006688 Данное изобретение относится к новому биологически чистому штамму Streptococcus thermophilus

006688
Данное изобретение относится к новому биологически чистому штамму Streptococcus thermophilus
ssp. salivarius (CD8), депонированному 4 декабря 2001 в DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen
und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany, с инвентарным номером DSM 14 667 и к его потомкам и
мутантам.
Данное изобретение дополнительно относится к пищевым составам, лекарственным средствам и ветеринарным продуктам, содержащим указанный новый штамм CD8 в качестве активного ингредиента
(или в качестве одного из активных ингредиентов) и применению указанного штамма для приготовления
пищевых составов, лекарственных средств и ветеринарных продуктов для профилактики/лечения различных предупреждающих и предвещающих признаков потенциально патологических состояний или
явно очевидных патологий.
Что касается применения пищевых составов и лекарственных средств по данному изобретению для
людей, их профилактическое или, правильно говоря, целебное действие проявляется, главным образом,
против конкретных болезней печени, таких как стеатоз печени (жировая инфильтрация печени), в особенности неалкогольный стеатоз печени и печеночная энцефалопатия, против некоторых эндокринных и
метаболических болезней, таких как гиперинсулинемия, резистентность к инсулину и ожирение, и также
против инфантильных патологических состояний, таких как аутизм, дефицит внимания (ADD) и дефицит
внимания/гиперактивность (ADHD).
В случае животных ветеринарные продукты находят полезное применение для лечения печеночных
патологий и эндокринных и метаболических болезней.
Для краткости в дальнейшем данное описание будет касаться исключительно профилактики/лечения стеатоза печени (жировой инфильтрации печени) и неалкогольного стеатоза печени, также ввиду
особой профилактической и целебной эффективности пищевых составов и лекарственных средств по
данному изобретению в отношении указанных патологий.
Стеатоз печени (или жировая инфильтрация печени) определяется как избыточное накопление липидов в гепатоцитах, под «избыточным накоплением» подразумевается накопление липидов, превышающее нормальные 5% от веса печени. При макровезикулярном стеатозе печени крупные капельки
триглицеридов распирают гепатоциты, смещая их ядра по направлению к периферии клеток, как случается в адипоцитах. При микровезикулярном стеатозе печени маленькие капельки триглицеридов накапливаются в гепатоцитах, оставляя ядра в центральном положении, и гепатоциты затем приобретают вид,
напоминающий пену.
Стеатоз печени, который обычно вызывает ограниченное увеличение аминотрансфераз в сыворотке
(менее чем 4-кратный верхний предел нормы), достоверно идентифицируется методами визуализации,
такими как ультразвуковая эхография и компьютерная томография.
Неалкогольный стеатоз печени (часто называемый как неалкогольный стеатогепатит NASH) является клиническим синдромом стеатоза, сопровождающегося воспалением печени.
Это диагносцируется биопсией печени после того, как были исключены другие причины болезней
печени (например заражения вирусом гепатита В и вирусом гепатита С), и после того, как было с достоверностью исключено злоупотребление алкоголем (> 20 г/сутки). Как только такое злоупотребление исключено, следует принять во внимание следующие возможные этиологические факторы:
Диетические аномалии
ожирение
полное парентеральное питание
быстрая потеря веса тела
Лекарственные средства
эстрогены
кортикостероиды
амиодарон
Метаболические болезни
абеталипопротеинемия
гипобеталипопротеинемия
болезнь Вильсона
болезнь Вебера-Крисчена
липодистрофия конечностей
Хирургические альтерации
подвздошно-тощекишечный обходной
желудочно-кишечной системы
анастомоз
обширная резекция тонкой кишки гастропластика
Никакой конкретной причины неалкогольного стеатоза печени не известно. В последнее время типичный пациент, пораженный такой патологией, описан как субъект женского рода, тучный, с избытком
сахара в крови, что может быть вызвано диабетом. Кроме того, пациент может иметь избыток триглицеридов в крови и страдать от коронарной болезни, расстройств щитовидной железы или гипертензии. В
последнее время сообщалось, что пациенты, пораженные неалкогольным стеатозом печени, не всегда
соответствуют этой картине. Было проведено одно исследование субъектов и мужского, и женского рода,
которые не имели избыточного веса, не страдали диабетом и не имели избытка триглицеридов в крови.
Другая группа пациентов, которые были диагносцированы как имеющие неалкогольный стеатоз печени,
-1-
006688
содержала детей в возрасте между 9 и 16 годами. Большинство из них имели избыточный вес, но только
двое из тридцати страдали от диабета.
Не существует тестов крови, которые позволяли бы с достоверностью диагносцировать стеатоз и
неалкогольный стеатоз печени.
Повышенные уровни содержания аминотрансфераз (аспартат-транзаминазы AST и аланинтрансаминазы ALT), чего также может и не случиться, являются только биохимическими индикаторами,
однако, они являются общими для обеих патологий. Нормальные биохимические величины были обнаружены у патологически тучных индивидуумов, биопсия печени которых показала прогрессирующую
болезнь печени.
Однако отношение AST/ALT может быть применимо для того, чтобы отличить неалкогольный
стеатоз печени от алкогольного стеатоза печени, патологии, где глубокие анатомо-патологические изменения печени могут быть вызваны злоупотреблением алкоголем (этанолом). При алкогольном стеатозе
отношение AST/ALT обычно более чем 2, тогда как при неалкогольном стеатозе уровни ALT выше, чем
уровни AST.
В настоящее время не известно какого-либо конкретного лечения неалкогольного стеатоза печения,
которое встречало бы широкое одобрение. Очевидно, пациентам, которые являются тучными, страдают
диабетом и имеют повышенные величины триглицеридов в крови, рекомендуется снижать вес и держать
под контролем их диабет, придерживаясь низкокалорийной диеты с низким содержанием жира, а также
принимая инсулин или лекарственные средства для снижения содержания сахара в крови. Для исчерпывающего обзора патогенеза, клинических аспектов, диагностики и лечения NASH см. статью Sheth S.G.
et al., Non-alcoholic steatohepatitis, Ann. Intern. Med. 1997, 127-137, которая приобщена ссылкой к данному
описанию.
Отсутствие эффективного и общепринятого лечения представляет фактор риска, потому что, несмотря на то что невоспалительный стеатоз является доброкачественным состоянием, у от 10 до 50%
пациентов, пораженных неалкогольным стеатозом печени, развивается прогрессирующий фиброз, который, в свою очередь, дегенерирует до цирроза, одиннадцатой наиболее распространенной причины
смерти на Западе, например в Соединенных Штатах.
Поэтому ощущается необходимость иметь в распоряжении эффективное профилактическое/целебное средство для лечения стеатоза печени и, в частности, неалкогольного стеатоза печени, и
поэтому цель данного изобретения - сделать такое средство доступным.
Согласно изобретению указанное средство представляет новый биологически чистый штамм Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8), депонированный 4 декабря 2001 в DSMZ Deutsche Sammlung
von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany, с инвентарным № DSM 14667, и его
потомки и мутанты.
Изобретение также относится к композициям, которые содержат вышеуказанный штамм Streptococcus в качестве активного ингредиента, которые могут принимать форму и представлять активность пищевых продуктов или диетических добавок, или истинного лекарственного средства, или ветеринарных
продуктов как функцию поддерживающего или профилактического действия, или истинного терапевтического действия, которую композиции предназначены осуществлять в зависимости от конкретных
субъектов, для которых они предназначены.
Изобретение также включает применение указанного выше штамма для приготовления композиций, подходящих для профилактики/лечения печеночных, эндокринных и метаболических болезней, указанных ранее, или аутизма и ADD или ADHD, и способ профилактики/лечения на основе введения предпочтительно пероральным путем указанных композиций.
Хотя интерпретация механизмов, посредством которых новый штамм Streptococcus CD8 привносит
свое профилактическое/целебное действие, не является необходимой для понимания и практического
применения данного изобретения, теоретически можно допустить, что прогрессирование доброкачественного и неалкогольного стеатоза печени (NASH) ингибируется изменениями, вызываемыми Streptococcus в сигналах воспалительных цитокинов, путем улучшения функции эпителиального барьера и путем ингибирования транслокации других бактерий из кишечника. Эти механизмы не являются взаимоисключающими и, вероятно, что новый штамм Streptococcus наделен многочисленными активностями.
Композиции на основе молочнокислых бактерий, которые имеют защитное действие на кишечник,
известны, но композиции, которые могли бы подавлять или противодействовать доброкачественному
стеатозу печени или неалкогольному стеатозу печени, не известны.
Композиции по данному изобретению, которые содержат профилактически или терапевтически
эффективное количество Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) или его потомков или мутантов,
могут быть приготовлены как пищевые составы или диетические добавки, как лекарственные средства
или ветеринарные продукты, в которых указанный Streptococcus является единственным активным ингредиентом или смешан с одним или несколькими другими активными ингредиентами и/или одним или
несколькими фармакологически приемлемыми наполнителями. Выбор наполнителей и большинство
подходящих способов приготовления ввиду особой цели композиций находится в сфере действия обычных композиций в пищевой или фармацевтической технологии.
-2-
006688
Особенно предпочтительная композиция содержит штамм вышеуказанного Streptococcus CD8 и
штамм Lactobacillus brevis CD2. Последний депонирован при DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany, с инвентарным номером DSM 11988.
Указанная композиция может дополнительно содержать штамм, выбранный из группы, включающей Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus или их смеси.
Указанные композиции могут также содержать по меньшей мере один из следующих ингредиентов:
витамин Е, холин, урсодезоксихолевую кислоту, клофибрат, тиглитазон, гемфиброзил, бетаин, Nацетилцистеин, розиглитазон, основные аминокислоты, L-карнитин или низший алканил-L-карнитин или
их фармакологически приемлемые соли.
Предпочтительными (низший алканил)-L-карнитинами являются ацетил-, пропионил- и изовалерил-L-карнитин. Фармакологически приемлемыми солями L-карнитина являются фумарат и тартрат,
тогда как фармакологически приемлемыми солями алканил-L-карнитина являются хлорид, фумарат и
галактарат.
Композиции, подходящие для перорального введения, могут быть в форме разовой дозы, например
таблетки, капсулы и пакеты, или в форме порошков и гранул, или, в качестве варианта, в форме суспензий или эмульсий.
Таблетки и капсулы могут содержать связующие вещества, смазки, стабилизаторы, красящее вещество, разделяющие агенты и тому подобное. Таблетки могут быть покрыты с использованием хорошо
известных технологий.
Жидкие композиции могут быть в виде водных или масляных суспензий, например, в пищевых
маслах или могут быть приготовлены, когда требуется пользователю, путем растворения или суспендирования препарата в форме порошка или гранул в воде или других подходящих растворителях.
Эти жидкие композиции могут содержать суспендирующие агенты, эмульгаторы, консерванты и
тому подобное.
Предпочтительно, чтобы различные дозированные формы, указанные выше, содержали количество
Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8), достаточное для того, чтобы пользователь, соблюдающий
схему приема лекарственного средства, которой легко следовать, мог принять от 50 до 3600 миллиардов
бактерий штамма в сутки.
Далее будут описаны клинические исследования, к которым были привлечены пациенты с неалкогольным стеатозом печени. Диагноз неалкогольного стеатоза печени должен предусматривать исключение инфекции вирусом гепатита С (т.е. антитело к вирусу гепатита С) и инфекцию вирусом гепатита В
(поверхностные антигены гепатита В). Уровни содержания церулоплазмина и α-1-антитрипсина являются обычно нормальными у пациентов с неалкогольным стеатозом печени. Серологические аутоиммунные
параметры (антимитохондриальное антитело, антинуклеарное антитело, антигладкомышечное антитело,
антитело против микросом печени/почек) являются отрицательными у пациентов, пораженных неалкогольным стеатозом печени, за исключением некоторых пациентов, которые имеют низкий титр положительности антинуклеарного антитела (изменяющийся от 1:40 до 1:320).
Клиническое исследование 1.
Двадцать четыре пациента (десять мужчин и четырнадцать женщин, средний возраст 49±12 лет),
которые были диагносцированы как имеющие состояние неалкогольного стеатоза печени, на основе тестов совместимой сыворотки, демонстрирующих повышенные величины аланин-трансаминазы, были
привлечены к исследованию. Все пациенты получали в сутки 1800 миллиардов бактерий Streptococcus
thermophilus ssp. salivarius (CD8), лиофилизованных в форме гранул.
Биохимические параметры сыворотки, измерение веса тела и липидный профиль определяли на
момент начала исследования и после 3 месяцев лечения. Двенадцать пациентов из двадцати четырех
(50%) были тучными (>20% сверх идеального веса тела). Одиннадцать пациентов применяли перорально
гипогликемические средства и/или инсулин или имели глюкозные показатели при голодании >160 мг/дл.
Величины для усредненных сывороточных щелочной фосфатазы, аланин-трансаминазы (ALT) и
гамма-глутамил-транспептидазы (GGT) после трех месяцев терапии заметно снизились по отношению к
основным величинам в самом начале исследования (Т<0,01), как показано в следующей таблице, где величины выражены в международных ед./л.
Никаких значительных изменений не было обнаружено в триглицеридах, холестерине и весе тела.
Данные, приведенные в таблице, показывают, что лечение неалкогольного стеатоза печени Streptococcus
thermophilus ssp. salivarius (CD8) ведет к значительному улучшению по уровням щелочной фосфатазы,
-3-
006688
ALT и GGT, которые являются сывороточными ферментами, показательными для функций печени, таких как цитолиз и холестаз.
Клиническое исследование 2.
Пять пациентов были привлечены к этому исследованию: двое мужчин и три женщины, которые
имели повышенные уровни содержания аспартат-трансаминазы (AST) и аланин-трансаминазы (ALT) и
на которых была проведена биопсия печени, которая обнаружила состояние неалкогольного стеатоза
печени, который развился в течение шести месяцев, предшествующих их привлечению к исследованию.
Эти пациенты не показали признаков других хронических болезней печени и не принимали лекарственных средств для снижения уровня триглицеридов. В течение четырех месяцев каждый пациент получал в
сутки 1800 миллиардов бактерий следующих видов:
Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8),
Lactobacillus brevis (CD2),
Bifidobacterium infantis,
Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus casei,
Lactobacillus bulgaricus,
Lactobacillus acidophilus.
Каждый грамм композиции содержал
Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) - 150 миллиардов,
Lactobacillus brevis (CD2) - 10 миллиардов,
Bifidobacterium infantis - 100 миллиардов,
Lactobacillus plantarum - 10 миллиардов,
Lactobacillus casei - 10 миллиардов,
Lactobacillus bulgaricus - 30 миллиардов,
Lactobacillus acidophilus - 30 миллиардов.
Содержание в сыворотке AST и ALT измеряли при начале исследования и на шестнадцатой неделе.
Исследование было завершено всеми пятью пациентами без проявления каких-либо негативных реакций.
Результаты исследования представлены в следующей таблице, где результаты выражены в международных ед./л.
В этом исследовании не было обнаружено никаких изменений в липидном профиле (холестеринемия, триглицериды), подтверждая специфичность действия предшествующей композиции, содержащей
Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) в сочетании с другими молочнокислыми бактериями.
Композицию готовили так, чтобы проявить в сочетании свойства Streptococcus thermophilus ssp. salivarius
(CD8) с противовоспалительными свойствами других молочнокислых бактерий (например, Lactobacillus
brevis CD2, см. международную патентную заявку WO 99/42568).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Штамм бактерий Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667.
2. Композиция, содержащая штамм бактерий Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667.
3. Композиция по п.2, дополнительно содержащая штамм Lactobacillus brevis CD2 DSM № 11988.
4. Композиция по п.3, дополнительно содержащая штамм бактерий, выбранный из группы, включающей Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum,
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus или их смеси.
5. Композиция по пп.2-4, дополнительно содержащая по меньшей мере один из следующих ингредиентов: витамин Е, холин, урсодезоксихолевую кислоту, клофибрат, тиглитазон, гемфиброзил, бетаин,
N-ацетилцистеин, розиглитазон, основные аминокислоты, L-карнитин или низший алканил-L-карнитин
или их фармакологически приемлемые соли.
6. Применение штамма Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667 для приготовления пищевого
состава для профилактики/лечения неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации печени, печеночной энцефалопатии, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, ожирения, аутизма, дефицита
внимания и дефицита внимания/гиперактивности.
7. Применение штамма Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667 для приготовления лекарственного средства, которое может быть введено пероральным или энтеральным путем, для профилактики/лечения неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации печени, печеночной энцефалопатии,
резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, ожирения, аутизма, дефицита внимания и дефицита
внимания/гиперактивности.
-4-
006688
8. Применение штамма Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667 для приготовления ветеринарного продукта для профилактики/лечения неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации
печени, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии и ожирения.
9. Применение композиции по п.3 для приготовления пищевого состава для профилактики/лечения
неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации печени, печеночной энцефалопатии, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, ожирения, аутизма, дефицита внимания и дефицита внимания/гиперактивности.
10. Применение композиции по п.3 для приготовления лекарственного средства, которое может
быть введено пероральным или энтеральным путем, для профилактики/лечения неалкогольного стеатоза
печени, жировой инфильтрации печени, печеночной энцефалопатии, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, ожирения, аутизма, дефицита внимания и дефицита внимания/гиперактивности.
11. Применение композиции по п.3 для приготовления ветеринарного продукта для профилактики/лечения неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации печени, резистентности к инсулину,
гиперинсулинемии, ожирения.
12. Применение по пп.9-11, где композиция дополнительно содержит штаммы Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus или их смеси.
13. Применение по пп.6, 7, 9, 10, где пищевой состав или лекарственное средство содержит от 50 до
3600 миллиардов бактерий штамма Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667.
14. Способ профилактики/лечения неалкогольного стеатоза печени, жировой инфильтрации печени,
печеночной энцефалопатии, резистентности к инсулину, гиперинсулинемии, ожирения, аутизма, дефицита внимания и дефицита внимания/гиперактивности введением индивидууму, нуждающемуся в этом,
эффективного количества пищевого состава или лекарственного средства, содержащего штамм Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667.
15. Способ по п.14, где пищевой состав или лекарственное средство дополнительно содержит
штамм Lactobacillus brevis CD2 DSM № 11988.
16. Способ по п.15, где пищевой состав или лекарственное средство дополнительно содержит
штамм бактерий, выбранный из группы, включающей Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus или их смеси.
17. Способ по пп.14-16, где эффективное количество пищевого состава или лекарственного средства содержит 50-3600 биллионов бактерий штамма Streptococcus thermophilus CD8 DSM № 14667 в сутки.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2/6
-5-