Кальцитонин (Calcitonin ELISA)

Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
1
______________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2008/01111 от 26.02.2008 г
Кальцитонин (Calcitonin ELISA)
Иммуноферментный тест для количественного определения кальцитонина в сыворотке крови.
Номер по каталогу: 7024
Набор рассчитан на 96 определений
1. НАЗНАЧЕНИЕ
ИФА тест Biomerica Кальцитонин (Biomerica Calcitonin ELISA) предназначен для количественного
определения кальцитонина в сыворотке крови человека. Только для in vitro диагностики.
2. ВВЕДЕНИЕ
Кальцитонин является полипептидом, состоящим из 32 аминокислот, секретирующимся первично
парафолликулярными С-клетками щитовидной железы. Его основное биологическое действие –
ингибирование резорбции остеокластами костной ткани. Это свойство обусловило использование
кальцитонина в диагностике заболеваний, для которых характерна повышенная резорбция, таких как
болезнь Педжета, а также в ряде случаев остеопороза.
3. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Наиболее важный клинический синдром, ассоциированный с аномальной гиперсекрецией кальцитонина это медуллярная карцинома щитовидной железы (МТС). МТС является опухолью кальцитонинпродуцирующих С-клеток щитовидной железы. Хотя МТС редка, составляя 5 - 10% от всех раковых
опухолей щитовидной железы, она часто приводит к летальному исходу. Она может возникать
спорадически, а может иметь наследственный характер, передаваясь как аутосомно-доминантный признак.
МТС имеет очень большое клиническое значение из-за передачи по наследству. Далее, возможна ранняя
диагностика по уровню сывороточного кальцитонина и полное излечение при субклинических проявлениях
заболевания на ранних стадиях1. МТС часто ассоциирована с другими клиническими проявлениями и имеет
благоприятный прогноз излечения при хирургическом вмешательстве. Хотя МТС является редкой
опухолью, она может наследоваться 1,3,4 как множественная эндокринная неоплазия II типа. Эти опухоли
обычно продуцируют сывороточный кальцитонин в диагностически значимых повышенных концентрациях.
Таким образом, иммуноанализ кальцитонина в сыворотке крови может использоваться для диагностики
наличия МТС с исключительной степенью точности и специфичности. У небольшого, но возрастающего
процента пациентов, однако, базальные уровни гормонов неотличимы от нормальных1. У части этих
пациентов наблюдаются ранние стадии С-клеточной неоплазии или гиперплазии, являющиеся наиболее
операбельными. Для выявления этих пациентов на ранних стадиях заболевания необходимо использовать
провокационный тест на секрецию кальцитонина для предотвращения постановки ложноотрицательных
диагнозов, если только проводится определение базального уровня кальцитонина. При большинстве
опухолей уровень кальцитонина повышается в ответ на введение кальция 5 или пентагастрина (pentagastrin)
6
, или их комбинации 7, но при использовании каждого из реагентов могут быть все же получены неверные
результаты. Следовательно, в случаях клинических проявлений для диагностических целей следует
использовать оба реагента. Кроме того, измерение концентрации кальцитонина также может быть
использовано для мониторинга эффективности лечения у пациентов с кальцитонин-продуцирующими
опухолями.
Опубликованы данные 8, что множественные формы иммунореактивного кальцитонина обнаруживаются как
у здоровых людей, так и у пациентов с МТС. Эти различные формы кальцитонина имеют молекулярный
вес, варьирующий от 3400 (мономеры) до 70 000 Да (полимеры).
Неопластические заболевания других нейроэндокринных клеток также могут способствовать повышению
уровня кальцитонина. Наилучшим примером может служить мелкоклеточный рак легкого. Другие опухоли,
такие как карциноиды и опухоли островковых клеток поджелудочной железы, также могут вызывать
повышение концентрации кальцитонина в сыворотке крови.
Повышенные уровни кальцитонина также отмечены как при острых, так и при хронических заболеваниях
почек, гиперкальциурии и гиперкальциемии.
4. ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Biomerica Кальцитонин (Biomerica Calcitonin ELISA) является твердофазным иммуноферментным
анализом (ИФА) «сэндвич»-типа, и предназначен для определения концентрации биологически интактной
цепи кальцитонина, состоящей из 32 аминокислот. В тесте используются два разных вида мышиных
моноклональных антител к кальцитонину человека, специфичных к строго определенным областям
молекулы кальцитонина. Одни антитела связываются только с 11-23 аминокислотами молекулы
кальцитонина, они биотинилированы. Другие антитела связываются только с 21-32 аминокислотами
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
2
______________________________________________________________________________________________________
молекулы кальцитонина; эти антитела мечены пероксидазой хрена (HRP), обеспечивающей появление
окраски в реакции с субстратом.
Лунки со стрептавидином - биотинилированные антитела к кальцитонину (11-23) – интактный
кальцитонин -- конъюгированные с пероксидазой антитела к кальцитонину (21-32)
В данном анализе калибраторы, контроли или образцы сыворотки крови пациентов одновременно
инкубируют с антителами, конъюгированными с ферментом, и антителами, меченными биотином, в лунках
микропланшета, покрытыми стрептавидином. Таким образом, кальцитонин образца оказывается в
«сэндвиче» между двумя видами антител. После инкубации лунки планшета промывают для удаления не
связавшихся компонентов. Фермент, связавшийся с твердой фазой, инкубируют с субстратом,
тетраметилбензидином (ТМБ). Реакцию останавливают добавлением в лунки кислотного стоп-реагента, при
этом цвет раствора становится желтым. Интенсивность желтого окрашивания прямо пропорциональна
концентрации кальцитонина в образце. По калибраторам строится кривая зависимости оптической
плотности от концентрации кальцитонина. По этой калибровочной кривой определяют концентрацию
кальцитонина в контролях и исследуемых образцах.
4. МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
ИФА набор Biomerica Кальцитонин содержит реагенты, достаточные для выполнения 96 определений
(включая калибраторы и контроли) кальцитонин.
Необходимые реагенты, входящие в состав набора
Компоненты набора
RGT 1 – Реагент 1
RGT 2 – Реагент 2
RGT 3 – Реагент 3
RGT А – Реагент А
RGT В – Реагент В
SOLN – Стоп-реагент
PLA – Микропланшет
CAL – Калибраторы
A: 0 пг/мл
B:
C: Точные концентрации
D: указаны на этикетках
E: флаконов
F:
CTRL – Контроли 1 и 2
Точные диапазоны
концентраций указаны на
этикетках флаконов
Описание
Биотинилированные антитела к кальцитонину
Меченные пероксидазой (ферментом) антитела к
кальцитонину
Раствор для разведения, содержащий ЭДТА
Промывочный раствор, концентрат (солевой раствор с
добавкой поверхностно-активного вещества)
Субстрат ТМБ (тетраметилбензидин)
Стоп-реагент (1 N раствор серной кислоты)
Рамка со стрипами, покрытыми стрептавидином
Лиофилизированный синтетический человеческий
кальцитонин. Лиофилизированный калибратор 0 (раствор
БСА). Все остальные калибраторы содержат синтетический
кальцитонин (1-32) в растворе БСА; откалиброваны по 2-му
стандарту ВОЗ IS 89/620
Лиофилизированные, 2 уровня. Синтетический
человеческий кальцитонин (1-32) в растворе БСА
Количество
1 × 7 мл
1 × 7 мл
1 × 10 мл
1 × 30 мл
1 × 20 мл
1 × 20 мл
12 × 8-луночных
стрипов
1 × 2 мл для
калибратора 0
1 × 1 мл для
остальных
калибраторов
1 × 1 мл каждого
уровня
Необходимое оборудование и материалы, не входящие в состав набора
• Планшетный спектрофотометр, способный измерять оптическую плотность при длине волны 450 нм и
405 нм.
• Устройство для промывки микропланшетов (при отсутствии устройства возможна ручная промывка).
• Аттестованные автоматические пипетки, позволяющие вносить объемы 50, 100 и 150 мкл.
• (Необязательно): Многоканальная пипетка или шаговая пипетка, позволяющая вносить объемы 50, 100
и 150 мкл.
6. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Хотя все реагенты данного набора специально разработаны так, чтобы они не содержали компонентов
крови человека, исследуемые образцы крови пациентов могут быть положительными по антигенам
гепатитов В и С или антителам к ВИЧ, поэтому их следует считать потенциально инфекционно опасными. С
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
3
______________________________________________________________________________________________________
ними нужно обращаться, соблюдая необходимые меры предосторожности, как со всеми непроверенными
образцами.
Стоп-реагент содержит 1 N раствор серной кислоты. Это сильная кислота. Хотя в наборе используется
разведенная кислота, тем не менее, обращаться с ней следует осторожно. Она способна вызвать ожоги,
поэтому при работе с нею необходимо надевать защитные перчатки и очки, а также соответствующую
защитную одежду. При ее расплескивании немедленно промойте поверхности большим количеством воды.
Не вдыхайте ее пары, избегайте ингаляций кислоты.
7. ВЗЯТИЕ И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Определение кальцитонина следует проводить в образцах сыворотки крови. Для проведения анализа в
дубликатах требуется 200 мкл сыворотки крови. Возьмите кровь из вены в пробирки, не содержащие
антикоагулянта. После образования сгустка тщательно отделите сыворотку, предпочтительно на
охлаждающей центрифуге. Образцы хранят при температуре минус 20 °С и ниже. Не следует использовать
сильно гемолизированные или липемические образцы.
8. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ
Все компоненты набора, за исключением концентрата промывочного раствора и стоп-реагента, до
использования в соответствии с рекомендациями необходимо хранить при температуре 2 – 8 оС.
1.
2.
3.
Все реагенты, за исключением калибраторов, контролей и концентрата промывочного раствора,
готовы к использованию. Все компоненты набора, за исключением концентрата промывочного
раствора, необходимо хранить при температуре 2 – 8 оС. Концентрат промывочного раствора
следует хранить при комнатной температуре до разведения во избежание выпадения осадка.
Во флакон с калибратором А (нулевой стандарт) внести 2,0 мл дистиллированной или
деионизированной воды и перемешать. В каждый флакон с калибратором, кроме 0 (калибраторы B –
F), а также во флаконы с контролями набора 1 и 2 внести по 1,0 мл реагента 3 (Раствора для
разведения) и перемешать. Оставьте флаконы на 10 минут, затем тщательно перемешайте,
осторожно переворачивая флаконы, до полного растворения их содержимого. После растворения
используйте калибраторы и контроли как можно скорее. Оставшееся содержимое флаконов с
калибраторами и контролями заморозьте (при температуре минус 20°С) как можно скорее
после использования в морозильнике без функции саморазмораживания. Стандарты и
контроли стабильны при температуре минус 20 °С в течение 6 недель после растворения и
выдерживают 3 цикла замораживания-оттаивания при соблюдении рекомендаций по обращению с
ними, описанных в разделе «Замечания по процедуре исследования».
Реагент А; Промывочный раствор, концентрат. Тщательно перемешайте содержимое флакона с
концентратом промывочного раствора. Если во флаконе с концентратом выпал осадок из-за
хранения при пониженной температуре, такой как 4 оС, растворите его, поместив флакон в водяную
баню при 37 оС или в термостат, взбалтывая или перемешивая. Добавьте концентрат промывочного
раствора (30 мл) к 570 мл дистиллированной или деионизированной воды и перемешайте.
Разведенный рабочий раствор промывочного концентрата стабилен в течение 90 дней при хранении
при комнатной температуре.
9. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Вставить в рамку-держатель необходимое количество стрипов, покрытых стрептавидином. При
расчете количества лунок следует учесть лунки, необходимые для внесения всех шести (6)
КАЛИБРАТОРОВ кальцитонина от A до F (точные концентрации кальцитонина указаны на этикетках
флаконов), контролей набора и исследуемых образцов сыворотки крови. Составьте схему или
пронумеруйте лунки.
2. Внести в соответствующие лунки стрипов по 100 мкл образцов. Оставшиеся калибраторы и
контроли заморозить (при температуре минус 20 °С) как можно скорее после
использования в морозильнике без функции саморазмораживания.
3. Внести во все лунки, уже содержащие образцы, по 50 мкл Реагента 1 (биотинилированных
антител).
4. Внести во все (те же самые) лунки по 50 мкл Реагента 2 (меченных ферментом антител).
Закрыть планшет(ы) алюминиевой фольгой или крышкой для предотвращения попадания света.
Поместить планшет(ы) на орбитальный шейкер или вращающую мешалку при 170 + 10 об/мин и
инкубировать в течение 4 + 0,5 часов при комнатной температуре (22-28 оС).
5. Удалить полностью содержимое лунок. Затем тщательно промыть их пять (5) раз с помощью
автоматического устройства для промывки микропланшетов (режим промывка/отсасывание).
Каждый раз следует вносить по 0,35 мл разведенного рабочего раствора промывочного концентрата
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
4
______________________________________________________________________________________________________
(приготовленного из Реагента А) в каждую лунку.
Внести во все лунки по 150 мкл Реагент В (субстрата ТМБ).
Закрыть планшет(ы) алюминиевой фольгой или крышкой для предотвращения попадания света.
Поместить планшет(ы) на орбитальный шейкер или вращающую мешалку при 170 + 10 об/мин и
инкубировать в течение 30 + 5 минут при комнатной температуре (22-28 оС).
8. Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента. Осторожно перемешать содержимое лунок
планшета.
9. Измерить оптическую плотность (ОП) раствора не позже, чем через 10 минут с помощью
планшетного спектрофотометра при длине волны 450 нм против 250 мкл дистиллированной или
деионизированной воды. Снова измерить оптическую плотность раствора при длине волны 405
нм против дистиллированной или деионизированной воды.
Примечание: второе измерение оптической плотности необходимо для повышения аналитической
точности измерений по калибровочной кривой для значений, лежащих в области высшего
калибратора (обычно около 1000 пг/мл). Таким образом, измерение концентрации кальцитонина в
образце сыворотки крови пациента с концентрациией >300 пг/мл проводится по калибровочной
кривой, построенной с использованием длины волны 405 нм, а не длины волны с максимумом
поглощения, поскольку концентрации кальцитонина исследуемого образца эквивалентны
концентрации наивысшего калибратора. В целом, концентрации кальцитонина в образцах
сыворотки крови пациентов и в контролях следует измерять при 450 нм, если концентрации
кальцитонина менее 300 пг/мл. Если концентрации кальцитонина превышают 300 пг/мл, следует
проводить интерполяцию с использованием длины волны 405 нм.
10. Используя значения оптических плотностей, полученные на предыдущем этапе, построить
калибровочную кривую с помощью режимов кубического сплайна, 4-параметрической логистики или
интерполяции от точки к точке и вычислить концентрацию кальцитонина.
6.
7.
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОЦЕДУРЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
• Кальцитонин 1-32 – очень лабильная молекула. Проводите анализ сразу после растворения или
размораживания всех калибраторов, контролей или исследуемых образцов сыворотки крови пациентов.
• Рекомендуется исследовать все калибраторы, контроли или образцы сыворотки крови пациентов в
дубликатах. Среднее арифметическое значение оптической плотности дубликатов следует затем
использовать для обработки данных и вычисления результатов.
• Образцы следует вносить в лунки, избегая образования пузырьков воздуха. Для этого рекомендуется
использовать способ «обратного пипетирования», описанный производителем на вкладыше к
автоматической пипетке.
• Образцы сыворотки крови пациентов с концентрацией, превышающей концентрацию кальцитонина в
наивысшем калибраторе (калибраторе F), которая составляет около 1000 пг/мл (точная концентрация
указана на этикетке флакона), могут быть разведены калибратором А (0 пг/мл) и исследованы снова.
Полученный результат умножают на коэффициент разведения.
• Не допускается использование реагентов из наборов других серий.
• Предпочтительно смешать в равных объемах необходимое для анализа количество Реагента 1
(биотинилированных антител) и Реагента 2 (меченных ферментом антител) в чистом желтом флаконе.
Эта смесь реагентов стабильна в течение семи (7) дней при хранении при температуре 4°С. Затем
внести в каждую лунку по 100 мкл смеси антител. Этот альтернативный способ заменяет пункты (3) и
(4). Вслед за этим планшет инкубируют на орбитальном шейкере.
• При перемешивании избегайте выплескивания реагентов из лунок. Это влияет на воспроизводимость и
точность анализа.
10. РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Расчет вручную
1. Для измерения при длине волны 450 нм построить калибровочную кривую, используя имеющиеся
в наборе первые пять калибраторов, т.е. калибраторы A, B, C, D и E. Для измерения при длине
волны 405 нм построить другую калибровочную кривую, используя три калибратора с самой
высокой концентрацией, т.е. калибраторы D, E и F.
2. Уточнить концентрацию каждого калибратора, указанную на этикетке флакона в пг/мл. На
миллиметровой бумаге отложить значения концентраций кальцитонина в калибраторах на оси Х,
значения соответствующих оптических плотностей - на оси Y.
3. Соединить соседние точки на графике прямой линией. Такой математический алгоритм обычно
называется построением «от точки к точке». Вычислить концентрацию кальцитонина в образце,
откладывая значение оптической плотности на оси Y и находя соответствующее значение
концентрации на оси Х. При концентрации кальцитонина до 300 пг/мл оптическую плотность
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
5
______________________________________________________________________________________________________
исследуемых образцов сыворотки крови и контрольных образцов измеряют при длине волны 450
нм. При концентрации кальцитонина выше 300 пг/мл следует проводить интерполяцию
концентраций, используя для измерения оптической плотности длину волны 405 нм.
Автоматический расчет
Оптимальные результаты обычно получают при использовании компьютерных программ с применением
кубического сплайна, 4 PL (4-параметрической логистики) или построения от точки к точке.
Пример расчета при 450 нм (ОП в рядах против дистиллированной или деионизированной воды)
Концентрация
Концентрация кальцитонина,
Лунки
1-е измерение, 2-е измерение,
Среднее
кальцитонина,
пг/мл,
планшета
ОП
ОП
значение, ОП
пг/мл
результат в
распечатке
Калибратор A
0,008
0,009
0,0085
0
Калибратор B
0,059
0,064
0,0615
10
Калибратор C
0,186
0,194
0,190
30
Калибратор D
0,578
0,602
0,590
100
Калибратор E
1,900
1,882
1,891
300
Контроль 1
0,127
0,122
0,125
20,6
20,6
Контроль 2
2,554
2,565
2,560
> 300
*
Образец 1
0,034
0,040
0,037
4,7
4,7
Образец 2
0,104
0,098
0,101
16,3
16,3
Образец 3
0,397
0,411
0,404
68,7
68,7
Образец 4
2,195
2,173
2,184
> 300
*
* Поскольку концентрация кальцитонина > 300 пг/мл, рекомендуется использовать данные, полученные при
длине волны 405 нм, из таблицы Пример расчета, приведенной ниже.
Пример расчета при 405 нм (ОП в рядах против дистиллированной или деионизированной воды)
Концентрация
Концентрация кальцитонина,
Лунки
1-е измерение, 2-е измерение,
Среднее
кальцитонина,
пг/мл,
планшета
ОП
ОП
значение, ОП
пг/мл
результат в
распечатке
Калибратор A
0,005
0,005
0,005
0
Калибратор D
0,187
0,198
0,193
100
Калибратор E
0,602
0,597
0,599
300
Калибратор F
1,898
1,910
1,904
1000
Контроль 1
0,045
0,044
0,045
< 300
¶
Контроль 2
0,814
0,816
0,815
403
403
Образец 1
0,016
0,020
0,018
< 300
¶
Образец 2
0,039
0,035
0,037
< 300
¶
Образец 3
0,128
0,134
0,131
< 300
¶
Образец 4
0,697
0,689
0,693
345
345
Для образцов со значением концентрации кальцитонина < 300 пг/мл рекомендуется использовать данные,
полученные при длине волны 450 нм, из таблицы Пример расчета, приведенной выше. При таком способе
получают результаты с оптимальной чувствительностью данного анализа.
ПРИМЕЧАНИЕ: Эти данные приведены только с иллюстративными целями, их не следует
использовать вместо данных, получаемых во время анализа.
11. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контрольные образцы сыворотки или пулы сыворотки следует вводить в каждый анализ наряду с
калибраторами и исследуемыми образцами сыворотки крови пациентов. Правильность результатов
анализа контрольных образцов следует оценивать с помощью соответствующих статистических методов.
Если концентрации кальцитонина в одном или более образцах контроля качества выходят за рамки
рассчитанных диапазонов, результаты анализа образцов сыворотки крови пациентов могут оказаться
неправильными.
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
6
______________________________________________________________________________________________________
12. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА
ИФА набор Biomerica Кальцитонин не дает прозонного эффекта до концентрации внесенного в образцы
очищенного интактного кальцитонина (1-32) 1000 000 пг/мл. Образцы с внесенным кальцитонином имели
концентрацию выше, чем у наивысшего калибратора, т.е. 1000 пг/мл. Несмотря на это, для получения
верных результатов образцы с уровнем кальцитонина, превышающим концентрацию наивысшего
калибратора, следует развести и исследовать повторно.
Как и в случае любого аналита, использующегося для целей диагностики, результаты анализа
кальцитонина всегда должны интерпретироваться в совокупности с другими клиническими данными и
результатами других лабораторных исследований.
13. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные референтные значения. Значения,
приведенные ниже, могут служить только в качестве ориентировочных. Концентрацию кальцитонина
измеряли с помощью ИФА набора Biomerica Кальцитонин у пятидесяти девяти (59) здоровых женщин и у
пятидесяти двух (52) здоровых мужчин. Полученные значения варьировали от 0,1 до 10,9 пг/мл у женщин и
от 0,2 до 27,7 пг/мл у мужчин. На основании статистических тестов асимметрии и эксцесса при
логарифмической трансформации установлено, что для популяции характерно нормальное или Гауссово
распределение, что и показано на гистограмме. Геометрическая средняя + 2 стандартных отклонения от
средней составила от 0,07 до 12,97 пг/мл для здоровых женщин и от 0,68 до 30,26 пг/мл для здоровых
мужчин. В соответствии с литературными данными 2,9 уровни кальцитонина оказались значительно ниже у
здоровых женщин, чем у здоровых мужчин. Следовательно, референтные значения должны быть ниже 13
пг/мл и 30 пг/мл для женщин и мужчин, соответственно.
14. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Правильность
Семьдесят семь образцов сыворотки крови пациентов с концентрацией кальцитонина от 0,8 до 3113 пг/мл
исследовали ИФА набором Biomerica Кальцитонин и иммунорадиометрическим (IRMA) набором для
определения кальцитонина ImmunoRarioMetricAssay Calcitonin. С помощью линейно-регрессионного
анализа получены следующие статистические значения:
Biomerica ELISA = 0,940 набор IRMA + 6,55 пг/мл
r = 0,993 N = 123
Далее, пятьдесят один образец сыворотки крови пациентов с концентрацией кальцитонина от <0,7 до 2240
пг/мл исследовали набором Biomerica Кальцитонин ИФА и хемилюминесцентным (IСMA) набором для
определения кальцитонина ImmunoChemiluminescentMetricAssay. С помощью линейно-регрессионного
анализа получены следующие статистические значения:
Biomerica ELISA = 1,094 набор IСMA - 6,13 пг/мл
r = 0,995 N = 123
Чувствительность
Чувствительность или минимально определяемую концентрацию анализа оценивали как наименьшее
значение концентрации, которое можно отличить от нуля при 95% доверительном интервале. ИФА набор
Biomerica Кальцитонин имеет чувствительность 1,0 пг/мл.
Точность и воспроизводимость
Точность ИФА набора Biomerica Кальцитонин оценивали по коэффициенту вариации в пределах одной
постановки, проводя 20 повторных исследований трех образцов сыворотки крови с различной
концентрацией кальцитонина.
Вариабельность в пределах постановки
Образец
А
В
С
Среднее значение
(пг/мл)
24,3
94,9
403
N
Коэффициент вариации, %
20
20
20
5,7
4,3
2,8
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
7
______________________________________________________________________________________________________
Общую точность ИФА набора Biomerica Кальцитонин оценивали по коэффициенту вариации между
постановками, проводя исследования трех образцов сыворотки крови с различной концентрацией
кальцитонина в 15 разных постановках двумя разными сериями наборов реагентов на протяжении
трехнедельного периода, причем анализы ставили трое лаборантов.
Вариабельность между постановками
Образец
А
В
С
Среднее значение
(пг/мл)
16,5
64,5
340
N
Коэффициент вариации, %
15
15
15
7,4
7,4
6,1
Открытие
Для определения открытия к четырем различным образцам сыворотки крови пациентов добавляли разные
количества кальцитонина. Результаты приведены в таблице:
Образец
сыворотки
A
B
C
D
Эндогенный
кальцитонин
(пг/мл)
0
0
0
9,7
8,7
7,8
0
0
0
5,7
5,1
4,6
Добавленный
кальцитонин
(пг/мл)
100
200
100
200
100
200
126
220
Ожидаемые
значения
(пг/мл)
100
200
109
208
100
200
131
225
Измеренные
значения
(пг/мл)
110
217
106
207
104
205
119
203
Открытие
(%)
110%
109%
97%
100%
104%
103%
91%
90%
Специфичность и перекрестная реактивность
Перекрестную реактивность ИФА набора Biomerica Кальцитонин определяли, добавляя различные
реагенты в образец, содержащий кальцитонин. Уровни кальцитонина определяли до и после внесения
добавленного реагента. Ни один из реагентов не давал перекрестных реакций в ИФА наборе Biomerica
Кальцитонин.
Небольшие колебания измеренных концентраций кальцитонина соответствуют
статистической вариации в пределах одной постановки.
Добавляемый
реагент
PTH (1-84)
Пептид, связанный
с
геном
кальцитонина
Кальцитонин
лосося
ТТГ
Концентрация
добавляемого
реагента
Концентрация
кальцитонина
без
добавляемого
реагента
(пг/мл)
Концентрация
кальцитонина
с
добавляемым
реагентом
(пг/мл)
Изменения
концентрации
кальцитонин
(пг/мл)
%
перекрестной
реакции
100 000 пг/мл
30 000 пг/мл
10 000 пг/мл
1000 000 пг/мл
186
186
186
200
194
200
194
202
8
14
8
2
0,00800%
0,04667%
0,08000%
0,00020%
100 000 пг/мл
200
204
4
0,00400%
1000 000 пг/мл
100 000 пг/мл
5000 мкМЕ/мл
500 мкМЕ/мл
50 мкМЕ/мл
191
191
198
198
198
194
199
203
193
199
3
8
5
0
1
0,00030%
0,00800%
0,00061%
0,00000%
0,01220%
Кинетика анализа
Для определения, имеется ли какой-либо кинетический сдвиг между началом и концом анализа, три пула
сыворотки крови с разным количеством добавленного кальцитонина последовательно вносили в лунки
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
Calcitonin ELISA, Biomerica, Inc.
8
______________________________________________________________________________________________________
одного цельного или стрипованного (состоящего из двенадцати 8-луночных стрипов) микропланшета на
протяжении анализа.
Линейность при разведении образца сыворотки крови пациента: параллелизм
Образец
A
B
C
D
Е
F
Разведение
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
1:16
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
1:16
Ожидаемые
значения
(пг/мл)
172
85,8
42,9
136
67,8
33,9
133
66
33,1
530
265
116
57,8
28,9
14,4
499
249
125
Измеренные
значения
(пг/мл)
343
168
81,3
40,3
271
131
70
34,3
265
134
70,4
32,5
> 1000
1060
504
271
231
116
58,8
27,1
12,1
> 1000
997
429
223
119
% Измеренные ÷
ожидаемые
значения
98%
95%
94%
97%
103%
101%
101%
106%
98%
95%
102%
100%
102%
94%
84%
86%
89%
95%
Шесть образцов сыворотки крови пациентов разводили калибратором А (нулевым калибратором).
Результаты в пг/мл приведены в таблице.
15. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Calcitonin.doc
2/5/2010 4:04:00 PM
Оригинал: Calcitonin ELISA
67024_eng.doc
November 2006
______________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]