ВАЛОВ Сергей Дмитриевич НЕЙРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
реклама
На правах рукописи ВАЛОВ Сергей Дмитриевич НЕЙРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕГУЛЯЦИИ ПРОЛИФЕРАЦИИ, РОСТА И ЦИТОДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЖЕЛЕЗИСТЫХ ЭПИТЕЛИЕВ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА 03.00.25 Гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Томск - 2004 Работа выполнена в ГОУ ВПО "Оренбургская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации " Научный консультант Доктор биологических наук, Заслуженный работник высшей школы Российской федерации, профессор Стадников Александр Абрамович Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Суходоло Ирина Владимировна Доктор медицинских наук, профессор Семченко Валерий Васильевич Доктор медицинских наук, профессор Агафонов Владимир Иванович Ведущая организация Новосибирская государственная медицинская академия. Защита с о с т о и т с я 2 0 0 4 г . в часов н а заседании диссертационного совета Д . 096. 03 при Сибирском государственном медицинском университете по адресу: 634050, Томск, Московский тракт, 2, зал заседаний диссертационного совета. С диссертацией можно ознакомиться в государственного медицинского университета Автореферат разослан « Ученый секретарь диссертационного совета » 2 библиотеке 0 0 Сибирского 4 г . Герасимов А.В. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В биологии тканей ключевой проблемой является раскрытие закономерностей гисто- и морфогенеза органов животных и человека, а также факторов, определяющих их проявления (А.Г.Кнорре, 1971; А.А.Заварзин, 1976; М.Зуссман, 1977; С.И.Щелкунов, 1977; В.П.Михайлов, Г.С.Катинас, 1984; Н.Н.Кочетов, 1986, 1991; В.Д.Новиков, 1999). Одними из наиболее важных факторов, определяющих и поддерживающих тканевой гомеостаз, обеспечиващих процессы адаптации висцеральных систем, являются медиаторы вегетативной нервной системы (Д.А.Сахаров, 1974, 1979; Г.А.Бузников, 1979; Дж. Бернсток, М. Коста, 1979; В.И.Скок и др., 1987) и гипоталамические нейропептиды (АЛ.Поленов, 1979,1980,1983; Б.В.Алёшин, 1979,1987; И.Г.Акмаев, 1979, 1992, 1997; А.А.Стадников, 1989, 1999, 2001). Анализ фундаментальных работ, касающихся изучения нейрогуморальной регуляции процессов клеточной репродукции, роста и дифференцировки (на примере эндокринных желёз), показал существенное значение гипоталамических нонапептидов и моноаминов в реализации тканями своих гисто- и органотипических потенций. Однако, ряд вопросов этой сложной проблемы до настоящего времени остаётся недостаточно изученным. Прежде всего это касается выяснения механизмов нейроэндокринного контроля пролиферации и роста эпителиоцитов неэндокринных тканей, избирательного' прямого действия этих регуляторных факторов на процессы репаративных гистогенезов. Требуют также новых доказательств выдвинутые в концептуальном плане представления о немаловажной роли гипоталамических нонапептидов (окситоцина, вазопрессина) в осуществлении тканями различного генеза своих гисто- и органотипических возможностей. Они в полной мере могут быть сопоставлены с известными утверждениями гистофизиологов об охранительно-тормозном влиянии на функции висцеральных органов окситоцина и вазопрессина, наблюдаемом особенно в стрессорных ситуациях (А.А.Поленов, 1983; Е.А.Черниговская и др., 1988; Е.Д.Бажанова и др., 1996; В.В.Кузик, Д.М.Макина, 2003). Изучение механизмов регуляции морфогенеза и> регенерации пищеварительных желёз в последние годы привлекает большое внимание исследователей (I. Dardick et al., 1990; U.Ahlgren et al., 1996; S.K.Kim et al.,2001; H.R.Berthoud et al.,2002; D.S.Dichmann et al.,2002; H.Bilal et al.,2003). Тем не менее до настоящего времени остаются недостаточно изученными нейрогуморальные факторы и механизмы их регуляторных влияний на процессы, которые лежат в основе детерминации, гистогенезов, дифференцировки и интеграции клеточных и тканевых структур пищеварительных желёз различного гистогенетического происхождения. Экзокринные клетки околоушной и поджелудочной железы являются 3 удобными объектами для выяснения общих закономерностей пролиферации, роста, цитодифференцировки клеточных элементов и определения границ компенсаторно - приспособительных и регенераторных возможностей, реализуемых при стрессорных воздействиях. Сравнительная структурно-функциональная характеристика эпителиев секреторного аппарата ротовой полости и поджелудочной железы даёт возможность аргументированно подойти к анализу генетической детерминированности клеток и тканей (Н.Г.Хлопин, 1946). Эволюция секреторного аппарата ротовой полости и экзокринного эпителия поджелудочной железы протекала в тесной связи с их функциями, которые отражали взаимоотношение организмов с внешней средой, что является выражением адаптации организмов к условиям существования и, в частности, к различным условиям питания и обработки пищевых веществ (Е.Ш.Герловин, 1978). Однако, в связи со спецификой условий функционирования и с особенностями их генетической детерминации, филогистогенез этих двух типов желёз существенно отличается друг от друга. Так, секреторный эпителий ротовой полости подвергся значительной прогрессивной эволюции, тогда как экзокринный эпителий поджелудочной железы характеризуется большей стабильностью у позвоночных (А.Н.Северцов,1939; И.И.Шмальгаузен,1946). Анализ причин и механизмов этого явления представляет интерес для изучения влияния факторов внешней среды на гистогенез тканей. Таким образом, исследование нейроэндокринной регуляции процессов гистогенеза, репаративной регенерации, диапазона компенсаторных и приспособительных возможностей секреторных эпителиев экзокринных желёз млекопитающих является перспективным, важным направлением современной гистологии и клеточной биологии. Настоящее исследование входит в комплексный план научноисследовательской работы Оренбургской государственной медицинской академии (номер государственной регистрации 01.9.50 006155). Цель исследования. Установить роль и значение гипоталамических нонапептидов, нейромедиаторов и моноаминов в регуляции процессов пролиферации, роста и цитодифференцировки железистого эпителия различного генетического происхождения (околоушная и поджелудочная железы). Задачи исследования: 1. Определить характер реализации своих гисто- и органотипических свойств, реактивных и компенсаторных возможностей эпителиями околоушной и поджелудочной желёз с параллельным установлением коррелятивных связей с состоянием органной адрен- и холинергической медиации и гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы у экспериментальных животных в условиях эмоционально-болевого стресса. 2. Уточнить и конкретизировать закономерности тканевых превращений эпителиев околоушной и поджелудочной желёз в условиях 4 их культивирования в организме по методу Ф.МЛазаренко и в диффузионных камерах. 3. Выяснить роль и значимость нейромедиаторов (дофамина, норадреналина, ацетилхолина) и гипоталамических нейрогормонов в регуляции репаративных гистогенезов эпителиев околоушной и поджелудочной желёз в условиях культивирования тканей in vivo. 4. Установить значение нонапептидергических нейросекреторных центров гипоталамуса в реализации железистым эпителием различного генеза своих гисто- и органотипических возможностей путем совместного культивирования данных эпителиев с супраоптическими или паравентрикулярными ядрами гипоталамуса in vivo по Ф.МЛазаренко и в диффузионных камерах. 5. Определить прямое влияние нейромедиаторов и гипоталамических нонапептидов на объём адаптационных и регенераторных возможностей J эпителиев околоушной и поджелудочной желёз в условиях их культивирования in vivo и in vitro. Научная новизна работы. Определена степень адаптивного участия нейроэндокринной и периферической нейротрансмиттерной систем в поддержании тканевого гомеостаза пищеварительных желёз, в обеспечении процессов компенсации нарушенных функций при стрессорных реакциях организма по критериям ультраструктурного и гистоавторадиографического анализа. Получены дополнительные сведения об органоспецифических особенностях эпителио-соединительнотканных взаимоотношений, детерминационных свойствах тканей околоушной и поджелудочной желёз в условиях их культивирования в организме по методу Ф.М. Лазаренко и в диффузионных камерах. Впервые определено существенное значение нонапептидергических нейросекреторных центров гипоталамуса в реализации железистым эпителием различного происхождения (эктодермального - околоушная железа) и (энтодермального - поджелудочная железа) своих гисто- и органотипических свойств. Получены новые данные о важном значении нейромедиаторов (дофамина, норадреналина, ацетилхолина) и гипоталамических нейрогормонов (окситоцина, вазопрессина) в регуляции репаративных гистогенезов тканей исследованных желёз. Определена дифференцированная и разнонаправленная роль гипоталамических нонапептидов и медиаторов симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы в регуляции процессов репаративных гистогенезов, дедифференцировки, репродукции, пролиферации, роста и дифференцировки секреторных эпителиев пищеварительных желёз, а также обосновано положение о стойкой детерминированности их тканеспецифических свойств. Сформулировано положение о том, что гуморальные факторы нонапептидергических ядер гимоталамуса являются регуляторами дедифференцировки дефинитивного железистого эпителия экто- и 5 энтодермальных желёз, стимуляторами их клеточной репродукции. Данные факторы стимулируют реализацию железистыми структурами околоушной и поджелудочной желёз своих гистобластичсских потенций и могут трактоваться как феномен дивергентного морфогенеза. Теоретическое и практическое значение работы. Полученные результаты дополняют современные представления об особенностях гистофизиологии и репаративной регенерации околоушной и поджелудочной желёз. Прослеженные эффекты субклеточной, клеточной и тканевой реорганизации в различных по происхождению пищеварительных желёзах на воздействие окситоцина, вазопрессина и нейромедиаторов создают основу для более глубокого понимания роли нонапептидов и нейромедиаторов симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы как межуровневых морфогенстических факторов в регуляции гистогенезов и морфофункциональных цитодифференцировок. Эти данные вносят существенный вклад в развитие учения о биологии тканей. В своей совокупности результаты работы открывают перспективы для последующего изучения прямого влияния гипоталамических нонапептидов и нейромедиаторов на процессы гибели, переживания, пролиферации, роста и цитодифференцировки клеток различных органов и тканей, в том числе и для обоснования возможного их применения в клинической практике как стимуляторов репаративной регенерации, а также обоснования методов коррекции патологических состояний в стоматологии, гастроэнтерологии. Использование разработанного способа воздействия на процессы пролиферации и функциональной специализации железистых эпителиев при культивировании in vivo и in vitro повысит эффективность научных исследований в работе экспериментальных гистологических лабораторий, в том числе и для решения частных вопросов трансплантологии. Внедрение. Результаты работы используются в учебном процессе на лекциях и практических занятиях со студентами на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии Оренбургской государственной медицинской академии; на кафедре анатомии и гистологии Оренбургского государственного аграрного университета; на кафедре анатомии, физиологии человека и животных Оренбургского государственного педагогического университета; в проведении экспериментальных исследований в лаборатории функциональной морфологии клетки института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, в проблемной научноисследовательской лаборатории "Нейроэндокринная регуляция взаимодействий про- и эукариот" Оренбургского филиала ЮУНЦ РАМН. Основные положения выносимые на защиту. 1. Характер реализации гисто- и органотипических свойств, реактивных и компенсаторных возможностей эпителия околоушной и поджелудочной желёз при действии стрессорных факторов определяется и реализуется адекватным состоянием гипоталамо-гипофизарной нейроэндокринной систем и соответствующим уровнем органной адрен- и 6 холинергической медиации. 2. Гистологический и цитологический анализ участия нейроэндокринной и периферической нейротрансмиттерной систем в поддержании тканевого гомеостаза пищеварительных желёз, в обеспечении процессов адаптации и компенсации нарушенных функций при стрсссорных реакциях организма. 3. Факторы нонапептидергических нейросекреторных центров гипоталамуса, являются существенными в реализации железистым эпителием различного происхождения эктодермального (околоушная железа) и энтодермального (поджелудочная железа) своих гисто- и органотипических возможностей проявившихся, в условиях их культивирования с супраоптическими или паравентрикулярными ядрами гипоталамуса in vivo по методу Ф.М.Лазаренко и в диффузионных камерах. 4. Нейромедиаторы (дофамин, норадреналин, ацетилхолин) и гипоталамические нейрогормоны (окситоцин, вазопрессин) регулируют проявления элементарных процессов репаративных гистогенезов структур околоушной и поджелудочной желёз при их органотипическом культивировании в организме и вне организма. 5. Нейрогормоны, содержащиеся в крупноклеточных ядрах гипоталамуса, изученные нейротрансмиттеры являются важными факторами, которые создают оптимальные условия для осуществления гистотипической и функциональной дифференцировки, не изменяя тканевой генетической детерминации аденощггов исследованных желёз. Апробация работы. Материалы работы доложены на II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), на научно-практической конференции морфологов Тюменской области "Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте" (Тюмень, 1996), на научном совещании морфологов, посвящённом 100-летию со дня рождения Н.Г.Хлопина "Гистогенетический анализ изменчивости и регенерации тканей" (С.Петербург, 1997), на Российской научной конференции "Вопросы оперативной микрохирургии и микрохирургической анатомии" (Оренбург, 1997), на Всероссийской научной конференции, посвященной 70-летию со дна рождения проф. П.В.Дунаева "Закономерности морфогенеза и регуляции тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях" (Тюмень, 1998), на IV Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Нижний Новгород, 1998), на IV съезде Российских морфологов с международным участием (Ижевск, 1999), на научной конференции, посвящённой 80летию со дня рождения проф. С.С.Михайлова (Москва, 1999), на научном совещании, посвященном 125-летию со дня рождения проф. А.А.Максимова (С.-Петербург, 1999), на V Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Ульяновск, 2000), на международной конференции "Структурные преобразования органов и тканей на этапах 7 онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов" (Астрахань, 2000), на 3-ем международном симпозиуме "Современные проблемы нейробиологии" (Саранск, 2001), на международной научной конференции "Экология и здоровье в XXI веке" (Ульяновск, 2001), на международной научной конференции, "Актуальные вопросы морфологии и хирургии XXI века" (Оренбург,2001), на научной конференции "Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей" (С.Петербург, 2001), на VI Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Уфа, 2002), на Всероссийской конференции, посвященной 150-летию со дня рождения чл.- корр. РАН, проф. А.С.Догеля "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии" (Томск, 2002), на Международной конференции "Нейроэндокринология 2003" (С.-Петербург, 2003), на Всероссийской научной гистологической конференщш "Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях", посвящённой памяти чл. - корр. АМН СССР, проф. Ф.М.Лазаренко (Оренбург, 2003). Публикации. По теме диссертации опубликовано 35 работ, из них 7 статей, оформлено 1 рационализаторское предложение. Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 349 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 147 рисунками и 17 таблицами. Список литературы включает 313 источников, в том числе зарубежных 127. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектами исследований служили околоушная и поджелудочная железы, крупноклеточные ядра гипоталамуса и нейрогипофизы 759 белых беспородных половозрелых крыс-самцов. Моделирование эмоционально-болевого стресса проводили на 45 беспородных крысах-самцах массой 180- 230 г. по методике O.Desiderato et al. (1974). В специальной камере животных подвергали воздействию тока силой 4 мА, избежать которого животные могли только путем ухода на платформу, расположенную в центре камеры. Это приводило к выработке условного рефлекса избегания, проявлявшегося в постоянном нахождении крыс на платформе. Последующее нанесение коротких сильных ударов тока (6 мА в течении 2 секунд) через пол платформы сопровождалось формированием стрессорной реакции у животных, обусловленной как наличием конфликта между выработанным условным рефлексом избегания и безусловным болевым раздражителем, так и постоянным напряженным ожиданием электроболсвого раздражения. В 8 камере животные находились 5 часов. Материал для исследования брали после завершения стрессорных воздействий через 1,2,3,5,6,7,8,10,14,15 суток. У 50 аналогичных крысах воспроизводился длительный эмоционально-болевой стресс (ежедневное 5-часовое стрессирование на протяжении 15 суток). Околоушная, поджелудочная железы, гипоталамус и нейрогипофиз исследовали через 1,2,3,5,6,7,10,13,14,15 суток эксперимента. Контролем служили 10 интактных крыс такой же массы, содержащихся в обычных условиях вивария. Предварительное электролитическое разрушение гшготаламических структур (А.А.Стадников, А.Н.Варламов, 1982) с последующим помещением лабораторных животных в камеры для моделирования эмоционально-болевого стресса было выполнено на 80 аналогичных животных (40 крысам были разрушены паравентрикулярные и 40 животным - супраоптические ядра гипоталамуса). Материал для исследования забирался через 1,2,3,5,7,10,13,15 суток эксперимента. Контролем служили ложно-оперированные животные (24 крысы). С использованием классического метода культивирования тканей in vivo по Ф.М.Лазаренко (1959) изучались закономерности имплантационных превращений тканевых структур выбранных желёз, как при культивировании только фрагментов желёз (30 животных) [36 имплантатов], так и в сериях экспериментов по совместному культивированию тканей околоушной и поджелудочной желёз с фрагментами гипоталамуса, содержащими супраоптические (СО) (30 животных) [36 имплантатов] или паравентрикулярные (ПВ) ядра. (30 животных) [36 имплантатов]. У животных реципиентов накануне имплантации производили электрическое разрушение соответствующих ядер гипоталамуса. При совместном культивировании с ядрами гипоталамуса использовали также материал, взятый от крыс доноров, предварительно находившихся в условиях длительного эмоциональноболевого стресса (30 животных) [36 имплантатов]. Взятие материала у крыс-доноров производился после их 00 00 умерщвления под эфирным рауш-наркозом в утренние часы (8 -9 ). Ночной период суток проходил без кормления животных. Выделенный материал помещался в стерильную чашку Петри с охлажденной (+40° С) питательной средой 199. Отпрепарированные фрагменты органов помещались в другую стерильную чашку Петри, со свежей порцией аналогичной охлажденной средой с антибиотиком (стрептомицин) в разведении 1: 50000 ед в 1 мл. Указанная доза препарата не влияет на результаты такого рода эксперимента (З.С.Хлыстова, 1959), но предотвращает имплантаты от инфицирования. Полученный материал измельчался острым лезвием до объёма 0,5 мм 3 и смешивался с целлоидиновым "песком" в соотношении 1 : 2 . Крысам - реципиентам под эфирным наркозом с соблюдением правил асептики и антисептики, под кожу передней брюшной стенки на поверхность мышцы живота производили имплантацию полученной смеси. В сериях опытов по совместному культивированию околоушной и 9 поджелудочной желез с ядрами гипоталамуса к имплантированному материалу добавлялись соответствующие фрагменты гипоталамуса. Выделение крупноклеточных нейросекреторных ядер гипоталамуса производились при помощи микроскопа МБС-9 при использовании стереотаксических карт (Я.Буреш и др.,1962). Гипоталамус разрезался фронтально, ориентируясь по перекресту зрительных нервов. Затем глазными ножницами клиновидно вырезались небольшие фрагменты в области залегания СО и ПВ ядер. Для контроля на каждую стадию опыта вместо участков гипоталамуса помещались фрагменты лобных долей конечного мозга тех же крыс-доноров. Для оценки правильности выделения пгаоталамических ядер проводился выборочный гистологический анализ взятого для трансплантации материала и оставшихся после выделения ядер частей гипоталамуса. Проведены серии опытов по исследованию экзогенного введения в область имплантатов нейромедиаторов (дофамин, адреналин, норадреналин, ацетилхолин) (90 животных) [108 имплантатов], гипоталамических нонапептидов (окситоцин) (30 животных) [36 имплантатов]. Дофамин вводился в дозе 0,2x10-4 мг, адреналин гидрохлорид в дозе 5х10 -8 мг, норадреналин гидротартрат в дозе 0,1х10-5 мг, ацетилхолин хлорид в дозе 25х10-9 мг, окситоцин 0,5Х10" 5 ME на массу культивируемого материала (5 мг) согласно рекомендациям И.П.Западнюка и др. (1983) и М.Д.Машковского (1972). В каждой серии опытов взятие материала осуществляли через 1,3, 6, 8, 10, 15 суток от начала имплантации. Органотипическое культивирование in vivo околоушной и поджелудочной желёз в диффузионных камерах (ДК) проведено на 240 крысах. ДК изготавливались из полихлорвиниловых капсул на основе модификации методов G. Algire et al. (1954), Т.П.Евгеньевой (1983,1994), Э.И.Дедкова (1995,1996). Наша модификация ДК (С.Д.Валов, 1998) использовалась в настоящей работе на основе рацпредложения N1241, вьданного 23.10.98 г. Оренбургской государственной медицинской академией. При этом применялись миллипоровые фильтры фирмы "Synpor" с величиной пор 0,3 мкм. В полость камеры помещались 3-4 3 фрагмента околоушной или поджелудочной желез (размером по 3 мм ). Камера закрывалась плотно с двух сторон крышками с фильтрами. Крысам-реципиентам под эфирным наркозом с соблюдением правил асептики и антисептики производили подкожную имплантащпо по две диффузионной камеры. Совместное культивирование эпителия околоушной и поджелудочной желез с фрагментами гипоталамуса, содержащих СО или ПВ ядра, проводили в двойных диффузионных камерах. Опыты выполнены на 60 крысах (72 имплантата). Выделение ядер гипоталамуса производили выше указанным способом. Двойные диффузионные камеры представляют собой два цилиндра меньшего диаметра плотно входящих в цилиндр большего диаметра, изготовленных из полихлорвинила. Между цилиндрами меньшего диаметра прокладывается миллипоровый фильтр. 10 В одну ID, разделенных фильтром полостей камеры, помещают 3-4 фрагмента околоушной или поджелудочной желёз в другую фрагменты гипоталамуса, содержащие либо СО, либо ПВ ядра. После закладки материала камера закрывается плотно крышками с фильтрами. Для контроля на каждую стадию опыта монтировали двойную ДК, в которую вместо участков гипоталамуса помещались фрагменты коры больших полушарий тех же крыс-доноров При совместном культивировании с ядрами гипоталамуса использовали также материал, взятый от крыс доноров, предварительно находившихся в условиях длительного эмоционально-болевого стресса (30 животных) [36 имплантатов]. Были проведены серии экспериментов по изучению экзогенного введения в область имплантированных камер нейромедиаторов (дофамин, адреналин, норадреналин, ацетилхолин) (90 животных) [108 имплантатов], гшюталамических нонапептидов (окситоцин) (30 животных) [36 имплантатов]. Дофамин вводился в дозе 0,2x10-4 мг, адреналин гидрохлорид в дозе 5x10-8 мг, норадреналин гидротартрат в дозе 0,1x10"5 мг, ацетилхолин хлорид в дозе 25х10-9 мг, окситоцин 0,5x l0-5 ME на массу (5 мг) культивируемого материала. Во всех сериях опытов крысамреципиентам под эфирным наркозом в область передней брюшной стенки производилась подкожная имплантация по 2 ДК. Материал забирался во всех сериях опытов через 1,3,6, 8, 10, 15 суток от начала имплантации. Для изучения прямого влияния нейромедиаторов и гипоталамических нонапептидов на адаптационные и регенераторные возможности тканей околоушной и поджелудочной желез использовали органотипические культуры in vitro (10 животных) [10 эксплантатов] и с экзогенным добавлением в культуральную среду (2-х и 4-х суточные культуры) дофамина, адреналина, норадреналина, ацетилхолина, окситоцина, вазопрессина (60 животных) [50 эксплантатов]. Согласно рекомендациям Б.Н.Вепринцева (1976), А.С.Трошина (1984), В.П.Божковой и др. (1988) эксплантаты размером 1 мм 3 в стерильных условиях помещались во флаконы на миллгаторовые пленки 0,3 mk фирмы "Synpor" в питательную среду, состоящей из среды 199 с 20% бычьей эмбриональной сывороткой, аденозина, гуанозина, уридина, цитидина по 0,6 мг/мл, глюкозы 1 мг/мл, инсулина 0,24 ЕД/мл (Р.Адамс,1983) и антибиотиков. Культивировали материал при постоянном вращении флаконов со скоростью 1/3 оборота в минуту с последующим ежедневным 2-3 разовым введением фармакологических препаратов. Расчет дозы препарата проводился на массу культивируемого материала (4-5 мг.). Дофамин применялся в дозе однократного введения -4 -8 0,2x10 мг, адреналина гидрохлорид в дозе 5Х10 мг, норадреналин в -5 дозе 0,1x10 мг, ацетилхолина хлорид в дозе 25 х 10-9 мг, окситоцин (Oxytocin synth.) в дозе 0,5 х 10-5 ME, вазопрессин (ORN Vasopressin, Sandos, Швейцария) в дозе 0,5 х 10-5 IЕ. Культуры тканей изучены через 2, 4 суток от начала эксперимента. В работе использован комплекс методов: гистохимических исследований, гистоавторадиографии, световой, люминесцентной и 11 электронной микроскопии, морфометрии. Светооптическое исследование. Полученный материал фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина, спирт-формоле, жидкости Буэна. Парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм окрашивали: гематоксилином Майера и эозином, гликоген и нейтральные гликопротеиды выявляли перйодат ШИФФ реакцией по Мак-Манусу (Э.Пирс, 1962). В целях дифференциального анализа гликогена и нейтральных полисахаридов срезы обрабатывали амилазой слюны при +37° С в течении 30 минут. Для подтверждения нейтральной природы ШИК - позитивных веществ проводили обработку срезов фенилгидразином (Э.Пирс,1962). Нуклеиновые кислоты выявляли метиленовым зеленым и пиронином по методу Браше (Э.Пирс, 1962). Контрольные срезы инкубировали в растворе кристаллической рибонуклеазы (концентрация 1 мг/мл в течение 2 часов при температуре +37° С) (Э.Пирс, 1962 ). Суммарный белок в срезах выявляли по Даниэлли (Э.Пирс, 1962). Ферменты ацетилхолинэстеразу (АХЭ), сукцинатдегидрогеназу (СДГ), кислую фосфатазу (КФ) определяли в свежезамороженных срезах исследованных объектов в соответствии с методиками MJ.Karnovsky, L.A.Roots (1964), M.M.Nachlas, A.M.Seligman (1960),G. Gomori (1939). Катехоламины выявляли с помощью люминесцентной микроскопии. Свежезамороженный материал обрабатывали по методике B.N.Falck, (1962). О качественном составе и количественной характеристике уровня катехоламинов в срезах судили визуально и по показаниям люминесцентной спектрофотометрической насадки (ФМЭЛ1А), смонтированной на микроскопе фирмы "Carl Zeiss Jena", при выходном напряжении 900 V, сопротивлении усилителя - 10б ом. В насадке был установлен зонд 0,5. Спектральный диапазон исследования объектов составлял 480-520 нм, об.20,40, ок. 10. Показания снимали с усилителя и выражали в условных единицах измерения шкалы вольтметра. Светооптическая авторадиография. ДНК-синтезирующую способность эпителиальных клеток околоушной и поджелудочной желез изучена с помощью радиактивного тимидина (Н3), вводимого внутрибрюшинно однократно за 1 час до 7 взятия материала у экспериментальных животных из расчета 3,7 х 10 Бк на 1 г массы тела животного. При культивировании тканей околоушной и поджелудочной желез in vitro тимидин (Н3) вводился однократно за 1 час до взятия материала непосредственно в культуральную среду. Интенсивность белкового синтеза в эпителиоцитах и фибробластах изучена с помощью радиактивного лейцина (Н3), вводимого внутрибрюшинно однократно за 1 час до взятия материала го расчета 26 х 10 7 Бк на 1 г массы тела животного. При культивировании тканей желез in vitro лейцин (Н3) вводился однократно за 1 час до взятия материала непосредственно в культуральную среду. При приготовлении гистоавтографов использовали жидкие 12 эмульсии типа "М" и "Р" по методике, предложенной Л.Н.Жинкиным (1959). Эмульсию экспонировали соответственно ее типу 2 недели и 2 месяца. Гистоавтографы окрашивали гематоксилином-эозином. Подсчет зерен восстановленного серебра на гистоавтографах с лейцином (НЗ) осуществляли на условную единицу площади цитоплазмы клетки (об. 90, ок.15, площадь измерительной сетки в окуляре 0,2 х 0,2 мм). При анализе гистоавтографов с тимидином (Н3) мечеными считали клетки, ядра которых содержали не менее 5 зерен серебра. В соответствии с рекомендациями О.И.Епифановой, В.В.Терских, А.Ф. Захарова (1977) в автографах подсчитывали индекс меченых ядер (ИМЯ) в промилях на 9-10 тыс . клеток. Проводили также подсчет митозов в эпителиальных клетках пищеварительных желез в 20-30 тыс. клеток. Электронномикроскопическое исследование. Материал фиксировали в охлажденном 2,5-3% охлажденном растворе глутарового альдегида на S-коллединовом буфере. Постфиксацию проводили в четырёхокиси осмия по Millonig (1961). Материал обезвоживали в ацетоне либо спирте с возрастающей концентрацией и заключали в ЭПОН-812 или аралдит. Ультратонкие срезы готовили на ультратомах LKB-5. Для прицельного выявления гистологических использовали полутонкие срезы, окрашенные капельным способом метиленовым синим и основным фуксином по рекомендациям T.Sato et M.A.Shamoto (1973). Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию в 2% водном растворе уранил-ацетата при температуре + 37 С в течение 2 час и в цитрате свинца (E.S.Reynolds, 1963). Исследование ультратонких срезов производили на электронном микроскопе ЭМВ 100АК и фотографировали ультраструктуры при увеличениях от 6000 до 40000. Количественная информация о размерах ядер, ядрышек, цитоплазмы эпителиоцитов желез, ядерно-цитоплазматических (ЯЦО) и ядрышко-ядерных (ЯдрЯО) отношениях получена в ходе морфометрических исследований при использовании винтового окулярмикрометра МОВ-1-15ху42 и окулярных вставок (Г.Г.Автандилов, 1984). Вычисление объема изучаемой структуры (ядро, ядрышко, цитоплазма) производили, в зависимости от их формы, по формулам (К.Ташке,1980): - объем шара: V = п / 6xD3, где D - диаметр; - объем эллипсоида : V = п / 6xLB2, где L (большой) и В (малый) диаметры. Вычисление площади поверхности ультраструктур производили одномоментным наложением на электроннограмму (фотоотпечаток или негатив) квадратной сетки (А.С.Якубов,В.А.Кац, 1984). Снятие морфометрических параметров осуществляли путем подсчета точек пересечения вертикальных и горизонтальных линий сетки. Площадь поверхности ультраструктур вычисляли по формуле S = 2 P 1 / L x ( M / 1000), где М- увеличение, Рl-количество пересечений линий на на измеряемой ультраструктуре, L-общее количество мерных точек, 13 проходящих через срез. Вычисление площади поверхности улътраструктур производили одномоментным наложением на электроннограмму квадратной сетки (размер квадрата 10x10 мм), содержащей внутри каждого квадрата 25 точек (расстояние между точками 1,5 мм ). Снятие морфометрических параметров осуществляли путем подсчета точек, проицирующихся на срез ультраструктуры. Полученные в работе количественные данные подвергнуты статистической обработке в соответствии с рекомендациями П.Ф.Рокитского (1973) и Г.Г.Автандилова (1990). Количественные данные сравнивали с использованием t - критерия достоверности по Стюденту. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ На экспериментальной модели эмоционального-болевого стресса по O.Desiderato et al. (1974) нами получены результаты, подтверждающие известные данные о стадийности структурно-функциональных изменений гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы, наблюдаемой в состоянии умеренного стрессирования лабораторного животного (М.А.Беленький, 1977; А.Л.Поленов,1983). В конце первых суток эксперимента после прекращения стрессорного воздействия объём ядер "светлых" (функционально активных нейросекреторных клеток), а также объем их ядрышек снижается. Через 2-3 суток опыта объём ядер достоверно увеличивается одновременно с увеличением объёма ядрышек. Через 5-6 суток происходит возврат морфометрических показателей ядер и ядрышек к таковым, наблюдаемым у интактных животных. Отмечается также усиление процесса выведения нейросекрета из нейрогипофиза (особенно через 2 и 3 суток от начала эксперимента). Терминали аксонов нейросекреторных клеток, прилежащие к капиллярам, содержат большое количество "пустых пузырьков", крупные митохондрии, свободные рибосомы, расширенные канальцы эндоплазматической сети. В 1 сутки после действия стрессорных факторов происходит увеличение количества секреторных гранул в их цитоплазме на фоне расширения канальцев гранулярной эндоплазматической сети. В цитоплазме сероцитов по сравнению с панкреатоцитами наблюдается процесс снижения электронной плотности секреторных гранул. В гландулоцитах исследуемых желез регистрируется увеличение размеров ядер, ядрышек, зон эухроматина, плотности расположения канальцев эндоплазматической сети, комплекса Гольджи, размеров митохондрий. С другой стороны, определяются железистые клетки с секреторными гранулами, но с узкими канальцами эндоплазматической сети, а также клетки с деструктивными изменениями, что свидетельствует о гетероморфном ответе клеток на стрессорные воздействия В околоушной и поджелудочной железах на стадиях 4-6 суток опыта отмечено усиление включения Н3-тимидина железистыми эпителио14 цитами. Повышение репродуктивной активности гландулоцитов было более заметно в околоушной железе, чем поджелудочной железе. На более поздних стадиях эксперимента отмечались явления адаптации, а затем и процессы возврата к нормализации функциональной деятельности секреторных элементов пищеварительных желез, снижения репродуктивной активности гландулоцитов до уровня наблюдаемого у интактных животных. В этой связи наши данные согласуются с результатами исследований Ю.Н. Копаева и др. (1974), В. Peter (1995), М. Morita (2002). Реактивные изменения, наблюдаемых в пищеварительных железах мы связываем с динамикой реорганизации нонапептидергических нейросекреторных клеток гипоталамуса и адренергических и холинергических структур. Отмечено увеличение содержания катехоламинов, что не противоречит сведениям, представленных П.А.Вундером и др. (1999). Холинергические терминали сохраняли свою структурную организацию и уровень холинергической медиации. При длительном воздействии стрессорных факторов происходит выраженное разбалансирование уровня продукции нонапептидов и моноаминов и их высвобождения из терминален аксонов нейросекреторных клеток, что проявляется в блокировании выведения нейросекреторных гранул на уровне нейрогипофиза. При этом имеют место ультраструктурные повреждения этих клеток. Установлено, что дестабилизация одного из центральных звеньев нейроэндокринной системы ограничивает ее адаптивные возможности, включая соответствующие механизмы ограничения репаративных свойств секреторного эпителия исследованных пищеварительных желез. Показано, что репродуктивная активность эпителия околоушной и поджелудочной желез, подвергнутых длительным стрессорным воздействиям, существенно понижалась (в 2 раза относительно интактных животных ). Определена стадийность морфологических изменений в эпителии пищеварительных желез при действии стрессорных факторов. Т а к уже на 5-е сутки хронического эксперимента отмечено появление множественных очагов деструкции, секреторного эпителия, особенно в поджелудочной железе при наличии гипертрофических процессов ряда клеточных элементов. Картина структурных изменений, как и в первой модели эмоционально-болевого стресса, носила гетсроморфный характер. В паренхиме железы отмечались явления вакуолизации цитоплазмы, пикноз ядер аденоцитов. Понижался индекса меченых я д е р и уменьшилось включение радиоактивного лейцина, особенно в околоушной железе (рис.1). 15 Примечание: подсчет зерен восстановленного серебра на гистоавтографах с лейцином осуществляли на условную единицу площади цитоплазмы клетки, (об. 90, ок. 15, площадь ячейки измерительной сетки в окуляре 0,2 х 0,2 мм) В сероцитах слюнной железы по сравнению с панкреатоцитами отмечалось снижение электронной плотности секреторных гранул с явлениями активного вывода секреторного продукта. Отдельные секреторные клетки, особенно панкреатоциты имели более расширенные канальцы эндоплазматической сети, увеличенные митохондрии и активное образование зон гетерохроматина в ядрах. В интерстициальной ткани железы определялись увеличенные в просвете сосуды микроциркуляторного русла с признаками периваскулярного отека. Одновременное определите адренергических структур показало увеличенное содержание катехоламинов (рис.2) и умеренную активность ацетилхолинэстеразы вокруг секреторных отделов пищеварительных желёз. Холинергические нервные терминали сохраняли свою структурную организацию. Пролонгирование эксперимента проявилось в нарастании морфологических изменений в околоушной и поджелудочной желёз. Дальнейшее усиление деструктивных процессов, особегаю отмечено в панкреатоцитах; возрастание количества аутофагосом, осмиофильных структур. Аналопгчным изменениям подвергались клетки выводных протоков. В интерстициальной ткани продолжали нарастать явления периваскулярного отека, процессов разрушения клеток фибробластического ряда и сосудов. Явления периваскулярного отека наблюдались в большем объеме в поджелудочной железе. В поджелудочной железе встречались чаще, чем в слюнной железе, двуядерные эпителиоциты, клетки с пикнотически измененным ядерным 16 аппаратом и макрофаги Отмечено снижение содержания катехоламинов вокруг концевых отделов (рис.2) на фоне деструктивных изменений ацетилхолинергических элементов. Примечание : показания регистрировались с люминесцентной спектрофотометрической насадки (ФМЭЛ - 1 А) при выходном напряжении 900 V, сопротивлении усилителя - 10 Зом, зонд 0,5, об. 40. Спектральный диапазон 480-520 нм. Предварительное разрушение крупноклеточных ядер гипоталамуса приводило к ещё более быстрому нарастанию морфологических изменений дезадаптогенного характера в пищеварительных железах с их выраженностью в большем объеме в поджелудочной железе. С применением комплекса световой, электронной микроскопии, гистоавторадиографии, гистохимии и морфометрии нами было установлено, что через сутки в области имплантатов желёз отмечаются нейтрофильная и моноцитарная инфильтрация, серозно-фибринозная экссудация, гиперемия сосудов. В первые сутки культивирования среди клеток воспалительной зоны преобладали нейтрофилы, а с третьих суток соотношение смещалось в сторону макрофагов. Через 6 суток культивирования вокруг имплантата формировалась капсула из малодифференцированной соединительной ткани В имплантатах желез отмечалась выраженная миграция и пролиферация фибробластов, рост коллагеновых волокон, капилляров. В эти сроки формировались многочисленные контакты между макрофагами и фибробластами Через 68 суток культивирования наблюдалось ускоренное созревание соединительной ткани в капсуле и в межцеллоидиновых прослойках имплантатов В этом плане результаты наших исследований конкретизируют и 17 уточняют данные авторов, изучавших paннee реакции различных тканей организма млекопитающих в очаге асептического воспаления (Н.Т.Хрущов и др., 1976, 1978; В.В.Серов, А.Б.Шсхтер, 1981; Н.А.Юрина, А.И.Радостина, 1990; А.Б.Шехтер, В.В.Серов,1991). Мы отмечаем, что фазный характер воспалительной реакции на основе взаимодействия эпителиоцитов, клеток крови и соединительной ткани в равной мере характерен как для околоушной слюнной железы так и для поджелудочной железы. Проведенное культивирование фрагментов исследуемых желёз показало морфологически обоснованную стадийность репаративного гистогенеза, что согласуется с данными о структурных превращениях, наблюдаемых при росте различных эпителиальных тканей в условиях их кулътивирования in vivo (Ф.М.Лазаренко,1959; Е.П.Володина,1961; П.В.Дунаев, 1962,1963; АН.Бажанов и др.,1965;1967;Э.Х. Абдрашитова, 1965; Ю.П.Семченко, 1967,1968,1971; В.П.Соустин, 1968,1969; Г.Н.Галкин, 1970; А.А.Стадников, 1972; Л. А Савицкая, 1971; П.В.Дунаев, 1976; З.С.Хлыстова, 1971; А.Н.Козлова и др., 1993; С.Д.Валов, 1995:2001; Ю.П.Семченко, Л.В.Ковбык,1995; M.McDowell et. al., 1987; L.Trevisani et. al.,1992; T.Shimizu et. al.,1994). Метод имплантации позволил установить, что источником пролиферации пересаженной поджелудочной железы служат в основном дедифференцированные гландулоциты и центрацинозныс клетки, что согласуется с данными Е.Ш.Герловина и др.(1972). В околоушной железе источником пролиферативного процесса наряду с дедифференцированными сероцитами могут быть миоэпителиоциты и клетки мелких выводных протоков. Полученные нами факты о том, что миоэпителиоциты в концевых отделах околоушной железы в дальнейшем наряду с малодифференцированными клетками принимают участие в процессах пролиферации согласуются с данными обзорных сведений Г.Н.Муравьёва, В.М.Бычкова (1986) и I.Dardick et al. (1981), I.Dardick et al.(1991), H.Bilal et al.(2003) и не позволяют согласится с имеющимися представлениями о том, что миоэпителиальные клетки являются высокодифференцированными элементами, неспособными к клеточной репродукции (П.П.Гусак,1966; B.Tandler,1971; L.S.Culter et AP.Chandhry, 1973; D.Brandess,1974). В своей совокупности наши данные можно рассматривать в свете учения о клеточнодифферонной организации тканей, предполагающей, что при культивировании пролиферируют клетки, составляющие основной дифферон обновляющихся и медленно растущих тканей, обеспечивающие in situ их основные морфофунциональные возможности (Н.Н.Кочетов,1984; L.Trevisany et al., 1992; J.I.Liu et al., 1994; D.F.Rogers, 1994). При имплантировании фрагментов желёз помимо стадийности превращений эпителиев мы определили явления их полиморфизма и гетерохроннсти. Так при культивировании тканей поджелудочной железы по сравнению с околоушной железой отмечалась задержка 18 процесса дедифференцировки эпителиоцитов. Пролиферативные разрастания харакгеризавались меньшей по объему выраженностью и были менее многообразными по форме. Разрастания эпителия культивируемых желёз происходили в виде двух форм: в виде покровных пластов и погружных тяжей. Указанные формы роста отражают коренные гистиотические свойства эпителиальных тканей (Н.Г.Хлопин,1946; Ф.М.Лазаренко, 1959). В процессе роста эпителия околоушной железы возникали только многослойные пролиферативные структуры. Пролиферативные образования поджелудочной железы имели однослойное строение. В этом отношении наши результаты подтверждают выводы, сделанные Н.Г.Хлопиным (1946) о том, что в органных и тканевых культурах неприменно проявляется стойкая гистологическая детерминация эпителиев больших слюнных желёз и поджелудочной железы. С затуханием воспалительной реакции в области имплантатов желёз на 6-8 сутки от начала опыта, вновь выросшие структуры вступали на путь вторичной функциональной дифференцировки. Прекращение пролиферативных процессов совпадает по срокам с созреванием соединительной ткани. В этом отношении наши результаты согласуются с утверждениями А.А.Заварзина (1945), А.А.Брауна (1945), Н.Г.Хлопина (1946), Ф.МЛазаренко (1959), Д.С.Саркисова (1987), Э.Дьюкар (1978), которые подчёркивали существенное значение взаимосвязи в системе "эпителий-соединительная ткань". Значительное развитие получали, особенно в культурах околоушной железы покровные пласты, структурная дифференцировка которых сопровождалась изменениями их цитохимической характеристики. Наряду с пластами возникали железистые структуры типа альвеол и трубок. В органных культурах околоушной железы цитодифференцировки белковых секреторных клеток не отмечено. Полученные нами данные сопоставимы с результатами, полученными М.В.Севериным (1969), А.В.Владимировым (1971,1972), АВ.Рейсканен (1972), Н.Г.Хливным (1971,1972), Л.А.Савицкой (1972), М.К.Кричевской (1972) при аутотрансплантации и аллотрансплантациии пищеварительных желёз в организме. Обобщая полученные результаты мы высказываем предположение о том, что секреторный аппарат ротовой полости, происшедший из зачатка эктодермы, в ходе эволюции должен был обеспечить адаптацию организмов к меняющиеся характеру питания и обитания в различных условиях среды. Его эволюция вероятно шла по типу ароморфоза (А.Н.Северцов, 1939) под контролем ведущей (движущей) формы естественного отбора, которую, как отмечал И.И.Шмальгаузен (1946), реализует селекционные преимущества в изменённых условиях внешней среды, определённых отклонений от нормы. При этом имеют место частичная элиминация прежней нормы и установление новой. Повидимому, под влиянием этой формы отбора в процессе эволюции и произошла существенная перестройка железистого аппарата у 19 позвоночных на различных уровнях его организации и нейроэндокринной регуляции. Филогенез экзокринного эпителия поджелудочной железы, происшедшего из зачатка энтодермы, был также тесно связан с функцией, которая связана с выработкой ферментов для расщепления пищевых веществ. Изменения эпителия поджелудочной железы шли по типу идиоадаптаций (А.Н.Северцов,1939) под контролем стабилизирующего отбора, который, как подчеркивал И.И.Шмальгаузен, (1946), осуществлялся на основе селекционного преимущества нормальной организации перед отклонениями от нормы. Признавая тканевой уровень иерархической организации живой материи, предусматривающий наличие внутри- и межуровневых связей и собственных закономерностей развития (В.П.Михайлов,1980; В.П.Михайлов, Г.С.Катинас,1984; А.А.Стадников,2001), мы высказываем предположение о том, что пшоталамические нонапептиды могут рассматриваться как межсистемные факторы регуляции репаративных гистогенезов желез пищеварительной системы. В этом отношении нами выявлена на примере тканей нсэндокринной природы (секреторный эпителий околоушной и поджелудочной желёз) их важная роль в реализации тканями, обладающими различными: генетическим происхождением и особенностями обновления клеточных популяций своих гисто- и органотипических возможностей. Для проверки данного механизма регуляции процессов репаративного гистогенеза секреторного эпителия пищеварительных желёз, мы предприняли исследования по совместному (органотипическому) культивированию фрагментов околоушной и поджелудочной желёз с СО или ПВ ядрами гипоталамуса. Выбор данного объекта гуморального воздействия на структурные преобразования эпителия пищеварительных желёз мы рассматривали в русле современных научных разработок нейробиолопш, предполагающих существенную роль пептидных факторов, в том числе и пшоталамических нейропептидов, в регуляции адаптивных реакций организма и процессов гистогенеза ( I.Zachary et al.,1987; А.А.Стадников, 1989,1995,1997; P.W.Finchet al., 1989; M.Anton et al., 1990). Нами установлено, что несмотря на процессы депрессии и гибели определённой части нейросекреторных клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса, через 3 сут эксперимента удастся различить несколько видов переживающих клеток. На стадиях 6-8 сут культивирования присутствовали сохранённые нейросекреторные клетки, в ядрах которых определялись ядрышки. Степень их сохранности и функционирования доказаны на ультрамикроскопическом уровне. В данных сериях эксперимента (сокультивирование фрагментов околоушной и поджелудочной желёз с СО или ПВ ядрами гипоталамуса) определены: стадийность, полиморфизм и гетсрохронность структурных превращений эпителия пищеварительных желёз, которые наблюдались и при контрольном культивировании. Однако были установлены 20 специфические признаки течения репаративных процессов в эпителии и соединительной ткани. Во всех сериях эксперимента на ранних стадиях сокультивирования определялась лучшая структурная организация и адаптированность железистого эпителия имплантированных органов, менее был выражен процесс распада клеток в том числе и за счёт сохранности межклеточных контактов. Эти данные можно рассматривать с позиций современных направлений в нейроэндокринологии, о важной трофической роли нейропептидов по отношению к различным тканям (Л.В.Ковбык,1995; Э.И.Дедков 1996; А.Н.Козлова, 1997; Л.И.Завершинская,1998). Наши исследования показали, что при совместном культивировании тканей околоушной и поджелудочной желёз с СО или ПВ ядрами гипоталамуса отмечалась достоверная активизация процессов митотического деления эпителиоцитов, стимулирование ДНКсинтетической способности на ранних этапах имплантации. Полученные результаты можно также рассматривать с позиций наличия определённой чувствительности эпителия пищеварительных желез к митогенному влиянию со стороны гипоталамических структур. Воздействие факторов крупноклеточных ядер гипоталамуса на эпителий желёз определяется не только условиями культивирования, но и увеличением числа меченных Н3-тимидином гландулоцитов, увеличением в их цитоплазме количества рибосом по сравнению с имплантацией органов без фрагментов гипоталамуса. Согласно данным исследователей (В.Я.Бродский, И.В.Урываева,1981; О.И.Епифанова, В.В.Терских, В.А.Полуновский, 1983; В.Я.Бродский,Н.В.Нечаева, 1988) в стимулированных к пролиферации клетках имеют место процессы, связанные с подготовкой клеток и переходу их в митоз. Среди них в первую очередь необходимо отметить возрастание синтеза рибонуклеиновых кислот. Наши наблюдения свидетельствуют о позитивном воздействие гипоталамических факторов крупноклеточных ядер на усиление синтеза рибонуклеопротеидов в пролиферирующих эпителиоцитах и соединительнотканных клеточных элементах стромы желёз. Мы отмечаем многослойный характер пролиферативных разрастаний в имплантатах околоушной железы и однослойные новобразованные структуры в имплантатах поджелудочной железы. Оценка характера эпителиальных разрастаний свидетельствует о выраженности их в культурах тканей околоушной железы, чем в пожелудочной железы. Анализируя процесс вторичной дифференцировки новообразованных эпителиальных пролифератов, мы отмечаем усиление цитодиффсренцировки эпителиоцитов по железистому типу. Полученные данные позволяют предположить, что установленные эффекты связаны со специфическим прямым действием на уровне железистых клеток околоушной и поджелудочной желёз гипоталамических нейрогормонов (окситоцина и вазопрессина). Мы высказываем также мнение о вероятной роли их, как инициаторов дедифференцировки эпителиоцитов, 21 стимуляторов клеточной пролиферации и роста. Подобное обоснование полученных данных согласуется с имеющимися в литературе сведениями о стимулирующем воздействии гипоталамических нейропептидов (в частности вазопрессина) на синтез рибонуклеиновых и дезоксирибонуклеиновых кислот в клетках доброкачественной опухоли мозга (Z.Szebro,1970), печени, красного костного мозга, хрящей, нефроцитах, фибробластах (A.Anastasy ct al., 1971; V.M.Reznik et al., 1985; W.J.Bettger, W.L.Mckeehan,1986), в лактощпах при неопластическом процессе молочной железы (W.G.Norh et al.,1995). Исходя из фундаментального положения о роли эгоггелиосоединительнотканных взаимоотношений в процессе репаративной регенерации, нельзя исключить и опосредованное действие гипоталамических нейро-гормонов на структуры пищеварительных желёз через клетки соединительной ткани (D.M.Omits et al.,1996; S. Le Bras et al.,1998; F.Miralles et al.,1999; L.De Moerlooze et al. 2000). Наши исследования показали, что со стороны клеток соединительной ткани и сосудов микрощфкуляторного русла на всех стадиях имплантирования наблюдалась прогрессирующая их активизация, пролиферация и рост. В условиях совместного органотипического культивирования фрагментов околоушной и поджелудочной желёз с крупноклеточными ядрами гипоталамуса отмечался выраженный рост клеток фибробластов и макрофагов (рис.3,4) с признаками гипертрофического увеличения размеров: ядра, ядрышка, цитоплазмы, усиления процесса синтеза нуклеиновых кислот, что связано с повышением функциональной активности клеток. При этом новообразование и гетероморфизм клеток соединительной ткани проявлялся на более ранних стадиях культивирования. На поздних стадиях имплантирования определялись увеличенные в размерах фибробласты и макрофаги, для которых характерными были продолжающийся рост ядрышек, ядер и усиленное включение Н3-тимидина. Необходимо отметить, что в опытах по раздельному культивированию фрагментов пищеварительных желёз с различными ядрами гипоталамуса, на фоне однотипных структурных изменений со стороны эпителия пищеварительных желёз, реакция клеточных элементов соединительной ткани, особенно со стороны фибробластов, была значительно выражена при сокультивировании с СО ядрами, по сравнению с паравентрикулярными ядрами. При этом, в опытах при имплантировании с ПВ ядрами гипоталамуса определялась заметно выраженная реакция со стороны клеток макрофагического ряда. 22 23 Согласно данным М.В.Угрюмова (1989), M.Palkovits (1983), P.T.Mannisto (1987) окситоцин и вазопрессин в крупноклеточных ядрах гипоталамуса представляют наибольшее представительство по сравнению с другими нейрогормонами, продуцирующими нейросекреторными клетками. Содержание вазопрессина в супраоптических ядрах в два раза выше, чем в паравентрикулярных ядрах. В то время, как секреция окситоцина, преобладает в паравентрикулярных ядрах. Учитывая эти особешюсти структурной организации ядер, можно предположить, что полученные различия в течении репаративных процессов в имплантатах, свидетельствуют о неравнозначном воздействии указанных гшюталамических факторов на регенераторные свойства и цитодифференцировку культивируемых тканей. При этом, выраженное гиперпластическое и гипертрофическое влияние на фибробласты оказывает вазопрессин. В то время, как окситоцин, преимущественно воздействует на деятельность макрофагов и миоцитов. С целью выяснения особенностей репаративного гистогенеза железистого эпителия различного генетического происхождения и реакции собственной соединительной ткани проведено органотипической культивирование фрагментов околоушной и поджелудочной желёз в диффузионных камерах, в которых по сведениям Е.А.Лурия (1963) исключается проникновение в трансплантируемый материал клеток из организма реципиента. В этой связи наблюдаемые в камерах структурные превращения мы считали проявлением "внутренних" возможностей околоушной и поджелудочной желёз, основанных на гисто- и органотипических признаках их тканевых элементов. В первые сутки эксперимента центральные участки культивируемых желёз подвергались некротическим изменениям, клетки периферических зон имплантата частично сохраняли свою жизнеспособность и подвергались дегрануляции. Необходимо отметить, что панкреатоциты были более устойчивыми к гибели и дольше сохраняли свою цитологическую дифференцировку, чем сероциты. Ультраструктурная организация переживающих сероцитов по сравнению с панкреатоцитами проявлялась в набухании и разрушении митохондрий, локальных повреждениях мембран гранулярной эндоплазматической сети, уменьшении количества связанных рибосом, появлении крупных гранул низкой электронной плотности. Однако встречались клетки с большим количеством секреторных гранул и сохранёнными структурами 24 цитоплазмы, что свидетельствовало о гетероморфности реактивных изменений. В интерстициальной соединительной ткани желёз обнаружены погибающие и переживающие клеточные формы. В стенках гемокапилляров и артериол в большом количесте отмечались активизированные клетки. Перициты и миоциты отделялись от стенок микрососудов, приобретали отросчатую или удлинённую форму становились похожими на фибробластоподобные клетки, которые мигрировали по соединительнотканным прослойкам. Реорганизующиеся эндотелиоциты придают гемокапиллярам вид клеточного тяжа. В артериулах эндотелиощггы утрачивают полярность и приобретают звёздчатую форму. Полученные нами сведения о структурной перестройке эндотелиоцитов в органотипических культурах согласуются с данными Э.И.Дедкова (1995), M.Aloisi, C.Giacorain and R. Tessari (1970). На стадии 3-6 суток органотипического культивирования желёз отмечались пролиферация дегранулированных клеток, особенно в имплантатах поджелудочной железы. По сравнению с культивированием по методу Ф.М.Лазаренко процесс синтеза нуклеиновых кислот был. снижен, что вероятно, связано с отсутствием адекватного стромального микроокружения, так как миллипоровые фильтры диффузионных камер препятствовали врастанию соединительнотканных элементов из окружающих структур организма крысы-реципиента. В интерстициальных промежутках фрагментов пищеварительных желёз, особенно в околоушной железе, наблюдались тяжи из фибробластоподобных и веретеновидных клеток Мигрирующие нa периферию фибробластноподобные клетки формировали вокруг трансплантатов зону роста. Появление в трансплантатах желёз новообразованных сосудов показывает непрерывный характер разрастания эндотелия, что согласуется с аналогичными сведениями В.В Серова, А.Б. Шехтера (1981), Д..С.Саркисова (1987). На поздних сроках культивирования в диффузионных камерах на фоне нарастания количества дегенерирующих и разрушающихся эпителиоцитов отмечалось присутствие макрофагов. В опытной серии совместного культивирования тканей околоушной и пищеварительных желёз с кругшоклеточными ядрами гипоталамуса в основном выявлена аналогичная стадийность структурных превращений тканей имплантатов, раннее показанная в диффузионных камерах для фрагментов только пищеварительных желёз. Однако, следует отметить и некоторые специфические особенности структурной реорганизации тканей околоушной и поджелудочной желёз, возникающих под влиянием нейросекреторных факторов. Через 1 сутки опыта в имплантатах определяются гландулоциты дегенерирующие, дедифференци-рующиеся и переживающие. При этом в последних отмечается хорошая адаптированность к условиям культивирования в диффузионной камере. Это подтверждают увеличение объёма ядер и размеров цитоплазмы переживающих клеток. В имплантатах определялись в большом количестве сохранённые, 25 переживающие гландулоциты. Мы не можем полностью объяснить механизм прямого адаптогенного воздействия нейросекреторных факторов крупноклеточных ядер гипоталамуса на культивируемые гландулоциты околоушной и поджелудочной желёз. В этой связи можно высказать предположите о наличии опосредованного (паракринного) влияния птоталамических нейропептидов через воздействие на гипертрофические и гиперпластические процессы в клеточных элементах соединительной ткани культивируемых желёз. На последующих стадиях (4-6 суток) сокультивирования определяется прогрессирующая активизация, пролиферация и рост со стороны клеток интерстициальной соединительной ткани и сосудов микроциркуляции. По сравнению с контрольной серией наблюдается усиление пролиферативной активности новообразующихся эпителиальных и соединительнотканных клеточных элементов (фибробластноподобных клеток). На стадии 6-10 суток культивирования в диффузионных камерах отмечалось по сравнению с контрольной серией более медленное нарастание деструктивных изменений в клетках, определялись процессы пролиферации и цитодифференцировки малодифференцированных клеток интерстициальной ткани, в основном фибробластноподобных элементов. Полученные результаты указывают на адаптогенное воздействие ядер переднего гипоталамуса на различные клеточные и тканевые структуры, и согласуются с результатами, полученными при культивировании фрагментов других органов в диффузионных камерах (Э.И.Дедков,1995; Н.Н.Шевлюк,1997; Л.И.Завершинская, 1998). Полученные в ходе эксперимента наши данные указывают на то, что комплекс регулирующих факторов, «содержащихся в СО, ПВ ядрах гипоталамуса, при прямом контакте с фрагментами околошной и поджелудочной желёз в культуралъных условиях оказывает неравнозначное воздействие на процессы пролиферации эпителиоцитов, общий характер межклеточных отношений, возможности цитодифференцировок. В качестве проверочных опытов мы использовали культивирование фрагментов желёз в организме и вне организма при экзогенном введении окситоцина и вазопрессина, присутствующих в естественных условиях в соответствующих нейросекреторных центрах гипоталамуса. Исследования проводились на животных-реципиентах (крысы), у которых предварительно осуществлялось электролитическое разрушение соответствующих ядер гипоталамуса (в методическом плане соблюдались условия, аналогичные тем, которые были выдержаны и предыдущих сериях опытов по сокультивированию тканей желёз с ядрами гипоталамуса, содержащие нейросекреторные клетки). Отмечено, что окситоцин и вазопрессин усиливали процессы дедифференцировки гландулоцитов, митотическое деление дсдифференцированных сероцитов и панкреатоцитов, стимулировали их ДНК-синтетическую способность, показатели которой преобладали в культурах тканей околоушной железы. Введение гипоталамических нонапептидов активизировало рост клеток эпителия и 26 соединительной ткани, вызывает гипертрофию ядрышек, которые приобретают разрыхлённый вид за счёт увеличения нитчатого компонента. Особенности структуры ядрышек у гландулоцитов, испытывающих в культуре тканей воздействие гипоталамических нонапептидов, могут объясняться с позиций вероятного участия их в перестройке ядрышкового аппарата. Нуклеосомальный характер строения ядрышек с хорошо выраженной нитчатой стуктурой свойственен для незрелых клеток, о чём свидетельствуют данные Е.А. Эренпрейса (1990), П.В.Челидзе и др. (1993), А.А.Стадникова (2001), G.Goessens (1984). Анализ клеточного состава эпителиальных структур, образующихся в органной культуре при экзогенном введении окситоцина и вазопрессина, показал его гетероморфный характер. В основном он был похож на таковой при совместном культивировании фрагментов пшдеварительных желёз с крупноклеточными ядрами гипоталамуса. Мы отмечаем, что наряду с полностью дегранулированными клеточными формами присутствуют в большом количестве переживающие клетки, которые имеют умеренно выраженные эндоплазматическую сеть, митохондрии, пластинчатый комплекс Гольджи и в апикальных участках цитоплазмы определяются секреторные гранулы, умеренной и сниженной электронной плотности. Секреторные гранулы умеренной электронной плотности преимущественно присутствовали в панкреатоцитах, а со сниженной плотностью в сероцитах. В эпителиальных образованиях культивируемых желёз достоверно уменьшается количество дегенеративноизменённых эпителиоцитов. При экзогенном введении окситоцина, либо вазопрессина в составе эпителиальных пролифератов среди дегранулированных железистых клеток в их цитоплазме определяются включения гликогена и липосомные структуры. Вероятно это связано с накоплением в клетках необходимых запасов трофических и энергетичеких веществ, которые будут использоваться клетками в ходе дифференцировки. Нами были также получены результаты, свидетельствующие о стимулирующем влиянии оксотоцина и вазопрессина на процессы синтеза и выведения секреторного продукта из гландулоцитов. Введение окситоцина и вазопрессина в культуры желез в равной мере пролонгирует жизнеспособность гландулоцитов околоушной и поджелудочной желез, стимулирует разрастание кровеносных сосудов и образование коллагеновых волокон в соединительной ткани. Показано прямое влияние окситоцина и вазопрессина (последнего в большей мере) на сохранность и функионирование эпителиоцитов, фибробластических клеток, эндотелиоцитов и миоцитов артериол, эндотелиоцитов капилляров. Указанные клеточные элементы приобретали крупные размеры, пролиферировали. В данных условиях количество погибающих эгаггелиоцитов было достоверно меньше, чем в случае культивирования без добавления нейропептидов. Добавленные в культуральную срелу нейропептиды усиливали возникающий гетероморфизм гланлулоцитов при культивировании (переживающие 27 формы, дистрофически измененные клетки, гибнущие и гипертрофированные элементы). Гипоталамические нейропептиды повышали активность фибробластов по выработке коллагеновых фибрилл и вызывали разрастание кровеносных сосудов. Тем не менее весьма трудно установить, являются ли воздействия оксотоцина и вазопрессина на структурные изменения в гландулоцитах околоушной и поджелудочной желёз прямым (эндокринным) или же они включают ряд промежуточных (опосредованных) процессов, с участием различных клеточных элементов собственной соединительной ткани на основе пара- и аутокринных механизмов регуляции (T.Imai ct al.,1992;T.F.Luscher,1994; T.F.Luscher, R.R. Wenzel, 1995). В фибробластах пролиферирующей соединительной ткани определяются липидные образования. По мнению Д.С.Саркисова и др. (1980) это связано с активизацией внутриклеточного метаболизма в том числе процесса фибриллогенеза, На основании гистоавторадиграфических исследований мы определили отличие ДНКсинтезирующих возможностей у фибробластов собственной соединительной ткани желёз. Количественный показатель пролиферативной активности клеток соедишггельной ткани был больше в имплантатах околоушной железы, чем поджелудочной железы. На основании имеющихся сведений эти данные можно интерпретировать в свете положения, которое указывает на приобретение соединительнотканными клетками, в составе различных органов, в том числе в околоушной и поджелудочной железах, специфических биологических особенностей (Э.Дьюкар,1978). При культивировании фрагментов пищеварительных желёз и дополнительном воздействии гипоталамических нонапептидов происходит повышение актививизация макрофагов, что согласуетя с данными ряда исследователей (А.В.Климушкин, 2003; G.Eskeland,1966, 1966а; L.N.Shulman, S.H. Robinson 1982). В сериях опытов органотипического культивирования желёз, когда в эксплантаты дополнительно вводили ноадреналин, дофамин нами была обнаружена лучшая сохранность белковых концевых отделов, которая наблюдалась и на поздних стадиях имплантации при наличии слабой пролиферации эпителия. При этом эпителий переживающих концевых отделов имел те же гистохимические и ультрамикроскопические характеристики, свойственные белковым железам в дефинитивном состоянии. Норадреналин создает необходимые условия для поддержания органотипической дифференцировки структур, в том числе и для новообразования атипических сероцитов и панкреатоцитов во вновь возникших пролифератах, оказывает стимулирующее влияние на метаболитические процессы и, в частности, синтеза дезоксирибонуклеиновых и рибонуклеиновых кислот. Высказанное нами положение о влиянии моноаминов на пролиферацию согласуется с данными Ю.А.Романова, К.А.Бикса (1981), О.И.Сукманского и др. (1984), показавших ингибирующее действие катехоламинов на пролиферативные 28 процессы других тканей, вместе с тем, они противоречат сведениям E.R.Burns (1978), показывающими их стимулирующее влияние. Дополнительное введение ацетилхолина в эксплантированные ткани желёз значительно усилило пролиферативные процессы, способствуя возникновению почек роста. Эти процессы продолжались на этапах культивирования. Выраженность морфологических изменений при действии нейромедиатора определялась больше в органных культурах околоушной железы. Проведенные нами наблюдения показали, что имеет место разнонаправленность в воздействии норадреналина и ацетилхолина на структурные элементы соединительной ткани. Норадреналин уменьшает воспалительную реакцию соединительной ткани и её васкуляризацию, ацетилхолин увеличивает в молодой соединительной ткани количество и диаметр кровеносных сосудов, содержание фибробластов, макрофагов, гранулоцитов и лимфоидных клеток В своей совокупности данные результаты позволяют высказать мнение о существовании избирательной чувствительности гландулоцитов к регуляторным факторам. Дофамин, норадреналин оказывают влияние на органотшшческие свойства изучаемых объектов, что проявляется в сохранении специфических дифференцировок и фунционировании желёз. Ацетилхолин способствует реализации биологических свойств на тканевом уровне, оказывая воздействие на рост и пролиферативные процессы эпителия и соединительной гкани. Это положение согласуется с гипотезой, выдвинутой М. Machon (1974) о том, что в качестве регулирующих факторов, которые могут определять направление клеточной дифференцировки, могут выступать нейромедиаторы. Гипоталамические нонапептиды позитивно влияют на поддержание жизнеспособности гландулоцитов, оказывают адатогенный эффект на структурные элементы эксплантированных фрагментов органов, обеспечивают дедифференцировку железистого эпителия, усиление ДНКсинтетической способности эпителиоцитов, фибробластов, макрофагов, усиливают в новообразованных железистых структурах вторичную дифференцировку, стимулируют образование сосудов и волокон межклеточного вещества соединительной ткани. Гипоталамические нейрогормоны создают условия для расширения эпителиями околоушной и поджелудочной желёз своих гистио- и органотиических возможностей (при этом не изменяется их генетическая детерминированность). ВЫВОДЫ 1. Адаптивный характер реализации тканеспецифических особенностей железистых эпителиев экто- и энтодермального генеза в стрессорных условиях определяется не только их тканевой детерминацией, но и зависит от адекватных коррелятивных связей с интегрирующими 29 факторами гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы и состоянием адрен- и холинергической медиации. 2. Структурно-функциональная реорганизация железистого эпителия околоушной железы в условиях активизации нонапептидергической гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы проявляется в приспособительной смене характера секреции (с белкового на слизистый), что отражает закономерности филогенеза сероцитов. 3. Адаптивные реакции эпителия поджелудочной железы на действие стрессорных факторов сопровождаются разнообразными гистогенетическими фенотипами (низкая митотическая активность клеток, высокая степень межтканевой комплексности и восстановления эпителиосоединительнотканных взаимоотношений), направленных на поддержание органотипического гомеостаза. 4. Реактивные изменения и гисто- и органотипические возможности эпителия пищеварительных желёз обусловлены (особенно в условиях длительного воздействия стрессорных факторов) дестабилизацией состояния гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы, выражающейся в разбалансировке процессов синтеза и выведения нейрогуморальных веществ, содержащихся в нонапептидэргических нейросекреторных центрах гипоталамуса (супраоптические и параБентрикулярные ядра подбугорья) и одновременно сопровождающимся ограничением адрен- и холинергической медиации в исследуемых объектах. . 5. Нейрогормоны крупноклеточных ядер гипоталамуса являются одними го регуляторов дедифференцировки дефинитивных секреторных эпителиев (экто- и энтеродермальных типов), а также стимуляторами стимуляторами клеточной репродукции, роста сероцитов, панкреатоцитов и камбиальных клеточных элементов околоушной и поджелудочной желёз. 6. Гипоталамические нонапепгидергические нейрогормоны оказывают позитивное влияние в обеспечении сохранности, функциональной активности, фенотипических структурных характеристик, реализации регенераторных возможностей паренхимы и стромы околоушной и поджелудочной желёз в экстремальных ситуациях и в условиях культивирования in vivo и in vitro. 7. При органотипическом культивировании фрагментов околоушной и поджелудочной желез in vivo по методу Ф.М.Лазаренко и в диффузионных камерах определены однотипная стадийность, полиморфизм и гетерохронность структурных превращений в имплантатах. В имплантатах околоушной железы новообразованные многослойные эпителиальные структуры отличались выраженным полиморфизмом и различным характером дифференцировки, секретирующие по слизистому типу. В имплантатах поджелудочной железы пролиферативные эпителиальные структуры характеризовались меньшим полиморфизмом, имели однослойное строение и характеризовались признаками, подчеркивающими их генетическое 30 единство с гастроинтестинальным пищеварительным аппаратом. 8. Стадийность, полиморфизм и гетерохронность структурных превращений при органотипическом культивировании околоушной и поджелудочной желёз in vivo полностью прослеживаются и при совместном имплантировании с супраоптическими или паравентрикулярными ядрами гипоталамуса, что способствовало переживанию клеток, усиливало репродукцию эндотелиоцитов, леймиоциов, фибробластов, макрофагов, стимулировало коллагеногенез и васкулогенез. 9. Установлено прямое влияние нейромедиаторов и гипоталамических нонапептидов на адаптационные и регенераторные возможности эпителиев околоушной и поджелудочной желез в условиях культур тканей in vivo и in vitro. Ацетилхолин оказывает стимулирующее влияние на гистиотипический рост. Норадреналин реализует своё воздействие на органотипическом уровне, что проявляется в различных специфических вариантах дифференцировки желёз. Окситоцин и вазопрессин создаются адекватные условия для расширения гисто- и органобластических возможностей исследуемых структур эктои энтодермального происхождения. 10. Вещества, содержащиеся в крупноклеточных ядрах гипоталамуса, являются теми внешними (эпигенетическими) факторами, которые создают оптимальные условия для осуществления гистобластических свойств пищеварительных желёз, но не определяют их функционалыгую специализацию. Существенную роль в реализации органоспецифической дифференцировки железистых эпителиев выполняют иные регуляторные факторы, особенно нейромедиаторы симпатического отдела нервной системы. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Значение эпителио-соединительнотканного взаимодействия в процессе роста и дифференцировки железистых эпителиев //Морфогенез и регенерация покровных и железистых эпителиев в онтогенезе и в условиях эксперимента: Сб. науч. трудов.- Оренбург, 1981.С.36 (соавт. Е.П.Володина, А.А.Стадников, Н.Н.Шевлюк, Т.В.Большакова, B.C. Полякова, А.Н.Варламов). 2. Моделирование гипоталамо-аденоппгофизарных взаимодействий в эксперименте на животных //Тез. докл. DC Всесоюзн. съезда анатомов, гистологов и эмбриологов. - Минск, 1981,- С.364-365 (соавт. А.А.Стадников, Н.Н.Шевлюк, М.Ф.Митрофанова). 3. Функциональная морфология эпителиальных барьеров при воздействии неблагоприятных факторов // Матер. X Всесоюзн. Съезда анатомов, гистологов, эмбриологов, 17-19 сент. 1986 г.-Винница.- Полтава, 1986.С.135 (соавт. Е.П.Володина, В.С.Полякова, Е.Н.Юрикова, Г.М. Алемасова). 31 4. О нейромедиаторной регуляции гисто- и морфогенеза эпителия белковых слюнных желез в условиях кулыуры тканей в организме и вне организма //Эпителий и соединительная ткань в нормальных, экспериментальных и патологических условиях: Сб. научн. трудов. Тюмень, 1990.- С.40-41. 5. Структурно-функциональное состояние гипоталамо-гипофизарногонадальной системы в условиях стресса // Матер. VII зональной научн. практ. конф. учёных медиков. Медико-биологические и экологические проблемы развития Севера.-Архангельск, 1990.- С.30-31 (соавт. ААСтадников, Н.Н.Шевлюк). 6. Некоторые аспекты регуляции регенерации и гистогенеза эпителия слюнных желез в условиях культуры тканей в организме и вне opганизма. //Матер.VII зональной конф. ученых медиков. Медико-биологические и экологические проблемы Севера.- Архангельск, 1992.-С.22-23. 7. Структурно-функциональное юучение внутри- и межсистемных механизмов регуляции тканевого и органного гомеостаза // Матер. XI съезда анатомов., гистологов и эмбриологов.-Смоленск,16-18 сент. 1992.Г.- Полтава, 1992.-С.230-231 (соавт.А.А.Стадников, Н.Н.Шевлюк, Ю.П.Семченко, М.Ф.Митрофанова). 8. Изучение роли гипоталамических нонапептидов как межуровневых регуляторов тканевого гомеостаза в условиях культивирования в организме и вне организма //Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных: Кн. научн. трудов // Матер.2-й Всерос. конф. Часть З.-Саратов, 1993.- С.108 (соавт.А.А.Стадников, А.Н.Мухортова, Э.И.Дедков, И.И. Рыбкин). 9. Некоторые аспекты холинергической и адренергической регуляции секреторного цикла слюнных желез ротовой полости и глотки // Российские морфологические ведомости.- 1994.- Вып.4.-С.61-62 (соавт. Ю,П,Семченко). 10. О роли гипоталамических нонапептидов и моноаминов в регуляции процессов пролиферации и цитодифференцировки покровных железистых эпителиев и некоторых эндокриноцитов // Актуальные вопросы теоретической и клинической медицины: Сб. научн. трудов ученых Оренб. мед. .ин-та.- Оренбург,1994.-Т.29.-С.60-65 (соавт. А.А.Стадников, Н.Н.Шевлюк, Э.И.Дедков, И.И.Рыбкин, Ю.П.Семченко, А.Н.Мухортова, В.С.Полякова, М.Ф.Митрофанова). 11. Морфофункциональная характеристика эгаггелия слюнных желез и нейроэндокринная регуляция его гистогенеза // Морфология .-1995.T.108.-N2.-C.52-53. 12. О нейроэндокринной регуляции репаративного гистогенеза белковых слюнных желез // Матер. II Съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока.- Новосибирск, 1995.-С.67-68. 13. Морфофункциональная характеристика железистого эпителия различного генетического происхождения и состояние иннервации в условиях стресса // Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и экперименте: 32 Матер. научн.-практ.конф. морфологов Тюменской обл.- Тюмень, 1996.С.38-39. 14. Использование эксплантации эпителия околоушной и поджелудочной желез в диффузионных камерах как метода по изучению влияния регуляторных факторов на репаративную регенерацию // Вопросы оперативной микрохирургии и микрохирургической анатомии: Матер. Рос. научн. конф.- Оренбург, 1997.-С.109. 15. Некоторые аспекты гипоталамической нейроэндокринной, адренергической и холинергической регуляции железистых эпителиев различного генеза в условиях стресса // Гистогенетический анализ изменчивости и регенерация тканей: Матер. научн. совещания, посвященного 100- летаю со дня рождения Н.Г.Хлопина.- С.-Петербург, 1997.-С.43. 16. Морфофункциональная реорганизация эпителиев некоторых пищеварительных желёз в аспекте нейроэндокринной регуляции // Морфология.- 1998.-Т. 113.-N3.- С.28-29. 17. К вопросу о нейроэндокринной регуляции репаративных гистогенезов эгоггелиев околоушной и поджелудочной желез // Матер.Всерос. научн.конф. Закономерности морфогенеза и регуляция тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях, посвященной. 70-летию проф. П.В.Дунаева.-Тюмень, 1998,- С.135. 18. Влияние эндокринных факторов на репаративный гистогенез околоушной железы при культивировании в диффузионных камерах // Морфология.- 1999.- T.116.-N.5.- С.34-37. 19. О ролиг ипоталамических нейрогормонов в регуляции репаративного гистогенеза некоторых покровных и железистых эпителиев // Сб. науч трудов к 100 летаю со дня рожд. Засл.д.н. РСФСР проф. В.Г.Елисеева.М., 1999, С.98-99 (соавт. АН.Козлова). 20. Использование эксплантации некоторых покровных и железистых эпителиев в диффузионных камерах для изучения влияния регуляторных факторов на репаративную регенерацию // Морфология и хирургия в практической ветеринарии и медицине: Сб.научн.трудов.- Оренбург, ОГАУ, 1999.-С.121-122 (соавт. М.Ф.Митрофанова А.Н.Козлова). 21. Сравнительное изучение репаративного гистогенеза различных покровных и железистых эпителиев при культивировании в организме // Морфология.- 2000.- Т. 117.- N 3.- С.29-30 (соавт. Ю.П. Семченко, А.Н.Козлова, Л.В.Ковбык). 22. О влиянии гипоталамических нейропептидов на репаративный гистогенез различных покровных и железистых эпителиев при культивировании в организме // Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов: Матер. межд. конф., Астрахань.- Астрахань, 2000.- С.78-79 (соавт.А.Н.Козлова). 23. Влияние нейроэндокринных факторов на репаративный гистогенез поджелудочной железы при культивировании Морфология.-2001.-Т. 119.-N2.-C.52-55 (соавт. А 33 24. Морфофункциональныс исследования железистых эпителиев и состояния нейроэндокриюгай и нейротрансмиттерной регуляции в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС) // Новости клинической цитологии России,- 2001.- T4.-N 3-4.- С.141-143 (соавт. А.А.Стадников, С.С.Быков). 25. Гетеротопия поджелудочной железы в желудке // Хирургия журнал им. Н.И. Пирогова,- 2001.- N 5.- С.50-51 (соавт. А.А.Третьяков, О.Б.Дронова). 26. Изучение структурно-функциональной реорганизации эпителиев околоушной и поджелудочной желёз и оценка состояния нейротрансмиттерной регуляции в условиях эмоционально-болевого стресса // Российские морфологические ведомости.-2001.-N3-4.- С. 23-25. 27. Изучение влияния гипоталамических нейропептидов на гистогенез различных по происхождению железистых и покровных эпителиев при культивировании в организме // Современные проблемы нейробиологии: Тез. докл. 3-го межд. симп..- Саранск, 2001.- С. 28 (соавт. А.Н. Козлова, С. С. Быков). 28. Некоторые аспекты сравнительного изучения структурнофункциональной реорганизации железистого эпителия различного генетического происхождения и состояния нейроэндокринной регуляции в условиях стресса // Экология и здоровье в XXI веке: Тез. докл. межд. научн. конф., Ульяновск.- Ульяновск, 2001.- С. 26 (соавт.С.С. Быков). 29. Изучение морфофункциональной реорганизации секреторного эпителия околоушной и поджелудочной желёз в условиях хронического эмоционально-болевого стресса // Актуальные вопросы морфологии и хирургии XXI века Том.1 Морфология: Матер, межд. научн. конф..Оренбург,2001.- С. 57-61. 30. Сравнительная морфофункциональная характеристика эпителия пищеварительных желёз и состояния нейроэндокринной и нейротрансмиттерной регуляции в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС) // Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей: Матер, научн. конф..- С.-Петербург, 2001.- С. 23. 31. К вопросу о влиянии нейромедиаторов и гипоталамических нейропептидов на гистогенез железистых и покровных эпителиев при культивировании в организме. // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии: Сб. научн. трудов посвященный 150-летию со дня рождения профессора А.С.Догеля. -Томск, 2002.- Вып. 2.- С. 98-99 (соавт. Ю.П. Семченко). 32. Влияние нейромедиаторов и гипоталамических нейропептидов на гистогенез железистых и покровных эгаггелиев при культивировании в организме // Морфология.- 2002.- Т. 121.- N 2-3.- С.31 (соавт. ЛВ.Ковбык, Ю.П. Семченко). 33. Морфофункциональная характеристика эпителиев некоторых пищеварительных желёз при разрушении кругшоклеточных ядер гипоталамуса-/III-научн.-практ. конф. врачей Приволжско-Уральского военного округа Оренбург: Сб научн.трудов.- Оренбург, 2002.-С.301-305 34 (соавт. С.С.Быков). 34. Прямое влияние нейромедиаторов и гипоталамический нейропептидов на гистогенез железистых эпителиев при культивировании in vivo и in vitro//Морфология.-С.Петербург,2003.-Т/124.-N5.-С.45.(соавт.Т.Н.Валова). 35. Изучение структурно-функциональных изменений эпителиев околоушной и поджелудочной желёз и анализ состояния нейротрансмиттерной регуляции в условиях острого эмоционально-болевого стресса //Вестник Оренбургского государственного университета.Оренбург, 2003.- N 1 (19).- С.49-51. Рационализаторское предложение по теме диссертации. Способ изготовления диффузионных камер многоразового использования для культивирования тканей //Удостоверение Оренбургской государственной медицинской академии на рационализаторское предложение N 1241 от 16.10.98 г. 35 Для заметок 36 37 38 0 0 0 «Офисная полиграфия» 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 48. Подписано в печать 04.08.2004. Формат 210x297 Гарнитура Times. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,33. Тираж 150 экз. Заказ № 102. • j
