì, îñíîâàííûì
íà îïðåäåëåíèè òî÷êè çàìåðçàíèÿ íà ïîëóìèêðîàâòîìàòè÷åñêîì
îñìîìåòðå Knauer. Äëÿ ïðåïàðàòîâ ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå îíà ñîñòàâèëà 210230 ìîñì/ëèòð.
Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîëèïèäíàÿ
íàíîýìóëüñèÿ ÔÕÃÊ, ïðèãîòîâëåííàÿ ìåòîäîì óëüòðàçâóêîâîé îáðàáîòêè
èç ÑÔÕ ñ äîáàâëåíèåì Na3ÃÊ, ïî îñíîâíûì ôèçèêî-õèìè÷åñêèì
ïàðàìåòðàì íå óñòóïàåò ýññåíöèàëå, à ïî íåêîòîðûì ñâîéñòâàì ïðåâîñõîäèò
ïðåïàðàò ÔÕÌ ôèðìû "Nattermann" (Ãåðìàíèÿ).
8.2.2. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÑÔÕ è ãëèö
öèððèçèíîâîé êèñëîòû íàà
èíààêòèâààöèþ öèòîõðîìàà Ð450 .
Ñ ïîìîùüþ îïèñàííîãî âûøå ìåòîäà îöåíêè ñòàáèëüíîñòè
öèòîõðîìà Ð450 - êàê ïîêàçàòåëÿ ñîñòîÿíèÿ ìåìáðàí ÝÐ ïå÷åíè (ñì. ãëàâó
6) [7, 18, 22], áûëà èññëåäîâàíà ñïîñîáíîñòü ôîñôîëèïèäíîé
íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ, îêàçûâàòü ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà ìåìáðàíû
êàê â óñëîâèÿõ in vitro, òàê è in vivo, ïðè ââåäåíèè æèâîòíûì ñ
ïîâðåæäåííûìè â ðåçóëüòàòå îòðàâëåíèÿ ãåïàòîòðîïíûìè ÿäàìè
ìåìáðàíàìè êëåòîê ïå÷åíè.
Òàê, áûëî ïðîâåäåíî ñðàâíåíèå âëèÿíèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ
íà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè èçîëèðîâàííîãî öèòîõðîìà Ð450, ò. å. îöåíêà èõ
ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ íà ýòîò ãåìîïðîòåèí (òàáëèöà 8.2.2).
244
Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè (t
Òàáëèöà 8.2.2.
) èçîëèðîâàííîãî öèòîõðîìà Ð450
â ïðèñóòñòâèè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ.
1/2
Óñëîâèÿ
îïûòà
Èçîëèðîâàííûé
öèòîõðîì
Ð450 2Â4
ÔÕÃÊ
ÑÔÕ
ÔÕÌ
Ýññåíöèàëå
T1/2 , ìèí
8,0 + 0,5
20,0 + 1,0**
7,0 + 1,2
7,0 + 0,8
3,0 + 0,5**
Èíêóáàöèÿ ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè
Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü öèòîõðîìà Ð450 â 1 ìë 100 ìÌ òðèñ-HC1 áóôåðà ðÍ
7,4. Ìèêðîñîìû ïðåäâàðèòåëüíî èíêóáèðîâàëè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè: 5 ìã/íìîëü
öèòîõðîìà Ð450 60 ìèí ïðè 40°Ñ. Èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà Ð450 îöåíèâàëè ïî
äèôôåðåíöèàëüíûì ñïåêòðàì ïîãëîùåíèÿ íà ñïåêòðîôîòîìåòðå Hitachi 557 (ßïîíèÿ) ïðè
ðåãèñòðàöèè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðè 450 è 420 íì â ïðîöåññå èíêóáàöèè. Ðàçíèöà ìåæäó
âåëè÷èíàìè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè èíàêòèâèðîâàííîé è àêòèâíîé êàðáîêñèêîìïëåêñíîé
ôîðìàìè ôåðìåíòà (ïðè 420 è 450 íì ñîîòâåòñòâåííî) - À (420 - 450) - ðàññìàòðèâàëàñü êàê
ïîêàçàòåëü èíàêòèâàöèè [7, 22].
** ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ, ð<0,05.
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 8.2.2, âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè
èçîëèðîâàííîãî î÷èùåííîãî öèòîõðîìà Ð450 (êîíòðîëü)
ñîñòàâëÿëî 8 ìèí. Ïîñëå èíêóáàöèè ñ ýìóëüñèåé ÔÕÃÊ îíî
óâåëè÷èëîñü äî 20 ìèí. Ïðåïàðàòû ÔÕÌ è ÑÔÕ íå îêàçûâàëè
ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ; âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà
Ð450 ïðè èíêóáàöèè ñ íèìè ñîñòàâëÿëî 7 ìèí., ÷òî ìîæåò áûòü
ñâÿçàíî ñ âûñîêèì èíäåêñîì îêèñëåííîñòè ôîñôîëèïèäà.
Ýññåíöèàëå â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ âûçûâàë ðåçêóþ
äåñòàáèëèçàöèþ
öèòîõðîìà
Ð450,
ñîêðàùàÿ
âðåìÿ
ïîëóèíàêòèâàöèè ôåðìåíòà äî 3 ìèíóò, ÷òî îáóñëîâëåíî, ïîâèäèìîìó, ïðèñóòñòâèåì â íåì ïðîèçâîäíûõ æåë÷íûõ êèñëîò,
äîáàâëÿåìûõ â êà÷åñòâå äåòåðãåíòà. Òàêèì îáðàçîì, èç
èññëåäóåìûõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ òîëüêî ñìåñü ÔÕÃÊ
çàìåäëÿëà ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè èçîëèðîâàíííîãî öèòîõðîìà
Ð450, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î åå ñòàáèëèçèðóþùåì äåéñòâèè íà ýòîò
ãåìîïðîòåèí.
Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïîä äåéñòâèåì ãåïàòîòîêñèíîâ â ÝÐ (â
ìèêðîñîìàõ) ïðîèñõîäèò ñíèæåíèå êàê àáñîëþòíîãî ñîäåðæàíèÿ
öèòîõðîìà Ð450, òàê è îñëàáëåíèå åãî ñòàáèëüíîñòè áëàãîäàðÿ
ïîâðåæäåíèþ ìåìáðàíû âñëåäñòâèè èíèöèàöèè ïðîöåññîâ ÏÎË
ðåàêöèîííîñïîñîáíûìè ìåòàáîëèòàìè ýòèõ ÿäîâ [18, 19, 23] (ñì. ãëàâó 6).
 ñâÿçè ñ ýòèì íàìè áûëî èññëåäîâàíî âëèÿíèå ñìåñè ÔÕÃÊ è
ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ êàê íà àáñîëþòíîå ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà
Ð450, òàê è íà åãî àêòèâíîñòü â ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàíàõ ìèêðîñîì
ïå÷åíè êðûñ. Äëÿ ýòîé öåëè áûëè âûáðàíû òðè
ýêñïåðèìåíòàëüíûå ìîäåëè ïîâðåæäåíèÿ ìåìáðàí: 2 èç íèõ ìîäåëè îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ââåäåíèåì
ãåïàòîòîêñèíîâ CCl4 è ãåëèîòðèíà, è ìîäåëü ëåêàðñòâåííîãî
245
îòðàâëåíèÿ, âûçâàííîãî ââåäåíèåì ôåíîáàðáèòàëà [7, 23 - 26].
×åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè è èç
ïå÷åíè âûäåëÿëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì. Óäåëüíîå ñîäåðæàíèå
öèòîõðîìà Ð450 â ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ ñîñòàâëÿëî 0,52±0,07;
0,56±0,08 è 2,3±0,21 íìîëü/ìã áåëêà ïîñëå ââåäåíèÿ CCl4,
ãåëèîòðèíà è ôåíîáàðáèòàëà ñîîòâåòñòâåííî, ïî ñðàâíåíèþ ñ
0,97±0,18 íìîëü/ìã áåëêà â êîíòðîëå. Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå
æèâîòíûì
ãåïàòîòðîïíûõ
ÿäîâ
(CCl4
è
ãåëèîòðèíà)
ñîïðîâîæäàëîñü ñíèæåíèåì óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà
Ð450 íà 47 è 41 %, ñîîòâåòñòâåííî, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ïîâðåæäåíèè ìåìáðàí ÝÐ. Ââåäåíèå òèïè÷íîãî èíäóêòîðà
öèòîõðîìà Ð450 ïîäñåìåéñòâà 2Â ôåíîáàðáèòàëà, íàïðîòèâ,
âûçûâàëî óâåëè÷åíèå óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ ãåìîïðîòåèíà â 2,4
ðàçà, ÷òî òàêæå õîðîøî èçâåñòíî èç ëèòåðàòóðû [28]. Íåñìîòðÿ íà
ýòî, ñêîðîñòü èíàêòèâàöèè âîññòàíîâëåííîãî öèòîõðîìà Ð450 â
ïðåïàðàòàõ ìèêðîñîì ïå÷åíè, èíäóöèðîâàííûõ ôåíîáàðáèòàëîì
êðûñ, áûëà ãîðàçäî âûøå, ÷åì â ìèêðîñîìàõ èíòàêòíûõ æèâîòíûõ,
÷òî
ñâèäåòåëüñòâóåò
î
íàðóøåíèÿõ
áåëîê-ëèïèäíûõ
âçàèìîäåéñòâèé (t1/2 ñîñòàâèëî 6±0,3 è 20±1,1 ìèí ñîîòâåòñòâåííî).
Èíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 ïðè ââåäåíèè CCl4 è ãåëèîòðèíà
áûëà òàêæå ïîâûøåíà (t1/2 ñîñòàâèëî 5±0,4 è 8±0,6 ìèí
ñîîòâåòñòâåííî) (òàáë. 8.2.3). Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò
î íàðóøåíèè ëèïèäíîãî ìàòðèêñà è ôîñôîëèïèäíîãî îêðóæåíèÿ
öèòîõðîìà Ð450 ýòèõ ìåìáðàí ïðè âñåõ òðåõ âîçäåéñòâèÿõ è
äåìîíñòðèðóåò òàêæå ãåïàòîòîêñè÷íîñòü ôåíîáàðáèòàëà.
 äàëüíåéøåì ýôôåêò ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ñðàâíèâàåìûõ
ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ îöåíèâàëè ïî çàìåäëåíèþ
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â ïîâðåæäåííûõ ìèêðîñîìàõ ïîñëå
èíêóáàöèè èõ ñ ýòèìè ïðåïàðàòàìè. Ïðåäâàðèòåëüíî áûëè
ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà: ñîîòíîøåíèå
ôîñôîëèïèäà ê öèòîõðîìó Ð450 (5 ìã íà 1 íìîëü) è âðåìÿ
èíêóáàöèè ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè (60 ìèí.
ïðè òåìïåðàòóðå 4°Ñ) (òàáë. 8.2.3).
Ðåçóëüòàòû ïîêàçûâàþò, ÷òî ïðè èíêóáàöèè ïîâðåæäåííûõ
ìèêðîñîì ñ íàíîýìóëüñèåé ÔÕÃÊ çàìåäëåíèå ñêîðîñòè
èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 áûëî íàèáîëåå âûðàæåííûì è
ñîñòàâëÿëî 12, 15 è 16 ìèíóò äëÿ ìèêðîñîì, ïîâðåæäåííûõ CCl4,
ãåëèîòðèíîì, ôåíîáàðáèòàëîì ñîîòâåòñòâåííî, â êîíòðîëå - 20
ìèí., à â ìèêðîñîìàõ áåç èíêóáàöèè ñ ôîñôîëèïèäíûìè
ïðåïàðàòàìè - 5, 8 è 6 ìèí. ñîîòâåòñòâåííî. Ïðåïàðàòû ÑÔÕ è ÔÕÌ
îêàçûâàëè
ìåíüøèé
ýôôåêò,
âðåìÿ
ïîëóèíàêòèâàöèè
ãåìîïðîòåèíà ñîñòàâëÿëî 10-11 ìèí. Â òî æå âðåìÿ äîáàâëåíèå 1
íìîëÿ ýññåíöèàëå íå òîëüêî íå âîññòàíàâëèâàëî ìåìáðàíó, íî,
246
Òàáëèöà 8.2.3.
Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â ìèêðîñîìàõ,
ïîâðåæäåííûõ CCl4, ãåëèîòðèíîì, ôåíîáàðáèòàëîì äî è ïîñëå
èíêóáàöèè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè (t1/2, ìèí.).
Ãðóïïû
æèâîòíûõ
Âðåìÿ ïîëó èíàêòèâàöèè
öèòîõðîìà
Ð450
Âðåìÿ ïîëóèíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 ïðè
èíêóáàöèè ìèêðîñîì ñ ôîñôîëèïèäíûìè
ïðåïàðàòàìè
ÔÕÃÊ
ÔÕÌ
Ýññåíöèàëå ÑÔÕ
Êîíòðîëü
20,0±1,1
-
-
-
-
CCl4
5,0 + 0,5
12,0 + 1,0
10,0 + 1,0
3,0 + 0,1
10,0 + 1,0
Ãåëèîòðèí
8,0 + 0,4
15,0 + 1,2
10,0 + 0,5
2,0 + 0,1
10,0 + 1,0
Ôåíîáàðáèòàë
6,0 + 0,5
16,0 + 1,1
11,0 + 1,0
2,0 + 0,1
11,0 + 1,0
Äëÿ ýêñïåðèìåíòà èñïîëüçîâàëè êðûñ-ñàìöîâ ìàññîé 100-120ã, ñîäåðæàùèõñÿ â ñòàíäàðòíûõ
óñëîâèÿõ; n=6 äëÿ êàæäîé ãðóïïû æèâîòíûõ. Ôåíîáàðáèòàë ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî â äîçå
0,8 ìã íà 100ã ìàññû êðûñàì â òå÷åíèå 3 äíåé. Ìîäåëè îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà ïîëó÷àëè
îäíîðàçîâûì ââåäåíèåì âíóòðèáðþøèííî CCl4 (0,2 ìë/100ã ìàññû) èëè ãåëèîòðèíà (30 ìã/100ã
ìàññû). Ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè ïîëó÷àëè ñòàíäàðòíûì ìåòîäîì [12]. Èíàêòèâàöèÿ
öèòîõðîìà Ð450 ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ, ïîëó÷àâøèõ CCl4, ãåëèîòðèí, ôåíîáàðáèòàë,
ïðîâîäèëàñü â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ. Èíêóáàöèîííàÿ ñìåñü ñîäåðæàëà 0,3 íìîëü Ð450 â 1 ìë
100 ìÌ, òðèñ-HC1 áóôåðà ðÍ-7.4. Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ
êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 ðåãèñòðèðîâàëè ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí [7, 21]. Â
äàëüíåéøåì ìèêðîñîìû èíêóáèðîâàëè ñ ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè èç ðàñ÷åòà 5 ìã íà 1
íìîëü ãåìîïðîòåèíà â òå÷åíèå 60 ìèí ïðè 40°Ñ è âíîâü ðåãèñòðèðîâàëè äèôôåðåíöèàëüíûå
ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 [7, 13, 21].
íàïðîòèâ, óñóãóáëÿëî ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå âñåõ òðåõ
ãåïàòîòîêñèíîâ, åùå áîëüøå óñèëèâàÿ èíàêòèâàöèþ öèòîõðîìà
Ð450 è ñîîòâåòñòâåííî ñíèæàÿ t1/2 â 2 - 3 ðàçà, âîçìîæíî, â
ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ñîëåé æåë÷íûõ êèñëîò, ïîâðåæäàþùèõ
ìåìáðàíû [29].
Òàêèì îáðàçîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñòàáèëèçèðóþùåãî
äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà öèòîõðîì Ð450
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîêàçàëè, ÷òî èç èññëåäóåìûõ
ïðåïàðàòîâ ìàêñèìàëüíûì ðåïàðèðóþùèì ýôôåêòîì íà
ãåìîïðîòåèí (öèòîõðîì Ð450) îáëàäàëà ñìåñü ÔÕÃÊ. ÑÔÕ è
ïðåïàðàò ÔÕÌ óñòóïàëè ïî ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ñìåñè ÔÕÃÊ.
Ýññåíöèàëå íå òîëüêî íå îêàçûâàë ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ, íî
è óñóãóáëÿë ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí.
Áîëåå ýôôåêòèâíîå äåéñòâèå ÔÕÃÊ â ñðàâíåíèå ñ äðóãèìè
èññëåäóåìûìè ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè áûëî òàêæå
ïîäòâåðæäåíî â ýêñïåðèìåíòàõ in vivo ïîñëå èõ òðåõêðàòíîãî
âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ îòðàâëåííûì æèâîòíûì (ðèñ. 8.2.1).
Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, ðåçêàÿ èíàêòèâàöèÿ ãåìîïðîòåèíà â
ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ CCl4 (ðèñ. 8.2.1, À) èëè
247
Ðèñ. 8.2.1. Èçìåíåíèå ñêîðîñòè èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 â
ìèêðîñîìàõ ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëåííûõ ÑÑ1 4 (À) è ãåëèîòðèíîì (Á) ïîñëå
âíóòðèáðþøèííîãî ââåäåíèÿ ÔÕÃÊ è ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ
Êðûñàì-ñàìöàì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî CCl4 ïî 0,2 ìë/100 ã ìàññû (À), èëè ãåëèîòðèí ïî 30
ìã/100 ã (Á). ×åðåç 24 ÷àñà æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû ÔÕÃÊ, èëè ÑÔÕ èëè ÔÕÌ èëè ýññåíöèàëå, â äîçå 20 ìã ÔË/100 ã, â òå÷åíèå òðåõ äíåé. ×åðåç 24
÷àñà ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè è ïîëó÷àëè ôðàêöèþ ìèêðîñîì ïå÷åíè.
Äèôôåðåíöèàëüíûå ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ êàðáîêñèêîìïëåêñà öèòîõðîìà Ð450 â îáëàñòè 400500 íì ðåãèñòðèðîâàëè â òå÷åíèå 20 ìèíóò ïðè 37î â ñðåäå, ñîäåðæàùåé 0,33 íìîëü öèòîõðîìà
Ð450/ìë, è ðàññ÷èòûâàëè ðàçíèöó ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ íåàêòèâíîé è àêòèâíîé ôîðì
öèòîõðîìà (À420 è À450 ñîîòâåòñòâåííî) - êàê ïîêàçàòåëü èíàêòèâàöèè öèòîõðîìà Ð450 [7, 14].
ãåëèîòðèíîì (ðèñ 8.2.1, Á) (êðèâûå 2), çàìåäëÿëàñü ïðè ââåäåíèè
æèâîòíûì âñåõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ, îäíàêî íàèáîëåå
âûðàæåííûì ýôôåêò áûë ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÔÕÃÊ. Àíàëîãè÷íûå
ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû è ïðè îòðàâëåíèè æèâîòíûõ
ôåíîáàðáèòàëîì [14].
Òàêèì îáðàçîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñòàáèëèçèðóþùåãî
äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà öèòîõðîì Ð450
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ìèêðîñîì, ïîêàçàëè, ÷òî èç èññëåäóåìûõ
ïðåïàðàòîâ ìàêñèìàëüíûì ðåïàðèðóþùèì ýôôåêòîì íà öèòîõðîì
Ð450 îáëàäàëà ñìåñü ÔÕÃÊ. ÑÔÕ è ïðåïàðàò ÔÕÌ ïî
ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ óñòóïàëè ñìåñè ÔÕÃÊ. Ýññåíöèàëå íå
òîëüêî íå îêàçûâàë ñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ, íî è óñóãóáëÿë
ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí.
8.2.3. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕÃ
ÃÊ íàà àêòèâíîñòü ìèêðîñîìààëüíûõ
ôåðìåíòîâ ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòààëüíûì òîêñè÷åñêèì
ãåïààòèòîì.
Ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå ìåìáðàí ìèêðîñîì îöåíèâàëè òàêæå
ïî óäåëüíîìó ñîäåðæàíèþ öèòîõðîìà Ð450 è ñêîðîñòè ÍÀÄÔÍçàâèñèìîãî îêèñëåíèÿ ñóáñòðàòîâ ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû 248
àíèëèíà è àìèíîïèðèíà. Êðîìå òîãî, äëÿ îöåíêè ðåïàðèðóþùåãî
äåéñòâèÿ íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ è ïðåïàðàòîâ ñðàâíåíèÿ íà
ìèêðîñîìàëüíûå ìåìáðàíû ïå÷åíè êðûñ â âûäåëåííûõ ìèêðîñîìàõ
îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ÍÀÄÔÍ-öèòîõðîì ñ ðåäóêòàçû è ÍÀÄÍôåððèöèàíèäðåäóêòàçû (òàáë. 8.2.4).
Òàáëèöà 8.2.4.
Âëèÿíèå ïðåïàðàòîâ íà ïîêàçàòåëè ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ
ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìû ìèêðîñîì ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì
òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì*.
Ìèêðîñîìû ïå÷åíè êðûñ ñ òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì
Ïîêàçàòåëè
Ñîäåðæàíèå öèòîõðîìà
Ð450 , (íìîëü/ìã áåëêà)
ÍÀÄÔÍ-ö
öèòîõðîì ñ ðåäóêòàçà, (íìîëü âîññò.
öèòîõðîìà ñ • ìã -1 •ìèí -1)
ÍÀÄÍ-ô
ôåððèöèàíèä ðå äóêòàçà (íìîëü âîññò.
ôåððèöèàíèäà • ìã -1•ìèí -1)
N-ä
äåìåòèëèðîâàíèå àìè íîïèðèíà , (íìîëü ôîð -
Èíòàêòíûå
ìèêðîñîìû
Áåç ââåäåíèÿ
ôîñôî ëèïèäîâ
0,97 ± 0,06
ÔÕÃÊ
ÔÕÌ
Ýññåíöèàëå
0,43 ± 0,05
0,77 ± 0,06*
0,78 ± 0,04*
0,61 ± 0,03*
0,49 ±0,003
0,25 ± 0,017
0,41± 0,02*
0,37± 0,04*
0,33± 0,019**
7,3 ± 0,06
3,63 ± 0,29
6,28 ±0,54*
5,69± 0,50*
4,95± 0,35**
9,7 ± 0,3
3,89 ± 0,3
7,69 ± 0,35*
7,73 ± 0,22*
7,80 ± 0,19**
0,99 ± 0,07
0,41 ± 0,06
0,78 ± 0,08*
0,75 ± 0,04*
0,62 ± 0,03 **
ìàëüäåãèäà • ìã -1•ìèí -1)
n-ããèäðîêñèëèðîâàíèå
àíèëèíà , (íìîëü ï -
àìèíî- ôåíîëà• ìã 1
•ìèí -1)
*- Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑ14 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê â ïîäïèñÿõ ê ðèñ 8.2.1. ×åðåç
ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ ôîñôîëèïèäîâ æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ìèêðîñîìû
ïå÷åíè è îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ñòàíäàðòíûìè ìåòîäàìè;
* - p < 0,01, ** p<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ íåëå÷åííûìè æèâîòíûìè (áåç ââåäåíèÿ ÔË) [7, 18].
Èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáë. 8.2.4, âèäíî, ÷òî îñòðûé
òîêñè÷åñêèé ãåïàòèò, âûçâàííûé ââåäåíèåì æèâîòíûì ÑÑ14,
ñîïðîâîæäàëñÿ ñíèæåíèåì óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 â
ñðåäíåì íà 55%, ñíèæåíèåì N-äåìåòèëàçíîé è n-ãèäðîêñèëàçíîé åãî
àêòèâíîñòåé (íà 55-60%), à òàêæå ñíèæåíèåì àêòèâíîñòåé ÍÀÄÔÍöèòîõðîì ñ ðåäóêòàçû è ÍÀÄÍ-ôåððèöèàíèäðåäóêòàçû íà 45-50%.
Ïîñëå ââåäåíèÿ ÔÕÃÊ, ÔÕÌ è ýññåíöèàëå íàáëþäàëè ïîâûøåíèå
óäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ öèòîõðîìà Ð450 (íà 35%), àêòèâíîñòåé ðåäóêòàç
â ñðåäíåì íà 25-30%. Ïðè÷åì, ýôôåêòèâíîñòü âñåõ òðåõ ïðåïàðàòîâ ïðè
òàêîé ñõåìå ýêñïåðèìåíòà îêàçàëàñü ïðèìåðíî îäèíàêîâîé.
8.2.4. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕÃ
ÃÊ íàà àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèààëüíûõ
ôåðìåíòîâ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòààëüíûì
ãåïààòèòîì.
Èçâåñòíî, ÷òî ïðè ïîâðåæäåíèè êëåòîê, âûçâàííîì äåéñòâèåì
ðàçëè÷íûõ àãåíòîâ, îäíèì èç óíèâåðñàëüíûõ ýòàïîâ ÿâëÿåòñÿ
249
Òàáëèöà 8.2.5.
Àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñû ïðè ââåäåíèè
ÑÑ14 è èõ âîññòàíîâëåíèå ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè
Ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçà
Öèòîõðîìîêñèäàçà
(íìîëü × ìèí × ìã )
(íìîëü × ìèí-1 × ìã-1)
-1
-1
Çäîðîâûå æèâîòíûå
12,3 ± 0,92
54,8 ± 3,36
Êðûñû, ïîëó÷àâøèå:
ÑÑl4
ÑÑl4 + ÔÕÃÊ
4,6 ± 0,53
19,9 ± 1.17
7,0 ± 0,68*
35,7 ± 1.25*
ÑÑl4 + ýññåíöèàëå
5,8 ± 0,2
30,4 ± 1.96*
Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑ14 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê â ïîäïèñè ê òàáëèöå 8.2.3. ×åðåç
ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ æèâîòíûõ çàáèâàëè, âûäåëÿëè ìèòîõîíäðèè ïå÷åíè è
îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ñòàíäàðòíûìè ìåòîäàìè [33].
* - ð< 0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ âåëè÷èíàìè äëÿ æèâîòíûõ, îòðàâëåííûõ ÑÑ14.
íàðóøåíèå ýíåðãåòè÷åñêèõ ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé [30] (ñì. ãëàâó 4).
Òàê, â ïðåïàðàòàõ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì
ãåïàòèòîì, èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑ14, íàáëþäàëîñü ðåçêîå,
áîëåå, ÷åì â 2 ðàçà, ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ äûõàòåëüíîé öåïè,
ëîêàëèçîâàííûõ âî âíóòðåííèõ ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàíàõ, ñóêöèíàòäåãèðîãåíàçû è öèòîõðîìîêñèäàçû, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ãëóáîêîì ïîâðåæäåíèè âíóòðèêëåòî÷íûõ ìåìáðàííûõ ñèñòåì [31, 32]. Â
ñâÿçè ñ ýòèì íàìè èññëåäîâàíî âëèÿíèå íàíîýìóëüñèè ÔÕÃÊ íà
àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì
ãåïàòèòîì (èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑ14) (òàáë. 8.2.5.).
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè ââåäåíèè êàê ÔÕÃÊ, òàê è ýññåíöèàëå âîçðàñòàëà
àêòèâíîñòü öèòîõðîìîêñèäàçû, à ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçû - òîëüêî ïðè
äåéñòâèè ÔÕÃÊ.
Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîëèïèäíàÿ ñìåñü ÔÕÃÊ ñïîñîáíà âîññòàíàâëèâàòü
òàêæå è àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ ìèòîõîíäðèé, õîòÿ è íå ñòîëü ýôôåêòèâíî,
êàê ôåðìåíòîâ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàí. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî in
vitro äëÿ ìèêðîñîìàëüíîãî öèòîõðîìà Ð450 ââåäåíèå ýññåíöèàëå îêàçûâàëî
äàæå ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå, óñóãóáëÿÿ âûçâàííîå ãåïàòîòîêñèíîì
ïîâðåæäåíèå ìåìáðàíû, â òî âðåìÿ êàê in vivo ýôôåêòû ÔÕÃÊ è ýññåíöèàëå
áûëè ñîïîñòàâèìû.
8.2.5. Âëèÿÿíèå ñìåñè ÔÕÃ
ÃÊ íàà ãåìîëèç ýðèòðîö
öèòîâ.
Ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå î ñòàáèëèçèðóþùåì è ðåïàðèðóþùåì
äåéñòâèè ñìåñè ÔÕÃÊ íà ìåìáðàíû ÝÐ ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü
âîçìîæíîñòü àíàëîãè÷íîãî äåéñòâèÿ íà äðóãèå áèîìåìáðàíû,
250
íàïðèìåð, ìåìáðàíû ýðèòðîöèòîâ, î ïîâðåæäåíèè êîòîðûõ â
óñëîâèÿõ in vitro ìîæíî ñóäèòü ïî ñòåïåíè ãåìîëèçà. Â ñâÿçè ñ ýòèì
áûëè ïðîâåäåíû ñðàâíèòåëüíûå èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ ñìåñè ÔÕÃÊ
è ýññåíöèàëå íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ (ðèñ. 8.2.2).
Ðèñ. 8.2.2. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ãåìîëèç ýðèòðîöèòîâ
Ýðèòðîöèòû ïîëó÷àëè èç ãåïàðèíèçèðîâàííîé êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ, îòäåëÿëè îò ïëàçìû
öåíòðèôóãèðîâàíèåì è òðèæäû ïðîìûâàëè 0,9% NaCl. (ôèçðàñòâîðîì). 0,1ìë ôîñôîëèïèäíîãî
ïðåïàðàòà (50 ìã ÑÔÕ/ìë) è 1 ìë îòìûòûõ ýðèòðîöèòîâ äîáàâëÿëè ê 3,9 ìë 0,9% NaCl
(ôèçðàñòâîðà) è èíêóáèðîâàëè 2 ÷àñà ïðè 37°Ñ ïðè îñòîðîæíîì ïåðåìåøèâàíèè. Ïî îêîí÷àíèè
èíêóáàöèè ñìåñü öåíòðèôóãèðîâàëè è îïðåäåëÿëè îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü íàäîñàäî÷íîé
æèäêîñòè ïðè 530 íì. Ïðîöåíò ãåìîëèçà ðàññ÷èòûâàëè ïî îòíîøåíèþ ê îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè
ïðè 100% ãåìîëèçå - ïðè èíêóáàöèè ýðèòðîöèòîâ â äèñòèëëèðîâàííîé âîäå â òåõ æå óñëîâèÿõ.
Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, èíêóáàöèÿ ýðèòðîöèòîâ â ôèçèîëîãè÷åñêîì
ðàñòâîðå â ïðèñóòñòâèè ýññåíöèàëå ïðè êîíöåíòðàöèè, ñîîòâåòñòâóþùåé
10 ìã/ìë ïî ÑÔÕ, ïðèâîäèò ïðàêòè÷åñêè ê ïîëíîìó ãåìîëèçó óæå â òå÷åíèå
20 ìèíóò. Â ïðîòèâîïîëîæíîñòü ýòîìó, â ïðèñóòñòâèè ñìåñè ÔÕÃÊ äàæå
ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ öåëîñòíîñòü ýðèòðîöèòîâ íå íàðóøàåòñÿ ïðîöåíò ãåìîëèçà áëèçîê ê òàêîâîìó â ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå
(êîíòðîëå), ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè ïîâðåæäàþùèõ âîçäåéñòâèé
èññëåäóåìîé ôîñôîëèïèäíîé íàíîýìóëüñèè íà ìåìáðàíû ýðèòðîöèòîâ.
8.2.6. Ñòààáèëèçèðóþù
ùåå äåéñòâèå ñìåñè ÔÕÃ
ÃÊ íàà êóëüòóðó
ýíäîòåëèààëüíûõ êëåòîê ïðè âîçäåéñòâèè òîêñè÷åñêèõ
àãåíòîâ.
 ýêñïåðèìåíòàõ in vitro áûëà ïîêàçàíà ñïîñîáíîñòü ñìåñè
ÔÕÃÊ ïðåäîõðàíÿòü ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè (â êóëüòóðå) îò
òîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ îêèñëåííûõ ïðîèçâîäíûõ õîëåñòåðèíà
(ðèñ. 8.2.3). Äëÿ ýòîãî ê êóëüòóðå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê â
251
Ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè ïóïî÷íîé âåíû
÷åëîâåêà êóëüòèâèðîâàëè â ÿ÷åéêàõ
ïëàøåê Costar (5 õ 104 ñì2) è
èñïîëüçîâàëè íà 5-6 ñóòêè. Â ñðåäó
ââîäèëè
õîëåñòàí-3,5,6-òðèîë
äî
êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 50 ìêÌ [34] è
ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû - ÔÕÊÃ èëè
ýññåíöèàëå - â êîíöåíòðàöèÿõ îò 25 äî
250 ìêã/ìë. Ïîñëå 24-÷àñîâîé èíêóáàöèè
êëåòêè îòìûâàëè, ñíèìàëè 0,25 Ì
ðàñòâîðîì òðèïñèí - ÅÄÒÀ è ñ÷èòàëè
êîëè÷åñòâî êëåòîê íà ãåìîöèòîìåòðå
[35].
Ðèñ.8.2.3. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà âûæèâàåìîñòü ýíäîòåëèàëüíûõ
êëåòîê â êóëüòóðå â óñëîâèÿõ òîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ õîëåñòàí-3
3,5,6-òòðèîëà.
ñîñòîÿíèè êîíôëóýíòíîãî ìîíîñëîÿ äîáàâëÿëè õîëåñòàí-3,5,6òðèîë äî êîíöåíòðàöèè 50 ìêÌ, âûçûâàþùåé èõ ïîëíóþ ãèáåëü
[34]. Ïðåäâàðèòåëüíîå äîáàâëåíèå â èíêóáàöèîííóþ ñðåäó
ýìóëüñèè ÔÕÃÊ îêàçûâàëî çàùèùàþùèé ýôôåêò íà êëåòêè. Êàê
âèäíî èç ðèñóíêà 8.2.3, íåñìîòðÿ íà öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå
õîëåñòàí-3,5,6-òðèîëà, êëåòêè îñòàâàëèñü æèâûìè ïðè
êîíöåíòðàöèè èññëåäóåìîé ñìåñè (ïî ÔÕ) - 150 ìêã/ìë ñðåäû [35].
Ýññåíöèàëå â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ çàùèòíîãî äåéñòâèÿ íå
îêàçûâàë. Ïðè åãî êîíöåíòðàöèè â ñðåäå, ïðåâûøàþùåé 125 ìêã/ìë
(ïî ÑÔÕ), êîëè÷åñòâî ïîãèáøèõ êëåòîê óâåëè÷èâàëîñü, ïî âñåé
âåðîÿòíîñòè, çà ñ÷åò öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âõîäÿùèõ â ñîñòàâ
ýññåíöèàëå æåë÷íûõ êèñëîò.
Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîëèïèäíàÿ
íàíîýìóëüñèÿ, ñîñòîÿùàÿ èç ÑÔÕ è Na3ÃÊ, ñïîñîáíà îêàçûâàòü
ñòàáèëèçèðóþùåå äåéñòâèå íà ôåðìåíòû ìèêðîñîìàëüíûõ è
ìèòîõîíäðèàëüíûõ ìåìáðàí, à òàêæå âîññòàíàâëèâàòü öåëîñòíîñòü
óæå ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí â êëåòêàõ ïå÷åíè æèâîòíûõ,
îòðàâëåííûõ ÑÑ14, èëè ãåëèîòðèíîì.  îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, äàííàÿ
êîìïîçèöèÿ íå èíãèáèðîâàëà àêòèâíîñòü öèòîõðîìà Ð450 â
ïîâðåæäåííûõ êëåòêàõ è íå âûçûâàëà ãåìîëèçà ýðèòðîöèòîâ. Ïîýòîìó
ñëåäóþùèì ýòàïîì áûëà ðàçðàáîòêà ñîîòâåòñòâóþùèõ òåõíîëîãèé,
ïîçâîëÿþùèõ ïîëó÷àòü íà îñíîâå ýòîé ñìåñè êàïñóëüíóþ è
èíúåêöèîííóþ ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
(ñîêðàùåííî: ôîñôî - ôîñôàòèäèëõîëèí, ãë - ãëèöèððèçèíîâàÿ
êèñëîòà, ëèâ - ïå÷åíü),
ñ ïîñëåäóþùèì ïðîâåäåíèåì
ñîîòâåòñòâóþùèõ äîêëèíè÷åñêèõ è êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé.
252
8.3. Òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé
ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ôîñôîãëèâà íà îñíîâå ôîñôàòèäèëõîëèíà ñîè
è ñîëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû.
Äëÿ ðàçðàáîòêè òàêîé òåõíîëîãèè ïðåæäå âñåãî íåîáõîäèìî
áûëî ïîäîáðàòü ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ : Na3ÃÊ, îïòèìàëüíîå íå òîëüêî
ñ òî÷êè çðåíèÿ òåõíîëîãèè, íî è îáåñïå÷èâàþùåå ìàêñèìàëüíóþ
áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòè ëåêàðñòâåííûõ ôîðì ïðåïàðàòà.
Ïðè ðàçðàáîòêå òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ ïåðîðàëüíîé ôîðìû
ëåêàðñòâåííîé êîìïîçèöèè íåîáõîäèìî áûëî ó÷åñòü è óñòðàíèòü
íåäîñòàòêè èìåþùèõñÿ êîììåð÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ íà îñíîâå
ðàñòèòåëüíûõ ôîñôîëèïèäîâ (Ýññåíöèàëå, Ëèïîñòàáèë, RhonePoulenc Rorer, Ãåðìàíèÿ). Òàê, ïåðîðàëüíàÿ ôîðìà ýññåíöèàëå
ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé êàïñóëû, ñîäåðæàùèå ñèðîïîîáðàçíóþ âÿçêóþ
ìàññó. Âëàãà, âõîäÿùàÿ â ñîñòàâ ìàññû, çíà÷èòåëüíî ñîêðàùàåò ñðîê
õðàíåíèÿ ïðåïàðàòà è óâåëè÷èâàåò åãî òîêñè÷íîñòü çà ñ÷åò
îáðàçîâàíèÿ
òàêèõ
ïðîäóêòîâ
îêèñëåíèÿ
ÑÔÕ,
êàê
ëèçîôîñôàòèäèëõîëèí (ëèçîëåöèòèí), êîòîðûé â ïîâûøåííîé
êîíöåíòðàöèè â êðîâè (ñâûøå 0,2 ìÌ èëè ñâûøå 9% îò îáùåãî
îáúåìà ëèïèäîâ â êëåòêå) âûçûâàåò ðàçðóøåíèå ìåìáðàí [36] (ñì.
òàêæå ãëàâó 3). Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî, íè îäèí êîììåð÷åñêèé
ôîñôîëèïèäíûé ïðåïàðàò, ïðèñóòñòâóþùèé íà ðûíêå â
Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, íå ðåãëàìåíòèðîâàí ïî ñîäåðæàíèþ
ëèçîÔÕ. Ýòîò ôàêò áûë ó÷òåí ïðè ðàçðàáîòêå íîðìàòèâíîòåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèè äëÿ ïðîèçâîäñòâà ïðåïàðàòà
ôîñôîãëèâ.
 ÃÓ ÍÈÈ ÁÌÕ ÐÀÌÍ áûëà ðàçðàáîòàíà òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ
ñóõîãî ãðàíóëÿòà äëÿ êàïñóëèðîâàíèÿ, ñîäåðæàùåãî ñìåñü ÑÔÕ è
Na3ÃÊ ïðè ñîîòíîøåíèè îò 2 : 1 äî 3 : 1 [37, 38]. Ñ öåëüþ âûáîðà
îïòèìàëüíîãî ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ è ñîëè ÃÊ â ýêñïåðèìåíòàõ íà
êðûñàõ è ìûøàõ áûëè èññëåäîâàíû òîêñèêîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà
ñìåñè. Äëÿ ýòîãî æèâîòíûì ââîäèëè ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìóþ
äîçó èññëåäóåìîé ñìåñè ñ ñîîòíîøåíèåì ôîñôîëèïèäà è ñîëè
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû îò 1 : 1 äî 2 : 1 (1:1; 1:3; 2:3; 1:7; 2:7 è 2:1).
Ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòà çà æèâîòíûìè âåëîñü íàáëþäåíèå â
òå÷åíèå 14 äíåé äëÿ îïðåäåëåíèÿ ëåòàëüíîñòè è ñèìïòîìîâ
îòðàâëåíèÿ. Ïîñëå çàâåðøåíèÿ òåñòèðîâàíèÿ ðàññ÷èòûâàëèñü
çíà÷åíèÿ LD50 äëÿ êàæäîãî âèäà è ïîëà æèâîòíîãî. Èññëåäîâàíèÿ
ïîêàçàëè, ÷òî â òîêñèêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâàõ èññëåäóåìûõ
êîìïîçèöèé ïðàêòè÷åñêè íå áûëî ðàçëè÷èé: çíà÷åíèÿ LD50
âàðüèðîâàëè îò 2480 ± 52 ìã/êã äëÿ ñîîòíîøåíèÿ ÔÕ:Na3ÃÊ 1:7 ó
êðûñ-ñàìöîâ è äî 2785 ± 165 ìã/êã ïðè ñîîòíîøåíèè 1:1 ó êðûññàìîê. Â äàëüíåéøåì äëÿ ðàçðàáîòêè ïåðîðàëüíîé ëåêàðñòâåííîé
ôîðìû áûëà âûáðàíà êîìïîçèöèÿ ñ ñîîòíîøåíèåì ÑÔÕ è ñîëè
253
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû 2 : 1 ïî ìàññå.
Ðàçðàáîòàííàÿ è ìàñøòàáèðîâàííàÿ â ïðîìûøëåííûõ óñëîâèÿõ
òåõíîëîãèÿ ïðîèçâîäñòâà êàïñóëüíîé ôîðìû ôîñôîãëèâà âêëþ÷àåò:
ïîëó÷åíèå ñìåñè èñõîäíûõ è âñïîìîãàòåëüíûõ êîìïîíåíòîâ,
âëàæíîå
ãðàíóëèðîâàíèå,
îïóäðèâàíèå
ãðàíóëÿòà,
êàïñóëèðîâàíèå, óïàêîâêó ãîòîâûõ êàïñóë â êîíòóðíûå ÿ÷åéêè è
êàðòîííóþ ïà÷êó (ðèñ. 8.3.1). Ñîãëàñíî ðàçðàáîòàííîìó
ïðîìûøëåííîìó ðåãëàìåíòó, ïåðâûì ýòàïîì ïðè ïðîèçâîäñòâå
êàïñóë ÿâëÿåòñÿ ïîëó÷åíèå ñìåñè èñõîäíûõ èíãðåäèåíòîâ
(ïîðîøêîîáðàçíîé ìàññû äëÿ êàïñóëèðîâàíèÿ) ñ îïðåäåëåííûìè
òåõíîëîãè÷åñêèìè õàðàêòåðèñòèêàìè (ðàçìåð ãðàíóë, âëàæíîñòü,
ñûïó÷åñòü). Äàëüíåéøèå ýòàïû (êàïñóëèðîâàíèå, óïàêîâêà â
êîíòóðíóþ ÿ÷åéêó, êàðòîííóþ ïà÷êó è äð.) ÿâëÿþòñÿ
ñòàíäàðòíûìè äëÿ ôàðìàöåâòè÷åñêîãî ïðîèçâîäñòâà.
Ðèñ. 8.3.1. Ñõåìà ïðîèçâîäñòâà êàïñóëüíîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî
ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
Êàïñóëüíàÿ ôîðìà ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
ðàçðåøåíà ê ïðèìåíåíèþ (ðåãèñòðàöèîííûé ¹ 99/212/11,
ïåðåðåãèñòðîâàí â 2003ã. й002528/01-2003).
Ïðè ðàçðàáîòêå èíúåêöèîííîé ôîðìû îñíîâíîé çàäà÷åé áûëî
ïîëó÷åíèå ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà â âèäå ôîñôîëèïèäíûõ
íàíî÷àñòèö (ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë) ñî ñðåäíèì äèàìåòðîì íå
áîëåå 100 íì. Ýòî íåîáõîäèìî äëÿ îáåñïå÷åíèÿ íàèáîëüøåé
áèîäîñòóïíîñòè è ìèíèìèçàöèè ðèñêà ïîãëîùåíèÿ êëåòêàìè
ðåòèêóëîýíäîòåëèàëüíîé ñèñòåìû (ÐÝÑ), çàõâàòûâàþùèìè áîëåå
êðóïíûå ÷àñòèöû [39-42].
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî â íàñòîÿùåå âðåìÿ îäíîé èç ïðè÷èí
ïîâûøåíîãî èíòåðåñà â ìåäèöèíå, â ÷àñòíîñòè, â ôàðìàöèè ê
íàíî÷àñòèöàì
ÿâëÿåòñÿ
èõ
ðàçìåð,
îáóñëàâëèâàþùèé
ôàðìàêîêèíåòèêó è ýôôåêòèâíîñòü ïðîíèêíîâåíèÿ â îðãàíìèøåíü. Èìåííî ðàçìåð íàíî÷àñòèö âëèÿåò íà èõ ðàñïðåäåëåíèå â
îðãàíèçìå è íà ñêîðîñòü çàõâàòà êëåòêàìè ÐÝÑ [43-46]. Äàæå
254
îòíîñèòåëüíî íåáîëüøîå ñíèæåíèå ðàçìåðà ëèïîñîì ðåçêî
ïðîäëåâàåò âðåìÿ èõ ïðåáûâàíèÿ â êðîâîòîêå, à òàêæå óñèëèâàåò èõ
ñïîñîáíîñòü äîñòèãàòü îïðåäåëåííûõ òêàíåé-ìèøåíåé. Ïðè
èçó÷åíèè
ôàðìàêîêèíåòèêè
óñòàíîâëåíî,
÷òî
êîìïëåìåíòñòèìóëèðóþùèé çàõâàò ëèïîñîì â ïå÷åíè êðûñ çàâèñèò
êàê îò ðàçìåðà ÷àñòèö, òàê è îò èõ ñîñòàâà [42, 47]. Ïå÷åíü êðûñ
çàõâàòûâàëà áûñòðåå ëèïîñîìû ñ áîëüøèì (800 íì) èëè ñðåäíèì
äèàìåòðîì (400 íì), ÷åì ìåëêèå (<200 íì) [48]. Îäíàêî, áûñòðîå
ïîãëîùåíèå êðóïíûõ ÷àñòèö îçíà÷àåò èõ çàõâàò êóïôåðîâñêèìè
êëåòêàìè ïå÷åíè è äàëüíåéøèé ìåòàáîëèçì, â òî âðåìÿ êàê
÷àñòèöû
ðàçìåðîì
ìåíåå
100
íì
íåóëîâèìû
äëÿ
ðåòèêóëîýíäîòåëèàëüíîé ñèñòåìû ïå÷åíè [39, 42].
Ïîýòîìó ïîäáîð ñîñòàâà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, à òàêæå
îïòèìèçàöèÿ èõ ðàçìåðà ÿâëÿëèñü îñíîâíîé öåëüþ ïðè ðàçðàáîòêå
òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîé
êîìïîçèöèè íà îñíîâå ÑÔÕ è ÃÊ.
Èñïîëüçîâàíèå ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö íàíîäèàïàçîíà äëÿ
èíúåêöèîííîé ôîðìû ïðåïàðàòà áûëî âûáðàíî íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ
ïðåäâàðèòåëüíûõ èññëåäîâàíèé ýôôåêòèâíîñòè âîññòàíîâëåíèÿ ìåìáðàí
ãåïàòîöèòîâ ôîñôîëèïèäàìè [7, 18], ïîêàçàâøèõ ñïîñîáíîñòü ÔË èìåííî â
òàêîì âèäå âñòðàèâàòüñÿ â ìåìáðàíû, ýôôåêòèâíî âîññòàíàâëèâàÿ
àêòèâíîñòü ìåìáðàííûõ ôåðìåíòíûõ ñèñòåì.
Îïòèìàëüíûì ðåøåíèåì çàäà÷è ïîëó÷åíèÿ ÷àñòèö ðàçìåðîì äî
100 íì îêàçàëîñü èñïîëüçîâàíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû íå
òîëüêî â êà÷åñòâå ôàðìàöåâòè÷åñêîé ñóáñòàíöèè, íî òàêæå è êàê
äåòåðãåíòà, ñïîñîáñòâóþùåãî ïîëó÷åíèþ ñòàáèëüíûõ íàíî÷àñòèö.
Ñ ýòîé öåëüþ áûëè ïðîâåäåíû èññëåäîâàíèÿ çàâèñèìîñòè ðàçìåðîâ
ïîëó÷àþùèõñÿ ÷àñòèö îò ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ è Na3ÃÊ. ×àñòèöû
ïîëó÷àëè ïóòåì âïðûñêèâàíèÿ â âîäíûé áóôåð èçîïðîïàíîëüíîãî
ðàñòâîðà ñìåñè ÑÔÕ è ÃÊ â ðàçíûõ ñîîòíîøåíèÿõ. Õàðàêòåðèñòèêó
îáðàçóþùèõñÿ âåçèêóë (íàíî÷àñòèö), íàõîäÿùèõñÿ â ðàâíîâåñèè ñ
ÃÊ â âîäíîì ðàñòâîðå, ïðîâîäèëè ìåòîäàìè àíàëèòè÷åñêîãî
óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ è ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè (ïðè
íåãàòèâíîì êîíòðàñòèðîâàíèè ôîñôîðíîâîëüôðàìîâîé êèñëîòîé).
Íà ðèñ. 8.3.2 ïðåäñòàâëåíû ýëåêòðîííûå ìèêðîôîòîãðàôèè
îáðàçóþùèõñÿ ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö ïðè ðàçíûõ ñîîòíîøåíèÿõ
ÑÔÕ è Na3ÃÊ. Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, óâåëè÷åíèå
êîíöåíòðàöèè Na3ÃÊ â èñõîäíîì ðàñòâîðå ïðèâîäèëî ê ñíèæåíèþ
ðàçìåðà îáðàçóþùèõñÿ ÷àñòèö. Ðàñïðåäåëåíèå ïîñëåäíèõ ïî
ðàçìåðàì ïðèâåäåíî â òàáë. 8.3.1.
Ïîëó÷åííûå
ðåçóëüòàòû
ïîêàçûâàþò,
÷òî
äèàìåòð
ôîñôîëèïèäíûõ ÷àñòèö ñôîðìèðîâàííûõ áåç ÃÊ ñîñòàâëÿë â
îñíîâíîì 160-220 íì.; ïðè ìèíèìàëüíîé äîëå ÃÊ (ñîîòíîøåíèå
255
Ðèñ. 8.3.2. Ýëåêòðîííàÿ ìèêðîñêîïèÿ ôîñôîëèïèäíûõ âåçèêóë ïðè ðàçíûõ
ñîîòíîøåíèÿõ ÑÔÕ: Na3ÃÊ.
Ýëåêòðîííûå ìèêðîôîòîãðàôèè ïîëó÷åíû íà ïðèáîðàõ "JEOL JEM 100" è "Phillips". 10 ìêë
ðàñòâîðà ÔÕÃÊ ñ ðàçíûì ñîîòíîøåíèåì êîìïîíåíòîâ (óêàçàíî ïîä ñîîòâåòñòâóþùèì ñíèìêîì)
â 0,1 ìÌ NH4HCO3 íàíîñèëè íà ìåäíûå ñåòêè 400 ìåø, ïîêðûòûå êàðáîíèçèðîâàííûì
êîëëîäèåì, âûäåðæèâàëè 30 ñåê, çàòåì ïðîìûâàëè 2-3 êàïëÿìè âîäû. Íåãàòèâíîå
êîíòðàñòèðîâàíèå îñóùåñòâëÿëè äîáàâëåíèåì 2-3 êàïëè 2% âîäíîãî ðàñòâîðà
ôîñôîðíîâîëüôðàìîâîé êèñëîòû. Êîíöåíòðàöèÿ ÑÔÕ âî âñåõ îáðàçöàõ 50 ìêÌ.
ÑÔÕ : Na3ÃÊ 5:1) ïðåèìóùåñòâåííûé äèàìåòð ñîñòàâëÿë 95 íì. Ïðè
ïðåîáëàäàíèè Na3ÃÊ (80% èëè ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ : Na3ÃÊ 1:4)
ýìóëüñèÿ ïðåäñòàâëÿëà ñîáîé ãåòåðîãåííóþ ñìåñü íàíî÷àñòèö
øèðîêîãî äèàïàçîíà - îò 12,5 äî 60 íì (òàáë 8.3.1).
Òàáëèöà 8.3.1
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòèö ïî ðàçìåðàì (â âåñîâûõ %)*.
Ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ: Na3ÃÊ
Äèàïàçîíû äèàìåòðà ÷àñòèö, íì
12,5 ÷15
15÷
÷17,5
22÷
÷25
1:0
32÷
÷37
5:1
1
7
5:2
4
20
5
17
1:4
45÷
÷47
50÷
÷55
4,0
5
5
60÷
÷65
Äî 95
4,0
15
35
57
49
6
21
18
35
110
160
220
47
40
*Ïðèâåäåíû ñðåäíèå äàííûå òðåõ ýêñïåðèìåíòîâ.
 äàëüíåéøåì âûáîð áûë îñòàíîâëåí íà ñîîòíîøåíèè ÑÔÕ : Na3ÃÊ 5:2,
êîòîðîå îáåñïå÷èâàåò ïîëó÷åíèå íàíî÷àñòèö ñ äèàìåòðîì 25 - 65 íì è ïðè
ýòîì ñîäåðæèò äîñòàòî÷íîå äëÿ îáåñïå÷åíèÿ ìåìáðàííûõ ðåïàðàöèîííûõ
ïðîöåññîâ êîëè÷åñòâî ÑÔÕ.
Âïîëíå âîçìîæíî, ÷òî ÃÊ, îáëàäàþùàÿ äåòåðãåíòíûìè ñâîéñòâàìè,
âëèÿåò íà ñïîñîáíîñòü ÑÔÕ ê îáðàçîâàíèþ ëèïîñîì è ìèöåëë â âîäíîé
ñðåäå, èëè, äðóãèìè ñëîâàìè, íà ïîâåðõíîñòíóþ àêòèâíîñòü ôîñôîëèïèäà,
ñïîñîáñòâóÿ ïîëó÷åíèþ íàíî÷àñòèö ñ ìèíèìàëüíûì ðàçìåðîì. Èìåííî
256
ýòî ñâîéñòâî, îòðàæàþùåå ñïîñîáíîñòü ÔË ñíèæàòü ïîâåðõíîñòíîå
íàòÿæåíèå íà ãðàíèöå ñ âîäíîé ôàçîé (èçìåðÿåìîå â ìèëëèíüþòîí/ì2 ìÍ/ì2), îïðåäåëÿåò ïðî÷íîñòü îáðàçóþùèõñÿ â âîäå ôîñôîëèïèäíûõ
âåçèêóë [49], èõ ñïîñîáíîñòü óäåðæèâàòüñÿ íà ãðàíèöå ñ âîäíîé ôàçîé.
Ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå îáðàçóåìûõ ôîñôîëèïèäàìè ïîâåðõíîñòåé
èçìåðÿþò èëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ñôåðè÷åñêèõ ïîâåðõíîñòåé - â
ïóçûðüêîâîé ïóëüñèðóþùåé ñèñòåìå [50], èëè â ïëîñêîñòè íà ãðàíèöå
ðàçäåëà ñðåä "âîäà - âîçäóõ" [49], ÷òî è áûëî èñïîëüçîâàíî íàìè äëÿ ñìåñè
ÑÔÕ ñ ðàçíûìè êîëè÷åñòâàìè ÃÊ. Äëÿ ýòîãî áûëè ñôîðìèðîâàíû ïëåíêè ñ
èñïîëüçîâàíèåì èçîïðîïàíîëüíûõ ðàñòâîðîâ ÑÔÕ (5õ10-3 Ì) ñ
äîáàâëåíèåì ÃÊ, â êîòîðûõ èçìåðÿëè íàòÿæåíèå íà ñóðôàêòîìåòðå Kruss
(Ãåðìàíèÿ). Ïîâåðõíîñòíîå íàòÿæåíèå äëÿ ÑÔÕ (áåç ÃÊ) ñîñòàâèëî 26,5±0,1
ìÍ/ì2; äîáàâëåíèå Na3ÃÊ â øèðîêîì èíòåðâàëå êîíöåíòðàöèé íå
îêàçûâàëî âëèÿíèÿ íà ýòó âåëè÷èíó. Òàêèì îáðàçîì, ïðîÿâëÿÿ
äåòåðãåíòíûå ñâîéñòâà, ÃÊ íå ñíèæàåò ïîâåðõíîñòíóþ àêòèâíîñòü
ôîñôîëèïèäà, îáåñïå÷èâàþùóþ åãî ñïîñîáíîñòü ê îáðàçîâàíèþ
íàíî÷àñòèö - ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë - â âîäíîé ñðåäå.
 ñâÿçè ñ õîðîøåé ðàñòâîðèìîñòüþ Na3ÃÊ â âîäå, ñ îäíîé ñòîðîíû, è åå
äåòåðãåíòíûìè
ñâîéñòâàìè,
ñïîñîáñòâóþùèìè
ïîëó÷åíèþ
ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö, ñ äðóãîé, ïðåäñòàâëÿëî èíòåðåñ èññëåäîâàòü
õàðàêòåð âçàèìîäåéñòâèÿ ÑÔÕ ñ ÃÊ â âîäíîé ñðåäå, ò.å. îïðåäåëèòü,
ÿâëÿåòñÿ ëè ñìåñü ÔÕÃÊ ýìóëüñèåé ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö â âîäíîì
ðàñòâîðå ñîëè ÃÊ, èëè ÃÊ "âñòðîåíà" â ìåìáðàíó ýòèõ íàíî÷àñòèö. Äëÿ ýòîãî
áûë
èñïîëüçîâàí
ìåòîä
ðàâíîâåñíîãî
èçîïëîòíîñòíîãî
óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ â ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè [51].
Ìåòîä îñíîâàí íà òîì, ÷òî íàïðàâëåíèå äâèæåíèÿ ÷àñòèö â
öåíòðîáåæíîì ïîëå â ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè îïðåäåëÿåòñÿ ñîîòíîøåíèåì
ìåæäó ïëîòíîñòüþ ðàñòâîðèòåëÿ (ρð) è ñîëüâàòèðîâàííîé ïëîòíîñòüþ
èññëåäóåìîãî âåùåñòâà (ρ÷). Ïðè ρ÷ > ρð ÷àñòèöû îñåäàþò, ïðè ρ÷ < ρð
íàáëþäàåòñÿ èõ ôëîòàöèÿ è, íàêîíåö, ïðè ρ÷ = ρð ÷àñòèöû â öåíòðîáåæíîì
ïîëå íå äâèæóòñÿ. Ïðè ïðîâåäåíèè ýêñïåðèìåíòà ïðåäâàðèòåëüíî
ôîðìèðîâàëè ãðàäèåíò ïëîòíîñòè, è èññëåäóåìûé îáðàçåö âíîñèëè â åãî
îïðåäåëåííóþ çîíó. Â ïðîöåññå öåíòðèôóãèðîâàíèÿ â öåíòðîáåæíîì ïîëå
÷àñòèöû èññëåäóåìîãî îáðàçöà ðàñõîäÿòñÿ èç ïåðâîíà÷àëüíîãî ïîëîæåíèÿ
ïî âûñîòå ïðîáèðêè â ñîîòâåòñòâèè ñ óñòàíîâèâøèìñÿ ãðàäèåíòîì,
îñòàíàâëèâàÿñü â òåõ åãî îáëàñòÿõ, ãäå ïëîòíîñòü ðàâíà ïëîòíîñòè ÷àñòèö
äàííîãî òèïà. Òàêèì îáðàçîì, ëîêàëèçàöèÿ ÷àñòèö â òîé èëè èíîé çîíå
ãðàäèåíòà ïëîòíîñòè ïîçâîëÿåò îöåíèòü èõ "ïëàâó÷óþ ïëîòíîñòü".
Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòèö ïî ïëîòíîñòè âî ôðàêöèÿõ ïî âûñîòå ïðîáèðêè
îáû÷íî îïðåäåëÿåòñÿ ñ ïîìîùüþ êàêîãî-ëèáî ñïåöèôè÷íîãî ìàðêåðà
(îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü, ðàäèîàêòèâíîñòü, ôëóîðåñöåíöèÿ èëè äð.). Ïðè
èññëåäîâàíèè ôîñôîãëèâà è åãî êîìïîíåíòîâ â êà÷åñòâå ìàðêåðîâ ìû
èñïîëüçîâàëè: 1) äëÿ ÑÔÕ - îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ïðè 320 íì (D320) è [Ñ14]257
Ðèñ. 8.3.3. Ðàâíîâåñíîå óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèå ÑÔÕ, Na3ÃÊ, ñìåñè ÔÕÃÊ è
ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö (èíúåêöèîííîé ôîðìû ôîñôîãëèâà).
ìåòêó (èñïîëüçîâàíèå îáðàçöîâ ôîñôîãëèâà ñ äîáàâëåíèåì [Ñ14]-ÔÕ); 2) äëÿ
ÃÊ - îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ïðè 256 íì (D256 ).
Ðåçóëüòàòû òàêîãî ýêñïåðèìåíòà äëÿ ýìóëüñèè ÑÔÕ, Na3ÃÊ, èõ ñìåñè è
ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðåäñòàâëåíû íà ðèñ 8.3.3. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà 8.3.3
(À), ïðè óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèè ýìóëüñèè ÑÔÕ ïîãëîùåíèå D320 è
ðàäèîàêòèâíîñòü [Ñ14] îòëè÷íû îò íóëÿ âî ôðàêöèÿõ ñ ïëîòíîñòÿìè 1,03 1,07 ã/ìë, ñ ìàêñèìóìîì â ïëîòíîñòè 1,05 ã/ìë, ÷òî óêàçûâàåò íà
ïðèñóòñòâèå â íèõ ÑÔÕ. Ïî ìåðå âîçðàñòàíèÿ ïëîòíîñòè (íà÷èíàÿ ñ
ïëîòíîñòè > 1,065 ã/ìë) íàáëþäàëè ïîñòåïåííîå âîçðàñòàíèå D256 âî
258
ôðàêöèÿõ. Ýòî óêàçûâàåò íà óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÃÊ çà ñ÷åò åå
ñåäèìåíòàöèè, ïëîòíîñòü êîòîðîé ñîñòàâëÿåò 1,3227 ã/ìë.
Îäíîâðåìåííîå âïðûñêèâàíèå ðàñòâîðîâ ÔÕ è ÃÊ (ïîëó÷åíèå
îáðàçöîâ â èçîïðîïàíîëå ñì. âûøå) â âîäíóþ ñðåäó ãðàäèåíòà
ïëîòíîñòè è èçìåðåíèå D320 ïîñëå óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèÿ (8.3.3
Á), âûÿâèëî â ýòèõ ôðàêöèÿõ íàëè÷èå âåçèêóë ñ ãèäðàòèðîâàííîé
ïëîòíîñòüþ òàêîé æå, êàê ó âåçèêóë ÷èñòîãî ÑÔÕ (1,03 - 1,07 ã/ìë).
Òîò æå ðåçóëüòàò íàáëþäàëè è äëÿ ãîòîâîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
(8.3.3 Â). Ñîîòíîøåíèå â ýòèõ ôðàêöèÿõ ïèêîâ D256/ D320 (ðèñ.
9.3.3Á) áûëî âûøå, ÷åì äëÿ ÷èñòîãî ÑÔÕ (~ 4 ïî ñðàâíåíèþ ñ ~ 2 äëÿ
ÑÔÕ). Ýòî óêàçûâàåò íà íàëè÷èå â íèõ è ÑÔÕ, è ÃÊ, î÷åâèäíî, â
ñîñòîÿíèè ñìåøàííûõ ëèïîñîì è/èëè ìèöåëë. Â çîíå áîëåå
âûñîêèõ ïëîòíîñòåé (1,065 - 1,215 ã/ìë) âèäíî íàëè÷èå ïèêà D256 (ñ
ìàêñèìóìîì ïðè 1,015 ã/ìë), ïðè D320 áëèçêîé ê íóëþ, ÷òî
ñâèäåòåëüñòâóåò îá îáðàçîâàíèè î÷åíü ìåëêèõ ñìåøàííûõ ìèöåëë
ñ âûñîêèì ñîäåðæàíèåì ÃÊ, à òàêæå î ïðèñóòñòâèè ñâîáîäíîé ÃÊ â
âîäíîì ðàñòâîðå. Òàêèì îáðàçîì, ïðèâåäåííûå ðåçóëüòàòû
ïîêàçûâàþò ïðèñóòñòâèå â âîäíîé ýìóëüñèè ÔÕÃÊ è â ôîñôîãëèâå
êàê ñâîáîäíî äèôôóíäèðóþùèõ, òàê è àññîöèèðîâàííûõ ñ
ôîñôîëèïèäíûìè íàíî÷àñòèöàìè ìîëåêóë ÃÊ.
 äàëüíåéøåì, ïðè ðàçðàáîòêå òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ
èíúåêöèîííîé ôîðìû ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ, áûëè
ïîäîáðàíû óñëîâèÿ äëÿ ïîëó÷åíèÿ ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö èç
âîäíîãî ðàñòâîðà Na3ÃÊ è âîäíîé (ïåðâè÷íîé) ýìóëüñèè ÑÔÕ
îäíèì èç èçâåñòíûõ ñïîñîáîâ - ïðîäàâëèâàíèåì (ýêñòðóçèåé)
âîäíîé ýìóëüñèè ôîñôîëèïèäîâ ÷åðåç óçêèå îòâåðñòèÿ â ìåìáðàíå
ïîä âûñîêèì äàâëåíèåì (800 - 1000 àòì.) [47]. Ïðåèìóùåñòâîì
ýòîãî ìåòîäà ÿâëÿþòñÿ ïîëó÷åíèå íàíî÷àñòèö ñòàíäàðòíîãî
ðàçìåðà, âûñîêàÿ ïðîèçâîäèòåëüíîñòü è ìèíèìàëüíîå îêèñëåíèå
ÑÔÕ â ïðîöåññå ïîëó÷åíèÿ ïðåïàðàòà. Èñïîëüçîâàíèå
ãîìîãåíèçàòîðà âûñîêîãî äàâëåíèÿ ïîçâîëÿåò ïîëó÷àòü
íàíî÷àñòèöû â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ ïðè ïîñòîÿííîì êîíòðîëå
òåìïåðàòóðû è äàâëåíèÿ.
Ïîëó÷åíèå ïðåïàðàòà â ôîðìå ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö,
óñòîé÷èâûõ ïðè õðàíåíèè, ÿâëÿåòñÿ îäíîé èç ñëîæíûõ çàäà÷.
Èçâåñòíî, ÷òî äëÿ ñòàáèëèçàöèè ïîëó÷àåìûõ íàäìîëåêóëÿðíûõ
ñòðóêòóð ÷àñòî èñïîëüçóþò òåõíîëîãèþ çàìîðàæèâàíèÿ-âûñóøèâàíèÿ
â ïðèñóòñòâèè êðèîïðîòåêòîðîâ. Ïðè ýòîì ïîëó÷àþò ëèîôèëüíî
âûñóøåííûé ïðåïàðàò, êîòîðûé ïðè ïîâòîðíîì ðàñòâîðåíèè â âîäå
ñîõðàíÿåò ñâîþ ñòðóêòóðó. Îñíîâíûì êðèòåðèåì ïîäáîðà
êðèîïðîòåêòîðîâ ÿâëÿåòñÿ ñîõðàíåíèå ñòàáèëüíîñòè ïðåïàðàòà è
ðàçìåðà íàíî÷àñòèö ïðè åãî ðàñòâîðåíèè [47, 52]. Õîòÿ ñ ïîìîùüþ
ëèîôèëèçàöèè ìîæíî ïîëó÷àòü ñòàáèëüíûé ñóõîé ïðåïàðàò
259
íàíî÷àñòèö, ýòîò ïðîöåññ òðåáóåò òùàòåëüíîãî êîíòðîëÿ, òàê êàê íà
ñòàäèÿõ çàìîðàæèâàíèÿ è îáåçâîæèâàíèÿ âîçìîæíî ôèçè÷åñêîå
ïîâðåæäåíèå ÷àñòèö êðèñòàëëàìè ëüäà. Ïîýòîìó ïðèìåíÿåìûé
êðèîïðîòåêòîð äîëæåí áûòü ëèøåí ýâòåêòè÷åñêèõ ñâîéñòâ, ò.å. íå
äîëæåí êðèñòàëëèçîâàòüñÿ ïðè çàìåðçàíèè. Ïðàâèëüíûé ïîäáîð
ñêîðîñòè ñíèæåíèÿ òåìïåðàòóðû (çàìîðàæèâàíèÿ ïðåïàðàòà), ðåæèìà
ñóøêè è êðèîïðîòåêòîðà (ìàëüòîçû) îáåñïå÷èëè â íàøåé ðàáîòå
ïîëó÷åíèå ñòàáèëüíîãî ïðåïàðàòà â âèäå ëèîôèëèçèðîâàííîãî
ïîðîøêà ñ ñîõðàíåííîé ñòðóêòóðîé íàíî÷àñòèö.
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî íà ïðîöåññ ñóøêè ïðåïàðàòà è çàùèòíîå
äåéñòâèå êðèîïðîòåêòîðîâ ñóùåñòâåííîå âëèÿíèå îêàçûâàåò ðàçìåð
ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö. Óñòàíîâëåíî, ÷òî äèàìåòð ÷àñòèö 100 íì
è ìåíüøå, à òàêæå ïðèñóòñòâèå ìàëüòîçû â ñîîòíîøåíèè 3:1 ê ÑÔÕ,
ñïîñîáñòâîâàëè îïòèìèçàöèè òåõíîëîãèè ïîëó÷åíèÿ èíúåêöèîííîé
ôîðìû ëåêàðñòâåííîé êîìïîçèöèè.
Äðóãèì, íå ìåíåå âàæíûì ôàêòîðîì çàùèòû ôîñôîëèïèäíûõ
íàíî÷àñòèö âî âðåìÿ ëèîôèëèçàöèè, ÿâëÿåòñÿ ïðåäîòâðàùåíèå
ñëèÿíèÿ âåçèêóë. Ýòîãî óäàëîñü äîñòè÷ü ïîäáîðîì îïòèìàëüíîãî
ñîîòíîøåíèÿ ÑÔÕ, Na3ÃÊ è ìàëüòîçû â èñõîäíîé ýìóëüñèè - 2,5:1:9.
Îïòèìàëüíîå ñîîòíîøåíèå ÑÔÕ è Na3ÃÊ, ñîñòàâèâøåå â ýòèõ óñëîâèÿõ
2,5:1, è áûëî âûáðàíî äëÿ äàëüíåéøåé ðàáîòû.
 ðåçóëüòàòå áîëüøîãî ÷èñëà ðàáî÷èõ ýêñïåðèìåíòîâ ïî ïîäáîðó
êîíêðåòíûõ òåõíîëîãè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ áûëà ðàçðàáîòàíà è
ìàñøòàáèðîâàíà òåõíîëîãèÿ ïðîèçâîäñòâà èíúåêöèîííîé ôîðìû
ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ, îñíîâó êîòîðîãî ñîñòàâëÿåò
êîìïîçèöèÿ ÑÔÕ + Na3ÃÊ â âèäå ëèîôèëèçèðîâàííûõ ôîñôîëèïèäíûõ
íàíî÷àñòèö. Íà ðèñóíêå 8.3.4 ïðåäñòàâëåíà îáùàÿ ñõåìà òåõíîëîãèè
ïðîèçâîäñòâà, êîòîðàÿ âêëþ÷àåò òàêèå îñíîâíûå ñòàäèè, êàê ýêñòðóçèÿ
ïîä âûñîêèì äàâëåíèåì, ñòåðèëèçóþùàÿ óëüòðàôèëüòðàöèÿ è
ëèîôèëèçàöèÿ.
Ðèñ. 8.3.4. Îáùàÿ ñõåìà òåõíîëîãèè ïðîèçâîäñòâà èíúåêöèîííîé ôîðìû
ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
260
Èíúåêöèîííàÿ ôîðìà ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ
ðàçðåøåíà ê ïðèìåíåíèþ Ìèíçäðàâîì ÐÔ â 2002 ã.
(ðåãèñòðàöèîííûé íîìåð й 002528/02).
Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå ñ ïîìîùüþ àòîìíî ñèëîâîé
ìèêðîñêîïèè ïîêàçàëî, ÷òî äèàìåòð ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö,
ñîñòàâëÿþùèõ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå, ïðèáëèçèòåëüíî
îäèíàêîâûé (10-45 íì è 25-60 íì ñîîòâåòñòâåííî) (ðèñ. 8.3.5)
Ðèñ. 8.3.5. Ñðàâíåíèå äèàìåòðà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö
ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå (âîäíàÿ ýìóëüñèÿ)
Äàííûå àòîìíî-ñèëîâîé ìèêðîñêîïèè Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðàçìåðà ôîñôîëèïèäíûõ íàíî÷àñòèö îáðàçöû
ïðåïàðàòîâ (ýññåíöèàëå è ôîñôîãëèâ) íàíîñèëè íà ïîäëîæêó èç âûñîêîîðèåíòèðîâàííîãî
ïèðîëèòè÷åñêîãî ãðàôèòà. Èçìåðåíèÿ ïðîâîäèëè íà ñêàíèðóþùåì çîíäîâîì ìèêðîñêîïå Solver-P47H [53.]
Ïîëó÷àåìûé ïî äàííîé ñõåìå ëåêàðñòâåííûé ïðåïàðàò
ôîñôîãëèâ èñïîëüçîâàëè â äàëüíåéøåì äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ íà
êóëüòóðàõ êëåòîê, à òàêæå in vivo íà æèâîòíûõ ñ ìîäåëÿìè
261
ãåïàòèòîâ. Ïðåïàðàò ïðîøåë äîêëèíè÷åñêèå, à çàòåì è
êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ òðåáîâàíèÿìè
Ãîñóäàðñòâåííîãî Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî Êîìèòåòà ÌÇ ÐÔ.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 8.
1. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane
therapeutic. Szczecin., 1993.
2. Ó÷àéêèí Â.Ô., Íèñåâè÷ Í.È., ×åðåäíè÷åíêî Ò.Â. Âèðóñíûå
ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì., 1994, 304-318.
3. Guan R, Ho K.Y., Kang J.Y., Yap I., Gwee K.A., Tan C.C. The effect
of polyunsaturated phosphatidylcholine in the treatment of acute viral
hepatitis. Aliment Pharmakol Ther. 1995, 9, 699-703.
4. Kuntz E. "Essentielle" Phospholipide in der hepatologie - 50 Jahre
Åxperimentale und Klinische Erfahrung. Z Gastroenterol. 1991, 29, 7-13.
5. Oette K. On the administration of phosphatidylcholine - metabolic
and pharmacokinetic aspects in human. In: 50th Anniversary of
Phospholipid Research (EPL). Ed. Gundermann K.-J., Schumacher R.,
wbn-Verlag, Bingen/Rhein. 1990, 35-48.
6. Ìèíóøêèí Î.Í. Íåêîòîðûå ãåïàòîïðîòåêòîðû â ëå÷åíèå
çàáîëåâàíèé ïå÷åíè. Ëå÷àùèé âðà÷. 2002, 6, 55-58.
7. Bachmanova G.I., Abdugafurova M.A., Li V.S., Dobrynina O.V.,
Shatinina S.Z., Archakov A.I. Reparation of damaged rat liver cells, microsomal membranes and cytochrome P450-dependent monooxygenase system
by
phospholipids.
In:
Phosphatidylcholine
(Polyenephosphatidylcholine/PPC): Effects on cell membranes and transport of cholesterol, 1988, PPC Workshop, Cologne, wbn-Verlag.
Bingen/Rhein, (Archakov A.I., Gundermann K.-J., eds), 1989, 137-145.
8. Van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A., Brouwer J.T., Schalm
S.W. Review article: glycyrrhizin as a potential treatment of chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205.
9. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè
õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîë è òåðàïèÿ. 2000, 9,
39-41.
10. Iino S., Tango T., Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K.,
Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic
effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40.
11. Ãèïåðëèïîïðîòåèíåìèÿ êàê ôàêòîð ðèñêà è òåðàïèÿ
"ýññåíöèàëüíûìè" ôîñôîëèïèäàìè (EPL) (ðåä. Ý.À.Áàáàÿí,
Þ.Ì.Ëîïóõèí, è äð.). Ìàòåðèàëû ñèìïîçèóìà. Óïðàâëåíèå ïî
âíåäðåíèþ íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ è ìåäèöèíñêîé òåõíèêè
ÌÇ ÑÑÑÐ, ÍÈÈ ôèçèêî-õèìè÷åñêîé ìåäèöèíû ÌÇ ÐÔ, Ìîñêâà, 1984.
12. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J.,
262
DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism Review.
2001, 33, 125-147.
13. Àáäóãàôóðîâà Ì.À., Ëè Â.Ñ., Øåðñòíåâ Ì.Ï., Áà÷ìàíîâà Ã.È.,
Àð÷àêîâ À.È. Èññëåäîâàíèå àíòèîêèñëèòåëüíûõ ñâîéñòâ ñîëåé
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû è èõ âëèÿíèå íà ìèêðîñîìàëüíóþ
ìîíîîêñèãåíàçíóþ ñèñòåìó ïå÷åíè. Âîïð ìåä õèìèè. 1990, 36, 29-31.
14. Àáäóãàôóðîâà Ì.À. Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå
ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðèðóþùåãî äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòîâ íà ïîâðåæäåííûå ìåìáðàíû êëåòîê ïå÷åíè. Äèññ. êàíä.,
1989.
15. Kiso Y., Tohkin M., Hikino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T.
Mechanism of antihepatotoxic activity of glycyrrhizin. I: Effect on free
radical generation and lipid peroxidation. Planta Med. 1984, 50, 298-302.
16. Karuzina I.I., Zgoda V.G., Archakov A.I. Mechanisms of P4502B4
self-inactivation, heme and apoenzyme oxidative modification during catalytic turnover. Abstr. XI Intern. symposium on microsomes and drug oxidations, Los Angeles. 1996, 199.
17. Êàðóçèíà È.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Àð÷àêîâ À.È.
Ñàìîèíàêòèâàöèÿ öèòîõðîìà Ð450 â êàòàëèòè÷åñêîì öèêëå. Âåñòíèê
ÐÀÌÍ. 1995, 2, 17-29
18. Archakov A.I., Bachmanova G.I., Cytochrome P450 and active
oxygen, Taylor & Francis, London, New York, Philadelphia. 1990.
19. Àð÷àêîâ À.È., Êàðóçèíà È.È. Ìèêðîñîìàëüíîå îêèñëåíèå. Â
ýíöèêëîïåäèè: Ñîâðåìåííîå åñòåñòâîçíàíèå. Ìîëåêóëÿðíûå îñíîâû
áèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ. 2000, 8, 261-267.
20. Mokhosoev I.M. Karuzina I.I., Oxidative degradation of dithionitereduced cytochromes P450 LM2 and LM4. In: Cytochrome P450: biochemistry and biophysics. Proceeding of the 7th Intern. Conference.
Archakov A.I., Bachmanova G.I. eds. 1992, 142-144
21. Forte T.M., Cross C.E., Gunther R.A., Kramer G.C.
Characterization of sheep lung lymph lipoproteins: chemical and physical
properties. J Lipid Res. 1983, 24, 1358-1367.
22. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ïîãîäèíà Î.Ê., Äîáðûíèíà
Î.Â., Ìèãóøèíà Â.Ë., Ñàâèí È.Ã. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ äåñòðóêöèè
ýíäîïëàçìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà êëåòîê ïå÷åíè. Àâòîðñêîå
ñâèäåòåëüñòâî ¹1142802 (1.11.1984).
23. Êàðóçèíà È.È., Àð÷àêîâ À.È. Öèòîõðîì Ð450.  ñá. Áåëêè è
ïåïòèäû (ïîä ðåä. Â.Ò.Èâàíîâà, Â.Ì.Ëèïêèíà), Íàóêà. 1995, 17-29.
24. Karuzina I.I., Archakov A.I. CCI4-induced damage to endoplasmatic reticulum membranes. Biochem Pharmacol. 1973, 22, 2095-2104.
25. Ñàâèí È.Ã., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Êàðóçèíà È.È., Ñêîöåëÿñ Å.Ä.,
Àíòîíîâà Ã.Í., Æèðíîâ Ã.Ô., Êàðÿêèí À.Â., Àðèïîâ À.Í., Àð÷àêîâ
263
À.È. Âëèÿíèå ãåëèîòðèíà íà ñèñòåìó ìèêðîñîìàëüíîãî îêèñëåíèÿ
ïå÷åíè êðûñ. Âîïð ìåä õèìèè. 1983, 29, 1, 49.
26. Áîëäàíîâà Í. Á., Äîáðûíèíà Î.Â., Ìèãóøèíà Â. Ë., Àð÷àêîâ
À.È. Çàùèòíûå äåéñòâèÿ ôîñôàòèäèëõîëèíîâûõ ëèïîñîì ïðè
ýêñïåðèìåíòàëüíîì òîêñè÷åñêîì ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986, 2,
65-67.
27. Story D.L., Meierhenry E.F., Tyson C.A., Milman H.A. Differences
in rat liver enzyme-altered foci produced by chlorinated aliphatics and
phenobarbital. Toxicol Ind Health. 1986, 2, 351-362.
28. Waxman D.J., Azaroff L. Phenobarbital induction of cytochrome
P450 gene expression. Biochem J. 1992, 281, 577-592.
29. Jansen P.L., Sturm E. Genetic cholestasis, causes and consequences
for hepatobiliary transport. Liver Int. 2003, 23, 315-322.
30. Okajasu T., Curtis M.T., Farber J.L. Structural alterations of mitochondrial membranes in ishemic liver cell. Arch Biochem Biophys. 1985,
236, 638-645.
31. Àëìàòîâ Ê.Ò., Ìèðòàëèïîâ Ä.Ò., Êàñûìîâà Ã.Ì. Èçìåíåíèÿ
ôîñôîëèïèäíîãî ñîñòàâà è îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ â
ìèòîõîíäðèÿõ ïå÷åíè ïðè ãåïàòèòå. Âîïð ìåä õèìèè. 1986, 32, 27-30.
32. Plaa G.L. Chlorinated methanes and liver injury: highlights of the
past 50 years. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2000, 40, 42-65.
33. Äîìáðîâñêàÿ Í.Â. Ñîñòîÿíèå ìèòîõîíäðèàëüíîé ñèñòåìû
ïå÷åíè ïðè ãåïàòèòå è ñïîñîáû êîððåêöèè ôîñôîëèïèäíûìè
ïðåïàðàòàìè. Äèññ. êàíä., 1991.
34. Êàáàåâà ÍÂ, Ïåðîâ ÍÀ, Ïåòðîâà ËÅ, Àíòîíîâ À.Ñ.
Ïîâðåæäåíèå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê õîëåñòàí-3β,5α,6β-òðèîëîì è
çàùèòíîå
äåéñòâèå
ïðåïàðàòîâ,
ïîâûøàþùèõ
óðîâåíü
âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÌÔ. Öèòîëîãèÿ. 1992, 34, 23-29.
35. Torkhovskaya T, Khalilov E., Medvedeva N., Morozkin A.,
Misharin A., Ipatova O., Antonov A., Kabayeva N., Archakov A.
Antiatherogenic action of micelles with glycyrrhizin on plasma lipoproteins and endothelial culture cells. XIII Lipid Meeting Leipzig, Germany.
2002, 82-83.
36. Martin GP, el-Hariri LM, Marriott C. Bile salt- and lysophosphatidylcholine-induced membrane damage in human erythrocytes. J
Pharm Pharmacol. 1992, 44, 646-50.
37. Àð÷àêîâ À.È., Èâàíîâ À.Ñ., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ìàðêèí Ñ.Ñ.,
Êîâàëåâà Ã.Ã. Êîìïîçèöèÿ, îáëàäàþùàÿ ñâîéñòâàìè ðåïàðèðîâàòü
ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ. Ïàòåíò ¹ 2043110 îò 10.09.1995ã.
38. Àð÷àêîâ À.È., Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Èïàòîâà Î.Ì.,
Êíÿæåâ Â.À., Ëèñîâ Â.È., Ñêâîðöîâ È.À., Ó÷àéêèí Â.Ô., Òèõîíîâà Å.Ã.,
ßêóáîâñêèé Ê.Â., Öûãàíîâ Ä.È. Êîìïîçèöèÿ, îáëàäàþùàÿ ñâîéñòâàìè
ðåïàðèðîâàòü áèîëîãè÷åñèå ìåìáðàíû. Ïàòåíò íà èçîáðåòåíèå ¹
264
2133122 îò 14.10.98.
39. Moghimi S.M., Hunter A.C., Murray J.C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacol Reviews. 2001,
53, 283-318.
40. Ìàðãîëèñ Ë.Á., Áåðãåëüñîí Ë.Ä. Ëèïîñîìû è èõ
âçàèìîäåéñòâèå ñ êëåòêàìè. Ì., Íàóêà, 1986.
41. Allen T.M., Chonn A. Large unilamellar liposomes with low uptake
into reticulo-endothelial system. FEBS Lett. 1987, 223, 42-46.
42. Drummond D., Meyer O., Hong K., Kirpotin D., Papahadjopoulos
D. Optimizing liposomes for delivery of chemotherapeutic agents to solid
tumors. Pharmacol Rev. 1999, 51, 691-743.
43. Senior J.H. Fate and behaviour of liposomes in vivo: a review of
controlling factors. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1987, 3, 123-93.
44. Hwang K.J. Liposome pharmacokinetics. In: Liposomes: From
Biophysics to Therapeutics (Ostro M.J. ed). Marcel Dekker, Inc, New
York. 1987, 109-156.
45. Gabizon A.A. Liposome circulation time and tumor targeting:
implications for cancer chemotherapy. Adv Drug Del Rev. 1995, 16, 285294
46. Áàðñóêîâ Ë.È. Ëèïîñîìû. Ñîðîñîâñêèé îáîçðåâàòåëüíûé
æóðíàë. 1998, 10, 2- 9.
47. Äóäíè÷åíêî À.Ñ., Êðàñíîïîëüñêèé Þ.Ì, Øâåö Â.È.
Ëèïîñîìàëüíûå ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû â ýêñïåðèìåíòå è
êëèíèêå. Õàðüêîâ, 2001.
48. Senior J., Crawley J.C., Gregoriadis G. Tissue distribution of liposomes exhibiting long half-lives in the circulation after intravenous injection. Biochim Biophys Acta. 1985, 839, 1-8.
49. Xia W.J., Onyuksel H. Mechanistic studies on surfactant-induced
membrane permeability enhancement. Pharm Res. 2000, 7, 612-618.
50. Erhorning G., Pulsating bubble technique for evaluating surface
tension. J Apl Physiol. 1977, 43, 198-203.
51. Birnie G.D., D.Rickwood (eds). Centrifugal Separations in
Molecular and Cell Biology. Butterworths, London, 1978.
52. Aso Y, Yoshioka S. Effect of freezing rate on physical stability of
lyophilized cationic liposomes. Chem Pharm Bull. 2005, 53, 301-304.
53. Kuznetsov V.Y., Ivanov Y.D., Bykov V.A., Saunin S.A., Fedorov
I.A., Lemeshko S.V., Hoa H.B., Archakov A.I. Atomic force microscopy
detection of molecular complexes in multiprotein P450cam-containing
monooxygenase system. Proteomics. 2002, 2, 161-165.
265
ÃËÀÂÀ 9. ÄÎÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
ÔÎÑÔÎÃËÈÂÀ
9.1. Ñðàâíèòåëüíîå èçó÷åíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè
ïðåïàðàòîâ ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå â ýêñïåðèìåíòàõ in sittu.
Ôàðìàêîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü ôîñôîãëèâà îöåíèâàëè â
ýêñïåðèìåíòàõ in vitro íà ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929
(ôèáðîáëàñòîïîäîáíûå
êëåòêè
ôèáðîñàðêîìû
ìûøåé),
ôèáðîáëàñòàõ êîæè ÷åëîâåêà (çäîðîâûõ äîíîðîâ) è íà
ïåðèòîíåàëüíûõ ìàêðîôàãàõ ìûøåé. Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè
ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå, ðàññ÷èòàííûå ïî ÑÔÕ (0,5 - 5 ìã/ìë)
äîáàâëÿëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ÷åðåç 2 ÷àñà ïîñëå ïàññèðîâàíèÿ
êëåòîê è àíàëèçèðîâàëè âëèÿíèå ýòèõ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ
íà ðîñò êëåòîê, ñèíòåç ÄÍÊ, ÐÍÊ è áåëêà, à òàêæå íà ïðîäóêöèþ
TNF ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè.
Ïðè êðàòêîâðåìåííîì (5 ÷àñîâ) êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê L929 â
ïðèñóòñòâèè èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòîâ êîëè÷åñòâî æèâûõ êëåòîê â
ñðåäå ñ ôîñôîãëèâîì áûëî âûøå, ÷åì â ñðåäå ñ ýññåíöèàëå (Ðèñ.
9.1.1 À). Èç ïðåäñòàâëåííîãî ãðàôèêà âèäíî, ÷òî ïðè íèçêèõ
êîíöåíòðàöèÿõ (äî 1 ìã/ìë) ôîñôîãëèâ ïðàêòè÷åñêè íå ñíèæàë
÷èñëî æèâûõ êëåòîê â ñðåäå; ïðè êîíöåíòðàöèè 5 ìã/ìë ÷èñëî
æèâûõ êëåòîê óìåíüøàëîñü íå áîëåå ÷åì íà 15-20%. Îäíàêî
ýññåíöèàëå óæå â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìã/ìë îáëàäàë âûðàæåííîé
öèòîòîêñè÷íîñòüþ, ðåçêî âîçðàñòàþùåé ñ óâåëè÷åíèåì
êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòà. Ïðè åãî ñîäåðæàíèè 5 ìã/ìë ñíèæåíèå
êîëè÷åñòâà æèâûõ êëåòîê â ñðåäå ñîñòàâëÿëî 85-90%.
Ðåçóëüòàòû êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê L929 â òå÷åíèå 24 ÷àñîâ â
ïðèñóòñòâèè ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå ïðåäñòàâëåíû íà ðèñ. 9.1.1Á.
Îò÷åòëèâî âèäíî, ÷òî ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ïðèñóòñòâèè 0,1
ìã/ìë ýññåíöèàëå âûæèâàåò òîëüêî 50% êëåòîê, à äîçà 0,2 ìã/ìë â
ýòèõ óñëîâèÿõ âûçûâàåò ãèáåëü âñåõ êëåòîê.  àíàëîãè÷íûõ
óñëîâèÿõ êóëüòèâèðîâàíèÿ ôîñôîãëèâ â êîíöåíòðàöèÿõ 0,5-5 ìã/ìë
öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ïðàêòè÷åñêè íå ïðîÿâëÿë.
×åðåç 72-96 ÷àñîâ êóëüòèâèðîâàíèÿ (ðèñ. 9.1.1 Â), ôîñôîãëèâ
çàìåäëÿë ðîñò êëåòîê òîëüêî ïðè êîíöåíòðàöèè 1,0 ìã/ìë. Â ýòèõ
æå óñëîâèÿõ ãîðàçäî ìåíüøàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýññåíöèàëå (0,1 ìã/ìë)
îêàçàëàñü òîêñè÷íîé äëÿ êëåòîê. Êîìïîíåíòû ôîñôîãëèâà (ÑÔÕ è
ÃÊ) ïðè êóëüòèâèðîâàíèè äî 6 ñóòîê ñóùåñòâåííîãî
öèòîòîêñè÷åñêîãî äåéñòâèÿ íà êëåòêè íå îêàçûâàëè.
Ïðè äîáàâëåíèè ôîñôîãëèâà â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó
ôèáðîáëàñòîâ êîæè ÷åëîâåêà íà 6-é äåíü èíêóáàöèè áûëà
âûÿâëåíà ñòèìóëÿöèÿ ðîñòà êëåòîê ïðè êîíöåíòðàöèè ôîñôîãëèâà
ïî ÑÔÕ 0,5 è 1 ìã/ìë.
266
Ðèñ. 9.1.1. Âëèÿíèå Ôîñôîãëèâà è Ýññåíöèàëå íà ðîñò êëåòîê L 929
Öèòîòîêñè÷íîñòü ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå îïðåäåëÿëè â îïûòàõ in vitro íà
ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929 (ôèáðîáëàñòîïîäîáíûå êëåòêè ôèáðîñàðêîìû
ìûøåé) ïðè èõ êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå 199 ñ 10% èëè 20% áû÷üåé ñûâîðîòêè. Êëåòêè
êóëüòèâèðîâàëè â 24- è 48-ìè ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ. Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòîâ (îò
0,5 äî 5 ìã/ìë) äîáàâëÿëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó ÷åðåç 2 ÷àñà ïîñëå ïàññèðîâàíèÿ êëåòîê (ðèñ.
À è Á). Ïðè êóëüòèâèðîâàíèè 96 ÷àñîâ ê êóëüòóðå êëåòîê äîáàâëÿëè ôîñôîãëèâ â
êîíöåíòðàöèè 1 ìã/ìë, à ýññåíöèàëå - 0,1 ìã/ìë. ×åðåç 5, 24, 48, 72 è 96 ÷àñîâ èíêóáàöèè
îïðåäåëÿëè ÷èñëî êëåòîê â ëóíêå ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè 590 íì ïîñëå îêðàñêè êëåòîê
267
Ðèñ. 9.1.2. Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà ñèíòåç ÐÍÊ, ÄÍÊ è
áåëêà â êëåòêàõ L 929 ïðè 4-õõ ÷àñîâîé èíêóáàöèè
Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå ïî ÑÔÕ (îò 0,05 äî 5,0 ìã/ìë) äîáàâëÿëè ê
êóëüòóðå ïàñïîðòèçèðîâàííîé ëèíèè êëåòîê L929 è ïðåèíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 4-õ ÷àñîâ.
Ñèíòåç áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ îöåíèâàëè ïî âêëþ÷åíèþ ìå÷åííûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ
Ñ14-âàëèíà, Ñ14-óðèäèíà è Í3-òèìèäèíà ñîîòâåòñòâåííî, êîòîðûå âíîñèëè â êóëüòóðàëüíóþ
ñðåäó ïåðåä ïàññèðîâàíèåì êëåòîê [4].
268
Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàíèÿ âëèÿíèÿ ïðåïàðàòîâ íà ðîñò
êëåòîê ïîêàçàëè îòñóòñòâèå öèòîòîêñè÷åñêèõ ñâîéñòâ ó ôîñôîãëèâà
è åãî êîìïîíåíòîâ, íî âûÿâèëè öèòîòîêñè÷íîñòü ïðåïàðàòà
ýññåíöèàëå, ñâÿçàííóþ, âåðîÿòíî, ñ ïðèñóòñòâèåì ñîëåé æåë÷íûõ
êèñëîò, ñïîñîáíûõ ëèçèðîâàòü êëåòêè (ñì. ãëàâó 5) [1, 2].
Ïîìèìî ðîñòà êëåòîê, èññëåäîâàëè òàêæå âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è
ýññåíöèàëå íà ñèíòåç â íèõ áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ (Ðèñ. 9.1.2, À, Á è Â).
Êàê âèäíî èç ãðàôèêîâ, ïðåèíêóáàöèÿ êëåòîê L929 ñ
ôîñôîãëèâîì â äîçå 0,5 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ), â òå÷åíèå 4-õ ÷àñîâ íå
âëèÿåò íà ñèíòåç áåëêà â êëåòêàõ (À), íà 15-30% ñíèæàåò ñèíòåç
ÐÍÊ (Á) è íà 20% óâåëè÷èâàåò ñèíòåç ÄÍÊ (Â). Ýññåíöèàëå æå è
ïðè ìåíüøèõ äîçàõ èíãèáèðóåò âñå èññëåäîâàííûå ïðåïàðàòû: óæå
â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) îí ~ íà 75% èíãèáèðóåò ñèíòåç
áåëêà (À); ïðè êîíöåíòðàöèè 0,5 ìã/ìë íàáëþäàëîñü ïî÷òè ïîëíîå
(íà 85-90%) èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ (Á, Â).
Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîãëèâ íå ïîâðåæäàåò êëåòî÷íûå ñèñòåìû
ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ, ÷òî ïîäòâåðæäàåò îòñóòñòâèå
òîêñè÷íîñòè êàê ó ñàìîãî ïðåïàðàòà, òàê è åãî êîìïîíåíòîâ. Ðåçêîå
èíãèáèðîâàíèå ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ â êëåòêàõ äàæå
ñðàâíèòåëüíî íèçêèìè êîíöåíòðàöèÿìè ïðåïàðàòà ýññåíöèàëå
óêàçûâàåò íà åãî öèòîòîêñè÷íîñòü.
Ïðåäñòàâëÿëîñü òàêæå öåëåñîîáðàçíûì èññëåäîâàòü âëèÿíèå
ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå, íà ïðîäóêöèþ ìàêðîôàãàìè TNF. Ýòîò
öèòîêèí ó÷àñòâóåò âî ìíîãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ, âêëþ÷àÿ
ïðîöåññû âîñïàëåíèÿ, èíôåêöèè, øîêà è ïîâðåæäåíèÿ òêàíåé,
ðàçâèòèÿ êàõåêñèè è èãðàåò ñóùåñòâåííóþ ðîëü â ïàòîãåíåçå ðÿäà
çàáîëåâàíèé [4]. Îñíîâíûì èñòî÷íèêîì TNF â îðãàíèçìå ÿâëÿþòñÿ
êëåòêè ìàêðîôàãàëüíîé ñèñòåìû [4, 5]. Âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòîâ íà ãåíåðàöèþ TNF îöåíèâàëè ïî èíäåêñó
öèòîòîêñè÷íîñòè (ÈÖ) êîíäèöèîíèðîâàííîé ñðåäû ìàêðîôàãîâ,
âûäåëåííûõ èç èíòàêòíûõ ìûøåé ïðè äîáàâëåíèè åå ê êóëüòóðå
êëåòîê L929 (ðèñ. 9.1.3) [6]. Êàê âèäíî èç ðèñóíêà, âåëè÷èíà ÈÖ äî
10% õàðàêòåðèçóåò íîðìàëüíûé óðîâåíü ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF
ìàêðîôàãàìè â êîíòðîëå áåç äîáàâëåíèÿ ïðåïàðàòîâ. Â ïðèñóòñòâèè
ýññåíöèàëå ïåðèòîíåàëüíûå ìàêðîôàãè èíòàêòíûõ ìûøåé
ñåêðåòèðóþò â ñðåäó áîëüøîå êîëè÷åñòâî TNF: ÈÖ êóëüòóðàëüíîé
ñðåäû ïðè äîáàâëåíèè ê ìàêðîôàãàì 2 ìã/ìë ïî ÑÔÕ ýññåíöèàëå
ðàâåí ~70%. Â òåõ æå óñëîâèÿõ ÈÖ ìàêðîôàãàëüíîé ñðåäû ïðè
äîáàâëåíèè ôîñôîãëèâà èëè ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû ñîñòàâëÿë
âñåãî 8 è 25% ñîîòâåòñòâåííî. Ñóùåñòâåííàÿ àêòèâàöèÿ
ïåðèòîíåàëüíûõ ìàêðîôàãîâ ïîä äåéñòâèåì ýññåíöèàëå ìîæåò íà
óðîâíå îðãàíèçìà ïðèâîäèòü ê ïîâûøåííûì âûáðîñàì TNF è
äðóãèõ öèòîêèíîâ, ñïîñîáíûõ îêàçûâàòü íåæåëàòåëüíûå ýôôåêòû.
269
Ðèñ. 9.1.3. Ñðàâíèòåëüíîå äåéñòâèå ôîñôîãëèâà è åãî êîìïîíåíòîâ íà
îáðàçîâàíèå ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé (TNF).
Òàêèì îáðàçîì, è â ýòèõ ýêñïåðèìåíòàõ óñòàíîâëåíî, ÷òî â
îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, ôîñôîãëèâ íå òîëüêî íå îáëàäàåò
öèòîòîêñè÷íîñòüþ, íî è íå àêòèâèðóåò îáðàçîâàíèå ìàêðîôàãàìè
TNF.
9.2. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòà
ôîñôîãëèâ â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè îñòðîãî
ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4.
Ó÷èòûâàÿ âàæíîñòü âîññòàíîâëåíèÿ áåëîêñèíòåçèðóþùåé ôóíêöèè
êëåòîê ïå÷åíè â ïðîöåññå ðåãåíåðàöèè îðãàíà ïîñëå ââåäåíèÿ ÑÑl4 [7],
áûëî èññëåäîâàíî âëèÿíèå ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ íà ñèíòåç ÐÍÊ,
ÄÍÊ, àëüáóìèíà, à òàêæå íà îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé
ìÐÍÊ â ïîëèðèáîñîìàõ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ îòðàâëåííûõ ÑÑl4 [8].
Ïîñêîëüêó ïðè òîêñè÷åñêîì ïîðàæåíèè ïå÷åíè ÑÑl4 ðåçêî óâåëè÷èâàåòñÿ
êîëè÷åñòâî êóïôåðîâñêèõ êëåòîê, ñïîñîáíûõ âûðàáàòûâàòü áèîëîãè÷åñêè
àêòèâíûå âåùåñòâà, â òîì ÷èñëå, è TNF, îöåíèâàëîñü äåéñòâèå ïðåïàðàòîâ
è íà ñåêðåöèþ ïîñëåäíåãî ìàêðîôàãàìè [9].
 îïûòàõ èñïîëüçîâàëè êðûñ ñàìöîâ ëèíèè Âèñòàð, ìàññîé 160 - 180 ã,
ñîäåðæàâøèõñÿ íà ñòàíäàðòíîé äèåòå. Äëÿ ðàçâèòèÿ îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî
ãåïàòèòà æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî ââîäèëè ÑÑl â äîçå 0,1 ìë/100ã. Äëÿ
èññëåäîâàíèÿ ñèíòåçà ÄÍÊ, ÐÍÊ è àëüáóìèíà èñïîëüçîâàëè âêëþ÷åíèå â
íèõ ìå÷åííûõ [Í3]-òèìèäèíà (Ðîññèÿ, 4,3 Ku/ìÌ), [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû
(Âåíãðèÿ, 40 ìêKu/ìÌ) è [Ñ14]-ëåéöèíà (×åõîñëîâàêèÿ, 80 ìêKu/ìÌ)
ñîîòâåòñòâåííî. Ðåçóëüòàòû ïðèâåäåíû â òàáë. 9.2.1.
4
270
Òàáëèöà 9.2.1.
Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà ñèíòåç ÐÍÊ
â ïå÷åíè êðûñ, ïîðàæåííûõ ÑÑl4
Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-îîðîòîâîé êèñëîòû
Ãðóïïû æèâîòíûõ
â ìÐÍÊ ïîëèðèáîñîì (ôðàêöèÿ ? 80 S)
â ñóììàðíóþ ÐÍÊ
(èìï/ìèí/ìã
ÐÍÊ) õ 10 3
(èìï/ìèí/ìã ïîëèðèáîñîì)
õ 10 3
% îò âêëþ÷åíèÿ â
ñóììàðíóþ ÐÍÊ
Èíòàêòíûå æèâîòíûå
19,4 ± 0,6
9,8 ± 0,8
59,0 ± 2,0
ÑÑl4
6,2 ± 0,6
2,5 ± 0,7
40,6 ± 3,3
ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ
12,4 ± 0,1* #
6,9 ± 0,3*
56,0 ± 2,3#
ÑÑl4 + ýññåíöèàëå
11,4 ± 1,2* #
5,0 ± 0,2* #
44,0 ± 2,1*
×èñëî æèâîòíûõ â ýêñïåðèìåíòå - 10, èç íèõ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå - 4, îòðàâëåííûõ ÑÑl4 - 6;.
ÑÑl4 ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 0.1 ìë/100 ã. Ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ñ êîíöåíòðàöèåé 50
ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî ïî 20 ìã/100 ã åæåäíåâíî â òå÷åíèå 3 ñóòîê. ×åðåç
ñóòêè ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ ïðåïàðàòîâ ââîäèëè [Ñ14]-îðîòîâóþ êèñëîòó, æèâîòíûõ
çàáèâàëè, êëåòêè ïå÷åíè ãîìîãåíèçèðîâàëè è öåíòðèôóãèðîâàíèåì ðàçäåëÿëè íà ôðàêöèè.
Ðàäèîàêòèâíîñòü ãîìîãåíàòà è ôðàêöèè ïîëèðèáîñîì îïðåäåëÿëè ïðè ïîìîùè æèäêîñòíîãî
ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rack-beta" [8].
* - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05.
#- ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì, ð<0,05.
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 9.2.1, ñèíòåç ÐÍÊ (â îñíîâíîì, ìÐÍÊ)
ñíèæàëñÿ ïîä äåéñòâèåì ÑÑl4 áîëåå ÷åì â 3 ðàçà, ÷òî ìîæåò áûòü
ñâÿçàíî ñ íàðóøåíèåì òðàíñêðèïöèè è/èëè àêòèâàöèåé íóêëåàç
ïîä äåéñòâèåì òîêñèêàíòà. Ââåäåíèå ôîñôîãëèâà èëè ýññåíöèàëå
äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëî ñèíòåç ñóììàðíîé ÐÍÊ ïî ñðàâíåíèþ ñ
ñîîòâåòñòâóþùèì ïîêàçàòåëåì ó îòðàâëåííûõ êðûñ. Îäíàêî
óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòîâ íå äîñòèãàë
óðîâíÿ ñèíòåçà ìÐÍÊ â íîðìàëüíîé ïå÷åíè, ñîñòàâëÿÿ 63% îò
êîíòðîëÿ. Ïîñêîëüêó ñóììàðíàÿ ÐÍÊ ïðåäñòàâëåíà, â îñíîâíîì,
ðèáîñîìíîé ÐÍÊ [8], ìîæíî ñäåëàòü âûâîä, ÷òî ñèíòåç ðèáîñîìíîé
ÐÍÊ áûñòðåå âîññòàíàâëèâàåòñÿ ïîä âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà è
ýññåíöèàëå, ÷åì ñèíòåç ìÐÍÊ.
Âêëþ÷åíèå [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â ìÐÍÊ ïîëèðèáîñîì ïå÷åíè êðûñ,
îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ñíèæàëîñü ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâûì ó èíòàêòíûõ
æèâîòíûõ (òàáë.9.2.1); ñíèæàëîñü è îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå ìÐÍÊ,
âõîäÿùåé â ñîñòàâ ïîëèðèáîñîì (âî ôðàêöèþ ÷àñòèö >80 S). Ýññåíöèàëå
íåñêîëüêî áîëüøå, ÷åì ôîñôîãëèâ, óâåëè÷èâàë äîëþ íîâîîáðàçîâàííîé
ìÐÍÊ, ñâÿçàííóþ ñ ðèáîñîìàìè.
Èçâåñòíî, ÷òî ÑÑl4 âûçûâàåò ïîâðåæäåíèå ìåìáðàí ÝÐ, ïðèâîäÿùåå ê
ñíèæåíèþ ñèíòåçà àëüáóìèíà [10]. Â íàøèõ ýêñïåðèìåíòàõ ïîêàçàíî, ÷òî
ââåäåíèå ôîñôîãëèâà êðûñàì ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïðèâîäèëî ê ïîëíîé
íîðìàëèçàöèè ñèíòåçà àëüáóìèíà. Ââåäåíèå ýññåíöèàëå íå îêàçûâàëî
ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà ýòîò ïðîöåññ (òàáë. 9.2.2).
271
Òàáëèöà 9.2.2.
Óäåëüíàÿ ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà (ïî [Ñ14]-ë
ëåéöèíó) â ñûâîðîòêå êðîâè êðûñ
ïîñëå îñòðîãî îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå.
Óäåëüíàÿ ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà
(èìï/ìèí/ìã) õ 10 3
Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà
Èíòàêòíûå æèâîòíûå
9,4 ± 0,75
ÑÑl4
6,3 ± 0,56
ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ
11,4 ± 1,04* #
ÑÑl4 + ýññåíöèàëå
3,7 ± 0,27* #
Êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ è óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà - êàê â ïîäïèñè ê òàáë. 9.2.1. [Ñ14]-ëåéöèí
ââîäèëè æèâîòíûì, ïîñëå ÷åãî îïðåäåëÿëè ðàäèîàêòèâíîñòü àëüáóìèíà ñûâîðîòêè êðîâè ñ
èñïîëüçîâàíèåì æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rack-beta".
* - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05.
# - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì; ð<0,05.
Êàê ñëåäóåò èç òàáëèöû 9.2.2, ñèíòåç àëüáóìèíà, ñíèæåííûé â
ðåçóëüòàòå ïîâðåæäåíèÿ ìèêðîñîìàëüíûõ ìåìáðàí ïðè ââåäåíèè
ÑÑl4, âîññòàíàâëèâàëñÿ ó æèâîòíûõ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì.
 ýêñïåðèìåíòàõ ñ ââåäåíèåì [Í3]-òèìèäèíà íàìè áûëî
ïîêàçàíî, ÷òî ðàçâèòèå îñòðîãî òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî
ââåäåíèåì ÑÑl4, ñîïðîâîæäàëîñü ñíèæåíèåì ñèíòåçà ÄÍÊ â ÿäðàõ
è ìèòîõîíäðèÿõ íà 50 è 65 % ñîîòâåòñòâåííî. Ëå÷åíèå
ôîñôîãëèâîì íå îêàçûâàëî ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà ñèíòåç
ÿäåðíîé ÄÍÊ, íî â 3 ðàçà óñèëèâàëî ñèíòåç ìèòîõîíäðèàëüíîé
ÄÍÊ. Íàðóøåíèå ôóíêöèé ìèòîõîíäðèé ïðè èíòîêñèêàöèè ÑÑl4
ÿâëÿåòñÿ, ïî-âèäèìîìó, ñëåäñòâèåì ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâàöèè
òîêñèêàíòà íåïîñðåäñòâåííî â ýòèõ îðãàíåëëàõ [11], ïîñêîëüêó
êîâàëåíòíîå ñâÿçûâàíèå ìåòàáîëèòîâ ÑÑl4 ñ ìèòîõîíäðèàëüíîé
ÄÍÊ â äåñÿòêè ðàç âûøå, ÷åì ñ ÿäåðíîé ÄÍÊ. Êðîìå òîãî, ñèíòåç
ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ áîëåå ÷óâñòâèòåëåí ê ïîâðåæäàþùåìó
äåéñòâèþ ÑÑl4, ÷åì ñèíòåç ÿäåðíîé ÄÍÊ [12]. Ñïîñîáíîñòü
ôîñôîãëèâà âîññòàíàâëèâàòü ñèíòåç ìèòîõîíäðèàëüíîé ÄÍÊ èìååò
áîëüøîå çíà÷åíèå äëÿ íîðìàëèçàöèè ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê è,
â ÷àñòíîñòè, ìèòîõîíäðèé [13, 14].
Ïðîâåäåííûå íàìè ãèñòîëîãè÷åñêèå è ãèñòîõèìè÷åñêèå
èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ÷åðåç 4 ñóòîê ïîñëå ââåäåíèÿ ÑÑl4 â
òêàíè ïå÷åíè ðàçâèâàëèñü ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ (òàáëèöû
9.2.3 è 9.2.4).  ÿäðàõ ÷àñòè ãåïàòîöèòîâ íàáëþäàëèñü ÿâëåíèÿ
öåíòðàëüíîãî õðîìàòîëèçà, âïëîòü äî êàðèîëèçà, óìåíüøàëîñü
ñîäåðæàíèå ÄÍÊ.  öèòîïëàçìå ãèñòîëîãè÷åñêè èçìåíåííûõ
êëåòîê íàáëþäàëàñü áåëêîâàÿ è æèðîâàÿ äèñòðîôèÿ, óìåíüøàëîñü
ñîäåðæàíèå ÐÍÊ è ñòðóêòóðíûõ ôîñôîëèïèäîâ (òàáëèöà 9.2.3).
272
Òàáëèöà 9.2.3
Ìîðôîëîãè÷åêàÿ îöåíêà ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè êðûñ ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 è ââåäåíèÿ
ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ (â áàëëàõ).*
Óñëîâèÿ
ýêñïåðèìåíòà
Äèñòîôè - Èíòåíñèâ íîñòü
÷åñêèå
èçìåíåíèÿ íåêðîçà
Ìàêðîôà ãàëüíàÿ
ðåàêöèÿ
Èíòàêòíûå æèâîòíûå
1,3
0
0
ÑÑl4
3,3
2,0
ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ
1,7
0
ÑÑl4 + ýññåíöèàëå
3,3
1,0
Ôèáðîáëàñòè ÷åñêàÿ
ðåàêöèÿ
Ðàçâèòèå ãðàíó ëÿöèîííîé
òêàíè
0
3,7
2,8
1,5
1,5
1,0
0
3,3
2,0
0
2,0
* ñîñòîÿíèå òêàíè ïå÷åíè îöåíèâàëè ãèñòîõèìè÷åñêè ïî èíòåíñèâíîñòè íåêðîçà,
ìàêðîôàãàëüíîé è ôèáðîáëàñòè÷åñêîé ðåàêöèÿì, à òàêæå ïî ñóììàðíûì äèñòðîôè÷åñêèì
èçìåíåíèÿì, ðåãèñòðèðóåìûì ïî 5-áàëëüíîé øêàëå: Î - îòñóòñòâèå ïðèçíàêà; 1 íåçíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ; 2 - óìåðåííî âûðàæåííûé ïðèçíàê; 3 - âûðàæåííûé ïðèçíàê; 4 ñèëüíî âûðàæåííûé ïðèçíàê [9]
 òêàíè ïå÷åíè áûëè îòìå÷åíû î÷àãè íåêðîçîâ, è ðàçâèòèå íà
ìåñòå íåêðîçîâ ãðàíóëÿöèîííîé òêàíè, íà îñíîâå êîòîðîé
âïîñëåäñòâèè, êàê èçâåñòíî, ðàçâèâàþòñÿ öèððîòè÷åñêèå
èçìåíåíèÿ [15]. Îäíîâðåìåííî óñèëèâàëàñü ïðîëèôåðàöèÿ
ôèáðîáëàñòîâ, ïðèâîäÿùàÿ ê ôèáðîçó [16].
Ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â ýòîò ïåðèîä åùå íå ïðîÿâëÿëèñü,
íàïðîòèâ, ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ è êîëè÷åñòâî äâóÿäåðíûõ êëåòîê
äàæå óìåíüøàëèñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì (òàáë. 9.2.4).
Òàáëèöà 9.2.4
Ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ è ñîäåðæàíèå äâóÿäåðíûõ êëåòîê (â %) â ïå÷åíè êðûñ ïîñëå
îñòðîãî îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ñ ïîñëåäóþùèì ââåäåíèåì ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ.
Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà
Èíòàêòíûå æèâîòíûå
ÑÑl4
ÑÑl4 + ôîñôîãëèâ
ÑÑl4 + ýññåíöèàëå
Ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ
Êîë -ââî äâóÿäåðíûõ êëåòîê
0,17±0,08
0,07±0,05
1,30±0,40* #
0,13±0,04**
8,30±0,80
4,75±0,64
6,80±0,80* #
7,07±1,06**
Êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ è óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà êàê â ïîäïèñè ê òàáë. 9.2.1. Êîëè÷åñòâî
ãåïàòîöèòîâ â ñîñòîÿíèè ìèòîçà è äâóÿäåðíûõ êëåòîê ðàññ÷èòûâàëè íà 500 êëåòîê â ïðîöåíòíûõ
ñîîòíîøåíèÿõ [8, 9].
* - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê èíòàêòíûì æèâîòíûì; ð<0,05.
# - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê îòðàâëåííûì æèâîòíûì; ð<0,05.
Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 9.2.4 äàííûõ, ââåäåíèå
æèâîòíûì ôîñôîãëèâà ïðèâîäèëî ê óâåëè÷åíèþ èññëåäîâàííûõ
ïàðàìåòðîâ. Îñîáåííî ýòî îòíîñèòñÿ ê ðåçêîìó ïîâûøåíèþ
ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà, ÷òî óêàçûâàåò íà àêòèâàöèþ
273
ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ â êëåòêàõ ïå÷åíè.
Ïîñëå ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà îòìå÷åíî ïðåêðàùåíèå ðàçâèòèÿ
íåêðîòè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, ÷òî âèäíî èç òàáëèöû 9.2.3.  ïå÷åíè
æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íàáëþäàëîñü ìåíüøå
äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé, îòñóòñòâóåò íåêðîç, à òàêæå ñíèæåíû
ïðîöåññû îáðàçîâàíèÿ ãðàíóëÿöèîííîé è ôèáðîçíîé òêàíè
(ôèáðîáëàñòè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ). Ó ýòîé ãðóïïû æèâîòíûõ îòìå÷åíî
ïîâûøåííîå ñîäåðæàíèå ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíûõ êðóïíûõ
ãåïàòîöèòîâ ñ âûñîêèì óðîâíåì ÐÍÊ è ôîñôîëèïèäîâ â
öèòîïëàçìå ïî ñðàâíåíèþ ñ íå ëå÷åíûìè êðûñàìè èëè æèâîòíûìè,
ïîëó÷àâøèìè ýññåíöèàëå.
Íåñìîòðÿ íà íåêîòîðîå ñíèæåíèå îáùåãî êîëè÷åñòâà
ìàêðîôàãîâ â ïå÷åíè æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ,
ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ýòèõ êëåòîê (ïðîÿâëÿþùèåñÿ â
óâåëè÷åíèè èõ ðàçìåðîâ, íàëè÷èè ôàãîöèòàðíûõ âàêóîëåé â
öèòîïëàçìå, ØÈÊ-ïîçèòèâíîé çåðíèñòîñòè) ñâèäåòåëüñòâóþò î
ïîâûøåíèè èõ ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè [9]. Ñëåäóåò îòìåòèòü,
÷òî ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ýññåíöèàëå, ëå÷åáíûé ýôôåêò áûë
âûðàæåí â ìåíüøåé ñòåïåíè. Ó íèõ ñëàáåå ïðîÿâëÿëèñü
ðåïàðàòèâíûå ïðîöåññû, íàáëþäàëèñü áîëåå âûðàæåííûå
äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ, ó ÷àñòè æèâîòíûõ
èìåëèñü î÷àãîâûå íåêðîçû.
Àêòèâàöèÿ ôîñôîãëèâîì çàùèòíîé àêòèâíîñòè ìàêðîôàãîâ ó
æèâîòíûõ îòðàâëåííûõ ÑÑl4, ïðîÿâèëàñü òàêæå â èíäóêöèè
ïåðèòîíåàëüíûìè ìàêðîôàãàìè ïå÷åíè ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF,
îöåíèâàåìûõ ïî ÈÖ êîíäèöèîíèðîâàííîé ñðåäû ìàêðîôàãîâ êðûñ,
îòðàâëåííûõ ÑÑl4. Ïðè ýòîì îáðàáîòêà ôîñôîãëèâîì in situ
ìàêðîôàãîâ çäîðîâûõ æèâîòíûõ ïðàêòè÷åñêè íå âëèÿëà íà ÈÖ ïðè
äîçàõ ïðåïàðàòà äî 0,2 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ), â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå,
óâåëè÷èâàþùåãî ÈÖ â 1,5 - 2 ðàçà [9], ÷òî ïîäòâåðæäàëî âûøå
ïðèâåäåííûå äàííûå î öèòîòîêñè÷íîñòè ýññåíöèàëå äëÿ
ìàêðîôàãîâ ìûøåé (ðèñ. 9.1.3).  ìàêðîôàãàõ ïå÷åíè êðûñ,
îòðàâëåííûõ ÑÑl4, îáà ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòà ñòèìóëèðîâàëè
ñèíòåç è ñåêðåöèþ TNF: äî 20-40% ÈÖ - ïðè âñåõ êîíöåíòðàöèÿõ
äëÿ ýññåíöèàëå, íà÷èíàÿ ñ 0,05 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) è ïðè
êîíöåíòðàöèÿõ ôîñôîãëèâà, ïðåâûøàþùèõ 0,1 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ).
Òàêèì îáðàçîì, ñïîñîáíîñòü ôîñôîãëèâà òîëüêî ïðè äîñòàòî÷íî
âûñîêèõ
êîíöåíòðàöèÿõ
ñóùåñòâåííî
àêòèâèðîâàòü
ìàêðîôàãàëüíóþ ðåàêöèþ è èíäóöèðîâàòü ýêñïðåññèþ
ìàêðîôàãàëüíîãî TNF, íåñîìíåííî, îòíîñèòñÿ ê åãî
ïîëîæèòåëüíûì ñâîéñòâàì. Âîçìîæíî, ÷òî óìåðåííàÿ ñòèìóëÿöèÿ
ñèíòåçà è ñåêðåöèè TNF ôîñôîãëèâîì áëàãîòâîðíî âëèÿåò íà
ïðîöåññû ðåãåíåðàöèè ïîâðåæäåííîé ïå÷åíè.
274
Íà îñíîâàíèè ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ íà ìîäåëè îñòðîãî
òîêñè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî îòðàâëåíèåì êðûñ ÑÑl4, ìîæíî
çàêëþ÷èòü, ÷òî ôîñôîãëèâ ýôôåêòèâíåå, ÷åì ýññåíöèàëå
ïðåäîòâðàùàåò äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ è
îáðàçîâàíèå íåêðîçîâ, à òàêæå óñèëèâàåò ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû
â êëåòêàõ.
9.3. Èññëåäîâàíèå ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè
ôîñôîãëèâà â ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ íà ìîäåëè
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà, âûçâàííîãî ÑÑl4.
Èññëåäîâàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè äåéñòâèÿ ôîñôîãëèâà â
ýêñïåðèìåíòàõ ñ èíäóöèðîâàííûì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì áûëè
ïðîâåäåíû íà äâóõ ãðóïïàõ æèâîòíûõ: (1) ñ òîêñè÷åñêèì
õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì, âûçâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl4 â òå÷åíèå 2-õ
íåäåëü; (2) ñ òîêñè÷åñêèì õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè
öèððîçà, âûçâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl4 â òå÷åíèå 6 íåäåëü [17].
 ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñ ñàìöîâ
âåñîì 120 - 150ã, êîòîðûì ââîäèëè ÑÑl4 äâà ðàçà â íåäåëþ
âíóòðèáðþøèííî â äîçå 0,1 ìë/100ã. Ðàçâèòèå õðîíè÷åñêîãî
ãåïàòèòà ó æèâîòíûõ ïîäòâåðæäàëè ãèñòîëîãè÷åñêèìè è
ãèñòîõèìè÷åñêèìè àíàëèçàìè. Ëå÷åíèå æèâîòíûõ ôîñôîãëèâîì è
ýññåíöèàëå ïðîâîäèëè, íà÷èíàÿ ñ ïåðâîãî äíÿ ââåäåíèÿ ÿäà òàêæå
ïî äâóì ñõåìàì: (1) â òå÷åíèå 2-õ íåäåëü; (2) â òå÷åíèå 6 íåäåëü.
Ïðåïàðàòû ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî (20 ìã ÑÔÕ íà 100ã ìàññû
òåëà) òðèæäû â íåäåëþ.
Äëÿ õàðàêòåðèñòèêè âîññòàíîâëåíèÿ áåëîêñèíòåçèðóþùåé
ôóíêöèè ïå÷åíè ïîä äåéñòâèåì ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ â
ãåïàòîöèòàõ èññëåäîâàëè ñèíòåç ìÐÍÊ è áåëêà, îöåíèâàåìûå ïî
âêëþ÷åíèþ â íèõ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû è [Ñ14]-ëåéöèíà
ñîîòâåòñòâåííî [17, 18].
Ïðè îòðàâëåíèè êðûñ ÑÑl4 ïî ñõåìå 1 (â òå÷åíèè 2-õ íåäåëü) â
ÿäðàõ êëåòîê ïå÷åíè çíà÷èòåëüíî âîçðàñòàëî êîëè÷åñòâî
íîâîñèíòåçèðîâàííûõ áåëêîâ 10,3 ± 1,8 îòí.åä. (ïî âêëþ÷åíèþ
[Ñ14]-ëåéöèíà), â êîíòðîëå - 4,8 ± 0,72 îòí.åä.; 1 îòíîñèòåëüíàÿ
åäèíèöà = èìï/ìèí/ìã áåëêà õ 103. Ýòî ìîæåò ñëóæèòü ïðèçíàêîì
ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ. Â öèòîçîëå (40,8 ± 4,7 îòí.åä. ïðîòèâ
35,4 ± 3,3 îòí.åä. â êîíòðîëå) è â ìèòîõîíäðèÿõ (1,00 ± 0,09 îòí.åä.
ïðîòèâ 1,22 ± 0,17 îòí.åä. â êîíòðîëå) ñóùåñòâåííûõ èçìåíåíèé â
ñèíòåçå áåëêà íå íàáëþäàëîñü. Ëå÷åíèå êðûñ ôîñôîãëèâîì è
ýññåíöèàëå â òå÷åíèå 2-õ íåäåëü íå îêàçûâàëî ñóùåñòâåííîãî
âëèÿíèÿ íà ñèíòåç áåëêà âî ôðàêöèÿõ êëåòîê ïå÷åíè. Òàê,
âêëþ÷åíèå [Ñ14]-ëåéöèíà â áåëêè öèòîçîëÿ ó ëå÷åííûõ
ôîñôîãëèâîì æèâîòíûõ ñîñòàâèëî 42,4 ± 6,5 îòí.åä., à ýññåíöèàëå 275
58,6 ± 4,5. Âêëþ÷åíèå â áåëêè ÿäåð êëåòîê ïå÷åíè ñîñòàâèëî
ñîîòâåòñòâåííî 10,1 ± 1,7 îòí.åä. è 6,5 ± 1,9 îòí.åä.
Äàííûå, ïîëó÷åííûå ïî âêëþ÷åíèþ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â
ÐÍÊ ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ÷åðåç äâå íåäåëè
ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4 ïîêàçàëè, ÷òî óðîâåíü ñèíòåçà ñóììàðíîé
ÐÍÊ â ÿäðàõ è ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé ÐÍÊ â öèòîïëàçìå
êëåòîê ïå÷åíè íåëå÷åííûõ æèâîòíûõ ïîâûøàëèñü ïî ñðàâíåíèþ ñ
êîíòðîëüíûìè (278,9 ± 21,5 îòí.åä ïî ñðàâíåíèþ ñ 143,9 ± 25,1 5
îòí.åä. â ÿäðàõ êëåòîê êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è 169,7 ± 17,9 îòí.åä.
ïî ñðàâíåíèþ ñ 106,5 ± 20,8 â öèòîçîëå êëåòîê êîíòðîëüíûõ
æèâîòíûõ; 1 îòí.åä. = èìï/ìèí/ìã ÐÍÊ õ 103). Ïðè ëå÷åíèè
ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â êëåòêàõ ïå÷åíè
êðûñ íå îòëè÷àëñÿ îò ñèíòåçà ìÐÍÊ â ïå÷åíè îòðàâëåííûõ, íî
íåëå÷åííûõ æèâîòíûõ. Òàê, íàïðèìåð, óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â
êëåòêàõ ïå÷åíè êðûñ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì, â öèòîçîëå ñîñòàâèë
166,9 ± 12,1 îòí.åä., à ýññåíöèàëå - 179,8 ± 20,4 îòí.åä.
Òàêèì îáðàçîì, ÷åðåç äâå íåäåëè ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl4,
óðîâåíü ñèíòåçà ÐÍÊ â ÿäðàõ è ñîäåðæàíèå íîâîîáðàçîâàííîé ÐÍÊ
â öèòîïëàçìå êëåòîê ïå÷åíè íå ëå÷åíûõ êðûñ ïîâûøàëèñü ïî
ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè. Ýòî, òàê æå, êàê è
èçìåíåííûé ñèíòåç áåëêà, îòðàæàåò ðåàêöèþ ïå÷åíè íà
ïðîèñõîäÿùèå â íåé íåêðîòè÷åñêèå ïðîöåññû. Ïðè ëå÷åíèè
ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå óðîâåíü ñèíòåçà ìÐÍÊ â êëåòêàõ ïå÷åíè
êðûñ íå îòëè÷àëñÿ îò ñèíòåçà ìÐÍÊ â ïå÷åíè îòðàâëåííûõ, íî
íåëå÷åííûõ êðûñ.
Íà îñíîâàíèè ïðèâåäåííûõ äàííûõ ìîæíî çàêëþ÷èòü, ÷òî
ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì èëè ýññåíöèàëå â òå÷åíèå ïåðâûõ 14 äíåé
(èëè 2-õ íåäåëü), êîòîðîå ïðîâîäèëè ïàðàëëåëüíî ñ ââåäåíèåì
êðûñàì ÑÑl4, íå îêàçûâàëî êàêîãî-ëèáî âëèÿíèÿ íà ïîâûøåííûé
âñëåäñòâèå ïðîòåêàþùèõ ðåïàðàöèîííûõ ïðîöåññîâ, óðîâåíü
ñèíòåçà áåëêà è ìÐÍÊ â ãåïàòîöèòàõ.
Äàííûå ãèñòîëîãè÷åñêîãî è ãèñòîõèìè÷åñêîãî àíàëèçà ïå÷åíè
êðûñ ïðè îòðàâëåíèè ÑÑl4, ïîêàçàëè, ÷òî óæå ê 14-îìó äíþ â
êëåòêàõ ðàçâèâàþòñÿ äèñòðîôè÷åñêèå è íåêðîòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ
è, â îòâåò íà íèõ, - âîñïàëèòåëüíàÿ èíôèëüòðàöèÿ, ïðîëèôåðàöèÿ
ôèáðîáëàñòîâ, ïðèâîäÿùàÿ ê ðàçâèòèþ ãðàíóëÿöèîííîé òêàíè. Çà
ýòîò ïåðèîä íà÷èíàåòñÿ ôèáðîòè÷åñêèé ïðîöåññ, ïðîèñõîäèò
ôîðìèðîâàíèå êîëëàãåíîâûõ âîëîêîí, îáðàçîâàíèå ïðîñëîåê,
ñîñòîÿùèõ èç ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè. Çàìåòíîé ïåðåñòðîéêè òêàíè
ïå÷åíè çà 14 äíåé íå îòìå÷åíî [18]. Îäíàêî, óâåëè÷åíèå
ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà è ÷èñëà äâóÿäåðíûõ è ïîëèïëîèäíûõ
êëåòîê óêàçûâàþò íà íà÷àëî ðåãåíåðàöèîííûõ ïðîöåññîâ â ïå÷åíè.
Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå çà ýòîò ïåðèîä (14 äíåé) íå
276
ïðèâîäèò ê çàìåòíîìó îñëàáëåíèþ ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà.
Ìîðôîëîãè÷åñêèå èçìåíåíèÿ â ïå÷åíè æèâîòíûõ ýòèõ ãðóïï ìàëî
îòëè÷àþòñÿ îò êðûñ, íå ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàòû.
Ñëåäóþùèì ýòàïîì áûëî èññëåäîâàíèå ýôôåêòèâíîñòè
äåéñòâèÿ ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ ïðè 45-äíåâíîì (6-òè
íåäåëüíîì) ëå÷åíèè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì õðîíè÷åñêèì
ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà (ñõåìà 2) [17]. Ôîñôîãëèâ è
ýññåíöèàëå ââîäèëè ñ ñàìîãî íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà (ñî 2-ãî äíÿ
îòðàâëåíèÿ æèâîòíûõ ÑÑl4). Èìåííî â òàêèõ ýêñïåðèìåíòàõ áûëî
ïðîäåìîíñòðèðîâàíî â ñâîå âðåìÿ çàùèòíîå äåéñòâèå ýññåíöèàëå
íà ìåìáðàíû ãåïàòîöèòîâ è ïðåäîòâðàùåíèå ðàçâèòèÿ
ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â òêàíÿõ ïå÷åíè [19, 20].
 òàáëèöå 9.3.1 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ñèíòåçà
áåëêà â ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèÿõ êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ïðè
äëèòåëüíîì îòðàâëåíèè ÑÑl4 ñ îäíîâðåìåííûì ââåäåíèåì
ôîñôîãëèâà èëè ýññåíöèàëå (ïî ñõåìå 2).
Òàáëèöà 9.3.1.
Âêëþ÷åíèå [Ñ14]-ë
ëåéöèíà â áåëêè ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ
õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà ïîñëå ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì è
ýññåíöèàëå â òå÷åíèå 45 äíåé.
Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-ëåéöèíà
(èìï/ìèí/ìã áåëêà) õ 10 3
ßäðà
Ìèòîõîíäðèè
Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà
Öèòîçîëü
Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà
72,3 ± 1,75
12,2 ± 0,55
2,83 ± 0,26
Ãðóïïà ñ õðîíè÷åñêèì
20,3 ± 1,74*
3,0 ± 0,35*
1,02 ± 0,14*
+ ôîñôîãëèâ
69,47 ± 4,74* #
9,34 ± 1,7* #
3,07 ± 0,19* #
+ ýññåíöèàëå
59,28 ± 6,5* #
11,78 ± 1,2* #
3,07 ± 0,39* #
ãåïàòèòîì
Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå = 5. ÑÑl4 ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 0,1 ìë/100 ã 2 ðàçà â
íåäåëþ â òå÷åíèå 45 äíåé. Ôîñôîãëèâ è ýññåíöèàëå ñ êîíöåíòðàöèåé 50 ìã/ìë (ïî ÑÔÕ) ââîäèëè
âíóòðèæåëóäî÷íî ïî 20 ìã/100 ã 3 ðàçà â íåäåëþ â òå÷åíèå âñåãî ýêñïåðèìåíòà. Ìå÷åííûå
ïðåäøåñòâåííèê [Ñ14]-ëåéöèí ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî ïî 50 ìêKu/100 ã âåñà çà 10 ìèí. äî
äåêàïèòàöèè æèâîòíûõ. Èç ãîìîãåíàòà ïå÷åíè ìåòîäîì äèôôåðåíöèàëüíîãî
öåíòðèôóãèðîâàíèÿ ïîëó÷àëè ôðàêöèè öèòîçîëÿ, ÿäåð è ìèòîõîíäðèé. Îïðåäåëåíèå
ðàäèîàêòèâíîñòè ïðîâîäèëè ïðè ïîìîùè æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ðàäèîìåòðà "Rackbeta" [17, 18].
* - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ; ð<0,05.
# - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê íåëå÷åííûì æèâîòíûì; ð<0,05.
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 9.3.1, ââåäåíèå êàê ôîñôîãëèâà, òàê è
ýññåíöèàëå ïðåïÿòñòâóåò ñíèæåíèþ âêëþ÷åíèÿ [Ñ14]-ëåéöèíà â
áåëêè ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ, îòðàâëÿåìûõ
ÑÑl4.
Ðåçóëüòàòû âêëþ÷åíèÿ [Ñ14]-îðîòîâîé êèñëîòû â ÐÍÊ
ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì
277
õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà ïðè ëå÷åíèè
ôîñôîëèïèäíûìè ïðåïàðàòàìè â òå÷åíèå 45 äíåé ïðåäñòàâëåíû â
òàáëèöå 9.3.2.
Òàáëèöà 9.3.2.
Âëèÿíèå 45-ä
äíåâíîãî ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì è ýññåíöèàëå íà âêëþ÷åíèå [Ñ14]îðîòîâîé êèñëîòû â ÐÍÊ ñóáêëåòî÷íûõ ôðàêöèé êëåòîê ïå÷åíè êðûñ ñ
õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà.
Âêëþ÷åíèå [Ñ 14 ]-î
îðîòîâîé êèñëîòû
Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà
(èìï/ìèí/ìã ÐÍÊ)
Öèòîçîëü
ßäðà
õ 10 3
Ìèòîõîíäðèè
Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà
63,6 ± 3,06
40,2 ± 4,7
4,83 ± 0,51
Ãðóïïà ñ õðîíè÷åñêèì
ãåïàòèòîì
+ ôîñôîãëèâ
32,15 ± 4,14*
47,2 ± 4,97*
3,83 ± 0,57*
60,5 ± 6,22* #
33,8 ± 4,38* #
6,03 ± 0,91* #
+ ýññåíöèàëå
100,1 ± 11,8* #
40,2 ± 3,11* #
3,19 ± 0,21* #
Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå 5. Óñëîâèÿ ââåäåíèÿ ÑÑl4 è ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ - êàê
óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáëèöå 9.3.1. [Ñ14]-îðîòîâóþ êèñëîòó ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî â äîçå 50
ìêKu/100 ã âåñà çà 60 ìèí. äî äåêàïèòàöèè æèâîòíûõ. Äàëåå ãîìîãåíàòû ïå÷åíè îáðàáàòûâàëè
êàê óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáë. 9.3.1.
* - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ; ð<0,05.
# - ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî îòíîøåíèþ ê íåëå÷åííûì æèâîòíûì; ð<0,05.
Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ ðåçóëüòàòîâ, ôîñôîãëèâ è
ýññåíöèàëå ïîëíîñòüþ âîññòàíàâëèâàëè áèîñèíòåç ÐÍÊ â
öèòîçîëå, ñíèæåííûé ïîä äåéñòâèåì ÑÑl 4.
Ãèñòîëîãè÷åñêèå è ãèñòîõèìè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ
ïîêàçàëè, ÷òî ÷åðåç 45 äíåé ââåäåíèÿ ÑÑl 4, ïî ìåðå çàìåùåíèÿ
î÷àãîâ íåêðîçà ñîåäèíèòåëüíîé òêàíüþ è ñîçðåâàíèÿ
ãðàíóëÿöèîííîé
òêàíè,
ïðîöåññ
ôèáðîçîîáðàçîâàíèÿ
óñèëèâàëñÿ,
îòìå÷åíî
îáðàçîâàíèå
ëîæíûõ
äîëåê,
ôîðìèðóåìûõ ñîåäèíèòåëüíîòêàííûìè ñåïòàìè, ðàçâèâàëàñü
êàðòèíà êëàññè÷åññêîãî öèððîçà.
Ââåäåíèå êðûñàì ôîñôîãëèâà íà ôîíå äëèòåëüíîãî
îòðàâëåíèÿ ÑÑl 4 ïðåïÿòñòâîâàëî ðàçâèòèþ ìîðôîëîãè÷åñêèõ
äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé òêàíè ïå÷åíè (òàáë. 9.3.3).
Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 9.3.3,
ââåäåíèå ýññåíöèàëå ìàëî âëèÿëî íà ìîðôîëîãè÷åñêèå
èçìåíåíèÿ â òêàíÿõ ïå÷åíè; îíè îñòàëèñü, ïðàêòè÷åñêè, íà òîì
æå óðîâíå, ÷òî è ó æèâîòíûõ, íå ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò.
Ââåäåíèå ôîñôîãëèâà, íàïðîòèâ, ñäåðæèâàëî äèôôóçíîå
ðàçðàñòàíèå ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè è öèððîòè÷åñêóþ
ïåðåñòðîéêó îðãàíà. Îòìå÷åíî ñóùåñòâåííîå îñëàáëåíèå
äèñòðîôè÷åñêèõ èçìåíåíèé, ôèáðîçà, ðàçâèòèÿ ëîæíûõ äîëåê,
278
Òàáëèöà 9.3.3.
Ìîðôîëîãè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè è ìèòîòè÷åñêèé èíäåêñ ïå÷åíè êðûñ
ïîëó÷àâøèõ ÑÑl4 è ôîñôîëèïèäíûå ïðåïàðàòû â òå÷åíèå 45 äíåé.
Óñëîâèÿ
ýêñïåðèìåíòà
Êîíòðîëüíûå
æèâîòíûå
Õðîíè÷åñêèé
ãåïàòèò
+ ôîñôîãëèâ
+ ýññåíöèàëå
Äèñò ðîôè - Èíòåíñèâ - Ôèáðîç
íîñòü
÷åñêèå
èçìåíå íåêðîçà
í èÿ
Ëîæíûå
äîëüêè
Ôèáðî áëàñòè ÷åñêàÿ
ðåàêöèÿ
Ðàçâèòèå
ãðàíóëÿ öèîííîé
òêàíè
Âîñïàëè òåëüíàÿ
ðåàêöèÿ
0,33
0
0
0
0
0
0
2,3
0,33
2,3
3,0
2,3
1,0
2,3
1,3
2,3
0
0
1,0
2,3
1,0
2,3
1,0
1,7
0
0
1,0
2,0
Ìèòîçû
(%)
0,13 ± 0,04
0,3 ± 0,07
0,33 ± 0,03
0,47 ± 0,07
Êîëè÷åñòâî êðûñ â êàæäîé ãðóïïå 5. Óñëîâèÿ ýêñïåðèìåíòà - êàê óêàçàíî â ïîäïèñè ê òàáëèöå 9.3.1.
Ñîñòîÿíèå òêàíè ïå÷åíè îöåíèâàëè ãèñòîõèìè÷åñêè ïî èíòåíñèâíîñòè íåêðîçà,
ìàêðîôàãàëüíîé è ôèáðîáëàñòè÷åñêîé ðåàêöèÿì, à òàêæå ïî ñóììàðíûì äèñòðîôè÷åñêèì
èçìåíåíèÿì, ðåãèñòðèðóåìûì ïî ïðèíÿòîé 5-áàëëüíîé øêàëå: Î - îòñóòñòâèå ïðèçíàêà; 1 íåçíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ; 2 - óìåðåííî âûðàæåííûé ïðèçíàê; 3 - âûðàæåííûé ïðèçíàê; 4 ñèëüíî âûðàæåííûé ïðèçíàê.
âîñïàëèòåëüíîé ðåàêöèè.  âåëè÷èíå ìèòîòè÷åñêîãî èíäåêñà
äîñòîâåðíûõ
ðàçëè÷èé
ìåæäó
ãðóïïàìè
æèâîòíûõ,
ïîëó÷àâøèõ è íå ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íå âûÿâëåíî.
Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå ôîñôîãëèâà â çíà÷èòåëüíîé
ñòåïåíè
ñïîñîáñòâîâàëî
ñíèæåíèþ
ìîðôîëîãè÷åñêèõ
íàðóøåíèé òêàíè ïå÷åíè íà èíäóöèðîâàííûõ ÑÑl 4 ìîäåëÿõ
îñòðîãî è õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ó êðûñ. Îñëàáëåíèå
íàðóøåíèé ïðîöåññîâ ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ ïîä
âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà íàáëþäàëè íà ìîäåëÿõ îñòðîãî ãåïàòèòà
[8], à òàêæå íà ìîäåëè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ñ ýëåìåíòàìè
öèððîçà ïðè åãî 6-íåäåëüíîì îäíîâðåìåííîì ââåäåíèè íà
ôîíå
îòðàâëåíèÿ
ÑÑl 4
[17,
18].
Ïðè
ìåíüøåé
ïðîäîëæèòåëüíîñòè ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì îí, íå âëèÿÿ íà
áèîñèíòåòè÷åñêèå ïðîöåññû, òåì íå ìåíåå, ñíèæàë
ðàçâèâàþùèåñÿ ïîä âëèÿíèåì òîêñèêàíòà ìîðôîëîãè÷åñêèå
èçìåíåíèÿ ïå÷åíè.
Íà îñíîâàíèè ñåðèè ïðîâåäåííûõ ýêñïåðèìåíòîâ ìîæíî
ñäåëàòü ñëåäóþùèå âûâîäû:
- ðåçóëüòàòû ãèñòîëîãè÷åñêîãî è ãèñòîõèìè÷åñêîãî
èññëåäîâàíèÿ ñîãëàñóþòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè áèîõèìè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèé è ñâèäåòåëüñòâóþò î áåçóñëîâíîé ëå÷åáíîé
ýôôåêòèâíîñòè ôîñôîëèïèäíûõ ïðåïàðàòîâ;
- ôîñôîãëèâ íå óñòóïàåò, à â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ îáëàäàåò
áîëåå âûðàæåííûì ãåïàòîïðîòåêòîðíûì äåéñòâèåì, ÷åì
ýññåíöèàëå.
Îäíèì èç êðèòåðèåâ âîññòàíîâëåíèÿ íîðìàëüíîãî
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ
ïå÷åíè
ïîñëå
åå
òîêñè÷åñêîãî
279
ïîâðåæäåíèÿ ÿâëÿåòñÿ âîññòàíîâëåíèå ìàññû òåëà è
îáåñïå÷åíèå íåîáõîäèìîé ñêîðîñòè åå íàðàñòàíèÿ.
Ïðè àíàëèçå âëèÿíèÿ ôîñôîãëèâà è ýññåíöèàëå íà
èçìåíåíèå ìàññû òåëà êðûñ îòìå÷àëè åñòåñòâåííîå
óâåëè÷åíèå ìàññû òåëà ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ íà
ïðîòÿæåíèè âñåãî ýêñïåðèìåíòà. Ïîñëå îòðàâëåíèÿ ÑÑl 4
ïðèðîñò ìàññû òåëà, íà÷èíàëñÿ òîëüêî ñ 15-ãî äíÿ îò íà÷àëà
ýêñïåðèìåíòà. Ïðè ëå÷åíèè ýññåíöèàëå êðûñû âåñèëè ìåíüøå
èñõîäíûõ âåëè÷èí äî 20-ãî äíÿ ýêñïåðèìåíòà, è òîëüêî çàòåì
èõ âåñ íà÷èíàë óâåëè÷èâàòüñÿ. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì
ïðèâîäèëî ê ïðèðîñòó ìàññû òåëà, íà÷èíàÿ ñ 14 äíÿ, ïðè ýòîì
ñêîðîñòü åå íàðàñòàíèÿ áûëà áëèçêà ê ñêîðîñòè óâåëè÷åíèÿ
ìàññû òåëà êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ.
 öåëîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ íà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ ñ ìîäåëÿìè ãåïàòèòîâ, èíäóöèðîâàííûõ ââåäåíèåì
ÑÑl 4 , ïîêàçàëè, ÷òî ôîñôîãëèâ ñïîñîáåí âîññòàíàâëèâàòü
êëåòêè ïå÷åíè ïîñëå îñòðîãî îòðàâëåíèÿ, à òàêæå çàùèùàòü èõ
â óñëîâèÿ äëèòåëüíîãî ïîâðåæäåíèÿ, èìèòèðóþùåãî ìîäåëü
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà.
Ïîäâîäÿ èòîãè ðåçóëüòàòîâ äîêëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé
ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ôîñôîãëèâà íåîáõîäèìî
îòìåòèòü, ÷òî:
- ôîñôîãëèâ è åãî êîìïîíåíòû â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå íå
îáëàäàþò öèòîòîêñè÷íîñòüþ (íå èíãèáèðóåò ðîñò êëåòîê â
êóëüòóðå);
- ôîñôîãëèâ, â îòëè÷èå îò ýññåíöèàëå, íå ïîâðåæäàåò
êëåòî÷íûå ñèñòåìû ñèíòåçà áåëêà, ÐÍÊ è ÄÍÊ;
ó
êðûñ
ñ
îñòðûì
òîêñè÷åñêèì
ãåïàòèòîì,
èíäóöèðîâàííûì ââåäåíèåì ÑÑl 4, ôîñôîãëèâ ïðåäîòâðàùàåò
äèñòðîôè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ãåïàòîöèòîâ è óñèëèâàåò
ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â ïå÷åíè, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ïåðñïåêòèâíîñòè åãî ïðèìåíåíèÿ ïðè îñòðîì òîêñè÷åñêîì
ãåïàòèòå â êà÷åñòâå ãåïàòîïðîòåêòîðà;
- ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå è ïðè öèððîçå, âûçâàííîì
xpîíè÷åñêîé èíòîêñèêàöèåé ÑÑl 4 , îáà ôîñôîëèïèäíûõ
ïðåïàðàòà ñòèìóëèðóþò ïðîöåññû âîññòàíîâëåíèÿ ñèíòåçà
áåëêà è ìÐÍÊ â ãåïàòîöèòàõ, îáåñïå÷èâàþò íå òîëüêî
âîññòàíîâëåíèå ìàññû òåëà æèâîòíûõ, íî è íåîáõîäèìóþ
ñêîðîñòü åå íàðàñòàíèÿ; ðåçóëüòàòû ãèñòîëîãè÷åñêîãî è
ãèñòîõèìè÷åñêîãî àíàëèçà ñâèäåòåëüñòâóþò î ñïåöèôè÷åñêîé
ãåïàòîïðîòåêòîðíîé è àíòèöèððîòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè
ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ.
280
9.4. Ðàñïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ ôîñôîãëèâà - ÃÊ è ÑÔÕ - â
îðãàíèçìå.
Êàê áûëî îòìå÷åíî (ñì. ãëàâû 6, 7), êîìïîíåíòû ôîñôîãëèâà, ÑÔÕ è ÃÊ,
êàæäûé â îòäåëüíîñòè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé äàâíî èñïîëüçóåìûå â
ìåäèöèíå ñîåäèíåíèÿ, ñ èçó÷åííîé ôàðìàêîêèíåòèêîé è
ôàðìàêîäèíàìèêîé [2, 19, 21 - 23, 28]. Íî ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ
åäèíñòâåííîé êîìïîçèöèåé, ãäå ýòè êîìïîíåíòû ïðèñóòñòâóþò âìåñòå.
Ïîýòîìó áûëî èíòåðåñíî èññëåäîâàòü ôàðìàêîêèíåòèêó ýòèõ ñîåäèíåíèé
â ñîñòàâå ïðåïàðàòà. Âïîëíå âîçìîæíî, ÷òî òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ
ôîñôîãëèâà îêàæåò âëèÿíèå íà ôàðìàêîêèíåòèêó åãî êîìïîíåíòîâ.
Èçó÷åíèå ðàñïðåäåëåíèÿ â îðãàíèçìå ÑÔÕ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé äîñòàòî÷íî
òðóäíóþ çàäà÷ó èç-çà åãî ñõîäñòâà ñ ýíäîãåííûì ÔÕ, âûñîêîé
ðàñïðîñòðàíåííîñòüþ â îðãàíèçìå è ò.ä. (ñì. ãëàâó 1). Îïðåäåëåíèå ÃÊ è åå
ìåòàáîëèòîâ â áèîëîãè÷åñêèõ îáðàçöàõ ìåòîäîì ÂÝÆÕ íå ïðåäñòàâëÿåò
îñîáûõ ñëîæíîñòåé. Åå ìåòàáîëèçì â îðãàíèçìå êðûñû ïðîèñõîäèò â
ñðåäíåì çà 70 ÷àñîâ [24]. Ïîýòîìó î ðàñïðåäåëåíèè ôîñôîãëèâà ñóäèëè,
èññëåäóÿ ñîäåðæàíèå ÃÊ è åå ìåòàáîëèòà ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (ÃÒ) â
ñûâîðîòêå êðîâè è òêàíÿõ. Ôîñôîãëèâ ââîäèëè â õâîñòîâóþ âåíó â äîçå,
ñîîòâåòñòâóþùåé 50 ìã/êã âåñà ÃÊ è 125ìã/êã ÑÔÕ. Îïðåäåëåíèå ÃÊ è ÃÒ â
îáðàçöàõ ïðîâîäèëè ìåòîäîì ÂÝÆÕ (ðèñ. 9.4.1).
Ïî äàííûì ðèñóíêà 9.4.1 êîíöåíòðàöèÿ ÃÊ â êðîâè è òêàíÿõ ðåçêî
ñíèæàåòñÿ â òå÷åíèå ïåðâûõ 2-õ ÷àñîâ ïîñëå ââåäåíèÿ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ
äàííûìè Tsai ñ ñîàâò. [25], ïîëó÷åííûìè ïðè âíóòðèâåííîì ââåäåíèè
êðûñàì àíàëîãè÷íîãî êîëè÷åñòâà ñâîáîäíîé ÃÊ. Îäíàêî, åñëè ïðè
ââåäåíèè ñâîáîäíîé ÃÊ ÷åðåç 1,5 ÷àñà îïðåäåëèòü åå ñîäåðæàíèå â ïëàçìå
óæå íåâîçìîæíî èç-çà ïðåäåëüíî íèçêîé êîíöåíòðàöèè [23], òî ïðè
ââåäåíèè ôîñôîãëèâà ìû íàáëþäàëè ïîñòåïåííîå ñíèæåíèå
êîíöåíòðàöèè ÃÊ â êðîâè, à â êîíöåíòðàöèè 3 ìêã/ìë îíà îïðåäåëÿëàñü
äàæå ÷åðåç 72 ÷àñà ïîñëå ââåäåíèÿ. Ñëåäîâàòåëüíî, âêëþ÷åíèå ÃÊ â
ôîñôîëèïèäíûå íàíî÷àñòèöû ïðîëîíãèðóåò åå öèðêóëÿöèþ â êðîâè.
Íåîæèäàííûì îêàçàëîñü áûñòðîå ïîÿâëåíèå â ñûâîðîòêå â
äîñòàòî÷íî âûñîêîé êîíöåíòðàöèè åå ìåòàáîëèòà - ÃÒ, äàëüíåéøàÿ
ýëèìèíàöèÿ êîòîðîé ïðîèñõîäèò ïàðàëëåëüíî ñ ÃÊ. Â ëèòåðàòóðå
ýòîò ôåíîìåí íå áûë îïèñàí. Èññëåäîâàòåëè îòìå÷àþò ïîÿâëåíèå
ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû â êðîâè òîëüêî â ñëó÷àå ïåðîðàëüíîãî
ââåäåíèÿ ÃÊ, êàê ðåçóëüòàò ãèäðîëèçà ïîñëåäíåé ôåðìåíòàìè
èñêëþ÷èòåëüíî êèøå÷íîé ìèêðîôëîðû [26]. Ïîÿâëåíèå ÃÒ â êðîâè
ðàññìàòðèâàþò êàê ðåçóëüòàò åå âòîðè÷íîãî âñàñûâàíèÿ ïîñëå
ñåêðåöèè ÃÊ â æåë÷ü è ñâÿçûâàþò ñ åå âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòüþ.
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî â ðàáîòå Takeda ñ ñîàâò. [27],
èçó÷àâøèìè ðàñïðåäåëåíèå ÃÊ â îðãàíèçìå, ïðè ñðàâíåíèè
ïåðîðàëüíîãî è âíóòðèâåííîãî åãî ââåäåíèÿ, òàêæå íàáëþäàëè
281
Ðèñ. 9.4.1. Äèíàìèêà èçìåíåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ÃÊ è ãëèöèððåòîâîé
êèñëîòû â ñûâîðîòêå êðîâè, ïå÷åíè è ïî÷êàõ êðûñ ïîñëå â/âåííîãî
ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà
Ôîñôîãëèâ ââîäèëè êðûñàì â õâîñòîâóþ âåíó â êîëè÷åñòâå ñîîòâåòñòâóþùåì 50
ìã/êã âåñà ÃÊ èëè 125ìã/êã ÑÔÕ. ×åðåç óêàçàííûå íà ðèñóíêå ïðîìåæóòêè âðåìåíè
æèâîòíûõ äåêàïèòèðîâàëè.  ñûâîðîòêå êðîâè è îáðàçöàõ òêàíåé ïå÷åíè è ïî÷åê
îïðåäåëÿëè ñîäåðæàíèå ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû (ÃÊ) è ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû
(ÃÒ) ìåòîäîì ÂÝÆÕ (êîëîíêà Ñ-18, ðåãèñòðàöèÿ ïðè 258 íì); äàíû ñðåäíèå
ðåçóëüòàòû ïî òðåì èçìåðåíèÿì.
ïîÿâëåíèå ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû â ñûâîðîòêå êðîâè ïðàêòè÷åñêè
ñðàçó æå ïîñëå âíóòðèâåííîãî ââåäåíèÿ ÃÊ. Ýòîò ôàêò àâòîðû
îáúÿñíèëè "áèîòðàíñôîðìàöèåé ÃÊ â îðãàíèçìå", îáóñëîâëåííîé
ãèäðîëèçîì â ïå÷åíè êðûñû ñ ïîìîùüþ β-ãëþêóðîíèäàçû äî ÃÒ
282
÷åðåç ìîíîãëþêóðîíèä. Ïîñëåäíèé çàòåì ìåäëåííî ãèäðîëèçóåòñÿ
äî ÃÒ.
 ïðîâåäåííûõ íàìè ýêñïåðèìåíòàõ, ÷åðåç 30 ìèíóò ïîñëå
ââåäåíèÿ 50 ìã/êã ÃÊ â ñîñòàâå ôîñôîãëèâà ñóùåñòâåííàÿ åå ÷àñòü
(420 ìêã/ã) è ÷àñòü ãëèöèððåòîâîé êèñëîòû (115 ìêã/ã) áûëè
îáíàðóæåíû â ïå÷åíè. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ÑÔÕ,
ïðèñóòñòâóþùèé â ôîñôîãëèâå, âëèÿåò íà ìåòàáîëèçì ýòèõ
ñîåäèíåíèé, óâåëè÷èâàÿ ïîñòóïëåíèå ÃÊ â ïå÷åíü.
Íèçêèé óðîâåíü ÃÊ è ÃÒ â òå÷åíèå âñåãî ýêñïåðèìåíòà
ñîõðàíÿëñÿ â ïî÷êàõ, ÷òî ñîãëàñóåòñÿ ñ äàííûìè î íèçêîì
âûâåäåíèè ýòèõ ñîåäèíåíèé ñ ìî÷îé ïðè â/â ââåäåíèè ÃÊ êðûñàì
[24].
9.5. Òîêñèêîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ôîñôîãëèâà.
Ôîñôîãëèâ èññëåäîâàëè â ýêñïåðèìåíòàõ íà îñòðóþ è õðîíè÷åñêóþ
òîêñè÷íîñòü, ìóòàãåííîñòü, êàíöåðîãåííîñòü è ýìáðèîòîêñè÷íîñòü.
Ýêñïåðèìåíòû ïðîâîäèëèñü ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì òðåáîâàíèÿì ê
ôàðìàöåâòè÷åñêèì ïðåïàðàòàì [29] â Ðîññèéñêîì êàðäèîëîãè÷åñêîì
íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííîì êîìïëåêñå ÌÇ ÑÐ ÐÔ, â ëàáîðàòîðèè
ëåêàðñòâåííîé òîêñèêîëîãèè ïîä ðóêîâîäñòâîì ïðîôåññîðà Å. Â.
Àðçàìàñöåâà.
Ïðè òîêñèêîëîãè÷åñêîì èçó÷åíèè ôîñôîãëèâà áûëî îòìå÷åíî,
÷òî ïðåïàðàò â äèàïàçîíå èñïûòàííûõ äîç 1400-35000 ìã/êã ïðè
îäíîêðàòíîì âíóòðèæåëóäî÷íîì ââåäåíèè ìûøàì BALB/C è
êðûñàì Wistar íå âûçûâàë âèäèìûõ ïðèçíàêîâ èíòîêñèêàöèè è
ãèáåëè æèâîòíûõ. Ïðè ýòîì èñïûòàííûå äîçû ïðåïàðàòà â 14-350
ðàç ïðåâûøàëè ñðåäíåñóòî÷íóþ ëå÷åáíóþ äîçó, ðåêîìåíäîâàííóþ
äëÿ ÷åëîâåêà. Ïîýòîìó ïðè äàííîì ñïîñîáå îäíîêðàòíîãî ââåäåíèÿ
ôîñôîãëèâà ëàáîðàòîðíûì æèâîòíûì ñðåäíå-ñìåðòåëüíûå äîçû
(LD50) íå óäàëîñü óñòàíîâèòü.
Îòìå÷åíî îòñóòñòâèå õðîíè÷åñêîé òîêñè÷íîñòè ïðè
âíóòðèâåííîì ââåäåíèè ñîáàêàì ïðåïàðàòà â äîçå 1000 ìã/êã. Ïðè
ýòîì íàáëþäàëèñü ïîëîæèòåëüíûå ìåòàáîëè÷åñêèå ýôôåêòû ïîâûøåíèå ýêñêðåòîðíîé ôóíêöèè ïå÷åíè, ñíèæåíèå ñîäåðæàíèÿ
õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ ïëàçìû êðîâè. Îòñóòñòâèå âëèÿíèÿ
äëèòåëüíîãî ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà íà ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå
âàæíåéøèõ îðãàíîâ è ñèñòåì ñîáàê ïîäòâåðæäåíî ðåçóëüòàòàìè
ïàòîìîðôîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé, ïîêàçàâøèõ îòñóòñòâèå
òîêñè÷åñêèõ ïîâðåæäåíèé âíóòðåííèõ îðãàíîâ, îáùèõ è ìåñòíûõ
òîêñèêî-àëëåðãè÷åñêèõ ðåàêöèé.
Îòñóòñòâèå ìóòàãåííîñòè è êàíöåðîãåííîñòè ïîêàçàíî ïðè
âíóòðèïåðèòîíåàëüíîì ââåäåíèè ìûøàì:
- íå îòìå÷åíî õðîìîñîìíûõ àáåððàöèé â êëåòêàõ êîñòíîãî ìîçãà
283
ïðè äîçå 1325 ìã/êã;
- íå îáíàðóæåíû ìóòàöèè â øòàììàõ ñàëüìîíåëëû â ïðåäåëàõ 25
ìã íà ÷àøêó Ïåòðè (òåñò Ýéìñà);
- íå îáíàðóæåíî ïîâðåæäåíèé ÄÍÊ ïðè "SOS-õðîìîòåñòå";
- â ïðåäåëàõ êîíöåíòðàöèé äî 450 ìã/êã íå îòìå÷åíî âëèÿíèÿ íà
äîìèíàíòíûå ëåòàëüíûå ìóòàöèè â çàðîäûøåâûõ êëåòêàõ.
Òåðàòîãåííîñòü è ýìáðèîòîêñè÷íîñòü îòñóòñòâîâàëè ïðè
âíóòðèáðþøèííîì ââåäåíèè ôîñôîãëèâà êðûñàì â äîçå 80 ìã/êã.
Èññëåäîâàíèÿ àëëåðãè÷åñêèõ è èììóíîòîêñè÷åñêèõ ñâîéñòâ
ïðåïàðàòà ïîêàçàëè, ÷òî àëëåðãè÷åñêèå ðåàêöèè îòñóòñòâîâàëè, íå
óñòàíîâëåíà äåãðàíóëÿöèÿ æèðîâûõ êëåòîê. Ïðåïàðàò â äîçàõ, íå
ïðåâûøàþùèõ 125 ìã/êã, íå âëèÿë íà ïåðâè÷íûå èììóííûå
ðåàêöèè, íå âûçûâàë ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòü çàìåäëåííîãî òèïà.
Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïî âûðàæåííîìó ñïåöèôè÷åñêîìó
ãåïàòîïðîòåêòîðíîìó
äåéñòâèþ
ôîñôîãëèâà
ïðè
ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ãåïàòèòàõ, à òàêæå ïî îòñóòñòâèþ òîêñè÷íîñòè
è íåãàòèâíûõ âîçäåéñòâèé íà êëåòêè, ïîñëóæèëè îñíîâàíèåì äëÿ
ïîëó÷åíèÿ ðàçðåøåíèÿ Ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî Ãîñóäàðñòâåííîãî
êîìèòåòà ÐÔ íà åãî êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ (ïðîòîêîë ¹11 îò
4.07.96).
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 9.
1. Martin G.P., el-Hariri L.M., Marriott C. Bile salt- and lysophosphatidylcholine-induced membrane damage in human erythrocytes. J
Pharm Pharmacol. 1992, 44, 646-650.
2. Oette K. On the administration of phosphatidylcholine - metabolic and pharmacokinetic aspects in human. In: 50th Anniversary of
Phospholipid Research (EPL). Ed. Gundermann K.-J., Schumacher R.,
wbn-Verlag, Bingen/Rhein, 1990, 35-48.
3. Gross KJ., Pogo AO. Control of ribonucleic acid synthesis in
eukaryotes. 2. The effect of protein synthesis on the activities of nuclear
and total DNA-dependent RNA polymerase in yeast. Biochemistry.
1976, 15, 2070-2081.
4. Carpentier I., Coornaert B., Beyaert R. Function and regulation of
tumor necrosis factor type 2. Curr Med Chem. 2004, 11, 2205-2212.
5. Trinchieri G. Regulation of tumor necrosis factor production by
monocyte-macrophages and lymphocytes. Immunol Res. 1991, 10, 89103.
6. Medvedev A.T., Fuchs B.B., Rachmilevich A.L. A study of the
action of immunosuppressive factors from tumour cells on lymphocytes
and macrophages in vitro and on the graft-versus-host reaction in mice.
Biomed Sci. 1990, 1, 261-266.
7. Weber L.W., Boll M., Stampfl A. Hepatotoxicity and mechanism
284
of action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model.
Crit Rev Toxicol. 2003, 33, 105-136.
8. Èïàòîâà Î. Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò. È., Êíÿæåâ Â. À., Êàðóçèíà È. È.,
Áà÷ìàíîâà Ã. È., Ãóñåâà Ì. Ê., Àð÷àêîâ À. È. Ñðàâíèòåëüíîå
èññëåäîâàíèå äåéñòâèÿ ýññåíöèàëå è íîâîãî îòå÷åñòâåííîãî
ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîëèâ" íà ìîäåëè îñòðîãî ãåïàòèòà ó êðûñ.
Âîïð ìåä õèìèè. 1998, 44, 544-550.
9. Ïîäîáåä Î.Â., Ôåäîðîâà Ë.Ì., ßêóøåâà È.Â., Àáàêóìîâà Î.Þ.,
Öâåòêîâà Ò.À., Êîâàëåâà Ã.Ã. Ãàâðèëü÷àê À.Â. Øåõòåð À.Á. Âëèÿíèå
ôîñôàòèäèëõîëèíà íà ðåïàðàöèîííûå ïðîöåññû â êëåòêàõ ïå÷åíè
ïðè åå îñòðîì ïîðàæåíèè ÑÑ14. Âîïð ìåä õèìèè, 1995, 41, 13-16.
10. Weignand K., Muller M., Urban J., Schreiber G. Intact endoplasmic reticulum and albumin synthesis in rat liver cell suspensions. Exp
Cell Res. 1971, 67, 27-32.
11. Tomasi A., Albano E., Banni S., Botti B., Corongiu F., Dessi M.A.,
Iannone A., Vannini V., Dianzani M.U. Free-radical metabolism of carbon tetrachloride in rat liver mitochondria. A study of the mechanism
of activation. Biochem J. 1987, 246, 313-317.
12. Levy G.H., Brabek M.J. Binding of carbon tetrachloride metabolites to rat hepatic mitochondrial DNA. Toxicol Lett. 1984, 22, 229-234.
13. Sawyer D.E., van Houten B. Repair of DNA damage in mitochondria. Mutat Res. 1999, 434, 161-176.
14. Ãàçèåâ À.È., Ïîäëóòñêèé À.ß. Íèçêàÿ ýôôåêòèâíîñòü
ñèñòåìû ðåïàðàöèè ÄÍÊ â ìèòîõîíäðèÿõ. Öèòîëîãèÿ. 2003, 45,
403-417.
15. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. - Ì., Ìåäèöèíà. Èçä. 2-å,
1993.
16. Øåðëîê Ø., Äóëè Äæ. Çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè è æåë÷íûõ
ïóòåé. Ìîñêâà, ÃÝÎÒÀÐ Ìåäèöèíà, 1999.
17. Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Êíÿæåâ Â.À., Êàðóçèíà È.È.,
Áà÷ìàíîâà Ã.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Àð÷àêîâ À.È. Òîðìîæåíèå ñ ïîìîùüþ
íîâîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà "Ôîñôîãëèâ" ðàçâèòèÿ
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ó êðûñ. Âîïð ìåä õèì. 1998, 44, 537-543.
18. Ïîäîáåä Î.Â., Ôåäîðîâà Ë.Ì., Àáàêóìîâà Î.Þ., ßêóøåâà
È.Â., Öâåòêîâà Ò.À., Ãàâðèëü÷àê À.Â. Øåõòåð À.Á., Êàðÿêèí À.Â.
Èññëåäîâàíèå ãåïàòîçàùèòíûõ ñâîéñòâ ïðåïàðàòà ôîñôîëèâ,
ñîäåðæàùåãî ôîñôàòèäèëõîëèí èç ñåìÿí ïîäñîëíå÷íèêà è
ãëèöèððèçèíîâóþ êèñëîòó, íà ìîäåëè öèððîçà ïå÷åíè êðûñ. Áþëë
ýêñï áèîë ìåä. 1997, 124, 311-314.
19. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane
therapeutic. Szczecin, 1999.
20. Kuntz E. "Essentielle" Phospholipide in der hepatologie - 50
Jahre Åxperimentale und Klinische Erfahrung. Z Gastroenterol. 1991,
285
29, 7-13.
21. Zierenberg O. Intestinal absorption of polyenephosphatidylcholine in man. J Lipid Res. 1982, 23, 1136-1142.
22. van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A. et al. Review article:
Glycyrrhizin as a Potential Treatment of Chronic Hepatitis C. Aliment
Pharmacol Ther. 1998, 12, 199-205.
23. Ploeger B., Mensinga T., Sips A., Seinen W., Meulenbelt J.,
DeJongh J. The pharmacokinetics of glycyrrhizic acid evaluated by
physiologically based pharmacokinetic modeling. Drug Metabolism
Review. 2001, 33, 125-147.
24. Ichikawa T., Ishida S., Sakiya Y., Akada Y. High performance
liquid chromatographic determination of Glycyrrhizin and
Glycyrrhetinic acid in biological materials. Chem Pharm Bull. 1984, 32,
3734-3738.
25. Tsai T.H., Liao J.F., Shum A.Y., Chen C.F. Pharmacokinetics of
Glycyrrhizin after intravenous administration to rats. J Pharm Sci.
1992, 81, 961-963.
26. Akao T. Localization of enzymes involved in metabolism of glycyrrhizin in contents of rat gastrointestinal tract. Biol Pharm Bull. 1997,
20, 122-126.
27. Takeda S., Ishthara K., Wakui Y., Amagaya S., Maruno M., Akao
T., Kobashi. Bioavailability study of glycyrrhetic acid after oral administration of glycyrrhizin in rats; relevance to the intestinal bacterial
hydrolysis. J Pharm Pharmacol. 1996, 48, 902-905.
28. Hîlzl J. Pharmacokinetic studies on phosphatidylcholine and
phosphatidylinositol. In: Phosphatidylcholine - biochemical and clinical aspects of essential phospholipids. H.Peeters ed., Springer Press,
Berlin - Heidelberg - New York, 1976, 66-79
29. Áåëîóñîâ Þ.Á., Ìîèñååâ Â.Ñ., Ëåïàõèí Â.Ê. Êëèíè÷åñêàÿ
ôàðìàêîëîãèÿ è ôàðìàêîòåðàïèÿ. Ðóêîâîäñòâî äëÿ âðà÷åé., M.,
1997.
286
ÃËÀÂÀ 10. ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÅ ÏÐÅÏÀÐÀÒÀ
ÔÎÑÔÎÃËÈÂ.
10.1. Îáîñíîâàíèå êëèíè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ ïðåïàðàòà
ôîñôîãëèâ
Êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ôîñôîãëèâà ïðîâîäèëèñü, â ïåðâóþ
î÷åðåäü, íà áîëüíûõ ñ çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè, â îñíîâíîì ñ
ðàçëè÷íûìè ôîðìàìè ãåïàòèòîâ, äëÿ ëå÷åíèÿ êîòîðûõ è
ðàçðàáàòûâàëñÿ äàííûé ïðåïàðàò.
Èçâåñòíî, ÷òî íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûì ñïîñîáîì ëå÷åíèÿ
âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ ÿâëÿåòñÿ òåðàïèÿ èíòåðôåðîíîì (ÈÔÍ).
Îäíàêî îíà îêàçûâàåòñÿ ýôôåêòèâíîé òîëüêî ó 40-60% áîëüíûõ, à
â ñëó÷àå ðàçâèòèÿ öèððîçà ýòà öèôðà îêàçûâàåòñÿ ìåíåå 20% [1, 2].
Ðÿä èññëåäîâàòåëåé îòìå÷àþò, ÷òî íåñìîòðÿ íà óëó÷øåíèå
ñîñòîÿíèÿ, âñå æå ó áîëåå 50% [3] èëè 60% [4] áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ
ñòàíäàðòíàÿ òåðàïèÿ èíòåðôåðîíîì èëè íå äàåò ðåçóëüòàòîâ, èëè
íåâîçìîæíà èç-çà âûñîêîãî ðèñêà ðàçâèòèÿ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ. Â
äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [5, 6] óêàçûâàåòñÿ, ÷òî íà ÈÔÍ-òåðàïèþ
âîîáùå îòâå÷àåò îêîëî 20% áîëüíûõ [5, 6]. Ïðè ðåçêîì ïîâûøåíèè
äîçû èíòåðôåðîíà èõ êîëè÷åñòâî óâåëè÷èâàåòñÿ äî 30% [7], ïðè
êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì - äî 35-37% [8-10] è ïî÷òè äî 55% ïðè
èñïîëüçîâàíèè, òàê íàçûâàåìîãî, ïýãèëèðîâàííîãî (ÏÝÃ)
èíòåðôåðîíà [6]. Â äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [11, 12] ïðèâîäèòñÿ áîëåå
âûñîêèé ïðîöåíò áîëüíûõ, îòâå÷àþùèõ íà êîìáèíèðîâàííóþ
òåðàïèþ ÏÝÃ-èíòåðôåðîíîì â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì.
Îäíàêî âñå àâòîðû îáðàùàþò îñîáîå âíèìàíèå íà íåîáõîäèìîñòü
ïðè ýòîì î÷åíü òùàòåëüíîãî èññëåäîâàíèÿ ðèñêà âîçíèêíîâåíèÿ è
ðàçâèòèÿ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ [3, 6, 12]. Ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòà Â
ïîëîæèòåëüíûé ýôôåêò òåðàïèè èíòåðôåðîíîì îáíàðóæåí ó 33%
áîëüíûõ, èç êîòîðûõ ó 13% íàáëþäàëàñü ïîâòîðíàÿ ðåàêòèâàöèÿ
âèðóñà ïîñëå îêîí÷àíèÿ ëå÷åíèÿ [13].
Òàêèì îáðàçîì, óñòîé÷èâîñòü çíà÷èòåëüíîãî ÷èñëà áîëüíûõ ê
òàêîìó âèäó ëå÷åíèÿ, íàðÿäó ñ ðèñêîì ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ åãî íîâûõ
êîìáèíèðîâàííûõ ôîðì, îáóñëàâëèâàåò íåîáõîäèìîñòü ïîèñêà
äðóãèõ, áîëåå ýôôåêòèâíûõ ñðåäñòâ äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ [14].
Ïðåïàðàòû íà îñíîâå ÃÊ ïðèîáðåòàþò â ïîñëåäíèå ãîäû âñå
áîëüøóþ ïîïóëÿðíîñòü ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòîâ, è ñðåäè íèõ íåîìèíîôàãåí Ñ, ðàçðàáîòàííûé â ßïîíèè è ïðèìåíÿåìûé â
êëèíèêå óæå áîëåå 30 ëåò [15, 16]. Îñîáóþ ýôôåêòèâíîñòü ýòîãî
ïðåïàðàòà îòìå÷àþò ïðè ëå÷åíèè õðîíè÷åñêèõ ãåïàòèòîâ [14-23].
Ñ÷èòàþò, ÷òî òåðàïåâòè÷åñêóþ ýôôåêòèâíîñòü åãî ïðèìåíåíèÿ
îáóñëàâëèâàþò ïðîòèâîâèðóñíûå è èììóíîìîäóëèðóþùèå
ñâîéñòâà ÃÊ, à òàêæå ñïîñîáíîñòü ê èíäóêöèè γ-èíòåðôåðîíà [24-26].
Îïðåäåëåííûé âêëàä â ýôôåêòèâíîñòü ÃÊ âíîñÿò åå
287
àíòèîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà, à òàêæå ñïîñîáíîñòü ïîâûøàòü
äåòîêñèöèðóþùóþ àêòèâíîñòü ïå÷åíè [27-29]. Îáëàäàÿ
ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûì äåéñòâèåì, ÃÊ ïîäàâëÿåò ðåïðîäóêöèþ
âèðóñà â ïå÷åíè è äðóãèõ îðãàíàõ çà ñ÷åò ñòèìóëÿöèè ñèíòåçà
èíòåðôåðîíà, ïîâûøåíèÿ ôàãîöèòîçà, óâåëè÷åíèÿ àêòèâíîñòè
åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ è äð. (ñì. ãëàâó 7).
Êàê áûëî ïîêàçàíî âûøå, ÑÔÕ îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ
âîññòàíàâëèâàòü öåëîñòíîñòü êëåòî÷íûõ ìåìáðàí (ñì. ãëàâó 6).
Èñïûòàíèÿ ýôôåêòèâíîñòè ÑÔÕ, â òîì ÷èñëå è â ñîñòàâå
ýññåíöèàëå, áûëè ïðîâåäåíû â îáùåé ñëîæíîñòè â áîëåå ÷åì 170
èññëåäîâàíèÿõ, âêëþ÷àÿ 18 äâîéíûõ "ñëåïûõ", íà íåñêîëüêèõ
òûñÿ÷àõ ïàöèåíòîâ ñ ðàçëè÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè, òàêèìè,
êàê îñòðûé è õðîíè÷åñêèé âèðóñíûå ãåïàòèòû, îæèðåíèå ïå÷åíè,
àëêîãîëüíûå, òîêñè÷åñêèå è ëåêàðñòâåííûå ïîðàæåíèÿ ïå÷åíè,
öèððîç è äð. [30 - 35]. Ðåçóëüòàòû ýòèõ èññëåäîâàíèé
ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ÑÔÕ ñïîñîáñòâóåò:
- íîðìàëèçàöèè ñóáúåêòèâíûõ ñèìïòîìîâ çàáîëåâàíèé,
êëèíè÷åñêèõ ïðîÿâëåíèé è áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé;
- óìåíüøåíèþ âîñïàëèòåëüíûõ ðåàêöèé, íåêðîçà ïå÷åíî÷íûõ
êëåòîê, ñíèæåíèþ æèðîâûõ èíôèëüòðàöèé, êëåòî÷íîé äèñòðîôèè
è ôèáðîãåíåçà;
- óñêîðåíèþ ñåðîêîíâåðñèè HBsAg ïðè îñòðûõ âèðóñíûõ
ãåïàòèòàõ;
- ñîêðàùåíèþ ñðîêîâ ãîñïèòàëèçàöèè.
Ïîêàçàíî ýôôåêòèâíîå äåéñòâèå ÑÔÕ íà áîëüíûõ ãåïàòèòîì Ñ [36].
Íåäàâíî óñòàíîâëåíî, ÷òî â ïîâðåæäåííîé àëêîãîëåì ïå÷åíè ÑÔÕ
ïðåïÿòñòâóåò ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè öèòîõðîìà CYP2E1, âûçûâàþùåãî
ãåíåðàöèþ àöåòàëüäåãèäà è ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, è ïîäàâëÿåò ôèáðîç [37].
ßâëÿÿñü îñíîâíûì ñòðóêòóðíûì êîìïîíåíòîì áèîëîãè÷åñêèõ
ìåìáðàí, ÑÔÕ âñòðàèâàåòñÿ â íèõ, âîññòàíàâëèâàÿ ñòðóêòóðó è ôóíêöèè
ïîâðåæäåííûõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ, öåëîñòíîñòü êëåòîê è óáåðåãàåò èõ îò
íåîáðàòèìûõ íåêðîòè÷åñêèõ ïîâðåæäåíèé. ÑÔÕ ñïîñîáñòâóåò
íîðìàëèçàöèè áåëêîâîãî, ëèïèäíîãî è æèðîâîãî îáìåíîâ, âîññòàíàâëèâàåò
äåòîêñèêàöèîííóþ ôóíêöèþ ïå÷åíè, èíãèáèðóåò ôîðìèðîâàíèå
ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè â ïå÷åíè, ñíèæàåò ðèñê âîçíèêíîâåíèÿ ôèáðîçà è
öèððîçà [32, 35].
Ðåçóëüòàòû äîêëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé è àíàëèç äàííûõ ëèòåðàòóðû
î ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ÃÊ è ÑÔÕ ïîçâîëèëè ïðåäïîëîæèòü, ÷òî
ðàçðàáîòàííûé íîâûé îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò ôîñôîãëèâ, äîëæåí
ñî÷åòàòü â ñåáå ýôôåêòû íåîìèíîôàãåíà Ñ, ýññåíöèàëå è
èíòåðôåðîíîòåðàïèè ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòîâ, à òàêæå ðÿäà äðóãèõ
çàáîëåâàíèé ïå÷åíè, ñâÿçàííûõ ñ íàðóøåíèåì íîðìàëüíîãî
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ ýòîãî îðãàíà.
288
Ôîñôîãëèâ âûïóñêàåòñÿ â äâóõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðìàõ - êàïñóëû è
ëèîôèëèçèðîâàííûé ïîðîøîê äëÿ âíóòðèâåííûõ èíúåêöèé.
Ïðîâåäåííûå
äîêëèíè÷åñêèå
èññëåäîâàíèÿ,
ïîêàçàâøèå
ãåïàòîïðîòåêòîðíóþ àêòèâíîñòü ôîñôîãëèâà íà ìîäåëÿõ îñòðîãî è
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà ñ ýëåìåíòàìè öèððîçà, ïðîÿâëÿþùóþñÿ â
ñòèìóëÿöèè ïðîöåññîâ âîññòàíîâëåíèÿ ñèíòåçà áåëêà è ìÐÍÊ â
ïîâðåæäåííûõ êëåòêàõ ïå÷åíè è íîðìàëèçàöèè ìîðôîëîãèè ïå÷åíè (ñì.
ãëàâó 9), ïîñëóæèëè îñíîâàíèåì äëÿ èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé
ýôôåêòèâíîñòè ïðåïàðàòà.
Îò÷åòû î õîäå êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé
ôîðì ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðåäñòàâëåíû àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ïîêðîâñêèì
Â.È., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ó÷àéêèíûì Â.Ô., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Õàèòîâûì
Ð.Ì., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Èâàøêèíûì Â.Ò., àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ
Ñòîðîæàêîâûì Ã.È., ÷ëåí- êîðð. ÐÀÌÍ Î.À. Äóíàåâñêèì, ïðîôåññîðàìè
Ëó÷øåâûì Â.È., ×åøèêîì Ñ.Ã., Àëüòøóëåðîì Â.Á., Ãàëüïåðèíûì Ý.È.,
Áóòîâûì Þ.Ñ., Ìàÿêîâîé Ñ.À. è äð. Âñå èññëåäîâàíèÿ âûïîëíåíû â
ñîîòâåòñòâèè ñ ïðîòîêîëîì êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé, ðàçðàáîòàííûì
àêàäåìèêîì ÐÀÌÍ Ó÷àéêèíûì Â.Ô.
Ëå÷åíèå êàïñóëüíîé è èíúåêöèîííîé ôîðìàìè ôîñôîãëèâà áûëè
ïðîâåäåíû íà áîëåå ÷åì 400 áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè è ñ ðàçëè÷íîé
ñòåïåíüþ âûðàæåííîñòè ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè (òàáë.10.1.1).
Òàáëèöà 10.1.1.
Ãðóïïû áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì
×èñëî áîëüíûõ,
ïîëó÷àâøèõ
ôîñôîãëèâ
×èñëî áîëüíûõ â
êîíòðîëå
Îñòðûé ãåïàòèò Â (ÂÃÂ) èëè ÂÃ(Â+Ñ)
87
75
Õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò (ÕÃ) Ñ, Â, ÕÃ(Ñ + B)
126
73
Äèôôóçíûå çàáîëåâàíèÿ ïå÷åíè (æèðîâîé,
ëåêàðñòâåííûé, àëêîãîëüíûé è
äèàáåòè÷åñêèé ãåïàòîçû, ãèïåðëèïèäåìèÿ è
äð.)
82
32
Çàáîëåâàíèÿ êîæè, àññîöèèðîâàííûå ñ
âòîðè÷íûìè äèñëèïèäåìèÿìè (ïñîðèàç,
ýêçåìà, íåéðîäåðìèò è äð.)
35
40
Îíêîëîãè÷åñêèå áîëüíûå ñ âèðóñíûì
ãåïàòèòîì  è òîêñè÷åñêèì ïîðàæåíèåì
ïå÷åíè
31
10
Êàëüêóëåçíûé õîëåöèñòèò
32
6
Îñòðûé ãåïàòèò À ó äåòåé
12
14
Îñòðûé ãåïàòèò Â ó äåòåé
15
13
Âñåãî
410
249
Çàáîëåâàíèÿ
289
10.2. Ïðèìåíåíèå êàïñóëüíîé ôîðìû ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ.
Èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ëåêàðñòâåííîãî
ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ïðè ëå÷åíèè çàáîëåâàíèé ïå÷åíè ðàçëè÷íîé
ýòèîëîãèè áûëè íà÷àòû â 1998 ãîäó ñ èñïûòàíèÿ êàïñóëüíîé
ôîðìû [38-44].
 ÷àñòíîñòè, 19 áîëüíûõ ñ îñòðûì âèðóñíûì ãåïàòèòîì  (Âà Â)
ñî ñðåäíå-òÿæåëûìè ôîðìàìè çàáîëåâàíèÿ íà ôîíå áàçèñíîé
òåðàïèè ïîëó÷àëè êàïñóëû ôîñôîãëèâ (ïî 2 êàïñ. 3 ðàçà â äåíü) â
òå÷åíèå 30 äíåé. Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà, ñîñòîÿùàÿ èç 10 áîëüíûõ,
ïîëó÷àëà òîëüêî áàçèñíóþ òåðàïèþ (ãëþêîíàò êàëüöèÿ, àñêîðóòèí,
ìåçèì ôîðòå è ò.ä.). Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âêëþ÷åíèå êàïñóë
ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ áîëüíûõ ñ îñòðûì âèðóñíûì ãåïàòèòîì â
öåëîì óñêîðÿëî èñ÷åçíîâåíèÿ êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ
èíòîêñèêàöèè (òîøíîòà, àíîðåêñèÿ è ò.ä.) è ïðèâîäèëî ê
ñîêðàùåíèþ îáùåãî êîëè÷åñòâà "êîéêî-äíåé". Ôîñôîãëèâ óëó÷øàë
è áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ñûâîðîòêè êðîâè, ÿâëÿþùèåñÿ
îáû÷íî èíäèêàòîðàìè ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (òàáëèöà 10.2.1).
Òàáëèöà 10.2.1.
Äèíàìèêà èçìåíåíèé áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ
ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè, â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ Îàïðè ëå÷åíèè
ôîñôîãëèâîì [38]
Ïîêàçàòåëü
Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì
Äî ëå÷åíèÿ
Áàçèñíàÿ òåðàïèÿ
Äî
Ïîñëå ëå÷åíèÿ
ëå÷åíèÿ
Ïîñëå ëå÷åíèÿ
ÀëÀÒ, åä/ë
1600 + 162
530 + 38*
1450 + 170
710 + 64
ÀñÀÒ, åä/ë
995 + 13
280 + 94
1522 + 163
296 + 40
Áèëèðóáèí (îáùèé)
ìêìîëü/ë
118 + 3,9
44+ 2,1*
122 + 4,1
80 + 3,4
Îòëè÷èÿ ìåæäó ïîêàçàòåëÿìè â ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ êîìïëåêñíóþ òåðàïèþ ñ
ôîñôîãëèâîì è áàçèñíóþ òåðàïèþ (* ð < 0,05); àêòèâíîñòü ôåðìåíòîâ (ÀëÀÒ, ÀñÀÒ) èçìåðÿëàñü
â íìîëü/ñåê-1ë-1 .
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.2.1, àêòèâíîñòü ÀëÀÒ, èñõîäíî ïîâûøåííàÿ
ïî÷òè íà ïîðÿäîê ïî ñðàâíåíèþ ñ íîðìîé, ñíèçèëàñü ïîñëå ëå÷åíèÿ â îáåèõ
ãðóïïàõ áîëüíûõ. Îäíàêî ñíèæåíèå áûëî âûðàæåíî â áîëüøåé ñòåïåíè ó
áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ. Àêòèâíîñòü ÀñÀÒ ñíèçèëàñü â îáåèõ
ãðóïïàõ îäèíàêîâî. Íàèáîëåå âûðàæåííûì îêàçàëîñü äåéñòâèå
ôîñôîãëèâà íà óðîâåíü áèëèðóáèíà. Äëÿ áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû
èñõîäíûé åãî óðîâåíü, ïðåâûøàâøèé â íåñêîëüêî ðàç íîðìàëüíûå
âåëè÷èíû, ñíèçèâøèñü â 1,5 ðàçà, äàëåå íå ìåíÿëñÿ, à ó áîëüíûõ,
ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, ïðîäîëæàë ñíèæàòüñÿ; ê êîíöó ëå÷åíèÿ óðîâåíü
áèëèðóáèíà ó ýòèõ áîëüíûõ áûë âäâîå íèæå, ÷åì ïðè èñïîëüçîâàíèè
áàçèñíîé òåðàïèè [38].
290
Ïîäîáíûé ýôôåêò íàáëþäàëè òàêæå ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ìèêñòãåïàòèòàìè Âà (Â+Ñ) è Âà À. Ïðåïàðàò îáëàäàë õîðîøåé ïåðåíîñèìîñòüþ,
ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ íå íàáëþäàëîñü [38-40, 44].
 öåëîì, ðåçóëüòàòû äàííîãî èññëåäîâàíèÿ ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî
âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ áîëüíûõ Âà Â, ÂÃ(Â+Ñ) è Âà À
ñïîñîáñòâóåò áîëåå áûñòðîé íîðìàëèçàöèè áèîõèìè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ
êðîâè è óëó÷øåíèþ êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ [38 - 40, 42].
 äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèÿõ ôîñôîãëèâ (ïî 2 êàïñ. 3 ðàçà â
äåíü) äàâàëè áîëüíûì ñ êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì (32 ïàöèåíòà)
â òå÷åíèå 5 äíåé ïåðåä ïëàíîâîé îïåðàöèåé è 5 äíåé â
ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå. Ãðóïïà êîíòðîëÿ (10 ïàöèåíòîâ)
ïîëó÷àëà ñòàöèîíàðíîå ëå÷åíèå.  ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó
áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ïðåïàðàò, íîðìàëèçàöèÿ áèîõèìè÷åñêèõ
ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè ïîñëå îïåðàöèè
íàñòóïàëà áûñòðåå, ÷åì ïðè îáû÷íîé (áåç ôîñôîãëèâà) òåðàïèè.
Òàê, âîçðîñøàÿ ïîñëå îïåðàöèè êîíöåíòðàöèÿ áèëèðóáèíà
ñíèæàëàñü ïîä âëèÿíèåì ôîñôîãëèâà äî èñõîäíîãî óðîâíÿ. Ó
áîëüíûõ îáåèõ ãðóïï íàáëþäàëè ñóùåñòâåííîå âîçðàñòàíèå
àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â êðîâè ñðàçó ïîñëå îïåðàöèè. Ýòà
ãèïåðôåðìåíòåìèÿ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå ñîõðàíÿëîñü è â
ïîñëåäóþùèå äíè.  òî æå âðåìÿ ó áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ
ôîñôîãëèâ, àêòèâíîñòü àìèíîòðàíñôåðàç ñíèçèëàñü â 1,5 - 2 ðàçà
(ð<0,05) ÷åðåç 5-6 äíåé ïîñëå îïåðàöèè [45]. Âñå ýòè äàííûå
ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ îêàçûâàåò çàìåòíîå
ãåïàòîïðîòåêòèâíîå äåéñòâèå â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó
áîëüíûõ ñ êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì [44-46].
 öåëîì, èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî ïðèåì êàïñóëüíîé ôîðìû
ôîñôîãëèâà áîëüíûìè õðîíè÷åñêèì êàëüêóëåçíûì õîëåöèñòèòîì
ïðè îïåðàöèîííîì ñòàöèîíàðíîì ëå÷åíèè ìîæåò ñëóæèòü
äîïîëíèòåëüíîé ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèåé, ñïîñîáñòâóþùåé
âîññòàíîâëåíèþ ôóíêöèè ïå÷åíè ïîñëå îïåðàöèè.
 êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Â.Ò.Èâàøêèíà (1998 ã.) ôîñôîãëèâ
â êàïñóëàõ ïîëó÷àëè 17 áîëüíûõ (èç íèõ 9 - ñ æèðîâûì ãåïàòîçîì,
4 - ñ Õà  è 4 - ñ öèððîçîì ïå÷åíè). Ôîñôîãëèâ îêàçûâàë
ïîëîæèòåëüíîå âëèÿíèå íà êëèíè÷åñêèå ñèìïòîìû, òàêèå, êàê
àñòåíè÷åñêèé è äèñïåïñè÷åñêèé ñèíäðîìû, à òàêæå "ñèíäðîì
ïðàâîãî ïîäðåáåðüÿ".  äèíàìèêå íàáëþäåíèÿ (÷åðåç 1,5 ìåñ.)
îòìå÷åíî ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîå (ð<0,05) ñíèæåíèå ñðåäíåé
êîíöåíòðàöèè õîëåñòåðèíà è òðèãëèöåðèäîâ ó áîëüíûõ ñ ãåïàòîçîì
- ñ 571±112,1 ìã% äî 432,5±112,1 ìã% (íîðìà 200-400 ìã%) [44].
 êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ, ïðîôåññîðà Ã.È.Ñòîðîæàêîâà (1998ã.)
êàïñóëüíóþ ôîðìó ôîñôîãëèâà ïîëó÷àëè 7 áîëüíûõ ñ àëêîãîëüíûì
ïîðàæåíèåì ïå÷åíè è 6 ñ äèàáåòè÷åñêèì ãåïàòîçîì è ãèïåðëèïèäåìèåé.
291
Ëå÷åíèå ïðåïàðàòîì áûëî íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ó ïàöèåíòîâ ñ
õðîíè÷åñêèìè àëêîãîëüíûìè ïîðàæåíèÿìè ïå÷åíè è ãåïàòîçîì, ÷òî
âûðàæàëîñü â ðåãðåññèè ñèìïòîìîâ ïîëèíåéðîïàòèè, íîðìàëèçàöèè
ëèïèäíîãî ñïåêòðà, óìåíüøåíèè äîçû ââîäèìîãî èíñóëèíà. Ýòè
ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ ýôôåêòèâíûì
ãåïàòîïðîòåêòîðîì äëÿ ïàòîãåíåòè÷åñêîãî ëå÷åíèÿ áîëüíûõ ñ
õðîíè÷åñêèìè äèôôóçíûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè [44].
Òàêèì îáðàçîì, â ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ôîñôîãëèâ
êàïñóëüíîé ôîðìû ïðîÿâèë ñåáÿ êàê ýôôåêòèâíîå ëåêàðñòâåííîå
ñðåäñòâî äëÿ ëå÷åíèÿ íåêîòîðûõ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè (îñòðûé
âèðóñíûé ãåïàòèò, æèðîâîé ãåïàòîç, êàëüêóëåçíûé õîëåöèñòèò è
äð.) çà ñ÷åò ïîñòåïåííîãî íàêîïëåíèÿ ÑÔÕ â ìåìáðàíàõ
ãåïàòîöèòîâ, ñîïðîâîæäàþùåãîñÿ èõ ðåïàðàöèåé è íîðìàëèçàöèåé
ôóíêöèîíèðîâàíèÿ êëåòîê, ïàðàëëåëüíî ñ ïðîÿâëåíèåì
òåðàïåâòè÷åñêîãî àíòèâèðóñíîãî ýôôåêòà ÃÊ [1, 14-16].
10.3. Êëèíè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü èíúåêöèîííîé ôîðìû
ôîñôîãëèâà.
Èññëåäîâàíèÿ êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè èíúåêöèîííîé
ôîðìû ôîñôîãëèâà áûëè íà÷àòû â 2000 ãîäó è íà ïåðâîì ýòàïå
ïðîâåäåíû ó 83 áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè è ñ ðàçëè÷íîé
ñòåïåíüþ âûðàæåííîñòè ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè. Ãðóïïó
êîíòðîëÿ, ñîïîñòàâèìóþ ïî ôîðìå è òÿæåñòè çàáîëåâàíèÿ,
ñîñòàâèëè 80 ïàöèåíòîâ (òàáë.10.3.1).
Òàáëèöà 10.3.1.
Ãðóïïû áîëüíûõ, ó÷àñòâóþùèõ â èñïûòàíèè èíúåêöèîííîé
ôîðìû ôîñôîãëèâà (ýòàï 1).
Çàáîëåâàíèÿ
Êîëè÷åñòâî áîëüíûõ
Áîëüíûå, ïîëó÷àâøèå ôîñôîãëèâ, âñåãî
â òîì ÷èñëå:
ÂÃ Â
83
19
ÕÃ Ñ
22
ÕÃ Â+Ñ
Öèððîç
10
ïå÷åíè
àëèìåíòàðíîé
è
âèðóñíîé
15
ýòèîëîãèè
Ãåïàòèò àëèìåíòàðíîé ýòèîëîãèè
11
Íåàëêîãîëüíûé ñòåàòîãåïàòèò
2
Äðóãèå ôóíêöèîíàëüíûå íàðóøåíèÿ
4
Ãðóïïà êîíòðîëÿ
80
Äëÿ ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà ñîäåðæèìîå ôëàêîíà (2,5 ã ñóõîãî
ëèîôèëèçèðîâàííîãî ïîðîøêà) ïåðåä óïîòðåáëåíèåì ðàñòâîðÿëè â
10 ìë âîäû äëÿ èíúåêöèé. Ïðåïàðàò ââîäèëè âíóòðèâåííî ïî
292
ñõåìå: 2,5 ã ôîñôîãëèâà (1 ôëàêîí) 2 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 10 äíåé.
Ïîñëå îêîí÷àíèÿ êóðñà âíóòðèâåííûõ èíúåêöèé áîëüíûå
ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ â êàïñóëàõ (ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü) â
òå÷åíèå 20-30 äíåé ïðè îñòðîé ôîðìå çàáîëåâàíèÿ è 3 - 6 ìåñÿöåâ
ïðè õðîíè÷åñêîé (ñõåìà ¹1). Áîëüíûå êîíòðîëüíîé ãðóïïû
ïîëó÷àëè "áàçèñíóþ" òåðàïèþ.
Âî âñåõ ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, íàáëþäàëàñü
ïîëîæèòåëüíàÿ äèíàìèêà êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ (ðèñ. 10.3.1).
Ðèñ. 10.3.1. Ïðîäîëæèòåëüíîñòü êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ ó
áîëüíûõ îñòðûì ãåïàòèòîì  è Â+Ñ ëå÷åíûõ ôîñôîãëèâîì (1) è â
ãðóïïå êîíòðîëÿ (2)
Ñíèæåíèå âûðàæåííîñòè êëèíè÷åñêèõ ñèìïòîìîâ îòðàæàëîñü
íà îáùåì ñîñòîÿíèè ïàöèåíòîâ, ó áîëüøèíñòâà èç êîòîðûõ ïîñëå
ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì áûëî êîíñòàòèðîâàíî óëó÷øåíèå
êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ (ðèñ. 10.3.2).
Ðèñ. 10.3.2. Âëèÿíèå ôîñôîãëèâà íà îáùåå ñîñòîÿíèå áîëüíûõ ïå÷åíî÷íîé
íåäîñòàòî÷íîñòüþ (ãåïàòèò âèðóñíûé è àëèìåíòàðíûé, öèððîç âèðóñíûé
è àëèìåíòàðíûé, ñòåòîãåïàòèò) [44]
293
Îäíèì èç ïðîÿâëåíèé ïîëîæèòåëüíîé äèíàìèêè ÿâèëîñü
ñîêðàùåíèå ðàçìåðîâ ïå÷åíè. Èñõîäíî ïå÷åíü âûñòóïàëà èç ïîä
êðàÿ ðåáåðíîé äóãè íà 2-8 ñì, à ó íåêîòîðûõ áîëüíûõ (ñ
àëèìåíòàðíûì öèððîçîì) äàæå íà 11 ñì. Ïîñëå ëå÷åíèÿ ïå÷åíü ó
áîëüøèíñòâà èç íèõ ñîêðàòèëàñü íà 1-2 ñì., ó íåêîòîðûõ èç íèõ
ðàçìåðû ïå÷åíè ïîëíîñòüþ íîðìàëèçîâàëèñü.
Õîðîøèé è óäîâëåòâîðèòåëüíûé ýôôåêò îò ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà ïî
ñõåìå 1 ïðè Âà  îòìå÷àëñÿ â ñðåäíåì ó 94% áîëüíûõ, à ïðè ÕÃ Ñ - â 83%
ñëó÷àåâ, ïðè ìèêñò-ãåïàòèòå - ó 78%.
Ïîëîæèòåëüíûå ñäâèãè áûëè îòìå÷åíû è ïðè ñðàâíåíèè
áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé - ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ ïå÷åíè (òàáëèöà 10.3.2).
Òàáëèöà 10.3.2.
Èçìåíåíèå óðîâíÿ áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, ìàðêåðîâ ñîñòîÿíèÿ
ïå÷åíè â êðîâè áîëüíûõ ïðè ëå÷åíèè èíúåêöèîííîé ôîðìîé ôîñôîãëèâà
(ñõåìà ¹1) [44].
Äî ëå÷åíèÿ
ÎÃÂ (n=19)
Ïîñëå
Äî ëå÷åíèÿ
24,3±3,4
ÕÃ Ñ (n=22)
Ïîñëå
% ñíèæ
ÕÃ Â+Ñ (n=10)
Äî ëå÷åíèÿ Ïîñëå
18,3±2
24,6
105±30
39±14**
62,8*
38,2±12,4
40,7
97±18
54.6±11
43,7
Áèë.
105±28
39±5,6**
%
ñíèæ.
62,8**
% ñíèæ
ìêìîëü/ë
143±17
83±20
41,9
64,5±16
ÀëÀÒ
1425±397
211±33,2**
85,2**
556±232
96±24,9**
84.5**
943±150
236±152**
75,0**
åä/ë
2495±238
931±212
62,6
1331±345
278±73
79,1
1587±273
773±196
51,3
ÀñÀÒ
875±431
95±19,3**
89,1**
159±61
43±7,6
73,0
343±49
85±50**
75,2**
åä/ë
1475±125
533±195
63,9
631±187
88±22
86
888±206
458±113
48,4
ÃÃÒÏ
132±31
68,6±6**
53.2**
79±19
47±4**
40.5**
118±30
92±17
22,0
åä/ë
123±25
98±12
20,3
148±25
121±19
18,9
148±31
127±34
14,2
ÙÔ
347±56
243±32
30,0
177±21
125±11**
29.3**
224±27
165±17
26,3
åä/ë
337±35
247±33
26,7
292±47
254±30
13,0
424±76
299±37
29,5
Äëÿ êàæäîãî ïîêàçàòåëÿ âåðõíÿÿ ñòðîêà - áîëüíûå, ïîëó÷àâøèå ôîñôîãëèâ,
íèæíÿÿ ñòðîêà - êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà
** ð< 0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé.
Ñîêðàùåíèÿ: Áèë - îáùèé áèëèðóáèí, ÀëÀÒ - àëàíèí àìèíîòðàíñôåðàçà, ÀñÀÒ - àñïàðòàò
àìèíîòðàíñôåðàçà, ÃÃÒÏ - ãàììàãëóòàìèí-òðàíñïåïòèäàçà, ÙÔ - ùåëî÷íàÿ ôîñôàòàçà
Èç ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå 10.3.2 äàííûõ âèäíî, ÷òî ó áîëüíûõ,
ñ Âà Â, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ ïî ñõåìå 1, óðîâåíü îáùåãî
áèëèðóáèíà áûë äîñòîâåðíî íèæå ïîñëå îêîí÷àíèÿ ëå÷åíèÿ ïî
ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé - 39±5,6 è 83±20 ìêìîëü/ë
ñîîòâåòñòâåííî. Âî âñåõ ãðóïïàõ áîëüíûõ, ïîñëå îêîí÷àíèÿ êóðñà
ëå÷åíèÿ çàðåãèñòðèðîâàíû áîëåå íèçêèå çíà÷åíèÿ ÀëÀÒ ïî
ñðàâíåíèþ ñ áîëüíûìè êîíòðîëüíûõ ãðóïï (òàê, â ñëó÷àå ÕÃ Ñ - 96±
24,9 è 278±73 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî). Ïðè ëå÷åíèè ãåïàòèòà  òàêæå
äîñòîâåðíî íèæå áûëè ïîêàçàòåëè ÀñÀÒ (95±19,3 è 533±195 åä./ë
ñîîòâåòñòâåííî) è ÃÃÒÏ (68,6±6 è 98±12 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî), à ïðè
ãåïàòèòå Ñ - óðîâíè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû (125±11 è 254±30 åä./ë
ñîîòâåòñòâåííî) è ÃÃÒÏ (47±4 è 121±19 åä./ë ñîîòâåòñòâåííî).
294
Áîëåå òîãî, ó áîëüíûõ ñ Õà C, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ,
ñóùåñòâåííî ñíèæàëèñü àêòèâíîñòü ÃÃÒÏ (â ñðåäíåì íà 40,5%), à
òàêæå àêòèâíîñòü ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû (íà 29,3%) ïî ñðàâíåíèþ ñ
18,9 % è 13% ñîîòâåòñòâåííî ó àíàëîãè÷íûõ áîëüíûõ â
êîíòðîëüíîé ãðóïïå. Äëÿ áîëüíûõ ñ ìèêñò-ãåïàòèòîì Â+Ñ ëå÷åíèå
ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèëî ê áîëåå ñóùåñòâåííîìó ñíèæåíèþ
êîíöåíòðàöèè áèëèðóáèíà è àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ. Ôîñôîãëèâ
ñíèæàë àêòèâíîñòü ÀëÀÒ è ÀñÀÒ íà 82-83% ïî ñðàâíåíèþ ñ 47 è
54% â êîíòðîëüíîé ãðóïïå, à òàêæå ñíèæàë áîëåå, ÷åì â ïîëòîðà
ðàçà àêòèâíîñòü ÃÃÒÏ è ÙÔ, óðîâåíü êîòîðûõ ïðàêòè÷åñêè íå
ìåíÿëñÿ ïðè áàçèñíîé òåðàïèè.
Òàêèì îáðàçîì, òåðàïèÿ èíúåêöèîííîé ôîðìîé ôîñôîãëèâà â
òå÷åíèè 10 äíåé ñ ïîñëåäóþùèì ïðèåìîì êàïñóë â òå÷åíèå 30
äíåé áîëüíûõ îñòðîé è õðîíè÷åñêîé ôîðìîé âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ
Â, Ñ, Â+Ñ, íîðìàëèçóåò áèîõèìè÷åñêèå ïàðàìåòðû ñûâîðîòêè
êðîâè è ïðèâîäèò ê óëó÷øåíèþ îáùåãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ.
Ïîëîæèòåëüíàÿ äèíàìèêà áûëà çàðåãèñòðèðîâàíà ó 77% áîëüíûõ
ãåïàòèòîì Â, 74% áîëüíûõ ñ ÕÃÑ è ó 78% - ñ ìèêñò-ãåïàòèòàìè Â+Ñ.
 öåëîì, áîëüíûõ, "îòâåòèâøèõ" íà ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì áûëî
áîëüøå, ÷åì ïðè òåðàïèè èíòåðôåðîíîì [5 - 10].
Íè ó îäíîãî èç ïàöèåíòîâ ïðåïàðàò íå îòìåíÿëè èç-çà
íåïåðåíîñèìîñòè, è òîëüêî ó îäíîãî áîëüíîãî íå áûëî ïîëó÷åíî
ëå÷åáíîãî ýôôåêòà.
 ýòèõ èññëåäîâàíèÿõ òàêæå ïðèíèìàëè ó÷àñòèå 7 ïàöèåíòîâ
ñ öèððîçîì ïå÷åíè âèðóñíîé ýòèîëîãèè (â îñíîâíîì, ñ âèðóñîì
ãåïàòèòà Ñ) â òÿæåëîé ôîðìå. Ó áîëüíûõ áûëè îòìå÷åíû
èñõîäíî âûñîêèå çíà÷åíèÿ àêòèâíîñòè ÃÃÒÏ (â ñðåäíåì 832
åä/ë). Ïîñëå âíóòðèâåííîãî êóðñà ôîñôîãëèâà óðîâåíü
ôåðìåíòà â êðîâè ñíèæàëñÿ â ñðåäíåì â äâà ðàçà. Â òî æå âðåìÿ
àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ ó ýòèõ áîëüíûõ, ìàëî èçìåíÿþùèåñÿ
âî âðåìÿ êóðñà èíúåêöèé, ñóùåñòâåííî ñíèçèëèñü ïîñëå
ïîñëåäóþùåãî ïðèåìà êàïñóë ôîñôîãëèâ. Ïðè àëèìåíòàðíîì
öèððîçå ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ýòèõ ôåðìåíòîâ ïðîÿâèëîñü óæå
ïîñëå êóðñà âíóòðèâåííîãî ëå÷åíèÿ, òàê æå êàê àêòèâíîñòè
ÃÃÒÏ è ÙÔ [2]. Òàêèì îáðàçîì, ôîñôîãëèâ îêàçûâàåò
òåðàïåâòè÷åñêîå äåéñòâèå íà áîëüíûõ öèððîçîì, íî, ïîâèäèìîìó, ó òàêèõ òÿæåëûõ ïàöèåíòîâ äëÿ ïðîÿâëåíèÿ áîëüøåé
ýôôåêòèâíîñòè ïðåïàðàòà íåîáõîäèì áîëåå äëèòåëüíûé êóðñ
ëå÷åíèÿ.
Ó÷èòûâàÿ ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ÃÊ [15, 22], îäíîé èç
çàäà÷ ïðîâîäèìîãî êëèíè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ áûëî èçó÷åíèå
âèðåìèè è óðîâíåé ÄÍÊ èëè ÐÍÊ âèðóñîâ ãåïàòèòîâ Â è Ñ,
ðåãèñòðèðóåìûõ ñ ïîìîùüþ ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè (ÏÖÐ)
(òàáëèöà 10.3.3).
295
Òàáëèöà 10.3.3
Ïîêàçàòåëè âèðóñíîé íàãðóçêè ïðè ëå÷åíèè ôîñôîãëèâîì
Ïîêàçàòåëü
Âèðåìèÿ
HCV
(Lg 10/ìë)
Âèðåìèÿ
HCV
(Lg 10/ìë)
ÐÍÊ HCV
(â Lg òèòðîâ)
ÄÍÊ HÂV
(â Lg òèòðîâ)
Çàáîëå âàíèå
Ê-â
âî
áîëüíûõ
Äî ëå÷åíèÿ
Ïîñëå â/â
êóðñà
(10 äíåé)
Ïîñëå ïåð îðàëüíîãî
êóðñà
(20 äíåé)
Öèððîç
ïå÷åíè
4
5,6 ± 0,2
4,6 ± 0,1*
3,1 ± 0,4**
ÕÃ Ñ
5
5,1 ± 0,2*
3,4 ± 0,6**
ÕÃ Ñ
14
2,5 ± 0,12
1,7 ± 0,15*
1,6 ± 0,13*
ÕÃ Â
18
2,5 ± 0,13
1.8 ± 0,12*
1,2 ± 0,11**
6,2 ± 0,4
* - p<0.05, ** - p<0.01 (ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè)
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.3.3, ó áîëüíûõ ñ öèððîçîì ïå÷åíè è Õà Ñ
â õîäå ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì íàáëþäàëîñü ïîñòåïåííîå óìåíüøåíèå
âèðåìèè HCV. Òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèëà ê ñíèæåíèþ ÐÍÊ
HCV. Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè ïîëó÷åíû ó áîëüíûõ ñ
ãåïàòèòîì  äëÿ ÄÍÊ HÂV. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû
ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïðèâîäèò ê
ïîäàâëåíèþ ðåïëèêàöèîííîé àêòèâíîñòè HÑV è HÂV, ïîâèäèìîìó, çà ñ÷åò âõîäÿùåé â ñîñòàâ ïðåïàðàòà ÃÊ [1, 28].
 ñâÿçè ñ äàííûìè îá èììóíîìîäóëèðóþùåì è èíòåðôåðîíñòèìóëèðóþùåì äåéñòâèè ÃÊ [24, 26] ïðåäñòàâëÿëîñü
öåëåñîîáðàçíûì èññëåäîâàòü ïîêàçàòåëè èììóíîëîãè÷åñêîãî è
èíòåðôåðîíîâîãî ñòàòóñà ó áîëüíûõ, ïðîøåäøèõ êóðñ ëå÷åíèÿ
ôîñôîãëèâîì. Ýòè èññëåäîâàíèÿ áûëè ïðîâåäåíû ñîâìåñòíî ñ
Èíñòèòóòîì èììóíîëîãèè ÌÇ ÐÔ íà 7 áîëüíûõ ñ ÕÂà Ñ. Ó÷èòûâàÿ,
÷òî èñõîäíûé èììóíîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ ó áîëüíûõ ñèëüíî
ðàçëè÷àëñÿ, ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû íîñÿò ïðåäâàðèòåëüíûé
õàðàêòåð.  êðîâè áîëüíûõ îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî Òëèìôîöèòîâ (CD3) è êîëè÷åñòâî êëåòîê åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ
(NK). Óðîâåíü ÈÔÍ-α è ÈÔÍ-γ îïðåäåëÿëè â ñóïåðíàòàíòå
íåñòèìóëèðîâàííîé è ñòèìóëèðîâàííîé êóëüòóðû ëèìôîöèòîâ,
ïîëó÷åííûõ èç êðîâè áîëüíûõ. Ïðè ýòîì â õîäå îïðåäåëåíèÿ ÈÔÍα èñïîëüçîâàëè ñòèìóëÿöèþ âèðóñîì ãåïàòèòà Ñ, à äëÿ ÈÔÍ-γ
êëåòêè ñòèìóëèðîâàëè äîáàâëåíèåì ôèòîãåìàããëþòèíèíà. Êàê
ïîêàçàëè èññëåäîâàíèÿ, òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì âûçûâàëà èçìåíåíèÿ
èììóííîãî è èíòåðôåðîíîâîãî ñòàòóñà áîëüíûõ. Ó ýòèõ ïàöèåíòîâ
îòìå÷åíî 2-3 êðàòíîå óâåëè÷åíèå îáùåãî êîëè÷åñòâà Ò-ëèìôîöèòîâ
(CD3) è NK, ÷òî ÿâëÿåòñÿ ïðèçíàêîì óëó÷øåíèÿ ñèñòåìû
296
èììóíèòåòà, ïî âñåé âåðîÿòíîñòè, â ðåçóëüòàòå ïðîÿâëåíèÿ
èììóíîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ ÃÊ [1, 25]. Â ñòèìóëèðîâàííîé
êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ, ïîëó÷åííûõ îò ÷åòûðåõ áîëüíûõ
õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì, íàáëþäàëè óâåëè÷åíèå ñèíòåçà ÈÔÍ-α. Â
íå ñòèìóëèðîâàííîé êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ îòìå÷åíî óâåëè÷åíèå
êîëè÷åñòâà ÈÔÍ-γ. Ñòèìóëÿöèÿ ñ ïîìîùüþ ÃÊ ñèíòåçà ÈÔÍ-γ
áûëà ïîêàçàíà íà ìûøàõ áîëåå 20 ëåò íàçàä [26], î âëèÿíèè åå íà
ñèíòåç ÈÔÍ-α ñîîáùåíèé â ëèòåðàòóðå íåò. Ôàêò åãî àêòèâàöèè
ìîã áû ïîñëóæèòü ñâÿçûâàþùèì çâåíîì ìåæäó èíòåðôåðîíîòåðàïèåé ãåïàòèòîâ (îáû÷íî èñïîëüçóþùåé ÈÔÍ-α) è
èñïîëüçîâàíèåì ÃÊ â ñîñòàâå íåîìèíîôàãåíà Ñ [16] è ôîñôîãëèâà.
Îäíàêî äëÿ îêîí÷àòåëüíûõ âûâîäîâ íåîáõîäèìî ïðîâåäåíèå òàêèõ
èññëåäîâàíèé íà áîëüøåì ÷èñëå áîëüíûõ.
Òàêèì îáðàçîì, â ïðîâåäåííûõ íà ïåðâîì ýòàïå êëèíè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ôîñôîãëèâ óëó÷øàåò
áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè êðîâè è êëèíè÷åñêîå ñîñòîÿíèå
áîëüíûõ,
à
òàêæå
îáëàäàåò
ïðîòèâîâèðóñíûì
è
èììóíîñòèìóëèðóþùèì ñâîéñòâàìè. Âíóòðèâåííàÿ ôîðìà
ïðåïàðàòà õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ áîëüíûìè, íå äàåò ïîáî÷íûõ
ðåàêöèé.
Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ òàêæå
ïîêàçàëè, ÷òî ýôôåêòèâíîñòü ëå÷åíèÿ ïðè ïàðåíòåðàëüíîì è
ïåðîðàëüíîì ïðèåìå ïðåïàðàòà çàìåòíî ðàçëè÷àëèñü (òàáë. 10.3.4).
Òàáëèöà 10.3.4.
Äèíàìèêà ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè ó ïàöèåíòîâ ïîñëå
ïàðåíòåðàëüíîãî è ïåðîðàëüíîãî ïðèåìà ôîñôîãëèâà [49].
ÀëÀò (åä/ë)
110,1 ± 27,4
Ïîñëå â/â
ââåäåíèÿ
(14 äíåé)
30,1 ± 5,6*
Óðîâåíü âèðóñíîé
íàãðóçêè ( lg
10/ìë)
6,2 ± 1,3
3,4 ± 1,1*
Ïîêàçàòåëü
Äî ëå÷åíèÿ
Ïîñëå 20 íåäåëü
ïðèåìà êàïñóë
42,6 ± 17,3
5,1 ± 0,2
- ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîêàçàòåëÿìè, ïîëó÷åííûìè äî ëå÷åíèÿ
- óðîâåíü âèðóñíîé íàãðóçêè - êîëè÷åñòâåííîå ñîäåðæàíèå HCV ÐÍÊ â åä. lg 10/ìë.
Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ (òàáë. 10.3.4), ïîñëå 2-õ
íåäåëüíîãî êóðñà â/â ââåäåíèÿ ôîñôîãëèâà ó âñåõ áîëüíûõ
íîðìàëèçîâàëñÿ óðîâåíü ÀëÀÒ è ñíèæàëàñü âèðóñíàÿ íàãðóçêà.
Îäíàêî ïîñëåäóþùèé ïðèåì êàïñóë ôîñôîãëèâà (20 íåäåëü) íå
ñïîñîáñòâîâàë äàëüíåéøåìó ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è
ñîäåðæàíèÿ âèðóñà â êðîâè [47]. Î÷åâèäíî, äëÿ äàëüíåéøåãî
297
ïîâûøåíèÿ ýôôåêòèâíîñòè ëå÷åíèÿ íåîáõîäèìî óâåëè÷èòü
äëèòåëüíîñòü êóðñà òåðàïèè êàê èíúåêöèîííîé ôîðìîé (íå ìåíåå
2-3 ìåñÿöåâ), òàê è ïîñëåäóþùåé êàïñóëüíîé ôîðìîé (íå ìåíåå 612 ìåñÿöåâ), ÷òîáû ïîëíîñòüþ íîðìàëèçîâàòü êàê áèîõèìè÷åñêèå,
òàê è ñåðîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè êðîâè.
10.4. Ïðèìåíåíèå êîìáèíèðîâàííîãî (êàïñóëüíîãî è â/â) êóðñà
ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì.
 êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Ã.È.Ñòîðîæàêîâà áûëè
ïðîâåäåíû
ðàíäîìèçèðîâàííûå
èññëåäîâàíèÿ
ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè ôîñôîãëèâîì ïî ñõåìå áîëåå
äëèòåëüíîãî ïðèåìà (ñõåìà 2), â ñðàâíåíèè ñî ñòàíäàðòíîé
òåðàïèåé âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ (èíòåðôåðîí, ðèáàâèðèí).
Áîëüíûå ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ ïàðåíòåðàëüíî ïî 2,5 ã (1
ôëàêîí) 2 ðàçà â íåäåëþ è ïàðàëëåëüíî ôîñôîãëèâ
ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 48 íåäåëü.
 èññëåäîâàíèå áûëî âêëþ÷åíî 79 ïàöèåíòîâ â âîçðàñòå îò
18 äî 57 ëåò. Îñíîâíûìè êðèòåðèÿìè îòáîðà ïàöèåíòîâ áûëè:
íàëè÷èå Õà Ñ, ñ ïîçèòèâíûì ðåçóëüòàòîì íà HCV ÐÍÊ ïî
äàííûì ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè (ÏÖÐ), ïîâûøåííàÿ
àêòèâíîñòü ÀëÀÒ è ÀñÀÒ â òå÷åíèå, êàê ìèíèìóì,
ïðåäøåñòâóþùèõ 6 ìåñÿöåâ, ïîëîæèòåëüíûå äàííûå
èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) íà íàëè÷èå ñóììàðíûõ
àíòèòåë ê HCV.
Ñ öåëüþ âåðèôèêàöèè äèàãíîçà õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ,
îöåíêè íàëè÷èÿ êðèòåðèåâ âêëþ÷åíèÿ â èññëåäîâàíèå è
îïðåäåëåíèÿ ñòåïåíè àêòèâíîñòè ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà
âñå áîëüíûå (79 ÷åëîâåê) áûëè îáñëåäîâàíû ïî åäèíîé
ñõåìå. Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ïàöèåíòîâ ïðèâåäåíà â
òàáëèöå 10.4.1.
Ïîñëå ïðîâåäåííîãî êëèíè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ âñå
ïàöèåíòû áûëè ðàçäåëåíû íà 4 ãðóïïû ñîîòâåòñòâåííî 4
ñõåìàì òåðàïèè (òàáë. 10.4.2). Â I ãðóïïó âîøëè 20 áîëüíûõ,
ñðåäíèé âîçðàñò 35,4±12,1 ëåò, 14 ìóæ÷èí è 6 æåíùèí,
êîòîðûå ïîëó÷àëè ìîíîòåðàïèþ ôîñôîãëèâîì. II ãðóïïó
ñîñòàâèëè 19 ïàöèåíòîâ, èç íèõ 13 ìóæ÷èí è 6 æåíùèí,
ñðåäíèé âîçðàñò 32,3±6,9 ëåò, ïîëó÷àâøèå ëå÷åíèå
ôîñôîãëèâîì â ñî÷åòàíèè ñ ÈÔÍ-α.  III ãðóïïó âîøëî 20
áîëüíûõ, 16 ìóæ÷èí è 4 æåíùèíû, ñðåäíèé âîçðàñò 27,4±9,2 ëåò, êîòîðûì ïðîâîäèëàñü ìîíîòåðàïèÿ ÈÔÍ-α. IV
ãðóïïà (ñòàíäàðòíàÿ òåðàïèè), ñîñòîÿùàÿ èç 20 ïàöèåíòîâ, 15
ìóæ÷èí è 5 æåíùèí (ñðåäíèé âîçðàñò 35,3±12,0 ëåò),
298
Òàáëèöà 10.4.1.
Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà ïàöèåíòîâ ñ õðîíè÷åñêèì
ãåïàòèòîì Ñ äî íà÷àëà ëå÷åíèÿ.
Õàðàêòåðèñòèêà
Ðåçóëüòàò
Àñòåíè÷åñêèé ñèíäðîì
0,71±0,05
Ãåïàòîìåãàëèÿ
0,61±0,05
Äèñïåïòè÷åñêèé ñèíäðîì
0,58±0,05
Ñèíäðîì äèñêèíåçèè æåë÷åâûâîäÿùèõ ïóòåé
0,48±0,05
Íàëè÷èå àíòèòåë (à/ò) ê HCV (ñóììàðíûå)
ÀëÀÒ, åä/ë
îáíàðóæåíû ó âñåõ
132,5±10,6
Íàëè÷èå HCV ÐÍÊ ìåòîäîì ÏÖÐ (êà÷åñòâåííî)
îáíàðóæåíà ó âñåõ
q HCV RNA, lg/mcg
1à
5,23±0,3
10,1% (n=8)
1â
29,1% (n=23)
1à +1â
2,5% (n=2)
2à
13,9% (n=11)
1à+2à
2,5% (n=2)
3à
39,3% (n=31)
1à +3à
1,3% (n=1)
2à + 3à
1,3% (n=1)
Ãåíîòèï
Ìîðôîëîãè÷åñêèå
äàííûå ïóíêöèîííîé
áèîïñèè ïå÷åíè (â
áàëëàõ):
1) Èíäåêñ
ãèñòîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè (ÈÃÀ)
ïî èíäåêñó
Knodell [48]
8,94±3,42
ïî øêàëå METAVIR
[48]
1,58±0,63
2) Èíäåêñ ôèáðîçà (ÈÔ) ( METAVIR [48])
1,61±0,98 (n=57)
Ñòåïåíü æèðîâîé äèñòðî ôèè ãåïàòîöèòîâ
0,39±0,05 (n=47)
 ñêîáêàõ ïîêàçàíî ÷èñëî áîëüíûõ, ó êîòîðûõ îáíàðóæåí èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü;
îáùåå ÷èñëî îáñëåäîâàííûõ - 79 áîëüíûõ.
ïîëó÷àëà ëå÷åíèå ÈÔÍ-α â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì
(òàáë. 10.4.2).
Îáùàÿ ïðîäîëæèòåëüíîñòü òåðàïèè âî âñåõ ãðóïïàõ - 48 íåäåëü. Ó
âñåõ ïàöèåíòîâ ïðîâîäèëîñü íàáëþäåíèå êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ è
îöåíêà ìàðêåðîâ HCV-èíôåêöèè íà 12-îé, 24-îé è 48-îé (ïî
299
Òàáëèöà 10.4.2.
Ñõåìû òåðàïèè, èñïîëüçîâàííûå â èññëåäîâàíèè.
Ãðóïïà
Ñõåìà òåðàïèè (48 íåäåëü)
I ãðóïïà (n=20)
ôîñôîãëèâ ïî 2,5 ã â/â 2 ðàçà â íåäåëþ +
ôîñôîãëèâ ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü
II ãðóïïà (n=19)
ôîñôîãëèâ ïî 2,5 ã â/â 2 ðàçà â íåäåëþ +
ôîñôîãëèâ ïåðîðàëüíî ïî 2 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü +
èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ïîäêîæíî (ï/ê)
III ãðóïïà (n=20)
èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ï/ê
IV ãðóïïà (n=20)
èíòåðôåðîí-α ïî 3ÌÅ 3 ðàçà â íåäåëþ ï/ê +
ðèáàâèðèí ïî 100 ìã â ñóòêè ïåðîðàëüíî
Òàáëèöà 10.4.3.
Äèíàìèêà èçìåíåíèé àêòèâíîñòè ÀëÀÒ (åä/ë) [49]
Ïåðèîä ëå÷åíèÿ
Äî ëå÷åíèÿ
I ãðóïïà
(ìîíîòåðàïèÿ
ôîñôîãëèâîì)
149,3 ± 26,0
II ãðóïïà
(ôîñôîãëèâ +
ÈÔÍ -α
α)
144,7 ± 24,9
III ãðóïïà
(ÈÔÍ -α
α)
130,2 ± 17,5
IV ãðóïïà
(ÈÔÍ -α
α+
ðèáàâèðèí )
106,0 ± 15,5
×åðåç 12 íåäåëü
83,8 ± 16,8*
56,3 ± 14,1**
31,2 ± 3,3*
33,4 ± 3,58*
×åðåç 24 íåäåëè
40,5 ± 7,3*
27,2 ± 2,4*
30,4 ± 2,6*
34,7 ± 3,4*
×åðåç 48 íåäåëü
30,5 ± 1,7*
28,1 ± 1,8*
31,4 ± 4,1*
36,2 ± 6,3*
Ïðèìå÷àíèå: * ð<0,01 è ** ð<0,05- â ñðàâíåíèè ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè â êàæäîé ãðóïïå.
Òàáëèöà 10.4.4.
Äèíàìèêà èçìåíåíèé ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà Ñ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ [49]
q HCV RNA,
lg10/mcg
Äî ëå÷åíèÿ
I ãðóïïà
(ìîíîòåðàïèÿ
ôîñôîãëèâîì)
4,35 ± 0,46
II ãðóïïà
(ôîñôîãëèâ +
ÈÔÍ -α
α)
4,71 ± 0,68
III ãðóïïà
(ÈÔÍ -α
α)
6,33 ± 0,57
IV ãðóïïà
(ÈÔÍ -α
α+
ðèáàâèðèí)
5,52 ± 0,51
×åðåç 12 íåäåëü
3,89 ± 0,56
0,78 ± 0,33*
1,67 ± 0,52*
0,69 ± 0,23*
×åðåç 24 íåäåëè
1,64 ± 0,43*
0,72 ± 0,35*
1,94 ± 0,57*
0,98 ± 0,41*
×åðåç 48 íåäåëü
1,04 ± 0,25**
0,93 ± 0,35*
1,47 ± 0,35*
1,14 ± 0,61*
* ð<0,01 è ** ð<0,05- â ñðàâíåíèè ñ èñõîäíûìè çíà÷åíèÿìè â êàæäîé ãðóïïå.
çàâåðøåíèþ êóðñà òåðàïèè) íåäåëÿõ.
Äèíàìèêà èçìåíåíèÿ àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè ó
áîëüíûõ ÕÃ Ñ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ ïðèâåäåíà â òàáëèöàõ 10.4.3 è 10.4.4
ñîîòâåòñòâåííî.
300
Ïðè ñðàâíèòåëüíîì àíàëèçå ðåçóëüòàòîâ èññëåäîâàíèé áûëî
óñòàíîâëåíî, ÷òî âñå ñõåìû ëå÷åíèÿ ïðèâîäèëè ê ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè
ÀëÀÒ è âèðóñíîé íàãðóçêè â êðîâè áîëüíûõ. Ïðè÷åì, åñëè íà 12-é íåäåëå
òåðàïèè ìåæäó 1 è òðåìÿ äðóãèìè ãðóïïàìè íàáëþäàëèñü ðàçëè÷èÿ, òî íà
24-é è 48-é íåäåëÿõ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé ìåæäó ãðóïïàìè
íå âûÿâëåíî.
 öåëîì, 48-íåäåëüíàÿ òåðàïèÿ ôîñôîãëèâîì ïî áèîõèìè÷åñêèì
è âèðóñîëîãè÷åñêèì äàííûì ïðèâîäèò ê ðåçóëüòàòàì, ñðàâíèìûì ñ
ìîíîòåðàïèåé ÈÔÍ-α. Ñóììàðíûå ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ ïî
áîëüíûì âñåõ ÷åòûðåõ ãðóïï, âûðàæåííûå â âèäå ïðîöåíòà
ïàöèåíòîâ, îòâåòèâøèõ íà òåðàïèþ, ïðèâåäåíû â òàáëèöå 10.4.5.
Òàáëèöà 10.4.5.
Ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ.
Îòâåò íà òåðàïèþ
I ãðóïïà
(ìîíîòåðàïèÿ
ôîñôîãëèâîì)
(n=20)
II ãðóïïà
(ôîñôîãëèâ +
ÈÔÍ -α
α)
(n=19)
III ãðóïïà
(ÈÔÍ -α
α)
(n=20)
IV ãðóïïà
α+
(ÈÔÍ -α
ðèáàâèðèí)
(n=20)
Ïîëíûé îòâåò
40%
57,9%
40%
75%
×àñòè÷íûé îòâåò*
55%
42,1%
35%
5%
Íåò îòâåòà
5%
0%
25%
20%
* - íîðìàëüíûé óðîâåíü ÀëÀÒ, íî ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà ïî äàííûì
ÏÖÐ-àíàëèçà.
Êàê âèäíî èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, îêîí÷àòåëüíûå
ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì (I ãðóïïà) èëè ôîñôîãëèâîì â
ñî÷åòàíèè ñ èíòåðôåðîíîì (II ãðóïïà) îêàçàëèñü çíà÷èòåëüíî
ëó÷øå, ÷åì ìîíîòåðàïèÿ ïàðåíòåðàëüíîé ôîðìîé ÈÔÍ-α
Îñîáåííî ïðèìå÷àòåëüíûì áûëî òî, ÷òî äîñòèæåíèå ïîëíîé
èëè ÷àñòè÷íîé ðåìèññèè ó ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì áîëüíûõ íå
ñîïðîâîæäàëîñü ïîáî÷íûìè ýôôåêòàìè, òîãäà êàê ïðè
ìîíîòåðàïèè èíòåðôåðîíàìè ïðàêòè÷åñêè âñåãäà âîçíèêàëè
ïîáî÷íûå ýôôåêòû, ÷òî â ðÿäå ñëó÷àåâ ïðèâîäèëî ê îòìåíå
ëå÷åíèÿ [49] (òàáë. 10.4.6).
Ó 2 ïàöèåíòîâ (10%) â ãðóïïå áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ
ìîíîòåðàïèþ ôîñôîãëèâîì â íà÷àëå ëå÷åíèÿ (2 è 4 íåäåëè)
îòìå÷åíî ïîâûøåíèå àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ (ÀÄ) äî 160/105
ìì.ðò. ñò. â îäíîì ñëó÷àå è äî 155/98 ìì.ðò. ñò. - â äðóãîì. Ïîñëå
íàçíà÷åíèÿ ñîîòâåòñòâóþùèõ àíòèãèïåðòåíçèâíûõ ïðåïàðàòîâ
301
Òàáëèöà 10.4.6.
×àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ðàçëè÷íûõ âàðèàíòîâ
ýòèîïàòîãåíåòè÷åñêîé òåðàïèè õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ, âêëþ÷àþùèõ
ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà.
Ïîáî÷íûé ýôôåêò
I ãðóïïà
(ìîíîòåðà ïèÿ ôîñôî ãëèâîì)
(n=20)
II ãðóïïà
(ôîñôîãëèâ +
ÈÔÍ-α
α) (n=19)
III ãðóïïà
(ÈÔÍ-α
α)
(n=20)
IV ãðóïïà
α+
(ÈÔÍ-α
ðèáàâèðèí)
(n=20)
Ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì
-
68,4%
90%
95%
Ëåéêîïåíèÿ
-
31,6%
45%
80%
Òðîìáîöèòîïåíèÿ
-
-
10%
25%
Ñíèæåíèå ãåìîãëîáèíà
è/èëè ýðèòðîöèòîâ
-
-
-
35%
Àðòåðèàëüíàÿ ãèïåðòåíçèÿ
10%
-
-
5%
Êîæíûå ðåàêöèè
-
5,3%
10%
10%
Ïîâûøåíèå
êîíúþãèðîâàííîãî
áèëèðóáèíà
-
5,3
-
-
Ñíèæåíèå ìàññû òåëà
-
52,6%
35%
35%
Áàêòåðèàëüíûé
êîíúþêòèâèò
-
-
5%
-
×àñòè÷íàÿ àëîïåöèÿ
-
-
15%
20%
Òèðåîèäíàÿ äèñôóíêöèÿ
-
-
25%
15%
Äåïðåññèÿ
-
-
30%
45%
Îäûøêà
-
-
-
20%
Ôàðèíãèò
-
-
-
20%
Íîðìàëüíûé óðîâåíü ÀëÀÒ, íî ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà ÐÍÊ âèðóñà ãåïàòèòà ïî ÏÖÐ
àðòåðèàëüíîå äàâëåíèå ó íèõ íîðìàëèçîâàëîñü, ÷òî ïîçâîëèëî
ïðîäîëæèòü òåðàïèþ áåç êîððåêöèè åå ðåæèìà. Ïîñëå
çàâåðøåíèÿ êóðñà ëå÷åíèÿ è îòìåíû àíòèãèïåðòåíçèâíîé
òåðàïèè ÀÄ îñòàâàëîñü â ïðåäåëàõ íîðìû.
Òåðàïèÿ ÈÔÍ-α ñîïðîâîæäàëàñü òèïè÷íûìè ïîáî÷íûìè
ÿâëåíèÿìè. Íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àëñÿ ãðèïïîïîäîáíûé
ñèíäðîì (90%). Êðîìå òîãî, ó ïàöèåíòîâ II è III ãðóïï îòìå÷àëñÿ
ðÿä
ïàòîëîãè÷åñêèõ
ñîñòîÿíèé,
ñâÿçàííûõ
ñ
èíòåðôåðîíîòåðàïèåé,
òàêèõ
êàê
ëåéêîïåíèÿ,
òðîìáîöèòîïåíèÿ, ñíèæåíèå ìàññû òåëà, áàêòåðèàëüíûé
êîíúþíêòèâèò, ÷àñòè÷íàÿ àëîïåöèÿ, íàðóøåíèå ôóíêöèé
ùèòîâèäíîé æåëåçû, äåïðåññèÿ. Äîáàâëåíèå ôîñôîãëèâà ê
302
ÈÔÍ-α íå ñîïðîâîæäàëîñü óñèëåíèåì ïîáî÷íûõ ÿâëåíèé.
Ëåéêîïåíèÿ âñòðå÷àëàñü ðåæå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ III è IV ãðóïï
(31,6%) è ó áîëüíûõ ýòîé ãðóïïû êîëè÷åñòâî íåéòðîôèëîâ íå
ñíèæàëîñü äî êðèòè÷åñêèõ âåëè÷èí.
Ïàöèåíòû IV ãðóïïû, ïîëó÷àâøèå ÈÔÍ-α è ðèáàâèðèí,
íåñìîòðÿ íà âûñîêèé ïðîöåíò îòâåòà íà ëå÷åíèå (75%), ïëîõî
ïåðåíîñèëè òåðàïèþ, è ó íèõ ðàçâèâàëîñü áîëüøîå ÷èñëî ïîáî÷íûõ
ðåàêöèé, îñîáåííî ëåéêîïåíèÿ (äî 80%) è ãðèïïîïîäîáíûé
ñèíäðîì (äî 95%) ïîâëåêøèõ çà ñîáîé îòìåíó ëå÷åíèÿ [44].
 îòëè÷èå îò âûøåïðèâåäåííûõ äàííûõ, ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì
ïðàêòè÷åñêè íå ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ ïîáî÷íûõ ðåàêöèé (òàáë. 10.4.6).
 ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ó áîëüíûõ õðîíè÷åñêèì
ãåïàòèòîì Ñ âî âñåõ ãðóïïàõ áûë ïðîâåäåí àíàëèç
ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé, äàííûå ïî èçìåíåíèþ êîòîðûõ
ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 10.4.7.
Òàáëèöà 10.4.7.
Äèíàìèêà ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé ó ïàöèåíòîâ ñ õðîíè÷åñêèì
ãåïàòèòîì Ñ [44]
Ïîêàçàòåëü
Ñòåïåíü
ãèñòîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè
(ÑÃÀ)
(METAVIR)
Èíäåêñ
ãèñòîëîãè÷åñ êîé
àêòèâíîñòè
(ÈÃÀ)
(Knodell)
Ñòåïåíü
ôèáðîçà
(ÑÔ)
(METAVIR)
Ñòåïåíü
æèðîâîé
äèñòðîôèè
(CÆÄ)
I ãðóïïà
(ìîíîòåðàïèÿ
ôîñôîãëèâîì)
(n=20)
1,54±0,24
0,54±0,14
II ãðóïïà
(ôîñôîãëèâ +
ÈÔÍ -α
α)
(n=19)
1,36±0,51
III ãðóïïà
α)
(ÈÔÍ -α
(n=20)
1,56±0,11
IV ãðóïïà
α+
(ÈÔÍ -α
ðèáàâèðèí)
(n=20)
1,8±0,18
0,73±0,14
0,94±0,06
0,53±0,13
8,46±1,39
7,73±0,9
9,0±0,45
10,47±0,87
1,54±0,43
2,82±0,85
3,5±0,43
1,53±0,45
1,0±0,25
2,0±0,36
0,94±0,22
0,93±0,18
0,62±0,21
1,46±0,43
0,88±0,23
0,6±0,13
0,31±0,05
0,31±0,09
0,13±0,05
0,2±0,06
0,14±0,04
0,16±0,05
0,09±0,03
0,1±0,04
Äëÿ êàæíîãî ïîêàçàòåëÿ âåðõíÿÿ ñòðîêà - çíà÷åíèÿ äî ëå÷åíèÿ, íèæíÿÿ - ïîñëå ëå÷åíèÿ.
Êàê âèäíî èç òàáëèöû 10.4.7, íàèáîëåå âûðàæåííîå ñíèæåíèå
ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé íàáëþäàëñÿ ó áîëüíûõ I è IV ãðóïï.
Ó÷èòûâàÿ áîëüøóþ âûðàæåííîñòü ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ïðè
èíòåðôåðîíîòåðàïèè (IV ãðóïïà), ëå÷åíèå áîëüíûõ I ãðóïïû
(êîìáèíèðîâàííûé âíóòðèâåííûé è ïåðîðàëüíûé êóðñ
ôîñôîãëèâà) ìîæíî ñ÷èòàòü áîëåå óñïåøíûì.
Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ (îöåíêà ìàðêåðîâ HCV-èíôåêöèè
303
ïî çàâåðøåíèè êóðñà òåðàïèè è ìîðôîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè)
ïîçâîëèëè ñäåëàòü âûâîäû î òîì, ÷òî ôîñôîãëèâ îáëàäàåò
ñïîñîáíîñòüþ ïîäàâëÿòü ðåïëèêàöèþ âèðóñà ãåïàòèòà Ñ è
ñóùåñòâåííî ñíèæàòü àêòèâíîñòü ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà.
Òåðàïèÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ôîñôîãëèâà õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ è
íå âûçûâàåò îñëîæíåíèé [38 - 47, 50]. Ôîñôîãëèâ ìîæíî ñ÷èòàòü
ïðåïàðàòîì âûáîðà ïðè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ Õà Ñ, îñîáåííî ó
ïàöèåíòîâ ñ âûñîêèì ðèñêîì ðàçâèòèÿ ñóùåñòâåííûõ ïîáî÷íûõ
ÿâëåíèé ïðè òåðàïèè èíòåðôåðîíîì è ðèáàâèðèíîì, èëè â ãðóïïå
ïàöèåíòîâ, ãäå òðàäèöèîííîå ïðîòèâîâèðóñíîå ëå÷åíèå ãåïàòèòà Ñ
ïðîòèâîïîêàçàíî.
10.5. Ïåðñïåêòèâû ïðèìåíåíèÿ ôîñôîãëèâà.
Íàðÿäó ñ ïðîäåìîíñòðèðîâàííûì âûøå òåðàïåâòè÷åñêèì
ýôôåêòîì ôîñôîãëèâà ó áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè âèäàìè
ïå÷åíî÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè, ýòîò ïðåïàðàò áûë ýôôåêòèâåí è ïðè
êóðñîâîì ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì.
Èññëåäîâàíèÿ ïðîâåäåíû ñîâìåñòíî ñ Èíñòèòóòîì ðåâìàòîëîãèè
ÌÇ ÐÔ [51, 52].
Áîëüíûå (32 ÷åëîâåêà) ñ ðàçëè÷íûìè êëèíè÷åñêèìè ôîðìàìè
àêòèâíîãî ïñîðèàçà ïîëó÷àëè íà ôîíå áàçèñíîé òåðàïèè
(ìåòîòðåêñàò èëè ñóëüôàëàçèí, ïëþñ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûå
ïðåïàðàòû), ôîñôîãëèâ â êàïñóëüíîé ôîðìå â òå÷åíèå 3-õ ìåñÿöåâ
ïî 6 êàïñóë â ñóòêè. Îöåíèâàëèñü âàæíûå äëÿ òàêèõ áîëüíûõ
ãåìîäèíàìè÷åñèå ïîêàçàòåëè (âðåìÿ îáðàçîâàíèÿ àãðåãàòîâ
ýðèòðîöèòîâ è èõ ãèäðîäèíàìè÷åñêàÿ ïðî÷íîñòü), à òàêæå îáùåå
(ñóáúåêòèâíîå è îáúåêòèâíîå) ñîñòîÿíèå áîëüíûõ [53].
Èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â òåðàïèþ
áîëüíûõ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì ïðèâîäèò ê óëó÷øåíèþ
ðåîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ êðîâè: óâåëè÷åíèþ âðåìåíè îáðàçîâàíèÿ
àãðåãàòîâ ýðèòðîöèòîâ (îò 3,36 ± 0,16 ñåê. äî ëå÷åíèÿ äî 4,25 ± 0,42
ñåê. ïîñëå ëå÷åíèÿ) è ñíèæåíèþ â 2 ðàçà ïðî÷íîñòè ýòèõ àãðåãàòîâ.
Êðîìå ýòîãî îòìå÷åíî óëó÷øåíèå ìèêðîöèðêóëÿöèè êðîâè è
êëèíè÷åñêîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ.
Ñ ó÷åòîì òîãî, ÷òî ïàòîãåíåç ïñîðèàòè÷åñêîãî àðòðèòà ÷àñòî
ñîïðÿæåí ñ ïå÷åíî÷íîé íåäîñòîòî÷íîñòüþ, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü,
÷òî ýôôåêò ôîñôîãëèâà ïðè ëå÷åíèè äàííûõ áîëüíûõ ñâÿçàí òàêæå
ñ âîññòàíîâëåíèåì ôóíêöèé ïå÷åíè [30, 54, 55].
Ôîñôîãëèâ òàêæå ïðîÿâèë õîðîøóþ ýôôåêòèâíîñòü ïðè
êóïèðîâàíèè àëêîãîëüíîãî àáñòèíåíòíîãî ñèíäðîìà, ñâÿçàííîãî,
êàê ïîëàãàþò [37, 56], ñ ôóíêöèîíàëüíîé íåäîñòàòî÷íîñòüþ ïå÷åíè
â ðåçóëüòàòå äåéñòâèÿ ýòàíîëà íà ôîñôîëèïèäû ìåìáðàí
ãåïàòîöèòîâ. Ïî äàííûì êëèíèêè ÍÈÈ íàðêîëîãèè
(Â.Á.Àëüòøóëåð, 1998), íàçíà÷åíèå ôîñôîãëèâà ñïîñîáñòâîâàëî
304
áîëåå áûñòðîìó èñ÷åçíîâåíèþ âåãåòàòèâíûõ àáñòèíåíòíûõ
ðàññòðîéñòâ (ãèïåðãèäðîç, òðåìîð), âîññòàíîâëåíèþ àïïåòèòà,
èñ÷åçíîâåíèþ òîøíîòû è æàæäû; îáíàðóæåíà òåíäåíöèÿ ê
íåêîòîðîìó îáùåñòèìóëèðóþùåìó ýôôåêòó. Ó ïàöèåíòîâ,
ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, îòìå÷àëîñü çíà÷èìîå (ïî ñðàâíåíèþ ñ
êîíòðîëüíîé ãðóïïîé) ñíèæåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ. Ìîæíî
ïðåäïîëîæèòü, ÷òî â îñíîâå òàêîãî äåéñòâèÿ ôîñôîãëèâà ïðè
àáñòèíåíòíîì ñèíäðîìå ëåæèò âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû è
ôóíêöèé ìåìáðàí êëåòîê ïå÷åíè, êîòîðîå ïðè îáû÷íîé òåðàïèè
òàêèõ ïàöèåíòîâ íå ïðîèñõîäèò [44].
10.6. Ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â ïåäèàòðèè.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ â ëèòåðàòóðå åñòü äàííûå ïî ëå÷åíèþ
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà Ñ (Õà Ñ) ó äåòåé ïðåïàðàòàìè
ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåðôåðîíà â êîìáèíàöèè ñ ðèáàâèðèíîì [5,
11, 57], àìàíòàäèíîì [3, 58], óðñîäåçîêñèõîëåâîé êèñëîòîé [59],
ýññåíöèàëüíûìè ôîñôîëèïèäàìè [60] è äð. Ïîëîæèòåëüíûé
ðåçóëüòàò ïðè êîìáèíèðîâàííîì ëå÷åíèè äîñòèãàåòñÿ äàæå â òåõ
ñëó÷àÿõ, êîãäà ìîíîòåðàïèÿ ÈÍÔ-α îêàçûâàåòñÿ íåýôôåêòèâíîé [5,
6]. Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðåäñòàâëåííûå ðåçóëüòàòû
êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè âåñüìà ïðîòèâîðå÷èâû [6, 12].
 êëèíèêå àêàäåìèêà ÐÀÌÍ Â.Ô.Ó÷àéêèíà áûëè ïðîâåäåíû
êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ôîñôîãëèâà êàïñóëüíîé ôîðìû â
êîìáèíàöèè ñ îòå÷åñòâåííûì ðåêîìáèíàíòíûì ÈÍÔ-α â âèäå
êîììåð÷åñêîãî ïðåïàðàòà âèôåðîí ó äåòåé ñ õðîíè÷åñêèìè
ãåïàòèòàìè Ñ è Â [44].
Ïîä íàáëþäåíèåì íàõîäèëîñü 177 áîëüíûõ äåòåé â âîçðàñòå îò
6 ìåñ. äî 14 ëåò, áîëüíûõ õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì,
ïîäòâåðæäåííûì ó áîëüøèíñòâà äàííûìè ïóíêöèîííîé áèîïñèè
ïå÷åíè.  ðåçóëüòàòå ñåðîëîãè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ áîëüíûõ ñ
ïîìîùüþ òåñò-ñèñòåì íà âèðóñû ãåïàòèòîâ Â, Ä è Ñ íà îñíîâå ÈÔÀ
è ÏÖÐ ó 70 äåòåé áûë óñòàíîâëåí ÕÃ Â è ó 107 - ÕÃ Ñ. Âñå äåòè
íàõîäèëèñü â ñòàäèè îáîñòðåíèÿ áîëåçíè.
 ïðîöåññå êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîãî îáñëåäîâàíèÿ ó áîëüøèíñòâà
áîëüíûõ îòìå÷àëèñü ðàçëè÷íîé ñòåïåíè âûðàæåííîñòè ñèìïòîìû
èíòîêñèêàöèè è àñòåíî-âåãåòàòèâíûå ïðîÿâëåíèÿ; ó âñåõ áûëà
ãåïàòîñïëåíîìåãàëèÿ è öèòîëèòè÷åñêèé ñèíäðîì â âèäå 5-10-êðàòíîãî
ïîâûøåíèÿ àêòèâíîñòè àìèíîòðàíñôåðàç (ÀëÀÒ è ÀñÀÒ), îïðåäåëÿåìûõ
åæåìåñÿ÷íî.
Ïîêàçàíèåì ê íàçíà÷åíèþ êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè áûëî âûÿâëåíèå
õðîíè÷åñêîãî ãåïàòèòà  èëè Ñ, ñîïðîâîæäàþùèõñÿ äëèòåëüíûì è
ñòàáèëüíûì (áîëåå ãîäà) ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è ÀñÀÒ ñ
îáíàðóæåíèåì ìàðêåðîâ àêòèâíîé ðåïëèêàöèè âèðóñîâ ãåïàòèòà Â (ÄÍÊ
HBV, HBeAg) è ãåïàòèòà Ñ (ÐÍÊ HCV). Êðèòåðèåì ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè
305
ñëóæèëè:
(1) Áèîõèìè÷åñêèé ïîêàçàòåëü - àêòèâíîñòü ÀëÀÒ. Èññëåäîâàíèÿ
âûïîëíÿëèñü åæåìåñÿ÷íî â õîäå ëå÷åíèÿ è â òå÷åíèå 6 ìåñ. ïîñëå
îêîí÷àíèÿ òåðàïèè; çàòåì êàæäûå 6 ìåñ. íà ïðîòÿæåíèè 36 ìåñ.
(2) Âèðóñîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè: - êà÷åñòâåííûé è êîëè÷åñòâåííûé
àíàëèçû ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV.
(3) Ãèñòîëîãè÷åñêèå ïîêàçàòåëè - îöåíêà èíäåêñà ãèñòîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòè. Ïî ðåçóëüòàòàì ýòèõ èññëåäîâàíèé îïðåäåëÿëè äèíàìèêó
áîëåçíè: ðåìèññèÿ, íåïîëíàÿ ðåìèññèÿ, îòñóòñòâèå ðåìèññèè.
Ýôôåêòèâíîñòü ïðîâîäèìîé òåðàïèè îöåíèâàëè ñòðîãî ïî ïðîãðàììå
"EUROHEP" [61].
 ïðîöåññå êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé ðàçëè÷àëè:
(1) Ïåðâè÷íóþ ðåìèññèþ - 2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèÿ
óðîâíÿ ÀëÀÒ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ - áëèæå ê êîíöó, ñ èíòåðâàëîì íå ìåíåå
2 íåäåëü; èñ÷åçíîâåíèå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV ê êîíöó òåðàïèè;
(2) Ñòàáèëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV
èëè ÄÍÊ HBV â òå÷åíèå 6 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè;
(3) Äëèòåëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ HCV
èëè ÄÍÊ HBV â òå÷åíèå 24 ìåñ ïîñëå îêîí÷àíèÿ òåðàïèè
(4) Ïðåêðàùåíèå ðåìèññèè â õîäå ëå÷åíèÿ ("óñêîëüçàíèå") - â õîäå 6
ìåñÿ÷íîé òåðàïèè ïîñëå íîðìàëèçàöèè ÀëÀÒ, åå óðîâåíü âíîâü ïîâûøàëñÿ
(2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ àíàëèçà ñ èíòåðâàëîì 2 íåäåëè), ïîâòîðíîå ïîÿâëåíèå
ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV â ëþáîé òî÷êå âðåìåíè ïîñëå åå èñ÷åçíîâåíèÿ
(5) Îòñóòñòâèå ðåìèññèè - ëþáàÿ äðóãàÿ äèíàìèêà àêòèâíîñòè ÀëÀÒ è
íàëè÷èå ÐÍÊ HCV èëè ÄÍÊ HBV ê îêîí÷àíèþ òåðàïèè.
37 áîëüíûõ (29 áîëüíûõ ñ ÕÃÑ è 8 - ñ ÕÃÂ) ïîëó÷àëè ôîñôîãëèâ â
êàïñóëàõ â êîìáèíàöèè ñ ðåêîìáèíàíòíûì ÈÔÍ-α-2b - âèôåðîíîì â
ñâå÷àõ, è 104 áîëüíûõ (70 áîëüíûõ ñ ÕÃ Ñ è 34 - Õà Â) ïîëó÷àëè
ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì.
Ôîñôîãëèâ íàçíà÷àëè äåòÿì äî 3 ëåò ïî 0,5 êàïñóëû, îò 3 äî 7 ëåò ïî 1
êàïñóëå, îò 7 ëåò - ïî 1,5 êàïñóë 3 ðàçà â äåíü. Âèôåðîí áîëüíûå ïîëó÷àëè
èç ðàñ÷åòà 3 ìëí ÌÅ/ì2 ïëîùàäè ïîâåðõíîñòè òåëà 3 ðàçà â íåäåëþ. Êóðñ
ëå÷åíèÿ ïðîäîëæàëñÿ 6 èëè 9 ìåñ.
Ãðóïïó êîíòðîëÿ ïîäáèðàëè ïî ñëó÷àéíîìó ïðèçíàêó (ñëåïûì
ìåòîäîì); îíà âêëþ÷àëà 39 äåòåé (ó 27 - Õà Â, ó 12 -Õà Ñ), êîòîðûå ïîëó÷àëè
ñèìïòîìàòè÷åñêóþ òåðàïèþ (äèåòà, ðåæèì, æåë÷åãîííûå ïðåïàðàòû,
ïîëèâèòàìèíû).
Ïîñëå îêîí÷àíèÿ 6-ìåñÿ÷íîãî êóðñà ëå÷åíèÿ âèôåðîíîì è
êàïñóëàìè ôîñôîãëèâà ñîñòîÿíèå ïîëíîé ðåìèññèè ïðè ÕÃ Ñ
îòìå÷àëîñü â 34% ñëó÷àåâ, íåïîëíîé ðåìèññèè åùå â 38% è òîëüêî
ó òðåòè (28%) áîëüíûõ íå íàáëþäàëè ñêîëüêî-íèáóäü
ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ ëå÷åíèÿ íà ðåïëèêàöèþ âèðóñà è
àêòèâíîñòü ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà (ðèñ. 10.6.1). Ïðè Õà Â
ïåðâè÷íàÿ ðåìèññèÿ îòìå÷åíà ó 50% áîëüíûõ.
306
ÂÈÔÅÐÎÍ
(n = 70)
ÂÈÔÅÐÎÍ + ÔÎÑÎÃËÈÂ
(n = 29)
Ðèñ. 10.6.1. Ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ âèôåðîíà â êîìáèíàöèè ñ
ôîñôîãëèâîì (â êàïñóëàõ) â òå÷åíèå 6 ìåñ. ó áîëüíûõ Õà Ñ
(ïî êîíñåíñóñó "Eurohep").
 ãðóïïå áîëüíûõ Õà Ñ, ïîëó÷àâøèõ ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì
ïåðâè÷íàÿ ïîëíàÿ ðåìèññèÿ íàáëþäàëàñü ó 39%, íåïîëíàÿ
(áèîõèìè÷åñêàÿ) åùå ó 17% è îòñóòñòâèå ýôôåêòà - ó 44%. Ò.å.
âêëþ÷åíèå ôîñôîãëèâà â âèôåðîíîâóþ (ÈÔÍ-α) òåðàïèþ
çíà÷èòåëüíî ñíèçèëî (îò 44 äî 28) ïðîöåíò íå îòâå÷àþùèõ íà
òåðàïèþ áîëüíûõ, ïðèâåäÿ èõ â ñîñòîÿíèå ÷àñòè÷íîé ðåìèññèè.
Ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå  ïîëíàÿ è ÷àñòè÷íàÿ ðåìèññèÿ
îòìå÷åíû ó ó 66% è 12% áîëüíûõ, 22% íå îòâå÷àëè íà äàííûé
ñïîñîá ëå÷åíèÿ.
Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî áîëüøèíñòâî äåòåé, âêëþ÷åííûõ â ãðóïïó
ëå÷åíèÿ êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèåé, áûëè ðåôðàêòåðíûìè íà
ìîíîòåðàïèþ âèôåðîíîì.
Ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ â ïðîâîäèìûõ èññëåäîâàíèÿõ íå
íàáëþäàëîñü.
 ãðóïïå äåòåé, íå ïîëó÷àâøèõ ïðîòèâîâèðóñíîå ëå÷åíèå, íè â
îäíîì ñëó÷àå íå îòìå÷àëîñü ïîëíîé ðåìèññèè (íåïîëíàÿ
áèîõèìè÷åñêàÿ èëè ñåðîëîãè÷åñêàÿ ðåìèññèÿ îòìå÷àëàñü ó 5 èç 27
áîëüíûõ ÕÃ Â è ó 3 èç 12 áîëüíûõ ÕÃ Ñ.)
Êðîìå êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè ñ âèôåðîíîì, ëå÷åíèå
ôîñôîãëèâîì â êàïñóëàõ ïîëó÷àëè 54 ðåáåíêà: ñ Âà À -12 è ñ Âà  15 äåòåé. Ãðóïïó êîíòðîëÿ ñîñòàâèëè 14 áîëüíûõ ñ Âà À è 13 - ñ ÂÃ
Â. Ïðåïàðàò äàâàëè äåòÿì äî 7 ëåò â äîçå 0,5-1 êàïñ. 3 ðàçà â äåíü,
ñòàðøå 7 ëåò - ïî 1,5 êàïñóëû 3 ðàçà â äåíü. Äåòè â ñðàâíèâàåìûõ
ãðóïïàõ áûëè îäíîãî âîçðàñòà, èìåëè îäèíàêîâóþ ñòåïåíü òÿæåñòè
çàáîëåâàíèÿ, íàõîäèëèñü â îäíèõ è òåõ æå óñëîâèÿõ è ïîëó÷àëè
307
îäèíàêîâóþ
áàçèñíóþ
òåðàïèþ.
Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå
ïîêàçàòåëè îöåíèâàëè äî ëå÷åíèÿ, íà 10-é è 20-é äíè ëå÷åíèÿ.
Ó áîëüíûõ, ëå÷åííûõ ôîñôîãëèâîì, íà 10 äåíü îò íà÷àëà
òåðàïèè, áûñòðåå, ÷åì ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû,
óìåíüøàëàñü æåëòóõà, ñîêðàùàëèñü ðàçìåðû ïå÷åíè, â ñûâîðîòêå
êðîâè
ñíèæàëîñü
ñîäåðæàíèå
îáùåãî
è,
îñîáåííî,
êîíúþãèðîâàííîãî áèëèðóáèíà, óìåíüøàëàñü àêòèâíîñòü ÀëÀÒ (è
â ìåíüøåé ñòåïåíè ÀñÀÒ). Ïîêàçàòåëè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû è
òèìîëîâîé ïðîáû òàêæå áûëè ëó÷øå, ÷åì â ãðóïïå êîíòðîëÿ (õîòÿ
ýòè ðàçëè÷èè áûëè íåäîñòîâåðíûìè).
Íà 20-é äåíü îò íà÷àëà òåðàïèè ó âñåõ äåòåé, ëå÷åííûõ
ôîñôîãëèâîì, æåëòóõà îòñóòñòâîâàëà, òîãäà êàê â ãðóïïå êîíòðîëÿ
ó 7 äåòåé èç 13 ñ Âà  åùå ñîõðàíÿëàñü ëåãêàÿ èêòåðè÷íîñòü ñêëåð.
Ðàçìåðû ïå÷åíè â ýòè ñðîêè â ãðóïïå áîëüíûõ ãåïàòèòîì À áûëè â
ïðåäåëàõ íîðìû ó 10 èç 12 ïàöèåíòîâ, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ è ó 9
èç 14 - â ãðóïïå êîíòðîëÿ. Â ãðóïïå ñ ÂÃ Â ýòè ïîçèòèâíûå
èçìåíåíèÿ íàáëþäàëèñü ñîîòâåòñòâåííî ó 8 èç 15 è ó 4 èç 13.
 ñûâîðîòêå êðîâè íà 20-é äåíü ëå÷åíèÿ ôîñôîãëèâîì â
êàïñóëàõ ó âñåõ äåòåé ñ ÂÃ À è ñ ÂÃ Â íàñòóïèëà íîðìàëèçàöèÿ
óðîâíÿ îáùåãî áèëèðóáèíà (ñíèæåíèå îò 54 ± 2,1 äî 10 ± 1,3
ìêìîëü/ë), òîãäà êàê â ãðóïïå êîíòðîëÿ ýòè âåëè÷èíû íå äîñòèãàëè
íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé (ñíèæåíèå îò 56 ± 3,2 äî 24 ± 1,9 ìêìîëü/ë).
Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû è ïðè èññëåäîâàíèè
àêòèâíîñòè ÀëÀÒ. Ó äåòåé ñ Âà  â ãðóïïå êîíòðîëÿ àêòèâíîñòü
ÀëÀÒ ñîõðàíÿëàñü ïîâûøåííîé â 2-2,5 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ
íîðìàëüíûìè âåëè÷èíàìè, òîãäà êàê â ãðóïïå ëå÷åííûõ
ôîñôîãëèâîì îíà áûëà â ïðåäåëàõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé (65 ± 3,9
åä/ë) [44]. Äåòåé, ïîëó÷àâøèõ ôîñôîãëèâ, âûïèñûâàëè èç
ñòàöèîíàðà â ñðåäíåì íà 4-6 äíåé ðàíüøå, ÷åì äåòåé êîíòðîëüíûõ
ãðóïï.
 öåëîì, ïðèìåíåíèå ôîñôîãëèâà â êàïñóëàõ â êîìïëåêñíîé
òåðàïèè ïðè ÂÃ À è ÂÃ Â ó äåòåé ñïîñîáñòâóåò áîëåå áûñòðîìó
óëó÷øåíèþ
îáùåãî
ñîñòîÿíèÿ,
ñíèæåíèþ
ñèìïòîìîâ
èíòîêñèêàöèè, ñîêðàùåíèþ ðàçìåðîâ ïå÷åíè, íîðìàëèçàöèè
óðîâíÿ áèëèðóáèíà è àêòèâíîñòè ÀëÀÒ. Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì
ñîêðàùàåò ñðîêè ïðåáûâàíèÿ áîëüíûõ â ñòàöèîíàðå. Ôîñôîãëèâ
õîðîøî ïåðåíîñèòñÿ äåòüìè. Ïîáî÷íûõ ðåàêöèé íå îòìå÷àëîñü.
Ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû ïðè ïåðîðàëüíîì ëå÷åíèè
ôîñôîãëèâîì â êîìáèíàöèè ñ ìîñëåöèòèíîì [62] áûëè ïîëó÷åíû è
â êëèíèêå ÎÍÖ èì. Í.Í.Áëîõèíà ÐÀÌÍ [44]. Ó 11 áîëüíûõ äåòåé ñ
ãåìîáëàñòîçàìè è ðàçëè÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè ïå÷åíè (ãåïàòèò Â,
òîêñè÷åñêîå ïîðàæåíèå ïå÷åíè) áûñòðåå êóïèðîâàëèñü ñèìïòîìû
èíòîêñèêàöèè (ñëàáîñòü, àíîðåêñèÿ, òîøíîòà) ïî ñðàâíåíèþ ñ
308
äåòüìè êîíòðîëüíîé ãðóïïû (10 áîëüíûõ). Êðîìå òîãî, ó áîëüíûõ
ãåìîáëàñòîçàìè ñíèæàëàñü àêòèâíîñòü ÀëÀÒ êàê â ãðóïïå äåòåé ñ
ãåïàòèòîì Â, òàê è ó áîëüíûõ ñ òîêñè÷åñêèì ïîðàæåíèåì ïå÷åíè
[44].
Òàêèì îáðàçîì, ìíîãîöåíòðîâûå êëèíè÷åñêèå èñïûòàíèÿ
ïîêàçàëè:
1) Âûñîêóþ ýôôåêòèâíîñòü ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ ó áîëüíûõ êàê
îñòðûìè, òàê è õðîíè÷åñêèìè Â, Ñ è ìèêñò Â+Ñ ãåïàòèòàìè, à òàêæå
õðîíè÷åñêèìè
äèôôóçíûìè
çàáîëåâàíèÿìè
ïå÷åíè,
îáóñëîâëåííûìè
ìåòàáîëè÷åñêèìè
íàðóøåíèÿìè
(ãèïåðëèïèäåìèÿ, àëêîãîëüíîå ïîðàæåíèå ïå÷åíè, êàëüêóëåçíûé
õîëåöèñòèò è äðóãèå).
2) Ôîñôîãëèâ ñóùåñòâåííî óëó÷øàåò ñèíòåòè÷åñêóþ ôóíêöèþ
ïå÷åíè è ñíèæàåò êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå ïðîÿâëåíèÿ ïå÷åíî÷íîé
íåäîñòàòî÷íîñòè ðàçëè÷íîé ýòèîëîãèè.
3) Ñðàâíèòåëüíîå èññëåäîâàíèå ïðåïàðàòà ôîñôîãëèâ è
áàçèñíîé òåðàïèè ïîêàçàëî, ÷òî ïî êëèíè÷åñêèì è áèîõèìè÷åñêèì
ïîêàçàòåëÿì ôîñôîãëèâ ÿâëÿåòñÿ áîëåå ýôôåêòèâíûì, ÷åì
ïðèìåíÿåìàÿ îáùåïðèíÿòàÿ áàçèñíàÿ òåðàïèÿ. Ó áîëüíûõ ñ
õðîíè÷åñêèìè ãåïàòèòàìè Ñ, Â, Ñ+ ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ â/âåííîé
ôîðìîé ôîñôîãëèâà íåñðàâíåííî ëó÷øå, ÷åì ïðè ìîíîòåðàïèè
ïàðåíòåðàëüíàìè ïðåïàðàòàìè α-èíòåðôåðîíà.
4) Ôîñôîãëèâ ïîäàâëÿåò ðåïëèêòèâíóþ àêòèâíîñòü HBV è HCV.
5) Ôîñôîãëèâ îáëàäàåò õîðîøåé ïåðåíîñèìîñòüþ, ïîáî÷íûå
ðåàêöèè â âèäå àëëåðãè÷åñêîé ñûïè âñòðå÷àþòñÿ ëèøü ó
åäèíè÷íûõ áîëüíûõ; ïðè äëèòåëüíîì âíóòðèâåííîì ïðèìåíåíèè
(12 ìåñÿöåâ è áîëåå) âîçìîæíà òðàíçèòîðíàÿ àðòåðèàëüíàÿ
ãèïåðòîíèÿ.
6)
Ðåçóëüòàòû
êëèíè÷åñêèõ
èñïûòàíèé
ïîçâîëÿþò
ðåêîìåíäîâàòü ôîñôîãëèâ äëÿ ëå÷åíèÿ êàê îñòðûõ, òàê è
õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ è äèôôóçíûõ çàáîëåâàíèé ïå÷åíè.
ÐÅÊÎÌÅÍÄÎÂÀÍÍÛÅ ÑÕÅÌÛ ËÅ×ÅÍÈß ÔÎÑÔÎÃËÈÂÎÌ.
1.Ñõåìà 1 (Ìîíîòåðàïèÿ Ôîñôîãëèâîì).
Ôîñôîãëèâ âíóòðèâåííî ïî 5,0 ã. 3 ðàçà â íåäåëþ. Â ïðîìåæóòêå
ìåæäó èíúåêöèÿìè (îñòàëüíûå äíè íåäåëè) ïðèåì ôîñôîãëèâà â
êàïñóëàõ ïî 2 êàïñ. 3-4 ðàçà â äåíü. Äëèòåëüíîñòü ëå÷åíèÿ 2 ìåñÿöà
ñ ïîñëåäóþùåé ïîääåðæèâàþùåé òåðàïèåé êàïñóëàìè ôîñôîãëèâ
ïî 2 êàïñ. 3-4 ðàçà â äåíü â òå÷åíèå 6-24 ìåñÿöåâ.
Ïðè
îòñóòñòâèè
(èëè
íåäîñòàòî÷íî
âûðàæåííûõ)
ïîëîæèòåëüíûõ èçìåíåíèÿõ â êðîâè áîëüíûõ (ïå÷åíî÷íûå ïðîáû,
âèðåìèÿ), èíúåêöèîííûé êóðñ ôîñôîãëèâà ìîæåò áûòü ïðîäîëæåí
309
ïîä êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûì êîíòðîëåì äî 6 ìåñÿöåâ ñ
ïîñëåäóþùåé ïîääåðæèâàþùåé êàïñóëàìè òåðàïèåé (ïðèåì íå
ìåíåå 6 êàïñóë â äåíü) äî 12-24 ìåñÿöåâ.
Ýôôåêòèâíîñòü ïðîâîäèìîé òåðàïèè îöåíèâàþò ÷åðåç êàæäûå
1-2 ìåñÿöà ïî ïðîãðàììå "EUROHEP". Ðàçëè÷àþò:
- Ïåðâè÷íóþ ðåìèññèþ - 2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ íîðìàëüíûõ
çíà÷åíèÿ óðîâíÿ ÀëÀÒ â ïðîöåññå ëå÷åíèÿ - áëèæå ê êîíöó, ñ
èíòåðâàëîì íå ìåíåå 2 íåäåëü; èñ÷åçíîâåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ
HBV;
- Ñòàáèëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ
HCV è ÄÍÊ HBV â ñûâîðîòêå êðîâè â òå÷åíèå 6 ìåñ ïîñëå
îêîí÷àíèÿ òåðàïèè;
- Äëèòåëüíóþ ðåìèññèþ - íîðìàëüíàÿ ÀëÀÒ, îòñóòñòâèå ÐÍÊ
HCV è ÄÍÊ HBV â ñûâîðîòêå êðîâè â òå÷åíèå 24 ìåñ ïîñëå
îêîí÷àíèÿ òåðàïèè
- Ïðåêðàùåíèå ðåìèññèè â õîäå ëå÷åíèÿ ("óñêîëüçàíèå") - â õîäå
6 ìåñ. òåðàïèè ïîñëå íîðìàëèçàöèè ÀëÀÒ, åå óðîâåíü âíîâü
ïîâûøàåòñÿ (2 ïîñëåäîâàòåëüíûõ àíàëèçà ñ èíòåðâàëîì 2 íåäåëè),
ïîâòîðíîå ïîÿâëåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV, îïðåäåëÿåìîå â
ëþáîé ìîìåíò âðåìåíè ïîñëå èõ èñ÷åçíîâåíèÿ.
- Îòñóòñòâèå ðåìèññèè - ëþáàÿ äðóãàÿ äèíàìèêà àêòèâíîñòè
ÀëÀÒ è íàëè÷èå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV ê îêîí÷àíèþ òåðàïèè.
Ëå÷åíèå ôîñôîãëèâîì ïî ïðèâåäåííîé âûøå ñõåìå ìîæíî â
ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè êîìáèíèðîâàòü êàê ñ ïðåïàðàòàìè
èíòåðôåðîíà (Èíòðîí À, ðîôåðîí-À, ðåàôåðîí è äð), òàê è ñ
ïðåïàðàòàìè, áëîêèðóþùèìè ðàçìíîæåíèå âèðóñà (ñ ðèáàâåðèíîì
â äîçå åæåäíåâíî 1000 ìã â ñëó÷àå ãåïàòèòà Ñ è ëàìèâóäèíîì ïî 100
ìã 2 ðàçà â äåíü, â ñëó÷àå ãåïàòèòà Â). Ïðè ýòîì îáà êëàññà
ïðåïàðàòîâ ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ â èõ òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçèðîâêàõ
â ñî÷åòàíèè ñ èíúåêöèÿìè ôîñôîãëèâà.
Ìèíèìàëüíàÿ äëèòåëüíîñòü âíóòðèâåííîãî êóðñà ëå÷åíèÿ - 2
ìåñÿöà ñ ïîñëåäóþùèì âîçìîæíûì ïðîäîëæåíèåì ïî êëèíèêîëàáîðàòîðíûì ïîêàçàòåëÿì äî 6 ìåñÿöåâ ñ êàïñóëüíîé
ïîääåðæèâàþùåé òåðàïèåé â òå÷åíèè 1-2 ëåò.
Àëãîðèòì òåðàïèè.
Ïî äîñòèæåíèè ïîëíîé ðåìèññèè ëå÷åíèå ïðîäîëæàòü äî 3-õ
ìåñÿöåâ äëÿ çàêðåïëåíèÿ ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè.
 ñëó÷àå ðåàêòèâàöèè ïðîöåññà (ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè ÀëÀÒ,
ÀñÀÒ, ïîÿâëåíèå ÐÍÊ HCV è ÄÍÊ HBV) êóðñ ëå÷åíèÿ
ïîâòîðÿåòñÿ. Ïðè ýòîì ïðè ìîíîòåðàïèè ôîñôîãëèâîì â ñõåìó
ëå÷åíèÿ äîáàâëÿþò (ñõåìà 2):
-  ñëó÷àå ÕÃ Ñ - ðèáàâèðèí åæåäíåâíî ïî 1000 ìã/ñóòêè (2 òàáë.
310
óòðîì, 3 òàáë. âå÷åðîì).
-  ñëó÷àå Õà  - ëàìèâóäèí ïî 100 ìã/2 ðàçà â ñóòêè.
Ïðè ðåàêòèâàöèè ïðîöåññà â ñëó÷àå êîìáèíèðîâàííîé òåðàïèè
âìåñòî ðèáàâåðèíà è ëàìèâóäèíà ëå÷åíèå ïðîâîäÿò ôîñôîãëèâîì â
êîìáèíàöèè ñ èíòåðôåðîíîì (ñõåìà 3).
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ Ê ÃËÀÂÅ 10.
1.van Rossum T.G., Vulto A.G., de Man R.A. Glycyrrhizin as a
potential treatment of chronic hepatitis C. Aliment Pharmacol Ther.
1998, 12, 199-205.
2. Àð÷àêîâ À.È.,.Ñåëüöîâñêèé À.Ï., Ëèñîâ Â.È., Öûãàíîâ Ä.È.,
Êíÿæåâ Â.À., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È. Ôîñôîãëèâ: ìåõàíèçì
äåéñòâèÿ è ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ â êëèíèêå. Âîïð ìåä
õèìèè. 2002, 48, 139-151.
3. Smith J.P., Riley T.R., Devenyi A., Bingaman S.I., Kunselman A.
Amantadine therapy for chronic hepatitis C. J Gen Intern Med. 2004, 19, 662668.
4. Kwo P.Y. Treatment of chronic hepatitis C in nonresponders to
interferon monotherapy. Curr Gastroenterol Rep. 2000, 2, 11-17.
5. Scott L.J., Perry C.M. Interferon-alpha-2b plus ribavirin: a review
of its use in the management of chronic hepatitis C. Drugs. 2002, 62,
507-556.
6. Garcia Compean D. Treatment of acute hepatitis C. Rev
Gastroenterol Mex. 2002, 67, 61-66.
7. Shiffman M.L., Hofmann C.M., Gabbay J., Luketic V.A., Sterling
R.K., Sanyal A.J., Contos M.J., Ryan M.J., Yoshida C., Rustgi V.
Treatment of chronic hepatitis C in patients who failed interferon
monotherapy: effects of higher doses of interferon and ribavirin combination therapy. Am J Gastroenterol. 2000, 95, 2928-2935.
8. Poynard T., Marcellin P., Lee S.S., Niederau C., Minuk G.S., Ideo
G., Bain V., Heathcote J., Zeuzem S., Trepo C., Albrecht J. Randomised
trial of interferon alpha2b plus ribavirin for 48 weeks or for 24 weeks
versus interferon alpha2b plus placebo for 48 weeks for treatment of
chronic infection with hepatitis C virus. Lancet. 1998, 352 ,1426-1432.
9. Narayanan Menon K.V., Poterucha J.J., El-Amin O.M., Burgart
L.J., Kremers W.K., Rosen C.B., Wiesner R.H., Charlton M. Treatment
of posttransplantation recurrence of hepatitis C with interferon and ribavirin: lessons on tolerability and efficacy. Liver Transpl. 2002, 8, 623629.
10 Pariente A., Djilloul A., Cadranel J.F. Treatment of chronic hepatitis C with interferon alpha and ribavirin. Results in "real life".
Gastroenterol Clin Biol. 2003, 27, 590-595.
11. Khokhar N. Effectiveness of 48 weeks Interferon alfa-2b in com311
bination with ribavirin as initial treatment of chronic hepatitis. J Ayub
Med Coll Abbottabad. 2002, 14, 5-8.
12. Ward R.P., Kugelmas M., Libsch K.D. Management of hepatitis
C: evaluating suitability for drug therapy. Am Fam Physician. 2004, 69,
1429-1436.
13. van Zonneveld M., Honkoop P., Hansen B.E., Niesters H.G.,
Murad S.D., de Man R.A., Schalm S.W., Janssen H. Long-term followup of alpha-interferon treatment of patients with chronic hepatitis B.
Hepatology. 2004, 39, 804-810.
14. Hoofnagle J., Di Bisceglie A. The treatment of chronic viral hepatitis. N Engl J Med. 1997, 336, 347-356.
15. Iino S., Tango T, Matsushima T., Toda G., Miyake K., Hino K.,
Kumada H., Yasuda K., Kuroki T., Hirayama C., Suzuki H. Therapeutic
effects of stronger neo-minophagen C at different doses on chronic hepatitis and liver cirrhosis. Hepatol Res. 2001, 19, 31-40.
16. Kumada H. Long-term treatment of chronic hepatitis C with glycyrrhizin [stronger neo-minophagen C (SNMC)] for preventing liver
cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Oncology. 2002, 62, 94-100.
17. Abe Y., Ueda T., Kato T., Kohli Y. Effectiveness of interferon,
glycyrrhizin combination therapy in patients with chronic hepatitis C.
Nippon Rinsho. 1994, 52, 1817-1822.
18. Arase Y., Ikeda K., Murashima N., Chayama K., Tsubota A.,
Koida I. Suzuki Y., Saitoh S., Kobayashi M., Kumada H. The long term
efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients. Cancer. 1997,
79, 494-500.
19. Okuno M., Kojima S., Moriwaki H. Chemoprevention of hepatocellular carcinoma: concept, progress and perspectives. J Gastroenterol
Hepatol. 2001, 16, 1329-1335.
20. Sumiyama K., Kobayashi M., Miyashiro E., Koike M.
Combination therapy with transfer factor and high dose stronger neominophagen C in chronic hepatitis B in children (HBe Ag positive).
Acta Paediatr Jpn. 1991, 33, 327-334.
21. van Rossum T.G., Vulto A.G., Hop W.C., Schalm S.W.
Glycyrrhizin-induced reduction of ALT in European patients with
chronic hepatitis C. Am J Gastroenterol. 2001, 96, 2432-2437.
22. Fujisawa Y., Sakamoto M., Matsushita M., Fujita T., Nishioka K.
Glycyrrhizin inhibits the lytic pathway of complement - possible mechanism of its anti-inflammatory effect on liver cells in viral hepatitis.
Microbiol Immunol. 2000, 44, 799-804.
23. Yamamura Y., Kotaki H., Tanaka N., Aikawa T., Sawada Y., Iga
T. The pharmacokinetics of glycyrrhizin and its restorative effect on
hepatic function in patients with chronic hepatitis and in chronically
carbon-tetrachloride-intoxicated rats. Biopharm Drug Dispos. 1997, 18,
312
717-725.
24. Numazaki K., Nagata N., Sato T., Chiba S. Effect of glycyrrhizin,
cyclosporin and tumor necrosis factor alpha on infection of U-937 and
MRC-5 cells by human cytomegalovirus. J Leukoc Biol. 1994, 55, 24-28.
25. Nakajima N., Utsunomiya T., Kobayashi M., Herndon D.N.,
Pollard R.B., Suzuki F. In vitro induction of anti-type 2 T cells by glycyrrhizin. Burns. 1996, 22, 612-617.
26. Abe N., Ebina T., Ishida N. Interferon induction by glycyrrhizin
and glycyrrhetinic acid in mice. Microbiol Immunol. 1982, 26. 535-539.
27. Vaya J., Belinky P.A., Aviram M. Antioxidant constituents from
licorice roots: isolation, structure elucidation and antioxidative capacity toward LDL oxidation. Free Radic Biol Med. 1997, 23, 302-313.
28. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å. Ãëèöèððèçèí â ëå÷åíèè
õðîíè÷åñêèõ âèðóñíûõ ãåïàòèòîâ. Êëèí ôàðìàêîëîãèÿ è òåðàïèÿ.
2000, 9, 39-41.
29. Dragland S., Senoo H., Wake K., Holte K., Blomhoff R. Several
culinary and medicinal herbs are important sources of dietary antioxidants. J Nutr. 2003, 133, 1286-1290.
30. Gundermann K.-J. The "essential" phospholipids as a membrane
therapeutic. Szczecin.. Publisher Polish Section of European Society of
biochemical pharmacology. Szczecin. 1993.
31. Ïîäûìîâà Ñ.Ä. Áîëåçíè ïå÷åíè. Ìåäèöèíà, Ì. 1984, 433447.
32. Kuntz E. "Essentielle" phospholipide in der hepatologie - 50
jahre experimentale und klinische erfahrung. Z Gastroenterol, 1991, 29,
7-13.
33. Ó÷àéêèí Â.Ô., Íèñåâè÷ Í.È., ×åðåäíè÷åíêî Ò.Â. Âèðóñíûå
ãåïàòèòû ó äåòåé. Ì. 1994, 304-318.
34. Barbarino F., Suciu A., Neumann E. Effect of "essential" phospholipids in chronic hepartitis and on immunology processses.
Therapiewoche Osterreich. 1989, 4, 155-162.
35. Guan R., Ho K.Y., Kang J.Y., Yap I., Gwee K.A., Tan C.C. The
effect of polyunsaturated phosphatidylcholine in the treatment of acute
viral hepatitis. Aliment Pharmakol Ther. 1995, 9, 699-703.
36. Niederau C., Strohmeyer G., Heintges T., Peter K., Gopfert E.
Polyunsaturated phosphatidylcholine and interferon alpha for treatment of chronic hepatitis B and C: a multi-center, randomized, doubleblind,
placebo-controlled
trial.
Leich
Study
Group.
Hepatogastroenterology. 1998, 45, 797-804.
37. Lieber C.S. Liver diseases by alcohol and hepatitis C: early detection and new insights in pathogenesis lead to improved treatment. Am
J Addict. 2001, 10, 29-50.
38. Ó÷àéêèí Â.Ô., Òîpõîâñêàÿ Ò. È., Äóíàåâñêèé Î. À., Ëó÷øåâ
313
Â. È., Ãàëüïåpèí Ç. È., Êîâàëåâ Î. Á., Êèñåëåâ Í. È., Æàpîâ Ñ. Í.,
Äîêó÷àåâ Ê. Â., Ïèñàpåâà Å. À., Êîíåâ Â.
Ïðèìåíåíèå
îòå÷åñòâåííîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ" ïðè îñòðûõ è
õðîíè÷åñêèõ çàáîëåâàíèÿõ ïå÷åíè. Ýïèäåì èíôåêö áîëåçí. 1999, 1,
49-54.
39. Ó÷àéêèí Â.Ô., Ëó÷øåâ Â. È., Æàpîâ Ñ. Í., Êîâàëåâ Î. Á.,
Èïàòîâà Î. Ì., Òèõîíîâà Å. Ã., Òîpõîâñêàÿ Ò. È., Êíÿæåâ Â. À.,
Äóíàåâñêèé Î. À., Àp÷àêîâ À. È. Íîâûé îòå÷åñòâåííûé
ôîñôîëèïèäíûé ïpåïàpàò "Ôîñôîãëèâ" êàê ýôôåêòèâíîå ñpåäñòâî
ïpè ëå÷åíèè áîëüíûõ ñ îñòpûìè âèpóñíûìè ãåïàòèòàìè. Êëèí
ìåä. 2000, 5, 39-42.
40. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ó÷àéêèí Â.Ô.,
Ëó÷øåâ Â.È., Æàðîâ Ñ.Í., Êîâàëåâ Î.Á., Ïèñàðåâà Å.À., Êîíåâ Â.Â.,
Êíÿæåâ
Â.À.
Êëèíèêî-ýêñïåðèìåíòàëüíîîå
îáîñíîâàíèå
ìåìáðàííîé òåðàïèè ãåïàòèòîâ. Íîâûé ôîñôîëèïèäíûé ïðåïàðàò
"Ôîñôîãëèâ". Ìàòåðèàëû êîíôåðåíöèÿ "Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå
àñïåêòû ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèè". Âèòåáñê, Áåëîðóññèÿ. 1999, 1216.
41. Àð÷àêîâ À.È., Ãóñåâà Ì.Ê., Èïàòîâà Î.Ì., Áóòîâ Þ.Ñ.,
Âàñåíîâà Â.Þ., Õðóñòàëåâà Å.À., Ïîïîâ Ê.Â. Ñðåäñòâî äëÿ
êîìïëåêñíîãî ëå÷åíèÿ õðîíè÷åñêèõ äåðìàòîçîâ: ïñîðèàçà,
àòîïè÷åñêîãî äåðìàòèòà, ýêçåìû è êåðàòîäåðìèé è ñïîñîá ëå÷åíèÿ
õðîíè÷åñêèõ äåðìàòîçîâ. Ïàòåíò ÐÔ 2196585 îò 06.03.01.
42. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Ó÷àéêèí Â.Ô. Ïðèìåíåíèå
ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ ñ âèðóñíûìè ãåïàòèòàìè.
V Ðîññèéñêèé íàöèîíàëüíûé êîíãðåññ "×åëîâåê è ëåêàðñòâî".
Ìîñêâà. 1998.
43. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È. Òåîðåòè÷åñêèå
îñíîâû
ïðèìåíåíèÿ
ýññåíöèàëüíûõ
ôîñôîëèïèäîâ
è
ãëèöèððèçèíîâîé êèñëîòû â ìåäèöèíå. Ñèìïîçèóì "Îïûò
êëèíè÷åñêîãî ïðèìåíåíèÿ îòå÷åñòâåííîãî ãåïàòîïðîòåêòîðà
"Ôîñôîãëèâ". 8-îé ðîññèéñêèé íàöèîíàëüíûé êîíãðåññ "×åëîâåê è
ëåêàðñòâî". Ìîñêâà. 2001.
44. ÔÎÑÔÎÃËÈÂ. Ëå÷åíèå è çàùèòà ïå÷åíè. Ïîñîáèå äëÿ
âðà÷åé. (Ó÷àéêèí Â.Ô., Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì. è äð., ïîä
ðåäàêöèåé Ó÷àéêèíà Â.Ô.) Ìîñêâà, ÃÓ ÍÈÈ ÁÌÕ ÐÀÌÍ, 2004.
45. Ó÷àéêèí B.Ô., Êíÿæåâ Â.À, Ãàëüïåðèí Ý.È., Äîêó÷àåâ Ê.Â.,
Òîðõîâñêàÿ Ò.È, Êîâàëåâ Î.Á., Ïèñàðåâà Å.À., Êîíåâ Â.À., Àð÷àêîâ À.È.
Ãåïàòîïðîòåêòîðíîå
äåéñòâèå ôîñôîëèïèäíîãî ïðåïàðàòà
"ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ, îïåðèðîâàííûõ ïî ïîâîäó õðîíè÷åñêîãî
êàëüêóëåçíîãî õîëåöèñòèòà. Õèðóðãèÿ. 2000, 3, 14-18.
46. Èïàòîâà Î.Ì., Ó÷àéêèí B.Ô., Êíÿæåâ Â.À, Ãàëüïåðèí Ý.È.,
Äîêó÷àåâ Ê.Â., Òîðõîâñêàÿ Ò.È, Àð÷àêîâ À.È. Êîìáèíàöèÿ
314
ìåòàáîëè÷åñêîé è õèðóðãè÷åñêîé òåðàïèè áîëüíûõ ñ õðîíè÷åñêèì
êàëüêóëåçíûì
õîëåöèñòèòîì:
èñïîëüçîâàíèå
íîâîãî
ãåïàòîïðîòåêòîðà "Ôîñôîãëèâ". Ìàòåðèàëû êîíôåðåíöèè
"Êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûå àñïåêòû ìåòàáîëè÷åñêîé òåðàïèè".
Âèòåáñê, Áåëîðóññèÿ. 1999, 34-41.
47. Ñòîðîæàêîâ Ã.È., Áàéêîâà È.Å., Íèêèòèí È.Ã., Àð÷àêîâ À.È.,
Èïàòîâà Î.Ì. Òåîðåòè÷åñêèå è ïðàêòè÷åñêèå àñïåêòû ïðèìåíåíèÿ
ãëèöèððèçèíà Êëèíè÷åñêèå ïåðñïåêòèâû ãàñòðîýíòåðîëîãèè,
ãåïàòîëîãèè. 2003, 1, 35-39.
48. Coton T., Matton T., Pecarrere J.L., Monchy D., Debonne J.M.
Interobserver reproducibility of the Knodell score and the Metavir
score in chronic viral hepatitis C. Results of 60 liver biopsies.
Gastroenterol Clin Biol. 2001, 25, 915-916.
49. Áàéêîâà È.Å. Êëèíèêî-ìîðôîëîãè÷åñêàÿ äèíàìèêà
õðîíè÷åñêîãî âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ íà ôîíå ðàçëè÷íûõ âàðèàíòîâ
ýòèîïàòîãåíåòè÷åñêîãî ëå÷åíèÿ. Àâòîðåô. êàíä. äèññ, 2003.
50. Àð÷àêîâ À.È., Èïàòîâà Î.Ì., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ñòîðîæàêîâ
Ã.È., Ó÷àéêèí Â.Ô. Íîâûé îòå÷åñòâåííûé ïðåïàðàò Ôîñôîãëèâ.
Ìåäèöèíñêàÿ êàôåäðà. 2003, 4, 62-65, 135-141.
51. Èïàòîâà Î.Ì., Íàñîíîâ Å.Ë., Êîðîòàåâà Ò.Â., Ôèðñîâ Í.Í.,
Èâêèíà Î.À., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Àð÷àêîâ À.È. Ãåìîðåîëîãè÷åñêàÿ è
êëèíè÷åñêàÿ
ýôôåêòèâíîñòü
íîâîãî
ôîñôîëèïèäíîãî
ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî ïðåïàðàòà "ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ
ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì. Áèîìåäèöèíñêàÿ õèìèÿ. 2003, 49, 484491.
52. Êîðîòàåâà Ò.Â., Íàñîíîâ Å.Ë., Èïàòîâà Î.Ì., Ôèðñîâ Í.Í.,
Èâêèíà Î.À. Ïðèìåíåíèå ôîñôîëèïèäíîãî ãåïàòîïðîòåêòîðíîãî
ïðåïàðàòà "ôîñôîãëèâ" ó áîëüíûõ ïñîðèàòè÷åñêèì àðòðèòîì (ÏÀ)
(ïðåäâàðèòåëüíûå
ðåçóëüòàòû).
Íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêàÿ
ðåâìàòîëîãèÿ, 2004, 3, 40-45.
53. Íàñîíîâ Å.Ë., ×è÷àñîâà Í.Â., Èìàìåòäèíîâà Ã.Ð. Ìåòîäû
îöåíêè ïîðàæåíèÿ ñóñòàâîâ, àêòèâíîñòè çàáîëåâàíèÿ è
ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì.
Ìåòîäè÷åñêîå ïîñîáèå äëÿ âðà÷åé. Ìîñêâà. 2001.
54. Raychaudhuri S.P., Raychaudhuri S.K. Role of NGF and neurogenic inflammation in the pathogenesis of psoriasis. Prog Brain Res.
2004, 146, 433-437.
55. Ghoreschi K., Rocken M. Immune deviation strategies in the
therapy of psoriasis. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2004, 3, 193198.
56. Lieber C.S., DeCarli L.M., Mak K.M., Cim C.I., Leo M.A.
Attenuation of alcohol-induced hepatic fibrosis by polyunsaturated
lecithin. Hepathology. 1990, 12, 1390-1398.
315
57. McHutchison J.G., Gordon S.C., Schiff E.R., Shiffman M.L., Lee
W.M., Rustgi V.K., Goodman Z.D., Ling M.H., Cort S., Albrecht J.K.
Interferon alfa-2b alone or in combination with ribavirin as initial
treatment for chronic hepatitis C. Hepatitis Interventional Therapy
Group N Engl J Med. 1998, 339, 1485-1492.
58. Kullig U., Porst H., Wiese M. et al. Treatment of chronic hepatitis C with a combination of high-dose interferon, ribavirin and amantadine in nonresponders. Poster abstracts, Falk symposium ¹ 115, Part
II of the Basel liver week, 1999, XI Internat. Congr. of liver diseases,
liver cirrhosis and its development. abstr. 112.
59. Kiso S., Kawata S., Tamura S., Imai Y., Inui Y., Nagase T., Maeda
Y., Yamasaki E., Tsushima H., Igura T., Himeno S., Seki K., Matsuzawa
Y. Efficacy of combination therapy of interferon-alfa with ursodesoxycholic acid in chronic hepatitis C. A randomized controlled clinical
trial. J Gastroenterol. 1997, 32, 56-63.
60. Ãîðáàêîâ Â.Â. Ñîâðåìåííûå ïîäõîäû ê äèàãíîñòèêå è
ëå÷åíèþ âèðóñíîãî ãåïàòèòà Ñ. Ðîññèéñêèé æóðíàë
ãàñòðîýíòåðîëîãèè, ãåïàòîëîãèè, êîëîïðîêòîëîãèè, 1998, 5, 61-67.
61. Schalm S.W., Eurohep A. European Community sponsored concerted action on viral hepatitis: its rationale and execution. J Hepatol.
1992, 15, 1-3.
62. Èïàòîâà Î.Ì., Ïðîçîðîâñêàÿ Í.Í., Òîðõîâñêàÿ Ò.È., Ãóñåâà
Ä.Í. Áèîëîãè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ñîåâûõ ôîñôîëèïèäîâ.
Áèîìåäèöèíñêàÿ õèìèÿ. 2004, 50, 436-450
316
ÑÏÈÑÎÊ ÑÎÊÐÀÙÅÍÈÉ
ÀëÀÒ
ÀñÀÒ
ÀÒÔ
ÀÔÊ
ÂÈ×
ÃÊ ÃÒ ÃÔË
ÄËÔÕ
ÄÏÔÕ
ÅÊ ÆÊ ÈÃÀ
ÈÔÍ
ÈÖ ÊË ËèçîÔÊ
ËèçîÔÕ
ËÍÏ
ËÎÍÏ
ËÂÏ ËÕÀÒ
ÂÃ ÏÍÆÊ
ÏÎË
ÑÌ ÑÌàçà
ÑÔ ÑÔË
ÑÔÕ
Òô.ï. ÓÄÔ
ÔÀÒ
ÔÃ ÔÈ ÔÊ ÔË ÔÑ ÔÕ ÔÕÌ
ÔÝ -
-
àëàíèí àìèíîòðàíñôåðàçà
àñïàðòàò àìèíîòðàíñôåðàçà
àäåíîçèí-3-ôîñôîðíàÿ êèñëîòà
àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà
âèðóñ èììóíîäåôèöèòà ÷åëîâåêà
ãëèöèððèçèíîâàÿ êèñëîòà
ãëèöèððåòîâàÿ êèñëîòà
ãëèöåðîôîñôîëèïèäû
äèëèíîëåîèëôîñôàòèäèëõîëèí
äèïàëüìèòîèëôîñôàòèäèëõîëèí
åñòåñòâåííûå êèëëåðû
æèðíûå êèñëîòû
èíäåêñ ãèñòîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè
èíòåðôåðîí
èíäåêñ öèòîòîêñè÷íîñòè
êàðäèîëèïèí
ëèçîôîñôàòèäíàÿ êèñëîòà
ëèçîôîñôàòèäèëõîëèí
ëèïîïðîòåèíû íèçêîé ïëîòíîñòè
ëèïîïðîòåèíû î÷åíü íèçêîé ïëîòíîñòè
ëèïîïðîòåèíû âûñîêîé ïëîòíîñòè
ëåöèòèí-õîëåñòåðèí-àöèëòðàíñôåðàçà
îñòðûé ãåïàòèò
ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû
ïåðåêèñíîå îêèñëåíèå ëèïèäîâ
ñôèíãîìèåëèí
ñôèíãîìèåëèíàçà
ñôèíãîçèí
ñôèíãîëèïèä
ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí
òåìïåðàòóðà ôàçîâîãî ïåðåõîäà
óðèäèí äèôîñôàò
ôàêòîð àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ
ôîñôàòèäèëãëèöåðèí
ôîñôàòèäèëèíîçèòîë
ôîñôàòèäíàÿ êèñëîòà
ôîñôîëèïèäû, ôîñôîëèïèä
ôîñôàòèäèëñåðèí
ôîñôàòèäèëõîëèí
ñîåâûé ôîñôàòèäèëõîëèí ñ äîáàâëåíèåì
ìàëüòîçû
ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí
317
ÕÃ ÖÄÔ
ÖÒÔ ÖÒ ÖÒË
ÝÏÐ ÝÐ -
-
AIF DD EGF eNOS
FADD
FLICE
FLIP
GPCR
HBV
HCV
HâsAg
IL iNOS
ñPLA2
iPLA2
sPLA2
MAPK
NFκB
NÊ PAF PG PIP PIP2
PTP PK C (R)
S1P SPC SREBP
TNF TRADD
TRAIL
VCAM
-
-
õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò (õðîíè÷åñêèé
âèðóñíûé ãåïàòèò)
öèòèäèí äèôîñôàò
öèòèäèí òðèôîñôàò
öèòèäèëòðàíñôåðàçà
öèòîòîêñè÷åñêèå Ò-ëèìôîöèòû
ýëåêòðîííûé ïàðàìàãíèòíûé ðåçîíàíñ
ýíäîïëàçìàòè÷åñêèé ðåòèêóëóì
ôàêòîð,âûçûâàþùèé àïîïòîç,
apoptosis inducing factor
"äîìåí ñìåðòè", "death domain"
ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîðà ðîñòà
ýíäîòåëèàëüíàÿ NO-ñèíòàçà
Fas-àññîöèèðîâàííûé DD
FADD-Like Interleukin Converting Enzyme
FLICE inhibitory protein
G-protein coupled receptors, ðåöåïòîð,
ñâÿçûâàþùèé G-áåëîê
âèðóñ ãåïàòèòà Â
âèðóñ ãåïàòèòà Ñ
àíòèãåí âèðóñíîãî ãåïàòèòà Â
èíòåðëåéêèí
èíäóöèáåëüíàÿ NO-ñèíòàçà
öèòîçîëüíàÿ ôîñôîëèïàçà
öèòîçîëüíàÿ Ñà2+- íåçàâèñèìàÿ ôîñôîëèïàçà
ñåêðåòîðíàÿ ôîñôîëèïàçà
ìèòîãåí-àêòèâèðóåìàÿ ïðîòåèíêèíàçà
ÿäåðíûé ôàêòîð κB, nuclear factor κB
åñòåñòâåííûé êèëëåð, natural killer
platelet activating factor, ôàêòîð
àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ
ïðîñòàãëàíäèíû
ÔÈ-4-ôîñôàò
ÔÈ-4,5-äèôîñôàò
permeability transition pore
ïðîòåèíêèíàçà Ñ (R)
ñôèíãîçèí-1-ôîñôàò
ñôèíãîçèë-ôîñôîðèëõîëèí
sterol regulatory element binding protein
ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè, tumor necrosis
factor
áåëîê TNF-R-àññîöèèðîâàííûé ñ DD
TNF-related apoptosis-inducing ligand
vascular cell adhesive molecule
318
Скачать