Ãåíåòè÷åñêàÿ ñòðóêòóðà ïîïóëÿöèé
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ÑÅËÜÑÊÎÕÎÇßÉÑÒÂÅÍÍÀß ÁÈÎËÎÃÈß, 2015, òîì 50, ¹ 2, ñ. 198-207 Ãåíåòè÷åñêàÿ ñòðóêòóðà ïîïóëÿöèé ÓÄÊ 636.52/.58:575.17 doi: 10.15389/agrobiology.2015.2.198rus ÏÎËÈÌÎÐÔÈÇÌ ÃÅÍΠÃÎÐÌÎÍÀ ÐÎÑÒÀ, ÐÅÖÅÏÒÎÐÀ ÃÎÐÌÎÍÀ ÐÎÑÒÀ, ÏÐÎËÀÊÒÈÍÀ È ÐÅÖÅÏÒÎÐÀ ÏÐÎËÀÊÒÈÍÀ  ÑÂßÇÈ Ñ ßÈ×ÍÎÉ ÏÐÎÄÓÊÒÈÂÍÎÑÒÜÞ Ó ÊÓÐ ÏÎÐÎÄÛ ÏÎËÒÀÂÑÊÀß ÃËÈÍÈÑÒÀß Ð.À. ÊÓËÈÁÀÁÀ  îñíîâå ãåíîìíîé ñåëåêöèè ëåæèò èçó÷åíèå ïîëèìîðôèçìà öåëåâûõ ãåíîâ, àëëåëüíûå âàðèàíòû êîòîðûõ ñâÿçàíû ñ ïðîäóêòèâíûìè êà÷åñòâàìè æèâîòíûõ. Àëëåëüíûå âàðèàíòû ôóíêöèîíàëüíûõ ãåíîâ âîçíèêàþò â ðåçóëüòàòå ðàçëè÷íûõ ìîäèôèêàöèé íóêëåîòèäíîãî ñîñòàâà, òàêèõ êàê òî÷å÷íûå ìóòàöèè (îäíîíóêëåîòèäíûé ïîëèìîðôèçì, single nucleotide polymorphism — SNP), èíñåðöèè/äåëåöèè (indel) è ò.ä.  ëþáîì ñëó÷àå âûÿâëåíèå ïîëèìîðôèçìà è ïîñëåäóþùåå èçó÷åíèå åãî êîððåëÿöèè ñ ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè ñëóæàò îñíîâîé äàëüíåéøåé íàïðàâëåííîé ñåëåêöèè. Íàèáîëåå èíòåðåñåí ïîèñê ïîëèìîðôèçìà â ãåíàõ, êîòîðûå êîäèðóþò ðåãóëÿòîðíûå áåëêè, ó÷àñòâóþùèå â êîíòðîëå ðîñòà è äèôôåðåíöèðîâêè, â ÷àñòíîñòè ãîðìîíû.  ñâîþ î÷åðåäü, ôèçèîëîãè÷åñêèé ýôôåêò ëþáîãî ãîðìîíà íàïðÿìóþ çàâèñèò îò åãî ðåöåïòîðà, ÷òî îïðåäåëÿåò öåëåñîîáðàçíîñòü èçó÷åíèÿ ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ, êîäèðóþùèõ êàê ñàìè ãîðìîíû, òàê è èõ ðåöåïòîðû.  Óêðàèíå íå ïðîâîäèëîñü èññëåäîâàíèé ñâÿçè ìåæäó ïîëèìîðôèçìîì ïåðå÷èñëåííûõ ãåíîâ è ïðîäóêòèâíûìè êà÷åñòâàìè êóð îòå÷åñòâåííîé ñåëåêöèè, ÷òî âî ìíîãîì îïðåäåëÿåò àêòóàëüíîñòü è íîâèçíó âûïîëíåííîé ðàáîòû. Ïîïóëÿöèþ êóð ÿè÷íî-ìÿñíîé ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ (ëèíèÿ 14, n = 98, ëàáîðàòîðíûé âèâàðèé Ãîñóäàðñòâåííîé îïûòíîé ñòàíöèè ïòèöåâîäñòâà Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè àãðàðíûõ íàóê Óêðàèíû, Õàðüêîâñêàÿ îáë.) èçó÷èëè ïî ðàñïðåäåëåíèþ ÷àñòîò àëëåëåé è ãåíîòèïîâ ïî ëîêóñàì GH (ãîðìîí ðîñòà), GHR (ðåöåïòîð ãîðìîíà ðîñòà), PRL (ïðîëàêòèí) è PRLR (ðåöåïòîð ïðîëàêòèíà). Ïîëèìîðôèçì ãåíîâ îïðåäåëÿëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ àíàëèçà (ïîëèìîðôèçì äëèí ðåñòðèêöèîííûõ ôðàãìåíòîâ — PCR-RFLP, restriction fragment length polymorphism) è ïîñðåäñòâîì ñðàâíèòåëüíîãî àíàëèçà äëèí àìïëèôèöèðîâàííûõ ôðàãìåíòîâ ïðè èçó÷åíèè èíñåðöèè â ëîêóñå ïðîëàêòèíà. Ïîêàçàíî, ÷òî ãåíû ãîðìîíà ðîñòà, ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà è ïðîëàêòèíà â îïûòíîé ïîïóëÿöèè êóð ÿâëÿþòñÿ ïîëèìîðôíûìè. Ïî ãåíó ïðîëàêòèíà (PRL-AluI) ÷àñòîòà àëëåëÿ C ñîñòàâèëà 0,372; àëëåëÿ T — 0,628; ïî ãåíó ãîðìîíà ðîñòà (GH-MspI, 1-é èíòðîí) ÷àñòîòà àëëåëÿ A — 0,908; B — 0,020; C — 0,072; ïî ãåíó ãîðìîíà ðîñòà (GH-SacI, 4-é èíòðîí) ÷àñòîòà àëëåëÿ A — 0,036; B — 0,964; ïî ãåíó ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà (GHR-NspI) ÷àñòîòà àëëåëÿ A — 0,280; B — 0,720. Ïî âñåì èçó÷åííûì ïîëèìîðôíûì ëîêóñàì ïîïóëÿöèÿ êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ íàõîäèëàñü â ñîñòîÿíèè ãåíåòè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ ïî Õàðäè-Âàéíáåðãó. Ãåíû ïðîëàêòèíà (ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå) è ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà îêàçàëèñü ìîíîìîðôíûìè. Òàêæå áûëà èçó÷åíà ñâÿçü ðàçëè÷íûõ ãåíîòèïîâ ïî ïðîëàêòèíó, ãîðìîíó ðîñòà è ðåöåïòîðó ãîðìîíà ðîñòà ñ ïîêàçàòåëÿìè ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòè. Âûÿâëåíû äîñòîâåðíûå ðàçëè÷èÿ â ïîêàçàòåëÿõ ïðîäóêòèâíîñòè ó îñîáåé ñ ðàçíûìè ãåíîòèïàìè ïî ëîêóñàì ïðîëàêòèíà (PRL-AluI) è ãîðìîíà ðîñòà (GH-SacI). Òàê, ó êóð ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ÿè÷íàÿ ïðîäóêòèâíîñòü çà 12 íåä ïðåâûøàëà òàêîâóþ ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì TT-PRL è ðàâíÿëàñü ñîîòâåòñòâåííî 75,38±2,33 è 67,82±1,21 øò. (P < 0,01). Ó êóð ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ÿè÷íàÿ ïðîäóêòèâíîñòü çà 40 íåä ñîñòàâèëà 201,50±8,43; TT-PRL — 188,32±3,45 øò. Áûëè îáíàðóæåíû ðàçëè÷èÿ ïî ìàññå ÿéöà íà 30-þ íåä æèçíè — 54,80±1,44 ã ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ïðîòèâ 50,95±0,54 ã ó êóð ñ ãåíîòèïîì CT-PRL (P < 0,05).  òî æå âðåìÿ ãåòåðîçèãîòíûå îñîáè AB (SacI+/SacI−) ïî ãåíó ãîðìîíà ðîñòà õàðàêòåðèçîâàëèñü äîñòîâåðíî áîëüøåé ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ çà 12 íåä ïðîäóêòèâíîãî ïåðèîäà, ÷åì êóðû ñ ãåíîòèïîì BB (SacI−/SacI−) (72,00±1,67 ïðîòèâ 66,98±1,05 øò.). Òàêæå îòìå÷àëèñü ðàçëè÷èÿ ïî ìàññå ÿéöà íà 30-þ íåä æèçíè — 55,02±1,52 ã ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì AB ïðîòèâ 51,40±0,42 ã ó êóð ñ ãåíîòèïîì BB (P < 0,05). Êëþ÷åâûå ñëîâà: ÏÖÐ, ïîëèìîðôèçì, ÿè÷íàÿ ïðîäóêòèâíîñòü, ãîðìîí ðîñòà, ïðîëàêòèí, êóðû.  ñîâðåìåííîé ãåíåòèêå äîìàøíåé ïòèöû âñå áîëüøåå ðàñïðîñòðàíåíèå ïîëó÷àþò ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèå ìåòîäû. Áóäó÷è äî íåäàâíåãî âðåìåíè ñâîåîáðàçíîé ýêçîòèêîé, ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèå ìàðêåðû ñòàëè îáûäåííûì èíñòðóìåíòîì ïðè ãåíåòèêî-ñåëåêöèîííûõ èññëåäîâàíèÿõ (1). Ïîâñåìåñòíîå ðàñïðîñòðàíåíèå ÄÍÊ-òåõíîëîãèé ïîçâîëèëî ñîçäàòü ïðåäïîñûëêè äëÿ ïðîâåäåíèÿ ñåëåêöèè ïòèöû íà ïðèíöèïèàëüíî íîâîì 198 óðîâíå, ó÷èòûâàÿ âñå âîçìîæíîñòè, êîòîðûå ñîçäàþòñÿ ïðè íåïîñðåäñòâåííîé ðàáîòå ñ íàñëåäñòâåííûì ìàòåðèàëîì.  îñíîâå ãåíîìíîé ñåëåêöèè ëåæèò èçó÷åíèå ïîëèìîðôèçìà öåëåâûõ ãåíîâ, àëëåëüíûå âàðèàíòû êîòîðûõ ñâÿçàíû ñ ïðîäóêòèâíûìè êà÷åñòâàìè æèâîòíûõ. Àëëåëüíûå âàðèàíòû ôóíêöèîíàëüíûõ ãåíîâ âîçíèêàþò â ðåçóëüòàòå ðàçëè÷íûõ ìîäèôèêàöèé íóêëåîòèäíîãî ñîñòàâà, òàêèõ êàê òî÷å÷íûå ìóòàöèè (îäíîíóêëåîòèäíûé ïîëèìîðôèçì, single nucleotide polymorphism — SNP), èíñåðöèè/äåëåöèè (indel) è ò.ä.  ëþáîì ñëó÷àå âûÿâëåíèå ïîëèìîðôèçìà è ïîñëåäóþùåå èçó÷åíèå åãî ñâÿçè ñ ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè ñëóæàò îñíîâîé äàëüíåéøåé íàïðàâëåííîé ñåëåêöèè. Âñå âûøåèçëîæåííîå â ïîëíîé ìåðå îòíîñèòñÿ è ê ïòèöåâîäñòâó (1). Íàèáîëåå èíòåðåñåí ïîèñê ïîëèìîðôèçìà â ãåíàõ, ïðîäóêòû êîòîðûõ ó÷àñòâóþò â ðåãóëÿöèè ðàçëè÷íûõ ôóíêöèé, ïðåæäå âñåãî ñâÿçàííûõ ñ îáåñïå÷åíèåì ðîñòà è äèôôåðåíöèðîâêè (2). Ê òàêèì îáúåêòàì îòíîñÿòñÿ ãåíû, êîäèðóþùèå ðåãóëÿòîðíûå áåëêè, â ÷àñòíîñòè ãîðìîíû.  ñâîþ î÷åðåäü, ôèçèîëîãè÷åñêèé ýôôåêò ëþáîãî ãîðìîíà íàïðÿìóþ çàâèñèò îò åãî ðåöåïòîðà, ÷òî îïðåäåëÿåò öåëåñîîáðàçíîñòü èçó÷åíèÿ ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ, êîäèðóþùèõ êàê ñàìè ãîðìîíû, òàê è èõ ðåöåïòîðû. Ñ ýòîé òî÷êè çðåíèÿ â ãåíåòèêå ïòèöû â êà÷åñòâå îäíèõ èç íàèáîëåå ïåðñïåêòèâíûõ ãåíîâ-êàíäèäàòîâ äëÿ èçó÷åíèÿ ïîëèìîðôèçìà è ñâÿçè àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ñ ïðîäóêòèâíûìè êà÷åñòâàìè ïòèöû ðàññìàòðèâàþòñÿ ãåíû ãîðìîíà ðîñòà, ïðîëàêòèíà, à òàêæå èõ ðåöåïòîðîâ (3, 4). Ãîðìîí ðîñòà è ïðîëàêòèí îòíîñÿòñÿ ê êëàññó ïåïòèäíûõ ãîðìîíîâ ñ øèðîêèì ñïåêòðîì ðåãóëèðóåìûõ ôóíêöèé (5). Òàê, ãîðìîí ðîñòà ïðèíèìàåò íåïîñðåäñòâåííîå ó÷àñòèå â ðåãóëÿöèè ðîñòà è äèôôåðåíöèðîâêè ðàçëè÷íûõ òèïîâ òêàíåé îðãàíèçìà. Íàðÿäó ñ ýòèì ïðîëàêòèí ó ïòèö ïðèíèìàåò ó÷àñòèå â ðåãóëÿöèè ðåïðîäóêòèâíîãî öèêëà, áóäó÷è ñâîåîáðàçíûì èíèöèàòîðîì ïðîÿâëåíèÿ íàñèæèâàíèÿ (óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè ïëàçìàòè÷åñêîãî ïðîëàêòèíà ïðèâîäèò ê ïîñòåïåííîìó ñíèæåíèþ èíòåíñèâíîñòè, à çàòåì è ê ïîëíîìó ïðåêðàùåíèþ ÿéöåêëàäêè) (6, 7). Ãåí ãîðìîíà ðîñòà (GH), ðàñïîëîæåííûé â 27-é õðîìîñîìå, ñîäåðæèò 5 ýêçîíîâ, 4 èíòðîíà ïðè îáùåé äëèíå ∼ 4,35 ò.ï.í. Ïîêàçàíî íàëè÷èå ðàçëè÷íûõ SNP (G662A, T3094C, C3199T è ò.ä.) â ðàçíûõ ó÷àñòêàõ ãåíà (èíòðîíû, ýêçîíû è ò.ä.) (8). Âûÿâëåíà ñâÿçü àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ñ ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè (ÿè÷íàÿ è ìÿñíàÿ ïðîäóêòèâíîñòü) (9). Îòìå÷åíà ïîçèòèâíàÿ êîððåëÿöèÿ SacI+ àëëåëÿ (4-é èíòðîí) ñ ïîêàçàòåëÿìè ðåçèñòåíòíîñòè ê áîëåçíè Ìàðåêà, â ñâîþ î÷åðåäü MspI-ïîëèìîðôèçì â 1-ì èíòðîíå ñâÿçàí ñ ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ ïòèöû (10, 11). Ãåí ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà (GHR) ñîäåðæèò 10 ýêçîíîâ è 9 èíòðîíîâ, îáùàÿ äëèíà — ∼ 130,33 ò.ï.í., ðàñïîëîæåí â Z-õðîìîñîìå, ÷òî îïðåäåëÿåò åãî ãåìèçèãîòíîå ñîñòîÿíèå ó ñàìîê ïòèöû. Ïîêàçàíî íàëè÷èå íåñêîëüêèõ ðàçëè÷íûõ òèïîâ SNP (G565A, A1512T è ò.ä.), çàòðàãèâàþùèõ èíòðîííóþ è ýêçîííóþ ÷àñòè, à òàêæå íåòðàíñëèðóåìûå 5′- è 3′-ó÷àñòêè ãåíà (8, 12, 13). Âûÿâëåíà ñâÿçü àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ãåíà GHR ñ ïîêàçàòåëÿìè êà÷åñòâà ñêîðëóïû, æèâîé ìàññû, à òàêæå ñ êàðëèêîâîñòüþ êóð. Ãåí ïðîëàêòèíà (PRL) âêëþ÷àåò 5 ýêçîíîâ è 4 èíòðîíà, îáùàÿ äëèíà — ∼ 6,14 ò.ï.í., íàõîäèòñÿ âî 2-é õðîìîñîìå. Ïîêàçàí ïîëèìîðôèçì ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå ãåíà, à òàêæå íåñêîëüêî SNP (14, 15). Âûÿâëåíà ñâÿçü ðàçëè÷íûõ àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ãåíà ïðîëàêòèíà ñ ïîêàçàòåëÿìè ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòè ó êóð ðàçíûõ ïîðîä, ñ ïðîÿâëåíèåì íàñèæèâàíèÿ è ò.ä. Íàïðèìåð, íàëè÷èå èíñåðöèè ðàçìåðîì 24 ï.í. ïîëîæèòåëüíî êîððåëèðóåò ñ ïîâûøåííîé ÿéöåíîñêîñòüþ è îòðèöàòåëüíî — ñ ïðîÿâëåíèåì íàñèæèâàíèÿ (16).  ãåíå ïðîëàêòèíà îïèñàíà òðàíçèöèÿ 199 öèòîçèíà â òèìèí â ïîëîæåíèè −2402, óñòàíîâëåíà ïîëîæèòåëüíàÿ ñâÿçü ÿéöåíîñêîñòè ñ CC-ãåíîòèïîì (17).  öåëîì, ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå âàæíóþ ðîëü ïðîëàêòèíà â ðåãóëÿöèè ðåïðîäóêòèâíîãî öèêëà ïòèöû, ìîæíî îòìåòèòü îñîáûå ïåðñïåêòèâû èçó÷åíèÿ ïîëèìîðôèçìà ýòîãî ãåíà, â ïåðâóþ î÷åðåäü â ñâÿçè ñ ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ (18). Ãåí ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà (PRLR) ñîäåðæèò 12 ýêçîíîâ, 11 èíòðîíîâ, îáùàÿ äëèíà ñîñòàâëÿåò ∼ 20,89 ò.ï.í., ðàñïîëîæåí, êàê è ãåí ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà, â Z-õðîìîñîìå. Ïîêàçàíî íàëè÷èå SNP â ðàçëè÷íûõ ó÷àñòêàõ ãåíà è èõ ñâÿçü ñ ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè êóð. Òàê, àëëåëüíûé âàðèàíò BamHI+ ïî 5-ìó ýêçîíó ãåíà ïîëîæèòåëüíî êîððåëèðóåò ñ ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ (3).  Óêðàèíå íå ïðîâîäèëîñü èññëåäîâàíèé ñâÿçè ìåæäó ïîëèìîðôèçìîì ïåðå÷èñëåííûõ ãåíîâ è ïðîäóêòèâíûìè êà÷åñòâàìè êóð îòå÷åñòâåííîé ñåëåêöèè, ÷òî âî ìíîãîì îïðåäåëÿåò àêòóàëüíîñòü è íîâèçíó âûïîëíåííîé ðàáîòû. Èñõîäÿ èç âûøåèçëîæåííîãî, öåëü ïðåäñòàâëÿåìîé ðàáîòû çàêëþ÷àëàñü â èçó÷åíèè ãåíåòè÷åñêîé ñòðóêòóðû ïîïóëÿöèè ó êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ïî ëîêóñàì ãîðìîíà ðîñòà, ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà, ïðîëàêòèíà, ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà, à òàêæå â âûÿâëåíèè ñâÿçè ìåæäó àëëåëüíûìè âàðèàíòàìè ïåðå÷èñëåííûõ ãåíîâ è ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ. Ìåòîäèêà. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèé áûëà èñïîëüçîâàíà ïòèöà óêðàèíñêîé ñåëåêöèè — êóðû ÿè÷íî-ìÿñíûå ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ, ëèíèÿ 14 (n = 98), ñîäåðæàùèåñÿ â ëàáîðàòîðíîì âèâàðèè îïûòíîé ñòàíöèè. ÄÍÊ âûäåëÿëè èç îáðàçöîâ êðîâè, êîòîðûå îòáèðàëè èç ãðåáíÿ ñ ïîìîùüþ ñêàðèôèêàòîðà íà ñòåðèëüíóþ ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó. Êàæäûé îáðàçåö ïîäñóøèâàëè, ìàðêèðîâàëè è èíäèâèäóàëüíî óïàêîâûâàëè äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ êîíòàìèíàöèè. Ïðè âûäåëåíèè ÄÍÊ ïîëüçîâàëèñü êîììåð÷åñêèì íàáîðîì ðåàãåíòîâ «ÄÍÊ-ñîðá-» («ÀìïëèÑåíñ», Ðîññèÿ). Óñïåøíîå âûäåëåíèå íåîáõîäèìîé äëÿ àíàëèçà ÄÍÊ îöåíèâàëè ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîôîðåçà â 0,7 % àãàðîçíîì ãåëå (CSL-AG100, «Cleaver Scientific», Âåëèêîáðèòàíèÿ) ïðè 200 V â òå÷åíèå 5 ìèí. Ãåí ïðîëàêòèíà èçó÷àëè ïî äâóì ïîêàçàòåëÿì — íàëè÷èþ èíñåðöèè ðàçìåðîì 24 ï.í. â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå ãåíà (24 indel) è îäíîíóêëåîòèäíîìó ïîëèìîðôèçìó (òðàíçèöèÿ öèòîçèíà â òèìèí) â ïîëîæåíèè −2402 (C-2402T) (ýíäîíóêëåàçà ðåñòðèêöèè AluI).  ãåíå ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà îöåíèâàëè BamHI-ïîëèìîðôèçì â 5-ì ýêçîíå. Ãåí ãîðìîíà ðîñòà, êàê è â ñëó÷àå ïðîëàêòèíà, èññëåäîâàëè ïî äâóì ïîêàçàòåëÿì — MspI-ïîëèìîðôèçìó â 1-ì èíòðîíå è SacI-ïîëèìîðôèçìó â 4-ì èíòðîíå.  ãåíå ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà îïðåäåëÿëè òðàíçèöèþ öèòîçèíà â òèìèí â 5-ì èíòðîíå (ýíäîíóêëåàçà ðåñòðèêöèè NspI). Ïðè àìïëèôèêàöèè áûëè èñïîëüçîâàíû ñëåäóþùèå íóêëåîòèäíûå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ïðàéìåðîâ: äëÿ PRL (24 indel) — 5′-TTTAATATTGGTGGGTGAAGAGACA-3′ è 5′-ATGCCACTGATCCTCGAAAACTC-3′ (14); äëÿ PRL (C-2402T) — 5′-AGAGGCAGCCCAGGCATTTTAC-3′ è 5′CCTGGGTCTGGTTTGGAAATT-3′ (14); äëÿ GH (1-é èíòðîí) — 5′-ATCCCCAGGCAAACATCCTC-3′ è 5′-CCTCGACATCCAGCTCACAT-3′ (19); äëÿ GH (4-é èíòðîí) — 5′-CTAAAGGACCTGGAAGAAGGG-3′ è 5′-AACTTGTCGTAGGTGGGTCTG-3′ (11); äëÿ PRLR (5-é ýêçîí) — 5′-TTGTCTGCTTTGATTCATTTCC-3′ è 5′-TGCATTTCATTCTTCCCTTTTT-3′ (3); äëÿ GHR (5-é èíòðîí) — 5′-ACGAAAAGTGTTTCAGTGTTGA-3′ è 5′-TTTATCCCGTGTTCTCTTGACA-3′ (20). ÏÖÐ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ðåàãåíòîâ DreamTaq PCR Master Mix («Thermo Scientific», ÑØÀ) ñ ïîìîùüþ ïðîãðàììèðóåìîãî òåðìî200 öèêëåðà Òåðöèê («ÄÍÊ-òåõíîëîãèÿ», Ðîññèÿ) ïî ñîîòâåòñòâóþùèì ïðîãðàììàì: îäèí öèêë — äåíàòóðàöèÿ 5 ìèí ïðè 94 °Ñ; 35 öèêëîâ — äåíàòóðàöèÿ 45 ñ ïðè 94 °Ñ, îòæèã 45 ñ ïðè 54 °Ñ äëÿ PRL (24 indel), 62 °Ñ äëÿ PRL (C-2402T), 56 °Ñ äëÿ PRLR (5-é ýêçîí) è GH (4-é èíòðîí), 55 °Ñ äëÿ GH (1-é èíòðîí) è 60 °Ñ äëÿ GHR (5-é èíòðîí), ýëîíãàöèÿ 60 ñ ïðè 72 °Ñ; îäèí öèêë — ôèíàëüíàÿ ýëîíãàöèÿ 10 ìèí ïðè 72 °Ñ. Îáúåì ðåàêöèîííîé ñìåñè ñîñòàâëÿë 20 ìêë, êîíöåíòðàöèÿ ïðàéìåðîâ äëÿ êàæäîãî ëîêóñà — 0,2 ìêM. Îáðàáîòêó àìïëèôèöèðîâàííûõ ôðàãìåíòîâ ýíäîíóêëåàçàìè ðåñòðèêöèè ïðîâîäèëè ñîãëàñíî ïðèëàãàåìûì èíñòðóêöèÿì (FastDigest, «Thermo Scientific», ÑØÀ). Ïðîäóêòû ðåñòðèêöèè ðàçäåëÿëè â 1,5 % àãàðîçíîì ãåëå (CSL-AG100, «Cleaver Scientific», Âåëèêîáðèòàíèÿ) ïðè íàïðÿæåíèè 150 V â òå÷åíèå 40 ìèí. Âèçóàëèçàöèþ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì áðîìèñòîãî ýòèäèÿ â óëüòðàôèîëåòîâîì ñâåòå. Ðàçìåð ðåñòðèêöèîííûõ ôðàãìåíòîâ îïðåäåëÿëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ìàðêåðîâ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ Ì-50 è Ì-100 («ÈçîÃåí», Ðîññèÿ). Äëÿ ãåíîòèïèðîâàíèÿ îñîáåé ïî êàæäîìó èç ëîêóñîâ ñîïîñòàâëÿëè äëèíû ðåñòðèêöèîííûõ ôðàãìåíòîâ íà ýëåêòðîôîðåãðàììàõ. Íà îñíîâå ïîëó÷åííûõ äàííûõ ðàññ÷èòûâàëè ôàêòè÷åñêîå (O) è òåîðåòè÷åñêîå (E) ðàñïðåäåëåíèå ãåíîòèïîâ, ÷àñòîòû ãåíîòèïîâ è àëëåëåé, ñîîòâåòñòâèå ãåíåòè÷åñêîìó ðàâíîâåñèþ ïîïóëÿöèè ïî Õàðäè-Âàéíáåðãó ìåòîäîì χ2, ôàêòè÷åñêóþ (Ho) è òåîðåòè÷åñêóþ (He) ãåòåðîçèãîòíîñòü, îáùåå ÷èñëî àëëåëåé (Na), ýôôåêòèâíîå ÷èñëî àëëåëåé (ne), èíäåêñ ôèêñàöèè Ðàéòà (Fis) ñîãëàñíî îáùåïðèíÿòûì ìåòîäèêàì (21). Òàêæå ïðîâîäèëè ó÷åò ïîêàçàòåëåé ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòè êóð: En12 è En40 (egg number) — ÷èñëî ÿèö ñîîòâåòñòâåííî çà 12 è 40 íåä ïðîäóêòèâíîãî ïåðèîäà; Ew30 è Ew52 (egg weight) — ìàññà ÿéöà ñîîòâåòñòâåííî íà 30-é è 52-é íåä æèçíè. Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé îïðåäåëÿëè ñ èñïîëüçîâàíèåì t-êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà (22). Ðåçóëüòàòû. Èçâåñòíî, ÷òî â ëîêóñå PRL (24 indel) àëëåëü I ñîäåðæèò èíñåðöèþ ðàçìåðîì 24 ï.í., â òî âðåìÿ êàê àëëåëü D åå íå ñîäåðæèò. Ãåíîòèï II ïðåäñòàâëåí íà ýëåêòðîôîðåãðàììå ôðàãìåíòîì ðàçìåðîì 154 ï.í., DD — 130 ï.í., ID — 130 è 154 ï.í.  ñëó÷àå PRL (C-2402T) àëëåëü C èìååò òðè ñàéòà ðåñòðèêöèè äëÿ AluI (äâà ìîíîìîðôíûõ è îäèí ïîëèìîðôíûé), àëëåëü T — äâà. Ñëåäîâàòåëüíî, ãåíîòèï CC ïðåäñòàâëåí íà ýëåêòðîôîðåãðàììå íàáîðîì ôðàãìåíòîâ ðàçìåðîì 160, 144, 81 è 54 ï.í.; TT — 304, 81 è 54 ï.í.; CT — 304, 160, 144, 81 è 54 ï.í. Íàëè÷èå òîãî èëè èíîãî àëëåëÿ îïðåäåëÿåòñÿ ïðèñóòñòâèåì öèòîçèíà èëè òèìèíà â ñàéòå ðåñòðèêöèè. Ó ãåíà GH (1-é èíòðîí) âîçìîæíû òðè àëëåëÿ. Äëÿ àëëåëÿ A õàðàêòåðíî íàëè÷èå îäíîãî ñàéòà ðåñòðèêöèè, äëÿ àëëåëÿ B — äâóõ, C — òðåõ. Ãåíîòèï AA ïðåäñòàâëåí íà ýëåêòðîôîðåãðàììå ôðàãìåíòàìè ðàçìåðîì 539 è 237 ï.í., BB — 392, 237 è 147 ï.í., CC — 267, 237, 147 è 125 ï.í., AB — 539, 392, 237 è 147 ï.í., AC — 539, 267, 237, 147 è 125 ï.í., BC — 392, 267, 237, 147 è 125 ï.í. Ãåí GH (4-é èíòðîí) ñóùåñòâóåò â âèäå äâóõ àëëåëåé — A è B. Àëëåëü A íåñåò äâà ñàéòà ðåñòðèêöèè äëÿ SacI (ïîëèìîðôíûé è ìîíîìîðôíûé ñàéòû), àëëåëü B — îäèí (ìîíîìîðôíûé ñàéò). Ãåíîòèï AA ïðåäñòàâëåí ôðàãìåíòàìè ðåñòðèêöèè ðàçìåðîì 584, 440 è 144 ï.í.; BB — 1024 è 144 ï.í., AB — 1024, 584, 440 è 144 ï.í. Ó PRLR (5-é ýêçîí) èìååòñÿ àëëåëü A, êîòîðûé ñîäåðæèò îäèí ñàéò ðåñòðèêöèè äëÿ BamHI, è àëëåëü B, êîòîðûé åãî íå ñîäåðæèò. Ãåíîòèï A0 ïðåäñòàâëåí íà ýëåêòðîôîðåãðàììå ôðàãìåíòàìè ðàçìåðîì 195 è 55 ï.í., B0 — 250 ï.í. Ó ãåíà GHR (5-é èíòðîí) èìååòñÿ àëëåëü B ñ îäíèì ñàéòîì ðåñòðèêöèè äëÿ NspI è àëëåëü A, ó êîòîðîãî îí îòñóòñòâóåò. Ãåíîòèï A0 ïðåäñòàâëåí 201 íà ýëåêòðîôîðåãðàììå ôðàãìåíòîì ðàçìåðîì 750 ï.í., B0 — ôðàãìåíòàìè 200 è 550 ï.í. Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî â ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ëîêóñû ãåíà ãîðìîíà ðîñòà (ïî 1-ìó è 4-ìó èíòðîíàì), ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà è ïðîëàêòèíà (C-2402T) ïîëèìîðôíû, â òî âðåìÿ êàê 24 indel è ãåí ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà — ìîíîìîðôíû (ðèñ.). Ýëåêòðîôîðåãðàììà ïðîäóêòîâ àìïëèôèêàöèè ïðîìîòîðíîãî ó÷àñòêà ãåíà ïðîëàêòèíà PRL 24 indel, ïðîäóêòîâ ðåñòðèêöèè ôðàãìåíòà ãåíà ïðîëàêòèíà PRL C-2402T, 1-ãî èíòðîíà ãåíà ãîðìîíà ðîñòà GH, 4-ãî èíòðîíà ãåíà ãîðìîíà ðîñòà GH, 5-ãî ýêçîíà ãåíà ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà PRLR è 5-ãî èíòðîíà ãåíà ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà GHR â ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ: 1-10 — íîìåðà ëóíîê; Ì — ìàðêåð ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ (M-50, M-100, «ÈçîÃåí», Ðîññèÿ); II, ID, DD, CC, CT, TT, AA, AB, AC, BB, A0, B0 — ñîîòâåòñòâóþùèå ãåíîòèïû (âèâàðèé Ãîñóäàðñòâåííîé îïûòíîé ñòàíöèè ïòèöåâîäñòâà Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè àãðàðíûõ íàóê Óêðàèíû, Õàðüêîâñêàÿ îáë., 2013 ãîä).  ñëó÷àå ñ 24 indel â ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ íàáëþäàëè íàëè÷èå îñîáåé òîëüêî îäíîãî ãåíîòèïà DD (òî åñòü ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå ãåíà ëîêóñ ïðîëàêòèíà ìîíîìîðôåí). Ìîíîìîðôíûé õàðàêòåð ýòîãî ëîêóñà ðåçêî îòëè÷àåò êóð àíàëèçèðóåìîé ëèíèè îò ðàíåå èçó÷åííûõ îñîáåé èç ïîïóëÿöèé ïîðîä áîðêîâñêàÿ áàðâèñòàÿ è áåëûé ïëèìóòðîê (23). Ïî íàëè÷èþ îäíîíóêëåîòèäíîãî ïîëèìîðôèçìà â ïîëîæåíèè −2402 ãåíà ïðîëàêòèíà â ïîïóëÿöèè áûëè îáíàðóæåíû îñîáè âñåõ òðåõ âîçìîæíûõ ãåíîòèïîâ (ñì. ðèñ.). Ïî ðåçóëüòàòàì îöåíêè MspI-ïîëèìîðôèçìà â 1-ì èíòðîíå ãåíà 202 ãîðìîíà ðîñòà â èçó÷åííîé ïîïóëÿöèè êóð èìåëèñü îñîáè òðåõ (èç øåñòè âîçìîæíûõ) ãåíîòèïîâ — AA, AB è AC. Ãîìîçèãîòíûõ ïî àëëåëÿì B è C îñîáåé íå îáíàðóæèëè. Òàêæå â èçó÷åííîé ïîïóëÿöèè îòñóòñòâîâàëè îñîáè ñ ãåíîòèïîì BC.  ñâîþ î÷åðåäü, ïî SacI-ïîëèìîðôèçìó â 4-ì èíòðîíå ãåíà ãîðìîíà ðîñòà áûëè âûÿâëåíû îñîáè äâóõ ãåíîòèïîâ — AB (SacI+/SacI−) è BB (SacI−/SacI−). Îñîáåé ñ ãåíîòèïîì AA (SacI+/SacI+) â èññëåäóåìîé ïîïóëÿöèè ìû íå îáíàðóæèëè. Ó èçó÷åííûõ êóð ãåí, êîäèðóþùèé ðåöåïòîð ïðîëàêòèíà, áûë ïðåäñòàâëåí îäíèì âàðèàíòîì (A0) (BamHI-ïîëèìîðôèçì â 5-ì ýêçîíå). Êàê è â ñëó÷àå ñ ãåíîì ïðîëàêòèíà (24 indel), îí îêàçàëñÿ ìîíîìîðôíûì. Ïî ãåíó GHR â ïîïóëÿöèè èìåëèñü îñîáè äâóõ ãåíîòèïîâ — A0 è B0. Âñëåäñòâèå ãåìèçèãîòíîñòè ëîêóñîâ ïî ãåíàì PRLR è GHR ó ñàìîê ïòèöû ãåòåðîçèãîòû â ïîïóëÿöèè â îáîèõ ñëó÷àÿõ îòñóòñòâîâàëè (ñì. ðèñ.). Àíàëèç ôàêòè÷åñêîãî è òåîðåòè÷åñêîãî ðàñïðåäåëåíèé îñîáåé ðàçíûõ ãåíîòèïîâ (ïî âñåì èçó÷åííûì ëîêóñàì) â îïûòíîé ïîïóëÿöèè êóð íå âûÿâèë íàðóøåíèÿ ãåíåòè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè äàâëåíèÿ îòáîðà. Ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîïóëÿöèÿìè äðóãèõ ïîðîä êóð óêðàèíñêîé ñåëåêöèè (áåëûé ïëèìóòðîê, áîðêîâñêàÿ áàðâèñòàÿ) (23) â èçó÷åííîé íàìè ïîïóëÿöèè èìåëñÿ ðÿä ñóùåñòâåííûõ îñîáåííîñòåé. Òàê, äëÿ êóð ÿè÷íîãî íàïðàâëåíèÿ ïðîäóêòèâíîñòè (áîðêîâñêàÿ áàðâèñòàÿ) ïî ëîêóñó PRL õàðàêòåðíà âûñîêàÿ ÷àñòîòà àëëåëÿ I (ñîäåðæèò èíñåðöèþ), äëÿ êóð ìÿñîÿè÷íîãî íàïðàâëåíèÿ ïðîäóêòèâíîñòè (áåëûé ïëèìóòðîê) — àëëåëÿ D (íå ñîäåðæàùåãî èíñåðöèè), â òî âðåìÿ êàê â ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ óêàçàííûé ëîêóñ âîîáùå áûë ìîíîìîðôåí (òàáë. 1). 1. ×àñòîòà ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíîâ ïðîëàêòèíà (PRL), ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà (PRLR), ãîðìîíà ðîñòà (GH) è ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà (GHR) â ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ (âèâàðèé Ãîñóäàðñòâåííîé îïûòíîé ñòàíöèè ïòèöåâîäñòâà Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè àãðàðíûõ íàóê Óêðàèíû, Õàðüêîâñêàÿ îáë., 2013 ãîä) Ëîêóñ Ãåíîòèï, åãî ÷àñòîòà ×àñòîòà àëëåëåé PRL (24 indel) DD — 1 D—1 PRL (C-2402T) CC — 0,110; CT — 0,520; TT — 0,370 C — 0,372; T — 0,628 PRLR (5-é ýêçîí) A0 — 1 A —1 GH (1-é èíòðîí) AA — 0,820; AB — 0,040; AC — 0,140 A — 0,908; B — 0,020; C — 0,072 GH (4-é èíòðîí) AB — 0,070; BB — 0,930 A — 0,036; B — 0,964 GHR (5-é èíòðîí) A0 — 0,280; B0 – 0,720 A — 0,280; B — 0,720 Ï ð è ì å ÷ à í è å. Ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû ñ èñïîëüçîâàíèåì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ àíàëèçà (ïîëèìîðôèçì äëèí ðåñòðèêöèîííûõ ôðàãìåíòîâ — PCR-RFLP, restriction fragment length polymorphism) è ïîñðåäñòâîì ñðàâíèòåëüíîãî àíàëèçà äëèí àìïëèôèöèðîâàííûõ ôðàãìåíòîâ ïðè èçó÷åíèè èíñåðöèè â ëîêóñå ïðîëàêòèíà. Îïèñàíèå àëëåëåé è ãåíîòèïîâ ñì. â òåêñòå. Ïðè àíàëèçå MspI-ïîëèìîðôèçìà â 1-ì èíòðîíå ãåíà ãîðìîíà ðîñòà â èññëåäóåìîé ïîïóëÿöèè êóð áûë íàéäåí àëëåëü C â ãåòåðîçèãîòíîì ñîñòîÿíèè (AC), ïðè ýòîì åãî ÷àñòîòà ñîñòàâèëà 0,072. Ñëåäóåò îòìåòèòü òîò èíòåðåñíûé ôàêò, ÷òî êàê òàêîâîé àëëåëü C, ñîãëàñíî äàííûì ñïåöèàëüíîé ëèòåðàòóðû, ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ îòñóòñòâóåò â ïîïóëÿöèÿõ êîììåð÷åñêèõ ëèíèé, îäíàêî ïðèñóòñòâóåò ó íåêîòîðûõ àáîðèãåííûõ ïîðîä (19). Ïðè ýòîì àëëåëü C, êàê è â ïðåäñòàâëÿåìîé ðàáîòå, íàéäåí â ïîïóëÿöèÿõ êóð äðóãèõ ïîðîä óêðàèíñêîé ñåëåêöèè (áîðêîâñêàÿ áàðâèñòàÿ è áåëûé ïëèìóòðîê), â êîòîðûõ åãî ÷àñòîòà ñîñòàâëÿëà 0,17 (23). Àíàëèç íàáëþäàåìûõ è îæèäàåìûõ ðàñïðåäåëåíèé ãåíîòèïîâ â âûáîðêå â öåëîì ïîêàçàë íàëè÷èå íåêîòîðîãî ýêñöåññà ãåòåðîçèãîò ïî ëîêóñàì PRL (C-2402T) è GH (1-é èíòðîí) (òàáë. 2).  òî æå âðåìÿ ïî ëîêóñó GH (4-é èíòðîí) ïîêàçàòåëè, îòðàæàþùèå ôàêòè÷åñêóþ è òåîðåòè÷åñêóþ 203 ãåòåðîçèãîòíîñòü, ïðàêòè÷åñêè ñîâïàäàëè (ñîîòâåòñòâåííî 0,071 è 0,069). 2. Ïîïóëÿöèîííî-ãåíåòè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ïî èçó÷åííûì ëîêóñàì (âèâàðèé Ãîñóäàðñòâåííîé îïûòíîé ñòàíöèè ïòèöåâîäñòâà Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè àãðàðíûõ íàóê Óêðàèíû, Õàðüêîâñêàÿ îáë., 2013 ãîä) Ëîêóñ ãåíà Na Ho He Fis ne PRL (24 indel) 1 – – – – PRL (C-2402T, AluI) 2 0,520 0,467 1,876 −0,113 GH (1-é èíòðîí, MspI) 3 0,184 0,170 1,205 −0,082 GH (4-é èíòðîí, SacI) 2 0,071 0,069 1,074 −0,029 PRLR (5-é ýêçîí, BamHI) 1 – – – – GHR (NspI) 2 – – – – Ï ð è ì å ÷ à í è å. Na — îáùåå ÷èñëî àëëåëåé; Ho — ôàêòè÷åñêàÿ ãåòåðîçèãîòíîñòü; He — òåîðåòè÷åñêàÿ ãåòåðîçèãîòíîñòü; Fis — èíäåêñ ôèêñàöèè Ðàéòà; ne — ýôôåêòèâíîå ÷èñëî àëëåëåé. Ïðî÷åðê îçíà÷àåò, ÷òî ïîêàçàòåëü íå ìîæåò áûòü ðàññ÷èòàí èç-çà ìîíîìîðôíîñòè ëîêóñîâ (PRL 24 indel è PRLR) è ãåìèçèãîòíîñòè (GHR). Ðåçóëüòàòû ïîëó÷åíû ñ èñïîëüçîâàíèåì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ àíàëèçà (ïîëèìîðôèçì äëèí ðåñòðèêöèîííûõ ôðàãìåíòîâ — PCR-RFLP, restriction fragment length polymorphism) è ïîñðåäñòâîì ñðàâíèòåëüíîãî àíàëèçà äëèí àìïëèôèöèðîâàííûõ ôðàãìåíòîâ ïðè èçó÷åíèè èíñåðöèè â ëîêóñå ïðîëàêòèíà. Ñðåäè ïîëèìîðôíûõ ëîêóñîâ íàèáîëüøåå çíà÷åíèå ýôôåêòèâíîãî ÷èñëà àëëåëåé íàáëþäàëîñü ïî ãåíó ïðîëàêòèíà (C-2402T) (ne = 1,876); íàèìåíüøåå (ne = 1,074) — ãîðìîíà ðîñòà (SacI-ïîëèìîðôèçì). Òàêèì îáðàçîì, ñðåäè âñåõ èçó÷åííûõ ãåíîâ ëîêóñ ïðîëàêòèíà (C-2402T) õàðàêòåðèçîâàëñÿ ñàìûì âûñîêèì óðîâíåì ïîëèìîðôèçìà. Íàðÿäó ñ ãåíåòèêî-ïîïóëÿöèîííûìè èññëåäîâàíèÿìè ìû îöåíèëè ÿè÷íóþ ïðîäóêòèâíîñòü ó êóð ðàçíûõ ãåíîòèïîâ. 3. Ïðîäóêòèâíûå ïðèçíàêè ó êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ñ ðàçíûìè àëëåëüíûìè âàðèàíòàìè ãåíîâ ïðîëàêòèíà (PRL), ãîðìîíà ðîñòà (GH) è ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà (GHR) (âèâàðèé Ãîñóäàðñòâåííîé îïûòíîé ñòàíöèè ïòèöåâîäñòâà Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè àãðàðíûõ íàóê Óêðàèíû, Õàðüêîâñêàÿ îáë., 2013 ãîä) Ãåíîòèï En12, øò. Ïðîäóêòèâíûé ïðèçíàê En40, øò. Ew30, ã Ew52, ã PRL CC 75,38±2,33** 201,50±8,43 54,80±1,44* 58,57±1,86 192,29±3,09 50,95±0,54* 57,46±0,60 CT 67,04±1,34** 188,32±3,45 52,25±0,65 59,50±0,82 TT 67,82±1,21** GH (MspI) AA 67,53±1,05 191,01±2,65 51,63±0,42 58,34±0,57 AB 66,50±3,62 181,79±8,57 51,08±2,81 58,93±2,91 AC 63,00±4,40 171,50±26,05 51,27±2,34 58,94±1,33 GH (SacI) AB 72,00±1,67* 199,00±10,13 55,02±1,52* 58,80±1,13 187,56±2,83 51,40±0,42* 58,42±0,53 BB 66,98±1,05* GHR A0 65,58±2,38 186,91±6,36 52,28±0,99 58,35±0,76 B0 68,67±0,87 189,67±2,99 51,46±0,48 57,48±1,21 Ï ð è ì å ÷ à í è å. En12 è En40 — ÷èñëî ÿèö ñîîòâåòñòâåííî çà 12 è 40 íåä ïðîäóêòèâíîãî ïåðèîäà; Ew30 è Ew52 — ìàññà ÿéöà ñîîòâåòñòâåííî íà 30-þ è 52-þ íåä æèçíè; MspI, SacI — ýíäîíóêëåàçû ðåñòðèêöèè. Îïèñàíèå ãåíîòèïîâ ïî àëëåëüíûì âàðèàíòàì ñì. â òåêñòå. *, ** Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé ñîîòâåòñòâåííî Ð < 0,05 è Ð < 0,01.  ñâÿçè ñ ìîíîìîðôíûì õàðàêòåðîì ãåíà ïðîëàêòèíà ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå èçó÷åíèå ñâÿçè àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ñ ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè ó êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ áûëî íåâîçìîæíî. Ïðè ýòîì áëàãîäàðÿ íàëè÷èþ îäíîíóêëåîòèäíîãî ïîëèìîðôèçìà â ëîêóñå PRL (C-2402T) ïîêàçàíî, ÷òî ÿè÷íàÿ ïðîäóêòèâíîñòü çà 12 íåä ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ïðåâûøàëà òàêîâóþ ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì TT-PRL è ñîñòàâèëà ñîîòâåòñòâåííî 75,38±2,33 è 67,82±1,21 øò. (P < 0,01) (òàáë. 3). ßè÷íàÿ ïðîäóêòèâíîñòü çà 40 íåä ó êóð ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ðàâíÿëàñü 201,50±8,43; TT-PRL — 188,32±3,45 øò.; ýòè ðàçëè÷èÿ áûëè íåäîñòîâåðíûìè, ÷òî âî ìíîãîì îáóñëîâëåíî íåáîëüøèì ÷èñëîì îñîáåé ñ 204 ãåíîòèïîì CC-PRL (11 êóð) ïî ñðàâíåíèþ ñ TT-PRL (36 êóð). Äàííûå î ïîëîæèòåëüíîé ñâÿçè ãåíîòèïà CC-PRL ñ ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ ó êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ñîîòâåòñòâóþò ðåçóëüòàòàì, ïîëó÷åííûì íà ïîðîäàõ êóð çàðóáåæíîé ñåëåêöèè (14, 17). Òàêæå îòìå÷àëèñü ðàçëè÷èÿ ïî ìàññå ÿéöà íà 30-þ íåä æèçíè — 54,80±1,44 ã ó îñîáåé ñ ãåíîòèïîì CC-PRL ïðîòèâ 50,95±0,54 ã ó êóð ñ ãåíîòèïîì CT-PRL (P < 0,05) (ñì. òàáë. 3). Ïî ëîêóñó GH (MspI-ïîëèìîðôèçì â 1-ì èíòðîíå) çíà÷èòåëüíûõ ðàçëè÷èé ïî ïîêàçàòåëÿì ïðîäóêòèâíîñòè ìåæäó îñîáÿìè ðàçíûõ ãåíîòèïîâ âûÿâëåíî íå áûëî, ÷òî, âåðîÿòíî, ñâÿçàíî ñ îòñóòñòâèåì â ïîïóëÿöèè êóð ñ ãåíîòèïàìè BB-GH è CC-GH (ìû ñðàâíèâàëè ïðîäóêòèâíîñòü îñîáåé, ãîìîçèãîòíûõ è ãåòåðîçèãîòíûõ ïî àëëåëþ A) (ñì. òàáë. 3).  òî æå âðåìÿ áûëè ïîêàçàíû ðàçëè÷èÿ ïî ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòè ìåæäó îñîáÿìè ñ ðàçíûì ãåíîòèïîì âñëåäñòâèå SacI-ïîëèìîðôèçìà ãåíà GH. Òàê, ãåòåðîçèãîòíûå îñîáè AB (SacI+/SacI−) õàðàêòåðèçîâàëèñü áîëüøåé ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòüþ, ÷åì êóðû ñ ãåíîòèïîì BB (SacI−/SacI−). Òåíäåíöèÿ ê ïðåâûøåíèþ ïîêàçàòåëåé ó ãåòåðîçèãîòíûõ îñîáåé íàä òàêîâûìè ó ãîìîçèãîòíûõ ñîõðàíÿëàñü è â ñëó÷àå ñ ìàññîé ÿéöà íà 30-þ íåä æèçíè (ñì. òàáë. 3). Ïî ëîêóñó GHR ìû íå âûÿâèëè äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé â ïîêàçàòåëÿõ ÿè÷íîé ïðîäóêòèâíîñòè. Ëîêóñ PRLR, êàê è ïðîëàêòèíà (ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå), îêàçàëñÿ ìîíîìîðôíûì, ÷òî èñêëþ÷èëî âîçìîæíîñòü èçó÷åíèÿ ñâÿçè ìåæäó ãåíîòèïîì è ïðîäóêòèâíûìè ïðèçíàêàìè ó êóð. Èòàê, èçó÷åíà ãåíåòè÷åñêàÿ ñòðóêòóðà ïîïóëÿöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ïî ëîêóñàì ãåíîâ ãîðìîíà ðîñòà, ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà, ïðîëàêòèíà è ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà. Ïîêàçàíî, ÷òî ãåíû ãîðìîíà ðîñòà, ðåöåïòîðà ãîðìîíà ðîñòà è ïðîëàêòèíà â îïûòíîé ïîïóëÿöèè êóð ïîëèìîðôíû. Ïî âñåì èçó÷åííûì ïîëèìîðôíûì ëîêóñàì ïîïóëÿöèÿ êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ íàõîäèòñÿ â ñîñòîÿíèè ãåíåòè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ ïî Õàðäè-Âàéíáåðãó. Ãåíû ïðîëàêòèíà (ïî íàëè÷èþ èíñåðöèè â ïðîìîòîðíîì ó÷àñòêå) è ðåöåïòîðà ïðîëàêòèíà ìîíîìîðôíû. Ïîêàçàíà ïîëîæèòåëüíàÿ ñâÿçü ãåíîòèïîâ ïî ïðîëàêòèíó CC-PRL è ãîðìîíó ðîñòà AB-GH (SacI+/SacI−) ñ ÷èñëîì ÿèö çà 12 íåä ïðîäóêòèâíîãî ïåðèîäà è ìàññîé ÿéöà íà 30-þ íåä æèçíè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ìîæíî â äàëüíåéøåì èñïîëüçîâàòü äëÿ íàïðàâëåííîé ñåëåêöèè êóð ïîðîäû ïîëòàâñêàÿ ãëèíèñòàÿ ñ öåëüþ ïîëó÷åíèÿ ïîòîìñòâà îò æåëàòåëüíûõ ãåíîòèïîâ, ÷òî â ñî÷åòàíèè ñ êëàññè÷åñêèìè ñåëåêöèîííûìè ìåòîäàìè ïîçâîëèò ìàêñèìàëüíî ýôôåêòèâíî ðàñêðûòü ïðîäóêòèâíûé ïîòåíöèàë ïòèöû. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. 2. 3. 4. 5. 6. F u l t o n J.E. Molecular genetics in a modern poultry breeding organization. World’s Poultry Sci. J., 2008, 64: 171-176 (doi: 10.1017/S0043933907001778). E n a y a t i B., R a h i m i - M i a n j i G. Genomic growth hormone, growth hormone receptor and transforming growth factor β-3 gene polymorphism in breeder hens of Mazandaran native fowls. African J. Biotechnol., 2009, 8(14): 3154-3159. R a s h i d i H., R a h i m i - M i a n j i G., F a r h a d i A., G h o l i z a d e h M. Association of prolactin and prolactin receptor gene polymorphisms with economic traits in breeder hens of indigenous chickens of Mazandaran province. Iranian J. Biotechnol., 2012, 10(2): 129-135. 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Áîðêè, e-mail: romankx@rambler.ru Sel’skokhozyaistvennaya biologiya/Agricultural Biology, 2015, V. 50, ¹ 2, pp. 198-207 POLYMORPHISM OF GROWTH HORMONE, GROWTH HORMONE RECEPTOR, PROLACTIN AND PROLACTIN RECEPTOR GENES IN CONNECTION WITH EGG PRODUCTION IN POLTAVA CLAY CHICKEN R.A. Kulibaba State Poultry Research Station, National Academy of Agrarian Sciences of Ukraine, Borky, Zmiiv Region, Kharkiv Province, 63421 Ukraine, e-mail romankx@rambler.ru Received June 16, 2014 doi: 10.15389/agrobiology.2015.2.198eng 206 Abstract The molecular assisted selection in animals is based on polymorphism study of desired gene alleles related to economic important traits, particularly productivity parameters. Allelic variants can be a result of different modification of DNA nucleotide composition, i.e. spot mutations leading to a single nucleotide polymorphism (SNP), insertions and deletions (indel), etc. Anyway, targeted selection necessitates detecting gene polymorphism and estimating its relationship with productivity. The genes encoding proteins which are involved in the growth and development regulation, such as hormones, are considered the most perspective and attractive candidates. So far as the physiological effect of any hormone is known to be directly related to its receptor, it is advisable to study gene polymorphism of both hormones and their receptors. In the Ukraine the relationship between polymorphism of the genes mentioned hereinabove and hen performance was not still studied. Therefore these stipulate the relevance and novelty of our investigation presented in the paper. The genetic structure of Poltava Clay chicken egg-and-meat breed (line 14, n = 98, laboratory population of State Poultry Research Station of the National Academy of Agrarian Sciences of Ukraine) was studied on growth hormone (GH), growth hormone receptor (GHR), prolactin (PRL) and prolactin receptor genes (PRLR). Gene polymorphism was determined by PCR-RFLP analysis and by comparative analysis of amplified fragment length when studying insertion in the prolactin locus. The growth hormone, growth hormone receptor and prolactin genes were polymorphic. The frequencies obtained were as follows: 0.372 and 0.628 for alleles C and T (PRL-AluI), respectively, in GH-MspI (intron 1) 0.908 for alleles A, 0.020 for B, 0.072 for C; in GH-SacI (the intron 4) 0.036 for A, 0.964 for B; in GHR-NspI 0.280 for A, 0.720 for B. The prolactin gene (24 indel) and prolactin receptor gene were monomorphic. The relationship of different genotypes of prolactin, growth hormone, and growth hormone receptor genes with egg productivity was studied. All studied polymorphic loci were in Hardy-Weinberg equilibrium in population of Poltava clay chicken breed. It is shown the significant differences in the productivity of individuals of different genotypes for the loci of prolactin (PRL-AluI) and growth hormone (GH-SacI). The egg production for 12 weeks in the individuals with genotype CC-PRL exceeded that in the individuals with genotype TT-PRL and amounted to 75.38±2.33 and 67.82±1.21, respectively (P < 0.01). Egg production for 40 weeks in the chickens with genotype CC-PRL reached 201.50±8.43, and in TT-PRL hens it was 188.32±3.45. The egg weight at 30th week of life was 54.80±1.44 g in the individuals with CC-PRL genotype against 50.95±0.54 g in the individuals with CT-PRL genotype (P < 0.05). At the same time the heterozygous individuals with genotype AB (SacI +/SacI−) on growth hormone gene were characterized by a significantly higher egg production during 12 week productive period compared to chickens with genotype BB (SacI−/SacI−), particularly 72.00±1.67 against 66.98±1.05. Also the differences were shown in the egg weight at the 30th week of life. Its value reached 55.02±1.52 g in the individuals with genotype AB while in hens with genotype BB it was 51.40±0.42 g (P < 0.05). Keywords: PCR, polymorphism, egg production, growth hormone, prolactin, chicken. Ðåäàêöèÿ æóðíàëà «Ñåëüñêîõîçÿéñòâåííàÿ áèîëîãèÿ» âûïîëíÿåò ðàññûëêó ýëåêòðîííûõ îòòèñêîâ îïóáëèêîâàííûõ ñòàòåé Äëÿ ïîëó÷åíèÿ ýëåêòðîííîãî îòòèñêà Âàì íåîáõîäèìî: îòîñëàòü òî÷íîå îïèñàíèå çàêàçà (àâòîðû è íàçâàíèå ñòàòüè, ãîä, íîìåð æóðíàëà, ñòðàíèöû) ïî àäðåñó felami@mail.ru, óêàçàâ Âàøè ôàìèëèþ, èìÿ, îò÷åñòâî (ïîëíîñòüþ), ãîðîä, ãäå ïðîæèâàåòå, êîíòàêòíûå e-mail è òåëåôîí; ïîëó÷èòü èç ðåäàêöèè ïî ñâîåìó e-mail ïîäòâåðæäåíèå çàêàçà (ñ ïðèñâîåííûì åìó íîìåðîì); îïëàòèòü óñëóãó, óêàçàâ â ïëàòåæíîì äîêóìåíòå â ãðàôå «Íàçíà÷åíèå ïëàòåæà» ïðèñâîåííûé çàêàçó íîìåð è Âàøè ôàìèëèþ, èìÿ, îò÷åñòâî. Îòòèñêè âûñûëàþòñÿ íà Âàø êîíòàêòíûé e-mail ïîñëå çà÷èñëåíèÿ îïëàòû íà ñ÷åò ðåäàêöèè. Áàíêîâñêèå ðåêâèçèòû ðåäàêöèè: Ïîëó÷àòåëü: Áàíê ïîëó÷àòåëÿ: ÈÍÍ 7708051012 Ðåäàêöèÿ æóðíàëà «Ñåëüñêîõîçÿéñòâåííàÿ áèîëîãèÿ», Ìàðüèíîðîùèíñêîå ÎÑÁ 7981, ã. Ìîñêâà, ð/ñ 40703810638050100603 Ñáåðáàíê Ðîññèè ÎÀÎ ã. Ìîñêâà, ÁÈÊ 044525225, ê/ñ 30101810400000000225  íàçíà÷åíèè ïëàòåæà óêàæèòå íîìåð çàêàçà, Âàøè ôàìèëèþ, èìÿ, îò÷åñòâî. Ñòîèìîñòü óñëóãè: îäèí îòòèñê — 120 ðóá., íå áîëåå øåñòè îòòèñêîâ (àáîíåìåíò) — 360 ðóá., íå áîëåå äâåíàäöàòè îòòèñêîâ (àáîíåìåíò) — 700 ðóá. ÍÄÑ íå îáëàãàåòñÿ. Àáîíåìåíò ïðåäïîëàãàåò ïðåäîñòàâëåíèå îòòèñêîâ çà òåêóùèé ãîä ïî ïðåäîïëàòå. E-mail äëÿ çàêàçà ýëåêòðîííûõ îòòèñêîâ — felami@mail.ru © Ýëåêòðîííûå îòòèñêè ÿâëÿþòñÿ èíòåëëåêòóàëüíîé ñîáñòâåííîñòüþ ðåäàêöèè æóðíàëà «Ñåëüñêîõîçÿéòâåííàÿ áèîëîãèÿ». Âíåñåíèå â íèõ êàêèõ áû òî íè áûëî èçìåíåíèé è äîïîëíåíèé íå äîïóñêàåòñÿ. Ïåðåïå÷àòêà, òèðàæèðîâàíèå, ðàçìåùåíèå â ñðåäñòâàõ èíôîðìàöèè, â òîì ÷èñëå ýëåêòðîííûõ è ñåòè Èíòåðíåò, à òàêæå êîììåð÷åñêîå ðàñïðîñòðàíåíèå âîçìîæíû òîëüêî ñ ðàçðåøåíèÿ ðåäàêöèè. 207
