012325 Предпосылки создания изобретения

012325
Предпосылки создания изобретения
Болезнь Альцгеймера является очень серьезным заболеванием мозга, которое приводит к прогрессирующей потере памяти, ведущей к деменции, физической неспособности и смерти через довольно
длительный промежуток времени. Среди пожилого населения в развитых странах число больных болезнью Альцгеймера достигает эпидемического порога.
Люди, страдающие от болезни Альцгеймера, характеризуются прогрессирующей деменцией во
взрослом состоянии, сопровождающейся тремя основными структурными изменениями мозга: диффузной потерей нейронов во многих частях мозга, аккумуляцией внутриклеточных осадков белка, вызвавшей нейрофибриллярные сплетения, и аккумуляцией внеклеточных осадков белка, вызвавшей амилоидные или старческие бляшки, окруженные бесформенными окончаниями нервов (дистрофические невриты). Основным компонентом этих амилоидных бляшек является амилоид-β-белок (Aβ), белок с 39-43
аминокислотами, который получается путем расщепления белкового предшественника β-амилоида
(APP). Были проведены глубокие исследования по изучению влияния осадков Aβ на болезнь Альцгеймера, см., например, Selkoe, Trends in Cell Biology 8, 447-453 (1998). Aβ образуется в результате метаболической обработки белка амилоидного предшественника («APP») в эндоплазменной ретикулярной ткани
(«ER»), аппарата Golgi или в эндосомально-лизосомальном пути и в большинстве случаев обычно выделяется в виде пептида с 40 («Aβ1-40») или 42 («Aβ1-42») аминокислотами (Selkoe, Annu. Rev. Cell. Biol.
10, 373-403 (1994)). Роль Aβ как основной причины болезни Альцгеймера подтверждается наличием отложений внеклеточного пептида β-амилоида (Aβ) в сенильных бляшках при болезни Альцгеймера («болезнь Альцгеймера»), увеличенным продуцированием Aβ в клетках, которые присоединяют мутантные
гены, ассоциированные с болезнью Альцгеймера, например, белок амилоидного предшественника, пресенилин I и пресенилин II; и токсичностью внеклеточного растворимого (олигомерного) или фибриллярного Aβ. См., например, Gervais, Eur. Biopharm. Review, 40-42 (Autumn 2001); May, DDT6, 459-62 (2001).
Хотя симптоматическое лечение применяется при болезни Альцгеймера, в настоящее время эту болезнь
нельзя предотвратить или вылечить.
Болезнь Альцгеймера характеризуется диффузными и нейритными бляшками, церебральной ангиопатией, а также нейрофибриллярными переплетениями. Считают, что бляшки и амилоид кровеносных
сосудов образуются при отложении нерастворимого белка Aβ-амилоида, который можно описать как
диффузный и фибриллярный. Полагают также, что и растворимый олигомерный Aβ и фибриллярный Aβ
являются нейротоксичными и воспалительными. Амилоидные фибриллы, как только они отложились,
могут стать токсичными для окружающих клеток. Например, фибриллы Aβ в виде сенильных бляшек,
как было установлено, ассоциированы с погибшими нейронными клетками и микроглиозом у пациентов,
больных болезнью Альцгеймера. При испытании in vitro было показано, что Aβ-пептид способен запускать процесс активации микроглии (макрофаги мозга), который объясняет наличие микроглиоза и воспаления мозга у пациентов с болезнью Альцгеймера. Как только эти амилоиды образовались, не существует известной, широко применяемой терапии или способа лечения, которые приводят к значительному
растворению отложений амилоида или предотвращают образование отложений in situ. Доступные в настоящее время фармацевтические методы лечения β-амилоидных заболеваний являются полностью симптоматическими, обеспечивая только временное или частичное клиническое улучшение. Хотя описаны
некоторые фармацевтические агенты, которые приносят частичное симптоматическое облегчение, в настоящее время не существует фармакологических методов лечения болезни Альцгеймера.
Сущность изобретения
Данное изобретение предусматривает способ сопутствующей терапии для лечения заболевания,
связанного с β-амилоидом, ингибирования нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной βамилоидом. Способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения или смеси соединений, имеющих по меньшей мере одну из следующих структур:
и их фармацевтически приемлемых солей и донепезила. Предпочтительно указанное соединение представляет собой 3-амино-1-пропансульфоновую кислоту.
Согласно одному варианту фармацевтическая композиция включает первый агент и второй агент в
фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент предотвращает или лечит болезнь, связанную с β-амилоидом, и выбран из соединения, имеющего одну из указанных выше структур или их фармацевтически приемлемых солей, и второй указанный агент является донепезилом.
Согласно другому варианту данное изобретение предусматривает способ профилактики или лечения болезни Альцгеймера, который включает сопутствующее введение субъекту, нуждающемуся в этом,
эффективного количества первого агента, который является эффективным для предотвращения или лечения болезни Альцгеймера у указанного субъекта, и второго агента, причем указанный первый агент
представляет собой 3-амино-1-пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
Согласно другому варианту данное изобретение предусматривает способ профилактики или лечения слабого снижения познавательной способности (Mild Cognitive Impairment), который включает со-1-
012325
вместное введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества первого агента, который
является эффективным для профилактики или лечения слабого снижения познавательной способности у
указанного субъекта, и второго агента, причем указанный первый агент представляет собой 3-амино-1пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
Согласно еще одному варианту данное изобретение обеспечивает способ профилактики или лечения, который включает совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
первого агента, эффективного для профилактики или лечения слабого нарушения познавательной способности у указанного субъекта, и второго агента, причем первый агент представляет собой 3-амино-1пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
Согласно другому варианту данное изобретение предусматривает способ профилактики или лечения слабого снижения познавательной способности, который включает совместное введение субъекту,
нуждающемуся в этом, эффективного количества первого агента, который является эффективным для
профилактики или лечения слабого снижения познавательной способности у указанного субъекта, и второго агента, причем указанный первый агент представляет собой 3-амино-1-пропансульфоновую кислоту.
Согласно еще одному варианту данное изобретение обеспечивает способ профилактики или лечения, который включает совместное введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
первого агента, эффективного для профилактики или лечения слабого нарушения познавательной способности у указанного субъекта, и второго агента, причем первый агент представляет собой 3-амино-1пропансульфоновую кислоту. Второй агент представляет собой ингибитор холинэстеразы донепезил.
Подробное описание изобретения
«Амилоидоз» или «амилоидная болезнь» означает патологическое состояние, характеризующееся
наличием амилоидных волокон. Амилоид означает родовое понятие, относящееся к группе различных,
но специфических отложений белка (внутриклеточных и внеклеточных), которые наблюдаются в случае
целого ряда различных болезней. Хотя и многообразные по происхождению, все амилоидные отложения
имеют общие морфологические свойства, окрашиваются специфическими красителями (например, красным Congo) и имеют характеристическую красно-зеленую окраску с двойным лучепреломлением в поляризованном свете после окраски. Они имеют также общие ультраструктурные признаки и общие дифрактограммы и инфракрасные спектры. Термин «β-амилоидные болезни» включает такие болезни, состояния, патологии и другие аномалии структуры или функции мозга, включая его компоненты, причем причиной этих болезней является амилоид.
Поверхность мозга, затронутая при β-амилоидной болезни, может быть стромой, включая сосудистую сеть, или паренхимой, включая функциональные или анатомические участки, или нейронами.
Субъект не должен иметь точный диагноз о характере β-амилоидной болезни.
Локальное отложение амилоида характерно для мозга, особенно у пожилых людей. Самый распространенный тип амилоида в мозгу является, в основном, Aβ белковыми волокнами, вызывающими деменцию, ассоциируемую со спорадической (ненаследственной) болезнью Альцгеймера. В действительности частота возникновения спорадической болезни Альцгеймера значительно превышает частоту возникновения наследственных форм. Тем не менее, фибриллярные белки, образующие бляшки, очень похожи в обоих случаях. APP экспрессируется и катаболизируется в большинстве клеток. Доминантным
катаболическим путем оказывается расщепление APP в Aβ последовательности ферментом с концевой
α-секретазой, приводящее к высвобождению растворимого эктодоменового фрагмента, известного как
APPsα. В противоположность этому неамилоидогенному пути APP может также расщепляться ферментами, известными как β- и γ-секретаза на N-конце и С-конце Aβ, соответственно, с последующим высвобождением Aβ во внеклеточное пространство. К настоящему времени ВАСЕ идентифицирован как βсекретаза (Vasser et al., Science 286:735-741, 1999) и в активность γ-секретазы вовлечены пресенилины
(De Strooper et al., Nature 391, 387-90 (1998)).
Aβ белок с 39-43 аминокислотами получают последовательным протеолитическим расщеплением
белка предшественника амилоида (APP) ферментом(ами) β- и γ-секретазами. Хотя Аβ40 является преобладающей получающейся формой, 5-7% от общего количества Aβ существует в виде Aβ42 (Cappai et al.,
Int. J. Biochem. Cell. Biol. 31, 885-89 (1999)). Оказывается, что длина белка Aβ резко меняет его биохимические/биофизические свойства. Конкретно, две добавочные аминокислоты на С-конце Aβ42 являются
очень гидрофобными, вероятно, увеличивая склонность Aβ42 к агрегации. Например, Jarett et al. показали, что Aβ42 очень быстро образует агрегаты in vitro по сравнению с Aβ-40, что приводит к предположению, что более длинные формы Aβ могут быть важными патологическими белками, вовлеченными в
первоначальный посев нейритных бляшек при болезни Альцгеймера (Jarett et al., Biochemistry 32, 469397 (1993); Jarrett et al. Ann. N. Y. Acad. Sci. 695, 144-48 (1993)).
Эта гипотеза была далее подтверждена недавним анализом вклада специфических форм Aβ в случае генетических семейных форм болезни Альцгеймера («FAD»). Например, мутантная форма APP
«London» (APPV7171), связанная с FAD, селективно повышает продуцирование форм Aβ42/43 по срав-2-
012325
нению с Aβ40 (Suzuki et al., Science 264, 1336-40 (1994)), в то время как мутантная форма APP «Swedish»
(APPK670N/M671L) повышает уровни как Aβ40, так и Aβ42/43 (Citron et al., Nature, 360, 672-674 (1992);
Cai et al., Science 259, 514-16, (1993)). Также было установлено, что связанные с FAD мутации в генах
пресенилина-1 («PS1») или пресенилина-2 («PS2») приводят к селективному увеличению продуцирования Aβ42/43, но не Aβ40 (Borchelt et al., Neuron, 17, 1005-13 (1996)). Этот факт подтвердился на моделях
трансгенных мышей, экспрессирующих PS мутанты, что показывает селективное увеличение Aβ42 в
мозгу (Borchelt, op cit; Duff et al., Neurodegeneration 5(4), 293-98 (1996)). Таким образом, основная гипотеза, рассматривающая этиологию болезни Альцгеймера, заключается в том, что увеличение образования
или высвобождения Aβ42 является решающим событием в патологии болезни.
Эпидемиологические исследования показывают, что субъекты с повышенными уровнями холестерина характеризуются повышенным риском заболеть болезнью Альцгеймера (Notkola et al., Neuroepidemiology 17(1), 14-20 (1998); Jarvik et al., Neurology 45(6), 1092-96 (1995)). В добавление к данным, предполагающим, что повышенные уровни Aβ ассоциируются с болезнью Альцгеймера, были выявлены и
другие факторы влияния окружающей среды и генетического риска. Например, существует взаимосвязь
между содержанием холестерина в сыворотке и возникновением и патофизиологией болезни Альцгеймера. Лучше всего изучен полиморфизм гена аполипопротеина Е («ApoE»); было установлено, что субъекты, гомозигоидные для ε4 изоформы ApoE (ароЕ4) постоянно рискуют заболеть болезнью Альцгеймера
(Strittmatter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90:1977-81 (1993)). Из-за того, что ApoE является белком
переноса холестерина, некоторые группы характеризовались корреляцией между риском развития болезни Альцгеймера и циркулирующими уровнями холестерина (Mahley, Science 240, 622-30 (1998); Saunders
et al., Neurology 43, 1467-72 (1993); Corder et al., Science 261, 921-23 (1993); Jarvik et al. Ann. N. Y. Acad.
Sci. 826, 128-46 (1997)). Более того, нагрузка холестерина повышает продуцирование Aβ белка (Simons et
al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 95, 6460-64 (1998)), в то время как фармакологическое восстановление холестерина ингибитором HMG СоА редуктазы снижает уровни Aβ-40 и Aβ-42 (Fassbender et al., Proc. Nat'l
Acad. Sci. USA, 98, 5856-61 (2001)) in vitro. С этими данными согласуются результаты эпидемиологических исследований, которые показали, что обработка некоторыми ингибиторами HMG СоА редуктазы,
обычно используемыми для нормализации уровней холестерина у людей, снижает преобладание заболеваний болезнью Альцгеймера (Wolozin et al., Arch. Neurol. 57, 1439-43 (2000); Jick et al., Lancet 356, 162731 (2000)). Вместе эти данные предполагают связь между регулированием уровня холестерина и болезнью Альцгеймера. Кроме того, была показана связь с сердечными болезнями (обсуждается ниже).
β-амилоидный пептид (Aβ) представляет собой пептид, содержащий 39-43 аминокислот, полученный протеолизом из «большого» белка, известного как «белковый предшественник β-амилоида»
(«βAPP»). Мутации в βAPP приводят к семейным формам болезни Альцгеймера, синдрому Дауна, церебральной амилоидной ангиопатии и старческой деменции, характеризующихся церебральным отложением бляшек, состоящих из Aβ фибрилл и других компонентов, которые описаны подробно ниже. Известные мутации в APP, ассоциированные с болезнью Альцгеймера, возникают вблизи сайтов расщепления β- и γ-секретазы или в Aβ. Например, положение 717 находится вблизи сайта расщепления γсекретазы APP при превращении его в Aβ, а положения 670/671 - вблизи сайта расщепления β-секретазы.
Мутации в любом из этих остатков могут привести к болезни Альцгеймера, предположительно, из-за
того, что они вызывают увеличение количества 42/43 аминокислотной формы Aβ, полученного из APP.
Семейная форма болезни Альцгеймера встречается только у 10% субъектов.
Большинство случаев заболевания болезнью Альцгеймера составляют спорадические случаи, когда
в APP и Aβ не происходит мутаций.
Структура и последовательность Aβ-пептидов различной длины хорошо известны. Такие пептиды
могут быть получены известными методами или экстрагированы из мозга известными методами (например, Glenner and Wong, Biochem. Biophys. Res. Comm. 129, 885-90 (1984); Glenner and Wong, Biochem.
Biophys. Res. Comm. 122, 1131-35 (1984)). Кроме того, различные формы пептидов являются коммерчески доступными.
Используемые здесь термины «β-амилоид», «амилоид-β» и т.п. относятся к β-амилоидным белкам
или пептидам, белкам или пептидам β-амилоидного предшественника, промежуточным соединениям и
их модификациям и фрагментам, если не оговорено иное. В частности, «Aβ» относится к любому пептиду, полученному протеолитической обработкой генного продукта, особенно пептидов, которые ассоциированы с амилоидными патологиями, включая Aβ1-39, Aβ1-40, Aβ1-41, Aβ1-42 и Aβ1-43. Для удобства
номенклатуры «Aβ1-42» может быть назван в данном изобретении «Aβ(1-42)» или просто «Aβ42» или
«Aβ42» (точно также и для других амилоидных пептидов, обсужденных в данном описании). Используемые здесь термины «β-амилоидный», «амилоид-β» и «Aβ» являются синонимами. Если иное не указано,
термин «амилоид» относится к амилоидогенным белкам, пептидам, их фрагментам, которые могут быть
растворимыми (например, мономерными или олигомерными) или нерастворимыми (например, имеющими фибриллярную структуру или в амилоидной бляшке). См., например, М.P. Lambert et al., Proc. Nat'l
Acad. Sci. USA, 95, 6448-53 (1998).
-3-
012325
Согласно некоторым аспектам изобретения β-амилоид является пептидом, содержащим 39-43 аминокислоты, или амилоид-β представляет собой амилоидогенный пептид, полученный из βAPP. βамилоидные болезни, которые рассматриваются в данном изобретении, включают возрастное ухудшение
познавательной способности, ранние стадии болезни Альцгеймера, что наблюдается в небольшом снижении познавательной способности («MCI»), сосудистую деменцию или болезнь Альцгеймера («AD»),
которая может быть спорадической (ненаследственной) AD или семейной (наследственной) AD. βамилоидная болезнь может быть также церебральной амилоидной ангиопатией («САА») или наследственным внутримозговым кровотечением. β-амилоидная болезнь может быть старческой дименцией, синдромом Дауна, миозитом («IBM») или возрастной макулярной дегенерацией («ARMD»).
Данное изобретение относится также к применению некоторых соединений, обозначенных как
«первый агент», примеры которых включают замещенные и незамещенные алкансульфоновые кислоты,
имеющие структуру
в сочетании со вторым агентом, биологически активным для лечения или профилактики β-амилоидных
болезней, включая болезнь Альцгеймера или церебральную амилоидную ангиопатию. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям для профилактики или лечения таких болезней и способам получения и применения таких композиций.
Изобретение относится к фармацевтическим композициям и способам их применения для лечения
β-амилоидных болезней. Фармацевтические композиции включают первый агент для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, например, для профилактики или ингибирования образования βамилоидных фибрилл, нейродегенерации и клеточной токсичности. Фармацевтическая композиция содержит также второй агент, который является активным фармацевтическим ингредиентом, т.е. второй
агент является терапевтическим и его функция активнее функции неактивного ингредиента, такого как
фармацевтический носитель (или средство доставки), стабилизатор, разбавитель или буфер. Второй агент
может быть пригодным для лечения или профилактики β-амилоидной болезни или другой неврологической болезни. Первый и второй агенты могут проявлять биологическое действие по сходным или несвязанным механизмам действия; или один или оба из первого и второго агентов могут проявлять биологическое действие по многим механизмам. Фармацевтическая композиция может также содержать третье
соединение, причем третье соединение может иметь те же характеристики, что и второй агент.
Очевидно, что фармацевтические композиции, описанные в данном изобретении, могут содержать
первый и второй, третий агенты в одном и том же фармацевтически приемлемом носителе или в разном
для каждого варианта фармацевтически приемлемом носителе. Следует также иметь в виду, что первый,
второй, третий агенты могут быть введены одновременно или последовательно. Или же первый и второй
агент могут быть введены одновременно, а третий или дополнительный агенты могут быть введены до
или после первых двух агентов.
Термин «комбинация», как в выражении «первый агент в комбинации со вторым агентом», обозначает совместное введение первого и второго агентов, которые, например, могут быть растворены или
перемешаны в одном и том же фармацевтически приемлемом носителе, или введение первого агента с
последующим введением второго агента, или введение второго агента с последующим введением первого агента. Следовательно, данное изобретение относится к способам комбинированного терапевтического лечения и комбинированным фармацевтическим композициям.
Термин «сопутствующий», как в выражении «сопутствующее терапевтическое лечение», включает
введение агента в присутствии второго агента. Сопутствующее терапевтическое лечение включает способы, в которых первый, второй, третий или дополнительный агенты вводятся совместно. Сопутствующее терапевтическое лечение включает также способы, в которых первый и дополнительные агенты вводятся в присутствии второго или дополнительного агента, причем второй или дополнительные агенты,
например, могут быть введены заранее. Сопутствующее терапевтическое лечение может осуществляться
постадийно разными медиками. Например, один врач может прописать введение субъекту первого агента, а второй - введение субъекту второго агента, и стадии введения могут осуществляться в одно и то же
время, почти в одно и то же время или в разное время, но так, чтобы первый агент (и дополнительные
агенты) содержались в организме после введения в присутствии второго агента (и дополнительных агентов). Медик и субъект могут быть одной и той же особой (например, человеком).
Комбинация агентов, используемых в способах и композициях по изобретению, описанных в данном изобретении, может давать терапевтический аддитивный или синергический эффект в условиях или
при лечении болезней, на которые направлено данное лечение. Комбинация агентов, используемых по
изобретению, может также снижать вредный эффект, связанный по меньшей мере с одним агентом, вводимым в отдельности или без другого(их) агента(ов) конкретной фармацевтической композиции. Например, токсичность побочного действия одного агента может быть ослаблена другим агентом композиции,
что позволит ввести большие дозы, совместимые с пациентом, и улучшить терапевтический результат.
Врачи могут достигнуть клинического повышения эффективности известных лекарств, вводимых в
меньших дозах, снижая тем самым побочные эффекты. Аддитивный или синергический эффекты, польза
-4-
012325
и преимущества композиций относятся к классам терапевтических агентов, структурным или функциональным, или к самим индивидуальным соединениям.
Данные способы и композиции относятся к лечению β-амилоидных болезней и состояний. Как уже
указывалось, различные болезни и состояния включают несколько биологических способов, которые
вызывают клинически признанное заболевание или состояние. Изобретатели полагают, что нацеленность
на более чем один из этих биологических процессов одновременно при помощи сопутствующих методов, описанных в данном изобретении, улучшает терапевтическое действие индивидуальных агентов.
Например, усиление активности ацетилхолина, секретированного остающимися холинергическими нейронами путем введения ингибиторов холинэстеразы и в то же самое время путем предотвращения дальнейшей нейронной потери за счет стимуляции клиренса Aβ из мозга, очень желательно по сравнению с
применением только одного отдельного лечения. Поскольку терапевтические цели, указанные здесь, являются независимыми и все же взаимосвязанными, желательно воздействовать на более чем одну цель в
одно и то же время. Два агента, введенные одновременно и действующие на разные цели, могут действовать синергически для модификации или улучшения течения болезни или симптомов. Соответственно,
один вариант изобретения относится к сопутствующей терапии при применении описанной в данном
изобретении композиции. Согласно другому варианту комбинация первого агента по изобретению со
вторым (терапевтическим) агентом улучшает терапевтический профиль, например профиль, который
больше, чем сумма всех преимуществ от лечения каждым из агентов в отдельности.
Кроме того, пациенты, болеющие болезнью Альцгеймера, часто страдают от вторичных состояний,
таких как депрессия, бред и психоз или нарушение сна. С точки зрения легкости изготовления, совместимости с пациентом и простоты введения лучше соединять все лекарства, которые принимает больной
болезнью Альцгеймера, в один комбинированный препарат. Из-за ухудшения познавательной способности соблюдение больными режима лечения очень затруднено и поэтому способы и композиции по изобретению особенно предпочтительно применять для лечения этих больных, потому что эта комбинация
лекарств вряд ли приведет к пропуску приема лекарства, и пациенты лучше соблюдают режим и схему
лечения. Комбинация соединений по изобретению (т.е. первых агентов композиций, описанных ниже) с
другими паллиативными лекарственными веществами, которые могут применяться для других болезней,
является еще одним преимуществом данного изобретения.
Согласно одному варианту фармацевтические композиции, описанные в данном изобретении, предотвращают или ингибируют превращение амилоидного белка в нерастворимые фибриллы, которые in
vivo осаждаются в различных органах, или они делают обратимым отложение осадков, которые уже есть
у субъектов. Согласно другому варианту соединение по изобретению может препятствовать связыванию
или прилипанию амилоидного белка в его растворимой олигомерной форме или в его фибриллярной
форме к поверхности клеток и повреждению клеток или ослаблять токсичность. Согласно еще одному
варианту композиция может блокировать вызванную амилоидом клеточную токсичность или активацию
микроглии. Согласно еще одному варианту активное соединение может блокировать вызванную амилоидом нейротоксичность.
Фармацевтические композиции по изобретению могут быть введены терапевтически или профилактически для лечения болезней, связанных с образованием β-амилоидных фибрилл, их агрегацией или
осаждением. Фармацевтические композиции по изобретению могут ослаблять течение болезни, ассоциируемой с β-амилоидом по любому из следующих механизмов (этот перечень является иллюстративным,
но не ограничивающим): замедление скорости образования β-амилоидных фибрилл или осадка; уменьшение степени осаждения β-амилоида; ингибирование, уменьшение или предотвращение образования βамилоидных фибрилл; ингибирование нейродегенерации клеточной токсичности, вызванного βамилоидом; ингибирование вызванного β-амилоидом воспаления или усиление клиренса β-амилоида из
мозга.
Данное изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения β-амилоидной болезни, включающей первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый
агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом.
Кроме того, изобретение включает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или
клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом, что вызывает стабилизацию познавательной способности и предотвращение, замедление или остановку дальнейшего ослабления познавательной способности.
Согласно другому варианту изобретение включает фармацевтическую композицию для лечения βамилоидной болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом, при этом повседневная активность, снижающаяся при β-амилоидной болезни, повышается или
-5-
012325
стабилизируется.
Согласно еще одному варианту изобретение включает фармацевтическую композицию для лечения
β-амилоидной болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарственным
веществом, при этом фармацевтическая композиция ингибирует взаимодействие между амилоидогенным
белком игликопротеином или протеогликаном основания мембраны, предотвращая или ингибируя осаждение β-амилоида.
Дальнейшие аспекты изобретения включают фармацевтическую композицию для лечения βамилоидной болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом, что вызывает изменение концентрации амилоида-β или тау в CSF субъекта по сравнению с
субъектом, не подвергающимся лечению.
Также изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной
болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем
первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом,
что вызывает предотвращение или ингибирование образования β-амилоидных фибрилл, нейродегенерации или клеточной токсичности у субъекта.
Изобретение также включает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной болезни,
включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый
агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом, что вызывает стабилизацию познавательной функции и предотвращение, замедление, остановку дальнейшего
ухудшения познавательной способности.
Согласно еще одному аспекту изобретение также включает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом, что вызывает усиление или стабилизацию повседневной активности, снижающейся при β-амилоидном заболевании у субъекта.
Изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной
болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем
первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом,
что вызывает ингибирование взаимодействия между амилоидогенным белком и гликопротеином или
протеогликановым компонентом базальной мембраны и тем самым предотвращение или ингибирование
осаждения амилоида у субъекта.
Далее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения β-амилоидной
болезни, включающую первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, причем
первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарственным веществом,
что вызывает изменение концентрации амилоида-β или тау в CSF субъекта по сравнению с субъектом, не
подвергающимся лечению.
Фармацевтические композиции по изобретению могут быть эффективны в процессе регулирования
отложения β-амилоида или после его попадания в мозг (вслед за проникновением через кровяной барьер
мозга) или на периферии. Действуя на периферии, соединение в фармацевтической композиции может
изменять равновесие Aβ между мозгом и плазмой, благоприятствуя выведению Aβ из мозга. Повышение
степени выведения Aβ из мозга приведет к уменьшению концентрации Aβ в мозгу и тем самым уменьшению осаждения Aβ. Альтернативно, соединения, проникающие в мозг, могут регулировать осаждение
путем непосредственного воздействия на Aβ в мозгу, например, путем поддержания его в нефибриллярной форме или улучшения его клиренса из мозга или путем защиты мозговых клеток от вредного действия Aβ. Эти соединения могут также предотвращать взаимодействие Aβ мозга с поверхностью и тем самым предотвращать нейротоксичность или воспаление.
Согласно некоторым аспектам фармацевтические композиции по изобретению содержат первый
агент, который предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл в мозгу или другом
органе (действуя локально) или во всем теле (действуя системно). Не ограничиваясь какой-либо теорией,
изобретатели полагают, что используемый первый агент может ингибировать или уменьшать взаимодействие между β-амилоидом и компонентом поверхности клеток, например, глюкозаминогликановым или
протеогликановым компонентом базальной мембраны, и что ингибирование или уменьшение этого
взаимодействия, в первую очередь, отвечает за наблюдаемые нейропротекторные эффекты. Например,
первый агент может также предотвращать связывание или прилипание к поверхности клеток βамилоидного пептида, а известно, что этот процесс вызывает повреждение или токсичность клеток. Точно так же первый агент может блокировать вызванную амилоидом клеточной токсичности или актива-6-
012325
цию микроглии или вызванную амилоидом нейротоксичность или ингибировать воспаление, вызванное
β-амилоидом. Первый агент может также снижать скорость или степень β-амилоидной агрегации, образования фибрилл или отложение, или первый агент уменьшает степень отложения β-амилоида. Первый
агент может также ингибировать, уменьшать или предотвращать образование β-амилоидных фибрилл.
Кроме того, первый агент может усилить клиренс β-амилоида из мозга, или первый агент может
благоприятно изменять равновесие β-амилоида между мозгом и плазмой со снижением количества βамилоида в мозгу. Первый агент может снижать уровень β-амилоидных пептидов, например, Aβ40 и
Aβ42 в CSF и в плазме, или первый агент может снижать уровень β-амилоидных пептидов, например,
Aβ40 и Aβ42 в CSF и увеличивать этот уровень в плазме.
Независимо от конкретного механизма, по которому первый агент проявляет биологическое действие, он предотвращает или лечит β-амилоидные болезни, такие как, например, болезнь Альцгеймера.
Первый агент может делать обратимым или способствовать отложению амилоида у субъекта, имеющего
отложения амилоида, или первый агент может способствовать клиренсу бляшек или замедлять осаждение у субъекта, имеющего отложения амилоида. Например, первый агент уменьшает концентрацию βамилоида в мозгу субъекта по сравнению с субъектом, не подвергающимся лечению, и первый агент
проникает в мозг, т.е. пересекает кровяной барьер в мозгу («ВВВ»), где оказывает биологическое воздействие. Следовательно, первый агент может поддерживать растворимый амилоид в нефибриллярной форме. Соответственно, первый агент может повышать скорость клиренса растворимого амилоида из мозга
субъекта по сравнению с субъектом, не получающим лечения.
Изобретение также включает способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, и указанный
первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию
или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарством.
К изобретению относится также способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, и указанный
первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию
или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает стабилизацию познавательной функции или предотвращение, замедление или остановку дальнейшего ухудшения познавательной функции.
Точно также изобретение предусматривает способ сопутствующего терапевтического лечения
субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, и указанный первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарством, что
вызывает улучшение или стабилизацию повседневной деятельности, снижающейся под действием указанной β-амилоидной болезни.
Согласно другому варианту изобретение охватывает способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает ингибирование взаимодействия между амилоидогенным белком и гликопротеиновым
или протеогликановым компонентом базисной мембраны указанной фармацевтической композицией и
тем самым предотвращение или ингибирование осаждения амилоида.
Согласно еще одному варианту изобретение предусматривает способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом носителе, и указанный первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных
фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает изменение амилоида-β или тау в CSF указанного субъекта по сравнению с субъектом, не подвергающимся лечению.
Изобретение предусматривает также способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта,
включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической
-7-
012325
композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная фармацевтическая
композиция содержит первый агент и по меньшей мере два вторых агента в фармацевтически приемлемом носителе, и указанный первый агент предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных
фибрилл, нейродегенерацию или клеточную токсичность, и каждый из указанных вторых агентов является лекарственным веществом.
Согласно другому аспекту изобретение предусматривает способ сопутствующего терапевтического
лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает предотвращение или ингибирование образования β-амилоидных фибрилл, нейродегенерации или клеточной токсичности у указанного субъекта.
Согласно другому аспекту изобретение предусматривает способ сопутствующего терапевтического
лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает стабилизацию познавательной функции и предотвращение, замедление или остановку дальнейшего ухудшения познавательной функции у указанного субъекта.
Согласно другому аспекту изобретение предусматривает способ сопутствующего терапевтического
лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает улучшение или стабилизацию повседневной деятельности, снижающейся под
действием указанной β-амилоидной болезни.
Согласно другому варианту изобретение охватывает способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает ингибирование взаимодействия между амилоидогенным белком и гликопротеиновым или протеогликановым компонентом базисной мембраны указанной фармацевтической композицией и тем самым предотвращение или ингибирование осаждения амилоида.
Согласно другому варианту изобретение охватывает способ сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и второй агент в фармацевтически приемлемом
носителе, и указанный первый агент связывает β-амилоид, а второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает изменение амилоида-β или тау в CSF указанного субъекта по сравнению с субъектом, не подвергающимся лечению.
Согласно еще одному варианту изобретение относится к способу сопутствующего терапевтического лечения субъекта, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества
фармацевтической композиции для лечения или профилактики β-амилоидной болезни, причем указанная
фармацевтическая композиция содержит первый агент и по меньшей мере два вторых агента в фармацевтически приемлемом носителе, причем указанный первый агент связывает β-амилоид, а указанный
второй агент является терапевтическим лекарством, что вызывает у указанного субъекта предотвращение
или ингибирование образования β-амилоидных фибрилл, нейродегенерации или клеточной токсичности.
Используемый термин «комбинационная терапия» или «терапевтическая комбинация» означает
введение двух или более «первых агентов», например соединений формул (I-X), или введение одного или
более первых агентов, таких как соединения формул (I-X), в сочетании с другими методами лечения болезни Альцгеймера с применением веществ, отличающихся от первого агента, как описано ниже, например, ингибиторов биосинтеза холестерина или агентов, снижающих уровень липидов, для профилактики
или лечения болезни Альцгеймера, например, путем снижения уровня одного или нескольких βамилоидных пептидов, регулирования образования β-амилоидных пептидов или регулирования уровня
изоформы 4 ApoE в крови или в мозгу. Такое введение включает совместное введение этих терапевтических агентов практически одновременно, например, в виде одной таблетки или капсулы с фиксированным отношением активных агентов или в виде множества отдельных капсул, содержащих каждый терапевтический агент. Такое введение включает также последовательное применение каждого типа терапевтического агента. В любом случае способ комбинационной терапии будет иметь преимущества при лече-8-
012325
нии состояния. Потенциальное преимущество комбинационной терапии может заключаться в снижении
требуемого количества индивидуального соединения или общего количества терапевтических соединений, которые эффективны при лечении такого состояния. Используя комбинацию терапевтических агентов, можно уменьшить побочные эффекты от применения индивидуальных соединений по сравнению с
монотерапией, что может повысить удобство для пациентов. Можно выбрать такие терапевтические
агенты, которые обеспечивают более широкий спектр дополнительных эффектов или дополнительное
действие.
Согласно изобретению «комбинационная терапия» включает также одновременное совместное введение первого агента (например, алкансульфоновой кислоты) и второго агента; этот термин включает
также способы, включающие стадии введения первого агента с последующим введением второго агента,
или введение второго агента с последующим введением первого агента.
Согласно другому аспекту изобретения β-амилоидный пептид является пептидом, содержащим 3943 аминокислоты, который представляет собой амилоидогенный пептид, полученный из βAPP.
Термин «β-амилоидная болезнь» (или «болезнь, связанная с β-амилоидом», эти термины являются
синонимами) относится к умеренному познавательному ухудшению, сосудистой деменции, болезни
Альцгеймера, включая спорадическую (ненаследственную) болезнь Альцгеймера и семейную (наследственную) болезнь Альцгеймера, церебральной амилоидной ангиопатии или наследственному мозговому
кровоизлиянию, старческой деменции, синдрому Дауна, миозиту телец включений или возрастной макулярной дегенерации.
Согласно другому варианту способ используют для лечения болезни Альцгеймера (например, спорадической или семейной болезни Альцгеймера). Способ можно также использовать профилактически
или терапевтически для лечения других клинических проявлений осаждения β-амилоида, например, у
больных синдромом Дауна и у субъектов с церебральной амилоидной ангиопатией («САА») и наследственным мозговым кровоизлиянием.
Церебральная амилоидная ангиопатия («САА») относится к специфическому осаждению амилоидных фибрилл в стенках артерий мягкой и паутинной оболочки мозга и кортикальных артерий, артериол и
в капиллярах и венах. Это обычно связано с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна и обычным старением, а также с различными семейными условиями, связанными с ударом или деменцией (см. Frangione
et al., Amyloid: J. Protein Folding Disord. 8, Suppl. 1, 36-42 (2001)). САА может возникать спорадически
или быть наследственной. Были идентифицированы многочисленные сайты мутации в Аβ- или APP-гене,
и они клинически связаны с деменцией или мозговым кровоизлиянием.
Примеры САА расстройств включают, но не ограничиваются этим, наследственное мозговое кровоизлияние с амилоидозом исландского типа (HCHWA-I), голландский вариант HCHWA (HCHWA-D,
мутация в Аβ), Flemish мутацию Aβ, Arctic мутацию Aβ, Italian мутацию Aβ, Iowa мутацию Aβ, семейную деменцию британского типа и семейную деменцию датского типа.
Кроме того, анормальная аккумуляция APP и β-амилоидного белка в мышечных волокнах участвует в патологии спорадического миозита телец включения («IBM») (Askanas et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 93, 1314-19 (1996); Askanas et al., Current Opinion in Rheumatology 7, 486-96 (1995)). Соответственно, соединения по изобретению можно использовать профилактически или терапевтически при лечении
расстройств, когда β-амилоидный белок анормально осаждается в неневрологических участках, например, при лечении IBM путем доставки соединений в мышечные волокна.
Дополнительно было установлено, что Aβ связан с анормальным внеклеточным отложением, известным как друзы, которые накапливаются вдоль базальной поверхности ретинального пигментного
эпителия у отдельных субъектов с возрастной макулярной дегенерацией (ARDM). ARDM является причиной необратимой потери зрения у пожилых людей. Полагают, что отложение Aβ может быть важным
компонентом местных воспалений, которые вызывают атрофию ретинального пигментного эпителия,
биогенезис друз и патогенез ARDM (Johnson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99 (18), 11830-5 (2002)).
Следовательно, изобретение относится также к лечению или профилактике возрастной макулярной дегенерации.
Изобретение предусматривает фармацевтические композиции и способы их использования для лечения β-амилоидных болезней. Фармацевтические композиции включают первый агент, который, например, предотвращает или ингибирует образование β-амилоидных фибрилл, нейродегенерацию или
клеточную токсичность. Фармацевтическая композиция содержит также второй агент, который является
активным фармацевтическим ингредиентом; т.е. второй агент является терапевтическим и его функция
превосходит функцию неактивного ингредиента, такого как фармацевтический носитель, консервант,
разбавитель или буфер. Второй агент может быть пригодным при лечении или профилактике βамилоидной болезни или другой неврологической болезни. Первый и второй агенты могут проявлять
биологическое действие по сходному или несвязанным механизмам действия, или же один или оба из
первого и второго агентов могут проявлять биологическое действие по многим механизмам действия.
Фармацевтическая композиция может также включать третье соединение, которое может иметь те же
характеристики, что и второй агент. «Второй агент» выбирают согласно следующим терапевтическим
-9-
012325
принципам.
Фармакологическое лечение болезни Альцгеймера и других β-амилоидных болезней
Патология болезни Альцгеймера включает ряд характеристических компонентов, включая, но не
ограничиваясь этим, осаждение β-амилоида, например, образование диффузных бляшек и старческих
бляшек, цитоскелетную патологию, например, гиперфосфорилированные тау и спаренные геликоидальные волокна, холинергическую дегенерацию, например, потерю базальных холинергических нейронов и
понижение ChAT в кортексе и перегородке, воспаление, такое как глиозис, познавательную и поведенческие дисфункции, такие как потеря познавательной способности, апатия и агрессия. Для отражения различных характеристик болезни существуют разнообразные терапевтические подходы к болезни. К настоящему времени клинически достоверные способы лечения болезни Альцгеймера ограничиваются
симптоматическим вмешательством, таким как лечение энхансерами познавательной функции, например, ингибиторами ацетилхолинэстеразы, ацетил/бутирилхолинэстеразы или агонистами рецепторов
NMDA. Не существует способов лечения, которые замедляют познавательное ухудшение у субъектов.
В настоящее время разработано несколько стратегических подходов к выбору терапевтических
агентов, изменяющих ход болезни. Они включают, например, следующее: ингибирование β- и γсекретазы, которые генерируют Aβ из APP; предотвращение олигомеризации или фибриллогенеза Aβ
или увеличение его клиренса из мозга, например, путем активной или пассивной иммунизации Aβ, путем
введения антифибриллогенных малых молекул или пептидов, или путем образования хелатов с металлами, блокирования или ингибирования воспаления и нейродегенерации, вызванной Аβ, снижения образования фосфорилированного тау-белка в нейрофибриллярных переплетениях и модулирования гомеостаза
холестерина. Предложен ряд соединений с антиокислительными, нейрозащитными или нейротрофическими свойствами для лечения болезни Альцгеймера, многочисленные подходы к их выбору, описанные
в данном патенте, и другие входят в объем данного изобретения. См., например, J. Hardy, et al., Science
297, 353-56 (2002).
Известны многие различные механизмы терапевтического лечения болезни Альцгеймера. Например, вакцинация может стимулировать иммунный ответ против Aβ-пептидов, ведущий к клиренсу пептидов из организма. Ингибиторы β- и γ-секретазы могут привести к сниженному получению Aβпептидов. Медные/цинковые хелаторы, такие как клиохинол, могут уменьшить взаимодействие меди и
цинка с Aβ-пептидами, приводя к клиренсу амилоидных бляшек. Активация α-секретазы, которая расщепляется в Aβ, как ожидается, уменьшит продуцирование Aβ и является еще одной целью.
Пути, участвующие в нейродегенерации или апоптозе, также являются мишенями для терапевтического вмешательства. Например, фосфорилирование поли-Q-атаксина Akt-киназой требуется для нейродегенерации, следовательно, Akt-киназа может быть мишенью. Orr et al., Neuron 38(3) 375-87 (2003);
Zoghbi et al., Cell 113(4), 457-68 (2003). Tay обнаружен в гиперфосфорилированных нейрофибриллярных
переплетениях и ингибирование киназ, вовлеченных в его фосфорилирование, например, GSK-3, также
является мишенью. См., например, WO 96/35126.
Многие подходы к таргетирированию амилоида включают, наряду с другим, предотвращение окислительного повреждения при помощи антиоксидантов (например, метионина, куркумина), ингибирование образования или осаждения амилоида при помощи антиагрегирующих агентов (например, пептидов,
хелаторов с металлами, глюкозаминогликановых миметиков), изменение метаболизма APP (например,
при помощи ингибиторов вортманнина или секретазы), сдвиг равновесия амилоидогенных пептидов на
периферии и в центральной нервной системе (например, антителами, вакцинами, гелсолином, GM1, IGF1) и уменьшение активации микроглии, приводящей к воспалению (например, Fc, TGFβ1).
Терапевтический подход к лечению может использовать антифибриллогенные агенты. Например,
терапевтический агент может связываться Aβ для предотвращения или ингибирования образования фибрилл. Например, участок 16-21 в Aβ-пептиде, KLVFFA, отвечает за образование β-sheet структур и межмолекулярные взаимодействия Aβ во время фиброгенеза. Пептиды из этого участка подверглись разносторонним испытаниям на антифибриллогенную активность (Tjernberg L.O., et al., J. Biol. Chem. 272
12601-05 (1997); Findeis et al., Biochemistry, 38, 6791-6800 (1999); Findeis et al., Amyloid, 231-41 (Dec.
2001)). Агенты, включающие непептидные вещества, по изобретению можно использовать как антифибриллогенные агенты таким образом. Неамилоидогенный путь можно регулировать методами фосфорилирования. Изменение уровня и активности РКС является одним из наиболее согласующихся открытий в
мозговой ткани больных болезнью Альцгеймера. Кроме того, механизмы измененной сигнальной трансдукции, особенно РКС, обнаружены в периферических тканях субъектов, больных болезнью Альцгеймера, что предполагает, что эти изменения не являются вторичными по отношению к потере нейронов и
могут непосредственно участвовать в патогенезе болезни Альцгеймера. Измененный метаболизм APP
является ключевым событием в гипотезе амилоидного каскада. Изучение роли РКС в регулируемой обработке APP позволило установить, что амилоидогенный путь образования Aβ и неамилоидогенный путь
α-секретазы оказываются сбалансированными. Целью фосфорилирования РКС является не молекула
APP сама по себе, все же возможность, что РКС таргетирует непосредственно α-секретазу или другие
- 10 -
012325
ключевые клеточные факторы, возможно связанные с везикулярным трафиком APP или α-секретазы, не
была реализована. М. Racchi, et al., Experimental Gerontology 38, 145-57 (2003). Нейрофибриллярные переплетения состоят из гиперфосфорилированных тау-белков. Одна или несколько киназ принципиально
отвечают за инициирование гиперфосфорилирования тау-белка in vivo, что приводит к его очевидной
диссоциации из микротрубочек и агрегации в нерастворимые спаренные геликоидальные волокна.
Гиперфосфорилирование тау-белков может лежать в основе образования переплетений при болезни
Альцгеймера. Калпаин отвечает за расщепление р35 и обработка клеток агрегатами Aβ может запустить
активный р35 и последующее опосредованное cdk5 фосфорилирование тау и возможно других цитоплазменных субстратов. D. Selkoe, Physiol. Rev. 81(2), 741-66 (2001). Подходящие для применения в данном изобретении агенты могут таргетировать любой из этих биологических процессов.
В некоторых случаях одно лекарство может иметь целью белее чем один терапевтический подход.
Например, исследования позволили предположить, что ингибиторы бутирилхолинэстеразы, которые ингибируют активность холинэстеразного фермента, также ассоциированы с Aβ (Darvesh et al., Cell Mol.
Neurobiol. 21, 285-96 (2001)).
Фенсерин, ингибитор ацетилхолинэстеразы, может ингибировать активность ацетилхолинэстеразного фермента и процессинг или трансляцию APP мРНК. Лекарства, снижающие уровень холестерина,
такие как статины, например, аворстатин, могут ускорять процессинг белка предшественника амилоида
при помощи α-секретазы, приводя к сниженному продуцированию Aβ-пептидов. Нестероидные противовоспалительные средства, такие как ибупрофен, флурбипрофен, индометацин и сулиндака сульфид,
могут селективно ингибировать образование пептида Aβ42 в добавление к ингибированию воспаления,
вызванного Aβ. Уменьшение содержания пептида Aβ42, которое происходит в организме трансгенной
мыши при введении флурбипрофена, продаваемого как Ansaid™ (Upjohn, теперь Pfizer, New York, New
York), который находится на фазе II клинических испытаний на людях, проводимых Myriad Genetics, Inc.
(Salt Lake City, Utah), коррелировалось с улучшением памяти и специального обучения.
Изобретение относится также к способу лечения или профилактики болезни, ассоциируемой с βамилоидом, путем введения по меньшей мере двух агентов, каждый из которых является соединением,
проявляющим терапевтический эффект при совместном введении, и пригоден для лечения или профилактики неврологического или психологического состояния или болезни. Первое соединение по изобретению, как описано ниже, может быть алкансульфоновой кислотой, пригодной для лечения или профилактики связанной с наличием β-амилоида болезни. Второе соединение является терапевтическим, т.е.
его функция превышает функцию неактивного ингредиента, такого как фармацевтический носитель,
консервант, разбавитель или буфер. Второе соединение может быть полезно для лечения или профилактики болезни, связанной с наличием β-амилоида, или другой неврологической болезни. Второе соединение может также уменьшать специфические симптомы, которые характерны для болезни Альцгеймера
(например, потерю памяти, беспокойство и т.д.). Первое и второе соединения могут проявлять биологическое действие по сходным или несвязанным механизмам действия, или один или оба агента могут действовать по многим механизмам. Третье соединение может также использоваться в способе по изобретению, причем третье соединение имеет те же свойства, что и второе.
Согласно одному варианту фармацевтические композиции по изобретению получаются таким образом, чтобы их можно было ввести субъекту перорально. Первый агент и указанный второй агент могут
вводиться совместно. Первый агент и второй агент могут модулировать разные биологические процессы
в патогенезе болезни Альцгеймера. Первый агент и второй агент могут действовать на разные цели. Например, первый агент может быть терапевтически пригоден при лечении болезни Альцгеймера, а второй
агент может быть терапевтически пригоден при лечении САА. Первый агент и второй агент могут иметь
различное сродство к связыванию или различные специфичности по отношению к пептидам, белкам или
ферментам, вовлеченным в патогенез болезни Альцгеймера. Первый агент и второй агент, когда они одновременно содержаться в организме субъекта, действуют синергически, уменьшая, ингибируя или
улучшая симптомы патогенеза болезни Альцгеймера.
Термин «субъект» включает живые организмы, в которых может возникнуть амилоидоз или которые восприимчивы к амилоидным болезням, например, к болезни Альцгеймера. Примеры субъектов
включают людей, обезьян, коров, овец, коз, собак, кошек, мышей, крыс и их трансгенные виды. Введение
композиций по изобретению субъекту, подвергающемуся лечению, можно осуществлять по известным
методикам, дозировке и в течение времени, эффективного для модулирования агрегации амилоида или
вызванной амилоидом нейротоксичности у субъекта, как описано ниже.
Эффективное количество терапевтического соединения, необходимого для получения терапевтического эффекта, может меняться в соответствии с такими факторами, как количество амилоида, уже отложившегося на клиническом сайте субъекта, возраст, пол и вес субъекта и способность терапевтического
соединения модулировать агрегацию амилоида у субъекта. Схема лечения может быть подобрана так,
чтобы обеспечить оптимальный терапевтический ответ. Например, ежедневно может вводиться несколько доз или же доза может быть пропорционально уменьшена в зависимости от терапевтической ситуации.
- 11 -
012325
Согласно одному аспекту изобретения субъектом является человек. Например, субъект может быть
человеком старше 40 лет, или человеком старше 50 лет, или человеком старше 60 лет, или даже человеком старше 70 лет. Субъект может быть женщиной, включая женщин в постклимактерическом периоде,
принимающих гормон(эстроген)заменяющую терапию. Субъект может также быть мужчиной. Субъект
может быть человеком, рискующим заболеть болезнью Альцгеймера или предрасположенным к болезни
Альцгеймера. Факторы предрасположенности к болезни Альцгеймера, идентифицированные или предложенные в научной литературе, включают, наряду с другими, генотипное предрасположение субъекта к
болезни Альцгеймера, факторы окружающей среды, влияющие на предрасположенность субъекта к болезни Альцгеймера, историю инфекций, вызванных вирусными и бактериальными агентами, усиливающих предрасположенность к болезни Альцгеймера, и сосудистые факторы, также влияющие на предрасположенность к болезни Альцгеймера. Субъект может также иметь один или более факторов риска заболеть сердечно-сосудистым заболеванием (например, атеросклерозом коронарных артерий, ангиной pectoris и инфарктом миокарда) или сосудисто-мозговой болезнью (например, атеросклерозом внутричерепных и внечерепных артерий, ударом, синкопе, транзиторными ишемическими приступами), такой как
гиперхолестеринемия, гипертония, диабет, вызванная курением болезнь, семейная или более ранняя болезнь коронарных артерий, заболевание сосудов мозга и сердечно-сосудистое заболевание. Гиперхолестеринемия характеризуется общим содержанием холестерина в сыворотке, превышающим примерно
5,2 ммол/л (примерно 200 мг/дл). Полагают, что предрасположенность к болезни Альцгеймера характерна для нескольких генотипов. Они включают такие генотипы, как антисмысловые мутации пресенилина1, пресенилина-2 и белка предшественника амилоида (APP), связанные с семейной болезнью Альцгеймера и генотипы α-2-макроглобулина и LPR-1, которые, как полагают, повышают риск заболеть спорадической (позднее начало) болезнью Альцгеймера. Е. van Uden et al., J. Neurosci. 22(21), 9248-304 (2002); J. J.
Goto et al., J. Mol. Neurosci. 19(1-2), 37-41 (2002). Другой генетический фактор риска развития болезни
Альцгеймера составляют варианты ApoE, гена, который кодирует аполипопротеин Е (особенно, генотип
ApoE4), компонент липопротеиновой частицы низкой плотности. W.J. Strittmatter et al., Annu. Rev. Neurosci. 19, 53-77 (1996). Молекулярные механизмы, по которым различные аллели ApoE изменяют вероятность развития болезни Альцгеймера, неизвестны, однако роль ApoE в метаболизме холестерина подтверждается целым рядом доказательств, связывающих метаболизм холестерина с болезнью Альцгеймера. Например, постоянное применение лекарств, снижающих уровень холестерина, таких как статины,
недавно был ассоциирован с низкой вероятностью возникновения болезни Альцгеймера и, как было показано, лекарства, снижающие уровень холестерина, снижают патологии APP у трансгенных мышей. Эти
и другие исследования позволяют предположить, что холестерин может влиять на процессинг APP.
Предполагают, что факторы окружающей среды способствуют возникновению у субъекта болезни Альцгеймера, включая действие алюминия, хотя эпидемиологическая ситуация находится под сомнением.
Кроме того, более ранее инфицирование некоторыми вирусными или бактериальными агентами может
влиять на предрасположенность субъекта к болезни Альцгеймера, включая вирус герпеса и вирус chlamydia pneumoniae. Наконец, другие факторы предрасположенности к болезни Альцгеймера могут включать факторы риска развития сердечно-сосудистых болезней или болезней сосудов мозга, курение, гипертонию и диабет. Как «риск возникновения болезни Альцгеймера» можно рассматривать и другие
факторы предрасположенности, не перечисленные выше и все же идентифицированные, в том числе повышенный риск возникновения болезни Альцгеймера в результате травмы головы, применения лекарств,
диеты или определенного стиля жизни.
Способы по изобретению можно использовать для предотвращения, лечения болезни Альцгеймера,
смягчения симптомов болезни Альцгеймера, регулирования образования или уровня β-амилоидных (Аβ)
пептидов или регулирования количества изоформы 4 ApoE в крови или мозгу субъекта. Согласно одному
варианту у человека происходит одна или несколько мутаций в генах, которые кодируют белок предшественника β-амилоида, пресенилин-1 или пресенелин-2. Согласно другому варианту у человека есть ε4ген аполипопротеина. Согласно другому варианту у человека есть семейная история болезни Альцгеймера или деменции. Согласно еще одному варианту у субъекта наблюдается нормальное или низкое содержание холестерина в сыворотке крови. Согласно другому варианту общее содержащие холестерина в
сыворотке крови меньше примерно 200 мг/дл или меньше чем примерно 180 мг/дл и может колебаться от
примерно 150 до примерно 200 мг/дл. Согласно еще одному варианту содержание LDL холестерина
меньше примерно 100 мг/дл или меньше примерно 90 мг/дл и может колебаться от примерно 30 до примерно 100 мг/дл. Методы измерения общего уровня холестерина в сыворотке крови и всего LDL холестерина хорошо известны специалистам и включают, например, описанные в WO 99/38498, с. 14, включенной в качестве ссылки. Методы определения уровней других стеринов в сыворотке описаны в Н. Gylling et al., «Serum Sterols During Stanol Ester Feeding in a Mildly Hypercholesterolemic Population», J. Lipid
Res. 40:593-600 (1999).
Согласно еще одному варианту у субъекта наблюдается повышенное содержание холестерина в сыворотке крови. Согласно еще одному варианту общее содержание холестерина в сыворотке равно по
меньшей мере примерно 200 мг/дл или по меньшей мере примерно 220 мг/дл и может колебаться от
- 12 -
012325
примерно 200 до примерно 1000 мг/дл. Согласно еще одному варианту у субъекта наблюдается повышенное содержание общего LDL холестерина. Согласно другому варианту общее содержание LDL холестерина больше примерно 100 мг/дл или даже больше примерно 110 мг/дл и может колебаться от примерно 100 до примерно 1000 мг/дл.
Согласно другому варианту человеку примерно 40 лет. Согласно еще одному варианту человеку по
меньшей мере 70 лет. Согласно еще одному варианту человеку от примерно 60 до 100 лет.
Согласно еще одному варианту субъект рискует заболеть, если это показывает диагностика изображения мозга, например, измерение активности мозга, осаждения бляшек или атрофии мозга.
Согласно еще одному варианту у субъекта нет симптомов болезни Альцгеймера. Согласно еще одному варианту субъект является человеком, которому по меньшей мере 40 лет и нет симптомов болезни
Альцгеймера. Согласно еще одному варианту субъект является человеком, которому по меньшей мере 40
лет и который имеет один или более симптомов болезни Альцгеймера.
С использованием способов по изобретению уровень β-амилоидных пептидов в мозгу субъекта может быть снижен от уровня до лечения примерно от 10 до примерно 100% или даже от примерно 50 до
примерно 100%.
Согласно альтернативному варианту у субъекта может быть повышенный уровень амилоида Aβ40 и
Aβ42 в крови и CSF до лечения, больше примерно 10 пг/мл и больше примерно 20 пг/мл или больше примерно 35 пг/мл или даже больше примерно 40 пг/мл. Согласно другому варианту повышенный уровень
амилоидного пептида Aβ42 может колебаться от примерно 30 до примерно 200 пг/мл или даже до примерно 500 пг/мл. Специалисту ясно, что по мере развития болезни Альцгеймера измеримый уровень βамилоидного пептида в CSF может слегка уменьшаться от величины повышенного уровня до начала болезни. Этот эффект приписывается увеличенному отложению, а именно захвату Аβ-пептида мозгом вместо обычного клиренса из мозга в CSF.
Согласно еще одному варианту субъект может иметь повышенный уровень Aβ40-амилоидного пептида в крови и CSF до лечения им, больше примерно 5 пг/мл Aβ42/мл и больше примерно 50 пг/мл
Aβ40/мл или больше примерно 400 пг/мл. Согласно еще одному варианту повышенное содержание βамилоидного пептида может колебаться от примерно 200 пг/мл до примерно 800 мг/мл и даже до примерно 1000 пг/мл.
Согласно еще одному варианту у субъекта может быть повышенный уровень Aβ42-амилоидного
пептида в CSF до лечения способами по изобретению, больше примерно 5 пг/мл, или больше примерно
10 пг/мл, или больше примерно 200 пг/мл, или даже больше примерно 500 пг/мл. Согласно еще одному
варианту содержание β-амилоидного пептида может меняться от примерно 10 до примерно 1000 пг/мл
или даже от примерно 100 до примерно 1000 пг/мл.
Согласно еще одному варианту у субъекта может быть повышенный уровень Aβ40-амилоидного
пептида в CSF до лечения способами по изобретению, больше примерно 10 пг/мл, или больше примерно
50 пг/мл, или даже больше примерно 100 пг/мл. Согласно еще одному варианту содержание βамилоидного пептида может меняться от примерно 10 до примерно 1000 пг/мл.
Количество β-амилоидного пептида в мозгу или крови субъекта можно измерить методом ферментсвязанного иммуносорбентного анализа (ELISA) или методами количественного иммуноблоттинга или
количественного SELDI-TOF, которые хорошо известны специалистам и описаны, например, Zhang, et
al., J. Biol. Chem. 274, 8966-72 (1999) и Zhang et al., Biochemistry 40, 5049-55 (2001). См. также А.K. Vehmas, et al., DNA Cell Biol. 20(11), 713-21 (2001); P. Lewczuk, et al., Rapid Commun. Mass Spectrom. 17(12)
1291-96 (2003); В.М. Austen, et al., J. Peptide Sci. 6, 459-69 (2000); и Н. Davies et al., BioTechniques 27,
1258-62 (1999). Эти методы осуществляют на образцах мозга или крови, приготовленных методом, хорошо известным специалистам. Другим примером такого метода измерения содержания β-амилоидных
пептидов является метод иммуноанализа с применением европия (EIA). См., например, заявку
WO 99/38498, с. 11.
Согласно еще одному варианту общее количество ApoE в крови или мозгу субъекта может быть
снижено от соответствующей величины до лечения на примерно 5-75% или согласно другому варианту
примерно на 5-50%. Общее количество ApoE может быть измерено методами, хорошо известными специалистам, например, с использованием набора ELISA, например набора Ahotek ApoE, поставляемый
Organon Teknika.
Способы по изобретению можно использовать для субъекта с болезнью Альцгеймера или деменцией, или методы по изобретению можно использовать для профилактики болезни Альцгеймера или деменции для субъекта, предрасположенного к этим болезням, например, субъекта с геномной мутацией в
APP-гене, ApoE-гене или гене пресенилина. У субъекта может быть (или он может быть предрасположен
или подозревается, что но болен) сосудистая деменция или сенильная деменция или умеренное ухудшение познавательной способности. Кроме болезни Альцгеймера у субъекта может быть другая βамилоидная болезнь, такая как церебральная амилоидная ангиопатия, или у субъекта может быть отложение амилоида, особенно амилоидное осаждение β-амилоида в мозгу субъекта.
- 13 -
012325
Определение деменции
Существенными признаками деменции являются множественные недостатки познавательной способности, которые включают ухудшение памяти и по меньшей мере один из следующих признаков: афазия, апраксия, агнозия или нарушения функции действия (способности думать абстрактно и планировать,
инициировать, следовать, контролировать и прекращать). Порядок начала или относительная величина
познавательных расстройств и ассоциированных с ними симптомов меняются в зависимости от конкретного типа деменции, как описано ниже.
Ухудшение памяти является, в общем, самым ранним симптомом. Отдельные люди с деменцией
испытывают затруднения с узнаванием новых вещей и могут терять ценные вещи, такие как бумажники
и ключи или забывать готовить еду на плите. В случае более серьезной деменции они забывают ранее
выученное, включая имена любимых людей. Люди с деменцией могут иметь трудности с перемещением
в пространстве, например, с перемещением в пространстве вокруг дома или вблизи в доме (где трудности с памятью вряд ли играют роль). Нелогичные суждения и блуждающий взгляд также являются общими признаками. Индивидуумы могут не знать о потере памяти или других познавательных аномалиях
или слегка догадываются об этом. Они могут нереально оценивать свои способности и строить планы,
которые несовместимы с их недостатками и прогнозами (например, планы начать новое дело). Они могут
недооценивать риски, связанные с деятельностью (например, вождением).
Диагноз деменции может быть поставлен, если нарушения познавательной способности являются
достаточно серьезными, чтобы вызвать ухудшение рабочей или социальной деятельности и это отклонение от нормы должно быть заметным. Природа и степень ухудшения могут быть разными и часто зависят от конкретного социального положения индивидуума. Например, умеренное познавательное ухудшение может значительно снизить способность индивидуума выполнять сложную работу, но не менее
трудную.
Расстройства познавательной способности и дегенерация мозговой деятельности клинически характеризуются прогрессирующей потерей памяти, способности к познанию, обоснованности суждений и
эмоциональной стабильности, что постепенно приводит к глубокому ухудшению умственных способностей и, в конце концов, к смерти. Обычно полагают, что болезнь начинается за несколько лет до своего
проявления в умеренной степени, когда умеренно ухудшается познавательная способность, что является
ранним признаком болезни Альцгеймера.
«Деменция типа Альцгеймера» начинается постепенно и обычно диагностируется после того, как
исключаются другие специфические причины. Диагностические критерии «деменции типа Альцгеймера»
включают развитие множественных познавательных дефицитов, проявляющихся в ухудшении памяти
(антероградной или ретроградной, т.е. сниженной способности узнавать новую информацию или вспоминать ранее узнанную информацию); и одного или нескольких следующих познавательных расстройств: афазии (расстройство речи), апраксии (сниженная способность выполнять движения, несмотря
на ненарушенную моторную функцию), агнозии (неспособность узнавать или идентифицировать объекты, несмотря на ненарушенную сенсорную функцию), расстройство исполнительской функции (а именно, планирования, организации, последовательности и абстрагирования); причем эти познавательные
дефекты каждый вызывает значительное ухудшение социальной или рабочей функции и представляет
собой значительное снижение предыдущего уровня функционирования. Течение болезни характеризуется постепенным началом и продолжающимся расстройством познавательной способности, и познавательные дефекты не обусловлены другим состоянием, которое вызывает прогрессирующий дефицит памяти и познавательных способностей (например, сосудистые заболевания мозга, опухоль мозга, гипотироидизм, недостаток витамина В или фолиевой кислоты, дефицит ниацина, гиперкальцемия, нейросифилис, ВИЧ-инфекция и воздействие химических веществ). Расстройство познавательной способности может сопровождаться расстройством поведенческой функции, например, склонностью бродить, агрессией
или ажитацией или психологическим расстройством, таким как депрессия или психоз. См. «Diagnostic
and Statistical Manual of Mental Disorders», 4th Ed., Text Revision by American Psychiatric Association (2000).
Например, критерии the National Institute of Neurological and Communicative Disorders and StrokeAlzheimer's Disease and the Alzheimer's Disease and Related Disorders Association (NINCDS-ADRDA) можно использовать для диагностики болезни Альцгеймера (McKhann, et al., 1984, Neurology 34:939-944).
Познавательную функцию пациента можно оценить по подшкале, оценивающей познавательную способность, Alzheimer's Disease Assessment Seal. (ADAS-cog; Rosen et al., 1984, Am. J. Psychiatry 141:13561364).
Болезнь Альцгеймера является прототипом кортикальной дегенеративной болезни. Основной компонент появляющихся симптомов обычно составляют жалобы пациентов на трудности с памятью, ухудшение речи, диспраксию, когда диагноз основывается, в первую очередь, на исключении других возможных этиологий деменции. Для деменции типа Альцгеймера не существует патогномоничных признаков,
выявляемых при физическом осмотре или лабораторном исследовании. Некоторые исследования позволили очевидно отделить пациентов с деменцией типа Альцгеймера от пациентов с деменцией других
этиологий и от контрольных групп с использованием таких методов, как EEG, MRT и SPECT, но эти исследования было трудно воспроизводить постоянно, и в настоящее время методы получения изображе- 14 -
012325
ния мозга лучше использовать для того, чтобы исключить другие идентифицируемые случаи.
Для изучения болезни Альцгеймера были разработаны различные диагностические методы. Клинические критерии были выверены при аутопсии и было установлено, что они очень специфичны, хотя и
только умеренно чувствительны. Применение этих критериев требует обширной оценки, включая историю болезни, основанную на информации, неврологическое исследование, нейрофизиологическое изучение и лабораторное обследование и получение изображений нервной системы. Болезнь Альцгеймера
характеризуется патологически генерализованной атрофией мозгового кортекса и нейрофибриллярными
переплетениями нейритными (амилоидными) бляшками и грануловакуольной дегенерацией. Хотя бляшки и переплетения могут быть обнаружены в мозгу пожилых людей, не болеющих болезнью Альцгеймера, они являются более многочисленными у пациентов с деменцией.
Сомнение остается в зависимости от того, были ли изображения мозга с бляшками, полученные для
индивидуумов без болезни Альцгеймера, «нормальными» вариациями или ранними патологическими
признаками болезни. Точный диагноз обязательно подтверждается наличием характеристической деменции в жизни и характерной патологией после смерти.
Естественное течение болезни Альцгеймера заключается в обострении и прогрессировании клинической симптоматологии. Дегенерация мозга, измеренная in vivo методами получения изображения, например, MRT, как было установлено, не коррелируется с состоянием клинической болезни. Общая конечная клиническая картина - это лежачий больной, полностью зависящий от других при выполнении
всех основных функций, даже когда он поворачивается в кровати. Питание часто осуществляется только
при помощи носожелудочных и желудочных трубок.
Изучение патобиологии болезни Альцгеймера позволило идентифицировать по меньшей мере четыре хромосомных локуса, связанных с семейными случаями; дегенерацию центральной нейрохимической системы, особенно базальных структур переднего мозга, связанных с опосредованной ацетилхолином нейротрансмиссией; факторы, связанные с образованием бляшек и переплетений и экзогенные (например, инфекционные и токсичные) процессы, которые могут способствовать развитию спорадических
случаев. Хотя амилоид сам по себе является обычным продуктом мозга, избыточное количество олигомерной или фибриллярной форм Aβ могут быть нейротоксичными.
В случае болезни Альцгеймера возраст и семейная история болезни являются основными факторами риска. Семейная история синдрома Дауна или гематологических злокачественных образований, таких
как лейкемия, миелолимфома или болезнь Ходжкина, также связана с повышенным риском появления
болезни Альцгеймера. Для болезни Альцгеймера в последние годы выявленные другие факторы риска
включают женский пол, прошлая история травмы головы и недостаток образования. Васкулярная деменция сильно связана с факторами риска проявления сосудисто-мозгового заболевания. Эти факторы включают гипертонию (особенно случаи, когда систолическое давление выше 160 мм рт.ст.), сердечные болезни, непостоянные ишемические приступы, сахарный диабет, шум над сонной артерией и болезни серповидных клеток. Ожирение, сидячий образ жизни, применение табака, потребление алкоголя и повышенное содержание в сыворотке холестерина и липидов также могут быть факторами риска для сосудистых болезней мозга.
Общее физическое обследование является рутинной составляющей наблюдения за развитием болезни Альцгеймера. Оно может обнаружить доказательство системной болезни, вызывающей дисфункцию мозга, например, увеличение и гепатоэнцелопатию, или может выявить системное заболевание, связанное с процессами в ЦНС. Фокальные неврологические последствия, такие как асимметричная гиперрефлексия или слабость, чаще наблюдаются при сосудистых болезнях, а не при дегенеративных. Обнаруженные при исследовании патологии лобной доли - признаки фронтального высвобождения, и примитивные рефлексы имеют место при многих расстройствах и часто указывают на большую степень процесса болезни. Первая стадия диагноза болезни Альцгеймера нужна для исключения бреда, который
можно отличить от деменции по кардинальному признаку: нарушение сознания. Уровень сознания или
возбуждения должен быть стабильным прежде, чем можно обеспечить достоверность диагноза болезни
Альцгеймера. Ее нужно также отличить от фокального или специфического познавательных ухудшений,
которые наблюдаются у больных, страдающих афазией или амнезией. Наряду с симптомами ухудшения
познавательной способности может появляться ухудшение настроения, особенно при деменции, депрессии или псевдодеменции. История ухудшения нестроения или наблюдающееся расстройство нейродегенеративной функции указывает на возможность более серьезного депрессивного расстройства.
Течение и прогноз синдрома деменции меняются в зависимости от его причины. Болезнь Альцгеймера необязательно связана с прогрессирующим ухудшением, хотя многие патобиологические процессы,
лежащие в основе деменции, являются дегенеративными. Скорость развития болезни может зависеть от
семьи и меняться от индивидуума к индивидууму. Возраст, при котором болезнь начинается, является
важным признаком болезни Альцгеймера, наиболее характерной причиной деменции в США. Болезнь
обычно возникает после 60 лет, и ее преобладание возрастает экспоненциально с каждым следующим
десятилетием, хотя сообщали о случаях болезни у молодых людей 30 лет. Семейные формы деменции
типа Альцгеймера начинаются в более раннем возрасте. Сосудистые заболевания мозга - вторая, наиболее распространенная причина болезни Альцгеймера, связаны вообще с более ранним началом болезни.
- 15 -
012325
Как класс деменции отличаются в некоторой степени своим течением, особенно, на ранних стадиях.
Дегенеративные деменции развиваются в начале постепенно и постепенно прогрессируют. Несмотря на
клиническое правило постоянно прогрессирующей деменции типа Альцгеймера, некоторые отдельные
пациенты достигают плато через несколько лет функционального ухудшения, затем возобновляется развитие болезни и продолжается до смерти. Сосудистые деменции могут следовать ступенчатой схеме развития, согласно которой новые нарушения появляются внезапно и связаны с новыми сосудистыми явлениями, но сосудистые деменции также часто имеют постепенное начало и медленно, но устойчиво прогрессируют. Первой стадией лечения деменций является проверка диагноза. Профилактические фармакологические агенты включают антигипертензивные средства, антикоагулянты или антитромбоцитные
средства. Как было показано, контроль кровяного давления способствует улучшению познавательной
функции у пациентов с сосудистой деменцией, но следует отметить, что антигипертензивные бетаблокаторы связаны с преувеличением познавательного ухудшения. Ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента («АСЕ») и диуретики не связаны с преувеличением познавательного ухудшения и, как полагают, снижают кровяное давление, не влияя на мозговое кровообращение (мозговое кровообращение предположительно коррелирует с познавательной функцией). Хирургическое удаление
шума над сонной артерией может предотвратить сосудистые явления у тщательно отобранных пациентов.
Содержание многочисленных нейротрансмиттеров, включая ацетилхолин, допамин, норэпинефрин,
GABA, серотонин и некоторые нейропептиды, включая соматостатин и вещество Р, уменьшается при
деменции. Для восполнения дефицита нейротрансмиттеров были предложены многие нейрофармакологические подходы. Заместительная терапия для ацетилхолина является наиболее распространенной и
широко опубликованной стратегией. Усилия восполнить дефицит включили применение предшественников ацетилхолина, например, холинсалицилата (Arthropan™, Purdue Pharma, L. P., Stamford, Connecticut) и лецитина из полиенилфосфатидилхолина (Phoschol™, Nutrasal LLC, Oxford, Connecticut); холинергических агонистов, например, ареколина (метил-N-метилтетрагидроникотината) и ингибиторов холинэстеразы, например, описанных в данном изобретении. Вместо таргетирования недостатка трансмиттера
другие подходы направлены на защиту и регенерацию нейронов. Селегилин (Eldepryl™, Somerset, Tampa,
Florida), ингибитор моноаминоксидазы («МАО») типа В («МАО-В»), замедляет развитие болезни Паркинсона, предположительно, путем лимитирования эндогенной генерации деструктивных продуктов
окисления и этот же эффект можно использовать терапевтически при лечении больных болезнью Альцгеймера. Подобные обработки антиоксидантами использовали экспериментально и в случае других деменций, включая болезнь Хантингтона и сосудистую деменцию. Считают, что налоксон (Narcan), опиатный антагонист, имеет возможное применение при сосудистой деменции, основанное на исследовании
животных, когда было показано уменьшение осложнений при церебральной ишемии. См., например, С.
Stowe et al., Ann. Pharmacother. 27, 447-48 (1999). Был изучен фактор роста нервов как средство ускорения нейронной регенерации и роста.
Используемый термин «лечение» субъекта включает применение или введение композиции по изобретению субъекту или применение или введение композиции по изобретению в клетку или ткань, полученную у субъекта, у которого есть связанная с β-амилоидом болезнь или состояние, который имеет
симптом такой болезни или состояния или рискует (является восприимчивым) заболеть этой болезнью
или состоянием, с целью излечения, заживления, смягчения, облегчения, изменения, улучшения или
влияния на болезнь или состояние, симптома болезни или состояния или риска (или восприимчивости)
заболеть этой болезнью или состоянием. Термин «лечение» относится к любому показателю успеха в
лечении или улучшении повреждения, патологии или состояния, включая любой объективный или субъективный параметр, такой как ослабление, ремиссия, ослабление симптомов или появление более терпимых для субъекта повреждения, патологии или состояния; замедление скорости дегенерации или ухудшения, менее изнуряющую конечную точку дегенерации, улучшение физического или ментального состояния субъекта или в некоторых случаях предотвращение начала деменций. Лечение или ослабление
симптомов может быть основано на объективных или субъективных параметрах, включая результаты
физического обследования или психиатрического обследования. Например, способы по изобретению
успешно применяют для лечения деменций у субъекта путем замедления скорости или степени познавательного ухудшения.
Изобретение относится также к способу профилактики или ингибирования образования амилоида у
субъекта. Например, такой способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по изобретению, способной снижать концентрацию Aβ, при этом образование или аккумуляция амилоида предотвращается или ингибируется.
Согласно другому аспекту изобретение относится к способу, в котором, по меньшей мере, первое
соединение служит для предотвращения, уменьшения или ингибирования образования амилоида у субъекта. Например, такой способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества
фармацевтической композиции, способной ингибировать аккумулирование Aβ, что вызывает предотвращение, уменьшение или ингибирование Aβ-амилоидоза.
- 16 -
012325
«Ингибирование» осаждения амилоида включает предотвращение или остановку образования амилоида, например, фибриллогенез, клиренс растворимого Аβ из мозга, ингибирование или замедление
дальнейшего осаждения амилоида у субъекта с амилоидозом, например, уже имеющего осадки амилоида, и уменьшение или обратимость амилоидного фибриллогенеза или осаждения у субъекта с развивающимся амилоидозом. Ингибирование осаждения амилоида определяется относительно субъекта, не получившего лечения или относительно пациента до лечения или, например, определяется клинически измеримым улучшением или, например, в случае субъекта с амилоидозом мозга, например, субъекта с болезнью Альцгеймера или церебральной амилоидной ангиопатией, стабилизацией познавательной функции или предотвращением дальнейшего ухудшения познавательной функции (т.е. замедлением, предотвращением или остановкой развития болезни) или улучшением параметров, таких как концентрация Aβ
или тау в CSF.
«Модулирование» осаждения амилоида включает ингибирование, как оно определено выше, и увеличение осаждения амилоида или образования фибрилл. Термин «модулирование» охватывает, следовательно, предотвращение или остановку образования или аккумуляции амилоида, ингибирование или замедление дальнейшей агрегации амилоида у субъекта с развивающимся амилоидозом, например, уже
имеющего агрегированный амилоид, и уменьшение или обратимость агрегатов амилоида у субъекта с
амилоидозом, и усиление осаждения амилоида, например, повышение скорости или количества осажденного амилоида in vivo и in vitro. Соединения, способствующие образованию амилоида, могут быть
использованы на животных моделях амилоидоза, например, чтобы сделать возможным развитие амилоидных отложений у животных в более короткий период времени или увеличить отложения амилоида в
выбранный отрезок времени. Соединения, способствующие образованию амилоида, могут применяться
при скрининге соединений, которые ингибируют амилоидоз in vivo, например, в животных моделях, клеточных анализах, и in vitro изучение амилоидоза. Такие соединения можно использовать, например, чтобы обеспечить более быстрые и более чувствительные анализы соединений. В некоторых случаях соединения, способствующие образованию амилоида, могут также вводиться в терапевтических целях, например, для ускорения отложения амилоида скорее в полости, чем в стенках мозговых кровеносных сосудов
для предотвращения САА. Модуляция агрегации амилоида определяется относительно субъекта, не получившего лечения, или субъекта до начала лечения.
Согласно одному из вариантов способ по изобретению применяют для лечения болезни Альцгеймера (например, спорадической или семейной). Способ может быть также использован профилактически
или терапевтически для лечения других клинических случаев отложения β-амилоида, таких как синдром
Дауна, и у субъектов с наследственной или спорадической церебральной амилоидной ангиопатией
(«САА»), которая приводит к мозговому кровоизлиянию (или удару).
Кроме того, анормальное накопление APP и β-амилоидного белка в мышечных волокнах причастно
к патологии спорадического миозита телец включения («IBM») (Askanas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
93, 1314-19 (1996); Askanas et al., Current Opinion in Rheumatology 7, 486-96 (1995)). Соответственно, соединения по изобретению можно использовать профилактически или терапевтически при лечении болезней, при которых β-амилоидный белок анормально осаждается в неневрологических участках, например, при лечении IBM путем доставки соединений в мышечные волокна.
Кроме того, было показано, что Aβ связан с анормальным внеклеточным отложением, известным
как друзы, которые накапливаются вдоль базальной поверхности ретинального пигментного эпителия у
отдельных людей с возрастной макулярной дегенерацией («ARDM»). ARDM является причиной необратимой потери зрения в пожилом возрасте. Полагают, что осаждение Aβ может быть важным компонентом локальных воспалительных явлений, которые способствуют атрофии ретинального пигментного
эпителия, биогенезу друз и патогенезу ARDM (Johnson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99(18), 11830-5
(2002)).
Данное изобретение относится, следовательно, к применению первого агента, имеющего одну из
структур:
для предотвращения или лечения связанных с амилоидом болезней, включая, наряду с другими, болезнь
Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, миозит телец включения, синдром Дауна, умеренное познавательное ухудшение и макулярную дегенерацию, в комбинации со вторым терапевтическим агентом.
Соответственно, изобретение относится к способам, применяющим, и композициям, включающим
соединения указанной структуры.
Согласно другому варианту у субъекта наблюдается умеренное познавательное ухудшение (MCI),
которое представляет собой состояние, характеризующееся умеренным, но измеримым ухудшением
мыслительной способности, но не необходимо связано с наличием деменций. MCI часто, но не обязательно, предшествует болезни Альцгеймера. Этот диагноз наиболее часто связан с умеренными проблемами памяти, но может также характеризоваться умеренным ухудшением других мыслительных способностей, таких как речевые способности или способность планировать. Однако в общем пациент с MCI
- 17 -
012325
имеет проблемы с памятью, более серьезные, чем это можно было ожидать у человека его возраста и образования. По мере развития состояния врач может изменить диагноз на более сильное познавательное
ухудшение, как это известно специалистам.
Согласно одному варианту фармацевтические композиции по изобретению предотвращают или ингибируют превращение амилоидных белков в нерастворимые фибриллы, которые in vivo осаждаются в
различных органах, или же они делают обратимым осаждение у субъектов, уже имеющих осадки. Согласно другому варианту активный агент может также предотвращать связывание или прилипание к поверхности клеток амилоидного белка в его растворимой олигомерной форме или в фибриллярной форме
и повреждение или токсичность клеток. Согласно еще одному варианту этот агент может блокировать
вызванную амилоидом нейротоксичность.
Фармацевтические композиции по изобретению могут вводиться терапевтически или профилактически для лечения болезней, связанных с образованием β-амилоидных фибрилл, их агрегацией или отложением. Фармацевтические композиции по изобретению могут улучшать течение связанной с βамилоидом болезни по любому из следующих механизмов (этот перечень является иллюстративным, но
не ограничивающим): замедлять скорость образования или отложения β-амилоидных фибрилл, уменьшать степень отложения β-амилоида, ингибировать, снижать или предотвращать образование βамилоидных фибрилл, ингибировать нейродегенерацию или клеточную токсичность, вызванные βамилоидом, ингибировать вызванное β-амилоидом воспаление или ускорять клиренс β-амилоида из мозга, или способствовать катаболизму или разложению β-амилоида в CSF, или модулировать уровень βамилоида в плазме. Другой путь уменьшения Aβ может заключаться в действии этих соединений на секретазы, что вызывает снижение уровня Aβ (как это видно на примере протеогликанов).
Фармацевтические композиции по изобретению могут быть эффективными для регулирования осаждения β-амилоида или после его попадания в мозг (вслед за проникновением через кровяной барьер
мозга) или на периферии. Действуя на периферии, агент, содержащийся в фармацевтической композиции, может изменять равновесие Aβ между мозгом и плазмой и тем самым способствовать выведению
Aβ их мозга. Увеличение выведения Aβ из мозга приведет к снижению концентрации Aβ в мозгу и тем
самым будет способствовать уменьшению осаждения Aβ. Или же агенты, проникающие в мозг, могут
регулировать осаждение, действуя непосредственно на Aβ в мозгу, например, путем поддержания его в
нефибриллярной форме или облегчения его клиренса из мозга, или ускорения скорости его разложения в
мозгу или в периферийных органах. Эти агенты могут также предотвращать взаимодействие Aβ в мозгу
с поверхностью клеток и тем самым предотвращать нейротоксичность или воспаление.
Композиции по изобретению могут вводиться терапевтически или профилактически для лечения
болезней, связанных с отложением β-амилоидных фибрилл, агрегации или осаждением. Композиции по
изобретению могут улучшать течение связанной с β-амилоидом болезни по многим механизмам. Согласно одному варианту фармацевтические композиции по изобретению предотвращают или ингибируют
превращение амилоидного белка в нерастворимые фибриллы, которые in vivo осаждаются в различных
органах, или способствуют клиренсу бляшек, или замедляют осаждение у субъектов, у которых уже есть
отложения. Согласно другому варианту фармацевтические композиции по изобретению могут также
предотвращать связывание или прилипание к поверхности клеток амилоидного белка в его растворимой
олигомерной форме или в фибриллярной форме и повреждение или токсичность клеток. Согласно еще
одному варианту этот агент может блокировать вызванную амилоидом нейротоксичность. Согласно другим вариантам этот активный агент может замедлять скорость образования или осаждения β-амилоида.
Согласно еще одному варианту этот агент может уменьшать степень осаждения β-амилоида. Другие
примеры включают ингибирование, уменьшение или предотвращение образования β-амилоидных фибрилл, ингибирование нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной β-амилоидом, ингибирование вызванного β-амилоидом воспаления, ускорение клиренса β-амилоида из мозга или увеличение
скорости его разложения в мозгу или в периферийных органах.
По меньшей мере один из терапевтических агентов по изобретению может регулировать осаждения
β-амилоида или после его попадания в мозг (вслед за проникновением через кровяной барьер мозга) или
на периферии. Действуя на периферии, агент, содержащийся в фармацевтической композиции, может
изменять равновесие Aβ между мозгом и плазмой и тем самым способствовать выведению Aβ из мозга.
Увеличение выведения Aβ из мозга приведет к снижению концентрации Aβ в мозгу и тем самым будет
способствовать уменьшению осаждения Aβ. Или же агенты, проникающие в мозг, могут регулировать
осаждение, действуя непосредственно на Aβ в мозгу, например, путем поддержания его в нефибриллярной форме или облегчения его клиренса из мозга, или способствуя катаболизму или действуя на секретазы, что вызывает снижение образования Aβ.
Согласно одному аспекту изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим
два агента, каждый из которых проявляет терапевтическое действие, будучи введен субъекту, нуждающемуся в этом, и пригоден для лечения или профилактики неврологической болезни.
- 18 -
012325
Первый агент имеет одну из структур
которые используют для лечения или профилактики связанной с β-амилоидом болезни. Второй агент
является терапевтическим, т.е. его действие превышает действие неактивного ингредиента, такого как
фармацевтический носитель, консервант, разбавитель или буфер. Второй агент может быть полезен при
лечении или профилактике связанной с β-амилоидом болезни или другой неврологической болезни. Первый и второй агенты могут проявлять биологическое действие по сходным или несвязанным механизмам
действия, или один или оба из первого и второго агентов могут проявлять биологическое действие по
многим механизмам действия. Фармацевтическая композиция может также включать третий агент, который имеет те же характеристики, что и второй агент.
Изобретение относится также к упакованным фармацевтическим композициям, содержащим два
агента, каждый из которых проявляет терапевтическое действие, будучи введенным субъекту, нуждающемуся в этом, и полезен при лечении или профилактике неврологической болезни. Первый агент имеет
одну из указанных выше структур, которые пригодны для лечения или профилактики связанной с βамилоидом болезни. Второй агент является терапевтическим, т.е. его действие превышает действие неактивного ингредиента, такого как фармацевтический носитель, консервант, разбавитель или буфер. Второй агент может быть полезен при лечении или профилактике связанной с β-амилоидом болезни или
другой неврологической болезни. Первый и второй агенты могут проявлять биологическое действие по
сходным или несвязанным механизмам действия, или один или оба из первого и второго агентов могут
проявлять биологическое действие по многим механизмам действия. Фармацевтическая композиция может также включать третий агент, который имеет те же характеристики, что и второй агент. В некоторых
случаях отдельные агенты могут быть упакованы в раздельные контейнеры для продажи или доставки
потребителю. Агенты по изобретению могут поставляться в растворе подходящего растворителя или без
растворителя (например, лиофилизованные). Дополнительные компоненты могут включать кислоты,
основания, буферные агенты, неорганические соли, растворители, антиоксиданты, консерванты или хелаторы металлов. Дополнительные компоненты набора могут быть в чистом виде или в виде водных или
органических растворов, содержащих один или несколько дополнительных компонентов набора. Любой
из или все компоненты набора могут содержать буферы.
Данное изобретение включает также упакованные фармацевтические продукты, содержащие первый агент в комбинации с (например, в смеси с) вторым агентом. Изобретение включает также фармацевтический продукт, содержащий первый агент, упакованный вместе с инструкцией по использованию
первого агента в присутствии второго агента, или инструкцией по применению первого агента в способе
по изобретению. Изобретение также включает фармацевтический продукт, содержащий второй или дополнительные агенты, упакованные вместе с инструкциями по использованию второго или дополнительного агентов в присутствии первого агента, или инструкциями по применению второго или дополнительного агентов в способе по изобретению. Альтернативно, упакованный продукт может содержать по
меньшей мере один из агентов, и продукт предназначен для использования со вторым агентом.
«Ингибирование» осаждения амилоида включает остановку или предотвращение образования амилоида, например, фибриллогенеза, ингибирование или замедление дальнейшего осаждения амилоида у
субъекта с амилоидозом, например, уже имеющего осажденный амилоид, и уменьшение или придание
обратимости фибриллогенезу или осаждением у субъекта с развивающимся амилоидозом. Ингибирование осаждения амилоида определяется по отношению к субъекту, не получающему лечения, или к субъекту до начала лечения, или, например, в случае субъекта с амилоидозом мозга, например, болезнью
Альцгеймера или церебральной амилоидной ангиопатией, как и стабилизация познавательной функции
или предотвращение дальнейшего ухудшения этой функции (например, профилактика, замедление или
остановка развития болезни).
Термин «модулирование» охватывает профилактику или остановку образования или накопления
амилоида или ингибирование или замедление дальнейшей агрегации амилоида у субъекта с развивающимся амилоидозом, например, уже имеющего амилоидные агрегаты, и уменьшение или придание обратимости амилоидным агрегатам у субъекта с амилоидозом или ускорение отложения амилоида, например, увеличение скорости отложения амилоида in vivo или in vitro. Способствующие образованию амилоида соединения могут быть использованы в животных моделях амилоидоза, например, для того, чтобы
сделать возможным развитие амилоидных отложений у животных в более короткий период времени или
увеличить осадки амилоида в выбранный период времени. Способствующие образованию амилоида соединения могут применяться для скрининга соединений, которые ингибируют амилоидоз in vivo, например, в животных моделях, клеточных анализах или in vitro анализах амилоидоза. Такие соединения можно использовать, например, для проведения более быстрых и более чувствительных анализов соединений. В некоторых случаях соединения, способствующие образованию амилоида, могут быть введены в
терапевтических целях, например, чтобы вызвать отложение амилоида скорее в прослойке, чем в стенке
кровеносных сосудов мозга для предотвращения САА. Модулирование агрегации амилоида определяется относительно субъекта, не получающего лечения, или субъекта до начала его лечения.
- 19 -
012325
Используемый термин «лечение» субъекта включает нанесение или введение терапевтического
агента субъекту или нанесение или введение терапевтического агента в клетку или ткань субъекта, у которого наблюдается болезнь или состояние, который имеет симптом болезни или состояния или рискует
(восприимчив) к болезни или состоянию, с целью лечения, заживления, ослабления, облегчения, изменения, улучшения или влияния на болезнь или состояние, симптома болезни или состояния или риска (восприимчивости) приобрести болезнь или состояние.
Данное изобретение относится также к фармацевтической композиции для лечения состояния, выбранного из умственной отсталости, расстройства деятельности, нарушения поведения, органических
умственных расстройств (включая деменцию и вызванные психоактивным веществом умственные расстройства), нарушения, вызванные злоупотреблением психоактивных веществ, расстройств настроения,
беспокойства, соматоформных расстройств, диссоциативных расстройств, дефицита внимания, шизофрении и разрушения личности у человека, композиция при этом включает ингибитор ацетилхолина. Второй агент может быть энхансером высвобождения нейротрансмиттера, т.е. он обладает способностью
способствовать или стимулировать высвобождение нейротрансмиттеров, таких как ацетилхолин, допамин и серотонин, у людей. Вторые агенты способны, следовательно, действовать, как терапевтические
агенты при лечении разнообразных состояний у людей, лечения или профилактики, которые можно осуществить или ускорить ускорением или стимуляцией высвобождения ацетилхолина, допамина или серотонина. Такие состояния включают болезнь Альцгеймера, возрастное ухудшение памяти, умеренное познавательное ухудшение и болезнь Паркинсона. Они также включают расстройство, выбранное из умственной отсталости, расстройства деятельности, нарушения поведения, органических умственных расстройств (включая деменцию и вызванные психоактивным веществом умственные расстройства), нарушения, вызванные злоупотреблением психоактивных веществ, расстройств настроения, беспокойства,
соматоформных расстройств, диссоциативных расстройств, дефицита внимания, шизофрении и разрушения личности. Изобретение также идеально подходит для лечения семейной или наследственной формы болезни Альцгеймера, так как, например, терапевтическое профилактическое фармацевтическое лечение может быть начато ранее в жизни пациента. В настоящее время все терапевтические способы, являющиеся коммерчески доступными, используются для лечения только симптомов болезни Альцгеймера, как это указывалось ранее. Данное изобретение предусматривает способы и композиции, которые
лечат этиологию самой болезни, и поэтому могут быть использованы профилактически. Биологические
процессы, порождающие болезнь Альцгеймера, могут возникать у человека до того, как возникают клинически заметные симптомы. Обычно согласно современной медицинской науке такой период в жизни
человека будет незаметным, и лечение современными лекарствами будет бесполезно. Для людей с выявленным предрасположением к развитию болезни Альцгеймера композиции по изобретению могут отложить появление симптомов.
Далее изобретение относится к новому химическому агенту. То есть изобретение относится к новым агентам и новым способам их применения, включая те соединения, которые подпадают под формулы, описанные в данном изобретении, и которые не раскрыты в цитированных патентах и заявках на патент.
Примеры терапевтических лекарств для лечения болезни Альцгеймера
В фармацевтических композициях по изобретению алкансульфоновая кислота может комбинироваться со вторым агентом, который также пригоден для лечения болезни Альцгеймера. В общем, второй
агент может быть любым терапевтическим лекарством. «Терапевтическое лекарство» означает лекарство
или препарат, вводимые на законных или одобренных в медицине основаниях, для терапевтической или
диагностической цели. Терапевтические лекарства могут быть доступны без рецептов или по рецептам.
Примеры терапевтических лекарств включают адренергетики, антиадренергетики, антиандрогенный
агенты, средства против ангины, беспокойства, противосудорожные средства, антидепрессанты, противоэпилептические средства, антигиперлипедимические средства, антигиперлипопротеинемические средства, антигипертензивные, противовоспалительные средства, средства против ожирения, против паркинсонизма, психоза, адренокортикальные стероиды, адренокортикальные супрессанты, антагонисты альдостерона, аминокислоты, анаболические стероиды, аналептические агенты, андрогены, регуляторы содержания глюкозы в крови, кардиопротектанты, сердечно-сосудистые средства, холинергические агонисты и антагонисты, деактиваторы или ингибиторы холинэстеразы, адъюванты и энхансеры, улучшающие
процесс познания, допаминергические агенты, ингибиторы ферментов, эстроген и родственные стероидные гормоны, поглотители свободных кислородных радикалов, агонисты GABA, антагонисты глутамата,
гормоны, антигипохолестеринемические агенты, гиполипедимические агенты, гипотензивные агенты,
иммунизирующие агенты, иммуностимулянты, ингибиторы моноаминоксидазы, нейропротекторы, антогонисты NMDA, антагонисты АМРА, конкурентные и неконкурентные антагонисты NMDA, опиоидные
антагонисты, открыватели калиевых каналов, негормональные стероидные производные, средства, применяемые после удара или травмы головы, простогландины, психотропные средства, релаксанты, седативные средства, седативные гипнотические средства, селективные антагонисты аденозина, антагонисты
серотонина, ингибиторы серотонина, селективные ингибиторы поглощения серотонина, антагонисты
рецептора серотонина, блокаторы натриевых и кальциевых каналов, стероиды, стимулянты, тироидные
- 20 -
012325
гормоны и ингибиторы и т.д.
Согласно одному аспекту изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей алкансульфоновую кислоту и второй агент, пригодный для лечения или профилактики болезни Альцгеймера. Второй агент может быть лечебным, а именно, может модулировать агенты, вызывающие болезнь
Альцгеймера, или он может быть паллиативным, т.е. смягчать симптомы болезни, например, за счет
улучшения памяти или познавательной функции. Второй агент может быть лекарством, которое пригодно для лечения болезни Альцгеймера самой по себе, или его можно использовать для лечения состояния,
связанного с болезнью Альцгеймера, например, вторичного состояния, или он может быть лекарством,
обычно прописываемым субъектам с болезнью Альцгеймера.
Согласно современному пониманию природной истории болезни Альцгеймера были выявлены несколько различных целенаправленных лекарств. Фармацевтическая композиция по изобретению может
включать второй агент, который является специфическим для любого из биологических процессов, позволяя клиническое представление о болезни Альцгеймера. Нельзя рассматривать данное изобретение
как ограниченное какой-либо конкретной теорией этиологии болезни Альцгеймера, и поэтому второй
агент в фармацевтических композициях по изобретению может быть любым, который сам по себе или в
комбинации с алкансульфоновой кислотой является эффективным при лечении или профилактике болезни Альцгеймера, что выявляется эмпирическим путем. Тем не менее, полагают, что биологические процессы, которые в совокупности обусловливают начало болезни Альцгеймера самой по себе или ее симптомов, полезны, поскольку любой из этих биологических процессов может быть модулирован при помощи второго агента в фармацевтической композиции по изобретению.
Термин «в комбинации с» вторым агентом или способом лечения включает совместное введение
алкансульфоновой кислоты, введение алкансульфоновой кислоты вначале с последующим введением
второго агента или лечение и введение второго агента вначале с последующим введением алкансульфоновой кислоты.
Состояние, ассоциируемое с болезнью Альцгеймера, может быть симптомом, характерным для болезни Альцгеймера, например, гипотироидизмом, цереброваскулярной или сердечно-сосудистой болезнью, потерей памяти, беспокойством или поведенческой дисфункцией (например, апатией, агрессией,
невоздержанностью), психологическим состоянием или неврологическим состоянием. Неврологическое
состояние может быть болезнью Хантингтона, боковым амиотрофическим склерозом, приобретенным
иммунодефицитом, болезнью Паркинсона, афазией, апраксией, агнозией, болезнью Пика, деменцией с
тельцами Льюиса, измененным мышечным тонусом, пароксизмом, потерей чувствительности, дефицитом поля зрения, нескоординированностью, нарушением походки, транзиторным сердечным приступом
или ударом, транзиторной настороженностью, дефицитом внимания, частыми падениями, синкопе, нейролептической чувствительностью, обычной гидроцефалией, связанной с давлением, субдуральной гематомой, опухолью мозга, посттравматическим повреждением мозга или постгипоксическим повреждением. Психологическим состоянием являются депрессии, бред, иллюзии, галлюцинации, сексуальное расстройство, потеря веса, психоз, расстройство сна, такое как инсомния, поведенческое растормаживание,
плохая самооценка, идея самоубийства, угнетенное настроение или раздражительность, ангедония, социальная отстраненность или избыточная вина.
Второй агент, а именно, терапевтическое лекарство, может быть психотропным препаратом, антидепрессантом (селективным ингибитором поглощения серотонина, атипичным антидепрессантом), антипсихотиком, стимулянтом аппетита или другим лекарством, используемым для лечения состояния, связанного с болезнью Альцгеймера, которая является предшественником ацетилхолина (лецитина или холина), гингко билоба, ацетил-L-карнитином, идебеноном, пропентофиллином или производным ксантина.
Антидепрессанты включают селективные ингибиторы поглощения серотонина, такие как циталопрам (Celexa), эсциталопрам (Lexapro), флуоксетин (Prozac™), флувоксамин (Luxapro™), пароксетин (Paxil™), сертрамин (Zoloft™); смешанные ингибиторы поглощения норэпинефрина/допамина, такие как бупропион (Wellbutrin™), лекарства со смешанным серотониновым действием, такие как нефазодон (Serzone™) и тразодон (Desyrel™), венлафексин (Effexor™), ингибиторы моноаминоксидазы, включая фенелзин (Nardil™) и транилципромин (Parnate™), тетрациклические антидепрессанты, такие как мапротилин,
миртазапин (Remeron™), амитриптилин (Elavil™), амоксатин, кломипрамин (Anafranil™), дезипрамин
(Norpramin™), доксепин (Sinequan™), имипрамин (Tofranil™), нортриптилин (Aventyl™, Pamelor™),
проптилин (Vivactil™) и тримипрамин (Surmontil™). Антидепрессанты: трициклические и селективные
ингибиторы поглощения серотонина, флуоксетин (Prozac™), сертралин (Zoloft™), пароксетин (Paxil™),
циталопрам (Celexa™), нортриптилин, монклобемид, миратазепин, Nardil™, Parnate™, Manerix™,
Tofranil™, Elavil™, Sinequan™, Surmontil™, Anafranil™, Norpramine™, Aventyl™, Effexor™, Serzone™,
Welbutrin™, Desyrel™ и Remeron™.
Антипсихотические средства включают арипипразол (Abilify™), клозапин (Clozaril™), оланзапин
(Zynpexa™), кветиапин (Seroquel™), рисперидон (Risperdal™) и зипрасидон (Geodon™). Антипсихотики:
обычные и атипичные оланзапин (Zyprexa™), кветиапин (Seroquel™), галоперидол (Haldol™), риспери- 21 -
012325
дон (Risperdal™), зиклопенхиксол (Clopixol™), зипразидон, тиоридазин (Mellaril™, Sandoz Parmaceutical
Corp., теперь Novartis, Basel, Switzerland), клозапин (Clozaril™), оланзапин и литий. Первый агент как
было установлено, композиции некоторых алкансерусодержащих окисей, включающие алкансульфоновые кислоты и алкансерные кислоты, в частности, включающие, например, 3-амино-1пропансульфоновую кислоту и ее некоторые соли, пригодные для лечения связанных с β-амилоидом болезней, включая болезнь Альцгеймера и церебральную амилоидную ангиопатию. См. WO 96/28187,
WO 01/85093 и патент США 5840294. Полагают, что анионная группа агента композиции ингибирует
взаимодействие между амилоидогенным белком и гликозаминогликаном (GAG) или протеогликаном
базальной мембраны, ингибируя тем самым отложение амилоида.
Способность терапевтического соединения по изобретению ингибировать взаимодействие между
амилоидогенным белком и гликозаминогликаном (GAG) или протеогликаном базальной мембраны можно оценить методом определения in vitro связывания, описанным, например, в данном изобретении или в
патенте США 5164295.
Вкратце, на твердую подложку, например, микротитровальную пластину из полистирола наносят
покрытие на основе амилоидогенного белка (например, сывороточный белок амилоида А или белок
предшественника β-амилоида (β-APP)) и блокируют любые остаточные гидрофобные поверхности. Твердую подложку с покрытием инкубируют при различных концентрациях компонента базальной мембраны, например, HSPG, в присутствии или в отсутствие испытуемого соединения. Твердую подложку тщательно промывают для удаления несвязанного материала. Связывание компонента базальной мембраны
(например, HSPG) с амилоидным белком (например, β-APP) затем измеряют с использованием антитела,
направленного против компонента базальной мембраны, который сопряжен с детектируемым веществом
(например, ферментом, таким как щелочная фосфатаза), путем детектирования указанного вещества. Соединение, которое ингибирует взаимодействие между амилоидогенным белком и гликозаминогликаном
(GAG) или протеогликаном базальной мембраны, будет снижать количество детектируемого вещества
(например, будет ингибировать активность фермента). Терапевтическое соединение по изобретению может взаимодействовать с сайтом связывания для гликопротеина или протеогликана базальной мембраны
в амилоидогенном белке и тем самым ингибировать связывание амилоидогенного белка с компонентом
базальной мембраны. Гликопротеины и протеогликаны базальной мембраны включают ламинин, коллаген тип IV, фибронектин и гепарансульфат-протеогликан (HSPG), перлекан и агрин. Согласно подобному
варианту терапевтическое соединение ингибирует взаимодействие между амилоидогенным белком и
HSPG. Были описаны фрагменты консенсусного сайта связывания для HSPG в амилоидогенных белках
(см., например, Cardin and Weintraub, Arteriosclerosis 9, 21-32 (1989)).
Предусмотрен также способ лечения или профилактики болезни, связанной с β-амилоидом, путем
введения по меньшей мере двух агентов, каждый из которых проявляет терапевтическое действие и пригоден для лечения или профилактики неврологической болезни. Первый агент по изобретению выбирают
из алкансульфоновых кислот, которые пригодны для лечения или профилактики болезни, связанной с βамилоидом. Второй агент является терапевтическим, т.е. его функция превышает функцию неактивного
ингредиента, такого как фармацевтический носитель, консервант, разбавитель или буфер. Второй агент
может быть пригоден для лечения или профилактики связанной с β-амилоидом болезни или другой неврологической болезни. Второй агент может также ослаблять специфические симптомы, характерные для
болезни Альцгеймера (например, потеря памяти, беспокойство и т.д.). Первый и второй агенты могут
проявлять биологическое действие по сходным или несвязанным механизмам действия, или один или
оба из первого и второго агентов могут проявлять биологическое действие по многим механизмам. Третий агент также можно использовать в способе по изобретению, причем третий агент имеет те же характеристики, что и второй агент. Изобретение относится к способу лечения или профилактики связанной с
β-амилоидом болезни у субъекта (например, человека), включающему введение субъекту терапевтического количества алкансульфоновой кислоты, что вызывает снижение или ингибирование образования
или осаждения амилоидных фибрилл, а также снижение или ингибирование клеточной токсичности.
Согласно другому варианту изобретение относится к способу лечения или профилактики болезни,
связанной с β-амилоидом, у субъекта (например, человека), включающему введение субъекту терапевтического количества алкансульфоновой кислоты для стабилизации познавательной функции и предотвращения, замедления или остановки дальнейшего ухудшения познавательной функции у субъектов с амилоидозом мозга, например, болезнью Альцгеймера или церебральной амилоидной ангиопатией. Согласно
другому варианту изобретение относится к способу лечения или профилактики β-амилоидной болезни у
субъекта (например, человека), включающий введение субъекту терапевтического количества алкансульфоновой кислоты для улучшения или стабилизации повседневной активности у субъектов с амилоидозом мозга, например, болезнью Альцгеймера.
«Первый агент» по изобретению может быть 3-амино-1-пропансульфоновой кислотой.
В общем, алкансульфоновые кислоты могут быть получены способами, показанными на общих
схемах реакций, например, приведенных в патентах США 5643562, 5972328, 5728375, 5840294, 4657704
и в предварительной заявке на патент США № 60/482058, поданной 23 июня 2003 г., под названием
- 22 -
012325
«Синтетический способ получения соединений для лечения амилоидоза», или модификацией этих способов с использованием доступных исходных материалов, реагентов и обычных методик синтеза. В этих
реакциях можно также использовать варианты, которые сами по себе известны, но не упомянуты. Функциональные и структурные эквиваленты агентов, описанных в данном изобретении, которые имеют те
же общие свойства, в которых один или более заместителей изменены, не влияя при этом отрицательно
на природу применения агента, могут быть получены различными известными способами.
В общем, агенты по изобретению могут быть получены способами, показанными на общих схемах
реакций, описанных, например, ниже, или путем модификации этих способов с применением доступных
исходных материалов, реагентов и обычных методов синтеза. В этих реакциях можно также использовать варианты, которые сами по себе известны, но не упомянуты. Функциональные и структурные эквиваленты агентов, описанных в данном изобретении, которые имеют те же общие свойства, в которых
один или более заместителей изменены, не влияя при этом отрицательно на природу применения агента,
могут быть получены различными известными способами.
Агенты, используемые в данном изобретении, могут быть легко получены по схемам реакций и
протоколам, описанным в данном изобретении, как показано в конкретных примерах синтеза. Однако
специалистам очевидно, что для получения этих соединений можно применять другие способы синтеза и
что нижеследующие примеры приведены только для иллюстрации и не ограничивают изобретение. См.,
например, «Comprehensive Organic Transformations», 2 Ed., R.С. Larock, John Wiley and Sons Ltd. (1999);
«March's Advanced Organic Chemistry» 5th Ed., by Smith and J. March, John Wiley and Sons Ltd. (2000) и
«Reagents for Organic Synthesis», vol. I-XX, by M. Fieser and L. Fieser, John Wiley and Sons Ltd. (2000).
Специалистам очевидно, что выбор любой конкретной защитной группы (например, аминной и карбоксильной защитных групп) будет зависеть от стабильности защищенной группы при условии последующей реакции. Примеры известных методов приведены в многочисленной химической литературе: «Comprehensive Asymmetric Catalysis», by E.N. Jacobsen, et al., Springer Verlag (1999), «Chemistry of the Amino
Acids» by J.P. Greenstein and Winitz, John Wiley and Sons, Inc., New York (1961); T.D. Ocain, et al., J. Med.
Chem. 31, 2193-99 (1988); E.M. Gordon, et al., J. Med. Chem. 31, 2199-10 (1988); «Practice of Peptide Synthesis» by M. Bodansky and A. Bodanszky Springer-Verlag, New York (1984); «Asymmetric Synthesis: Construction of Chiral Molecules Using Amino Acids» by G. M. Coppola and H.F. Schuster, John Wiley and Sons, Inc.,
New York (1987); «The Chemical Synthesis of Peptides» by J. Jones, Oxford University Press, New York
(1991); и «Introduction of Peptide Chemistry» by P. D. Bailey, John Wiley and Sons, Inc., New York (1992).
Химические структуры в этом изобретении показаны в соответствии с имеющимися известными
стандартами. Так, если атом, например атом углерода, когда он изображен, имеет ненасыщенную валентность, тогда предполагается, что эта валентность насыщена атомом водорода, даже в том случае,
если он явно не показан. Структуры некоторых соединений включают стереогенные атомы углерода.
Следует указать, что изомеры, возникающие при такой асимметрии (например, все энантиомеры и диастереомеры), входят в объем данного изобретения, если иное не указано. То есть, если иное не указано,
любой хиральный центральный атом углерода может иметь (R)- или (S)-конфигурацию. Такие изомеры
могут быть получены в практически чистой форме классическими методами разделения и стереосинтеза.
Кроме того, алкены могут иметь Е- или Z-конфигурацию. Кроме того, соединения по изобретению могут
быть в несольватированной и сольватированной формах с подходящими растворителями, например водой, ТГФ, этанолом и т.п. В общем, для целей данного изобретения сольватированные формы считаются
эквивалентными несольватированным формам.
Ниже более подробно объясняются различные терапевтические подходы и рассматриваются классы
лекарственных веществ для лечения болезни Альцгеймера.
Энхансеры познавательной функции - ингибиторы холинэстеразы
Болезнь Альцгеймера связана с дегенерацией холинергических нейронов в базальной передней части мозга, которая играет основную роль в познавательной функции, включая память. Пациенты с болезнью Альцгеймера характеризуются заметным снижением активности ацетилхолинэстеразы и поглощением холина. Becker, et al., Drug Development Research, 12, 163-95 (1988). Согласно одному аспекту данное изобретение относится к повышению уровней ацетилхолина путем введения ингибитора холинэстеразы (например, ацетилхолинэстеразы или бутилхолинэстеразы). Холинергические нейроны составляют
основную нейронную систему центральной и периферической нервной системы. Холинергические нейроны продуцируют ацетилхолина нейротранемиттера. В центральной нервной системе ацетилхолин является нейротрансмиттером и высвобождается холинергическими нейронами наряду с другими местами
в гиппокамп и передний кортекс мозга. Область гиппокампа мозга, особенно те области, куда высвобождается ацетилхолин, имеет функции, связанные с познанием, учением и памятью. Дегенеративные болезни с такими симптомами, как потеря познавательной способности, способности к учению и памяти, связывают с потерей холинергических нейронов. Известно, что холинергическая дисфункция, характеризующаяся замеченной дегенерацией холинергической иннервации в базальной передней части мозга, и
снижение уровней холинацетилтрансферазы, ацетилхолинэстеразы и никотиновых и мускариновых рецепторов являются самыми ранними признаками болезни Альцгеймера. Другие нейротрансмиттерные
системы, такие как глутамонергическая, серотонергическая и допаминергическая, также связаны с бо- 23 -
012325
лезнью Альцгеймера, но на более поздней стадии болезни.
Данное изобретение относится также к комбинационному применению рецептора никотинового
ацетилхолина или мускаринового агониста, что приводит к улучшению познавательной функции. Агонисты рецептора никотинового ацетилхолина улучшают познавательную функцию у пациентов с болезнью
Альцгеймера. Wilson, et al., Pharmacol. Biochem. Behavior 51, 509-14 (1995); Americ, et al., Alzheimer Disease Assoc. Disorders 9(suppl. 2), 50-61 (1995); Buccafusco, et al., Behav. Pharmacol. 10, 681-90 (1999). Сообщалось, что мускариновые и никотиновые агонисты улучшают познавательную способность в моделях
животных и у людей. Schwarz, et al., J. Pharmacol. Experim. Theraput. 291, 812-22 (1999); Veroff, et al., Alzheimer Disease Assoc. Disorders 12, 304-12 (1998); Bodick, et al., Alzheimer Disease Assoc. Disorders 11
(suppl. 4), S16-22 (1997).
У субъектов с болезнью Альцгеймера число холинергических нейронов, иннервирующих гиппокамп, обычно уменьшается, и прогрессирующая потеря этих холинергических нейронов отражается на
потере памяти и познавательной функции у этих субъектов. Ацетилхолин синтезируется холинацетилтрансферазой («ChAT»). Будучи высвобожден нейроном он расщепляется холинэстеразами, например,
ацетилхолинэстеразой («AChE»). Таким образом, усиление активности ChAT или ингибирования активности холинэстеразы, например, AChE, может повышать уровни трансмиттера. Эти лекарственные вещества сами по себе обеспечивают улучшение основных симптомов.
Другой терапевтический подход к повышению уровней ацетилхолина основан на регулировании
ChAT в нейронах. Например, эстроген повышает уровень ацетилхолина путем регулирования ChAT в
гиппокампе крыс. Luine, et al., Brain Res., 191, 273-77 (1980); Luine, Exp. Neurology, 89, 484-90 (1985);
Singh et al., Brain Res., 644, 305-12 (1994). Клиническая информация также свидетельствует, что женщины в постклимактерическом периоде, получающие гормон-заместительную терапию (эстроген с добавлением прогестинов или без них), менее подвержены болезни Альцгеймера и более вероятно, что уже
имеющиеся симптомы смягчаются. См., например, WO 93/014085 (производные индола обладают способностью способствовать высвобождению ацетилхолина), патент США № 5278162 (замещенные полициклические соединения способствуют высвобождению ацетилхолина).
Известны многие ингибиторы холинэстеразы. Некоторые ингибиторы холинэстеразы одобрены для
применения в способе лечения для улучшения памяти и обучаемости у субъектов с болезнью Альцгеймера. Такрин (Congnex™, Warner-Lambert Co., теперь Pfizer, New York, New York) был первым одобренным ингибитором холинэстеразы, который используется редко из-за негативных побочных эффектов,
например, проблем с желудком и печенью. Донепезил (Aricept™, Eisai Co., Ltd.) более селективен по отношению к ацетилхолинэстеразе и характеризуется меньшими побочными эффектами, чем такрин. Ривастигмин (Exelon™, Novartis Pharma SA) таргетирует специфический подтип ацетилхолинэстеразы, которая содержится в больших концентрациях в мозгу субъектов Альцгеймера. Галантамин (Reminyl™,
Janssen Pharmaceutica Products, LP) оказывает двойное действие на мозг; в добавление к тому, что он является ингибитором ацетилхолинэстеразы, галантамин также оказывает действие на никотиновые рецепторы ацетилхолина в мозгу. Эти ингибиторы холинэстеразы могут быть ингибиторами ацетилхолинэстеразы или бутилхолинэстеразы или обеих. Другим примером служит фенсерин (в настоящее время проходит клинические испытания в США). Помимо холинергического действия фенсерин может ингибировать
образование β-APP по отдельному и другому механизму действия на уровне мРНК. Другим примером
является AII-082 (также широко испытывается в клиниках). Деградация пути AChE может ингибироваться ингибиторами, такими как физостигмин (Synapton™ или Antilirium Injectable™, Forrest Laboratories,
New York, New York), квилостигмин, толсерин, тиатолсерин, тиацимсерин, неостигмин, эсеромин, зифросилон, местинон, гуперцин А и икопезил.
Фенсерин, ингибитор ацетилхолинэстеразы, в настоящее время разрабатывается (Axonyx, New
York, New York) для лечения болезни Альцгеймера. Фенсерин, который, как было установлено, улучшает память и обучаемость у лабораторных животных, работает по двум механизмам: он ингибирует разложение нейротрансмиттерного ацетилхолина в мозгу животных и он ингибирует образование токсичной формы β-амилоидного белка в мозгу, которая считается причиной гибели мозговых клеток при болезни Альцгеймера. В отличие от других ингибиторов ацетилхолинэстеразы, которые просто подавляют
активность фермента, двойной механизм действия фенсерина позволяет предположить, что он не только
способен улучшать память и познавательную способность, но также способен замедлять развитие болезни. По сравнению с имеющимися на рынке лекарствами для лечения болезни Альцгеймера фенсерин
нацелен на мозг в большей степени, чем на остальной организм, и более быстро выводится из крови. В
процессе доклинических испытаний фенсерин может максимизировать терапевтическое действие лекарства в мозгу и уменьшать побочные эффекты за счет быстрого выведения лекарства из крови. Поскольку
нежелательные побочные эффекты и взаимодействие лекарств часто возникают из-за того, что лекарства
находятся в организме в течение длительного периода, быстрое исчезновение фенсерина из крови позволяет предположить, что он позволит проводить более мягкое лечение по сравнению с существующим.
Даже хотя фенсерин быстро выводится из организма, лекарство остается связанным с ацетилхолинэстеразным ферментом в мозгу, что обеспечивает большую продолжительность терапевтического лечения.
- 24 -
012325
Замещенные фенсерины и фенилкарбаматы эсеролина, норэсеролина и бензилнорэсеролина также являются специфическими ингибиторами ацетилхолинэстеразы. См., например, патенты США № 5171750,
5378723, 5409948, 5998460, 5948763, 6410747, 462171 и 6495700, а также WO 93/06105.
Кроме того, данное изобретение относится к способу поддержания или предотвращения снижения
уровня ацетилхолина во фронтальном кортексе участков гиппокампа в мозгу млекопитающих, включающему введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества первого агента,
например, алкансульфоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли и, возможно, ингибитора холинэстеразы.
Далее, настоящее изобретение относится к способу ингибирования состояний или вредных эффектов, вызванных недостатком холинацетилтрансферазы или ацетилхолина во фронтальном кортексе или
на участках гиппокампа в мозгу млекопитающих, включающему введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества первого агента, например, алкансульфоновой кислоты или ее
фармацевтически приемлемой соли и, возможно, ингибитора холинэстеразы.
Более того, данное изобретение относится к фармацевтическому составу, включающему первый
агент, например, алкансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, возможно, ингибитора холинэстеразы, фармацевтический носитель, разбавитель или эксципиент.
Другой вариант данного изобретения относится к способу, когда состояние вызвано снижением
уровня холинацетилтрансферазы или ацетилхолина во фронтальном кортексе или в гиппокампе мозга
при болезни Альцгеймера.
Используемый термин «эффективное количество» означает количество первого агента, например,
алкансульфоновой кислоты, которая способна поддерживать способность мозговых клеток продуцировать стабильные уровни ацетилхолина в мозгу, например, в гиппокампе и фронтальном кортексе, или
ингибировать состояния или вредные эффекты, вызванные уменьшением ацетилхолина у млекопитающих. Когда алкансульфоновая кислота или другой первый агент вводится совместно с ингибитораом
AChE, термин «эффективное количество» означает также количество такого агента, способное ингибировать AChE. Ингибитор AChE может обозначаться «AChEi».
В этом контексте термин «ингибирование» в контексте условий ингибирования или вредных эффектов, вызванных дефицитом ChAT или ацетилхолина в области фронтального кортекса или гиппокампа, имеет общепринятое значение, а именно, предотвращение, ограничение, смягчение, улучшение, замедление, остановка или обратимость развития или степени снижения ChAT и ацетилхолина и патологических осложнений, т.е. симптомов таких событий.
Термин «апрегуляция ChAT» относится к увеличению активности ChAT, т.е. ускорению превращения холина в ацетилхолин. Это ускорение включает повышение эффективности или скорости реакции
ChAT и холина или увеличение количества ChAT, имеющегося на сайте действия. Это увеличение количества имеющегося фермента могут быть обусловлены регуляции или другой стадией образования фермента или уменьшению деактивации и метаболизму фермента.
Было показано, что Aβ может ингибировать отток ацетилхолина из нейронов при новой стимуляции
и что, кроме того, экзогенный Aβ может ингибировать поглощение холина с высоким сродством. Обычно уровни оттока ацетилхолина (например, из гиппокампа) снижаются в присутствии Aβ в мозгу. Aβ
может действовать несколькими различными путями, проявляя это действие, например, действие на
транспортер холина, модулируя пост-синаптические события, или действие на нейронные рецепторы
ацетилхолинэстеразы (например, nAChr (α7, α2β4). Было показано, что антитела, способные связываться
с Aβ, могут нормализовать уровень оттока ацетилхолина, который обычно снижается в присутствии Аβ в
мозгу (Bales et al., Cholinergic dysfunction in APP V717F transgenic mice is normalized folloving anti-Ap antibody administration. See, Abstract from Neuroscience Meeting, New Orleans, Nov. 2003 program № 133.9).
Первый агент по изобретению, например, алкилсульфоновая кислота, может действовать так же на нормализацию уровней ацетилхолина при связывании с Aβ. Наличие алкансульфоновой кислоты может таким образом предотвратить Aβ от ингибирования оттока ацетилхолина, приводя при этом к увеличению
количества ацетилхолина в синапсе. Является вероятным, что алкансульфоновая кислота и ингибитор
ацетилхолинэстеразы будут действовать синергически, улучшая холинергическую нейротрансмиссию,
так как оба агента повышают уровни ацетилхолина.
Антисмысловое лекарство (EN101) Ester Neurosciences (Herzlia Pituach, Israel) для лечения миастении gravis продемонстрировало впервые эффективное и безопасное применение оральной антисмысловой терапии для лечения неврологического состояния, которое смягчило симптомы миастении gravis без
холинергических симптомов или значительных вредных событий, основанных на балансировании холинергической трансмиссии через регулируемую модуляцию новой мишени компании, являющейся вариантом стресс - ответ ацетилхолин-эстеразы. AChE является ферментом, который разлагает ацетилхолин
нейротрансмиттера. EN101 селективно ингибирует продуцирование мишени на критической стадии биосинтеза, обеспечивая тем самым эффективное лечение при уменьшении побочных эффектов и существенном улучшении по сравнению с кратковременным паллиативным облегчением, наблюдающимся при
применении обычных ингибиторов. EN101 является основным лекарством в технологии Ester's для кон- 25 -
012325
троля преэкспрессии специфического варианта белка AChE, который применяется для различных неврологических расстройств.
Подходящие антагонисты мускариновых рецепторов включают цевимелин, PD-151832, производимый Pfizer Inc., YM-796, производимый Yamanouchi Pharmaceutical Inc., и β-58, производимый Phytopharm plc. Подходящие стимуляторы высвобождения ацетилхолина включают миноприн и монтирелин,
производимые Grunenthal GmbH, T-588, производимый Toyama Chemical Co, Ltd., XE-991. Пригодные
стимуляторы поглощения холина включают МКС-231, производимый Mitzubishi-Tokyo Pharmaceutical
Inc. Подходящие агонисты никотиновых холинергических рецепторов включают алиниклин, производимый SIBIA Neurosciences Inc., SIB-1553А, АВТ-089 (патент США 5278176, Abbott Laboratories), никотиновый пластырь, GRS-21 и ТС-2403.
Такрин стал в 1993 г. первым агентом, одобренным специально для лечения познавательных симптомов болезни Альцгеймера. Такрин является обратимым ингибитором холинэстеразы, и полагают, что
его действие сказывается в увеличении доступности интрасинаптического ацетилхолина в мозгу пациентов с болезнью Альцгеймера. Лекарство может также проявлять другое действие. Донепезил, другой обратимый ингибитор холинэстеразы, теперь тоже доступен для лечения болезни Альцгеймера.
Энхансеры познавательной способности - антагонисты рецепторов NMDA
Избыточное возбуждение, вызванное нейротрансмиттерами, может вызвать дегенерацию и гибель
нейронов. Полагают, что такая дегенерация частично опосредована экситотоксичным действием глутамата и аспартата возбудительных аминокислот у рецептора N-метил-D-аспартата (NMDA). Повышенный
уровень одного или нескольких родственных глутамату соединений ассоциируется со многими нейродегенеративными расстройствами и нейродегенерацией, связанной с длительными болезнями, такими как
болезнь Хантингтона, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (ALS, который также
известен как моторная нейронная болезнь), болезнь Паркинсона и приобретенный иммунодефицит
(AIDS). Антагонисты рецептора возбудительных аминокислот, которые блокируют рецепторы NMDA,
признаны пригодными для лечения этих расстройств. Рецепторы NMDA участвуют в явлении экситотоксичности, которое может быть определяющим фактором возникновения некоторых неврологических
расстройств. Расстройства, которые отвечают за блокаду рецептора NMDA, включают острую церебральную ишемию (удар или травма мозга, например), мышечный спазм, судорожные синдромы, невропатическую боль и беспокойство, и могут являться существенной причиной хронических нейродегенеративных расстройств, таких как болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (ALS), болезнь
Альцгеймера и болезнь Хантингтона. Соединения, которые обеспечивают самую большую защиту нейронов от повреждений, опосредованных рецептором NMDA, например, повреждением, возникающим в
результате стимуляции рецептора NMDA глутаматом или другими возбудительными аминокислотами
или структурно близкими соединениями, могут быть использованы по одному из вариантов данного изобретения.
Некоторые примеры антагонистов рецепторов NMDA известны и коммерчески доступны. Мемантин (Ebixa™ или Axura™, доступный в США в настоящее время от Merz Pharmaceuticals, Frankfurt am
Main, Germany), который действует по другому механизму, предотвращает или уменьшает повреждение
мозга, вызванное болезнью Альцгеймера, путем блокирования рецепторов NMDA в мозгу, см. патент
США 5614560. Мемантин (1-амино-3,5-диметиладамантин) уменьшает нейронное повреждение путем
блокирования канальной активации, управляемой рецептором NMDA и вызванной возбудительными
аминокислотами (такими как родственные глутамату соединения) при концентрациях, которые легко
образуются у людей, принимающих лекарство (Wesemann et al., J. Neurol. Transmission (Supp.) 16, 143
(1980)).
Некоторые лекарства имеют активность антагонистов NMDA, не вызывая гипофункции вследствие
активности у некоторого другого типа рецептора. В мозгу здоровых лабораторных животных такие антагонисты NMDA не вызывают образования вакуолей и других токсичных побочных эффектов, которые
вызываются антагонистами NMDA, такими как РСР и МК-801, вследствие активности дополнительных
нейронных рецепторов.
Такие лекарства и рецепторы, с которыми они взаимодействуют в дополнение к рецепторам
NMDA, включают следующие: ибогаин, который также подавляет возбудительную активность у сигмарецепторов и который может быть также активным по отношению к серотониновым рецепторам, и
Eliprodil, который также повышает ингибиторную активность у сигма-рецепторов; некоторые антихолинергические лекарства, такие как проциклидин, тригексифенидил, бипериден, которые также подавляют
возбудительную активность мускариновых ацетилхолиновых рецепторов, и некоторые хиноксалиндионы, включая NBQX, АСЕА 1021 и АСЕА 1031, которые обсуждаются ниже и которые подавляют активность не-NMDA рецепторов (а именно, рецепторов каиновой кислоты и рецепторов AMPA) в добавление
к рецепторам NMDA.
Как описано в примере 11, NBQX блокирует не-NMDA рецепторы так сильно, что он действует как
агент, обеспечивающий безопасность при совместном введении с МК-801.
Соответственно, эти и другие хиноксалиндионы представляют большой интерес для фармацевтиче- 26 -
012325
ских компаний и часто являются обещающими безопасными антагонистами NMDA. Низкотоксичные
антагонисты NMDA являются хорошими кандидатами, как для лечения болезни Альцгеймера, так и для
дополнительных исследований с целью идентификации аналогов, имеющих баланс и их сродство к связыванию двоих или многих рецепторов. Например, агенты, используемые при болезни Паркинсона, проциклидин, тригексилфенидил и бипериден, все имеют сродство к мускариновым рецепторам, которые в
несколько раз выше, чем в отношении рецепторов NMDA. Дальнейшие примеры антагонистов рецепторов NMDA включают соединения, описанные в патенте США № 4906779, в котором описаны дизамещенные гуанидины, например, N,N'-ди-м-толилгуанидин, N,N'-ди-о-этилфенилгуанидин, N,N'-ди-мэтилфенилгуанидин и N,N'-ди-о-иодфенилгуанидин; в патенте США № 5498610, в котором описаны аналоги 5-(1-гидрокси-2-пиперидино)пропил-2(1H,3H)индолона. Мускариновый агонист также может быть
использован по изобретению. Класс производных стириламидина, являющихся антагонистами рецептора
NMDA человека, является селективным для антагонистов, содержащихся в подъединице NR2B, и могут
применяться по изобретению, см. опубликованную заявку США № 2003/0119871. Подходящие антагонисты рецептора NMDA также включают ипеноксазон, который производит Nippon Chemiphar Co. Ltd.
Используемый термин «агонист» относится к молекуле, которая при взаимодействии с биологически активной молекулой вызывает изменение (например, усиление) в биологически активной молекуле,
или которое позитивно модулирует активность биологически активной молекулы. Агонист взаимодействует с рецептором и инициирует физиологический или фармакологический ответ, характерный для этого
рецептора. Как известно из уровня техники, агонисты включают, но не ограничиваются этим, нуклеиновые кислоты, карбогидраты, липиды или любые другие вещества, которые связываются или взаимодействуют с биологически активными веществами. Термины «антагонист» или «ингибитор», используемые
в данном изобретении, относятся к веществу, которое при взаимодействии с биологически активной молекулой блокирует или негативно модулирует биологическую активность биологически активной молекулы. Антагонисты противодействуют связанным с рецепторами ответам, обычно вызванным другими
биоактивными агентами (а именно, агонистами). Антагонисты и ингибиторы включают, но не ограничиваются этим, белки, нуклеиновые кислоты, карбогидраты, липиды или любые другие вещества, которые
связываются или взаимодействуют с биологически активными молекулами. Ингибиторы и антагонисты
могут влиять на биологию целых клеток, органов или организмов (например, ингибитор, который замедляет или предотвращает нейронную дегенерацию и гибель нейронов).
Эстрогены
Эстроген играет огромную плейотропную роль во многих нейродегенеративных состояниях, включая болезнь Альцгеймера. Было показано, что женщины подвержены большему риску, более раннему
началу болезни и более быстрому развитию болезни Альцгеймера, чем мужчины, хотя заболеваемость и
не связана с полом. Потеря эстрогенов в постклимактерический период приводит к обычно обратимой
потере памяти, что подвергается эстрогенозаместительной терапии. Кроме непосредственного блокирования нейротоксичности эстроген действует на различных уровнях пластичности: роста аксонов, синаптогенезиса, ускорения синаптической трансмиссии (электрофизиологически и биохимически). Это действие может быть приписано или механизмам, зависящим от рецепторов, в основном, транскрипционному, включая непосредственное действие ER в процессе транскрипции и косвенное действие посредством
других транскрипционных факторов, таких как CREB и Akt, а также их ретроградный транспорт, или
независящим от рецепторов (быстрым) механизмам, включающим активационное действие вторичных
мессенджерных систем, сосуществующую нейротрансмиссию или координированную активацию обоих
механизмов, а также окислительное действие молекулы эстрогена. Возмещение эстрогена уменьшает
риск заболевания болезнью Альцгеймера в постклимактерический период у женщин, увеличивает возраст проявления заболевания и, возможно, замедляет ухудшение здоровья. Эстрогенные агенты включают эстроген, лазофоксифен, дролоксифен, гамоксифен и ралоксифен (Evista™, Eli Lilly, Indianapolis, Indiana).
Согласно настоящему изобретению пригодны также композиции или терапевтические комбинации,
которые дополнительно включают гормонозаместительные агенты и композиции. Пригодные гормоны и
композиции включают андрогены, эстрогены, прогестины, их фармацевтически приемлемые соли и производные. Пригодны также комбинации этих агентов и композиции.
Примеры эстрогенов включают, но не ограничиваются этим, комбинации андрогена и эстрогена,
такие как комбинация этерифицированных эстрогенов (эстронсульфат натрия и эквилинсульфат натрия)
и метилтестостерона, доступного в Solvay Pharmaceuticals, Inc., Marietta, GA, в виде Estrotest™; смесь
девяти синтетических эстрогенных соединений, включая эстронсульфат натрия, эквилинсульфат натрия,
17α-дигидроэквилинсульфат натрия, 17α-эстра-диолсульфат натрия, 17β-дигидроэквилинсульфат натрия, 17α-дигидроэквиленинсульфат натрия, 17β-дигидроэквиленинсульфат натрия, эквиленинсульфат
натрия и 17β-эстрадиолсульфат натрия; доступная в Duramed Pharmaceuticals, Inc., Cincinnati, Ohio в виде
Cenestin™; этинилэстрадиол, доступный в Schering Plough Corporation, Kenilworth, NY в виде Estinyl™;
комбинации этерифицированных эстрогенов, такие как эстронсульфат натрия и эквилинсульфат натрия,
доступные в Solvay в виде Estratab™ и в Monarch Pharmaceuticals, Bristol, Term., в виде Menest™; эстро- 27 -
012325
пипат, доступный в Pharmacia and Upjohn, Peapack, NY, в виде Ogen™ и в Women Ferst Health Care, Inc.,
San Diego, Calif., в виде Orto-Est™ и сопряженные эстрогены (17α-дигидроэквилин, 17α-эстрадиол и 17βдигидроэквилин), доступные в Wyeth, Philadelphia, Pa., в виде Premarin™. Другой пример эстрагенов
описан в патенте США № 6610706.
Прогестины и эстрогены могут применяться в комбинациях, включающих эстрадиол и норетиндрон, которые получают в Pharmacia and Upjohn, Peapack, N. J. в виде Activella; левоноргестрел и этинилэстрадиол, которые производят в Wyeth в виде Alesse™, в Watson Laboratories Inc., Corona, Calif, в виде
Levora™ и Trivora™ в Monarch Pharmaceuticals в виде Nordette™ и в Wyethas Triphasil™; этинодиолдиацетат и этинилэстрадиол, которые выпускает G. D. Searle and Co., в виде Lemulen™ и Zovia™; дезогестрел и этинилэстрадиол, производимые Organon в виде Desogen™ и Mircette™ и Ortho-McNeil Pharmaceuticals, Raritan, N.Y. в виде Ortho-Cept™; норетиндрон и этинилэстрадиол, выпускаемые Parke-Devis, Morris Plains, N. Y., под торговыми марками Estrostep™ и Femhrt™, Watson в виде Microgestin™, Necon™ и
Tri-Norinyl; Ortho-McNeil в виде Modicon™ и Ortho-Novem™ и Warner Chilcott Laboratories, Rockaway, N.
Y., под торговой маркой Ovecon™; комбинация норгестрела и этинилэстрадиола, которую выпускает
Wyeth под торговыми марками Ovral™ и Lo/Ovral™; Watson под торговыми марками Ogestrel™ и LowOgestrel™; комбинацию норетиндрона, этинилэстрадиола и местранола, выпускаемую Watson в виде
Brevicon™ и Norinyl™; комбинацию 17β-эстрадиола и микронизованного норгестимата, вьпускаемую
Ortho-McNeil под торговой маркой Ortho-Prefest™; комбинацию норгестимата и этинилэстрадиола, выпускаемую Ortho-McNeil под торговыми марками Ortho Cyclen™ и Ortho Tri-Cyclen™; комбинацию сопряженных эстрагенов (эстронсульфат натрия и эквилинсульфат натрия) и ацетата медроксипрогестерона, производимую Wyeth под торговыми марками Premphase™ и Prempo™.
Примеры прогестинов включают норетиндрон, выпускаемый ESI Lederle, Inc., Philadelphia, Pa., в
виде Aygestin™, Ortho-McNeil под торговой маркой Micronor™; Watson в виде NOR-QD™; норгестрел от
Wyeth в виде Ovrette™; микронизированный прогестерон от Solvay в виде Prometrium™; и ацетат медоксипрогестерона от Pharmica and Upjohn под торговой маркой Provera™.
Нестероидные противовоспалительные лекарства
Нестероидные противовоспалительные лекарства (NSAIDs), по всей вероятности, появились в целях задержки развития болезни Альцгеймера. Полагают, что противовоспалительные лекарства связаны
с микроглиальным астроцитным и цитокиновым ответами, которые возникают в ходе болезни Альцгеймера. Доказано, что NSAIDs, включающие ибопрофен, напроксен, сулиндак и индометацин, обладают
селективным действием по отношению к Аβ42 независимо от воздействия циклооксигеназы. S. Weggen,
et al., «Asubject of NSAIDs lower amyloidogenic Aβ42 independently or cyclooxygenase activity», Nature 414,
212-16 (2001). Несмотря на то, что механизм уменьшения Aβ42 этими NSAIDs не установлен, эффект
воздействия независим от ингибирования циклооксигеназы, что составляет основную противовоспалительную цель этих соединений. Оказывается, что NSAIDs не изменяют общий уровень накопления Aβ,
однако сдвигают расщепление Aβ42 на менее токсичный и более низкомолекулярный Aβ-пептиду, содержащему 38-аминокислоту, что предполагает их взаимодействие с γ-секретазой. Один класс разрабатываемых соединений является ингибиторами PDE4, которые действуют как противовоспалительное
средство при испытаниях на мышах. Такой противовоспалительный реагент, т.е. ролипрам, блокирует
микроглиальный воспалительный ответ и может иметь токсичные побочные эффекты, но более новые
аналоги без таких побочных эффектов еще находятся в стадии разработки. Wilcock и др. «Intracranially
Administered Anti-Abeta Antibodies Reduce Beta-Amiloid Deposition by Mechanisms Both Independend and
Associated with Microglial Activation» J. Neurosci. 23(9), 3745-51 (2003). Например, согласно Memory
Pharmoceutical's MEM-1414 является одним из ингибиторов PDE4 и в настоящее время используется при
изучении болезни Альцгеймера.
Приемлемые противовоспалительные соединения включают ингибитор СОХ-2 (такие как Vioxx™ и
Celebrex™), ингибиторы цитокина (такие как талидомид, описанный в WO 95/04533, и дексанабинол),
дополнительные ингибиторы антагонисты рецептора лейкотриена и их комбинации. Примеры включают
производные уксусной кислоты, сулиндак (Clinoril™, Merck and Co., Inc., Rahway, New Jersey), индометацин (Indocin™, Merck and Co., Inc., Rahway, New Jersey); этодолак (Lodine™, Wyeth, Medison New Jersey); набуметон (Relafen™, GlaxoSmithkline, Meddlesex, England), толметин натрия (Tolectine™, McNeil
Pharmaceuticals, Spring House, Pennsylvania); производные антраниловой кислоты: меклофенамат натрия
(Meclomen™, Pfezer, New York, New York), мефенамовую кислоту (Penstel™, Pfizer, New York, New
York), производные эноловой кислоты: пироксикам (Feldene™, Pfizer, New York, New York), мобик (мелоксикам), производные фенилуксусной кислоты: артротек (диклофенак/мизопростол), Voltaren™ (диклофенак), производные пропионовой кислоты: напроксен натрия (Anapeox™, Naprosyn™, Hoffmann-La
Roche Inc., (Roche), Nutley, N.Y.), флюрбипрофен (Ansaid™, Upjohn, сейчас Pfizer, New York, New York),
оксапрозин (Daypro™ G. D. Searle, сейчас Pfizer, New York, New York), ибупрофен (Motrin™ Upjohn, сейчас Pfizer, New York, New York), фенопрофен кальция (Nalfon™, Dista, Ranbaxy, Princeton, N. Y.), кето- 28 -
012325
профен (Oruvail™ или Orudis™, Wyeth, Madison, New Jersey), кеторолак трометамина (Toradol™, Syntex
Laboratories, Hoffmann-La Roche Inc., (Roche), Nutley, N.Y.); производные салициловой кислоты: дифлюнизал (Dolobid™, Merck and Co., Inc., Rahway, New Jersey); и селективные ингибиторы СОХ-2: Bextra™
(вальдесоксиб), Celebrex™ (целекоксиб, Pfizer, New York, New York), и Vioxx (рофекоксиб, Merck and
Co., Inc., Rahway, New Jersey). Флюрбипрофен в настоящее время является предметом клинических испытаний, проводимых Myriad Genetics на пациентах с болезнью Альцгеймера.
Maas BiolAB (Albuquerque, New Mexico) разрабатывает циклоспорин как противовоспалительный
агент нейропротекции, ЕР 813420 В1. Циклоспорины, класс лекарственных препаратов, более известных
как иммуносуппресанты, были разработаны для использования в новых целях в качестве наиболее эффективных нейропротектантов для защиты при спектре нервных заболеваний, когда они пересекают кровемозговой барьер. Циклоспорины защищают митохондрию мозга и предотвращают гибель нейронов
при травме мозга, повреждении спинного мозга, ударах, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, а также при боковом амиотрофическом склерозе (ALS) на моделях животных.
Антиоксиданты
Как орган, богатый липидами, ЦНС, в частности, чувствителен к влиянию липидного перокисления
при модулировании клеточных сигнальных путей, клеточной дисфункции, гибели клеток нервной системы. При болезни Альцгеймера появилось доказательство роли окислительного стресса при нейродегенерации, так как наблюдались многократные признаки окислительного стресса, включая окисление белка,
уменьшенное содержание полиненасыщенных жирных кислот, повреждение митохондрия и нуклеарной
ДНК.
Свободные радикалы (например, радикалы-надокиси) используются фагоцитами для того, чтобы
убивать бактерии и разрушать инородные вещества путем окисления. Обычный избыток надокисей погашается дисмутазой надокисей, однако, если окислительный стресс вызывает перепроизводство радикалов или если образование надокисей превышает возможности дисмутазы надокисей, тогда может иметь
место нежелательное окислительное повреждение. В. Halliwell, Acta Neurol. Scand. 126, 23-33 (1989). В
случае болезни Альцгеймера окисление белка, окисление ДНК и перокисление липидов больше, чем у
контрольных групп, подобранных по возрасту. S.S. Pitchumoni et al., N. Engl. J. Med. 46 (12), 1566-72
(1998).
Термин «антиоксидант» означает любое вещество, способное защитить от окислительного стресса,
вызванного реакционноспособными частицами кислорода, такими как свободные радикалы. Антиоксиданты обычно создаются таким образом, чтобы они могли быть окислены раньше других веществ. В дополнение к дисмутазе надокисей каталаза и глюкатионпероксидаза реагируют с перекисью водорода и
превращают ее в воду и двухатомный кислород. Другие антиоксиданты включают витамин Е (αтокоферол), витамин С (аскорбиновая кислота), витамин А (ретиноевая кислота), коэнзим Q и селегилин.
Витамин Е α-токоферол, обрывает свободный радикал, отдавая атом водорода путем получения токофероксирадикала, который поглощает другой пероксирадикал с получением α-токоферолхинона, устойчивого соединения. В отличие от многих других антиоксидантов, витамин Е является липофильным и
таким образом растворимым в центральной нервной системе и способным локализоваться в клеточной
мембране, предотвращая тем самым перокисление липидов. Глютамат и Aβ совместно, как было доказано, стимулируют продуцирование свободных радикалов в культивированных нейронах, но этот процесс
замедляется добавлением каталазы или α-токоферола и агентов, которые повышают активность каталазы. Н. Hara et al., Brain Res. 510, 335-38 (1990).
Витамин Е, как было доказано, замедляет ухудшение познавательной способности при болезни
Альцгеймера и при опытах на моделях крыс. Лечение пациентов с болезнью Альцгеймера витамином Е
показало уменьшение скорости функциональных отклонений. Хотя не ясно, имеет ли отношение причинная зависимость окисления к этиологии болезни Альцгеймера, например, является ли это вторичным
эффектом стресса, вызванного синаптическими или нейронными потерями, лечение антиоксидантами,
как было замечено, является органичным, но имеет обнадеживающую перспективу при лечении болезни
Альцгеймера. Витамин Е не имеет отрицательных показателей при взаимодействии с другими медицинскими препаратами и может использоваться в комбинации с другими терапевтическими методами лечения болезни Альцгеймера. С. Behl et al., «Vitamin E protects nerve cells from beta-amyloid protein toxicity».
Biophys. Res. Commun. 186, 944-50 (1992); M. Sano et al., «Rational and design of a multicenter study of selegiline and α-tocopherol in the treatment of Alzheimer disease using novel clinical outcomes», Alzheimer Dis.
Assoc. Disord. 10, 132-40 (1996); H. Kappus et al., «Tolerance and safety of vitamin E: a toxicological position
report» Free Radic. Biol. Med. 13, 55-74 (1992).
Селегилин ингибирует моноаминоксидазу, которая может превращать определенные протоксины в
токсины. L.S. Schneider J. Clin. Psychiatry 57, 30-36 (1996). Селегилин и другие ингибиторы моноаминоксидазы типа В могут защищать нейроны от окислительного повреждения и в то же время не нарушают
воздействия ингибиторов типа А, которые метаболизируют серотонин и норепинефрин. Селегилин также
ингибирует окислительное деаминирование допамина, что препятствует образованию свободных радикалов и последующего повреждения нейронов. М. Sano et al., Alzheimer Dis. Assoc. Disord. 10, 132-40
- 29 -
012325
(1996). Селегилин благодаря своим антиокислительным и нейропротекторным свойствам может замедлять развитие болезни Альцгеймера. Воздействие селегилина на метаболизм катехоламина может способствовать эффективности селегилина при задержке развития болезни Альцгеймера у пациентов с умеренным ухудшением.
Другие антиоксиданты включают поглотители свободных радикалов, Egb-761, yuyu industrial, CPI21, деканабинол и хелатообразователи железа, которые мешают железу вступать в реакции с образованием гидроксильных радикалов. Дисферриоксиамин препятствет повреждению радикалов in vivo, и клинические испытания доказывают, что это может замедлить развитие болезни Альцгеймера. Еще одним
примером является НСТ-1026 (NO-флюрбипрофен), который является производным флюрбипрофена,
донором закиси азота, которая в настоящее время проходит клинические испытания на людях NicOx SA
(Sophia Antipolis, France). Постоянное применение NSAIDs может привести к образованию язвы желудка
и ухудшение функции почек. Закись азота, как полагают, устраняет или делает обратными такие побочные эффекты, что заставляет обратить внимание на НСТ-1026.
Агонисты рецептора, активированного пероксомным пролифератором (PPAR)
В данном изобретении являются также полезными композиции или терапевтические комбинации,
которые содержат, кроме того, по крайней мере один (один или более) рецептор, активированный пероксомным пролифератором (PPAR). Рецепторы действуют как агонисты рецепторов, активированных пероксомным пролифератором-альфа (PPARα), -гамма (PPARγ) и -дельта (PPARδ), который также известен
как PPARP или NUCI.
Воздействие на человеческие клетки агонистами рецепторов, активированных пероксомными пролифераторами PPAR, агонистами PPARαaa или PPARβ модулирует, уменьшает или устраняет образование или высвобождает из клетки Aβ, в частности, Aβ42. См. публикацию американской патентной заявки
№ 2003/0125338, в которой описано применение рецепторов, активированных пероксомными пролифератороми для лечения амелоидоза, болезней и связанных с ними условий. Рецепторы, активированные
пероксомным пролифератором (PPARα, PPARδ и PPARγ), являются семейством гена ядерного рецептора, Desvergne et al., Endocrine Rev. 20, 649-88 (1999). PPARs обычно активируются жирными кислотами и
подобными производными. Было установлено, что PPARδ с пользой используются для увеличения уровня липопротеина высокой плотности (HDL) в человеческом организме. См., например, WO 97/28149, где
описаны PPAR агонисты, которые полезны для повышения липопротеина высокой плотности (HDL) в
плазме у млекопитающих. Активатор PPARα полезен, среди прочего, для понижения уровня триглицеридов, умеренного понижения уровня LDL и повышения уровня HDL. Полезными примерами активаторов PPARα являются фибраты.
В отличие от PPARα функция PPARδ не так хорошо понятна. Хотя PPARδ повсеместно экспрессируется в мозговой и жировой тканях, а кожа имеет более высокий уровень относительной mRNA экспрессии. (J.M. Peters, et al., Mol. Cell. Biol. 20, 5119-28 (2000)). Профиль экспрессии PPARδ предполагает
его вовлечение в функции мозга. G. Xing, et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 217, 1015-25 (1995). Более того, PPARδ может быть вовлечен в обратный транспорт холестерина. W. R. Olever, et al., Proc. Nat'l
Acid. Sci. USA 98, 5306-11 (2001). Примеры PPARδ агонистов включают вальпроевую кислоту (Lampen,
et al., Tox. Appl. Pharmacol. 160, 238-49 (1999)), GW501516 (W. R Oliver, et al., Proc. Nat'l Acid. Sci. USA
98, 5306-11 (2001), L-165041, L-165461, L-783483 и L-796449 (Berger, et al., J. Biol. Chem. 274, 6718-25
(1999)).
Обычное исследование может быть проведено с целью определения возможности влияния какойлибо композиции на высвобождение Aβ по крайней мере из одной клетки in vivo. Приемлемый метод
анализа использует клетки SM-4, которые устойчиво трансфецируются с предшественником мутантного
амилоида белка шведского типа, и затем обрабатывались анонистом PPARα или PPARδ, таким как пириниксиновая кислота или ее производными. После обработки среда собирается и исследуется на содержание Aβ40 и Aβ42. Статистически значимое уменьшение (р<0,05) концентрации Aβ40 или Aβ42 в среде
сравнимо с соответствующими контрольными показателями показывает, что лечение ингибирует или
подавляет образование Aβ40 и Aβ42 или выводит из клеток. Если соединение уменьшает образование Aβ42
или выводит его на статистически значимую величину при сравнении с контрольными показателями (отсутствие соединения или присутствие носителя), оно считается модулирующим Aβ42, по изобретению.
Примером PPAR агониста является пириниксиновая кислота, которая, как было доказано, вызывает
уменьшение образования Aβ42 или высвобождение его из клеток SM-4 в зависимости от концентрации.
Пириниксиновая кислота была определена в качестве гиполипидемического агента, см. патент США
№ 3814761, который охарактеризовал это, и родственные соединения как противолипидемические агенты. Может быть соблазнительным рассматривать активность воздействия пириниксиновой кислоты на
образование или высвобождение Aβ42, непосредственно относящуюся к ее гиполипидемическому действию, в частности, ввиду клинической взаимосвязи между гиперхолестеринемией и болезнью Альцгеймера. Wolozin, Proc. Nat'l Acid. Sci. USA 98, 5306-11 (2001). Известно, что фибраты действуют как холестеринпонижающие агенты, но они обычно неизвестны в целях снижения образования Аβ42 или его высво- 30 -
012325
бождения. Например, сообщалось, что когда клетки SM-4 были обработаны клофибратом или культуральная среда была собрана и испытана на уровне Aβ42, было обнаружено, что клофибрат увеличивает
уровни внеклеточного Аβ42 при концентрации 50-500 мкМ. Подобные результаты были получены с
5,8,11,14-эйкозатетраионовой кислотой (ETYA) при концентрации 20-50 мкМ. Факт, что три PPARα агониста (все из них являются веществами, понижающими холестерин), обладающие в корне различным
воздействием на образование Aβ42 или на высвобождение из SM-4 клеток, подразумевает, что некоторые из PPARα агонистов влияют на образование Aβ42 или его удаление через механизм, который не сопутствует в точности их роли в качестве веществ, понижающих холестерин. См. патентную заявку США
№ 2003/0013699, в которой описаны новые гетероциклические структуры, разработанные для профилактики, лечения или ослабления болезни Альцгеймера, регулирующие образование или уровень βамилоидных пептидов в потоке крови или в мозгу.
Не ограничивающие примеры приемлемых производных фибриновой кислоты («фибраты») включают клофибрат (такой как этил-2-(п-хлорофенокси)-2-метилпропионат, например капсулы Атромид-S™,
которые в промышленном масштабе выпускает Wyeth, Madison, New Jersey); гемфиброзил (такой как 5(2,5-диметилфенокси)-2,2-диметилпентановая кислота, например, таблетки Lopid™, которые в промышленном масштабе выпускает Pfizer, New York, New York); ципрофибрат (С.A.S. Registry № 52214-84-3,
см. патент США № 3948973, в котором описан синтез таких галоциклопропилзамещенных феноксиалкановых кислот и эфиров); безафибрат (C.A.S. Registry № 41859-67-0, см. патент США № 3781328, в котором описан синтез новых соединений феноксиалкилкарбоновой кислоты и их способность снижать уровень липида и холестерина в сыворотке); клинофибрат (C.A.S. Registry № 30299-08-2, см. патент США
№ 3716583, в котором описано получение навых антиатеросклеротических агентов); фенофибрат (такой
как Tricor™ микронизированный фенофибрат (2-[4-(4-хлорбензоил)фенокси]-2-метилпропановая кислота, 1-метилэтиловый эфир), который получают Abbott Laboratories, Abbott Park Illinois или Lipantyl™
микронизированный фенофибрат, производимый Laboratories Founice, Chenôve, France).
Другие примеры PPARα активаторов включают приемлемые фторфенильные соединения, описанные в патенте США № 6028109, в котором раскрывается способ применения PPARα агонистов для производства лекарства для лечения ожирения и методы лечения ожирения; некоторые замещенные фенилпропионовые соединения, указанные в WO 00/75103, который описывает новые производные замещенной фенилпропионовой кислоты, способные связываться в качестве лиганда с PPARα, чтобы активировать рецептор и таким образом снизить уровень липида в крови; PPARα активаторы раскрыты в
WO 98/43081, которая описывает методы и композиции для лечения организма с желудочно-кишечным
заболеванием путем введения композиции, содержащей фармацевтически активное количество модулятора PPAR. Неограниченные примеры приемлемых PPARγ активаторов включают производные глитазонов или тиазолидиндионов, такие как троглитазон (такой как Rezulin™ 5-([[[4-(3,4-дигидро-6-гидрокси2,5,7,8-тетраметил-2Н-1-бензопиран-2-ил)метокси]фенил]метил]-2,4-триазолидиндион), производимый в
промышленном масштабе фирмой Pfizer, New York, New York); росиглитазон (такой как Avandia™ росиглитазона малеат 5-[[4-[2-(метил-2-пиридиниламино)этокси]фенил]метил]-2,4-триазолидиндион, (Z)-2бутеиндиоат), выпускаемый GlaxoSmithKline, Middlesex, England) и пиоглитазон (такой как Actos пиоглитазона гидрохлорид (5-[[4-[2-(5-этил-2-пиридинил)этокси]фенил]метил]-2,4-триазолидиндиона моногидрохлорид), выпускаемый в промышленном масштабе фирмой Takeda Pharmaceuticals, Lincolnshire,
Illinois). Другие полезные тиазолидиндионы включают циглитазон, энглитазон, дарглитазон и BRL
49653, см. WO 98/05331, который предлагает такие соединения для профилактики и лечения диабетов
типа 2 и сердечно-сосудистых заболеваний; активаторы PPARγ раскрыты в WO 00/76488, где описаны
методы профилактики или задержки начала диабета типа 1; и PPARγ активаторы, раскрытые в патенте
США № 5994554, в котором описан способ определения с помощью радиометки способности соединения реагировать или не реагировать с PPARγ.
Другие используемые PPARγ активаторы включают некоторые ацетилфенолы, см. патент США
№ 5859051, в котором описан ацетилфенол и его аналоги для использования соединения для борьбы с
ожирением и диабетом; некоторые хинолинфенильные соединения раскрыты в WO 99/20275, где описано использование таких соединений для связи активности PPAR рецепторов с такими соединениями;
арильные соединения, раскрытые в WO 99/38845, в котором описаны такие соединения для использования в качестве PPARγ модуляторов при лечении состояний, таких как диабет типа 2 и ожирения; некоторые 1,4-диазамещенные фенильные соединения раскрыты в WO 00/63161, в которой описаны такие соединения, как высокоселективные агонисты для рецептора PPAR или пролекарства агонистов для PPAR
рецептора и вследствие этого применяемые для лечения диабета типа 2; некоторые арильные соединения, раскрытые в WO 01/00579, в которой описаны такие соединения, как модуляторы активности
PPARγ, которые используются в фармацевтических композициях и способах лечения состояний диабета
типа 2 и ожирения; соединения бензойной кислоты, раскрытые в WO 01/12612 и WO 01/12187, в которых
описаны такие соединения, как PPAR агонисты, в частности PPARγ, используемые для лечения состояний инсулиновой резистентности, включая сахарный диабет типа 2; замещенные 4- 31 -
012325
гидроксифенилалкановой кислоты соединения, раскрытые в WO 97/31907, в которой описаны такие соединения, как обнаруживающая активация, включая активность агониста по отношению к PPARδ, таким
образом, тем самым модулировать уровни глюкозы в крови у млекопитающих.
PPARδ полезны, среди прочего, для понижения уровней триглицерида или повышения уровней
HDL. Не ограничивающие примеры активаторов PPARδ включают приемлемые производные тиазола и
оксазола, таких как C.A.S. Registry № 317318-32-4, см., например, WO 01/00603, в которой описывается
использование памовой кислоты или одного из ее производных для изготовления медикамента для лечения болезней, характеризующихся отложениями амилоидных агрегатов; приемлемые аналоги не-βокисляемых жирных кислот; некоторые фтор-, хлор- или тиофеноксифенилуксусные кислоты, см., например, WO 97/28149, в которой описаны такие соединения, полезные для повышения уровней липидов
высокой плотности HLD в плазме млекопитающих и для профилактики, остановки или замедления развития атеросклеротических сердечно-сосудистых заболеваний и родственных состояний; см., например,
патент США № 5093365, в котором описывается способность таких аналогов жирных кислот для понижения концентрации в крови холестерина и триглицерида; и PPARδ, раскрытые в WO 99/04815, в которой описаны медицинские композиции с холестеринпонижающим эффектом, содержащие в качестве
активного ингредиента, соединения с эффектом активации PPARδ рецептора, обладающего свойством
понижения LDL-холестерина.
Более того, соединения, которые имеют множественную функциональность для активации различных комбинаций PPARα, PPARγ и PPARδ практически также применяются в настоящем изобретении.
Неограничивающие примеры включают некоторые арилзамещенные соединения, раскрытые в патенте
США № 6248781, в котором описана способность таких соединений для лечения или профилактики состояний, опосредованных нуклеарными рецепторами, в частности PPAR; WO 00/23416, WO 00/23415,
WO 00/23445, WO 00/23451 и WO 00/63153, все из которых описывают соединения, которые могут применяться для лечения состояний, опосредованных PPARα или PPARγ активаторами, таких как диабет и
ожирение. Другие неограничивающие примеры PPARα и PPARγ активаторов включают активаторы, указанные в WO 97/52042, где описано использование фармацевтически эффективного количества агониста
PPARα и PPARγ для лечения и профилактики синдрома X; активаторы, указанные в WO 00/63190, где
описаны новые соединения, которые могут быть использованы для лечения или профилактики состояний, опосредованных нуклеарным рецептором, в частности PPAR; активаторы, указанные в
WO 01/21181, где описаны новые лекарственные препараты, эффективные против заболеваний, связанных с гликометаболизмом и липидным метаболизмом, путем ингибирования или промотирования
PPARα или PPARγ; биарилокса(тиа)зольные соединения, описанные в WO 01/16120, где модуляторы
PPARs применяются для лечения диабетов типа 2 и сердечно-сосудистых заболеваний; соединения, описанные в WO 00/63196, применяемые для лечения или профилактики состояний, опосредованных нуклеарными рецепторами, в частности, Retinoid X Receptor и семьями PPARs, и WO 00/63209 описывает фармацевтические композиции, используемые для лечения или профилактики условий, опосредованных
PPARs; замещенные 5-арил-2,4-тиазолидиндионы, раскрытые в патенте США № 6008237, где описаны
замещенные 5-арил-2,4-тиазолидиндионы как сильные агонисты PPAR и, таким образом, применяемые
для лечения, контроля или профилактики диабетов, гипергликемиии, сосудистого рестеноза и других
болезней, опосредованных PPAR; соединения арилтиазолидиндиона и арилоксазолидиндионов, раскрытые в WO 00/78312 и WO 00/78313, где описаны замещенные 5-арил-2,4-тиазолидиндионы и оксазолидиндионы как сильные агонисты PPAR и, следовательно, приемлемые при лечении, контроле или профилактике болезней, опосредованных PPARα или PPARγ; GW 2331 или (2-[(4-[дифторфенил]-1гептилуреидо)этил]фенокси)-2-метилмасляная кислота, см., например, WO 98/05331, где описаны такие
соединения для профилактики и лечения диабетов типа 2 и сердечно-сосудистых болезней с диабетом и
преддиабетным состоянием или симптомами путем применения PPARα агониста и PPARγ агониста, или
активации как PPARα, так и PPARγ; ариловые соединения, указанные в патенте США № 6166049, где
раскрыт метод, включающий в себя введение PPARα и PPARγ; соединения оксазола, указанные в
WO 01/17994, где описана химическая модификация PPAR агониста на основе фосфора; и соединения
дитиолана, указанные в WO 01/25225 и WO 01/25226, где описаны методы синтезирования новых производных дитиолана с высокой степенью сродства к PPARα или PPARγ.
Другие полезные PPAR активаторы включают замещенные бензилтиазолидин-2,4-дионы, как указано в WO 01/14349, WO 01/14350 и WO 01/04351, в которых показано, как такое соединение в качестве
лиганда человеческого PPAR, усиливает транскрипционную активность рецептора и способствует понижению уровня сахара в крови и уровня липида; меркаптокарбоновые соединения, указанные в
WO 00/50392, где показано, как такие соединения оказывают высокое антигипергликемическое и PPARактивирующее действие; аскофураноновые соединения, указанные в WO 00/53563, где показано, как такие соединения используются для профилактики или лечения диабета, хронических воспалений, рака
пищеварительных органов и т.д.; карбоксильные соединения, указанные в WO 99/46232, обладают свойствами регулирования PPARs; соединения, указанные в WO 99/12534, где описаны ароматические соединения, обладающие эффектом регулирования PPAR; соединения бензола, указанные в WO 99/15520,
- 32 -
012325
где описаны соединения, обладающие эффектом регулирования PPAR и поэтому пригодные для лечения
родственных заболеваний; о-анизамидные соединения, указанные в WO 01/21578, где описана способность таких соединений работать как PPAR агонисты; и PPAR активаторы, указанные в WO 01/40192,
где описаны гетероциклические соединения, которые обладают эффектом понижения уровня глюкозы в
крови, понижения уровня липида в крови, улучшает инсулиновую резистентность и активирует PPAR.
Агенты, понижающие уровень холестерина
Так как один аспект настоящего изобретения относится к лечению болезни Альцгеймера, регулирующему образование или уровень β-амилоидного пептида (Aβ) или регулирующего количество изоформы 4 ApoE в потоке крови или в мозгу путем лечения сочетанием активных ингредиентов, в котором
активные ингредиенты могут вводиться раздельно, изобретение также относится к комбинированию раздельных фармацевтических композиций в форме набора. Таким образом, изобретение включает набор, в
котором соединены две отдельные части: фармацевтическая композиция, содержащая по крайней мере
одно соединение из любого, приведенного в формуле, и отдельная фармацевтическая композиция, содержащая по крайней мере один ингибитор биосинтеза холестерина, понижающий уровень липида, как
описано выше. Согласно другому варианту набор может включать указания по применению отдельных
компонентов. Форма набора особенно выгодна тогда, когда отдельные компоненты должны регулироваться различной дозировочной формой (например, оральной и парентеральной) или вводиться в различных интервалах приема.
Согласно другому варианту композиции, используемые в методах настоящего изобретения, могут
дополнительно включать в себя один (или более) ингибитор АцилКоА:холестерин О-ацилтрансферазы
(АКАТ), которые могут понизить уровень LDL и VLDL при совместном введении или в сочетании с соединением или соединениями указанных формул. АКАТ является ферментом, ответственным за этерификацию избыточного внутриклеточного холестерина, который может замедлять синтез VLDL, являющийся продуктом этерификации холестерина и перепроизводства апо-В-100-содержащих протеинов.
Неограничивающие примеры полезных ингибиторов АКАТ включают авасимиб ([[2,4,6-трис(1метилэтил)фенил]ацетил]сульфамовой кислоты, 2,6-бис(1-метилэтил)фениловый эфир, ранее известный
как CI-1011), HL-004, лецимиб (DuP-128) и CL-277082 (N-(2,4-дифторфенил)-N-[[4-(2,2диметилпропил)фенил]метил]-N-гептилмочевина). См. P.Chang et al., «Current New and Future Treatment
in Dyslipidaemia and Atherosclerosis», Drugs 60(1), 55-93 (2000).
Существует сложная взаимосвязь между болезнью Альцгеймера, гомеостазом холестерина и агентами, использованными для регулирования уровня холестерина в человеческом организме. WO 00/28981
описывает введение ингибитора HMG СоА редуктазы (3-гидрокси-3-метилглутарил-СоА-редуктазы) с
целью уменьшения риска начала приступов болезни Альцгеймера. Использованными ингибиторами были ловастатин, правастатин или их комбинация. Однако подобной корреляции не наблюдалось при использовании симвастатина. WO 00/31548 также указыват ингибиторы HMG СоА редуктазы, в частности,
статины. Интересно, что симвастатин, предложенный в качестве ингибитора, контрастирует с результатами, изложенными в WO 00/28981, где отмечено, что не уменьшалось преобладание болезни Альцгеймера у субъектов, на которых проводилось лечение симвастатином.
Более половины общего количества холестерина, находящегося в организме человека, произведено
собственным биосинтезом. HMG СоА (3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А) редуктаза является ферментом, катализирующим начальную стадию, ограничивающую скорость биосинтеза холестерола, т.е.
конверсию HMG СоА в мевалонат. Холестерин и триглицериды циркулируют в потоке крови как часть
липопротеиновых комплексов. Эти комплексы могут быть разделены по плотности ультрацентрифугированием на липопротеиновые фракции высокой плотности (HDL), средней (IDL), низкой (LDL) и очень
низкой плотности (VLDL). Триглицериды (TG) и холестерин, синтезированный в печени, включаются в
VLDLs и высвобождаются в плазму для доставки к периферическим тканям. В серии последующих стадий VLDLs превращаются в IDLs и обогащенные холестерином LDLs. HDLs, содержащие аполипопротеин А, согласно выстроенной гипотезе, участвуют в обратном транспорте холестерина из тканей обратно в печень. Повышенный уровень общего холестерина, т.е. гиперхолестеринемия, LDL низкой плотности - холестерин (LDL-C) и апопротеин В (мембранный транспорт белка для LDL) ускоряет атеросклероз
у людей. Аналогично, пониженный уровень HDL-холестерин (HDL-C) и его транспортного комплекса,
аполипопротеина А, ассоциируется с развитием атеросклероза. Сердечно-сосудистые заболевания и
смертность непосредственно зависят от уровня общего холестерина и LDL-C и обратно пропорциональны уровню HDL-C. Ингибиторы HMG-CoA редуктазы, как было показано, уменьшают уровень холестерина в сыворотке, LDL-C и аполипопротеина В, наиболее вероятно, за счет повышения катаболизма LDL
и печеночной экстракции LDL-предшественников, блокирующих ферментный синтез холестерина, и одновременно повышают уровень HDL. Такие лекарства, снижающие уровень липида, понижают уровень
холестерола в сыворотке и уменьшают вероятность как сердечно-сосудистых, так и нарушений сосудов
мозга. Например, см. патены США № 5831115, 5807834, 5801143, 5798375 и 5786485. Статины, хорошо
известные для профилактики и лечения коронарных сердечных заболеваний, блокируют начальную стадию, ограничивающую скорость биосинтеза холестерина HMG-CoA редуктазой. См. патент США
№ 6465516.
- 33 -
012325
Болезнь Альцеймера типично характеризуется патологическим наличием старческих бляшек и мелкоразветвленных нервных волокон, обнаруженных при вскрытии в мозге больных болезнью Альцгеймера, а также были замечены сосудистые компоненты болезни. Они включают повреждения в микроциркуляции мозга и отложения в сосудах Aβ-белка, который является основным компонентом старческих
бляшек, найденных при болезни Альцгеймера.
В дополнение к взаимосвязи с сердечными заболеваниями известно, что существует взаимосвязь
между уровнем холестерина в сыворотке, степенью развития и патофизиологией болезни Альцгеймера.
Эпидемиологические испытания показали, что субъекты с повышенным холестерином рискуют заболеть
болезнью Альцгеймера в большей степени (Notkola et al., «Serum Total cholesterol, apolipoprotein E epsilon
4 allele, and Alzheimer's Disease», Neuroepidemiology, 17(1):14-20 (1998); Jarvik et al., "Interactions of apolipoprotein E genotype, total cholesterol level, age and sex in prediction of Alzheimer's disease: a case-control
study", Neurology, 45(6): 1092-6 (1995)). В других опытах было обнаружено, что субъекты, обладающие
генотипом аполипопротеина ε4 (ароЕ4), который кодирует вариант аполипопротеина, белка, транспортирующего холестерин, обладает повышенным риском заболеть болезнью Альцгеймера, а также у них наблюдается повышенный уровень холестерина и наличие сердечных заболеваний. R. Mahley, "Cholesterol
transport protein with expanding role in cell biology", Science 240, 622-30 (1988); Saunders, et al., "Association
of apolipoprptein E allele ε4 with late-onset familial and sporadic Alzheimer's disease", Neurology, 43, 1467-72
(1993); Corder, et al., "Gene dose of apolipoprotein E type 4 allele and the risk of Alzheimer's disease in lateonset families", Science 261:921-923 (1993); Jarvik, et al., "Coronary artery disease, hypertension, ApoE and
cholesterol: a link to Alzheimer's disease?", Ann. N.Y. Acad. Sci. 826:128-146 (1997). Как apoE4, так и второй
возможный фактор риска болезни Альцгеймера, α-2-микроглобулин связываются с рецептором, белком,
связанным с рецептором липопротеина, что важно для клеточного повышения холестерола (Narita, et al.,
«Alpha-2-macroglobuline complexes with and mediates the endocytosis of beta-amiloid peptide via cell surface
low-density lipoprotein receptor-related protein", J. Neurochem. 69(5):1904-11 (1997) и Blacker et al., "Alpha-2
macroglobulin is genetically associated with Alzheimer's disease", Nature Genetics 19:357-60 (1998)). Другие
исследования показали, что холестерин увеличивает производство Aβ-протеина, который аккумулируется в мозгу субъектов с болезнью Альцгеймера и, как считают многие исследователи, вызывают нейродегенерацию, которая лежит в основе болезни. D. J. Selkoe, "Cell biology of the beta-amiloid precursor protein
and the genetics of Alzheimer's disease", Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, 67, 587-96
(1996); и Simons, et al., "Cholesterol depletion inhibits the generation of β-amiloid in hippocampal neurons",
Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 95, 6460-04 (1998).
Изоформа 4 аполипопротеина ε (ApoE изоформа 4) является большим фактором генетического риска для болезни Альцгеймера. Патентная заявка № WO 95/06470 описывает введение ингибитора HMGCoA-редуктазы (статина) для регулирования уровня (ApoE изоформы 4) в человеческом организме в целях профилактики и лечения болезни Альцгеймера. Нормальной клеточной функцией ApoE является
поглощение и доставка липидов. Изоформа ApoE связана с повышенным риском заболевания атеросклерозом, увеличением осаждения амилоидных старческих бляшек и заболеванием болезнью Альцгеймера.
K. Fassbender, et al., "Simvastatin Strongly Reduces Levels of Alzheimer's Disease β-amiloid peptides Aβ42
and Aβ40 in vitro and in vivo", Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 98:5856-5861 (2001). Патентная заявка WO
00/28981 описывает на странице 3, что пациенты, обладающие изоформой 4 ApoE, обладают повышенным риском заболеть болезнью Альцгеймера, а также имеют повышенный уровень холестерина и обладают повышенным риском сердечных заболеваний.
Уровень холестерина в мозгу явлется критическим при образовании и поддержании синапса, а недавние исследования определили холестерин как лимитирующий фактор при синаптогенезе. Понижение
содержания холестерина может установить ограничение в пластических процессах, таким образом
уменьшая тенденцию развития болезни Альцгеймера. Выход для очень длинных аксонов является способностью обеспечить достаточное количество холестерина для быстрого роста аксонов, особенно при
регенерации. Мозг при болезни Альцгеймера содержит меньше холестерина, и это способствует изменениям в составе мембран, связанным с болезнью Альцгеймера, в мембранной текучести, в структуре и
динамике двухслойных липидов. Статины, как ингибиторы синтеза холестерина, могут снизить развитие
болезни Альцгеймера. Длительное сильное действие иингибируется ингибиторами биосинтеза холестерина и длительное сильное воздействие ассоциируется с особым путем увеличения производства липидов. Например, рост аксонов приостанавливается, когда синтез холестерина ингибируется правастатином
и может реактивироваться добавлением холестерина либо в тела клеток, либо в периферические аксоны.
Термин «ингибитор HMG-CoA-редуктазы» относится к любому соединению, которое ингибирует
биоконверсию 3-гидрокси-3-метилглутарильного коэнзима А в мевалоновую кислоту, катализируемую
ферментом HMG-CoA-редуктазой. Ингибирующий эффект любого из таких соединений может быть быстро определен специалистами в этой области в соответствии со стандартными методами анализа. Ингибиторы HMG-CoA-редуктазы изввестны специалистам в этой области. Неограничивающие примеры полезных ингибиторов биосинтеза холестерина включают конкурентные ингибиторы HMG-CoAредуктазы, ограничивающие скорость стадии биосинтеза холестерина, ингибиторы сквален-синтазы, ин- 34 -
012325
гибиторы сквален-эпоксидазы и их смеси. Ингибиторы HMG-CoA-редуктазы, пригодные для использования в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются этим, правастатин (например, Pravachol™, который получают в Bristol Meyers Squibb) и родственные соединения, как это раскрыто в патенте
США № 4346227; и ловастатин и родственные соединения, как это раскрыто в патентах США № 4231398
и 4346227. В некоторых вариантах ловастатин и правастатин используются в настоящем изобретении как
ингибиторы HMG-СоА-редуктазы. Ловастатин, известный под торговой маркой Mevacor, является конкурентным ингибитором HMG-CoA-редуктазы.
Другие ингибиторы HMG-CoA-редуктазы, которые могут быть использованы для ингибирования,
включают аторвастатин (Lipitor™, Pfizer, New York, New York) и другие 6-[2-(замещенный пиррол-1ил)алкил]пиран-2-оны и производные, такие как описанные в патенте США № 4647576; флювастатин
(Lescol™, Novartis, Basel, Switzerland); флюиндостатин (Sandoz XU-62-320); пиразольные аналоги производных мевалонолактона, как изложено в заявке WO 86/03488; ривастатин и другие пиридилдигидроксигептеновые кислоты, как изложено в европейском патенте 491226А; Searle's SC 45355 (производное 3замещенной пентандионовой кислоты дихлорацетат); имидазольные аналоги мевалонолактона, как изложено в заявке WO 86/07054; производные 3-карбокси-2-гидроксипропанфосфоновой кислоты, как описано во французском патенте № 2596393; 2,3-дизамещенный пиррол, фуран и производные тиофена, как
изложено в европейской патентной заявке № 0221025; нафтильные аналоги мевалонолактона, как изложено в патенте США № 4686237; октагидронафталины, как изложено в патенте США № 4499289; кетоаналоги мевинолина (ловастатина), как изложено в европейской патентной заявке № 0142146 А2; а также
другие ингибиторы HMG-CoA-редуктазы.
Другие примеры приемлемых ингибиторов HMG-CoA-редуктазы включают статины, такие как
флювастатин, симвастатин (например, Zocor™ от Merck and Co.), аторвастатин, церивастатин, CI-981 и
питавастатин (такой как NK-104 от Negma Kowa, Япония), розувастатин; ингибиторы HMG СоАсинтетазы, например, L-659,699 ((E,E)-11-[3'R-(гидроксиметил)-4'-оксо-2'R-оксетанил]-3,5,7R-триметил2,4-ундекадиеновой кислоты); ингибиторы синтеза сквалена, например, сквалестатин 1; и ингибиторы
сквален-эпоксидазы, например, NB-598 ((Е)-N-этил-N-(6,6-диметил-2-гептен-4-инил)-3-[(3,3'-битиофен5-ил)метокси]бензолметанамина гидрохлорид) и другие ингибиторы биосинтеза стерола, такие как DMP565.
Кроме того, другие соединения, полезные при ингибировании HMG СоА-редуктазы, приемлемые
для использования, описаны в патенте США № 4904646 и № 5091378. Примеры статинов включают Advicor™ (ловастатин/ниацин); церивастатин (Baycol™, Bayer Corp., отозванный с рынка США); Mevacor™
(ловастатин, Merck and Со, Inc., Rahway, New Jersy); ривастатин, розувастатин; питавастатин, мевастатин, велостатин и Zocor (симвастатин Merck and Co, Inc., Rahway, New Jersy). Другие примеры ингибиторов HMG СоА-редуктазы включают пиразольные аналоги мевалонолактона, инденовые аналоги мевалонолактона, производные 3-карбокси-2-гидроксипропанфосфиновой кислоты, 6-[2-(замещенный пиррол1-ил)алкил]пиран-2-он, гетероциклические аналоги мевалонолактона, включающие аналоги имидазола,
нафтильные аналоги мевалонолактона, производные октагидронафталина, кетоаналоги ловастатина и
2,3-дизамещенный пиррол, фуран или тиофен.
В дополнение к их прямому действию на биосинтез и метаболизм липид/холестерина, статины в
комбинации с субстратами синтазы окиси азота, известны для облегчения транспорта лекарств через
кровяной барьер мозга («ВВВ»). Ввиду того, что болезнь Альцгеймера является болезнью мозга, особенно полезной фармацевтической композицией является комбинация второго агента - статина и второго
агента - субстрата синтазы окиси азота (например, L-Arg), также как первого агента, описанного здесь.
Семейство ферментов, называемых Синтаза Окиси Азота («NOS»), образует окись азота из L-аргинина, и
полученная окись азота является ответственной за релаксацию, зависящую от эндотелия, и активацию
растворимой гуанилат-циклазы, нейротрансмиссию в центральную и периферическую нервные ситемы и
активированную цитотоксичность макрофага. Синтаза Окиси Азота встречается во многих различных
изоформах, которые включают конститутивную форму (cNOS) и индуцибельную форму (iNOS). Конститутивная форма присутствует в нормальных эндотелиальных клетках, нейронах и некоторых других тканях. Образование окиси азота конститутивной формой в эндотелиальных клетках играет важную роль
при регулировании нормального давления крови, профилактике эндотелиальной дисфункции, такой как
гиперлиподемия, атеросклероз, тромбоз и рестеноз. Индуцибельная форма синтазы окиси азота, как было
обнаружено, присутствует в активированных макрофагах и индуцируется в клетках сосудов гладких
мышц, например, розличными цитокинами или микробиологическими продуктами. Конверсия субстратов предшественника, таких как L-аргинин, в окись азота ферметативно катализируется NOS и полученный побочный продукт конверсии L-аргинина является L-цитрумин. L-аргинин, так как он используется
здесь, включает все биохимические эквиваленты (т.е. соли, предшественники и его основную форму).
Согласно одному варианту данное изобретение обеспечивает способ усиленной доставки первого
агента в ткань мозга субъекта, включающий введение композиции в поток крови субъекта, по существу,
одновременно с усиливающим поток крови количеством L-аргинина. Согласно другому варианту данное
изобретение обеспечивает способ усиленной доставки желаемой композиции в ткань мозга субъекта,
- 35 -
012325
включающий введение композиции в поток крови субъекта, по существу, одновременно с усиливающим
поток крови количеством L-аргинина или усиливающим поток крови количеством системы, генерирующей ecNOS-NO.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать один или более ингибиторов белка, переносящего холестериловый эфир («ЕТР»), вводимых совместно или в сочетании с соединением или соединениями формулы, описанной здесь. СЕТР является ответственным за обмен или передачу холестерилового эфира, несущего HDL и триглицериды в VLDL.
Неограничивающие примеры приемлемых ингибиторов СЕТР изложены в заявке WO 00/38721 и в
патенте США № 6147090, которые указаны в настоящем изобретении в качестве ссылок. Ингибиторы
гидролазы панкреатического холестерилового эфира (рСЕН), такие как WAY-121898, также могут быть
введены совместно или в комбинации с производным (производными) фибриновой кислоты или ингибитором (ингибиторами) абсорбционным стеролом, указанными выше.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать пробукол или его производные (такие как AGI-1067 и другие производные, указанные в патентах США № 6121319 и 6147250), которые могут понизить уровни
LDL и HDL, введенных совместно или в комбинации с соединениями формулы настоящего изобретения.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать один или более активаторов рецептора липопротеина низкой плотности (LDL), введенных совместно или в комбинации с соединением любых указанных выше
формул. Неограничивающие примеры приемлемых активаторов рецептора LDL вклчают НОЕ-402, производное имидазолидинилпиримидина, которое непосредственно стимулирует активность LDL рецептора. См. М. Huettinger et al., "Hypolipidemic activity of HOE-402 is Mediated by Stimulation of the LDL Receptor Pathway". Arterioscler. Thromb. 13, 1005-12 (1993).
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать растительные стеролы, растительные станолы или эфиры
жирных кислот и растительных станолов, такие как эфир ситостанола, использованный в маргарине
Benecol™, который может понижать уровень холестерина, вводимого совместно или в комбинации с каким-либо соединением формулы настоящем изобретении. Обычно общая дневная дозировка растительных стеролов, растительных станолов или эфиров жирных кислот и растительных станолов может колебаться от около 0,5 до около 20 г/день один раз или 2-4 раздельными дозами.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать один или более антиоксидантов, таких как пробукол, токоферол, аскорбиновая кислота, β-каротин и селен, или витамины, такие как витамин B6 или витамин
B12, введенные совместно или в комбинации с соединением любой формулы настоящем изобретении.
Обычно общая дневная дозировка антиоксидантов или витаминов может колебаться от примерноо 0,05
до примерно 10 г/день один раз или 2-4 раздельными дозами.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, использованные в способах настоящего
изобретения, могут дополнительно содержать ингибиторы моноцитов и макрофагов, такие как полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA), тироидные гормоны, включая аналоги троксина, такие как CGS26214 (соединение тироксина с фторированным кольцом), генную терапию и использование рекомбинантных белков, таких как рекомбинантный ароЕ, введенные совместно или в комбинации с каким-либо
соединением формулы настоящем изобретении. Обычно общая дневная дозировка этих агентов может
колебаться в пределах от примерно 0,01 до примерно 1000 мг/день один раз или 2-4 раздельными дозами.
Fassbender et al. раскрывают, что использование симвастатина и ловастатина, одних или в комбинации с метил-β-циклодекстрином, может понизить уровни внутриклеточного и секретированного Aβ in
vitro и что лечение животных симвастатином понижает жидкостные уровни Aβ в мозгу и в спинной мозгу in vivo. Патент США № 6071899 раскрывает соединения, которые могут иметь общее применение при
любом расстройстве, которое включает эндотелиальную дисфункцию, таком как атеросклероз, или имеет
общее применение при любом расстройстве, которое включает перокисление липида в сочетании с ферментной активностью, включая воспалительные состояния мозга, такие как болезнь Альцгеймера
(см. кол. 5, с. 16-29).
Заявка WO 99/38498 раскрывает методы профилактики или лечения болезни Альцгеймера путем
введения агента, понижающего уровень холестерина (т.е. фибраты), возможно, в комбинации с агентом,
понижающим уровень холестерина, таким как статины; секвестранты желчных кислот или агенты, которые блокируют кишечную абсорбцию холестерина (например, β-ситостерол, SCH 48461 (3R,4S)-1,4-бис(4-метоксифенил)-3-(3-фенилпропил)-2-азетидинон), Сβ-148,623, сапонины, неомицин и ингибиторы
АСАТ.
Патенты США № 5767115, 5624920, 5688990, 5656624 и 5688787, соответственно, раскрывают соединения гидроксизамещенного азетидинона и соединения замещенного β-лактама, полезные для понижения уровня холестерина или при ингибировании образования холестеринсодержащих поражений в
- 36 -
012325
стенках артерий млекопитающих, но не описывают лечения болезни Альцгеймера.
Симвастатин был использован для понижения уровней β-амилоидных пептидов Aβ42 и Aβ40 in vitro
и in vivo, например, у морских свинок. Wolozin, В. et al., Arch. Neurol. 57:1439-1443, 2000, описывают
изучение субъектов, которых лечили ингибиторами HMG-CoA-редуктазы. Авторы сообщают, что развитие болезни Альцгеймера у них было на 60-73% ниже, чем у субъектов, которых лечили другими медикаментами. В этих опытах причинной взаимосвязи не было установлено. Jick, H. et al., The Lancet
356:1627-1631, 2000, также сделали обзор предмета отчетов и нашли, что у субъектов в возрасте 50 лет и
старше введение статина ассоциировалось, в основном, с пониженным риском слабоумия, включая болезнь Альцгеймера, и другие состояния. Аналогично, ингибиторы Acyl-CoA холестериновой ацилтрансферазы (АСАТ) были использованы для понижения холестерина в плазме на моделях различных животных, включающих крыс, морских свинок и кроликов (Tanako et al., J. Med. Chem. 41:2390-2410, 1998;
Junquero et al., Buochem. Pharmacol. 61:97-108, 2001). Примеры ингибиторов АСАТ включают, но не ограничиваются этим, гибенкламид, CI-976, (PD 128042), NTE-122, анилиды жирных кислот, F12511, авасимиб, TS-962 (HL-004), N-хлор-сульфонилизоцианат и его производные, SR-9223i; пирипиропены, PD132301, PD-132301-2, DUP-128, YM-17E, BW 447А, 65919 для болезни Альцгеймера, CL-277,082, мелинамид, производные гидроксифенилмочевины, R-106578, производные индолина с амидными или мочевинными группами, 57-118, 58-035, CI-999, CI-1011, N-алкил-N-[(фторфенокси)бензил]-N'-арилмочевина
и их производные, SKF-99085, EAB-309, N-алкил-N-(гетероарилзамещенный бензил)-N'-арилмочевина и
их производные, F-1394, N-алкил-N-бифенилилметил-N'-арилмочевина и их производные, CL-277,082,
CL-283,546, CL-283,796, CP-113,818, CP-105,191, аналоги полиацетилена - панаксинол, панаксидол, панаксидиол и панакситриол, Т-2591, 4,4-бис-(трифторметил)имидазолины и их производные, FR-145237,
FR-186054, FR-129169, нарингенин, улиоидол, 23-гидроксиуроловая кислота, 27-транс-пкумароилоксиуроновая кислота, 27-цис-п-кумароилоксиуроновая кислота, тритерпены и их производные, N-(4,5-дифенилтиазол-2-ил)-N'-арил или алкил(тио)мочевины и их производные, N-(4,5дифенилтиазол-2-ил)алканамиды и их производные, RP73163, RP 64477, диарилзамещенные гетероциклические мочевины и их производные, гетероциклические амиды и их производные, циклические сульфиды, полученные по реакции гетеро-Дильса-Альдера тиоальдегидов с 1,3-диенами, Е-5324, тетразоламидные производные (+/-)-2-додецил-α-п-генил-N-(2,4,6-триметоксифенил)-2Н-тетразол-5-ацетамида,
эпикохлиохинон А, ациклические (дифенилэтил)дифенилацетамиды, 2-(1,3-диоксан-2-ил)-4,5-дифенил1H-имидазолы и их производные, производные N-(2,2-диметил-2,3-дигидробензофуран-7-ил)амида, FCE
27677, GERI-BP002-A, TMP-153, амиды 1,2-диарилэтиламинов и их производные, F-1394, производные
N-(4-оксохроман-8-ил)амида, терпендолы, церамид с короткой цепью и дигидроцерамид, FY-087,
447C88, цикланделат, производные 3-хинолилмочевины, N-фенил-6,11-дигидродибенз[b,е]-оксепин-11карбоксамиды и родственные производные, гипсетин, AS-183, AS-186, производные 2,6-дизамещенного-3-имидазолилбензопирана,
латеритин,
производные
2-(алкилтио)-4,5-дифенил-1Нимидазолов, глисопренины, акатерин, U-73482, пурпактины и хлорпромазин.
Ингибиторы амилоида (антиамилоидный терапевтический подход)
Другими важными целями для терапевтического вмешательства являются механизмы, которые превращают APP в Aβ. В частности, даунрегуляция β- и γ-секретазы и апрегуляция α-секретазы (которая
расщепляется в Aβ-пептидах) будет ингибировать производство Aβ-пептида. β-секретаза или ВАСЕ была установлена несколькими группами и является ферментом - аспартил-протеазой. Однако молекулярная идентичность фермента, перерабатывающего γ-сайт APP, γ-секретазу, еще не определена. Ясно, что
пресенилины требуются для расщепления γ-секретазы APP. Секреция Aβ практически полностью блокируется в нейронах, испытывающих недостаток пресенилина 1. Существует ряд возможностей для действия пресенилинов: (1) они могут быть востребованы для внутриклеточного перемещения и сортировки
APP в карман γ-секретазы, или (2) они могут служить в качестве сопутствующего фактора при расщеплении γ-секретазы. (С. Haass, et al., Science 286, 916-19 (1999); M.S. Wolfe, et al., Biochemistry 38, 4720-27
(1999); T. Bayer, et al., Brain Pathology 11, 1-11 (2001); B. De Strooper et al., Nature 391, 387-91 (1998)). См.
также WO 2003/103652 и WO 2003/103653.
γ-секретаза расщепляется на С-конце Aβ и в основном ответственна за генерацию патогеновой 42аминокислотной формы Aβ, Aβ42, которая образует нерастворимые токсичные фибрилы и аккумулируется в старческих бляшках. М. Hutton, et al., Essays Biochem. 33, 117-31 (1998); R.L. Nussbaum and С.Е.
Ellis, N. Engl. J. Med. 348(14), 1356-64 (2003); T. Iwatsubo, et al., Neuron 13, 45-53 (1994); W.P. Esler and
M.S. Wolfe, Science 293, 1449-54 (2001). Несмотря на то что обычная функция APP неизвестна, она преимущественно экспрессируется в мозгу и, как подозревают, участвует в клеточной адгезии, синаптическом росте и нейральном восстановлении.
β-амилоид образует сплошную среду агрегатов: мономерный β-амилоид, растворимый олигомерный β-амилоид, нерастворимые протофибриллы, β-амилоид, диффузный β-амилоид, компактный амилоид, нейритный или старческий амилоид, причем последние два являются патологическими и диагностическими признаками болезни Альцгеймера.
Независимо от образования фибрилл или бляшек β-амилоид, тем не менее, может изменять мем- 37 -
012325
бранный потенциал и мембранное возбуждение, синаптическую трансмиссию, синаптическую пластичность и интеллект. β-амилоид, особенно β-амилоид-1-42, как было отмечено, является нейротоксичным.
Соответственно, сам β-амилоид представляет значительную цель для лекарства. Недавнее доказательство
предполагает, что сами по себе бляшки менее токсичны, чем олигомеры или протофибриллы. Такие олигоменые формы Aβ могли быть ответственны за первую стадию болезни, когда начинается гибель нейронных клеток. См. также WO 03/050073, WO 03/047576, WO 03/045378, WO 03/043987, WO 03/043975,
WO 03/043618, патент США № 6569851, WO 03/040096, патент США № 6552013, WO 03/037325,
WO 03/030886, WO 03/029169, ЕР 1298436, WO 03/027068, патент США № 6258505, WO 03/020370, патент США № 6509331, WO 03/006453, WO 03/006423, WO 03/006021, WO 03/006013, патент США
№ 6509331, патент США № 6486350, WO 03/002122, патент США № 6476263, WO 03/000261,
WO 02/100856, WO 02/100820, WO 02/100818, WO 02/100410, WO 02/100399, WO 02/098849,
WO 02/094768, патент США № 6476263, WO 02/076440, патент США № 2002/16320 А1, патент США
№ 6329163, WO 00/202520, WO 00/202518, WO 00/202512, WO 00/202506, WO 00/202505, патент США
№ 6284221, патент США № 6221645, WO 00/175165, WO 00/170672, патент США № 6262302, патент
США № 6191166, патент США № 6262302, патент США № 6153652, WO 96/40885, патент США
№ 5942400, патент США № 5744346 и WO 98/21589.
Плотные микросферы или сфероны могут превращаться в бляшки, когда они лопаются in vitro или
когда они вводятся подопытным животным. P. Averback, J. Alzheimer's Disease 1, 1-34 (1998). Соединение
NX-D2858 (Nymox Pharmaceutical Corp., Dorval, Quebéc, Canada) блокирует превращение сферонов в
старческие бляшки и может остановить или замедлить развитие болезни Альцгеймера (опубликованная
заявка США № 2003-0083298). Другим соединением, которое может быть использовано в фармацевтических композициях в настоящем изобретении, является Ateroid™ (Hunter-Fleming) и родственные мукополисахариды, такие как глюкозаминогликаны, имеющие средний молекулярный вес, равный 2400 Да, которые были описаны как приемлемые для лечения болезни Альцгеймера. (ЕР 1181024).
Другое соединение представляет собой индол-3-пропионовую кислоту (Oxygon™, Mindset), который указан для профилактики цитоксического действия амилоидного бета-белка на клетки, а также для
блокирования амилоидных отложений и, следовательно, полезен при лечении фибриллогенной болезни,
такой как болезнь Альцгеймера, (патент США № 6395768 В1). Приемлемые ингибиторы амилоидной
агрегации также включают реймакон, производимый фирмой Conpharm AB.
Дополнительные примеры включают спектр полисахаридов. (Патент США № 6607758,
WO 03/013442, заявка США 2002/197692, заявка США 2002/150637 и СА 2323090).
Новый хелатирующий агент является примером еще одного подхода «Targeted pharmacological depletion of serum amyloid P component for treatment of human amyloidosis» M.B. Pepys, et al., Nature 417
(6886), 254-59.
Ингибиторы образования амилоида
Данное изобретение относится к способу лечения или профилактики болезненного состояния, связанного с амилоидозом, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества
агента для снижения количества фибриллярного или растворимого Aβ, что вызывает лечение или предотвращение указанного состояния, связанного с амилоидозом.
Согласно одному варианту способы по изобретению основаны, по меньшей мере частично, на ингибировании взаимодействия между амилоидогенным протеином и компонентом базисной мембраны
для ингибирования осаждения амилоида. Компонент базисной мембраны является гликопротеином или
протеогликаном, например, протеогликаном гепаринсульфата. Терапевтический агент, используемый в
способе по изобретению, может вмешиваться в связывание компонента базисной мембраны с сайтом
связывания мишени на амилоидогенном белке, ингибируя тем самым отложение амилоида. В некоторых
вариантах способы по изобретению включают введение субъекту терапевтического агента, который ингибирует отложение амилоида. «Ингибирование отложения амилоида» означает предотвращение образования амилоида, ингибирование дальнейшего отложения амилоида у субъекта с развивающимся амилоидозом и уменьшение отложений амилоида у субъекта с амилоидозом. Ингибирование отложений амилоида определяют по сравнению с субъектом, не получающим лечения, или с субъектом, получающим
лечение, до начала лечения. Отложение амилоида ингибируется за счет ингибирования взаимодействия
между амилоидогенным белком и составляющим базисной мембраны. «Базисная мембрана» относится к
внеклеточной матрице, состоящей из гликопротеинов и протеогликанов, включая ламинин, коллаген типа IV, фибронектин и протеогликан гепаринсульфата («HSPG»).
Согласно одному варианту изобретения отложения амилоида ингибируется при вмешательстве в
реакцию между амилоидогенным белком и сульфированным глюкозаминогликаном, таким как HSPG.
Сульфированные глюкозаминогликаны содержатся во всех типах амилоидов (см. Snow, et al., Lab. Invest.
56, 120-23 (1987)) и амилоидное осаждение и осаждение HSPG возникают совместно в животных моделях амилоидоза (см. Snow et al., Lab. Invest. 56, 665-75 (1987)).
Способность терапевтического соединения по изобретению ингибировать взаимодействие между
амилоидогенным белком и гликопротеином или протеогликаном базальной мембраны можно оценить
- 38 -
012325
методом in vitro связывания, таким как описан в патенте США № 5164295. Кроме того, способность соединения связываться с амилоидогенным белком или ингибировать связывание компонента базальной
мембраны (например, HSPG) с амилоидогенным белком (например, Aβ) может быть измерена методом
масс-спектрометрии, когда растворимый белок, например Aβ, инкубируется вместе с соединением. Соединение, которое связывается, например, Aβ, будет вызывать изменения в масс-спектре белка.
Например, терапевтический агент по изобретению может взамиодействовать с сайтом связывания
или гликопротеина или протеогликана базальной мембраны в амилоидогенном белке и тем самым ингибировать связывание амилоидогенного белка с компонентом базальной мембраны. Гликопротеины и
протеогликаны базальной мембраны включают ламинин, коллаген типа IV, фибронектин и HSPG. Согласно одному варианту терапевтический агент ингибирует взаимодействие между амилоидогенным
белком и HSPG. Были описаны фрагменты консенсусного сайта связывания для HSPG в амилоидном
белке (см., например, Cardin and Weintraub, Arteriosclerosis 9, 21-32, (1989)).
Хелаторы металлов
Zn2+ опосредует нейродегенеративные процессы, наблюдающиеся при припадках, ишемии, травмах
и болезни Альцгеймера. Zn2+ содержится во внеклеточной бляшке и дегенерирующих нейронах при болезни Альцгеймера, что способствует нейронной дегенерации. Окислительное повреждение в неокортексе, связанное с болезнью Альцгеймера, может быть результатом постепенного встраивания ионов металла, например цинка и меди. Цинк и медь содержатся в очень высоких концентрациях в β-амилоидных
бляшках в мозгу пациентов с болезнью Альцгеймера. Оба металла существенны, но обычно нужны только небольшие количества, и избыток металла выделяется. Существует гипотеза, что β-амилоид превращает растворенный кислород в перекись водорода, которая, в свою очередь, вызывает повреждение клеток. Хелаторы металлов можно использовать для уменьшения окислительных явлений. У трансгенных
мышей APP, которым вводили клохинол (антибиотик и биодоступный хелатор Cu/Zn), через несколько
месяцев лечения возникало заметное уменьшение отложений Aβ. Оказывается цинк и другие двухвалентные металлы необходимы для агрегации Aβ. Таким образом, хелатирование металлов может быть
терапевтически выгодным при лечении болезни Альцгеймера путем предотвращения агрегации Aβ или
разрушения уже образовавшихся агрегатов. В лаборатории хелатор меди-цинка клиохинол может растворять осадки β-амилоида в мозговой ткани после вскрытия субъектов с болезнью Альцгеймера. У
трансгенных мышей APP, которым вводили клохинол (антибиотик и биодоступный хелатор Cu/Zn), через несколько месяцев лечения возникало заметное уменьшение отложений Aβ. Новое исследование позволяет распространить эти результаты на мышей, генетически склонных к перепродуцированию амилоида β. Клиохинол уменьшал отложения амилоида наполовину через девять недель без вредных эффектов. Мышей, которых лечили клиохинолом, можно было также оценить значительно выше по шкале поведения. Сродство клиохинонла к Zn находится в наномолярном интервале, в то время как сродство Aβ к
Zn2+ находится в низшем микромолярном интервале. Клиохинол был одобрен FDA в качестве антибиотика, но был снят с продажи около 30 лет назад из-за побочных эффектов, вовлекающих потерю витамина В-12. Антибиотик клиохинол, известный также как 5-хлор-7-иод-8-гидроксихинолин или иодхлоргидроксихинолин, известный хелатор меди/цинка, хорошо переносится людьми и находится в настоящее
время на фазе II клинических испытаний при болезни Альцгеймера. Т.Е. Golde, J. Clin. Invest. 111, 11-18
(2003). Клиохинол хелатирует медь и цинк in vitro и уменьшает отложение Aβ на модели мыши. Более
того, промежуточные результаты от рандомизированного полуслепого клинического лечения с применением плацебо у 32 больных болезнью Альцгеймера позволили предположить, что это лекарство замедляет скорость ухудшения познавательной способности у наиболее пораженных групп.
Подходящие хелаторы меди/цинка включают клиохинол, доступный в PN Gerolymatos SA. Предварительные положительные результаты были получены при клинических испытаниях на людях, при которых клиохинол в сочетании с В-12 оказался полезным при лечении больных с болезнью Альцгеймера.
Bush et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 99, 7317-19 (1999), опубликованная заявка на патент США
№ 2002/0025944. См. также «Treatment with a cooper-zinc chelator markedly and rapidly inhibits betaamyloid accumulation in Alzgeimer's disease transgenic mice» R.A. Cherny, et al., Neuron 30, 665-76 (2001) и
«The galvanization of β-amyloid in Alzgeimer's disease» A.I. Bush and R.E. Tanzi Proc. Nat'l Acad. Sci. USA
99, 7317-19 (2002).
Фанхинон (4,7-фенантролин-5,6-дион) до сих пор использовали для лечения различных нарушений,
таких как амебиоз. Однако было предложено его применение для лечения или профилактики улучшения
памяти. Фанхинон продавался Ciba-Geigy как Entobex™. Фанхинон является также хелатором металлов
того же семейства, что и клиохинол. Согласно данному изобретению предусмотрено применение фанхинона для изготовления фармацевтической композиции для лечения или профилактики ухудшения памяти.
- 39 -
012325
Устранение поведенческих отклонений при болезни Альцгеймера
Пациентов с болезнью Альцгеймера можно также лечить для облегчения поведенческих нарушений, связанных с развитием болезни. Использование такого лечения должно смягчить психотические
симптомы, такие как паранойя, бред, галлюцинации и ассоциированная и независимая ажитация, вопли,
драчливость и насилие, и тем самым для повышения комфорта и безопасности больных. Для пациентов с
определенными психотическими симптомами можно вводить попеременно антипсихотики и антидепрессанты.
Бензодиазепины можно использовать кратковременно и обоснованно для срочного успокоения, но в
других случаях их следует избегать, так как они вызывают бред и способны дальше ухудшать остаточные познавательные способности. Литий (Eskalith), центрально действующие β-адренергические блокаторы, карбамазепин (Tegretol™, Ciba-Geigy Pharmaceuticals, теперь Novartis, Basel, Switzerland) и вальпроат (Depakene) использовались эмпирически для лечения аффективной лабильности и приступов агрессии. Респеридон можно также использовать для психозов, связанных с болезнью Альцгеймера. Можно
также применять оланзабин, сертиндол и кветиапин. Другие примеры включают тразодон, β-блокаторы,
пропранолол, метопролол и пиндотол (особенно для некоторых возбужденных пациентов с деменцией).
Когда больные мужчины проявляют несдерживаемую сексуальность, особенную проблему у пациентов с
фронтальной лобной деменцией, можно применять медроксипрогестерон и родственные гормональные
агенты. Глюкозаминогликана полисульфат (Ateroid™) может также смягчать депрессивные симптомы у
пожилых людей с деменцией. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry, 13, 977-81 (1989).
Принимается во внимание и лечение апатии. Допаминергические агенты, такие как психостимулянт
CD-амфеламин, метилфемидат, амантадин (Symmetrel™, DuPont Multi-Source Products, Wilmington, DE),
бромокриптин и бупропион полезны при лечении сильной апатии. А.Е. Wallace, et al., "Double-blind, placebo-controlled trial of methylphenidate in older, depressed, medically ill patients." Am. J. Psychiatry 152, 92931 (1995).
Для начального лечения часто выбирают SSRIs вследствие их лучших профилей побочных эффектов. Может подходить схема приема 1 раз в день. Примеры SSRIs включают флуоксетин (Prozac™, Pulvules, Dista, Eli Lilly, Indianopolis, Indiana), пароксетин, сертралин, бупропион и венлагаксин. Терапевтическое обоснование и клинические испытания показали, что надо избегать применения агентов с очень
выраженной антихолинергической активностью (например, амитриптилина, имипрамина). Среди оставшихся агентов разработаны дозы для нортриптилина. Рассматривается применение MAOIs для больных,
неподдающихся лечению, или неспособных принимать другие агенты (транилципромин и фенелзин являются примерами).
Когда кроме самой деменции возникает расстройство сна без других психиатрических симптомов,
некоторые клиницисты прописывают тразодон или золпидем. Можно использовать бензодиазепины (например, лоразепам или оксазепам) и хлоральгидрат. Триазолам, в частности, не рекомендуется для пациентов с деменцией из-за его ассоциации с амнезией. Дифенгидрамин, который содержится в большинстве снотворных без рецепта, используется некоторыми клиницистами, но его антихолинергические свойства делают его не совсем оптимальным для лечения больных с деменцией.
Некоторые люди с деменцией характеризуются необузданным поведением, отпускают некорректные шутки, пренебрегают личной гигиеной, проявляют необоснованную фамильярность с незнакомыми
или пренебрегают общепринятыми правилами общественного поведения. Возможно, что они могут причинить вред другим, нанося удары. Может возникнуть стремление к суициду, особенно у отдельных людей с умеренным ухудшением, которые способны видеть свои недостатки и способны составить (и выполнить) план действий. Беспокойство является довольно распространенным, и некоторые пациенты
проявляют «катастрофические реакции», подавляющие эмоциональные ответы на сравнительно слабые
раздражители, такие как изменения в рутинной деятельности или окружении. Распространенным является подавленное настроение, с нейровегетативными изменениями или без них, а также расстройство сна
независимо от депрессии. Может возникнуть бред, особено с темами преследования (например, вера в то,
что положенные не в то место вещи были украдены). Часто больные принимают знакомых людей за незнакомых (или наоборот).
Могут возникнуть галлюцинации во всех видах ощущения, но наиболее часто возникают визуальные галлюцинации. У некоторых пациентов наблюдаются пики ажитации (или других поведенческих
отклонений) в вечерние часы, которые иногда называют «закатными».
Часто на деменцию накладывается делирий, потому что лежащая в основе болезнь мозга увеличивает восприимчивость к действию лекарств или общего медицинского состояния. Отдельные пациенты с
деменцией могут быть особенно уязвимыми к психосоциальным раздражителям (например, визиты в
госпиталь, тяжелые утраты), которые могут усиливать их интеллектуальные недостатки и связанные с
этим проблемы. Деменция иногда сопровождается нарушением моторики, которое может включать затрудненную походку, невнятную речь и разнообразные анормальные движения. Могут также возникать
другие неврологические симптомы, такие как миоклунус и припадки.
Когда больные мужчины проявляют неограниченное насильственное сексуальное поведение, что
- 40 -
012325
является особой проблемой с фронтальной лобной деменцией, иногда рекомендуют медроксипрогестерон и родственные гормональные агенты (Н. Kyomen et al., "The use estrogen to decrease aggressive physical behavior in elderly men wiht dementia." J. Am. Geriatr. Soc. 39, 1110-12 (1991); S.S. Rich, et al., "Leuprolide acetate for exhibitionism in Huntington's disease." Mov. Disord. 9, 353-57 (1994); P.G. Weiler, et al.,
"Propranolol fof the control of disruptive behavior in senile dementia." J. Geriatr. Psychiatry Neurol. 1, 226-30
(1988)), но в настоящее время только ряд случаев подкрепляет эту рекомендацию.
Глюкозаминогликана полисульфат (например, Ateroid™) при деменции в старости действует на депрессивную симптоматологию у гериатрических пациентов. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry
13, 977-81 (1989). Литература, касающаяся лечения апатии, встречается реже. Существуют минимальные
свидетельства, что допаминергические агенты, такие как психостимулянты (d-амфетамин, метилфенидат), амантадин, бромокриптин и бупропион, помогают при лечении сильной апатии, но обещающие результаты подтверждают эффективность исследований (А.Е. Wallace, et al., "Double-blind, placebocontrolled trial of methylphenidate in oder, depressed, medically ill patients." Am. .Г. Psychiatry 152, 929-31
(1995)). Психостимулянты также применялись для лечения дипрессии у пожилых людей с серьезными
общими медицинскими расстройствами (P. Pickett et al., "Psychostimulant treatment of geriatic depressive
disorders secondary to medical illness." J. Geriatr. Psychiatry Neurol. 3, 146-51 (1990); L.W. Lazarus et al.,
"Methylphenidate and nortriptiline in the treatment of poststroke depression: a retrospective comparison." Arch.
Phys. Med. Rehabil. 75, 403-06 (1994); T.R. Price et al., " Safety and efficacy of ЕСТ in depressed patients with
demencia: a review of clinical experiens." Convulsive Their. 5, 1-74 (1989)).
На начальном этапе лечения часто выбирают SSRIs из-за лучших профилей боковых эффектов.
Приемлемой схемой лечения является прием лекарства 1 раз в день. Примерами SSRIs являются флуоксетин, пароксетин, сертралин, бупропион и венлагаксин. Терапевтическое обоснование и клинические
испытания показали, что надо избегать применения агентов с очень выраженной антихолинергической
активностью (например, амитриптилина, имипрамина). Среди оставшихся агентов разработаны дозы для
нортриптилина. Среди оставшихся лекарств можно также назвать десипрамин и тразодон.
Депрессия характерна для пациентов с деменцией. Пациенты с депрессией должны находиться под
наблюдением как потенциальные самоубийцы. Подавленное настроение может отвечать на улучшение
жизненной ситуации или лечение с ориентированной стимуляцией, но пациенты с сильной депрессией
или устойчивым угнетенным состоянием с дополнением нейровегетативных признаков или без них
должны получать антидепрессанты. Хотя формальная оценка эффективности антидепрессантов у пациентов с деменцией ограничена, существует значительное клиническое доказательство, подтверждающее
их применение. Выбор среди агентов основан на профиле побочных эффектов и характеристиках данного пациента. MAOIs, как полагают, пригоден для пациентов, не поддающихся лечению или неспособных
принимать другие агенты (транилципролин и фенелзин являются примерами).
Лечение расстройства сна при деменции направлено на снижение частоты и степени серьезности
бессонницы, прерванного сна и ночной растерянности у пациентов с деменцией. Цель состоит в повышении комфорта пациентов и уменьшении неудобств для семей и ухаживающего персонала. Расстройство сна обычно для деменции (Satlin A: Sleep disorders in demencia. Psychiatr. Ann. 24, 186-90 (1994);
С.С. Hoch et al., "Sleep patterns in Alzgeimer, depressed and healthy elderly." West J. Nurs. Res. 10, 239-56
(1988)) и не всегда является таким угнетающим, чтобы пренебрегать риском возникновения побочных
эффектов при необходимости фармакологического лечения. Когда расствойство сна возникает без других психиатрических симптомов, кроме самой деменции, некоторые клиницисты прописывают тразодон
или золпидем. В некоторых случаях можно применять бензодиазепины (например, лоразепам или оксазепам). Триазолам не рекомендуется для пациентов с деменцией из-за его связи с амнезией. Дифенгидрамин, который содержится в большинстве отпускаемых без рецепта снотворных, используется некоторыми клиницистами, но его антихолинергические свойства делают его неоптимальным для лечения пациентов с деменцией.
Питательные добавки: витамин В12, гомоцистеин
Пирролидон или производные пирролидина были предожены для улучшения памяти в ЕР 239500,
ЕР 165919, BE 892942, патенте США № 5102882, ЕР 296978, ЕР 296979. Производные пиридина для лечения ухудшения короткой памяти описаны в патенте США 4448779. Холиновые производные для лечения умственной деградации у пожилых предложены в ЕР 201623. Индол и производные индолина для
улучшения познавательных процессов раскрыты в ЕР 241006, JP 6107544, патенте США № 5494928,
WO 97/47598 и в патенте США № 4778812. Производные пилокардина для улучшения памяти описаны в
патенте США № 4977176. Глицинсодержащие композиции для улучшения познавательных способностей
раскрыты в патенте США № 5731349. Производные пептидов для лечения умственной деградации и
улучшения умственных способностей описаны в патенте США № 5439930, RU 2099078 и WO 95/15310.
Ксантиновые производные для лечения возрастного ухудшения памяти расткрыты в WO 94/19349.
Соединения, усиливающие вызванное радражителем высвобождение нейротрансмиттеров, особенно ацетилхолина, можно также применять для лечения ухудшения памяти. Примерами служат производные 2-бензил-2-пропил-2-амино-2R-ацетата, предложенные в ЕР 293351, 1-(4-хлорфенил)-2-метил-2пропил-2-амино-3-метилбутаноат, описанный в GB 2205095, полициклические гетероароматические
- 41 -
012325
производные, раскрытые в патенте США № 5300642, производные 5-фенил-4,4-диметил-3-оксо- или гидроксипентиламина, описанные в ЕР 322391, производные 1-окса-8-азаспиро(4.5)декана, предложенные в
ЕР 491562, производные ациклических и азабициклических гидроксиламинов, описанные в
WO 94/00448, галогенированные ароматические производные, описанные в ЕР 627400, производные
ациклических и циклических амидов, раскрытые в WO 95/29909, производные карбамоилоксипропиламина или карбамоилоксиэтиламина, описанные в WO 96/08468. Соединения, модулирующие функцию
каинатного рецептора, можно использовать для улучшения памяти, например, алкилкарбоксиаминокислоты, такие как (2S,4R)-4-метилглутаминовая кислота (WO 96/25387).
Гипоталамные гипофизиотропные гормоны, такие как соматостатин и высвобождающий гормон
роста фактор, могут улучшать познавательные способности (ЕР 326381).
Уроновые кислоты улучшают церебральную эффективность вообще, например, улучшают память
(DE 2555010).
Улучшение памяти происходит при введении спиро(N'-метил-4'-пиперидил)-N-этилсукцинимида,
парасимпатикомиметического вещества, обладающего также холиномиметическими аналгетическими и
седативными свойствами (патент США № 4481206).
В заявке WO 98/33498 описано применение брефлата или аналогичных соединений для лечения
млекопитающего, страдающего от познавательной дисфункции.
Брефлат или аналогичные соединения повышают долговременный потенциал нервных клеток. Подходящие ингибиторы повторного поглощения моноамина включают NS-2330. Подходящие ноотропные
агенты включают оксирацетам, поставляемый ISF Societa Per Azioni, прамирацетам, поставляемый Warner Lambert Co., идебенон от фирмы Takeda Chemical Inds., Ltd, анапсос от фирмы ASAC Pharmaceuticals
International, небрацетам, поставляемый Bochringer Ingelheim Corp., JTP-2942, поставляемый Japan Tobacco Inc., фазорацетам фирмы Nippon Shinyaku Co., Ltd., бакозид, доступный в Central Drug Research
Institute, алзен, поставляемый Bar Ilan University, KA-672, производимый Dr. W. Schwabe GmbH and Co.,
алаптид, поставляемый VUFB, IQ-200, ALE-26015, поставляемый Allelix Pharm-Eco LP, и их комбинации.
Подходящим агонистом допаминового рецептора является сперамин. Подходящие лиганды рецепторов АМРА включают СХ-516, СХ-691, производимые Cortex Pharmaceuticals Inc., и их комбинации.
Подходящие блокаторы кальциевых каналов включают тамоларизин от Nippon Chemiphar Co., Ltd., нимодипин от фирмы Bayer AG, PD-176078, доступный в Elan Pharmaceuticals Inc., и их комбинации. Подходящие ингибиторы апоптоза включают ацетил-L-карнитин, CEP-1347 от Cephalon., Inc., TCH-36 от
Novartis AG и их комбинации. Подходящим ингибитором каспазы является пралнаказан. Подходящие
ингибиторы моноаминоксидазы включают моклобемид фирмы Roche Holdung AG, селеглин, расагилин
фирмы Teva Pharmaceuticals Inds., Ltd., SL-25.1188, Ro-41-1049 фирмы Roche Holding AG и их комбинации. Подходящим агонистом рецептора 5-НТ1а является Aβ-159 фирмы Asahi Kasei Corp., подходящий
стимулятор NGF представляет собой ксалипроден фирмы Sanofi-Synthelabo. Подходящие нейропротекторые агенты включают цитихолин, GS-1590 фирмы Leo Pharmaceuticals Products Ltd. A/S, CPI-1189
фирмы Centaur Pharmaceuticals Inc., SR-57667 фирмы Sanofi-Synthelabo и их комбинации. Подходящие
антагонисты рецептора гистамина Н3 включают GT-2016 и GT-2331 (оба от фирмы Gliatech Inc.) и их
комбинации.
Подходящие ингибиторы пролилендопептидазы включают ONO-1603, Ono Pharmaceutical Co., Ltd.,
Z-321 фирмы Zeria Pharmaceutical Co., Ltd., и их комбинации. Пригодный модулятор кальция является
нейрокальком, фирмы Apollo Biopharmaceuticals Inc. Подходящий антагонист фактора, высобождающего
кортикотропин включает NBI-113, фирма Neurocrine Biosciences, Inc. Пригодный модулятор GABA
включает NCD97-1, доступный в Neurogen Corp. Подходящий лиганд сигма-рецептора представляет собой игмезин, фирма Pfezer Inc. Пригодным антагонистом имидазолин/α-адренергического рецептора
служит эфароксан фирмы Ckitt and Colman PLC.
Подходящий агонист рецептора вазоактивного интестинального пептида представляет собой стеарил-NIe-VIP. Пригодный инверсный агонист бензодиазепина представляет собой дронабинол, фирма
Unimed Pharmaceuticals Inc. Подходящими агонистами рецептора тиротропин-высвобождающего гормона являются талтиремин фирмы Tanabe Seiyaku Co. Ltd, и протирелин фирмы Takeda Chemical Inds. Inc.
Подходящим антагонистом 5-HT3 является GYKI-46903. Подходящим ингибитором топоизомеразы II
является иододоксорубицин фирмы Pharmacia and Upjohn AB. Подходящий агонист стероидного рецептора представляет собой GL-701 фирмы Leland Stanford Junior University. Пригодный антагонист кортикостероидного рецептора представляет собой антикорт. Подходящим модулятором окиси азота является
GL-701. Подходящий ингибитор RAGE представлет собой ALT-711 фирмы Alton Inc. RAGE представлет
собой мультилигандный рецептор подсемейства иммуноглобулинов, участвующий в гомеостазе и хронической болезни (Bucciarelli et al., Cell. Mol. Life Sci., 59(7), 1117-28 (2002)).
Изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно
соединение, выбранное из группы, состоящей из D-фосфосерина и L-фосфосерина, и второй терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из антипсихотиков, антидепрессантов, психостимулян- 42 -
012325
тов и терапевтических агентов для лечения болезни Альцгеймера. В этих фармацевтических композициях второй терапевтический агент являеятся антипсихотическим агентом, выбранным из группы, состоящей из типичных антипсихотиков, атипичных антипсихотиков и депо-антипсихотиков. Примеры вторых
терапевтических агентов включают хлорпромазин, тиоридизин, мезоридазин, флуфеназин, перфеназин,
трифлуоперазин, тиотиксен, галоперидол (Haldol™, McNeil Pharmaceuticals, Spring House, Pennsylvania),
локсапин, молиндон (Moban™, DuPont Multi-Source Products, Wilmington, DE), клозапин, рисперидон,
оланзапин, кветиапин, галоперидола деканоат, флуфеназина деканоат, флуфеназина энантат, амитриптилин, амоксапин, бупропион, бупропион SR, кломипрамин, десипрамин, доксепин, флуоксетин, фливоксамин, имипрамин, мапротилин, миртазапин, нефазодон, нортриптилин, пароксетин, фенелзин, протриптилин, сертралин, транилципромин, тразодон, тримипрамин, венлафаксин, велафаксин XR, декстроамфетамин, метамфетамин, метилфенидат, пемолин, донепезил, такрин (Tacrine™), ацетопленазин, хлорпротиксен, дроперидол, пимозид, бутаперазин, карфеназин, ремоксиприд, пиперацетазин, сульпирид и ципразидон.
Согласно другому альтернативному варианту композиции применяются в способах лечения или
профилактики нейропсихиатрического расстройства, характеризующегося ослабленной нейротрансмиссией NMDA. Нейропсихиатрическое расстройство может быть болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна, депрессией, сильной забывчивостью, церебральной амилоидной ангиопатией, васкулярной деменцией, кровоизлиянием, умеренным познавательным ухудшением («MCI») или травмой головы.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, используемые в способах по изобретению, могут дополнительно включать один или несколько секвестрантов желчной кислоты (нерастворимые антионообменные смолы), введенных совместно или в комбинации с соединением любой приведенной в данном изобретении формулы.
Секвестранты желчных кислот связывают желчные кислоты в кишечнике, прерывая энтерогепатическую циркуляцию желчных кислот и вызывая увеличение фекальной экспрессии стероидов. Применением секвестрантов желчных кислот можно снизить холестерин в печени и способствовать синтезу рецепторов ароВ/Е (LDL), которые связывают LDL из плазмы с целью дальнейшего снижения уровней холестерина в крови.
Неограничивающие примеры подходящих секвестрантов желчных кислот включают холестирамин
(сополимер стирола с дивинилбензолом, содержащий катионные группы четвертичного аммония, способные связывать желчные кислоты, такой как Questran™ холестирамин, который доступен в BristolMyers Squibb), колестипол (сополимер диэтилентриамина и 1-хлор-2,3-эпоксипропана, такой как Colestid™ в виде таблеток, фирма Pharmacia), колесевелама гидрохлорид (такой как WelChol™ в виде таблеток), (поли(аллиламина гидрохлорид), сшитый эпихлоргидрином и алкилированный 1-бромдеканом и (6бромгексил)триметиламмоний бромидом, которые доступны в Sankyo), водорастворимые производные,
такие как 3,3-иоен, N-(циклоалкил)алкиламины и полиглюзам, нерастворимые кватернизованные полистиролы, сапонины и их смеси. Другие подходящие секвестранты желчных кислот описаны в заявках
WO 97/11345 и WO 98/57652 и патентах США № 3692895 и 5703188, которые включены в данное описание в качестве ссылок. Подходящие неорганические секвестранты холестерина включают салицилат
висмута плюс монтморил-лонитная глина, гидроокись алюминия и антацид карбонат кальция.
Согласно альтернативному варианту композиции, используемые в способах по изобретению, могут
дополнительно содержать один или несколько ингибиторов идеального транспорта желчных кислот
(«IBAT») (или ингибиторов апикального транспорта желчных кислот, зависимого от натрия («ASBT»)),
вводимых совместно или в комбинации с соединением любой формулы, указанной в данном изобретении. Ингибиторы IBAT могут ингибировать транспорт желчных кислот для снижения уровней LDLхолестерина. Неограничивающие примеры ингибиторов IBAT включают бензотиепины, такие как
2,3,4,5-тетрагидро-1-бензотиепин-1,1-диоксид, описанный в заявке WO 00/38727, которая включена в
качестве ссылки.
Согласно другому альтернативному варианту композиции, используемые в способах по изобретению, могут дополнительно включать никотиновую кислоту (ниацин) или ее производные, введенные
совместно с или в комбинации с соединением любой формулы, приведенной в данном изобретении.
Используемый термин «производное никотиновой кислоты» означает соединение, содержащее пиридин-3-карбоксилатную структуру или пиразин-2-карбоксилатную структуру, включая кислые формы,
соли, эфиры, цвиттер-ионы и таутомеры, если они есть. Примеры производных никотиновой кислоты
включают ницеритол, никофуранозу и асиримокс (5-метил-пиразин-2-карбоновой кислоты 4-окись). Никотиновая кислота и ее производные ингибируют гепатопродуцирование VLDL и его метаболита LDL и
повышает уровни HDL и Aβо А-1. Примером подходящей никотиновой кислоты является Niaspan (ниациновые таблетки с пролонгированным высвобождением) фирмы Kos.
Композиции, терапевтические комбинации или способы по изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько лекарств против ожирения. Подходящие контролирующие ожирение лекарства включают, но не ограничиваются этим, лекарства, которые уменьшают потребление энергии или
подавляют аппетит, лекарства, которые повышают расход энергии и распределяющие питательные ве- 43 -
012325
щества агенты.
Подходящие средства против ожирения включают, но не ограничиваются этим, норадренергические агенты (такие как диэтилпропион, мазиндол, фенилпропаноламин, фентермин, фендиметразин,
фендамина тартрат, метамфетамин, фендиметразин и тартрат); серотонергические агенты (такие как сибутрамин, фенфлурамин, дексфенфлурамин, флуоксетин, флувоксамин, пароксетин); термогенные агенты (такие как эфедрин, кофеин, теофиллин и селективные β3-адренергические агонисты); αблокирующий агент; каинит или антагонист рецептора АМРА; лептин-липолизом стимулированный рецептор; ингибитор фермента фосфодиэстеразы; соединение, имеющее нухлеотидные последовательности
гена mahogany; полипептид фактора-10 роста фибробласта; ингибитор моноаминоксидазы (такой как
бефлоксатон, моклобемид, брофаромин, феноксатин, эсупрон, бефол, толоксатон, пирлиндол, амифламин, серклоремин, басинаприн, лазабемид, милацемид и кароксазон); соединение, ускоряющее метаболизм липидов (такое как соединения эводиамина); и ингибитор липазы (такой как орлистат). В общем,
общая доза вышеописанных лекарств от ожирения может колебаться от 1 до 3000 мг/день и, желательно,
от примерно 1 до 1000 мг/день и, более желательно, от примерно 1 до 200 мг/день при однократной дозе
или при приеме 2-4 разделенных доз.
Композиции, терапевтические комбинации и способы по данному изобретению могут дополнительно содержать один или более модификаторов крови. Подходящие модификаторы включают, но не
ограничиваются этим, антикоагулянты (аргатробан, бивалирудин, далтепарина натриевую соль, десирудин, дикумарол, лиаполат натрия, нафомостата мезилат, фенпрокумон, тинциапарина натриевую соль,
варфарина натриевую соль); антитромботические средства (ангарелида гидрохлорид, бивалирудин, цилостазол, далтепарина натриевую соль, данапароида натриевую соль, дазоксибена гидрохлорид, эфегатрона сульфат, эноксаперина натриевую соль, флуретофен, ифетробан, ифетробана натриевую соль, ламифибан, лотрафибана гидрохлорид, напсагатрон, орбофибана ацетат, роксифибана ацетат, сибрафибан,
тинзапарина натриевую соль, трифенагрел, абсиксимат, золимомаб аритокс); антагонисты рецептора
фибриногена (роксибифана ацетат, фрадафибан, орбофибан, лотрафибана гидрохлорид, тирофибан, ксемилофибан, моноклональное антитело 7Е3, сибрафибан); ингибиторы тромбоцитов (цилостазол, клопидогрел, бисульфат, эпопростенол, эпопростенола натриевая соль, тиклодипина гидрохлорид, аспирин,
ибупрофен, напроксен, сулиндак, индометацин, мефеномат, дроксикам, диклофенак, сульфинпиразон,
пироксикам, дипиридамол): ингибиторы агрегации тромбоцитов (акадезин, берапрост, берапроста натриевая соль, ципростина кальциевая соль, итазигрел, лифаризин, лотрафибана гидрохлорид, орбофибана
ацетат, оксагрелат, фрадафибан, орбофибан, тирофибан, ксемилофибан); геморрологические агенты
(пентоксифиллин); ингибитор коагуляции, ассоциироанный с липопротеином; ингибиторы фактора VIIa
(4Н-3,1-бензоксазин-4-оны, 4Н-3,1-бензоксазин-4-тионы, хиназолин-4-оны, хиназолин-4-тионы, бензотиазин-4-оны, полученные при помощи имидазолилборной кислоты пептидные аналоги пептидов, полученных из TFPI, нафталин-2-сульфоновой кислоты {1-[3-(аминоиминометил)бензил]-2-оксопирролидин3-(S)-ил} амидотрифторацетат, дибензофуран-2-сульфоновой кислоты {1-[3-(аминометил)бензил]-5оксопирролидин-3-ил}амид, толуол-4-сульфоновой кислоты {1-[3-(аминоиминометил)бензил]-2оксопирролидин-3-(S)-ил}амидотрифторацетат, 3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-сульфоновой кислоты {1[3-(аминоиминометил)бензил]-2-оксо-пирролин-3-(S)-ил}амидотрифторацетат); ингибиторы фактора Ха
(дизамещенные пиразолины, дизамещенные триазолины, замещенные н-[(аминоиминометил)фенил]пропиламиды, замещенные N-[(аминометил)фенил]пропиламиды, ингибитор пути фактора ткани
(TFPI), низкомолекулярные гепарины, гепариноиды, бензимидазолины, бензоксазолиноны, бензопиперазиноны, инданоны, производные двухосновной (амидиноарил)пропановой кислоты, амидинофенилпирролидины, амидинофенилпирролины, амидинофенил-изоксазолидины, амидиноиндолы, амидиноазолы,
производные бис-арил-сульфониламинобензамида, ингибиторы пептидного фактора Ха).
Композиции, терапевтические комбинации в способах по изобретению могут дополнительно включать один или несколько сердечно-сосудистых агентов. Подходящие сердечно-сосудистые агенты включают, но не ограничиваются этим, блокаторы кальциевых каналов, клентиазема малеат, амлодипина безилат, исрадипин (DynaCire™, Reliant Parmaceuticals, Liberty Corner, N.Y.), нимодипин, фелодипин
(Plendil™, Merck and Co., Inc., Rahway, New Jersey), нилвадипин, нифедипин, телудипина гидрохлорид,
дилтазема гидрохлорид (Cardizem™ или Cardizem SR™, Aventis, Strasburg, France), белфосдил, верапамила гидрохлорид (Calan или Calan SR™, G.D. Searle, LLC, Skokie, IL), фостедил; адренергические блокаторы (фенспирида гидрохлорид, лабетолола гидрохлорид, пророксан, алфузозина гидрохлорид, ацебутолол, ацебутолола гидрохлорид, алпренолола гидрохлорид, атенолол, бунолола гидрохлорид, картеолола гидрохлорид, целипролола гидрохлорид, цетамолола гидрохлорид, циклопролола гидрохлорид, дексапропранолола гидрохлорид, диацетолола гидрохлорид, димвалола гидрохлорид, эсмолола гидрохлорид,
эксапролола гидрохлорид, флестолола сульфат, лабеталола гидрохлорид, левобетаксолола гидрохлорид,
левобунолола гидрохлорид, металола гидрохлорид, метопролол, метопролола тартрат, надолол, паматолола сульфат, пенбутолола сульфат, практолол, пропранолола гидрохлорид (Inderal™, Wyeth, Madison,
New Jersey), соталола гидрохлорид, тимолол, тимолола малеат, типренолола гидрохлорид, толамолол,
бисопролол, бисопролола фумарат, небиволол); адренергические стимулянты; ингибиторы ангиотензин- 44 -
012325
превращающего фермента (АСЕ) (беназеперила гидрохлорид, беназеприлат, каптоприл (Capoten™, Bristol-Myers, Squibb Co., New York, New York), делаприла гидрохлорид, фосиноприла натриевую соль, либензаприл, моэксиприла гидрохлорид, пентотрил, периндоприл, хинаприла гидрохлорид, хинаприлат,
рамиприл (Altace™, Hoechst Marion Russel, Inc., теперь Aventis, Strasburg, France), спираприла гидрохлорид, спираприлат, тепротид, эналаприла малеат (Vasotec™, Merck and Co., Inc., Rahway, New Jersey), лисиноприл (Zestril™, Stuart, AstraZenica, Wilmington, Delaware), зофеноприла кальциевую соль, периндоприлэрбумин); антигипертензивные агенты (алтиазид, бензтиазид, каптоприл, карведилол, хлортиазида
натриевая соль, клонизина гидрохлорид (Catapress™, Bochringer Indelheim, Ridgefield, Connecticut), циклотиазид, делаприла гидрохлорид, дилевалола гидрохлорид, доксазодина мезилат, фосиноприла натриевую соль, гуанфацина гидрохлорид (Tenex™, Robins, ESP Pharmaceuticals, Flanders, NY), метиидопу, метопролола сукцинат, моэксиприла гидрохлорид, монатепила малеат, пелансерина гидрохлорид, феноксибензамина гидрохлорид, празозина гидрохлорид, примидолол, хинаприла гидрохлорид, хинаприлат, рамиприл, теразозина гидрохлорид, кандесартан, кандесартана цилексетил, телмисартан, амлодипина бесилат, амлодипина малеат (Norvasc™, Pfizer, New York, New York), бевантолола гидрохлорид; антагонисты
рецептора ангиотензина II (кандесартан, ирбесартан, лосартана калиевую соль, кандесартан целексетил,
телмисартан); антиангинные средства (амлодипина бензилат, амлодипина малеат, бетаксолола гидрохлорид, бевантолола гидрохлорид, бутопрозина гидрохлорид, карведилол, цинепазета малеат, метопролола
сукцинат, молсидомин, монатепила малеат, примидолол, ранолазина гидрохлорид, тосифен, верапамила
гидрохлорид); коронарные вазодилаторные средства (фостедил, азаклорцина гидрохлорид, хромонара
гидрохлорид, клонипрат, дилтиазема гидрохлорид, дипиридамол, дропрениламин, эритритила тетранитрат, изосорбида динитрат, изосорбида мононитрат, лидофлазин, миофлазина гидрохлорид, миксидин,
молсидомин, никорандил, нифедипин (Procardia™, Pfizer, New York, New York), низолдипин, нитроглицерин, оксепренола гидрохлорид, пентринитрол, пергексилина малеат, прениламин, пропалилнитрат,
теродилина гидрохлорид, толомолол, верапамил); диуретики (продукт комбинации гидрохлортиазида и
спиронолактона и продукт комбинации гидрохлортиазида и триамтерена).
Кровяной барьер мозга
Окись азота является сосудорасширяющим средством периферической сосудистой системы в нормальной ткани организма. Увеличивающееся образование окиси азота при помощи синтазы окиси азота
вызывает расширение кровеносных сосудов (вазодилатацию) без снижения кровяного давления. Независящее от давления увеличение потока крови в ткани мозга увеличивает церебральную биодоступность
композиций в крови. Это увеличение количества окиси азота может быть стимулировано введением Lаргинина. По мере возрастания уровня окиси азота поток крови в мозгу соответственно увеличивается, и
лекарства в потоке крови переносятся этим потоком крови в ткани мозга. Следовательно, L-аргинин
можно использовать в фармацевтических композициях по изобретению для ускорения доставки агентов
в мозговую ткань после введения фармацевтической композиции в кровь субъект практически одновременно с потоком крови, увеличивающим количество L-аргинина (WO 00/56328).
Агенты по изобретению, которые проявляют физиологический эффект in vivo в мозгу, могут быть
более полезными, если они имеют доступ к клеткам-мишеням мозга. Неограничивающими примерами
клеток мозга являются нейроны, глиальные клетки (астроциты, олигодендроциты, микроглия), клетки
кровеносной системы (мышечные клетки, эндотелиальные клетки) и клетки, которые образуют оболочку
мозга. Кровяной барьер («ВВВ») обычно ограничивает доступ к мозгу, действуя как физическая и функциональная блокада, которая разделяет паренхиму мозга от системной циркуляции (см., например,
Pardridge et al., J. Neurovirol 5(6), 556-69 (1999); Rubin et al., Rev. Neurosci. 22, 11-28 (1999)). Циркулирующие вещества обычно могут получить доступ к клеткам мозга по одному из двух процессов: опосредованный липидами транспорт через ВВВ путем свободной диффузии или активный (или катализируемый) транспорт.
На основе агентов по изобретению могут быть получены составы, которые улучшают распределение in vivo, например, в виде порошкообразных или жидких таблеток или раствора для орального введения или в виде назального спрея, носовых капель, геля или мази, для введения через трубку или катетер,
при помощи шприца, тампона или подслизистой инфузии. Например, кровяной барьер мозга (ВВВ) исключает многие сильно гидрофильные агенты. Для обеспечения пересечения ВВВ более гидрофильными
агентами по изобретению, могут использовать их в липосомах. Способы изготовления липосом см., например, в патентах США № 4522811, 5374548 и 5399331. Липосомы могут включать одно или несколько
веществ, которые селективно транспортируются в специфические клетки или органы («таргетирующие
фрагменты» или «таргетирующие группы» или «транспортирующие векторы»), тем самым обеспечивая
целенаправленную доставку лекарств (см., например. V.V. Ranade J. Clin. Pharmaceutical. 29, 685 (1989)).
Кроме того, агенты могут быть связаны с таргетирующими группами, которые облегчают проникновение
через кровяной барьер мозга. Согласно одному варианту в способе по изобретению используют полиамин природного происхождения, связанный с агентом, который является малой молекулой и подходит
для ингибирования осаждения Aβ.
Для облегчения транспорта агентов по изобретению через ВВВ их можно сочетать с вектором ВВВ
- 45 -
012325
транспорта (обзор векторов ВВВ транспорта и механизмов см. Bickel et al., Adv. Drug Delivery Reviews
46, 247-79 (2001)). Примеры таких векторов включают катионизированный альбумин или моноклональное антитело OX26 к рецептору трансферрина; эти белки подвергаются абсорбционно-опосредованному
и рецептор-опосредованному трансцитозу через ВВВ, соответственно. Природные метаболиты клеток,
которые можно использовать в качестве таргетирующих групп, включают, наряду с прочими, путресцин,
спермидин, спермин или DHA. Другие примеры таргетирующих веществ включают фолат или биотин
(см., например, патент США № 5416016); маннозиды (Umezawa, et al., Biochem. Biophys.Res. Common.
153, 1038 (1988)); антитела (P. G. Bloeman, et al., FEBS Lett. 357, 140 (1995); M. Owais, et al., Antimicrob.
Agents Chemother 39, 180 (1995); сурфактант рецептора протеина A (Briscoe, et al., Am. J. Physiol. 1233,
134, (1995); gp 120 (Schreier, et al., J. Biol. Chem. 269, 9090 (1994)); см. также K. Keinanen and M.L. Laukkanen, FEBS Lett. 346, 123 (1994); J. J. Killion and I.J. Fidler, Immunomethods 4, 273 (1994).
Примерами других векторов ВВВ транспорта, которые таргетируют рецептор-опосредованные
транспортные системы в мозг, включают такие факторы, как инсулин, инсулиноподобные факторы роста
(«IGF-I», «IGF-II»), ангиотензин II, предсердный и мозговой натрийуретический пептид («ANP» и
«BNP»), интерлейкин I ("IL-I") и трансферрин. Моноклональные антитела к рецепторам, которые связывают эти факторы, можно также использовать в качестве векторов ВВВ-транспорта. Механизмы таргетирования (направленности) векторов ВВВ транспорта для абсорбционно опосредованного трансцитоза
включают катионные вещества, такие как катионизированный LDL, альбумин или пероксидаза хрена в
сочетании с полилизином, катионизированный альбумин или катионизированные иммуноглобулины.
Небольшие основные олигопептиды, такие как аналог динорфина Е-2078 и аналог АСТН эбиратид, могут
также пересекать барьер via абсорбционно-опосредованный трансцитоз и являются потенциальными
транспортирующими векторами.
Другие векторы ВВВ транспорта таргетируют системы для транспорта питательных веществ в мозг.
Примерами таких ВВВ транспортирующих векторов являются гексозы, например, глюкоза, и монокарбоновые кислоты, например молочная, и нейтральные аминокислоты, например фенилаланины, и амины,
например холин, и основные аминокислоты, например, аргинин, нуклеозиды, например аденозин, и пуриновые основания, например аденин, и тироидные гормоны, например трииодтиридин. Антитела к внеклеточным доменам транспортеров-питательных веществ можно также использовать в качестве транспотирующих векторов. Другие возможные векторы включают ангиотензин II и ANP, которые могут участвовать в регуляции проницаемости через ВВВ.
В некоторых случаях связь, соединяющая терапевтический агент с транспортирующим вектором,
может быть расщеплена вслед за транспортом в мозг для того, чтобы высвободить биологически активный агент. Примеры линкеров включают дисульфидные связи, сложноэфирные связи, тиоэфирные связи,
амидные связи, лабильные кислотные связи и связи Шиффова основания. Можно использовать линкеры
авидин/биотин, в которых авидин ковалентно связан с вектором транспорта лекарства через ВВВ. Сам
авидин может быть вектором, транспортирующим лекарства.
Трансцитоз, включающий рецептор-опосредованный транспорт композиций через кровяной барьер
мозга, может также применяться для агентов по изобретению. Опосредованная рецептором трансферрина доставка описана в патентах США № 5672683, 5383988, 5527527, 5977307 и 6015555. Известен также
транспорт, опосредованный трансферрином. P.M. Friden, et al., Pharmacol. Exp. Ther. 278.1491-98 (1996);
H.J. Lee, J. Pharmacol. Exp. Ther. 292, 1048-52 (2000). Доставка, опосредованная рецептором EGF, оописана Y. Deguchi, et al., Bioconjug. Chem. 10, 32-37 (1999), трансцитоз описан A. Cerletti, et al., J. Drug Target, 8, 435-46 (2000). Ферменты инсулина были использованы как носители для доставки через кровяной
барьер мозга. М. Fukuta et al., Pharm. Res. 11, 1681-88 (1994). Доставка агентов при помощи конъюгата
нейтрального авидина и катионизованного человеческого альбумина также описана Y.S. Kang et al.,
Pharm. Res. 1, 1257-64 (1994).
Используя способы и вещества, известные из уровня техники, можно применять другие методы облегчения проникновения агентов по изобретению через кровяной барьер мозга. См., например, патент
США № 6024977, который раскрывает ковалентные полярные конъюгаты липидов для таргетирования в
мозг и центральную нервную систему. В патенте США № 5017566 описаны производные циклодекстрина, включающие комплексы включения липоидальных форм дигидропиридиновых восстановительных
таргетирующих фрагментов.
В патенте США № 5023252 описано применение фармацевтических композиций, содержащих неврологически активное лекарство и соединение для облегчения транспорта лекарства через кровяной
барьер мозга, включая макроциклический эфир, диэфир, амид, диамид, амидин, диамидин, тиоэфир, дитиоэфир, тиоамид, кетон или лактон. В патенте США № 5024998 описаны парентеральные растворы водонерастворимых лекарств с циклодекстириновыми производными. В патенте США № 5039794 предложено применение метастазного опухолевого фактора эгрессии для облегчения транспорта соединений
через кровяной барьер мозга. В патенте США № 5112863 описано применение производных N-ацетиламинокислот в качестве антипсихотических лекарств для доставки через кровяной барьер мозга. В патенте США № 5124146 описан способ доставки терапевтических агентов через кровяной барьер мозга в сайты повышенной проницаемости, связанные с поражениями мозга. В патенте США № 5153179 предложе- 46 -
012325
но применение ацилированного глицерина и его производных в лекарственном препарате для улучшения
проникновения в клеточные мембраны. В патенте США № 5177064 описано применение липоидальных
фосфонатных производных нуклеозидных антивирусных агентов для доставки через кровяной барьер
мозга. В патенте США № 5254342 описан опосредованный рецептором трансцитоз кровяного барьера
мозга с использованием трансферринового рецептора в сочетании с фармацевтическими соединениями,
которые усиливают или ускоряют этот процесс. В патенте США № 5258402 описано лечение эпилепсии
имидатными производными противосудорожного сульфамата. В патенте США № 5270312 предложены
замещенные пиперазины в качестве агентов для центральной нервной системы. В патенте США
№ 5284876 описаны конъюгаты жирных кислот и допаминовых лекарств. Патент США № 5389623 предлагает применение липидных производных дигидропиридина и противовоспалительных стероидов или
стероидных половых гормонов для доставки через кровяной барьер мозга. В патенте США № 5405834
предложены пролекарства тиротропин-высвобождающего гормона. В патенте США № 5413996 раскрыты ацетилоксиалкилфосфонатные конъюгаты неврологически активных лекарств для анионного секвестрирования таких лекарств в ткани мозга. В патенте США № 5434137 описаны способы селективного открытия анормальных капилляров ткани мозга с применением брадикинина, введенного вливанием в сонную артерию. Патент США № 5442043 раскрывает пептидный конъюгат между пептидом, обладающим
биологической активностью и неспособным пересекать кровяной барьер мозга, и пептидом, который не
проявляет биологической активности и способен проходить кровяной барьер мозга при рецепторопосредованном эндоцитозе. В патенте США № 5466683 описаны водорастворимые аналоги противосудорожного средства для лечения эпилепсии. В патенте США № 5525727 описаны композиции для дифференциального поглощения и удержания в ткани мозга, включающие конъюгат наркотического анальгетика и их агонистов и антагонистов с липидной формой дигидропиридина, которая образует редокссоль при поглощении через кровяной барьер мозга, что предотвращает обратное попадание в круг системного кровообращения.
Дальнешие примеры модификаций, которые способствуют проникновению через кровяной барьер
мозга, описаны в заявке WO 85/02342, которая раскрывает лекарственную композицию, содержащую
глицеролипид или его производное. В заявке WO 089/11299 описан химический конъюгат антитела с
ферментом, который доставляется к сайту повреждения мозга для активации отдельно введенного неврологически активного пролекарства. В заявке WO 91/04014 описаны способы доставки терапевтических и
диагностических агентов через кровяной барьер мозга путем инкапсулирования лекарств в липосомы,
нацеленные на ткань мозга с использованием лигандов транспорт-специфического рецептора или антител. В заявке WO 91/04745 описан транспорт через кровяной барьер мозга с использованием веществ
клеточной адгезии и их фрагментов для увеличения проницаемости через плотные соединения в сосудистом эндотелии. В заявке WO 91/14438 описано применение модифицированного химерного моноклонального антитела для облегчения транспорта веществ через кровяной барьер мозга. В заявке
WO 94/01131 описаны липидизированные белки, включающие антитела. В заявке WO 94/03424 описано
применение производных аминокислот в качестве лекарственных конъюгатов для облегчения транспорта
через кровяной барьер мозга. В заявке WO 94/06450 описаны конъюгаты неврологически активных лекарств с редокс-таргетирующим соединением дигидропиридинового типа, содержащие аминокислотную
связь и алифатический остаток. В заявке WO 94/02178 описанны нацеленные на антитела липосомы для
доставки через кровяной барьер мозга.
В заявке WO 95/07092 описано применение конъюгатов лекарства и фактора роста для доставки лекарств через кровяной барьер мозга. В заявке WO 96/00537 описаны полимерные микросферы в качестве
инъецируемых носителей лекарств для доставки биоактивных агентов к сайтам в центральной нервной
системе. Заявка WO 96/04001 раскрывает конъюгаты омега-3-жирных кислот и неврологически активных
лекарств для доставки в ткань головного мозга. В заявке WO 96/22303 описаны конъюгаты жирных кислот и глицеролипидов и неврологически активных лекарств для доставки в ткань головного мозга.
В общем, специалисту хорошо известно, как получить эфир, амид или производные гидразина агента по изобретению, например, из соответствующих карбоновой кислоты и подходящего реагента. Например, карбоксилсодержащее соединение или его реакционноспособный эквивалент могут реагировать
с гидроксилсодержащим соединением или его реакционноспособным эквивалентом, чтобы получить
соответствующий эфир. См., например, «Comprehensive Organic Transformations", 2nd Ed., by R.C. Larock,
VCH Publishers John Wiley & Sons, Ltd., (199989); "March's Advanced Organic Chemistry," 5nd, by M.B.
Smith and J. March John Wiley & Sons, Ltd. (2000).
Соединение по изобретению может действовать на периферии, вызывая изменение в равновесии
концентрации амилоидного белка в двух частях (а именно, системной vs центральной) в этом случае не
требуется, чтобы соединение проникало в мозг, чтобы вызвать или уменьшить концентрацию Aβ в мозгу
(эффект «погружения»).
- 47 -
012325
Пролекарства
Данное изобретение относится также к агентам указанных формул. Пролекарства являются агентами, которые превращаются in vivo в активные формы (см., например, R.B. Silverman, 1992, "The Organic
Chemistry of Drug Design and Drag Action", Academic Press, chp.8). Пролекарства можно использовать для
изменения биораспределения (например, обеспечить применение агентов, которые обычно не входят в
реакционноспособные сайты протеазы) или фармакокинетику какого-либо агента. Например, карбоксильная группа может быть этерифицирована, например, метильной группой или этильной группой с
получением эфира. Когда эфир вводят субъекту, эфирная группа расщепляется ферментативным путем
или нет, при восстановлении, окислении или гидролизе, раскрывая анионную группу. Анионная группа
может быть этерифицирована группами (например, ацилоксиметиловых эфиров), которые расщепляются
с высвобождением промежуточного агента, который затем разлагается с образованием активного агента.
Группы пролекарства могут подвергаться метаболизму in vivo эстеразами или по другим механизмам с
образованием карболовых кислот.
Примеры пролекарств и их применение хорошо известны (см., например, Berge, et al., "Pharmaceuticals Salts", J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)). Пролекарства могут быть получены in situ во время конечных
выделения и очистки агентов или путем отдельной реакции очищенного агента в свободной кислой форме с подходящим дериватизирующим агентом. Карбоновые кислоты могут быть превращены в эфиры
путем обработки спиртом в присутствии катализатора.
Примерами расщепляемых карбоновых кислот пролекарств являются группы замещенных или незамещенных, разветвленных или неразветвленных низших алкиловых эфиров (например, этиловых эфиров, пропиловых эфиров, бутиловых эфиров, пентиловых эфиров, циклопентиловых эфиров, гексиловых
эфиров, циклогексиловых эфиров), группы низших алкениловых эфиров, группы ди-низших-алкиламино-низших-алкиловых эфиров (например, диметиламино-этиловый эфир), группы ациламино-низших
алкиловых эфиров, группы ацилокси-низших алкиловых эфиров (например, пивалоилоксиметилового
эфира), группы ариловых эфиров (фенилового эфира), арил-низший-алкиловых эфиров (например, бензилового эфира), группы замещенных (например, метилом, галоидом или метокси) ариловых и арилнизший алкиловых эфиров, группы амидов, низших алкиламидов, динизших алкиламидов и гидроксиамидов.
Фармацевтические препараты
Согласно другому варианту настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям,
содержащим агенты любой из указанных формул, для лечения болезни, связанной с β-амилоидом, а также к способам изготовления таких композиций.
В общем, агенты по изобретению могут быть получены способами, показанными на общих схемах
реакции, приведенных, например, в патентах и заявках на патент, на которые даны ссылки, или модификаций этих способов с использованием легко доступных исходных материалов, реагентов и обычных
методов синтеза. В этих реакциях можно также применять варианты, которые известны сами по себе, но
не упоминаются в этом изобретении. Используют также функциональные и структурные эквиваленты
агентов, описанных в данном изобретении, которые имеют те же самые общие свойства и в которых замена одного или нескольких заместителей не влияет отрицательно на природу или применение агента.
Агенты по изобретению могут быть в виде раствора в подходящем растворителе или могут не содержать растворителя (например, быть в лиофилизованном виде). Согласно другому аспекту изобретения агенты и буферы, необходимые для осуществления способов по изобретению, могут быть упакованы
в виде набора. Набор может быть использован согласно способам по изобретению и может включать
инструкции для применения его в способе по изобретению. Дополнительные компоненты набора могут
включать кислоты, основания, буферные агенты, неорганические соли, растворители, антиоксиданты,
консерванты или хелаторы металлов. Дополнительные компоненты набора могут быть в виде чистых
веществ или водных или органических растворов, которые включают один или несколько дополнительных компонентов набора. Любой или все компоненты набора могут дополнительно содержать буферы.
Терапевтический агент может быть введен парентерально, интраперитонально, интраспинально или
интрацеребрально. Дисперсии могут быть приготовлены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, их
смесях и маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты могут содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
Для того чтобы ввести терапевтический агент не парентеральным, а другим способом может быть
необходимым нанести на него покрытие из материала, предотвращающего его инактивацию, или вводить
этот агент совместно с таким материалом. Например, терапевтический агент может быть введен субъекту
в соответствующем носителе, например в липосомах, или в разбавителе. Фармацевтически приемлемые
разбавители включают физиологический раствор и водные буферные растворы. Липосомы включают
вода-в масле-в воде эмульсии CGF, а также обычные липосомы (Strejan, et al., J. Neuroimmunol. 7, 27
(1984)).
Фармацевтические композиции, пригодные для инъекций, включают стерильные водные растворы
(если агент растворим в воде) или дисперсии и стерильные порошки для приготовления перед употреблением стерильных инъецируемых растворов или дисперсий. Во всех случаях композиции должны быть
- 48 -
012325
стерильными и жидкими до такой степени, чтобы их можно было легко вводить шприцем. Композиция
должна быть стабильной при условиях производства и хранения и должна сохраняться от загрязняющего
действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибки.
Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, без ограничения, любые неиммуногенные фармацевтические адъюванты, подходящие для орального, парентерального, назального введения, введения через слизистую, трансдермального, внутрисосудистого (IV), внутриартериального (IA),
внутримышечного (IM) и подкожного введения, например, фосфатный буферный физиологический раствор (PBS). Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например,
воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их
подходящие смеси и растительные масла. Должно поддерживаться подходящее жидкое состояние, например, за счет применения покрытия, такого как лецитин, поддержания требуемого размера частиц в
случае дисперсии и за счет применения сурфактантов. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто при помощи различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимерозала и т.п. Во многих случаях в
композицию включают изотонические агенты, например, сахара, хлорид натрия, или полиспирты, такие
как маннит и сорбит. Прологированную абсорбцию инъецируемых композиций можно получить за счет
включения в композицию агента, который задерживает абсорбцию, например, моностеарат алюминия
или желатин.
Стерильные инъецируемые растворы можно получить путем введения терапевтического агента в
требуемом количестве в подходящем растворителе с одним из ингредиентов, перечисленных выше, или с
комбинацией этих ингредиентов, с последующей стерилизацией при фильтровании. Обычно дисперсии
получают путем введения терапевтического агента в стерильный носитель, который содержит основную
дисперсионную среду, и других необходимых ингредиентов из тех, что перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов используют вакуумную
сушку и сушку при замораживании, получая порошок активного ингредиента (а именно, терапевтического агента) и любого дополнительного желаемого ингредиента из ранее стерилизованного при фильтрации его раствора.
Терапевтический агент может быть введен перорально, например, с инертным разбавителем или усваиваемым съедобным носителем. Терапевтический агент и другие ингредиенты могут быть заключены
в твердые или мягкие капсулы, спрессованы в таблетки или же введены как компоненты диеты для субъекта. В случае орального терапевтического введения терапевтический агент может быть введен вместе с
эксципиентами и применен в виде проглатываемых таблеток, трансбуккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Количество терапевтического агента в композициях и
препаратах может, конечно, меняться.
Количество терапевтического агента в таких терапевтически пригодных композициях должно быть
таким, чтобы достигалась нужная доза.
Особенно выгодно получать парентеральные композиции в унифицированной дозированной форме
для облегчения введения и однородности дозировки. Унифицированная дозированная форма означает
физически дискретные единичные дозы, пригодные как унифицированные дозы для субъектов, получающих лекарство; при этом каждая единичная доза содержит заданное количество терапевтического
агента, рассчитанное для достижения желательного терапевтического эффекта в сочетании с требующимся фармацевтическим носителем. Состав унифицированной дозированной формы по изобретению
диктуется и непосредственно зависит от а) уникальных характеристик терапевтического агента и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут и б) ограничений, свойственных
процессу совмещения такого терапевтического агента для лечения амилоидных отложений у субъектов.
Следовательно, данное изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие агенты
указанных формул, включая их фармацевтически приемлемые соли, в фармацевтически приемлемых
носителях для аэрозольного, перорального и парентерального введения. Данное изобретение включает
также такие агенты или их соли, которые были лиофилизованы и которые могут быть восстановлены с
получением фармацевтически приемлемых составов для введения внутривенной, внутримышечной или
подкожной инъекцией. Можно проводить также внутрикожное или чрескожное введение.
Согласно данному изобретению агент описанных здесь формул и его фармацевтически приемлемые
соли могут вводиться орально или путем ингаляции в виде твердого вещества или могут вводиться внутримышечно или внутривенно в виде раствора, суспензии или эмульсии. Или же эти агенты и их соли могут также вводиться путем ингаляции, внутривенно или внутримышечно в виде липосомной суспензии.
Фармацевтические составы по изобретению также пригодны для введения в виде аэрозоля, путем
ингаляции. Эти составы представляют собой раствор или суспензию желательного агента указанной ниже формулы или его соли, или множества твердых частиц агента или соли. Желаемый состав можно поместить в небольшую камеру и распылить. Распыление можно проводить сжатым воздухом или при помощи ультразвука с образованием множества мелких капель или твердых частиц, содержащих агенты
или их соли. Жидкие капли или твердые частицы должны иметь размер частиц в интервале от примерно
0,5 до примерно 5 мкм. Твердые частицы могут быть получены обработкой твердого агента любой фор- 49 -
012325
мулы, указанной здесь, или его соли подходящим известным методом, например, путем микронизации.
Размер твердых частиц или капель равен, например, от примерно 1 до примерно 2 мкм. В этом аспекте
для достижения этой цели доступны коммерческие распылители.
Фармацевтический состав, пригодный для введения в качестве аэрозоля, может быть в виде жидкости, состав тогда содержит водорастворимый агент любой приведенной формулы или его соль в носителе, который представляет собой воду. Может содержаться поверхностно-активное вещество, которое
снижает поверхностное натяжение состава в такой степени, которая достаточна, чтобы привести к образованию капель желаемого размера при распылении.
Пероральные композиции включают также жидкие растворы, эмульсии, суспензии и т.п. Фармацевтически приемлемые носители, пригодные для приготовления таких композиций, хорошо известны. Типичные компоненты носителей для сиропов, эликсиров, эмульсий и суспензий включают этанол, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, жидкую сахарозу, сорбит и воду. Для суспензии типичные
суспндирующие агенты включают метилцеллюлозу, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, трагакант, альгинат натрия; типичные смачивающие агенты включают лецитин и полисорбат 80 и типичные
консерванты включают метилпарабен и бензоат натрия. Пероральные жидкие композиции могут также
содержать один или несколько компонентов, таких как подсластители, ароматизаторы и красители, указанные выше.
Фармацевтические композиции могут содержать покрытия, обычно зависимые от pH и времени,
чтобы выбранный агент высвобождался в желудочно-кишечном тракте вблизи желательного места топического применения или в разные промежутки времени, чтобы продлить желательное действие.
Такие дозированные формы обычно включают, но не ограничиваются этим, одно или несколько
веществ, выбранных из ацетата фталата целлюлозы, поливинилацетатфталата, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, этилцеллюлозы, восков и шеллака.
Другие препараты для системной доставки нужных агентов включают сублингвальную, буккальную и назальную формы. Такие композиции обычно содержат один или более растворимых наполнителей, таких как сахароза, сорбит и маннит, и связующие, такие как смола акации, микрокристаллическая
целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза.
Могут быть также включены вещества, способствующие скольжению, смазывающие агенты, подсластители, красители, антиоксиданты и ароматизаторы, описанные выше.
Композиции по изобретению могут быть введены субъекту топически, например, прямым наложением или намазыванием этой композиции на эпидермальную или эпителиальную ткань субъекта или
трансдермально при помощи «пластыря». Такие композиции включают, например, лосьоны, кремы, растворы, гели и твердые формы. Эти топические композиции могут содержать эффективное количество,
обычно по меньшей мере около 0,1% или даже от примерно 1% до примерно 5% агента по изобретению.
Подходящие носители для топического введения обычно остаются на коже в виде непрерывной пленки и
являются стойкими к удалению с потом или при погружении в воду. Обычно носитель является органическим по природе и способным диспергировать или растворять в нем терапевтический агент. Носитель
может включать фармацевтически приемлемые мягчители, эмульгаторы, загущающие агенты, растворители и т.п.
Активные агенты вводятся в терапевтически эффективном количестве, достаточном для ингибирования осаждения амилоида у субъекта. «Терапевтически эффективная» доза ингибирует амилоидное
осаждение, например, по меньшей мере примерно на 20% или по меньшей мере примерно на 40% или
даже по меньшей мере примерно на 60% или по меньшей мере примерно на 80% по сравнению с субъектами, не получающими лечения.
В случае болезни Альцгеймера «терапевтически эффективная» доза стабилизирует познавательную
функцию и предотвращает дальнейшее ухудшение познавательной функции (а именно, предотвращает,
замедляет или останавливает развитие болезни). Данное изобретение предусматривает соответствующие
терапевтические лекарства. Под «терапевтиком» или «лекарством» подразумевают агент, обладающий
улучшающим или профилактическим действием на конкретную болезнь или состояние у живого человека или животного.
Более того, активные агенты вводятся в терапевтически эффективном количестве, достаточном для
уменьшения отложения амилоидного белка у субъекта, например, Аβ40 или Aβ42. Терапевтически эффективная доза ингибирует осаждение амилоида, например, по меньшей мере на 15% или по меньшей
мере примерно на 40% или даже по меньшей мере примерно на 60% или по меньшей мере примерно на
80% по сравнению с субъектами, не получившими лечения.
Согласно другому варианту активные агенты вводят в терапевтически эффективной дозе, достаточной для увеличения или усиления образования амилоидного белка, например, Аβ40 или Aβ42, в крови
субъекта. Терапевтически эффективная доза повышает его концентрацию, например, по меньшей мере
примерно на 15% или по меньшей мере примерно на 40% или даже по меньшей мере примерно на 60%
или по меньшей мере примерно на 80% по сравнению с субъектами, не получившими лечения.
Согласно еще одному варианту активные агенты вводят в терапевтически эффективной дозе, доста- 50 -
012325
точной для повышения оценки по шкале испытаний ADAS-cog, например, по меньшей мере примерно на
1 балл, по меньшей мере примерно на 2 балла, по меньшей мере примерно на 3 балла, по меньшей мере
примерно на 4 балла, по меньшей мере примерно на 5 баллов, по меньшей мере примерно на 10 баллов,
по меньшей мере примерно на 12 баллов, по меньшей мере примерно на 15 баллов или по меньшей мере
примерно на 20 баллов по сравнению с субъектами, не получившими лечения.
Токсичность и терапевтическую эффективность таких агентов можно определить стандартными
фармацевтическими методами в клеточных культурах или на экспериментальных животных, например,
для определения LD50 (доза, летальная для 50% популяции) и ED50 (терапевтически эффективная доза
для 50% популяции). Соотношение доз, дающих токсический и терапевтический эффекты, представляет
собой терапевтический индекс, выражаемый в виде отношения LD50/ED50, и обычно чем больше терапевтический индекс, тем больше эффективность. Если агенты, дающие токсичные побочные эффекты, используются, нужно тщательно создавать систему для доставки, которая направляет такие агенты к сайту
пораженной ткани, чтобы снизить до минимума возможные повреждения неинфицированных клеток и
тем самым уменьшить побочные эффекты.
Очевидно, что соответствующие дозы зависят от ряда факторов в пределах знаний обычного практикующего врача, ветеринара или исследователя. Доза(ы) малых молекул зависит(ят), например, от личности, размера и состояния субъекта или испытуемого образца, способа введения композиции и эффекта,
который практики хотят получить при действии малой молекулы на нуклеиновую кислоту или полипептид по изобретению.
Примерные дозы составляют миллиграммы или микрограммы малых молекул на кг веса субъекта
или веса образца (например, от около 1 мкг/кг до примерно 500 мг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 5 мг/кг, или от примерно 1 мкг/кг до примерно 50 мкг/кг). Далее, ясно, что подходящие дозы зависят от действенности по отношению к экспрессии или активности, которые модулируются. Такие подходящие дозы могут быть определены с применением описанных в данном изобретении методов. Когда
нужно ввести животному (например, человеку) одну или несколько этих малых молекул для того, чтобы
модулировать экспрессию или активность полипептида или нуклеиновой кислоты по изобретению, врач,
ветеринар или исследователь могут, например, сначала прописать довольно низкую дозу, увеличивая
затем дозу до тех пор, пока не получится соответствующий ответ. Кроме того, очевидно, что конкретная
величина дозы для конкретного животного зависит от разнообразных факторов, включая активность
конкретного используемого агента, возраст, вес, общее состояние здоровья, пол и диету субъекта, время
введения, метод введения, скорость экскреции, комбинацию лекарств и степень экспрессии или активности, которые подвергаются модулированию.
Способность агента ингибировать осаждение амилоида можно оценить на животной модели, которая может предсказать эффективность ингибирования осаждения амилоида в процессе болезни человека,
например, на трансгенной мыши, экспрессирующей человеческий APP или на других релевантных моделях, где наблюдается отложение Aβ. Точно так же способность агента предотвращать или уменьшать
познавательное ухудшение на модели, может служить показателем эффективности для людей. Или же
способность агента можно определить путем проверки способности агента ингибировать образование
амилоидных фибрилл in vitro, например, методом изучения фибриллогенеза, таким, который описан в
данном изобретении, включая ThT, CD или ЕМ методы анализа. Связывание агента с амилоидными фибриллами можно измерить с применением MS метода, описанного в данном изобретении.
Фармацевтически приемлемые соли
Некоторые агенты по изобретению могу содержать основную функциональную группу, такую как
амино- или алкиламино группа, и по этому способны образовать фармацевтически приемлемые соли с
фармацевтически приемлемыми кислотами. Термин «фармацевтически приемлемые соли» в этом аспекте относится к солям присоединения сравнительно нетоксичных неорганических и органических кислот
к агентам по изобретению. Эти соли могут быть получены in situ во время конечного выделения и очистки агентов по изобретению или путем взаимодействия очищенного агента по изобретению в его основной форме с подходящей органической или неорганической кислотой и выделения образовавшейся соли.
Примеры солей включают гидрогалоидные соли (включая гидробромид и гидрохлорид), сульфат,
бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, бензоат, лактат, фосфат,
тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептонат, лактобионат, 2гидроксиэтансульфонат и лаурилсульфонат и т.п. См., например, Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J.
Pharm. Sci. 66, 1-19 (1977).
В других случаях агенты по изобретению могут содержать одну или несколько кислых функциональных групп и поэтому способны образовать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически
приемлемыми основаниями. Термин «фармацевтически приемлемые соли» в этих случаях относится к
солям присоединения сравнительно нетоксичных неорганических и органических оснований к агентам
по изобретению. Эти соли тоже могут быть получены in situ во время конечного выделения и очистки
агентов по изобретению или взаимодействием очищенного агента в виде свободной кислоты с подходящим основанием, таким как гидроокись, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, аммиак или фармацевтически приемлемые первичные, вторичные или третичные амины.
- 51 -
012325
Примеры щелочных и щелочно-земельных солей включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния,
алюминия и т.п. Примеры органических аминов, пригодных для образования солей присоединения к основаниям, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и т.п.
Специалистам ясно, что можно используя рутинное экспериментирование, осуществить многие эквиваленты конкретных вариантов и методов, описанных в данном изобретении. Такие эквиваленты входят в объем данного изобретения, определяемого нижеследующей формулой изобретения. Все патенты,
заявки на патент и литературные источники, указанные в данном изобретении, включены в нее полностью в качестве ссылок. Ниже изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые не ограничивают изобретение.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают также, например, производные агентов, модифицированных получением кислых или основных солей, как описано ниже. Примеры фармацевтически
приемлемых солей включают неорганические или органические кислые соли основных остатков, таких
как амины, и щелочные или органические соли кислотных остатков, например, карбоновых кислот.
Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксичные соли или четвертичные аммонийные соли образовавшегося родительского агента, например, из неорганических или органических
кислот. Такие обычные нетоксичные соли включают соли, полученные из неорганических кислот, таких
как соляная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная и азотная кислоты, и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая,
молочная, малевая, винная, лимонная, аскорбиновая, пальмоевая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацет-оксибензойная, фумаровая,
толуолсульфокислота, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая и изетионовая кислоты.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены из родительского соединения, которое
содержит основную или кислотную группы, обычными химическими способами. В общем такие соли
можно получить взамиодействием свободной кислотной или основной форм этих агентов со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в их смеси.
Примеры
Специалисты в данной области техники знают, или могут определить с помощью соответствующих
примеров, многочисленные эквиваленты конкретных методов, вариантов изобретения, пунктов формулы
изобретения и примеров по данному описанию. Такие эквиваленты рассматриваются как входящие в
объем данного изобретения и охватываются прилагаемой Формулой изобретения. Содержание всех ссылок, опубликованных патентных заявок, цитированных на протяжении всего изобретения, вводится в
данное описание в качестве ссылки. Изобретение далее иллюстрируется нижеприведенным примером,
которые не следует рассматривать как ограничивающий.
Определение связывания и антифибриллогенных свойств.
Испытуемые соединения приобретены из промышленных источников или синтезированы и изучены методом масс-спектрометрии ("MS"). MS анализ дает данные о способности соединений связываться
с амилоидом.
Образцы для масс-спектрометрического ("MS") анализа готовят в виде водных растворов, содержащих 20% этанола, 200 мкМ испытуемого соединения и 20 мкМ солюбилизированного Aβ40. Значение
pH каждого образца доводят до 7,4 (±0,2) добавлением 0,1% водного раствора гидроксида натрия. Затем
растворы анализируют масс-спектрометрией с ионизацией электрораспылением на приборе Waters ZQ
4000.
Образцы вводят непосредственным вливанием при скорости потока 25 мкл/мин в течение 2 ч после
приготовления. Температуру в источнике поддерживают 70°С, а напряжение в конусе составляет
20 В во всех анализах. Данные обрабатывают с помощью программы Masslynx. MS анализом получают
данные о способности соединений связываться с растворимым Aβ, тогда как ThT, EM и CD анализы дают данные об ингибировании фибриллогенеза. Результаты анализа связывания с Aβ суммированы в
табл. 1: "+++" указывает на сильное (прочное) связывание; "++" указывает на умеренное связывание; "+"
указывает на слабое связывание; "+" указывает на отсутствие детектируемого связывания; и отсутствие
данных показывает, что они не определялись.
Также проводят УФ-спектрометрический анализ, и этот анализ показывает способность испытуемых соединений связываться с (фибриллярным) Aβ. Эксперименты проводят слепым методом. 20 мкг
тестируемого соединения инкубируют с 50 мкМ фибрилл Aβ(1-40) в течение 1 ч при 37°С в забуференном Tris физиологическом растворе (20 мМ Tris, 150 мМ NaCl, pH 7,4, содержащий 0,01 азида натрия).
После инкубации раствор центрифугируют в течение 20 мин при 21000 g для седиментации Aβ(1-40)
вместе с любым связанным тестируемым соединением. Количество тестируемого соединения, остающегося в супернатанте, определяют по оптической плотности (считывая оптическую плотность). Фракцию
(часть) связанного соединения затем рассчитывают, сравнивая количество, остающееся в супернатантах
продуктов инкубации с Aβ, с количеством, остающимся в контрольных "инкубациях", которые не содержат Aβ фибрилл. В качестве позитивного контроля в каждый анализ вводят тиофлавин Т и конго
- 52 -
012325
красный, о которых известно, что они связываются с Aβ фибриллами. Перед анализом тестируемые соединения разводят до 40 мкМ, это двойная концентрация по сравнению с концентрацией в последнем
тесте, а затем смотрят на UV VIS спектрофотометре Hewlett Packard 8453, чтобы выяснить, достаточна
ли оптическая плотность для определения.
Наблюдаемые синергистические эффекты комбинированной терапии у больных людей.
В данном примере легкобольных и больных средней тяжести лечат алкансульфоновой кислотой, а
именно, 3-амино-1-пропансульфоновой кислотой, в сочетании с другими терапевтическими соединениями, применяемыми для снижения симптомов, характерных для болезни Альцгеймера (например, утраты
когнитивной функции). Примеры включают применение алкансульфоновой кислоты в комбинации с соединениями, повышающими когнитивную функцию, такими как ингибиторы ацетилхолинэстеразы
("AChEi"). Определяют действие такой комбинированной терапии на изменение оценки по шкале ADAScog у больных.
Больных лечат тестируемой алкилсульфоновой кислотой в течение 9 месяцев. Группа пациентов
получает тестируемое соединение индивидуально, тогда как другую группу лечат тестируемым соединением в комбинации с AchEi, а именно, донепезилом.
Действие на ADAS-cog.
Перед началом исследования больных болезнью Альцгеймера делят на группы (категории) "легкие"
больные и больные "средней тяжести" по шкале MMSE ("Мини-исследование ментального статуса").
В.V. Rover, et al., "Mini-mental state exam in clinical practice." Hospital Practice 22(1A), 99 и послед. (1987).
(Согласно этому исследованию оценка по шкале MMSE в интервале 19-26 рассматривается как "легкое
заболевание", а оценка в интервале 13-18 рассматривается как "средней тяжести". Затем изменение ментальной функции этих пациентов анализируют, сравнивая оценки по шкале ADAS-Cog, которые регистрируют периодически в течение девятимесячного периода. За это время некоторые из пациентов получают тестируемую алкансульфокислоту, а другие получают алкансульфокислоту совместно с донепезилом, ингибитором ацетилхолинэстеразы. Среднее изменение оценки по шкале ADAS-Cog для каждой
группы пациентов сравнивают с известным стандартным изменением у аналогичных больных болезнью
Альцгеймера, которых лечили одним донепезилом. Стандартные и экспериментальные данные приведены в таблице, см. ниже, в зависимости от конкретной терапевтической схемы и популяции больных.
Позитивное изменение оценки по шкале ADAS-Cog отражает ухудшение когнитивной функции
"легкобольного AD"; стабилизация наблюдается при изменении ±1; а негативное изменение показывает
улучшение когнитивной функции. В медицинской литературе имеется прогноз, что пациенты с болезнью
Альцгеймера, не получающие никакого лечения имеют, в среднем, изменения оценки ADAS-Cog через
девять месяцев, варьирующиеся от +2,5 (для "легкобольных") до +5 (для больных "средней тяжести").
Так как результаты показывают, что пациенты, пролеченные одним тестируемым соединением,
имеют стабильную оценку по шкале ADAS-Cog (-0,5 в среднем, группа легкобольных и группа средней
тяжести для удобства рассматриваются вместе), и, следовательно, по-видимому, тестируемое соединение
ограничивает дальнейшее развитие заболевания в том, что касается когнитивной функции, у пациентов в
этой группе в течение периода испытания.
Известны количественные эффекты каждой схемы отдельного введения терапевтического препарата. Следовательно, аддитивный эффект для группы легкобольных плюс группа больных средней тяжести
вместе находится в пределах (+5 - +2,5)+(-0,5), что в результате по шкале ADAS-Cog дает ухудшение от
+2,0 до +4,5. Удивительно, но наблюдается обратный эффект. Эффект сопутствующего применения тестируемой алкансульфоновой кислоты с ингибитором ацетилхолинэстеразы приводит к улучшению когнитивной функции (-3,0), тогда прогнозировалось понижение функции. Эти результаты показывают
пример благоприятного воздействия комбинированной терапии на больных болезнью Альцгеймера.
Известно, что алкансульфоновая кислота, применяемая в исследовании, оказывает влияние на концентрацию Aβ в мозге. Мы также определили влияние тестируемого соединения на изменение уровней
Aβ пациентов с легкой и средней тяжести формой болезни Альцгеймера по сравнению с изменениями у
больных, пролеченных тройной комбинацией испытуемого соединения, AchEi и статина.
Пациентов, проходящих лечение испытуемым алкансульфоновым соединением в присутствии или в
отсутствие AchEi и статина, оценивают по концентрации в Aβ CSF во время 0 и 3 месяца после начала
лечения алкансульфоновой кислотой. Изменение концентрации Aβ CSF сравнивают с соответствующей
группой плацебо.
- 53 -
012325
У пациентов, пролеченных испытуемым соединением, наблюдается уменьшение концентрации Aβ
CSF на 34%. Ранее показано, что испытуемое соединение понижает уровни как растворимого, так и нерастворимого Aβ42 в мозге трансгенных мышей. Основываясь на исследованиях на мышах, предполагают, что испытуемое соединение способствует клиренсу Aβ из мозга и CSF до его отложения. Уменьшение концентрации Aβ CSF, наблюдаемое у пациентов, пролеченных испытуемым соединением, выше,
чем наблюдаемое в группе плацебо, где у пациентов наблюдается незначительное повышение 15% концентрации Aβ CSF. Этот результат говорит о разнице между двумя группами 49%. У пациентов в группе
тройной терапии (испытуемое соединение, AchEi и статин) наблюдается снижение уровней Aβ42 CSF на
31%, тогда как у пациентов, получавших AchEi и статин, наблюдается повышение уровней Aβ42 CSF на
45%. Эта тройная терапия оказывает более сильное влияние на изменение (-76%) концентрации Aβ42 CSF
по сравнению с соответствующим контролем.
Суммарно, по сравнению с соответствующей группой плацебо, комбинация испытуемого соединения, AchEi и статина оказывает более значительное влияние на концентрацию Aβ CSF, чем одно испытуемое соединение.
Методология.
CSF берут у больных до и после лечения испытуемым соединением в суточной дозе 100, 200 или
300 мг. CSF после лечения фракционируют с помощью FPLC муравьиной кислотой, а затем фракцию,
содержащую Aβ, лиофилизируют. Количество Aβ-пептида измеряют по методу ELISA (Biosource). Найдено, что композиция, содержащая испытуемую алкансульфоновую кислоту, снижает уровень Aβ в CSF,
когда пациентам дают суточные дозы 200 или 300 мг. У большинства пациентов, получающих плацебо
или суточные дозы 100 мг, наблюдаются стабильные уровни Aβ CSF в течение 3-месячного периода,
тогда как наибольшее снижение уровней Aβ наблюдается у пациентов, получающих суточные дозы 200
или 300 мг. Присутствие лекарственного вещества в цереброспинальной жидкости (ликвор) наводит на
мысль, что лекарственное вещество проникает через гематоэнцефалический барьер, чтобы проникнуть в
мозг. Присутствие алкансульфоновой кислоты в CSF определяют у пациентов, прошедших трехмесячный курс лечения. У этих пациентов CSF отбирают через пять часов после введения дозы, и уровни алкансульфоновой кислоты определяют с помощью LC-MS/MS. Найдено, что тестируемая алкансульфоновая кислота присутствует в CSF пациентов в зависимости от дозы, например, у пациентов, получающих
суточную дозу 200 или 300 мг, наблюдается более высокая концентрация, чем у пациентов, получающих
суточную дозу 100 мг.
Когнитивная функция при комбинированной терапии - алкансульфоновая кислота плюс ингибитор
ацетилхолинэстеразы.
Больные болезнью Альцгеймера в легкой форме и средней степени тяжести, получающие усилитель
когнитивных функций (Aricept™ или Exelon™), получают также суточные дозы испытуемого лекарственного препарата 300 мг алкансульфоновой кислоты в течение шести месяцев. Во время экспериментов
просматривалась медицинская литература, в которой указывается, что у пациентов, получающих ингибиторы AChE более двенадцати месяцев, следует ожидать снижения оценки когнитивных функций по
шкале ADAS-Cog в течение шестимесячного периода. Чтобы определить, сможет ли лекарственное вещество усилить или даже стабилизировать благотворное действие ингибиторов AChE, пациентам дают
как ACheE, так и тестируемое соединение в течение 6 месяцев. Хотя ожидалось, что когнитивные функции пациентов, получающих только ингибиторы AChE, будет неизбежно снижаться, исследование показало, что у пациентов, получающих сопутствующее лечение, наблюдается стабильные и улучшенные
оценки по шкале ADAS-Cog, как проиллюстрировано на диаграмме А прилагаемых фигур. Эти результаты показывают, что тестируемое лекарственное вещество, даваемое как сопутствующее при лечении ингибиторами AChE, способно сохранять и даже улучшать когнитивную функцию пациентов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ сопутствующей терапии для лечения заболевания, связанного с β-амилоидом, ингибирования нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной β-амилоидом, у субъекта, заключающийся во введении нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения или смеси соединений, имеющих по меньшей мере одну из следующих структур:
и их фармацевтически приемлемых солей и донепезила.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой 3-амино-1пропансульфоновую кислоту.
3. Способ по любому из пп.1-2, дополнительно включающий введение третьего агента, выбранного
из статинов.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение ингибирует, уменьшает или предупреждает образование амилоидных-β фибрилл.
- 54 -
012325
5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение повышает клиренс
амилоида-β из мозга.
6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение проникает в мозг.
7. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение сохраняет растворимый амилоид-β в нефибриллярной форме.
8. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный амилоид-β представляет собой
пептид, содержащий 39-43 аминокислоты.
9. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что заболевание, связанное с амилоидом-β,
представляет собой болезнь Альцгеймера или состояние, ассоциированное с болезнью Альцгеймера.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанное состояние, ассоциированное с болезнью Альцгеймера, представляет собой потерю памяти, тревогу или поведенческую дисфункцию.
11. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение и донепезил вводят
субъекту в качестве терапевтического или профилактического средства.
12. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение и донепезил вводят
субъекту перорально.
13. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение и донепезил вводят
субъекту одновременно.
14. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное соединение и донепезил при одновременном их присутствии в организме субъекта, действуют синергистически, уменьшая, подавляя
симптомы или ослабляя интенсивность симптомов или патогенез болезни Альцгеймера.
15. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что повседневная жизненная активность, ослабленная заболеванием, связанным с амилоидом-β, повышается или стабилизируется.
16. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что указанное соединение или донепезил ингибируют взаимодействие между амилоидогенным белком и гликопротеиновой или протеогликановой
составляющей основания мембраны, тем самым предупреждая или ингибируя отложение амилоида.
17. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что концентрация амилоида-β или -τ (белка) в
CSF указанного субъекта изменяется по сравнению с непролеченным субъектом.
18. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что у указанного субъекта наблюдается легкое
когнитивное нарушение.
19. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что когнитивная функция стабилизируется или
дальнейшее ухудшение когнитивной функции у указанного субъекта предупреждается, замедляется или
прекращается.
20. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что указанным субъектом является человек.
21. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с β-амилоидом, содержащая соединение или смесь соединений, имеющих по меньшей мере одну из следующих структур:
и их фармацевтически приемлемые соли и донепезил.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, отличающаяся тем, что указанное соединение представляет собой 3-амино-1-пропансульфоновую кислоту.
23. Фармацевтическая композиция по пп.21-22, дополнительно содержащая третий агент, выбранный из статинов.
24. Набор, содержащий соединение или смесь соединений, имеющих по меньшей мере одну из следующих структур:
и их фармацевтически приемлемые соли и донепезил, с инструкциями для применения.
25. Набор по п.24, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой 3-амино-1пропансульфоновую кислоту.
26. Применение соединения или смеси соединений, имеющих по меньшей мере одну из следующих
структур:
и их фармацевтически приемлемых солей и донепезила для лечения заболевания, связанного с βамилоидом, ингибирования нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной β-амилоидом.
27. Применение по п.26, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой 3-амино1-пропансульфоновую кислоту.
- 55 -
012325
График А
Изменения оценок по ADAS-Cog у больных легкой формой AD (от начала (базовая линия) до 9 месяцев)
Примеры изменений результатов ADAS-Cog исследования у больных легкой формой болезни
Альцгеймера, пролеченных в течение 9 месяцев испытуемым соединением в комбинации с донеперзилом
(Aricept™). Обнаружено, что у больных легкой формой болезни Альцгеймера при сочетании лечения
алкилсульфоновой кислотой с лечением AchEi результаты ADAS-Cog улучшаются или стабилизируются.
График изображает изменения (результатов) у отдельных пациентов (людей) после лечения в виде комбинированной терапии по данному описанию, осуществляемой в течение 3-9 месяцев.
Таблица 1
Относительная аффинность связывания соединений по изобретению
- 56 -
012325
- 57 -
012325
- 58 -
012325
- 59 -
012325
- 60 -
012325
- 61 -
012325
- 62 -
012325
- 63 -
012325
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
- 64 -