Диссертация - Бурятская государственная сельскохозяйственная
реклама
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БУРЯТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ В. Р. ФИЛИППОВА» на правах рукописи БУЯНТУЕВА Дарима Тумэновна БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ СПОСОБЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ СВИНОВОДСТВА 06.02.10 - Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Д И С С Е Р Т А Ц И Я на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор, Заслуженный ветеринарный врач РФ МУРУЕВ А.В. Улан-Удэ 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Краткая характеристика породного состава свиней, разводимых в 11 России 1.2. Половая система свиней и изменения в ней при различных физиологических состояниях 21 1.3. Нейрогуморальная регуляция репродуктивной функции свиней 29 1.4. Особенности постнатального развития и нейрогуморальная регуляция процессов роста и развития молодняка сельскохозяйственных животных 1.5. Использование 36 биотехнологических методов в развитии 41 животноводства Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и условия проведения исследований 51 2.2. Методы исследования 52 2.2.1. Методика стимуляции репродуктивной функции свиней 52 2.2.2. Методика стимуляции процессов роста и развития поросят в 54 период постнатального онтогенеза Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Морфофункциональная реакция яичников свиноматок на экзогенную инъекцию Фоллимага (ГСЖК) 66 3.2. Повышение плодовитости свиней биотехнологическим способом 75 3.3. Индуцирование синтеза соматотропного гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза 78 3.4. Эффективность применения синтетического аналога рилизинггормона в постнатальный период 82 3.5. Концентрация гипофизарных гормонов в крови и в мясе животных опытной и контрольной групп 86 3.6. Экономическая эффективность результатов исследований 88 3 ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 92 ВЫВОДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 100 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 102 ПРИЛОЖЕНИЯ 117 4 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы. В настоящее время одной из основных проблем агропромышленного комплекса России является обеспечение еѐ населения мясной продукцией собственного производства. Реализовать эту проблему в ближайшие годы можно лишь в том случае, если наряду с другими отраслями животноводства особое внимание уделить развитию свиноводства как наиболее скороспелой и технологичной отрасли. К сожалению, высокий биологический потенциал свиней для увеличения производства мяса в нашей стране используется недостаточно. Известно, что поголовье свиней в России в 1991-2002 гг. сократилось более чем в 2 раза, с 38,3 млн.голов в 1990 г. до 16 млн.голов в 2002 г., а производство свинины за эти годы уменьшилось с 3,4 млн.т.до 1,6 млн.т., что сравнимо с уровнем 1960 г. (Гегамян Н., Стариков А., 2003). Потребление свинины на душу населения уменьшилось и составило 11 кг в 2002 г. при норме 24 кг и выше. В 50% регионов производство свинины на душу населения находится в кризисном состоянии (менее 10 кг). Кроме того, снизилась интенсивность роста живой массы (среднесуточный прирост 200-230г) и качество животных, возросли затраты корма и труда, генетический потенциал свиней используется лишь на 20-50% (Гегамян А., Эрнст Л.В., 2003; Мысик А.Т., 2010). В связи с вышеуказанным, такая неблагоприятная ситуация вынудила и обусловила необходимость разработки научной концепции по восстановлению и развитию животноводства в новых экономических условиях. Разработанной Концепцией развития животноводства России на 20052010 годы, одобренной научной сессией Россельхозакадемии и коллегией Министерства сельского хозяйства Российской Федерации предусматривается доведение производства свинины во всех категориях хозяйств в убойной массе соответственно до 2,1 и 3,3 млн. тонн. Кроме того, Указом Президента РФ от 30 января 2010 года утверждена Доктрина 5 продовольственной безопасности РФ, где стратегической целью продовольственной безопасности указано обеспечение населения нашей страны безопасной животноводческой продукцией. Гарантией ее достижения является стабильность и увеличение объемов внутреннего производства, а также наличие и создание необходимых резервов и запасов, имеющих пороговые значения в отношении: зерна – не менее 95%; сахара – не менее 80%; растительного масла – не менее 80%; мяса и мясопродуктов (в пересчете на мясо) - не менее 90% (Колбасов Д.В., 2011). В связи с вышеизложенным, для успешной реализации данной Доктрины продовольственной безопасности РФ, существующие традиционные методы производства продукции животноводства, безусловно, еще не утратили своего значения и еще некоторое время будут определять темпы производства животноводческой продукции. Но, вместе с тем, следует отметить, что во многих развитых странах в настоящее время наблюдается бурный рост интереса к производству животноводческой и другой сельскохозяйственной продукции методами инновационных технологий, а именно - «Биотехнологий» и «Бионанотехнологий», т.к. данные отрасли науки определяют научно-технический прогресс любой страны, обеспечивают ее оборонную и продовольственную безопасность и заметно улучшают качество жизни населения этой страны. Таким образом, интенсивное развитие свиноводства возможно при полном использовании биологических возможностей животных для получения максимума приплода. Поэтому приоритетными направлениями в области свиноводства производства является свинины, внедрение дающих интенсивных технологий конкурентоспособную и высококачественную свинину, в частности - разработка и внедрение эффективных бионанотехнологических способов повышения воспроизводительных качеств свиноматок и прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. 6 Цель и задачи исследования. Цель настоящих исследований заключается в интенсификации воспроизводительных способностей свиноматок путем повышения их плодовитости и стимуляции прироста живой массы поросят методом активизации обменных процессов на ранней стадии их постнатального онтогенеза гормональными, биологически активными препаратами. В связи с вышеизложенным, учитывая актуальность и практическую значимость данной проблемы, для достижения указанной цели в задачу настоящих исследований входили: 1. Изучить морфофункциональную яичников свиноматок на суперовуляторную гормональную реакцию стимуляцию репродуктивной функции путем экзогенного введения препарата Фоллимаг; 2. Определить оптимальную дозу экзогенного введения Фоллимага в повышении оплодотворяемости и плодовитости свиноматок; 3. Определить эффективность гормональной стимуляции репродуктивной функции свиней по количеству полученного приплода после введения Фоллимага; 4. Изучить влияние гипоталамуса синтетического (рилизинг-гормона) на аналога нейросекрета индуцирование синтеза соматотропного гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза; 5. Установить динамику прироста живой массы поросят в зависимости от уровня индуцируемого синтеза соматотропного гормона в крови поросят. Научная новизна. Новыми в диссертационной работе является разработка эффективных биотехнологических способов повышения плодовитости свиноматок и стимуляции прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Экспериментально на животных разработан эффективный биотехнологический способ повышения плодовитости свиней за счет максимального индуцирования проявления 7 генетического и биохимического потенциала самих свиноматок, заложенных в их генотипе. Впервые в технологии ведения свиноводства изучена возможность индукции синтеза соматотропного гормона (СТГ) гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза. Впервые получены данные концентрации соматотропного гормона (СТГ) в крови поросят на ранней стадии постэмбрионального онтогенеза до и после инъекции синтетического аналога рилизинг-гормона «Сурфагон». Научная новизна работы подтверждена выдачей патента на изобретение РФ №2496448 «Биотехнологический способ стимуляции прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза» от 27.10.2013 г. (заявка № 20121234564 от 06.06.2012 г.). Практическая значимость. Материалы исследования имеют теоретическое и важное практическое значение и послужат основанием для дальнейших поисков и разработок новых эффективных способов индуцирования синтеза гипофизарных гормонов при интенсификации технологии ведения свиноводства и производства ее продукции. Разработанные биотехнологические способы дают возможность данной отрасли животноводства значительно снизить себестоимость производимой продукции за счет производительности ресурсо- труда и энергосбережения, работников свиноводства, повышения и повысить конкурентоспособность производимой продукции. Результаты наших исследований могут быть использованы не только в научно-исследовательской работе и в животноводческой практике, но и в учебном процессе при изучении учебных дисциплин: физиологии, разведения сельскохозяйственных животных, акушерства и фармакологии в зооинженерном и ветеринарном факультетах высших учебных заведений. Кроме того, результаты исследований могут быть использованы не только в свиноводстве, но и в овцеводстве, особенно мясного направления. Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационной работы внедрены и используются в подсобном хозяйстве 8 Управления федеральной службы исполнения наказаний Российской Федерации по Республике Бурятия (УФСИН РФ по РБ) в период с 2012 года и по настоящее время (Акты внедрения от 12.01.2012 г., от 25.08.2012 г.). Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе: кафедры хирургии, акушерства и биотехнологии студентами факультета ветеринарной медицины в ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В. Р. Филиппова», в учебном процессе кафедры ветеринарного акушерства и гинекологии им. И.А. Бочарова ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»; кафедры анатомии, акушерства и хирургии ФГБОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия»; кафедры специальных ветеринарных дисциплин ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия», а также в учебном процессе кафедры патологии, физиологии и морфологии ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий. Кроме того, экспериментальные материалы, научные выводы и положения диссертационной работы соискателя включены в лекцию «Биотехнология воспроизводства свиней» и используются при проведении лабораторнопрактических занятий по теме: «Организация искусственного осеменения свиней на предприятиях промышленного типа» со студентами факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия». Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на: ● Международной научно-практической конференции «Инновационные технологии в животноводстве», посвященной юбилею доктора с.-х. наук, профессора, Заслуженного зоотехника РФ И.И. Виноградова, Чита, 2009 г. 9 ● Международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве», посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Бурятская ГСХА имени В.Р. Филиппова», Улан-Удэ, 2009 г. ● Международной научно-практической конференции «Инновационному развитию АПК - научное обеспечение», посвященной 80летию Пермской ГСХА имени Д.Н. Прянишникова, Пермь, 2010 г. ● Международной научно-практической ветеринарной науки в безопасности Российской реализации Федерации», конференции Доктрины ГНУ «Задачи продовольственной Всероссийский НИИ вирусологии и микробиологии РАСХН, Покров, 2011 г. ● XIV Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности и экономике», Институт прикладных исследований и технологий, Институт оптики атмосферы Сибирского отделения РАН, Российский государственный гидрометеорологический университет, Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург, 2012. ● VIII Международной научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскому хозяйству», посвященной 70-летию Алтайского ГАУ, Барнаул, 2013. ● Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири», посвященной 100-летию профессора Василия Родионовича Филиппова, Улан-Удэ, 2013 г. ● Ежегодной научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р.Филиппова», Улан-Удэ, 2010, 2011, 2012 гг. 10 Публикации. Материалы диссертационной работы достаточно полно отражены и опубликованы в 16 научных статьях, в том числе 2 работы в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 128 страницах компьютерного текста, состоит из введения и 4-х глав (обзор литературы, материал исследования и обсуждение практических предложений, и методика полученных списка исследования, результатов), литературы, результаты выводов, содержащих 112 отечественных и 39 иностранных источников и приложений. Диссертация иллюстрирована 9 таблицами и 15 рисунками. Основные положения, выносимые на защиту: ▪ Морфофункциональная реакция яичников свиней в зависимости от введенной дозы препарата Фоллимаг; ▪ Воспроизводительные качества свиней по количеству принесенного потомства после стимуляции репродуктивной функции Фоллимагом; ▪ Показано, что синтетический аналог рилизинг-гормона индуцирует синтез соматотропного (СТГ) гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза. ▪ Установлено, что индуцированный синтез СТГ гипофизом поросят стимулирует прирост живой массы поросят в постэмбриональный период их онтогенеза. 11 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Краткая характеристика породного состава свиней, разводимых в Российской Федерации В настоящее время в мире разводится более 400 разнообразных, как по масти, так и по направлению продуктивности пород свиней. Большинство из них выведены за счет скрещивания целого ряда пород, на основе целеустремленного отбора лучших животных, подбора по желательному типу и направленного выращивания новых поколений (Мысик А.Т., 1984, Кабанов В.Д., 2001). В Российской Федерации разводят свиней 22 пород и 8 породных групп, в том числе 19 - созданные за годы Советской власти или подвергшиеся длительной акклиматизации, хорошо приспособленные к условиям зон своего распространения. (Эрнст Л.К., Дмитриев Н.Г., Порошин И.А., 1994, Никульников В.С., Кретинин В.К., 2007). Разведение большого числа пород свиней было обусловлено разнообразием природно-климатических зон России и необходимостью иметь в каждом регионе несколько контрастных пород для организации промышленного скрещивания. Породообразовательный процесс начался во второй половине XIX века, особенно большой размах этот процесс получил в 30-50-х годах прошлого столетия и продолжается в настоящее время. В методах создания отечественных пород много общего: воспроизводительное скрещивание аборигенных групп животных, обладающих такими ценными качествами, как неприхотливость, приспособленность к местным климатическим условиям, крепость конституции и устойчивость к ряду заболеваний, с животными европейских заводских, высокопродуктивных пород; закрепление ценных качеств исходных животных путем целенаправленного отбора и подбора в нескольких поколениях. Для улучшения аборигенных пород в помещичьи хозяйства России в середине-конце XIX в. завозили свиней йоркширской (средней и крупной 12 белой), беркширской, линкольнской, суффольской, темноворской, датской, польско-китайской, крупной черной, белой короткоухой (немецкая благородная) и некоторых других пород. Путем скрещивания местных и завозных пород во многих районах России были созданы большие массивы улучшенных свиней, сыгравших большую роль в создании отечественных культурных пород. Все необходимые условия для создания новых отечественных пород были созданы после выхода Декрета о племенном животноводстве 1918 г., когда Советским правительством были намечены меры по охране племенных животных и организации специальных рассадников племенного поголовья. Начало породообразованию в нашей стране положил профессор Московского института животноводства, академик ВАСХНИЛ М.Ф. Иванов, который в 1926 г. теоретически обосновал и за короткое время создал новую породу свиней - украинская степная белая. Дальнейшую работу по совершенствованию породы продолжил ближайший соратник М.Ф. Иванова академик Л.К. Гребень. Большой вклад в теорию и практику племенной работы по выведению новых пород свиней в довоенный период внес профессор А.Ф. Бондаренко. Им выведены высокопродуктивные заводские линии крупной белой породы свиней - Богдана, Тараса и заводские семейства Рекордной, Гарной, Любительской, которые сыграли большую роль в улучшении племенного свиноводства. Кроме того, А.Ф. Бондаренко первым организовал племенную работу с миргородскими улучшенными рябыми свиньями и в результате его работы была создана новая миргородская порода свиней, которая была апробирована в 1940 г. В Сибири М.О. Симон на основе скрещивания местных свиноматок с хряками крупной белой породы, путем длительной целенаправленной селекционной работы создал новую сибирскую северную породу. На опыте работы по созданию украинской степной белой, миргородской и сибирской северной пород в нашей стране были уже четко сформулированы и проверены на практике основные приемы и методы селекционно-племенной 13 работы, позволяющие резко повышать продуктивность свиней при меньших затратах кормов на продукцию. Основные плановые породы свиней в нашей стране представлены в таблице 1. Таблица 1 - Породный состав свиней в России Породы универсального направления продуктивности Брейтовская Ливенская Белорусская черно-пестрая Муромская Кемеровская Северокавказская Крупная белая Сибирская северная Латвийская белая Семиреченская Литовская белая Украинская степная белая Породы мясного направления продуктивности Эстонская беконная Уржумская Породы сального направления продуктивности Миргородская Украинская степная рябая Породные группы (универсального направления продуктивности) Аксайская черно-пестрая Цивильская Кахетинская В настоящее время самой распространенной породой в нашей стране является крупная белая. В результате длительной селекционной работы тип крупной белой породы свиней коренным образом преобразован, изменены ее биологические и наследственные качества. От крупных белых свиней Англии отечественные отличаются более крепкой конституцией, повышенным многоплодием и лучшей приспособленностью к условиям содержания. Огромный вклад в развитие отечественного свиноводства, и в частности в систематизацию крупной белой породы, внес Н.Н. Завадовский. 14 Порода доминирует в племенном поголовье - на ее долю в России приходится не менее 85% (в Центральном Черноземье - свыше 90%). Брейтовская порода свиней выведена путем сложного воспроизводительного скрещивания в колхозах Ярославской области под руководством директора Брейтовского государственного племенного рассадника В.М. Федорина и зоотехника-селекционера этого рассадника Г.Ф. Махониной. Брейтовская порода утверждена в 1948 году. Наиболее ценными качествами брейтовской породы свиней являются ее неприхотливость, хорошая приспособленность к климатическим условиям Северо-Западной зоны РФ, способность использовать в большом количестве объемистые корма и давать хороший прирост массы при малоконцентратном типе кормления, а также высокие диетические и вкусовые качества мяса. В настоящее время животные брейтовской породы широко используются при выведении Западного типа новой российской мясной породы свиней. Белорусская черно-пестрая порода создана по инициативе и непосредственном участии Н.М. Замятина коллективом ученых Белорусского научно-исследовательского института животноводства и селекционеров племенных хозяйств. В процессе выведения новой породы проводился интенсивный отбор и однородный подбор животных по основным продуктивным показателям, крепости конституции и жизнеспособности. Порода была утверждена в 1976 году. Животные белорусской черно-пестрой породы отличаются повышенной устойчивостью к заболеваниям и стрессам. Работа по дальнейшему совершенствованию свиней белорусской черно-пестрой породы направлена на повышение многоплодия, мясных качеств, приспособленности к условиям разведения на промышленных комплексах. Кемеровская порода свиней выведена в Кемеровской области под руководством А.И. Овсянникова и Г.И. Гудилина методом сложного воспроизводительного скрещивания местных сибирских свиней с хряками 15 крупной белой породы, беркширской и частично крупной черной пород. При создании отдельных линий и семейств использовались хряки сибирской северной породы и сибирской черно-пестрой породной группы. Порода утверждена в 1961 г. Свиньи кемеровской породы хорошо приспособлены к суровым условиям континентального климата Сибири и Северного Казахстана, отличаются выносливостью и высокой жизнеспособностью, широко используются в скрещивании с плановыми породами Сибири крупной белой, сибирской северной и ландрас. Латвийская белая порода свиней выведена под методическим руководством Латвийского научно-исследовательского института животноводства и ветеринарии путем скрещивания местных свиней с крупными белыми и частично немецкими короткоухими белыми свиньями в хозяйствах Курземского и Видземского государственных племенных рассадников. Основной улучшающей породой была крупная белая, поэтому тип, конституция и экстерьер сходны с этой породой. Порода утверждена в 1967 году. В Латвии латвийская белая порода является плановой, в общем поголовье породных свиней республики составляет 95,8%. В системах скрещивания используется как материнская порода, разводится во всех районах Латвии. Литовская белая порода выведена путем сложного воспроизводительного скрещивания местных свиней с хряками крупной белой, немецкой короткоухой и немецкой длинноухой пород специалистами Шедувского, Укмерского и Шакяйского Государственных племенных рассадников, под руководством и непосредственном участии сотрудников Литовского научно-исследовательского института животноводства. Порода утверждена в 1967 г. В связи с тем, что самое большое влияние на формирование литовских белых свиней оказала крупная белая порода, по типу конституции, экстерьеру и продуктивности литовские белые свиньи схожи с животными крупной белой породы, но встречаются животные с недостатками телосложения: слабые бабки, перехват за лопатками, 16 недостаточная оброслость. Селекционная работа с породой ведется в направлении совершенствования мясных и откормочных качеств и устранения экстерьерных недостатков. Ливенская порода свиней выведена в Орловской области в результате воспроизводительного скрещивания местных длинноухих свиней с хряками крупной белой, беркширской и польско-китайской пород под руководством Н.Н. Коровецкой. Порода утверждена в 1949 году. Специфическими особенностями породы являются хорошая приспособленность к природным и кормовым условиям ее обитания и высокие качества мяса. Так, например, по интенсивности окраски мясо свиней ливенской породы превосходит все другие породы свиней, разводимые в нашей стране. Основное направление селекции - повышение многоплодия свиноматок и улучшение откормочных и мясных качеств. Муромская порода свиней выведена во Владимирской области путем воспроизводительного скрещивания местных свиней с литовской белой и крупной белой породами под руководством А.П. Редькина и И.А. Савичева. Порода утверждена в 1957 году. По конституции и экстерьеру животные муромской породы сходны с крупными белыми свиньями. Голова легкая, с небольшим изгибом профиля; уши умеренно длинные, свисающие вперед; грудь широкая и глубокая; спина ровная и широкая; масть белая, щетина густая, равномерно покрывающая туловище. Основная селекционная работа направлена на повышение многоплодия, молочности свиноматок и улучшения мясных качеств. Северокавказская порода свиней выведена в совхозах и колхозах Ростовской области и Краснодарского края под руководством П.Е. Ладана путем сложного воспроизводительного скрещивания местных кубанских свиней с крупной белой, беркширской и белой короткоухой породами. Порода утверждена в 1955 году. Животные северокавказской породы характеризуются крепкой конституцией. Селекция свиней северокавказской породы направлена на дальнейшее улучшение мясных и откормочных 17 качеств. На основе северокавказской породы выведен и утвержден в 1978 г. новый высокопродуктивный донской заводской тип мясных свиней (ДМ-1). Сибирская северная порода свиней выведена в Новосибирской области методом простого воспроизводительного скрещивания местных короткоухих свиней с хряками крупной белой породы. Работа проводилась под руководством М.О. Симона. В процессе выведения породы при разведении помесей «в себе» широко применялся однородный подбор с использованием различных степеней инбридинга и жесткая браковка животных в каждом поколении, не удовлетворяющих требованиям будущей породы. Сибирская северная порода утверждена в 1942 году. Свиньи сибирской северной породы крепкой конституции, гармоничного телосложения. Сибирская северная порода свиней по своим хозяйственно-полезным признакам не уступает крупной белой породе, но превосходит ее в отношении выносливости и приспособленности к суровым условиям северной части Сибири. Хорошая оброслость щетиной и подшерсток служат естественной защитой от сильных морозов зимой, а летом предохраняют животных от укусов комаров и мошек, от которых страдают свиньи крупной белой породы. Генеалогическую структуру породы составляют 8 линий хряков и 12 семейств свиноматок. Порода разводится и совершенствуется в племенном совхозе «Ояшинский», в опытном хозяйстве «Боровское» Сибирского научно-исследовательского и проектно-технологического института животноводства и в племенном хозяйстве «Красный Октябрь» Красноярского края. Сибирские северные свиньи районированы и используются в системах скрещивания в Новосибирской области, Красноярском крае, республике Бурятия и в Казахстане. Селекция сибирской северной породы продолжается в направлении совершенствования откормочных и мясных качеств. В процессе селекции используется иммуногенетический анализ, который позволяет контролировать достоверность происхождения животных, интенсивность 18 селекционного давления и продолжать генетическое сходство каждого поколения с родоначальниками линий родственных групп. Семиреченская порода свиней выведена специально для условий юговосточного Казахстана, которые характеризуются резко-континентальным климатом, высокой температурой летом (480С) с большими перепадами дневных и ночных температур (от 480С до 50С), холодной (до -500С) и малоснежной зимой. Порода выводилась под руководством сотрудников института экспериментальной биологии Академии наук Казахстана. Семиреченская порода свиней утверждена в 1978 году. Свиньи семиреченской породы сочетают в себе высокую продуктивность заводских пород и крепость конституции дикого кабана, отличаются устойчивостью к экстремальным климатическим условиям юговостока Казахстана, несмотря на белую масть, не страдают от солнечных ожогов. Семиреченские свиньи более устойчивы к ряду заболеваний, чем свиньи других пород. При разведении в промышленных комплексах свиньи семиреченской породы не уступают по продуктивности животным крупной белой породы, но превосходят их по жизнеспособности поросят и по выносливости маток. Украинская степная белая порода выведена М.Ф. Ивановым путем простого воспроизводительного скрещивания местных улучшенных свиней Юга Украины с хряками крупной белой породы. Порода создавалась в хозяйстве «Аскания-Нова» Херсонской области. Это был первый в России опыт создания новой породы, а методы ее выведения стали классическими и в дальнейшем широко использовались при создании большинства пород свиней России. Впервые порода выводилась в соответствии с четко поставленной целью - сочетать в животных высокую продуктивность культурных пород с выносливостью и приспособленностью к местным условиям аборигенных свиней. При выведении украинской степной белой породы для закрепления наследственных качеств лучших помесных животных применялись 19 различные и, преимущественно, тесные степени инбридинга при одновременной строгой браковке полученных животных по крепости конституции и выраженности желательных признаков. Порода утверждена в 1932 году. Основное направление селекции - совершенствование откормочных и мясных качеств. При выделении отдельных линий применяется вводное прилитие крови ландрасов. Эстонская беконная порода создана в Эстонии путем сложного воспроизводительного скрещивания местных длинноухих свиней с хряками крупной белой, немецкой, финской улучшенной породами, датским ландрасом. Последняя порода оказала наибольшее влияние на формирование свойств эстонской беконной породы. Порода утверждена в 1961 году. Эстонская беконная порода широко используется в системах скрещивания в качестве отцовской породы, а в Эстонии частично и в качестве материнской. Совершенствование свиней эстонской беконной породы ведется по мясным и откормочным качествам. Уржумская порода свиней создана в Кировской области в результате скрещивания местных свиней с хряками крупной белой породы. Порода утверждена в 1957 году. Свиньи уржумской породы хорошо приспособлены к местным условиям и к потреблению большого количества объемистых, сочных кормов. Генеалогическую структуру породы составляют 15 линий хряков и 15 семейств свиноматок. Селекция свиней уржумской породы направлена на улучшение скорости роста и мясных качеств. Миргородская порода свиней выведена в колхозах и совхозах Полтавской области работниками Миргородского Государственного племенного рассадника под руководством А. Ф. Бондаренко и сотрудников Полтавского научно-исследовательского института свиноводства. Порода создана в результате сложного воспроизводительного скрещивания местных украинских короткоухих свиней пестрой масти с беркширскими, крупными белыми, средними белыми свиньями и частично с хряками породы темворс. 20 Порода утверждена в 1940 году. Животные миргородской породы хорошо приспособлены к условиям Лесостепи Украины и пастбищному содержанию. Селекция свиней направлена на увеличение длины туловища и повышение выхода мясных отрубов. Украинская степная рябая порода выведена путем скрещивания свиней украинской степной белой, но пестрой масти (выщепление) с хряками беркширской и мангалицкой пород. В дальнейшем при разведении помесей «в себе» применялся тесный инбридинг и жесткий отбор по крепости конституции и продуктивности животных. Работа проводилась в опытном хозяйстве «Аскания-Нова» Украинского научно-исследовательского института животноводства степных районов под руководством Л. К. Гребня. Порода утверждена в 1961 году. Свиньи украинской степной рябой породы по выносливости и приспособленности к условиям жаркого климата юга Украины имеют преимущество по сравнению с украинской степной белой породой. Аксайская черно-пестрая породная группа выведена путем скрещивания местных свиней с крупной белой и беркширской породами. Конституция свиней этой породной группы крепкая, телосложение гармоничное, масть черно-пестрая. Породная группа районирована в Алма-Атинской области, совершенствуется по многоплодию, мясным и откормочным качествам путем дополнительного прилития крови крупной белой и эстонской беконной пород. Кахетинская породная группа аборигенных свиней происходит от короткоухого подвида дикого кабана, что подтверждается параллельным расположением коренных зубов нижней челюсти, длинными и узкими слезными костями, полосатой окраской поросят. Свиньи кахетинской породной группы отличаются слабым развитием, малоплодностью и позднеспелостью. Несмотря на то, что кахетинские свиньи не выдерживают конкуренции с культурными породами свиней, принимаются меры по их сохранению и разведению в чистом виде, для 21 прилития крови к культурным заводским породам для повышения их конституциональной крепости и резистентности к заболеваниям. Цивильская породная группа свиней выведена путем скрещивания местных чувашских свиней с хряками крупной белой породы. Для свиней цивильской породной группы характерны крепкая конституция, более тяжелая, чем у крупных белых свиней голова с широким лбом, небольшим изгибом профиля и несколько удлиненным рылом. Уши средней величины, слегка наклоненные вперед; спина ровная, прямая; масть белая. Цивильская породная группа используется в скрещивании с крупной белой породой в системе разведения свиней Чувашской АССР. Селекция ведется на повышение материнских и откормочных качеств. 1.2. Половая система свиней и изменения в ней при различных физиологических состояниях Половые органы свиней делятся на наружные и внутренние. К наружным половым органам относятся половые губы, между которыми находятся половая щель и клитор, и преддверие влагалища. К внутренним влагалище, матка, яйцепроводы и яичники (Кононов Г.А., 1977; Студенцов А.П., 2000; Валюшкин К.Д., Медведев Г.Ф., 2001; Некрасов Г.Д., Суманова И.А., 2007; Джакупов И.Т., 2011). При визуальном осмотре свиноматки видна только лишь часть органов репродукции - половая щель, которая образована половыми губами. Наружная поверхность их - это тонкая и нежная кожа, в которой находятся потовые и сальные железы, внутренняя - слизистая оболочка, покрытая многослойным плоским эпителием. Толща половых губ заключается в соединительной ткани, гладких и поперечнополосатых круговых мышечных волокнах, образующих сфинктер вульвы. В вентральном (нижнем) углу половой щели расположен рудимент мужского полового члена - клитор, который состоит из двух ножек, которые прикрепляются к седалищной кости, и тела, оканчивающегося головкой. 22 Клитор у свиней длинный, тонкий, его величина достигает 4-6 см (Джакупов И.Т., 2011). Половая щель переходит в мускульную трубку, длина которой варьирует в зависимости от возраста и размера свиноматки и равняется 5-12 см. Это преддверие влагалища, выстланное тонкой слизистой оболочкой бледно-розового цвета, которая формирует маленькие продольные и поперечные складки. Преддверие отделяется от собственно влагалища слабовыраженной поперечной складкой слизистой оболочки - девственной плевой. В данном месте, на вентральной стенке преддверия, расположено отверстие мочеиспускательного канала, а позади него и на данном же уровне боковых стенок - отверстия выводных протоков преддверных желез. Преддверие передается в собственно влагалище, имеющее толстую мускульную стенку. У свиноматок влагалище короткое (8-10 см), узкое и без четких границ переходит в шейку матки. Слизистая оболочка влагалища не обладает железами и формирует продольные складки. Под слизистой оболочкой лежат сильные круговые и продольные гладкие мышцы (Некрасов Г.Д., Суманова И.А., 2007, Джакупов И.Т., 2011). Далее, суживаясь, влагалище передается в длинную и узкую часть шейку матки, которая представляет собой большое утолщение мышечной стенки матки. Шейка матки является продолжением тела матки, соединяя своим каналом полость матки с полостью влагалища. Длина ее колеблется от 8 до 20 см, а у крупных особей может достигать 28 см (Питканен И.Г., 1961; Виноградов И.И., 2005). Внутри шейки матки имеется канал, окруженный обильными продольными и циркулярными складками. По сообщениям В.М. Прокопцева (1981), у свиноматок в стадии половой охоты канал шейки матки имеет сильно извилистую спиралеобразную конфигурацию, на стадии полового покоя он извит значительно меньше, а у супоросных свиноматок почти прямой. Если на стадии полового покоя, когда тонким катетером 23 иногда удается проникнуть через шейку и тело матки, то на стадии течки и охоты, особенно у ремонтных свинок, это практически невозможно. Иная часть матки - тело - обладает длиной примерно 5 см. В срок имплантации (присоединения) зародышей через просвет тела матки случается их миграция из одного рога матки в иной, что обеспечивает размеренное распределение плодов в каждом роге матки. Матка свиней относится к типу двурогих (Климов А.Ф., Акаевский А.И., 1955; Кононов Г.А. с соавт., 1977; Акаевский А.И. с соавт., 1984; Шипилов В.С. с соавт., 1986; Студенцов А.П., 2000). Длина рога матки у половозрелых свинок равна 50-75 см, у зрелых свиноматок - 200 см и более (Валюшкин К.Д., Медведев Г.Ф., 1997). По данным П.Е. Ладана (1946), средняя длина маточных рогов в период супоросности достигает 280 см, а иногда и 350 см. Матка является органом плодоношения, ее стенка образована слизистой, мышечной и серозной оболочками. В слизистой оболочке рогов матки заложено много маточных желез, которые после оплодотворения сильно разрастаются и принимаются секретировать вещества, которые обеспечивают кормление зародышей до формирования плацентарных связей. По данным Ю.Т. Техвер (1968), маточные железы не имеют выводной части и на всем протяжении выстланы секреторными клетками. Мышечная оболочка матки свиней в связи с многоплодием имеет свои особенности. Миометрий состоит из внутреннего кольцевого и наружного продольного слоев гладких мышечных волокон, между которыми имеется сосудистый слой. Кольцевой слой в области шейки матки формирует мощный сфинктер. Во время родов поочередно сокращаются правая и левая части сфинктера, благодаря чему при закрытом одном роге второй остается открытым, препятствуя, таким образом, одновременному попаданию нескольких плодов в родовые пути и их ущемлению (Nagler M., 1956; Техвер Ю.Т., 1968; Кононов Г.А., 1977). 24 Рога матки идут в яйцепроводы (фаллопиевы трубы), которые представляют собой извитые трубочки, начинающиеся узким отверстием в верхушке рогов матки, и сильно извиваясь, оканчиваются воронкообразным расширением у яичника (правого либо левого). Яйцепровод подвешен на брыжейке яйцевода, которая обтягивает яичник, образуя выраженную яичниковую сумку. При овуляции она прекрасно обеспечивает проникновение яйцеклеток в яйцепроводы. Длина их составляет 25-35 сантиметров. Стенка яйцепровода состоит из слизистой, мышечной и серозной оболочек. Слизистая оболочка в яйцепроводах собрана в складки, высота которых повышается в маточной части яйцепровода, практически закрывая просвет канала. Это обеспечивает постепенное поступление спермиев из рогов матки и задержку в яйцепроводе оплодотворенных яйцеклеток (зигот) в период дробления. На границе яйцепровода и рога матки находится маточно-трубное соединение (Lovell J.E., Getty R., 1969; Ronsseau J.P. et al., 1987). Считается, что сочленение регулирует поступление спермиев в яйцепроводы, обеспечивает их отбор и формирует депо. Здесь наблюдается максимальное время выживания сперматозоидов. Они сохраняют подвижность в течение 72 часов. По мнению F.du Mesnil du Buisson, L. Dauzier (1955), J.P. Rigby (1964), этот участок функционирует как фильтр спермы, подобно шейке матки других млекопитающих. Яичники свиней - это небольшие бугристые органы, расположенные в развитой яичниковой бурсе и бахромке. Форма и размеры яичников в значительной мере зависят от их функционального состояния. Масса яичников у 10-12-месячных животных стабилизируется и составляет 4,0-6,0 г. (Квасницкий А.В., 1983), в исследованиях М.Д. Любецкого средняя масса яичников свиноматок в первую половину супоросности повышается с 4,1±0,17 грамм в 8-9-месячной возрастной группе (95-100 килограмм) до 11,6±0,19 грамм в возрастной группе 3-4 лет (250-280 килограмм). По данным И.Г. Питкянен, средняя масса яичников (в 25 периоде свежелопнувших фолликулов) половозрелых свиноматок (100-150 килограмм) составляла 3,9 грамм (колебания от 2,1 до 5,9 грамм), в возрастной группе 1-2,5 года - 6,3 грамм (4,3-12,7 грамм), по данным М.А. Данилова (1965), к 3-4 годам она равна 15,2-21,0 г, а А.А. Сысоев (1983) показал, что они весят 7,0-9,0 граммов. В отличие от яичников прочих сельскохозяйственных животных яичники свиноматки усеяны не серозной, а белочной оболочкой, под которой находятся корковый и мозговой слои. Основу данных слоев составляет рыхлая соединительная ткань. Корковый слой хранит большое число фолликулов на различных этапах формирования с находящимися в них формирующимися и зрелыми яйцеклетками. Диаметр зрелых фолликулов равен 10-12 мм (Perry J.S., Rowlands I.W., 1962). Поперечник взрослых фолликулов у свиньи равняется 0,8-1 см. Рыхлая соединительная ткань мозгового слоя, находящегося в центре яичника, испещрена кровеносными сосудами и нервными окончаниями. На месте каждого овулировавшего фолликула формируется новейший эндокринный орган - желтое тело (величиной с горошину), основу которого составляют лютеиновые клетки, которые сформировались из клеток фолликулярного эпителия. При наступлении супоросности формируется желтое тело (при ее отсутствии подвергается обратному формированию спустя несколько суток после овуляции), которое выделяет в кровь гормон прогестерон, усиливающий рост слизистой оболочки рогов матки и молочных желез; к окончанию супоросности возникает дегенерация желтого тела, которая завершается после опороса. Кровоснабжение половых органов происходит через сосуды, отходящие от брюшной аорты и внутренней подвздошной артерии. Иннервируются половые органы симпатическими и парасимпатическими стволами. 26 Изменения в половой системе свиней в течение полового цикла Половой цикл физиологических, - это комплекс морфологических и ритмично повторяющихся биохимических процессов, согласованно и последовательно протекающих в устойчивом темпе, специфическом для каждого вида животных (Кононов Г.А., 1977) Половой цикл, по мнению А.П. Студенцова, был определен как сложный нейрогуморальный складывающийся из трех цепной стадий: рефлекторный возбуждения, процесс, торможения и уравновешивания. При характеристике каждой стадии были введены такие самостоятельные понятия (феномены) как течка, общая реакция, охота и овуляция. Половые циклы появляются с наступлением половой зрелости у разных видов животных и повторяются в строго определенной периодичности до старости. Половые циклы, ритмично повторяющиеся со времени наступления половой зрелости до климактерического периода и отсутствующие только в период беременности, наблюдаются у полицикличных животных, к которым относятся свиноматки (Кононов Г.А., 1977; Студенцов А.П., 2000; Валюшкин К.Д., Медведев Г.Ф., 2001). В течение одного полового цикла в организме самки происходит целый комплекс физиологических изменений, которые обусловлены изменением баланса гонадотропных и овариальных гормонов. Под воздействием гормонов яичников - эстрогенов и прогестерона - в половых органах самки, в частности во влагалище, шейке матки, яйцепроводах и особенно в матке, происходят определенные изменения на протяжении полового цикла, которые получили название циклических. Так, в яичниках происходит двухфазная сменяемость в продукции гормонов (Кононов Г.А., 1977). Растущие фолликулы вырабатывают группу эстрогенных гормонов (эстрон, эстрадиол и эстриол). Перед овуляцией в клетках гранулезы начинает вырабатываться гормон прогестерон, который является одним из звеньев в сложном механизме овуляции. После 27 сформирования желтого тела продукция прогестерона значительно увеличивается. Исходя из этого, гормональная цикличность яичника подразделяется на две фазы: фолликулиновую и прогестероновую (лютеиновую). Под влиянием гормонов яичника в эндометрии создаются наиболее оптимальные условия для продвижения и жизнедеятельности сперматозоидов, а также для имплантации зиготы. Кроме того, яичники, кроме биохимических, претерпевают и морфологические изменения. В фолликулиновую фазу, когда происходит рост и созревание фолликулов, яичник несколько увеличивается в объеме, консистенция его становится более плотной. В предовуляционный период в яичнике обнаруживается зрелый фолликул, представляющий собой флюктуирующий бугорок. После овуляции полость фолликула заполняется кровяным сгустком, на месте лопнувшего фолликула формируется желтое тело, которое при отсутствии оплодотворения постепенно уменьшается в размерах, т.е. подвергается регрессии. Под влиянием овариальных гормонов в яйцепроводах происходят функциональные и морфологические изменения, характер которых зависит от фазы цикла. В проэстум, например, повышается тонус и частота сокращения яйцепроводов, а в период овуляции воронка яйцепроводов расширяется, бахромка воронок охватывает яичники со всех сторон. В прогестероновую фазу происходит ослабление сокращений яйцепроводов, наблюдается постепенное угасание изменений. В течение полового цикла функциональная активность матки имеет существенные различия. Особенно глубокие изменения наблюдаются в эндометрии, которые протекают строго динамично, согласуясь в цикличности с функцией яичников. Гистологические исследования, проведенные рядом авторов, позволяют утверждать, что на протяжении полового цикла выявляются характерные изменения эндометрия, на основании которых половой цикл 28 можно разделить на пролиферативную, секреторную и инволюционную стадии, или фазы (Кононов Г.А., 1977). В пролиферативную пролиферативных фазу, процессов под характеризующуюся влиянием появлением эстрогенных гормонов, увеличивается ригидность матки, клетки эндометрия утрачивают четкие контуры, большую часть их цитоплазмы занимает ядро. Отек стромы эндометрия наблюдается только перед началом или в момент эструса. По данным Х.В. Кюбар (1983), во время охоты, когда уровень эстрогенов и лютеинизирующего гормонов высокий, а прогестерона остается низким, покровный эпителий слизистой оболочки матки является псевдодвурядным. Активизируются маточные железы. П.А. Соколов (1971) сообщает, что при половом цикле у свиней наблюдаются два максимума толщины слизистой матки: на третий день цикла за счет отека эндометрия и на 14 день вследствие пролиферативных изменений ее соединительнотканной основы (гипертрофии и гиперплазии маточных желез). Поверхностный эпителий матки на протяжении полового цикла неоднородный. В первые дни он многорядный, что вызвано пролиферативными процессами под влиянием группы эстрогенных гормонов яичников. В период развития желтых тел эпителий становится однорядным. С.М. Пуд (1968), изучая биологическую активность матки, установил, что в стадию возбуждения она самая высокая. В секреторную фазу, с развитием желтого тела быстро нарастает количество прогестерона, под влиянием которого слизистая оболочка матки из фазы пролиферации формируется в фазу секреции. До 9-10 дня полового цикла в эпителии эндометрия сохраняется многорядность, исчезающая по мере угасания процесса секреции. В инволюционную фазу, которая продолжается с 12-го по 16-19-й день полового цикла, слизистая оболочка матки покрыта кубическим и призматическим однорядным эпителием с бледно окрашивающимися ядрами. На протяжении полового цикла в слизистой оболочке влагалища 29 происходят изменения, предэстральный период обусловленные железы функцией преддверия яичников. влагалища В начинают вырабатывать секрет, который увлажняет слизистую оболочку влагалища и подготавливает ее к коитусу. В стадии проэструм в мазках из влагалища лейкоциты и нормальные эпителиальные клетки преимущественно круглой формы. Во время эструса лейкоциты не обнаруживаются, а эпителиальные клетки принимают многогранную форму. В период двух очередных стадий метаэструм и диэструм - во влагалищном секрете обнаруживаются лейкоциты и эпителиальные клетки, имеющие также многогранную форму. pH слизи, выделяющейся из влагалища, имеет слабощелочную реакцию – от 7,1 до 8,4 (Губаревич Я.Г., 1976). Таким образом, к концу инволюционной фазы в яичниках начинается рост и развитие фолликулов, организм самки насыщается эстрогенными гормонами, в эндометрии появляются признаки пролиферации, т.е. начинается развитие нового очередного полового цикла. 1.2. Нейрогуморальная регуляция репродуктивной функции свиней Бесспорно, репродуктивная сельскохозяйственных животных, функция направленная организма на сохранение самок вида животных, является одной из главных, особенностью которой для данного вида млекопитающих является поли- и моноцикличность. Ритмичное проявление эстрального цикла через определенный период времени у самок домашних животных, достигших половой зрелости, обусловлено и находится в непосредственной зависимости от центральной нервной системы и ее взаимоотношений с эндокринной системой (Волосков П.А. с соавт., 1940; Волоскова А.А., 1949; Doriveaue J., Ector F.,1966; Клинский Ю.Д., 1975; Савченко О.Н., 1975; Радченков В.П., 1977; Савченко О.Н., Степанов Г.С., 1977; Holler W.,1982; Лебедев А.Г., 1982; Прокофьев М.И., 1983; Menget H.,1986; Завертяев В.П., 1989; Турков В.Г., 1996; Студенцов А.П., 2000; Нежданов А.Г., 2003 и другие). 30 В настоящее время в биологической науке накопились многочисленные экспериментальные и клинические данные о роли коры головного мозга, гипоталамо-гипофизарного комплекса, яичников и матки в регуляции воспроизводительной системы у самок домашних животных (Волоскова А.А., 1949; Лопырин А.И., 1971; Павлов В.А., 1977; Давыдов В.У., 1978; Downey B.,1980; Holler W., 1982; Прокофьев М.и., 1983; Завертяев Б.П., 1989; Cheminean P., Delgadillo J.A.,1994; Турков В.Г., 1996, Муруев А.В., 1998 и другие). По мнению вышеуказанных и других авторов, каждое звено проявляет свое действие с определенной периодичностью, в строго определенное время в зависимости от фазы полового цикла. Изучая гормональные взаимоотношения в организме животных, в том числе и на примере гипофиз-гонадной системе, братья Завадовские М.М. и Б.М. (1939,1946) разработали концепцию о плюс-минус взаимодействии, которая в настоящее время распространена и на другие уровни организации нейрогормональной системы. Благодаря нейрогуморальной регуляции физиологических процессов, в том числе воспроизводительной функции, центральная нервная система млекопитающих получила возможность более совершенно осуществлять свои функции (Митюшов М.И., Степанов Г.С., 1979). Следовательно, центральная нервная система свое координирующее и регулирующее влияние на физиологическую и воспроизводительную функцию, а также на структурную организацию желез внутренней секреции осуществляет через гипоталамус (Павлов В.А., 1977; Баранов В.Г., 1979; Розен В.Б., 1980; Прокофьев М.И., 1983; Бабичев В.Н., 1984; Завертяев Б.П., 1989; Magname E., Gnillenme V.,Coite-Devolx B., Gnillenme V. e.a.1991; Турков В.Г., 1994; Шипилов В.С., 1994; Hileman Stenley M., Kuchl David E. e.a., 1994; Clarka I.J., 1995; Houghton D.C., Vonng I.R. e.a., 1995; Currlewis J.D., Thiery J.-C., Malpeux B.,1995; Downing J.A., Loss J., Scaremuzzi R.J., 1996 и другие), который является конечным морфологическим образованием головного 31 мозга и обеспечивает функциональную связь головного мозга с эндокринной системой (Ажипа Я.Н., 1979). Роль гипоталамуса в регуляции циклической репродуктивной функции животных была выявлена в результате открытия в гипоталамусе физиологически активных веществ - нейрогормонов (рилизинг-гормоны, рилизинг-факторы), оказывающих непосредственное влияние на синтез и секрецию гормонов гипофиза (Schally A.V. e.a.,1971; Данилова О.А., Савченко О.Н., 1981; Лебедев А.Г. с соавт., 1982; Прокофьев М.И., 1983; Завертяев Б.П., 1989; Эрнст Л.К. и Сергеев Н.И., 1989; Лебедев А.Г. с соавт., 1989; Соловьев Н.А., 1989 и другие). Эти нейросекреты продуцируются в специфических клеточных скоплениях - ядрах гипоталамуса. В переднем отделе гипоталамуса располагаются супраоптические, паравентрикулярные, передние перивентрикулярные и супрахиазматические ядра (Баранов В.Г., Пропп М.В., 1979). В настоящее время известно, что гонадотропин-рилизинг-гормон (ГнРг) вызывает секрецию фолликулостимулирующего лютеинизирующего гормонов (ФСГ) (ЛГ) и гипофизом (Shally A.V. e.a.,1971; Lolman J. e.a.,1973; Kaltenbach C.C. e.a.,1974; Лободин А.С., 1990; Алиев А.А., Петров Г.Е., Григорьев А.А., 1991; Турков В.Г., 1996). Гипоталамическая регуляция полового цикла самок домашних животных по представлениям Прокофьева М.И. (1983) осуществляется следующим образом: нервные окончания из гипоталамуса выделяют нейрогормональные вещества в капилляры первичного сплетения портальной системы срединного возвышения, затем они переносятся через гипофизарную ножку в синусы передней доли гипофиза, где оказывают влияние на секреторную активность гипофизарных клеток. Благодаря тому, что нейросекреторные клетки совмещают нервную и эндокринную функцию, в гипоталамусе происходит переключение начального нервного импульса в гуморальные звенья эфферентных цепей. 32 Гипофиз является железой - «мишенью» для гипоталамических рилизинг-гормонов (Miyachi Y. e.a.,1973), в передней доле которого обнаружены рецепторы, избирательно связывающие молекулы Гн-Рг. Под действием рилизинг-гормонов гипоталамуса в гипофизе начинают синтезироваться гипофизарные гормоны (Matsuo H. e.a.,1971; Swansou L.V., Hafs H.D., 1971; Martini L.,1974). В передней доле гипофиза выделено 7 различных гормональных веществ, белковой или пептидной природы. Синтезируемые передней долей гипофиза гормоны называют тропными, так как основное назначение их заключается в регуляции функции периферических эндокринных желез. К тропным гормонам относятся: адренокортикотропный гормон (АКТГ), тиреотропный гормон (ТТГ), лютеинизирующий гормон (ЛГ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), соматотропный гормон (СТГ), липотропины и пролактин (Константинова М.С., 1979; Розен В.Б., 1980). По химическому строению ФСГ и ЛГ являются гликопротеидами. ФСГ оказывает стимулирующее действие на рост и развитие фолликулов, пролиферацию клеток гранулезы. ЛГ стимулирует морфологические процессы в яичнике, как и ФСГ (Константинова М.С., 1979). Автор считает, что благодаря ЛГ и ФСГ в яичниках самок сельскохозяйственных животных происходят дозревание граафовых фолликулов до овуляции. Под непосредственным воздействием ЛГ происходит разрыв стенки фолликула, а на месте лопнувшего фолликула образуется через несколько суток функционально активное желтое тело яичников. М.И. Митюшов, А.А. Филаретов (1981) считают, гипоталамус участвует не только в осуществлении циклического усиления секреции гонадотропинов, но и в регуляции уровня этих гормонов по принципу обратной связи. Работу механизмов обратной связи в течении эстрального цикла коровы авторы представляют следующим образом: в нервном центре происходят циклические изменения (под влиянием импульсов, поступающих из «ритмического центра»), обеспечивающие в строго определенную стадию 33 цикла включение обратной связи в зависимости от уровня гормонов в крови животных. Запуск осуществляется при достижении порогового уровня половых стероидов в крови животных. На определенной стадии развития фолликула в яичнике, когда количество продуцируемых эстрогенов достигает порогового уровня, центральный циклический механизм осуществляет включение обратной связи, обеспечивая тем самым массивный выброс гонадотропинов в кровь животных, что и обусловливает рост и развитие фолликула, и последующую овуляцию. Из данных Буянова А.А. (1969, 1982); R.P. Wetteman, H.D. Hafe (1973); Г.С. Степанова с соавт. (1977), вытекает, что начальный эндокринный импульс, способствующий началу роста и развития фолликулов происходит в первой половине второй декады полового цикла. В этот период происходит кратковременный подъем концентрации гонадотропинов ФСГ и ЛГ в крови животных. Завершивший рост и развитие фолликул достигает крупных размеров и выпячивается над паренхимой яичника (Савченко О.Н., 1979). Под непосредственным влиянием гонадотропных гормонов процесс созревания фолликула заканчивается, происходит разрыв его стенки, яйцеклетка выходит из фолликулярной полости, последняя спадается, происходит лютеинизация клеток гранулезы и theca interna, начинает формироваться желтое тело. Первые стадии формирования желтого тела начинаются с интенсивной пролиферации и гипертрофии клеток, их пигментацией, разрастания кровеносных сосудов и клеток theca interna. Стадия пролиферации и васкуляризации продолжается несколько дней и с 7го дня после овуляции начинается фаза расцвета желтого тела, секреция прогестерона, прогестинов и эстрогенов (Хватов В.П., 1955). По данным Давыдова В.У. (1978), яичники продуцируют эстрогены и прогестерон. Входящие в группу эстрогенов - эстрадиол, эстрон и эстриол, принимают участие в развитии и функции половых органов самок, полового поведения, регуляции половых циклов и развитии беременности. 34 Прогестерон вырабатывается в основном желтым телом яичника и плацентой у некоторых видов животных, отчасти надпочечниками и фолликулами (Волосков П.А. с соавт., 1964; Савченко О.Н., 1967, 1979; Павлов В.А., 1977). Основная биологическая роль прогестерона в организме самок сельскохозяйственных животных - это сохранение беременности, путем действия его на матку, подготовки животных к беременности, регуляция процессов зачатия, родов и лактации. Он нивелирует действие эстрогенов в пролиферации эндометрия и вызывает секреторную трансформацию (Савченко О.Н., 1979; Розен В.Б., 1980). Желтое тело яичников является временной железой половозрелых млекопитающих (Волосков П.А. с соавт., 1964; Савченко О.Н., 1967; Техвер Ю.Т., 1968; Савченко О.Н., 1979). Розен В.Б. (1980) отмечает, что общая продолжительность овариального цикла животных находится в прямой зависимости от функционирования желтых тел. Частота овуляций находится в обратной зависимости от времени жизни желтого тела. На протяжении беременности животного, когда желтые тела функционируют и секретируют прогестерон в кровь, овуляция в яичнике не происходит. Прогестины, а также андрогены, образующиеся в циклических желтых телах в высоких концентрациях, повидимому, тормозят по механизму обратной отрицательной связи на уровне гипоталамуса и гипофиза тоническую секрецию гонадотропинов и вследствие этого препятствуют созреванию фолликулов и овуляции. Аналогичный тормозящий эффект на овуляцию оказывают и желтые тела беременности, а также плацента, еще более активно образующая прогестерон и его производные. Наряду с прогестинами, желтые тела полового цикла и беременности образуют некоторое количество эстрогенов. Лютеальную секрецию эстрогенов автор сводит к сенсибилизации гипоталамуса и гипофиза, а также органов полового тракта к прогестинам. При этом утверждается, что индуктором формирования желтых тел является ЛГ, стимулирующий дифференцировку лютеиновых клеток и биосинтез 35 прогестерона (Brinkley H.J. e.a., 1964; Hoffman B. e.a., 1974; Marsh J.M. e.a., 1974). Если беременность не наступает у животных, желтые тела претерпевают обратное развитие и синтез прогестерона в них тормозится, теряют липиды и превращаются в белые тела. В регрессии желтых тел у многих видов животных важную роль играют не только низкие уровни гипофизарных гормонов в крови и чувствительность к ним лютеиновых клеток, но и функции матки (Janina H. e.a., 1970; Nacahara T. e.a., 1971). Удаление матки (гистерэктомия) может значительно продлить активность желтых тел, секрецию гестагенных гормонов и состояние ложной беременности. В настоящее время установлен один из главных гуморальных факторов матки, стимулирующий лютеолиз - простагландины (Bruce B., Pharriss P.D., 1970; Goding J.R. e.a., 1972; Goding J.R., 1974; Segnin B.E. e.a., 1974; Harsel W. е.a., 1975; Behrman H., 1979; Docice F., 1980; Kotwica J., 1980; Milval R.A., Hansel W., 1980; Tordsy J.S. e.a., 1980; Downey B., 1980; Череминисинов Н.Г. и др., 1992; Beckn F.G. e.a., 1993; Wilt-bank M.C. e.a., 1995 и другие). В последние годы многие ученые-исследователи выясняли механизмы и факторы, поддерживающие функцию желтого тела (лютеотропные) и вызывающие его регрессию (лютеолитические). Роль простагландинов в сложном механизме овариального цикла значительна и в последние годы их с успехом применяют для регуляции и синхронизации половых циклов животных и при трансплантации эмбрионов (Hearashaw H. e.a., 1974; Henricke D.M. e.a., 1974; Roshe J.F., 1974; Corteel M., 1975; Varadin M., 1978; Дмитриев В.Б. с соавт., 1979; Roshe J., Prendivilla D., 1979; Singh G.B. e.a., 1979; Adeyemo O. e.a., 1979; Лебедев А.Г. с соавт., 1980; Прокофьев М.И., 1980; Kotwica b.S., 1980; Sceramuzzi R.J. e.a., 1980; Nara B.S., First N.L., 1981; Khunara N., Gupta R., 1982; Sevcik B. e.a., 1982; Ермолов Б.Н. с соавт., 1983; Варшавский А.Н. с соавт., 1990; Амстиславский С.Я. с соавт., 1991; Ахметова Н.И., 1991; Клинский Ю.Д. с соавт., 1991; Мадиссон В.Л., 1991; Сергеев Н.И. с соавт., 1991; Сергеев Н.И. с соавт., 1995 и другие). 36 Простагландины - новый класс биологически активных веществ, синтезирующихся из полинасыщенных жирных кислот при помощи специальной ферментной системы (простагландинсинтетазы), фиксированной в макросомальных мембранах. Они состоят из 20 атомов углерода и включают циклопентановое кольцо. В зависимости от структуры пятичленного кольца все простагландины делят на четыре группы: А, Б, Е и Ф (ПГА, ПГБ, ПГЕ и ПГФ). Простагландины и их основные предшественники - полинасыщенные жирные кислоты (эйкозатетроеновая, биологических жидкостях неопределяемо малых у всех эйкозатриеновая) млекопитающих, количествах. Наибольшую содержатся как правило, в в концентрацию простагландинов содержат семенная жидкость млекопитающих и человека. По данным исследований Жильцова Н.З. и др. (1974), простагландины, полученные из спермы барана, действуют на гладкомышечную ткань изолированной матки, вызывают энергичные ее сокращения даже в малой дозе. Таким образом, овариальный цикл периодически сменяется фолликулярной и лютеиновой фазами. В фолликулярную фазу доминирует развитие и рост фолликулов, продуцирующих преимущественно эстрогены, в лютеиновую - преобладает развитие и рост желтого тела, синтезирующего, в основном, прогестины. Лютеиновая фаза завершается лизисом желтого тела и тем самым обуславливает стимуляцию фолликулярных процессов (Розен В.Б., 1980). Завершением фолликулярной фазы является овуляция и начинает прогрессировать лютеиновая фаза. 1.4. Особенности постнатального развития и нейрогуморальная регуляция процессов роста и развития молодняка сельскохозяйственных животных В процессе онтогенеза каждое животное проходит определенные периоды развития. Каждый период развития, состоящий из ряда 37 определенных фаз, характеризуется определенными взаимоотношениями организма со средой и особой чувствительностью к тем или иным ее воздействиям. Между фазами существуют переломные этапы, называемые критическими периодами, которые характеризуются особой чувствительностью к совершенно определенным внешним воздействиям. Установлено, что индивидуальное развитие животных в онтогенезе протекает по трем периодам, которые включают в себя 9 этапов развития, 15 стадий и 10 критических фаз (Тельцов Л.П., 2004). По данным П.Г. Светлова (1978), в критические фазы развития у животных происходит: 1) смена одного этапа на другой; 2) установка генетической программы на будущий этап; 3) десинхронизация биологических ритмов роста и развития органов и систем; 4) повышение чувствительности тканей и органов к лекарственным веществам; 5) генетические мутации в клетках; 6) смена морфофункциональных генераций дефинитивных органов. Известно, что индивидуальное развитие человека и животных подчинено общим биологическим закономерностям: 1) эндогенности (имманентности); (биологическим 2) этапности ритмам); 4) (периодизации); непрерывности 3) цикличности (перманентности); 5) асинхронности и гетерохронности; 6) адаптационной детерминированности (причинности); 7) провизорности (временности). Все эти закономерности развития свойственны и проявляются на каждом этапе. Проявление этих закономерностей на каждом этапе развития качественно и количественно иное (Тельцов и др., 2000-2005). Существует целый ряд классификаций периодов развития, которые несколько отличаются друг от друга. Продолжительность отдельных стадий развития может отличаться как у животных разных видов, так и у отдельных особей. Таким образом, в онтогенезе можно выделить два основных периода: пренатальный и постнатальный. Такое деление позволяет рассматривать общие закономерности развития высших позвоночных. 38 Исследования показывают, что процессы роста и развития изменяются в онтогенезе и филогенезе под действием генетических факторов и условий среды, что они влияют на другие биологические и хозяйственно-полезные признаки, подвергаются воздействию планомерного отбора и подбора. Это дает большие возможности для изменения уровня и направления продуктивности животных в желательную сторону. У свиней можно выделить три особенности роста: 1. Низкая скорость роста в эмбриональном и высокая - в постэмбриональном периоде. Скорость роста - прирост тела в единицу времени - является абсолютной мерой роста за период, измеряется приростом в сутки, выраженным в граммах. Среднесуточный прирост в среднем в эмбриональном периоде составляет 9,6 г, в постэмбриональном - 228 г; 2. Высокая интенсивность роста в постэмбриональный период, определяемая по кратности увеличения живой массы. Средняя живая масса поросят при рождении составляет 1,2 кг, во взрослом состоянии 250 кг. Следовательно, в постэмбриональном периоде свиньи увеличивают массу в среднем в 208 раз (крупный рогатый скот - в 14,2 раза, лошади и овцы - в 10 раз); 3. Постэмбриональный эмбрионального период значительно роста у больший, свиней чем у относительно других видов сельскохозяйственных животных. Так, продолжительность роста в постэмбриональный период больше эмбрионального у свиней в 9,6 раза, у крупного рогатого скота – в 5,9, у лошадей – в 5,3, у овец – в 4,8 раза. Многочисленными исследованиями ученых всего мира доказано, что организм на каждом этапе развития не реализует всех своих возможностей, запрограммированных в генотипе, а реализует только часть, которая называется фенотипом. Именно частичная реализация полезных качеств 39 генотипа на разных этапах развития создает благоприятные условия для целенаправленного вмешательства в управление онтогенезом животных. Регулирующее влияние эндокринных желез - гипофиза, щитовидной железы, надпочечников и других - на процессы роста и развития проявляется еще в эмбриогенезе. Подавление функции одной из перечисленных желез внутренней секреции или полное ее выключение во время эмбриогенеза приводит к патологическому развитию зародыша и к аномалиям его роста в постнатальный период (Мицкевич, 1935; Студитский, 1947). Роль гормонов в регуляции процессов роста и развития сказывается наиболее полно в постнатальный период онтогенеза животных. В специальных монографиях и обзорах показано, что нарушение нормальной деятельности гипофиза или щитовидной железы, надпочечника, поджелудочной либо половых желез сказывается на росте и развитии не только взаимозависимой системы эндокринных органов, но и других частей организма (Архангельский, 1958; Маргулис, 1962; Завадовский М.М., 1941; Эскин, 1951,1958,1960,1963; Генес, 1963; Вундер, 1965 и другие). Так, в опытах с тотальной и субтотальной гипофизэктомией у млекопитающих установлено, что удаление гипофиза приводит к остановке роста всех органов, к наступлению в той или иной степени выраженных явлений их атрофии, к уменьшению веса животных. Наибольшему влиянию подвергаются эндокринные железы, претерпевающие глубокие атрофические изменения (Smith, 1930; Selye, 1941 и другие). Гипофизэктомия особенно ощутима для организма, если она осуществляется в молодом возрасте: прекращается рост скелета, тормозится рост и развитие органов. Гипофиз необходим также для осуществления некоторых цитологических преобразований в органах, связанных с их ростом. Введение карликовым животным соматотропного гормона приводит к стимуляции их роста: у них увеличивается вес тела, начинают расти органы, в том числе печень (Helweg-Larsen, 1949,1952; Lauchtenber-ger, Helweg-Larsen, Murmanis, 1954). 40 Особенно чувствительны к удалению гипофиза железы эндокринной системы: щитовидная, надпочечники, поджелудочная и гонады. В связи с наступающими в них атрофическими изменениями функция этих органов испытывает серьезные нарушения. Как показали специальные исследования, влияние гипофиза на рост органов и на весь организм в целом обусловлено синтезом соматотропного гормона (СТГ). Введение этого гормона в организм гипофизэктомированных животных приводит к восстановлению процессов его роста. Вместе с тем, реализация действия соматотропного гормона возможна только при условии нормального функционирования надпочечников. Введение соматотропного гормона адреналэктомированным животным не усиливает их рост. Как оказалось, соматотропный гормон действует лишь при наличии дезоксикортикостерона. На рост организма оказывают влияние и другие гормоны гипофиза. Так, адренокортикотропный гормон (АКТГ), регулирующий функцию надпочечников, тормозит рост. Тиреотропный гормон гипофиза регулирует функцию щитовидной железы. Хотя тироксин сам по себе и обладает ростстимулирующим действием, введение его гипофизэктомированным животным не стимулирует их роста (Эскин, 1958; Carriere, 1960; Smith, Greenwood, Foster, 1967). В работах, проведенных А.А. Войткевичем (1947) установлено, что на каждом этапе постнатального онтогенеза млекопитающих складываются совершенно определенные взаимоотношения между гипофизом и щитовидной железой, сопровождающиеся сменой функциональной активности указанных желез в процессе роста. Сложные взаимоотношения в процессе роста организма складываются также между гипофизом и другими эндокринными железами: половыми, поджелудочной. Интересно, что инсулин может стимулировать рост гипофизэктомированных крыс, чего не удается добиться при введении других гормонов (Вундер, 1965). 41 Таким образом, приведенные данные свидетельствуют как о сложных коррелятивных отношениях между эндокринными железами, так и о несомненном их участии в регуляции процессов постнатального роста животных. 1.5. Использование биотехнологических методов в развитии животноводства В последнее время особое значение и актуальность приобретают рациональное использование генетических ресурсов животноводства и его интенсификация путем внедрения в производство новых, прогрессивных методов ускоренного воспроизводства высокопродуктивных животных. В частности, за счет освоения эффективных методов биотехнологии, клеточной и генной инженерии и создания на их основе совершенно новых высокопродуктивных пород животных с уже запрограммированными качествами, так как главным биологическим фактором интенсификации животноводства является генетическое совершенствование животных, как основное орудие производства повышения эффективности этой отрасли сельского хозяйства. Генетическое совершенствование популяций сельскохозяйственных животных было и остается ключевой проблемой животноводства, от решения которой зависит уровень его интенсификации и увеличение производства высококачественных продуктов питания. В этой связи, бесспорно, традиционные системы и методы селекции животных ещѐ не исчерпали своих возможностей и в ближайшем будущем будут в основном определять темпы селекционного процесса. Вместе с тем, новые открытия и огромный объем исследований в области молекулярной биологии развернули новые перспективы по совершенствованию и развитию животноводства. Возникла новая отрасль биологии - биотехнология, в том числе биотехнология сельскохозяйственных животных, главным направлением которой является 42 клеточная и генная инженерия, а также нетрадиционные способы повышения производства продукции животноводства. Биотехнология означает использование биохимических и генетических свойств живых Биотехнология макров и микроорганизмов воспроизводстве и в селекции практических целях. сельскохозяйственных животных имеет особое значение. Например, крупный рогатый скот относится к одноплодным видам млекопитающих. В лучшем случае от каждой коровы получают одного теленка в год, в то время как в их яичниках содержатся сотни представляющих тысяч незрелых огромный половых генетический клеток - резерв, ооцитов, особенно высокопродуктивных животных. Следовательно, кардинальное решение проблемы ускоренного воспроизводства высокопродуктивного скота состоит в том, чтобы перейти к нетрадиционным способам увеличения плодовитости животных, в частности к эффективным методам биотехнологии воспроизводства животных. К методам биотехнологии, применяемым в практике воспроизводства животных, относят также искусственное осеменение, глубокое замораживание и длительное хранение спермы быков-производителей, индуцирование половой охоты и ее синхронизация, регулирование времени отелов, опоросов и ягнений. Бесспорно, дальнейшее наращивание производства продукции животноводства возможно путем быстрого создания высокопродуктивных пород и линий животных, способных наиболее эффективно оплачивать корма и затраты труда. Основным методом быстрого улучшения породных и повышения продуктивных качеств сельскохозяйственных животных является интенсивное использование высококлассных племенных животных путем широкого применения искусственного осеменения маточного поголовья, так как при таком воспроизводстве создается возможность получения от одного племенного производителя в десятки и сотни раз больше потомства, чем при естественной случке. К тому же внедрение искусственного осеменения имеет 43 определенное значение в борьбе и профилактике с заразными болезнями, передающимися контактным путем при естественной случке. Современное искусственное осеменение животных представляет собой комплекс сложных, научно-обоснованных технологических приемов: оно дает хорошие результаты только при глубоком знании физиологии воспроизведения животных и очень тщательном выполнении и соблюдении правил технологии искусственного осеменения. В передовых хозяйствах и за рубежом метод искусственного осеменения за последние годы был основным в размножении крупного рогатого скота (Кононов Г.А., 1978; Студенцов А.П. с соавт., 2000). Метод искусственного осеменения сельскохозяйственных животных состоит в том, что при помощи специальных приборов и инструментов получают половую продукцию (сперму) у самцов, при необходимости обрабатывают ее и посредством инструментов вводят в половые органы самок (Родин И.И., 1976). Применение искусственного осеменения оказало большое влияние на породное преобразование скотоводства. Так, используя всего несколько сот быков герефордской породы, животноводы вывели новую породу мясного скота - казахскую белоголовую, в которой насчитывается теперь более 1,8 млн. голов. Огромный массив новой молочно-мясной породы крупного рогатого скота - кузгенской - создан при использовании только нескольких десятков быков. За 50 лет в нашей стране выведено 67 новых продуктивных пород животных и птицы, приспособленных к разнообразным климатическим условиям; разводят 49 пород крупного рогатого скота. При искусственном осеменении значительно уменьшается потребность в племенных производителях. При вольной случке одним быком можно покрывать не более 40 коров в год, а при искусственном осеменении спермой одного племенного быка можно осеменить от 1960 до 2075 коров (Субботин А.Д., 2002). 44 Технологические возможности использования одного производителя при искусственном осеменении заметно возрастают. Например, спермой быка Нептун (США) голштинской породы за год было осеменено около 25 тысяч коров и телок. В последнее время наряду с этими традиционными биотехническими методами приобрела практическое значение и трансплантация эмбрионов, которая выступает как эффективный метод биотехнологии ускоренного размножения высокоценных племенных животных. В настоящее время это достижение науки уже широко используется в практической селекции и, по мнению ученых, в будущем приведет к коренному изменению нынешнего состояния в воспроизводстве и селекции сельскохозяйственных животных. В России функционирует значительное число центров по трансплантации эмбрионов, где ежегодно получают свыше 5 тысяч телят. Практическая значимость этого метода заключается в том, что с развитием искусственного осеменения животных была решена проблема ускорения мужских особей, что, безусловно, позволило на порядок повысить темпы селекции. Однако задача расширения генетического влияния женских особей, ценных по генотипу, оставалась трудноразрешимой. И только с разработкой и широким использованием метода трансплантации эмбрионов удалось ее решить, что дало новый импульс ускорению процессов генетического совершенствования пород животных. Была поставлена и решена проблема дозревания ооцитов, оплодотворения и раннего эмбрионального развития сельскохозяйственных животных. Это позволило использовать значительное число женских генеративных клеток от животных с ценным генотипом и даже уже после того, когда данные особи давно закончили свой жизненный цикл. Следует напомнить, что эти исследования были начаты и в нашей стране, и первый теленок с использованием данного метода тоже был получен у нас. Что касается самок, то традиционные методы разведения этих животных позволяют получать лишь несколько потомков за всю их жизнь. Низкий уровень традиционного воспроизводства у самок и длительный 45 интервал времени между поколениями, в среднем 6-7 лет у крупного рогатого скота, значительно ограничивают генетический прогресс в животноводстве. В настоящее время эта проблема решается в значительной степени за счет внедрения новых, более радикальных методов разведения животных, в частности метода трансплантации эмбрионов от высокопродуктивных животных. Так, генетически выдающиеся самки освобождаются от необходимости плодоношения и выращивания потомства в постнатальный период. Таким образом, трансплантация эмбрионов производит высококачественных в генетическом отношении самок эффективными донорами эмбрионов с ценным генотипом. Разработанные в последние годы методы длительного хранения и транспортировки эмбрионов еще более повышают потенциальные возможности этого метода. Методом трансплантации эмбрионов можно получать телят и от старых высокоценных коров, если их яичники функционируют нормально, но сами они уже не способны вынашивать плод. Этот метод позволяет быстро размножать импортируемые группы животных и на их основе создавать крупные стада и целые ареалы определенных типов животных. Значительно дешевле перевозить из-за границы зародыши, чем животных, и при этом значительно меньше риск ввоза заразных заболеваний. Также этот прием может стать надежным способом получения двоен. Очевидно, можно предполагать, что в ближайшем будущем пересадка эмбрионов от высокопродуктивных животных станет основным методом разведения сельскохозяйственных животных с ценным генотипом. Проблема трансплантации эмбрионов привлекла большое внимание ученых нашей республики и животноводовпрактиков в конце 80-х и в начале 90-х годов. Так, например, в учебноопытном хозяйстве «Байкал» Бурятского сельскохозяйственного института к.с.-х.н., доцентом С.Г. Лумбуновым была развернута работа по трансплантации эмбрионов, извлеченных от коров с ценным генотипом и пересаженных низкопродуктивным реципиентам, и соответственно было получено несколько десятков телят от этих высокопродуктивных коров. 46 Доктором же сельскохозяйственных наук В.А. Тайшиным в одном из хозяйств Мухоршибирского замороженных эмбрионов района была черно-пестрой проведена трансплантация голштинской породы, приобретенных и завезенных из Московской области. Кроме того, в последнее время заслуживает серьезного внимания ученых и практиков разработка и внедрение в производство методов гормональной регуляции процессов размножения и других процессов жизнедеятельности самих животных, заложенных в их генотипе и относящихся к методам биотехнологии. Так, например, данной проблемой занимаются и освещают в своих работах доктор с.-х.наук, профессор Муруев А.В. и другие. Они отмечают, что необходимо максимально использовать биологические возможности организма, заложенные в генотипе, в том числе - гормональную регуляцию процессов роста и развития животных на ранней стадии постнатального их онтогенеза, так как именно в этот период интенсивность роста наиболее высокая. Необходимость разработки данного метода обоснована и тем, что гормоны обладают высокой биологической активностью. Они оказывают свое действие в ничтожно малых концентрациях, составляющих в массовом выражении нанограммы - микрограммы- 10ˉ6 - 10ˉ9 г на 100 мл (нг% - мкг%) или в молярном выражении - 10ˉ6 - 10ˉ11 Моль. Для иллюстрации биологической активности гормонов можно привести следующие расчеты, сделанные на основе имеющихся экспериментальных данных. Так, по данным ведущего эндокринолога В.Б. Розена (1980), 1 грамм женского полового гормона - эстрадиола может вызвать течку у 10000000 неполовозрелых мышей, 1 грамм гормоноида адреналина может активизировать работу 100000000 изолированных сердец, 1 грамм гормона насекомых - экдизона - вызвать линьку у 200000000 особей и т.д. Таким образом, перечисленные свойства гормонов (высокая биологическая их активность, секретируемость их железой, дистантность 47 действия) позволяют охарактеризовать их как особый класс биоорганических соединений и отличить их от других гуморальных факторов – медиаторов, тканевых гормонов и т.д. Кроме того, гормоны обладают большой мощностью и широким спектром действия на обмен веществ клеток, тканей и органов, на их физиологию и морфологию, и, соответственно, на рост и развитие животных. При этом гормональная регуляция в организме млекопитающих оказывает существенное, порой решающее влияние на фундаментальные жизненные процессы многоклеточного организма и на их воспроизводительную функцию. Ведущими эндокринологами доказано, что в системной регуляции ростовых процессов в организме позвоночных животных главенствующая роль принадлежит соматотропному гормону (СТГ), который синтезируется гипофизом животных. Одной из главных функций этого гипофизарного гормона является стимулирующее влияние на линейный рост, общие размеры тела, его массу, размеры и массу отдельных органов. При этом роль СТГ в регуляции ростовых и анаболических процессов у большинства изученных видов животных определяющая, так как гипофизэктомия животных на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза почти полностью приостанавливает рост и увеличение массы тела и даже снижает величину последней. А введение гипофизэктомированным животным препаратов гормона (СТГ) стимулирует и полностью восстанавливает интенсивность их роста. У растущих животных СТГ также значительно усиливает рост тела (сомы), увеличивает его массу, вызывает повышение задержки азота. Исследования, проведенные профессором Муруевым А.В., Жаповым Ж.Н. (2007), показали, что при максимальном использовании биологических возможностей организма животных, а именно - гормональной регуляции процессов роста и развития животных на ранней стадии постнатального их онтогенеза, действительно получаются очень хорошие результаты. Так, в 48 своих опытах они опирались на теоретические данные о том, что доминирующие ростовые процессы, происходящие в организме новорожденных животных, в конечном итоге обеспечивают усиление всех жизненно важных функций организма, необходимых для их полноценного существования, и доказали, что экзогенное введение синтетического аналога рилизинг-гормона «Сурфагон» подопытным животным на ранней стадии постнатального их онтогенеза действительно индуцирует синтез соматотропного гормона гипофизом телят: через 3 часа после введения данного препарата происходит незначительное повышение концентрации СТГ в крови подопытных животных; а в дальнейшие периоды исследований наблюдается заметная тенденция к повышению концентрации данного гормона. В настоящее время достоверно установлено, что соматотропный гормон, попадая в кровь и лимфу животных, вызывает гипертрофию и гиперплазию паренхиматозных органов, которые непосредственно участвуют в обмене веществ. Эти процессы, в свою очередь, усиливая обмен веществ животных, приводят к интенсивному наращиванию их живой массы. Кроме того, под действием СТГ происходит рост хрящевых тканей и эпифизарных частей трубчатых костей. Хрящевая ткань в последующем окостеневает, а на костную ткань всегда нарастает соединительная и мышечная ткани, которые являются источниками мясной продукции. Таким образом, соматотропный гормон, стимулируя линейный рост и наращивание общих размеров тела животных, приводит к эффективной трансформации потребляемого животными корма в животноводческую продукцию (мясо), что очень важно в рыночных условиях, так как законы рынка требуют получать максимум продукции с наименьшими затратами (корма, времени и т.д.). Вместе с тем перспективы дальнейшего развития биотехнологии в области животноводства и ветеринарии очень высоки. Так, например, широким фронтом ведутся исследования и разработки по выделению и 49 клонированию определенных генов и их внедрению в геном других животных. Ген соматотропина (гормона роста) крысы встроен в геном мыши, в результате этого увеличились скорость роста реципиента и конечная живая масса. В связи с этим, можно себе представить, какое огромное практическое значение будет иметь использование этого биотехнологического приема на сельскохозяйственных животных. Появляется возможность по заранее намеченному плану реконструировать геном домашних животных, придать ему заранее заданные свойства. Для достижения таких результатов традиционными методами потребовалась бы работа в течение многих поколений. Таким образом, эти эксперименты показали, что чужеродные гены могут быть введены домашним животным путем инъекции их в ядро или пронуклеус яйцеклетки. К этому же направлению исследований по биотехнологии относятся и работы по созданию трансгенных свиней, устойчивых к вирусу гриппа. Такие свиньи уже есть, и получены они в результате совместной деятельности отечественных и немецких ученых. В настоящее время начаты экспериментальные исследования по искусственному заражению этих животных вирусом гриппа и изучается реакция их организма на данный инфекционный процесс. Громадный интерес для зооветспециалистов представляет создание трансгенных животных с повышенной общей иммунобиологической устойчивостью организма к ряду инфекционных заболеваний. И вновь здесь особое место отводится проблеме получения трансгенных животных с интегрированным геном интерферона, который, как известно, полностью несет ответственность за оптимальное состояние общей иммунобиологической реактивности организма животных. Так, например, уже созданы кролики с интегрированным геном В-интерферона человека, которые обладают повышенной устойчивостью к миксоматозу кроликов. К сожалению, полной устойчивости к данной инфекции не наблюдается, как 50 при интеграции генов антисмысловых РНК, но отмечается повышенный уровень устойчивости к ней, что, очевидно, определяется экспрессией при заражении вирусом гена В-интерферона человека. В этой связи возникает возможность получения политрансгенных животных, сочетающих повышенную общую и специфическую иммуногенность, которая, очевидно, найдет наиболее быстрый выход в практику селекции. Таким образом, очевидно, необходимо, учитывая уже полученную информацию, сконцентрировать усилия ученых на тех проблемах клеточной и генной инженерии, работа над которыми уже дала определенные положительные результаты, с тем, чтобы реализовать последние в практике животноводства и ветеринарии. По-видимому, это будут новые диагностикумы и вакцины, стимуляторы воспроизводительной способности, продуктивности и роста, а также трансгенные животные, наследственно устойчивые к ряду вирусных болезней, получение монозиготных близнецов и клонирование животных 51 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и условия проведения исследований Экспериментальная часть работы выполнялась в условиях подсобного хозяйства Федерального казенного учреждения «Исправительная колония №8» (ФКУ ИК-8) Управления федеральной службы исполнения наказаний Российской Федерации по Республике Бурятия. Исследования проводили в период с 2011 по 2012 гг. на поголовье свиней крупной белой породы. Объектами исследований являлись: свиньи крупной белой породы, препарат «Фоллимаг» и синтетический аналог рилизинг-гормона «Сурфагон». Сельскохозяйственный участок ФКУ ИК-8 является структурным подразделением собственного производства ИК-8. Место расположения: 4-й км Спиртзаводской трассы Октябрьского района г. Улан-Удэ. Целью деятельности подсобного хозяйства «Свиноферма» является обеспечение спецконтингента учреждения продукцией сельскохозяйственного производства и создание рабочих мест для осужденных. На подсобном хозяйстве имеются участки по содержанию и разведению свиней крупной белой породы. Среднегодовое поголовье свиней составляет 350 голов. Свиноферма находится на территории закрытого учреждения и располагает помещениями для содержания свиней разновозрастных групп, кормокухней, хозяйственным блоком, убойным пунктом. Постройки свинофермы шлакозаливные, перекрытия, полы и перегородки - искусственное, деревянные. Освещение водоснабжение в помещениях централизованное. естественно- Навозные массы вывозятся специально выделенным автотранспортом на близлежащие поля, буртуются и затем используются в качестве органического удобрения. 52 2.2 Методы исследований 2.2.1. Методика стимуляции репродуктивной функции свиней Успешное развитие свиноводства во многом определяется хорошей организацией работы по воспроизводству стада свиней, которое должно базироваться на знании закономерностей роста, развития и биологических особенностей этого вида животных (Трухачев В., Филенко В., Кононова Л. и другие, 2003). На сегодняшний день по свиноводческим комплексам страны репродуктивный потенциал маточного поголовья в среднем реализуется на 80-83%, а в целом по отрасли - еще меньше. Нарушения воспроизводительной функции у свиноматок связаны, как правило, с несоблюдением в полном объеме требований гигиены кормления и многочисленными технологическими (и климатическими) стрессовыми воздействиями, приводящими к угнетению функциональной деятельности эндокринной системы и расстройству механизмов регуляции функции воспроизведения. Клинически это проявляется нарушением половой цикличности, снижением оплодотворяемости и многоплодия, повышением эмбриональной смертности и абортов, слабостью родовой деятельности и послеродовыми заболеваниями. Поэтому в системе мероприятий по обеспечению репродуктивного здоровья свиноматок, наряду с естественными факторами регуляции половой функции, вполне оправданным является применение корригирующей терапии с использованием специфических гормональных и гормоноподобных препаратов, обеспечивающих коррекцию функциональной деятельности гипоталамо-гипофизарно-гонадальной системы и смягчающих отрицательное действие на репродуктивную функцию неблагоприятных факторов среды обитания животных. Для направленной регуляции плодовитости животных используют в основном гонадотропные обладающие препараты плацентарного фолликулостимулирующим, происхождения, лютеинизирующим и 53 тиреотропным действием, гонадолиберины, активизирующие процесс созревания фолликулов и синхронизацию овуляции, а также простагландины F2α , обладающие лютеолитическим и миотропным действием. Высокий фолликулостимулирующий и овуляторный эффект от введения гонадотропных препаратов получают при отсутствии в яичниках активных лютеиновых структур (желтых тел, лютеиновых кист), то есть на фоне депрессии генеративной и гормональной функции гонад, вызываемой лактационной доминантой и чрезмерным воздействием различных стрессфакторов. Поэтому наиболее часто гонадотропины используют для активизации функциональной деятельности яичников у свиноматок после отъема поросят для профилактики бесплодия. Для реализации данной актуальной проблемы, имеющей большую практическую значимость, перед нами была поставлена цель - разработать эффективный, инновационный биотехнологический способ интенсификации производства свинины путем повышения уровня воспроизводства, т.к. только повышение уровня воспроизводства в технологии ведения свиноводства обеспечивает снижение себестоимости производства свинины за счет получения максимального количества приплода с каждой свиноматки. Для индуцирования множественной овуляции в яичниках свиноматок (суперовуляции, полиовуляции) и последующего получения максимального количества поросят с каждой свиноматки мы использовали препарат «Фоллимаг» - высокоочищенный от иммуногенных белков гонадотропный гормон сыворотки жеребых кобыл, изготовленный ЗАО «Мосагроген», серии 861210. Фоллимаг содержит гонадотропин сыворотки крови жеребых кобыл и вспомогательные вещества: глицин, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный. Представляет собой пористую массу от белого до светло-коричневого цвета. Хорошо растворим в физиологическом растворе или в воде для инъекций. Допускается легкая опалесценция раствора. Выпускают в виде стерильной лиофилизированной пористой массы для инъекций, расфасованной в 54 стеклянные флаконы вместимостью 10 мл с гормональной активностью в одном флаконе 750МЕ или 1000МЕ. Препарат представляет собой гонадотропный гормон (ГСЖК) сыворотки крови жеребых кобыл. С целью установления оптимальной дозы препарата для определения множественной овуляции в яичниках свиноматок нами был инъецирован препарат «Фоллимаг» в дозах 700, 800 и 900 МЕ на голову за 48 часов до их забоя. После извлечения половых органов нами визуально устанавливалось морфофункциональное состояние яичников, в частности - интенсивность роста и развития фолликулов в яичниках интересующих нас свиноматок. После визуального определения количества предовуляторных фолликулов в яичниках свиноматок, нами была проведена сравнительная оценка морфофункционального состояния яичников свиней в зависимости от введенной дозы препарата «Фоллимаг». На основании полученных результатов были набраны 2 группы основных свиноматок крупной белой породы по 15 голов в каждой. Все животные на момент исследований находились в одинаковых условиях кормления, содержания, при формировании групп учитывались возраст свиней, живая масса, многоплодие. Животным опытной группы был инъецирован препарат «Фоллимаг» в дозе 800МЕ на голову, внутримышечно в область уха. Контрольной группе свиноматок ничего не вводили, за ними, как за свиноматками из опытной группы было установлено постоянное клиническое наблюдение. После проявления животными первых клинических признаков половой охоты их запускали в отдельную клетку с хряком-производителем. 2.2.2. Методика стимуляции процессов роста и развития поросят в период постнатального онтогенеза Следующим приоритетным направлением в разработке биотехнологических способов интенсификации свиноводства, на наш взгляд, 55 является разработка биотехнологического способа стимуляции прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Известно, что процессы роста у млекопитающих на ранней стадии постнатального онтогенеза являются доминирующими. Эти доминирующие ростовые процессы, происходящие в организме новорожденных животных, в конечном итоге обеспечивают оптимальное усиление всех других жизненно важных функций организма животных, необходимых для их полноценного существования. Эта количественная сторона онтогенеза у многоклеточных животных определяется координированным увеличением размеров и числа функционирующих клеток, из которых складываются соответствующие органы и ткани целого организма. В основе увеличения размеров каждой клетки (гипертрофия) и их числа (гиперплазия) лежит ускоренный по сравнению с нерастущими тканями синтез РНК и белка, синтез ДНК и повышенная частота митозов. Таким образом, ростовые процессы, происходящие в организме животных, в конце концов обусловлены интенсивностью синтеза нуклеиновых кислот и белка в тканях (анаболические процессы). Интенсивность и время протекания ростовых процессов у животных на ранней стадии постнатального онтогенеза контролируется рядом внутренних и внешних факторов организма животных. К внутренним регуляторам, в частности, относят - гормоны, местные тканеспецифические и другие факторы саморегуляции ростовых процессов. Из внешних факторов, оказывающих определенное влияние на рост и белковый обмен, следует назвать следующие факторы: условия кормления, физическая и нервная нагрузка, климатические факторы, уровень фоновой радиоактивности внешней среды, концентрация кислорода в воздухе. Влияние внешних факторов на рост и анаболические процессы в организме животных реализуется через нервную и эндокринную системы. Существование любого живого организма как единого целого с его способностью к самовосстановлению, самосохранению и 56 самовопроизведению возникновения в эволюционно многоклеточном обусловило организме необходимость специализированного «управленческого» аппарата. Его специальными функциями стала системная (межклеточная) регуляция и программирование формирования и работы различных органов, тканей, клеток, т.е. направленное приведение их структуры и деятельности в соответствие с нуждами организма, которые сводятся к способности обеспечения постоянства внутренней среды. Внутренняя среда формирует условия, в которых существуют те или иные органы и их части, даже отдельные клетки организма. Для внутренней среды существуют оптимальные условия в целях сохранения последних, весь организм должен непрерывно менять свою внешнюю среду, если возникает опасность. Координация функций отдельных органов животных осуществляется при помощи двух важнейших систем регуляции - нервной и гормональной. Нервная система своими тончайшими нервными волокнами проникает почти во все клетки организма и в силу этого она идеально приспособлена для регистрации состояния функциональных изменений всех без исключения органов. Нервные волокна способны очень быстро проводить раздражения, что обеспечивает и быстрое приспособление организма к изменениям внешней и внутренней среды. Эндокринные железы млекопитающих выполняют главенствующую, жизненно важную функцию в их организме, и служат, прежде всего, для регулирования роста, развития, обмена веществ и размножения животных. В отличие от ускоренно протекающих нервных процессов, гормональная регуляция осуществляется более постепенно. Главной системой организма животных, которая обеспечивает координацию функций отдельных органов, является гормональная система. Все железы внутренней секреции иннервируются парасимпатическими нервными волокнами, которые управляют их функциями. Тесная связь гормональной и нервной систем осуществляется через гипофиз, управляемый 57 гипоталамусом. Так как гормоны образуются и могут поступать в кровь разными путями и в различном количестве, то важным фактором данной системы организма является очень точное дозирование их деятельности, что совершенно необходимо для обмена веществ и развития животных. Нарушения эндокринной регуляции животных могут возникнуть вследствие как чрезмерно усиленной, так и недостаточной продукции гормонов. Гормонами называют биологически активные вещества, которые, образуясь в определенных тканях эндокринной системы и попадая в кровь в ничтожно малых дозах, влияют на функции других тканей. Собственно гормоны образуются в специфических железах, которые выделяют свои продукты непосредственно в кровь (внутренняя или эндокринная секреция). Роль гормонов в организме состоит, прежде всего, в регуляции обмена веществ, роста и развития (морфогенеза), регуляции и развития половых желез и их деятельности. Они воздействуют также на поведение животных, на их устойчивость и приспособляемость к негативным влияниям внешней среды. Образование гормонов, выделение их в кровь контролируется нервной системой животных, которая на изменения внутренней среды отвечает вполне определенными регуляционными сигналами. Важные регуляционные центры управления функциями эндокринных желез, влияющих на обмен веществ, процессы размножения, а также водный и минеральный баланс, сосредоточены в гипоталамусе. Функционально они тесно связаны с гипофизом и вегетативной нервной системой. Большое значение для функциональной деятельности эндокринных желез имеет и кора больших полушарий головного мозга, от которой исходят тормозящие и стимулирующие импульсы для системы промежуточный мозг-гипофиз. Между отдельными клетками внутренней секреции в нормальных условиях существует равновесие, для поддержания которого служат различные предохранительные механизмы организма животных. Избыточный синтез того или иного гормона может компенсироваться 58 образованием антигормона. регулирующего механизма Кроме того, обратной это связи, ведет к который включению ограничивает образование и выделение гормона. С другой стороны, уже само понижение уровня одного гормона в крови ведет к повышению секреции другого гормона по механизму обратной связи. Из внешних факторов, оказывающих определенное влияние на рост и белковый обмен животных, следует назвать следующие: условия кормления, физическая и нервная нагрузка, климатические факторы, уровень фоновой радиоактивности внешней среды, концентрация кислорода в воздухе. Влияние внешних факторов на рост и анаболические процессы в организме животных реализуется через нервную и эндокринную системы. В последние годы к группе тропных гормонов, которые непосредственно влияют на обменные процессы организма животных, относят и гормон роста, или соматотропин (СТГ), который синтезируется специальными ацидофильными соматрофными клетками гипофиза (малые эозинофилы). Соматотропный гормон (СТГ) - важнейший стимулятор роста организма и синтеза белка в клетках (анаболические процессы), а также образования глюкозы и распада жиров, он осуществляет, по крайней мере, часть своих эффектов опосредованно, через усиление секреции печенью и, возможно, другими органами соматомединов. Оказывается ростовая активность соматотропного гормона (СТГ) у эмбриона и на самых ранних этапах постэмбрионального развития животных невелика. Очевидно, в эти периоды онтогенеза СТГ выполняет не сколько ростовые, сколько адаптивные функции. Сущность адаптации к внешним условиям среды животных - это обеспечение самосохранения и самоподдержания систем в меняющихся условиях внешней среды. Для реализации этой задачи нами были набраны опытная и контрольная группы новорожденных поросят в возрасте 1 месяц. Поросятам 59 опытной группы внутримышечно вводили синтетический аналог рилизинггормона (сурфагон) в дозе 5 мкг на голову. Мы надеялись и предполагали, что экзогенное введение сурфагона выступит в роли стимулирующего фактора, именно - запустит и будет стимулировать синтез соматотропного гормона (СТГ) гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза. Одной из главных функций этого гипофизарного гормона является стимулирующее влияние на линейный рост, общие размеры и увеличение массы у животных, размеры и массу отдельных паренхиматозных органов. На первом этапе экспериментальных исследований мы изучили влияние синтетического аналога рилизинг-гормона (сурфагона) на изменение концентрации СТГ в крови подопытных животных. Для этого нами был произведен забор крови у подопытных животных до введения сурфагона и после его инъекции через: 3 и 24 часа для определения концентрации соматотропина. На втором этапе наших исследований после изучения концентрации СТГ в крови подопытных животных (после экзогенной инъекции сурфагона) мы изучили динамику прироста живой массы поросят. С этой целью мы проводили взвешивание поросят в возрасте 1, 2, 3; 3,5 и 7 месяцев (возраст забоя животных) для определения живой массы и среднесуточного прироста после экзогенного введения синтетического аналога рилизинг-гормона. Для определения концентрации гормона в крови подопытных животных применяли иммуноферментный метод (ИФА). Оборудование для ИФА производится в зарубежных странах (HUMANФРГ; BIO-TEK instruments - США и др.) и отечественных фирм. Комплект оборудования ИФА производства ЗАО «Пикон» (г. Москва) включает в себя анализатор иммуноферментных реакций, автоматический промыватель планшетов, вибротермостат на две плашки и комплект механичесикх дозаторов. 60 ИФА применяется в ветеринарии для диагностики инфекционных болезней животных: оспы овец, чумы крупного рогатого скота и свиней; инфекционных болезней птиц: инфекционной бурсальной болезни, инфекционного бронхита кур, реовируса птиц, ньюкаслской болезни, синдрома снижения яйценоскости, сальмонеллеза, пастереллеза, микоплазмоза, гриппа птиц и других; для контроля за содержанием вредных веществ в продуктах животного и растительного происхождения, а также для количественного определения гормонов и других биологически активных веществ в биологических жидкостях организма млекопитающих. Состав набора для определения гормонов в сыворотке (плазме) крови. В состав набора для определения концентрации гормонов в крови телят методом иммуноферментного анализа входят следующие компоненты: 1. Планшет плоскодонный из прозрачного пластика для иммуноферментного анализа цельный (96-луночный) или стриповый (6 стрипов по 16 лунок каждый или 12 стрипов по 8 лунок каждый) с адсорбированным конъюгатом. 2. Стандарты гормонов калиброванные, лиофилизированная аморфная масса белого цвета: а) стандарт, содержащий 0 нг/мл б) стандарт, содержащий 33 нг/мл в) стандарт, содержащий 3,3 нг/мл г) стандарт, содержащий 10,0 нг/мл 3. Образец контрольный, содержащий 7,5 нг/мл гормона, лиофилизированная аморфная масса белого цвета. 1. Конъюгат пероксидазы из корня хрена с аффинными антителами к гормонам, жидкость красного, розового или желтого цвета или бесцветная 0,3; 0,6 или 1,5 мл. 2. Буфер №1, бесцветная жидкость - 0,3; 0,6 или 1,5 мл. - 1 фл. 3. Буфер №2, жидкость красного, розового или желтого цвета или бесцветная - 0,3; 0,6 или 1,5 мл. - 1 фл. 61 4. Фосфатно-солевой буферный раствор фосфорнокислый двузамещенный 12-водный; (ФСБР) - натрий калий фосфорнокислый однозамещенный; натрий хлористый, калий хлористый, рH 7,3±0,1 - 20кратный концентрат с детергентом, бесцветная жидкость - 15; 30 или 75 мл. 1 фл. 5. Тетраметилбензидин (ТМБ) - бесцветная прозрачная жидкость - 2,2; 4,4 или 11 мл.- 1 фл. 6. Субстратный раствор, бесцветная прозрачная жидкость - 8,8; 17,6 или 44 мл. - 1 фл. 10. Стоп - реагент (4 N серная кислота), бесцветная прозрачная жидкость - 12;24 или 60 мл. ПОСТАНОВКА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ. 1.Порядок маркировки планшета и внесения образца приведен на схеме. Время внесения образца в лунки одного планшета не должно превышать 15 минут. 2. Упаковку со стрипами (с планшетом) вскрывают, в рамку вставляют необходимое для работы количество стрипов, во все используемые лунки вносят по 300 мкл промывочного буфера и оставляют на 1 минуту. 3. Содержимое планшета удаляют переворачиванием отсасыванием так, чтобы в лунке не осталось жидкости. СХЕМА ВНЕСЕНИЯ ОБРАЗЦОВ 1 2 0 Х4 1,1 Х5 3,3 Х6 10,0 Х7 50,0 Х8 Х1 Х9 Х2 Х10 Х3 И т.д. или 62 4. В лунку 1 стрипа ряда А вносят 50 мкл калибровочной пробы, содержащей 0 нг/мл гормона. 5. В лунку 1 стрипа ряда В вносят 50 мкл калибровочной пробы, содержащей 1,1 нг/мл гормона. 6. В лунку 1 стрипа ряда С вносят 50 мкл калибровочной пробы, содержащей 3,3 нг/мл гормона. 7. В лунку 1 стрипа ряда D вносят 50 мкл калибровочной пробы, содержащей 10,0 нг/мл гормона. 8. В лунку 1 стрипа ряда E вносят 50 мкл калибровочной пробы, содержащей 50,0 нг/мл гормона. 9. В оставшиеся лунки вносят по 50 мкл анализируемых образцов (Х) сыворотки крови. 10. Лунки планшета со стандартами и анализируемыми образцами внося по 150 мкл раствора конъюгата. 11. Планшет инкубируют в течение 30 минут при температуре 37 0С в вибротермостате или термостате. 12. После окончания инкубации жидкость из лунок удаляют переворачиванием планшета или отсасыванием. Во все используемые лунки планшета вносят по 300 мкл промывочного буфера, после чего жидкость из лунок удаляют таким же образом. Процедуру повторяют 4 раза. После последней промывки в лунке не должно содержаться жидкости. 13. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора хромогена и инкубируют в течение 7-15 минут при температуре от 18 до 240С в темном месте. 14. В лунку планшета с хромогеном добавляют по 100 мкл стопреагента для остановки ферментативной реакции. 15. Оптическую плотность (ОП) измеряют на фотометре вертикально сканирования при длине волны 450 нм. Окраска должна быть стабильна не менее 30 минут. 63 КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ. 1. Порядок маркировки планшета и внесения образца приведен на схеме. Время внесения образца в лунки одного планшета не должно превышать 15 минут. 2. Упаковку со стрипами (с планшетом) вскрывают, в рамку вставляют необходимое для работы количество стрипов, во все используемые лунки вносят по 300 мкл промывочного буфера и оставляют на 1 минуту. 3. Содержимое планшета удаляют переворачиванием или отсасыванием так, чтобы в лунке не осталось жидкости. 4. В лунку 1 стрипа ряда А вносят 50 мкл образца контрольного, содержащего 7,5 нг/мл прогестерона. 5. В оставшиеся лунки вносят 50 мкл анализируемых образцов (Х) молока или сыворотки (плазмы) крови. 6. В лунки планшета с контрольным и анализируемыми образцами вносят по 150 мкл раствора конъюгата. 7. Планшет инкубируют в течение 30 минут при температуре 37 0С в вибротермостате или термостате. 8. После окончания инкубации жидкость из лунок удаляют переворачиванием планшета или отсасыванием. Во все используемые лунки планшета вносят по 300 мкл промывочного буфера, после чего жидкость из лунок удаляют таким же образом. Процедуру повторяют 4 раза. После последней промывки в лунке не должно содержаться жидкости. 9. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора хромогена и инкубируют в течение 7-15 минут при температуре от 18 до 240С в темном месте. 10. В лунку планшета с хромогеном добавляют по 100 мкл стопреагента для остановки ферментативной реакции. Окраска должна быть стабильна не менее 30 минут. 64 СХЕМА ВНЕСЕНИЯ ОБРАЗЦОВ 1 К.0 Х1 Х2 Х3 Х4 Х5 Х6 Х7 УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО И КАЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗОВ. 1. Учѐт результатов реакции при количественном анализе. Оптимальная плотность (ОП) растворов в лунках с контрольным и анализируемыми образцами после остановки ферментативной реакции измеряют на спектрофотометре «Униплан» фирмы ЗАО «Пикон» или на приборе аналогичного класса при длине волны 450 нм. Программное обеспечение прибора позволяет получать результаты измерений в виде конечных концентраций гормона в анализируемых образцах. 2. Учѐт результатов реакции при качественном анализе. При качественном анализе и визуальном учѐте реакции сравнивают окраску содержимого лунок с анализируемыми пробами с окраской лунки образца контрольного. Интенсивность цветовой реакции обратно пропорциональна концентрации гормона в исследуемых пробах. Реакцию сравнивают по принципу: «положительная» - интенсивность окраски пробы ниже интенсивности окраски контрольного образца; «отрицательная» интенсивность окраски пробы и интенсивность окраски контрольного образца одинаковы. 65 При спектрометрическом учѐте результатов реакции качественного анализа сравнивают значения ОП анализируемых проб со значением ОП образца контрольного. 66 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Морфофункциональная реакция яичников свиноматок на экзогенную инъекцию Фоллимага (ГСЖК) При разработке биотехнологического способа повышения плодовитости свиноматок огромное значение имеет разработка методов индуцирования множественной овуляции (суперовуляции). После того, как было установлено, что введение экзогенного фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) не ускоряет рост отдельных фолликулов, а стимулирует развитие одновременно нескольких фолликулов до предовуляторной стадии, гонадотропные препараты, содержащие ФСГ-активность, были использованы для вызывания множественной овуляции у домашних животных. В связи с тем, что главенствующим органом, определяющим плодовитость животных, является репродуктивная система, мы сочли нужным изучить морфофункциональную реакцию яичников свиноматок на экзогенное введение гонадотропина сыворотки жеребых кобыл (ГСЖК). Как видно из рис.1 яичники свиноматок - парные органы. В них образуются женские половые клетки - ооциты, и гормоны, необходимые для осуществления процессов воспроизводства. У половозрастных свинок яичники имеют бобовидную форму и гладкую поверхность. Рисунок 1. Яичники свиноматок. 67 Незадолго до и после наступления половой зрелости в результате выпячивания над поверхностью яичников фолликулов и желтых тел яичники приобретают форму ежевики или тутовой ягоды (бугристость), их размеры и масса в большей степени зависят от стадии полового цикла, возраста и массы животных. Длина яичника колеблется от 2 до 7 см, ширина от 1,5 до 4 см (рис.2). Рисунок 2. Форма яичников свиней Яичники свиней имеют эластичную консистенцию. Цвет яичников зависит от состояния половой функции животных. У неполовозрелых свинок они белые (рис.3), перед овуляцией приобретают розово-красный (рис.4), а затем кирпично-красный цвет (рис.5). Рисунок 3. Яичники неполовозрелых свинок 68 Рисунок 4. Яичник свиноматки перед овуляцией. Рисунок 5. Яичник свиноматки после овуляции (хорошо видны сформировавшиеся желтые тела). Во время супоросности у свиней они становятся фиолетовыми (рис.6). Рисунок 6. Яичники свиноматок в период супоросности. 69 Существуют различия в цвете обескровленных яичников (после убоя животных) и находящихся в физиологическом состоянии (при лапаротомии). В последнем случае они имеют более интенсивную светло-красную окраску. Яичники свиней покрыты зародышевыми клетками кубического эпителия. Под слоем зародышевого эпителия находится соединительнотканная белочная оболочка (рис.7). Рисунок 7. Соединительнотканная белочная оболочка, покрывающая основу яичника Она покрывает основу яичника, состоящую из рыхлой соединительной ткани. В ней различают наружную (корковую) и внутреннюю (мозговую) зоны. Мозговая зона состоит из рыхлой, частично ретикулярной, соединительной ткани, а соединительная ткань корковой зоны содержит тонкие пучки коллагеновых волокон и фиброциты. В соединительной ткани яичника как в корковой, так и в мозговой зоне имеются интерстициальные клетки. Они мезенхимного происхождения и участвуют как в эндокринной функции, вырабатывая эстрогены, так и в трофической. В корковом слое расположено множество фолликулов и желтых тел (рис.8). 70 Рисунок 8. Фолликулы и желтые тела, расположенные в корковом слое яичников В мозговой зоне находится большое количество нервных волокон, крупных кровеносных и лимфатических сосудов. В центре зоны они многократно ветвятся. Сосуды штопорообразно извиваются. Вены образуют венозное сплетение. Отсюда нервы и сосуды направляются в корковый слой яичника (рис.9), где достигают всех функциональных образований (фолликулов, желтых тел и т.д.). Рисунок 9. Сосудистые и нервные сплетения в корковом слое яичника 71 Вокруг фолликулов, интерстициальных клеток желтых тел, формируются атретических нервные фолликулов сплетения. и Нервы достигают яйцеклетки. В зависимости от стадии развития фолликулы располагаются в различных участках коркового слоя. Они состоят из половой и фолликулярных клеток. Последние выполняют по отношению к половой клетке трофическую (питательную) роль. Развитие и овуляция фолликулов У неполовозрелых свинок самые мелкие фолликулы (первичные, примордиальные) располагаются в корковом слое у его поверхности. Их количество у новорожденных свинок достигает сотни тысяч. Каждый их них состоит из половой клетки (ооцита первого порядка), окружающего его одного слоя фолликулярных клеток и соединительнотканной оболочки теки. Периодически часть первичных фолликулов начинает расти. По мере роста и развития они перемещаются в корковом слое ближе к центру яичника. Во время развития эпителий фолликула из плоского становится сначала кубическим, а затем призматическим. Размножаясь, фолликулярные клетки окружают ооцит первого порядка сначала в два, а затем и в несколько слоев. Формируются так называемые вторичные фолликулы, которые еще больше углубляются в корковый слой. В дальнейшем в центре фолликула появляется наполненная жидкостью полость, образующаяся из слившихся небольших наполненных жидкостью полостей между фолликулярными клетками. Фолликул превращается в пузырек (пузырчатый фолликул), Графов пузырек (рис.10). В процессе развития фолликула происходит рост и овоцитов. Они покрываются блестящей (прозрачной) оболочкой, которая состоит из мукополисахаридов и является продуктом обмена веществ овоцита. Вокруг овоцита фолликулярный эпителий располагается в виде радиальных лучей (лучистый венчик). Эти клетки выполняют по отношению к овоциту трофическую (питательную) роль. Их длинные отростки проникают через 72 отверстия в прозрачной оболочке к ее цитоплазме. Остальной фолликулярный эпителий фолликула называется зернистым. Рисунок 10. Пузырчатые фолликулы в корковом слое яичника По мере роста пузырчатый фолликул над поверхностью яичника предстает в виде прозрачного пузырька (рис.11). Диаметр зрелого фолликула 10-12 мкм. Развитый фолликул представляет собой пузырек, центр которого заполнен жидкостью. Рисунок 11. Пузырчатые фолликулы, выступающие над поверхностью яичника 73 В предовуляционный период на поверхности фолликула выявляется истонченный участок оболочки, состоящий в основном из перекрещивающихся волокон соединительной ткани. Остальные участки оболочки фолликула собираются в складки в виде сильного расширения сосудов. Разрыв фолликула и выход из него зрелой яйцеклетки (процесс овуляции) происходит в верхней его части, наиболее сильно выступающей над поверхностью. В настоящее время важнейшим резервом повышения рентабельности свиноводства и значительного увеличения производства свинины является интенсивное использование маточного стада. При этом важнейшей проблемой отрасли является повышение плодовитости и продуктивности свиноматок и сохранности полученного приплода. Для реализации этой проблемы мы опирались на достижения современной науки, а именно - на раскрытые разработки приемов регулирования механизмов воспроизводительной функции свиноматок (синхронизация половой охоты, овуляции и опоросов, трансплантация яйцеклеток и т.д.). Кроме того, достигнутые в последние годы успехи биологической науки в познании регуляции половой функции у животных создали все необходимые предпосылки для разработки эффективных методов управления процессом воспроизводства животных, а достижения современной химии открыли широкие возможности в использовании фармакологических средств для внедрения этих методов в практику животноводства. В связи с тем, что главенствующим органом, определяющим плодовитость животных, являются яичники, мы сочли нужным изучить морфофункциональную реакцию яичников свиноматок на экзогенное введение препарата Фоллимаг. С целью установления оптимальной дозы вводимого препарата и для определения эффективности индуцирования суперовуляции в яичниках свиноматок нами был инъецирован препарат «Фоллимаг» в дозах 600; 700 и 74 800 МЕ за 48 часов до забоя животных. После извлечения половых органов у убитых свиней нами визуально учитывалось морфофункциональное состояние яичников, в частности - рост и развитие фолликулов в яичниках свиноматок, обработанных Фоллимагом. Рисунок 12. Яичники свиней после введения 600 МЕ Фоллимага Результаты проведенных исследований, представленные на рисунке 12, показывают, что введение Фоллимага свиноматкам в дозе 600 МЕ с целью стимуляции половой охоты является недостаточным, т.к. не происходит фолликулогенеза, т.е. вводимая доза не вызвала активизацию роста и развития фолликулов. Исследования яичников свиней, обработанных в дозе 700 МЕ на голову, показали, что указанная доза также является недостаточной для индуцирования суперовуляции в яичниках свиней (рис.13). Рисунок 13. Яичники свиней после введения 700 МЕ Фоллимага 75 Введение Фоллимага в дозе 800 МЕ на голову вызвало положительное действие на яичники свиней, т.е. индуцировало рост и развитие нескольких фолликулов одновременно для последующей их суперовуляции и оплодотворения большего числа яйцеклеток и, соответственно, получения большего количества приплода (рис.14). Рисунок 14. Морфологическая реакция яичников свиней на экзогенное введение Фоллимага в дозе 800 МЕ. Таки образом, исходя из полученных результатов морфологического исследования яичников свиней, представленных на рисунках 12,13,14; установлено, что введение Фоллимага в дозе 600 и 700 МЕ не вызвало желаемого эффекта суперовуляции в яичниках свиней и наиболее оптимальной дозой для суперовуляции и последующего повышения плодовитости свиней является 800 МЕ на животное. 3.2. Повышение плодовитости свиней биотехнологическим способом В достижении устойчивого роста производства продуктов питания для населения страны особое внимание в настоящее время уделяют ускоренному развитию свиноводства, как наиболее скороспелой отрасли животноводства. Успехи в реализации поставленных задач во многом определяются интенсивностью использования маточного поголовья в воспроизводстве. Физиологические нормативы репродуктивного цикла свиноматок позволяют 76 получать до 2,2-2,3 опоросов и от каждой свиноматки до 22-23 деловых поросят. По состоянию на 2009 г. репродуктивный потенциал маточного поголовья по свиноводческим комплексам страны в среднем реализуется на 80-83%, а в целом по отрасли - еще меньше. Нарушения воспроизводительной функции у свиноматок связаны, как правило, с несоблюдением в полном объеме требований гигиены кормления и многочисленными технологическими (и климатическими) стрессовыми воздействиями, приводящими к угнетению функциональной деятельности эндокринной системы и расстройству механизмов регуляции функции воспроизведения. Клинически это проявляется нарушением половой цикличности, снижением оплодотворяемости и многоплодия, повышением эмбриональной смертности и абортов, слабостью родовой деятельности и послеродовыми заболеваниями. Поэтому в системе мероприятий по обеспечению репродуктивного здоровья свиноматок, наряду с естественными факторами регуляции половой функции, вполне оправданным является применение корригирующей терапии с использованием специфических гормональных и гормоноподобных препаратов, обеспечивающих коррекцию функциональной деятельности гипоталамо-гипофизарно-гонадальной системы и смягчающих отрицательное действие на репродуктивную функцию неблагоприятных факторов среды обитания животных. Для направленной регуляции плодовитости животных используют в основном гонадотропные (гонадотропины, препараты получаемые из плацентарного сыворотки крови происхождения жеребых кобыл), обладающие фолликулостимулирующим, лютенизирующим и тиреотропным действием, гонадолиберины (синтетические аналоги гонадотропин-рилизинггормона), обеспечивающие аденогипофиза, повышение активизирующие процесс функциональной созревания активности фолликулов и синхронизацию овуляции, а также простагландины F2α, обладающие лютеолитическим и миотропным действием. Специфичность действия 77 препаратов каждой группы на органы репродуктивной системы предопределяет и тактику их практического использования. Высокий фолликулостимулирующий и овуляторный эффект от введения гонадотропных препаратов получают при отсутствии в яичниках активных лютеиновых структур (желтых тел, лютеиновых кист), то есть на фоне депрессии генеративной и гормональной функции гонад, вызываемой лактационной доминантой (подсос) и чрезмерным воздействием различных стресс-факторов. Поэтому наиболее часто гонадотропины используют для активизации функциональной деятельности яичников у свиноматок после отъема поросят для профилактики бесплодия. В связи с вышеизложенным, на основании полученных результатов исследований яичников свиней нами были набраны опытная и контрольная группы свиноматок по 15 голов в каждой с целью получения максимального количества приплода от них. Животным опытной группы был инъецирован препарат «Фоллимаг» в дозе 800 МЕ на голову, внутримышечно в каудальную область уха. На следующем этапе экспериментальных исследований нами производился количественный учет приплода, родившихся от свиноматок опытной и контрольной групп. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 2. Таблица 2 - Показатели опороса свиней после стимуляции репродуктивной функции препаратом Фоллимаг, ( X±S X, n=15) Группы животных Показатели Опытная Контрольная 12,0±0,90** 8,6±0,49 Cv, % 29,2 20,9 Lim 10-15 6-12 Средний выход поросят на 1 свиноматку, X±S X *- Р 0,95; **- P>0,99 здесь и далее Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований мы считаем, что применение препарата Фоллимаг в дозе 800 78 МЕ свиноматкам действительно стимулирует репродуктивную функцию свиноматок, повышая их плодовитость и синхронную оплодотворяемость за счет индуцирования суперовуляции в яичниках свиней и оплодотворения большего числа суперовулировавшихся фолликулов, позволяющее получать большее количество полноценного приплода за счет максимального индуцирования проявления генетического и биохимического потенциала самих свиноматок, заложенного в их генотипе. Кроме того, разработанный нами биотехнологический способ стимуляции воспроизводительной функции свиноматок при внедрении его в свиноводство позволит значительно снизить себестоимость производимой продукции, повысить конкурентоспособность отрасли за счет максимального получения приплода, а также усовершенствовать саму технологию ведения свиноводства и повысить производительность труда его работников. 3.3. Индуцирование синтеза соматотропного гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза В настоящее время в агропромышленном комплексе (АПК) нашей страны одной из самых крупных, приоритетных и актуальных проблем, согласно национального проекта «Развитие АПК», является интенсификация животноводства, реализация которой должна основываться на использовании инновационных методов технологии ведения животноводства и быстрейшего внедрения их в производство. В этой связи заслуживает серьезного внимания ученых и практиков разработка и внедрение в производство методов биотехнологии и бионанотехнологии, так как данные отрасли науки обеспечивают высокий потенциал экономического роста, от которых зависит качество жизни населения, технологическая, продовольственная и оборонная безопасность, ресурсо- и энергосбережение любой страны. Кроме того, в связи с переходом АПК на рыночные условия, разработка и использование методов биотехнологии становятся наиболее актуальными и практически значимыми, так как проблема повышения 79 доходности и рентабельности отрасли животноводства встает очень остро в этих жестких рыночных условиях, особенно при глобальном экономическом кризисе и обеспечении продовольственной безопасности страны. Реализация данной актуальной проблемы, по мнению ведущих ученых, возможна за счет разработки и внедрения в производство современных эффективных биотехнологических методов повышения обмена веществ в организме животных, стимуляции скорости роста и прироста живой массы животных на ранней стадии постнатального онтогенеза, так как именно в этот период постнатального развития ростовые процессы у животных являются доминирующими. Поэтому заслуживает серьезного внимания ученых и, на наш взгляд, разработка методов гормональной регуляции, стимулирующих основные процессы жизнедеятельности животных, а именно генетический и биохимический потенциал роста и развития самих животных, заложенных в их генотипе. При разработке данного метода к нам пришла оригинальная научная мысль - максимально использовать внутренние резервы организма самих животных, в частности, использовать гормональную регуляцию процессов роста и развития животных на ранней стадии постнатального онтогенеза, так как именно в этот период интенсивность (скорость) роста новорожденных животных наиболее высокая, просто необходимо запустить этот механизм запуска роста и развития животных. Необходимость и своевременность разработки данного метода обоснована и тем, что гормоны обладают высокой биологической активностью и оказывают свое действие в ничтожно малых концентрациях, составляющих в массовом выражении нанограммымикрограммы- 10-6-10-9г на 100мкг (нг%-мкг%) или в молярном выражении 10-6 - 10-11 моль. Для привести иллюстрации следующие биологической расчеты, активности сделанные на гормонов основе можно имеющихся экспериментальных данных. Так, по данным ведущего эндокринолога В.Б. Розена (1980), 1 грамм женского полового гормона - эстрадиола может 80 вызвать течку у 10000000 неполовозрелых мышей, 1 грамм гормоноида адреналина может активизировать работу 100000000 изолированных сердец, 1 грамм гормона насекомых - экдизона - вызвать линьку у 200000000 особей и так далее. Следовательно, гормоны обладают большой мощностью и широким спектром действия на обмен веществ клеток, тканей и органов, на их физиологию и морфологию и, соответственно, на рост и развитие животных. При этом гормональная регуляция в организме млекопитающих оказывает порой решающее влияние на фундаментальные жизненные процессы многоклеточного организма и на их воспроизводительную функцию. Опираясь на эти теоретические данные, к нам пришла оригинальная мысль, а именно - максимально использовать внутренние резервы организма самих животных, в частности, использовать гормональную регуляцию процессов роста и развития животных на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Эти доминирующие ростовые процессы, происходящие в организме новорожденных животных, в конечном итоге обеспечивают усиление всех жизненно важных функций организма, необходимых для их полноценного существования. Ведущими эндокринологами доказано, что в системной регуляции ростовых процессов в организме позвоночных животных главенствующая роль принадлежит соматотропному гормону (СТГ), который синтезируется гипофизом животных. Одной из главных функций этого гипофизарного гормона является стимулирующее влияние на линейный рост, общие размеры и увеличение массы у животных. Исходя из этих данных, перед нами была поставлена задача разработать эффективный биотехнологический способ стимуляции синтеза соматотропного гормона (СТГ) гипофизом поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Для выполнения данной работы мы использовали препарат «Сурфагон», являющийся синтетическим аналогом гонадотропин - рилизинг- 81 гормона ЛГ-РГ-люли-берина (нейросекрета гипоталамуса). В начале наших исследований мы решили достоверно убедиться в том, что экзогенное введение Сурфагона действительно будет индуцировать синтез СТГ гипофизом поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Для получения достоверных результатов была набрана опытная группа поросят в возрасте 1 месяц, которым был введен рилизинг-гормон «Сурфагон». Мы надеялись и предполагали, что внутримышечная инъекция синтетического аналога рилизинг-гормона новорожденным поросятам выступит в роли стимулирующего фактора для синтеза СТГ гипофизом поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Результаты проведенных исследований представлены на рисунке 15. 1,2 1,151 1,065 1 0,8 0,71 0,6 0,4 0,2 0 до введения Сурфагона после введения Сурфагона через 3 часа 24 часа Рисунок 15. Концентрация СТГ в крови поросят до и после введения сурфагона, нг/мл. Как видно из рисунка 15, концентрация соматотропного гормона в крови поросят опытной группы уже через 3 часа после введения синтетического аналога рилизинг-гормона имеет незначительную тенденцию к повышению, через 24 часа после введения препарата повышается в 1,6 раза 82 (38,3%). Следовательно, можно предположить, что синтезируемый соматотропный гормон окажет свое биологическое действие на рост и развитие животных. 3.4. Эффективность применения синтетического аналога рилизинг-гормона в постнатальный период На следующем этапе исследований, убедившись в том, что введение синтетического аналога рилизинг-гормона действительно индуцирует синтез соматотропного гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза, мы производили взвешивание поросят до и через 15 дней после введения синтетического аналога рилизинг-гормона с целью получения достоверных результатов прироста живой массы и его связи с индуцированным синтезом соматотропного гормона гипофизом поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 3. Таблица 3 - Показатели живой массы поросят до и после введения синтетического аналога рилизинг-гормона, ( X±S X, n=10) Возраст Показатели Группа животных животных: 1 мес. 1,5мес. Живая масса животных до инъекции Сурфагона X±S Живая масса животных после инъекции Сурфагона X±S X Опытная Контрольная 4,1±0,28 4,1±0,49 21,7 38,3 6,86±0,51 6,0±0,62 23,5 32,5 (кг) Сv, % X (кг) Сv, % Из таблицы 3 видно, что средняя живая масса поросят до введения синтетического аналога рилизинг-гормона была одинаковой и составила в возрасте 1 месяц - 4,1 кг. Но, как мы видим из таблицы 3, уже через полмесяца после введения данного препарата живая масса поросят опытной группы была выше по сравнению с контролем. Так, в возрасте 1,5 месяца она составила 6,86±0,51 кг, а в контрольной - 6,0±0,62 кг. 83 Кроме того, с целью изучения взаимосвязи между индуцированным синтезом соматотропного гормона в крови поросят опытной группы и показателями прироста их живой массы, нами была изучена корреляционная связь между данными показателями путем вычисления коэффициента корреляции. Результаты показали, что коэффициент корреляции равен +0,82; что указывает на наличие высокой степени взаимосвязи между переменными, то есть за изменением уровня концентрации СТГ в крови подопытных животных следует соответствующее изменение показателей живой массы животных. На следующем этапе проведенных исследований нами производилось взвешивание животных обеих групп через каждые 15 дней с целью получения достоверных результатов показателей прироста живой массы поросят опытной группы. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 4. Таблица 4 - Показатели прироста живой массы поросят опытной группы после введения сурфагона и поросят контрольной группы, ( X±S X, n=10) Группа животных Показатель Возраст животных 2 мес. 2,5 мес. Живая масса животных (кг) через: 3 мес. 3,5 мес. Опытная Контрольная 9,8±0,76* 7,5±1,1 Сv, % 24,5 45,0 X±S 13,7±1,17* 10,2±1,29 Сv, % 26,9 40,3 X±S 20,4±1,8* 15,3±1,77 Сv, % 27,9 36,7 X±S 26,2±1,71** 19,3±1,93 21,0 31,7 X±S X X X X Сv, % Как видно из таблицы 4, живая масса поросят опытной группы в течение всего периода наблюдений была достоверно выше по сравнению с 84 показателями контрольной группы. Так, в возрасте 2 месяца она составила у животных опытной группы 9,8±0,76 кг, что на 2,3 кг больше в среднем по группе, чем у поросят контрольной группы (7,5±1,1 кг). В дальнейшие периоды исследований живая масса животных опытной группы также была выше по сравнению с показателями у контрольной группы: так, в возрасте 2,5 месяца - 13,7±1,17 в опытной группе и 10,2±1,29 кг - в контрольной группе; в 3 месячном возрасте - 20,4±1,8 и 15,3±1,77 кг соответственно. В возрасте 3,5 месяца средняя живая масса поросят опытной группы составляла 26,2±1,71 кг, а контрольной группы животных - 19,3±1,93 кг, разница между данными показателями составила 6,9 кг (35,8%). На следующем этапе исследований нами производилось взвешивание поросят опытной группы в возрасте 7-8 месяцев, перед их забоем. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 5. Таблица 5 - Показатели живой массы поросят опытной группы перед забоем, ( X±S X, n=10) Возраст животных: 7-8 мес. Группа животных Показатели Опытная X±S Живая масса животных после инъекции Сурфагона X (кг) Сv, % 115,59±2,68 7,32 Поросят контрольной группы взвешивали в возрасте 10-12 месяцев, также перед их забоем на мясо. Результаты взвешиваний представлены в таблице 6. Таблица 6 - Показатели живой массы поросят контрольной группы перед забоем, ( X±S X, n=10) Возраст животных 10-12 мес. Группа животных Показатели Живая масса животных Контрольная X±S X (кг) Сv, % 114,2±2,81 7,78 85 Для более глубокого представления об интенсивности роста животных опытной группы, взаимосвязи между величиной растущей массы и скоростью роста нами вычислялась абсолютная скорость роста по возрастным периодам. Полученные результаты представлены в таблице 7. Таблица 7 - Абсолютный прирост поросят по периодам исследований (кг), n=10 Периоды исследований, мес. Опытная группа Периоды исследований, мес. Контрольная группа 0-1,5 5,86 0-1,5 5,0 1,5-3,5 20,34 1,5-3,5 14,3 3,5-7,5 95,25 3,5-11 99,9 Рассматривая и анализируя динамику изменения абсолютного прироста животных опытной и контрольной групп по возрастным периодам, можно отметить, что в период до 1,5 месяцев разница между исследуемыми показателями составила 17,2%; с 1,5 до 3,5 месячного возраста - 42,2%; в периоде 3,5-7,5 месяцев в опытной группе абсолютная скорость роста составила 95,25 кг, тогда как в контрольной группе в периоде 3,5-11 месяцев она оставила 99,9 кг. Исходя из полученных данных, следует, что скорость абсолютного прироста поросят опытной группы была значительно выше, т.к. в возрасте 7,5 месяцев средняя живая масса составила 115,59±2,68 кг, тогда как живая масса поросят контрольной группы в возрасте 11 месяцев составила всего 114,2±2,81 кг. Очевидно, скорость роста поросят опытной группы обусловлена мощным биологическим действием соматотропного гормона, который действует на процессы роста и развития животных опосредованно, путем гипертрофии внутренних паренхиматозных органов, а гипертрофия внутренних паренхиматозных органов всегда сопровождается повышением обмена веществ в организма животных, что приводит к усилению процессов роста и развития животных. 86 3.5. Концентрация гипофизарных гормонов в крови и в мясе животных опытной и контрольной групп В современном промышленном птицеводстве и животноводстве для увеличения производства продукции нередко используются различные гормональные стимуляторы роста (прогестерон, тестостерон, эстрадиол 17β и др.), что может приводить к их избыточному накоплению в мясе и мясопродуктах, это представляет серьезную опасность для здоровья человека, поскольку данные соединения нарушают обменные процессы и гормональный статус организма, влияют на сердечную деятельность (Островская А.В., 2004). В связи с этим, во многих странах мира ужесточаются требования по контролю за содержанием гормональных препаратов в продуктах за содержанием гормональных препаратов в продуктах животного происхождения, что предусмотрено соответствующими Директивами ЕЭС 89/662/ЕЕС, 90/425/ЕЕС, 96/23/ЕС. В нашей стране Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ издано соответствующее указание (№10-7-1/900 от 04.10.1999 г.) по организации Государственного ветеринарного надзора за содержанием гормональных стимуляторов роста и тиреостатиков в продуктах животного происхождения, в котором отражены требования по предупреждению попадания гормонов в продовольственное сырье; требования, критерии и мероприятия, касающиеся их применения в ветеринарной практике, а также лабораторный контроль за содержанием этих веществ в продуктах и кормах. В регуляции многих жизненных функций организма животного принимают участие железы внутренней секреции. Эти железы называются так потому, что не имеют выводных протоков и вырабатываемые в них вещества непосредственно поступают в кровь. Такие вещества носят название гормонов или инкретов. Гормоны отличаются высокой биологической активностью, но в то же время обладают специфичностью, то есть каждый гормон оказывает влияние на определенные функции 87 организма. Одни гормоны влияют на рост, другие - на обмен веществ, третьи - на развитие организма и так далее. Трудно определить в организме такие физиологические процессы, которые не находились бы под регулирующим влиянием гормонов. Согласно современным представлениям, действие гормонов основано на стимуляции или угнетении каталитической функции определенных ферментов. Этот эффект достигается посредством активации или ингибирования уже имеющихся ферментов в клетках за счет ускорения их синтеза путем активации генов. Гормоны осуществляют свое биологическое действие, соединяясь с рецепторами - информационными молекулами, трансформирующими гормональный сигнал в гормональное действие. Рецептор после опознавания и связывания гормона генерирует химические или физические сигналы, которые вызывают взаимодействий, последовательную заканчивающихся цепь пострецепторных проявлением специфического биологического действия гормона. Синтез гормонов, участвующих в обмене веществ животных, происходит непрерывно, всегда в одинаковом количестве. Если организму животных потребуется большее количество гормонов, клетки соответствующей железы (по нервным путям посредством рецепторов, находящихся в самой железе) получают нервный стимул для повышения своей активности и наоборот, то есть избыточный синтез какого-либо гормона приводит к включению регулирующего механизма обратной связи, который ограничивает образование и выделение гормона. С другой стороны, само понижение уровня одного гормона в крови животных ведет к повышению секреции другого гормона по механизму обратной связи или принципу «плюс-минус взаимодействия», впервые сформулированным отечественным ученым М.М. Завадовским. 88 Гипоталамо-гипофизарная регуляция осуществляется механизмами, функционирующими по принципу обратной связи, в которых четко выделяются различные уровни взаимодействия. В целях определения аккумуляции гормонов в тканях животных и, соответственно, исключения канцерогенного и тератогенного действия гормонов в крови и в мясе подопытных животных, мы провели исследования по определению концентрации соматотропного гормона в крови животных, взятой во время их забоя, и в пробах мяса подопытных животных, которых по достижению 7-8 месяцев сдавали на забой. В качестве сравнения взяли кровь и пробы мяса от животных контрольной группы, которым на ранней стадии постнатального онтогенеза не вводили синтетический аналог рилизинг-гормона «Сурфагон». Результаты проведенных исследований показали, что исследуемый соматотропный гормон не был обнаружен в крови и в пробах мяса, взятых от животных опытной и контрольной групп. Таким образом, внутримышечное введение синтетического аналога рилизинг-гормона подопытным животным не вызывает у них аккумуляции гипофизарных гормонов в мясе, следовательно, они не могут оказать канцерогенного и тератогенного действия на организм человека в результате потребления мяса, что отвечает требованиям приложения 12 Санитарных Правил и Нормативов 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов». 3.6. Экономическая эффективность результатов исследований Многообразие объектов животноводческой деятельности, разные направления животноводческой работы обусловили разработку системы специальных экономических показателей, позволяющих выявить эффективность затрат труда специалистов животноводства, целесообразность использования тех или иных средств (Юров И.И., 2001), в частности внедрения инновационных биотехнологических способов интенсификации свиноводства. 89 Определение экономической эффективности результатов научных исследований является важным критерием оценки научных работ, так как интенсификация отраслей животноводства возможна только путем повышения рентабельности самих отраслей. Таблица 8 - Расчет экономической эффективности применения гонадотропного препарата «Фоллимаг» Показатели Количество в группе Получено поросят, гол. Цена реализации 1 кг живой массы молодняка свиней, руб. Стоимость 1 поросенка при рождении, руб. Стоимость, полученная за счет дополнительного количества приплода, руб. Затраты на препараты, руб. Экономическая эффективность в результате проведенных исследований Экономическая эффективность на 1 руб.затрат Опытная группа Контрольная группа Свиноматки 15 15 180 129 112 112 10,9×112=1220,8 10,9×112=1220,8 51×1220,8=62260,8 - 4650 - 62260,8-4650=57610,8 - 57610,8/4650=12,4 В таблице 8 дан расчет экономической эффективности применения биотехнологического способа повышения плодовитости свиноматок за счет максимального индуцирования проявления генетического и биохимического потенциала самих животных, заложенного в их генотипе. Полученные результаты показали, что применение данного биотехнологического способа действительно экономически выгодно, так как экономическая эффективность 90 в результате проведенных исследований составила 57610,8 рублей (расчет только на 15 животных); на рубль затрат - 12,4 рубля. Следующим биотехнологических приоритетным способов направлением интенсификации в разработке свиноводства является разработка биотехнологического способа повышения прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза. Результаты проведенных исследований показали, что животных опытной группы отправляли на забой в возрасте 7-8 месяцев, средняя живая масса которых составляла 115,59±2,68 кг; животных контрольной группы сдавали на забой в возрасте 10-12 месяцев, средняя живая масса - 114,2±2,81 кг, причем разница между показателями живой массы животных опытной и контрольной групп была незначительной, а разница между показателями возраста забоя животных обеих групп составила в среднем 3,5 месяца (таблица 9). Таблица 9 - Расчет экономической эффективности применения синтетического аналога рилизинг-гормона «Сурфагон» Показатели Количество в группе Возраст забоя, мес. Средняя живая масса перед забоем, кг Стоимость, полученная за счет экономии материальных и трудовых затрат за 3,5 мес., руб. Затраты на препараты, руб. Экономическая эффективность в результате проведенных исследований Экономическая эффективность на 1 руб.затрат Опытная группа Контрольная группа Поросята 10 10 7-8 10-12 115,59±2,68 кг 114,2±2,81 кг 12565,1 - 385 - 12565,1-385=12180,1 - 12180,1/385=31,6 91 Результаты проведенных расчетов показывают, что применение синтетического аналога рилизинг-гормона «Сурфагон» с целью стимуляции роста и развития поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза действительно экономически выгодно: так, при забое животных в возрасте 7-8 месяцев хозяйство получит прибыль в размере 12565,1 рублей за счет экономии материальных и трудовых затрат в расчете на 3,5 месяца на 10 голов. Экономическая эффективность при этом на рубль затрат составила 31,6 рублей. Таким образом, разработанные нами биотехнологические способы повышения плодовитости свиноматок и стимуляции роста и развития поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза обеспечат хозяйствам ресурсо- и энергосбережение, сократят материальные затраты, тем самым способствуя повышению рентабельности производства и снижению себестоимости производимой продукции, что очень важно и актуально в современных рыночных условиях. 92 ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ Мир вступил в XXI век с множеством нерешенных проблем, среди которых продовольственная остается наиболее важной, острой и насущной. Поэтому основная задача животноводов - устранение дефицита продуктов питания путем интенсификации животноводства. Изучение состояния животноводства, играющего решающую роль в продовольственном обеспечении населения, приобретает особую значимость. Во многих странах, особенно в нашей стране, существует продовольственный дефицит. Важнейший показатель качества рациона людей - потребление животного белка. В развитых странах, с учетом импорта и экспорта, потребляется более 50 г животного белка в сутки на человека, а в развивающихся странах 10-30 г - намного ниже рационной нормы. Подавляющая часть населения земного шара в ближайшие годы не будет обеспечена нормой питания по калорийности, а достижение нормы потребления животного белка остается проблемой для всего человечества (Мысик А.Т., 2010). Учитывая существующий разрыв между фактическим уровнем потребления молочных и мясных продуктов и нормами их питания во многих странах мира, особое внимание уделяется развитию животноводства и наращиванию производства животноводческой продукции. По-прежнему в решении мясной проблемы свиноводство занимает первое место - 37,7%, эта отрасль животноводства выгодно отличается эффективной конверсией корма в продукцию по сравнению со жвачными животными. Поэтому, в современных рыночных условиях особое значение приобретает рациональное использование генетических ресурсов животноводства и производство животноводческой продукции методами ресурсо- и энергосберегающих Биотехнологий и Бионанотехнологий. «Высоких технологий», именно - 93 Развитие свиноводства в нашей стране обеспечивалось высоким научным потенциалом, были разработаны эффективные технологии производства свинины. Но, к сожалению, в процессе реформирования агропромышленного комплекса, которое проводилось без достаточной научной разработки и без глубокого экономического анализа возможных негативных последствий, наибольшее снижение производства произошло в зернопотребляющих отраслях животноводства. Многие хозяйства, специализирующиеся на производстве свинины, в силу резкого удорожания концентрированных кормов, диспаритета цен, отсутствия инвестиций и льготных кредитов остались без собственных средств с огромной задолженностью бюджетам всех уровней, поставщикам энергетических и других ресурсов. В результате численность поголовья и производство свинины уменьшилось более чем в 2 раза. Особенно резко снизилось производство в сельхозпредприятиях, реализация на убой свиней сократилась в 5 раз, весовые кондиции животных, реализованных на мясо, снизились более чем на 20 % и сегодня остаются низкими - 85 кг. Такая неблагоприятная ситуация в животноводстве вынудила и обусловила необходимость разработки научной концепции по восстановлению и развитию животноводства в новых экономических условиях. Разработанной концепцией развития животноводства в России предусмотрено увеличить производство животноводческой продукции в следующих размерах: в расчете на душу населения производство молока должно возрасти с 220 до 386 кг, мяса - с 30 до 70 кг, яиц с 234 до 324 шт. В среднем по стране удельный вес продукции скотоводства должен быть в пределах 52 %, свиноводства - 32 %, овцеводства - 5%, птицеводства 23 % от общей стоимости животноводческой продукции. В структуре мясной продукции доля говядины должна составить 44 %, свинины - 32 %, баранины и прочих видов мяса - 6%. Кроме того, Указом Президента РФ от 30 января 2010 года утверждена Доктрина 94 продовольственной безопасности РФ, где стратегической целью продовольственной безопасности указано обеспечение населения нашей страны безопасной животноводческой продукцией. Гарантией ее достижения является стабильность и увеличение объемов внутреннего производства, а также наличие и создание необходимых резервов и запасов, имеющих пороговые значения в отношении: зерна - не менее 95%; сахара - не менее 80%; растительного масла - не менее 80%; мяса и мясопродуктов (в пересчете на мясо) - не менее 90%. Для успешной реализации данной Доктрины продовольственной безопасности РФ, существующие традиционные методы производства продукции животноводства, безусловно, еще не утратили своего значения и еще некоторое время будут определять темпы производства животноводческой продукции. Но, вместе с тем, во многих развитых странах в настоящее время наблюдается бурный рост интереса к производству животноводческой и другой сельскохозяйственной продукции методами инновационных технологий, а именно - «Биотехнологий» и «Бионанотехнологий», т.к. данные отрасли науки определяют научно-технический прогресс любой страны, обеспечивают ее оборонную и продовольственную безопасность и заметно улучшают качество жизни населения этой страны. Интенсификация животноводства и переход его на рыночные отношения, на которые нацеливают объективные условия, особенно остро выдвигают перед биологической наукой проблему разработки эффективных методов управления процессом воспроизводительной функции животных. В связи с вышеизложенным, для реализации интенсификации технологии ведения свиноводства и производства свиноводческой продукции, перед нами была поставлена цель - разработать и внедрить в производство эффективные биотехнологические способы повышения плодовитости свиноматок и повышения прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. 95 Важнейшим резервом повышения рентабельности свиноводства и значительного увеличения производства свинины является интенсивное использование маточного стада. При этом важнейшей проблемой отрасли является повышение плодовитости и продуктивности свиноматок и сохранности полученного приплода. (Б.Д. Кальницкий, 1985; В.Д. Кабанов, 2001 и др.). Для реализации этой проблемы мы опирались на достижения современной науки, а именно - на раскрытые разработки приемов регулирования механизмов воспроизводительной функции свиноматок (синхронизация половой охоты, овуляции и опоросов, трансплантация яйцеклеток и т.д.). В связи с вышеуказанным, в целях реализации данной инновационной разработки, мы использовали препарат «Фоллимаг» - высокоочищенный от иммуногенных белков гонадотропный гормон сыворотки жеребых кобыл. С целью установления оптимальной дозы препарата для индуцирования множественной овуляции, мы определяли визуально морфофункциональное состояние яичников свиноматок, обработанных Фоллимагом. Результаты проведенных исследований показали, что наиболее оптимальной дозой для индуцирования суперовуляции в яичниках свиней является доза 800 МЕ на животное. На следующем этапе экспериментальных исследований нами производился количественный учет приплода, принесенного свиноматками из опытной и контрольной групп. Полученные результаты показали, что среднее количество поросят, полученных в опоросах от свиноматок опытной группы, было достоверно больше по сравнению с приплодом от свиноматок контрольной группы. Так, при биометрической обработке полученных данных было установлено, что применение препарата Фоллимаг повысило плодовитость свиноматок опытной группы по сравнению со свиноматками контрольной группы на 39,5%. 96 Таким образом, мы считаем, что применение препарата Фоллимаг свиноматкам действительно стимулирует репродуктивную функцию свиноматок, повышая их плодовитость и оплодотворяемость за счет активизации множественной овуляции и оплодотворения большего числа яйцеклеток, позволяющее получить большее количество полноценного приплода за счет максимального использования генетического и биохимического потенциала самих свиноматок, заложенного в их генотипе. Кроме того, разработанный нами бионанотехнологический способ стимуляции воспроизводительной функции свиноматок при внедрении его в сельскохозяйственное производство позволит значительно снизить себестоимость производимой продукции за счет максимального получения приплода, а также усовершенствовать саму технологию ведения свиноводства. Следующим приоритетным направлением в разработке биотехнологических способов интенсификации свиноводства, на наш взгляд, является разработка биотехнологического способа повышения прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального их развития. При этом мы исходили из теоретических данных ученых, в частности, ведущими эндокринологами доказано, что в системной регуляции ростовых процессов в организме позвоночных животных и человека главенствующая роль принадлежит СТГ, который синтезируется гипофизом животных. Одной из главных функций этого гипофизарного гормона является стимулирующее влияние на линейный рост, общие размеры тела, его массу, размеры и массу отдельных органов. При разработке данного способа мы опирались на данные ведущих эндокринологов о том, что гормоны обладают высокой биологической активностью, большой мощностью и широким спектром действия на обмен веществ клеток, тканей и органов, на их физиологию и морфологию, и, соответственно, на рост и развитие животных, а также и на то, что этот способ, по нашему мнению, должен полностью относиться к инновационной 97 технологии ведения животноводства и производства животноводческой продукции, так как в корне будет отличаться от традиционной технологии ведения животноводства, и обладать неоспоримыми преимуществами, которые будут отражены в выводах. Для выполнения данной работы мы использовали синтетический аналог рилизинг-гормона (нейросекрета гипоталамуса). В начале наших исследований мы решили достоверно убедиться в том, что экзогенное введение синтетического аналога рилизинг-гормона действительно будет индуцировать синтез СТГ гипофизом поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Для получения достоверных результатов и определения концентрации СТГ у поросят была набрана опытная группа поросят в возрасте 1 месяц, которым был введен синтетический аналог рилизинг-гормона в дозе 5 мкг на животное. Мы надеялись и предполагали, что внутримышечная инъекция синтетического аналога рилизинг-гормона новорожденным поросятам выступит в роли стимулирующего фактора для синтеза СТГ гипофизом поросят на ранней стадии постнатального их онтогенеза. Результаты проведенных исследований показали, что концентрация исследуемого соматотропного гормона имела тенденцию к повышению после введения синтетического аналога рилизинг-гормона в крови животных опытной группы (от 0,710 до 1,151 нг/мл). Параллельно с гормональными исследованиями мы производили взвешивание поросят до и через 15 дней после инъекции синтетического аналога рилизинг-гормона. Полученные результаты показали, что средняя живая масса поросят до введения синтетического аналога рилизинг-гормона была одинаковой и составила в возрасте 1 месяц - 4,1 кг., но уже через полмесяца после введения данного препарата живая масса поросят опытной группы была выше по сравнению с контролем. Так, в возрасте 1,5 месяца она составила 6,86±0,51 кг, а в контрольной - 6,0±0,62 кг. Кроме того, коэффициент корреляции составил +0,82, что указывает на прямо 98 пропорциональную зависимость между показателями концентрации соматотропного гормона в крови животных опытной группы и показателями прироста их живой массы. На следующем этапе проведенных исследований нами производилось взвешивание животных обеих групп через каждые 15 дней с целью получения достоверных результатов показателей прироста живой массы поросят опытной группы. Результаты проведенных исследований показали, что живая масса поросят опытной группы в течение всего периода наблюдений была достоверно выше по сравнению с контрольной группой. Так, в возрасте 2 мес. она составила у животных опытной группы 9,8±0,76 кг, а у поросят контрольной группы - 7,5±1,1 кг, что на целых 2,3 кг больше в среднем по группе. В дальнейшие периоды исследований живая масса животных опытной группы также была выше по сравнению с показателями у контрольной группы так, в возрасте 2,5 мес. - 13,7±1,17 и 10,2±1,29 кг; в 3 мес. - 20,4±1,8 и 15,3±1,77 кг; в 3,5 мес. - 26,2±1,71 и 19,3±1,93 кг соответственно. Таким образом, разница между показателями живой массы животных опытной и контрольной групп в 3,5-месячном возрасте составила 35,8%. Разница между этими данными была статистически достоверна с вероятностью p>0,95. Для более глубокого представления об интенсивности роста животных опытной группы, взаимосвязи между величиной растущей массы и скоростью роста мы проанализировали динамику изменения абсолютного прироста живой массы животных опытной и контрольной групп по возрастным периодам, вплоть до самого забоя животных. Результаты проведенных исследований показали, что в период до 1,5 месяцев разница между исследуемыми показателями составила 17,2%; с 1,5 до 3,5 месячного возраста - 42,2%; в периоде 3,5-7,5 месяцев в опытной группе абсолютная скорость роста составила 95,25 кг, тогда как в контрольной группе в периоде 3,5-11 месяцев она оставила 99,9 кг. Исходя из полученных данных, следует, что скорость абсолютного прироста поросят опытной группы была 99 значительно выше, т.к. в возрасте 7,5 месяцев средняя живая масса составила 115,59±2,68 кг, тогда как живая масса поросят контрольной группы в возрасте 11 месяцев составила всего 114,2±2,81 кг. Очевидно, после введения синтетического аналога рилизинг-гормона у подопытных животных происходит ускоренное наращивание живой массы по сравнению с поросятами контрольной группы за счет биологического действия СТГ, в частности - за счет стимуляции гипертрофии внутренних паренхиматозных органов, которая всегда сопровождается повышением обмена веществ в организме животных. Таким образом, мы считаем, что нами разработаны эффективные биотехнологические способы интенсификации свиноводства и производства свиноводческой инновационной продукции, технологии которые ведения полностью соответствуют свиноводства, экономически эффективны, обеспечивают ресурсо- и энергосбережение данной отрасли. 100 ВЫВОДЫ 1. Экзогенное введение препарата Фоллимаг в дозе 800 МЕ на голову обеспечивает оптимальную суперовуляторную реакцию яичников свиней для повышения их воспроизводительной способности; 2. Стимуляция репродуктивной функции свиней препаратом Фоллимаг позволяет повысить уровень их плодовитости на 39,5%; 3. Внутримышечная инъекция синтетического аналога нейросекрета гипоталамуса (рилизинг-гормона) соматотропного гормона поросятам гипофизом поросят стимулирует синтез на стадии ранней постнатального их онтогенеза в 1,6 раза (38,3%); 4. Искусственно индуцированный синтез соматотропного гормона стимулирует повышение живой массы поросят в возрасте 3,5 мес. на 35,8% по сравнению с показателями поросят контрольной группы; 5. Искусственная гипофизом поросят индукция синтеза сопровождается соматотропного эффективной гормона трансформацией потребляемого корма в мясную продукцию и, следовательно, снижает себестоимость производства свинины. 6. Соматотропный гормон (гормон роста) в крови, взятой во время забоя свиней, и в пробах мяса, отобранных от свиней опытной и контрольной групп после забоя не выявлялся, что отвечает требованиям приложения 12 Санитарных Правил и Нормативов 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов»; 7. Разработанный биотехнологический способ стимуляции прироста живой массы поросят повышает производительность труда работников свиноводства и приводит к интенсификации технологии ведения свиноводства. 8. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составила при применении Фоллимага - 12,4 рубля, при применении Сурфагона - 31,6 руб. 9. Разработанные биотехнологические способы повышения плодовитости свиней и стимуляции прироста живой массы поросят на ранней 101 стадии постнатального онтогенеза позволяют снизить себестоимость производимой продукции и повысить ее конкурентоспособность. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Разработанные биотехнологические способы стимуляции воспроизводства свиней и прироста живой массы поросят на ранней стадии постнатального онтогенеза предлагаются для внедрения их в технологию ведения свиноводства хозяйств с разной формой собственности. 102 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ: 1. Абрамова, И. М. Влияние питания на морфофункциональное развитие репродуктивных органов животных / И.М. Абрамова, Ф.Г. Каюмов // Вестник РАСХН. - 2004. - №5. - С.55-56. 2. Айдагулова, C. B. Роль патологии фолликулярной ткани яичников в развитии овариальной дисфункции / С. В. Айдагулова, Г. И. Непомнящих, Ю. В. Галкина, И. О. Маринкин, В. М. Кулешов// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т.144. №10. - С.452-456. 3. Акатов, В. А. Ветеринарное акушерство и гинекология / В. А. Акатов, Г. А. Кононов. - Л.: Колос, 1977. 4. Актуальные вопросы интенсификации воспроизводства стада и повышения сохранности приплода: Сб. науч. тр. - Донской с.-х. институт / Ред.кол.: Степанов В. И. (гл.ред.) и др. - ст. Персиановка (Рост.обл.): Дон.СХИ, 1999. 5. Амерханов, Х. А. Приоритетно повышение продуктивности, а не рост поголовья / Х. А. Амерханов // Животноводство России. - 2004. №1. - С. 2-4. 6. Амстиславский, С. Я. Методы биотехнологии в практике разведения животных / С. Я. Амстиславский, Л. Ф. Максимовский, М. Т. Воротников. – Новосибирск: Институт цитологии и генетики, 1991. – 170 с. 7. Бабайлова, Г. Совершенствование технологии кормления свиней / Г. Бабайлова // Свиноводство. - 1986. - №3. - С. 19-21. 8. Баймишев, Х. Б. Морфоадаптационные изменения структур матки телок в зависимости от дозы движения / Х. Б. Баймишев // Современные проблемы животноводства. - Казань, 2000. - С. 197-198. 9. Базонов, В. Эффективность промышленного производства свинины в России / В. Базонов, И. Базонов // Свиноводство, 2005. - №1. - С.24-25. 103 10. Биотехнология сельскохозяйственных животных / Эрнст Л. К., Прокофьев М. И. - М.: Колос, 1995. 11. Бутенко, Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе / Р. Г. Бутенко. - М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. 12. Бэйрд, Д. Т. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих / Д. Т. Бэйрд. - М., 1987.- С. 118-144. 13. Валюшкин, К. Д. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных / К. Д. Валюшкин, Г. Ф. Медведев. - 2-е изд., перераб. и доп. - Мн.: Урожай, 2001. - С. 48-95. 14. Варфоломеев, С. Д. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов / С. Д. Варфоломеев, С. В. Калюжный. - М.: Высшая школа, 1990. 15. Волкопялов, Б. П. Свиноводство: Учебник для студентов зоотехнических вузов и факультетов. / Б. П. Волкопялов. - 3-е изд., перераб. – М., 1963 г. - С. 72-179. 16. Воронцов, Н. Н. Развитие эволюционных идей в биологии. / Н. Н. Воронцов - М.: Отдел УНЦ ДО МГУ, 1999. 17. Воспроизводство сельскохозяйственных животных / Ред.кол.: Ю. М. Бирдин (зам.отв.ред. и др.) // ВАСХНИЛ, Сиб.отд-е, Сиб.н.-и. и проектно-технол. ин-т жив-ва. - Новосибирск, 1990. - Вып.4. 18. Гегамян, Н. Развитие отрасли свиноводства на промышленной основе / Н. Гегамян, А. Стариков, Н. Пономарѐв // Свиноводство - 2003.- №2.С.9-11. 19. Гегамян, Н. С. Комплексное решение проблем в отрасли свиноводства России / Н. С. Гегамян, Л. К. Эрнст // Свиноводство. - №5. - 2003. - С. 2-3. 20. Голиков, А. Н. Физиология сельскохозяйственных животных. / А. Н. Голиков, Г. В. Паршутин - М: Колос, 1980. - 480 с. 21. Грудев, Д. И. Многоплодие свиней. / Д. И. Грудев - М. : Россельхозиздат, 1976. - 225 с. 104 22. Гудилин, И. Содержание гормонов в крови свиней разных генотипов / И. Гудилин, Л. Лазарева // Свиноводство.-2008.- №2.- С.27-28. 23. Гудилин, И. Параметры метаболизма белков в крови свиней разного генотипа / И. Гудилин, Л. Лазарева // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки.- 2008.- №1 .- С.81-83. 24. Дарвин, Ч. Д. Изменение животных и растений в домашнем состоянии. / Ч. Д. Дарвин - М., 1941. 25. Десятов, В. Г. Интенсификация мясного скотоводства. / В. Г. Десятов, Н. И. Мамонтов, В. Н. Алинкин - М.: Росагропромиздат, 1991. 26. Доброхотов, Г. Н. Свиноводство. / Г. Н. Доброхотов - М.: «Колос», 1974. - С.84-115. 27. Долматова, А. В. Морфофункциональные особенности яичников свиноматок с различными генотипами по гену FSHB / А. В. Долматова, Е. Н. Сковородин // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, 2009. - №4. - С. 19-20. 28. Долматова, А. В. Патоморфология репродуктивных органов свиноматок / А. В. Долматова, Е. Н. Сковородин / Вестник Башкирского ГАУ, 2010. - №1.- С. 29-35. 29. Дуник, И. М. Проблемы развития животноводства и его научного обеспечения / И. М. Дуник // Зоотехния. - 1995. - №10. - С. 28-30. 30. Егорова, В. Н. Новые достижения биотехнологии на службе у медицины и ветеринарии / В. Н. Егорова // Практик, 2002. - №2. С.48-50. 31. Завадовский, М. М. Избранные труды / под ред. И. К. Журек; коммент. Ю. Д .Клинского. - М.: Агропромиздат, 1990. 32. Завадовский, М. М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных. / М. М. Завадовский - М.: Сельхозиздат, 1963.- 671 с. 105 33. Завертяев, Б. П. Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота. / Б. П. Завертяев - Ленинград: Агропромиздат, Ленинградское отделение, 1989 - 265с. 34. Зиновьева, H. A. Животноводство в XXI веке / Н. А. Зиновьева, Е. А. Гладырь, Д. А. Фролкин // Сборник научных трудов ВИЖ. - 2001.С.218-224. 35. Игнатьев Р. Р. Возрастная иммунология сельскохозяйственных животных / Р. Р. Игнатьевич // Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2002. - Вып. I. - С. 21-23. 36. Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве: Материалы всесоюз. науч. конф. (г.Витебск) / отв.ред. В. П. Шишков. - М.: МВА, 1992. 37. Кабанов, В. Д. Повышение продуктивности свиней./ В. Д. Кабанов М.: Колос, 1983. - 256 с. 38. Кабанов, В. Д. Рост и мясные качества свиней. / В. Д. Кабанов - М.: Колос, 1972. - 192с. 39. Кабанов, В. Д. Свиноводство. / В. Д. Кабанов - М.: Колос, 2001. 40. Квасницкий, A. B. Новый метод прогнозирования многоплодия и крупноплодности свиней. / A. B. Квасницкий, Л. А. Конюхова // Вестник Полтавского государственного СХИ, 2000.- №1. - С. 25-30. 41. «Концепция - прогноз развития животноводства в России до 2010 года». - МСХ РФ 2002 г. (п.1 и 11). 42. Красота, В. Ф. Биотехнология в животноводстве. / В. Ф. Красота, Б. П. Завертяев - М.: Колос, 1994. 43. Кукушкин, С. А. Нарушение функции воспроизводства у свиней / С. А. Кукушкин, А. М. Рахманов // Ветеринарный консультант.- 2003.№3. - С.3-4. 44. Кукушкин, С. А. Болезни репродуктивной сферы свиней / С. А. Кукушкин, В. М. Ковалишин // Животновод.- 2003.- №3. - С.22-23. 106 45. Кюбар, Х. В. Морфометрическая характеристика гистоструктуры эндометрия коров и свиноматок в разных физиологических состояниях: автореф. дис. …д-ра. вет. наук / Х.В. Кюбар. – М., 1983. 29 с. 46. Ладан, П. Е., Мысик А.Т. Породы свиней / П. Е. Ладан, А. Т. Мысик. ВАСХНИЛ. - М., 1981. 47. Лазарева, Л. В. Система гормонального мониторинга у животных / Л. В. Лазарева // Фундаментальные исследования, 2006. - №8. - С.32. 48. Левин, К. Л. Физиология и патология воспроизводства свиней. / К. Л. Левин - М.: Росагропромиздат, 1990. - 225 с. 49. Лумбунов, С. Г. Продуктивность и резистентность молочного скота Бурятии. / С. Г. Лумбунов - Улан-Удэ: БГСХА,2001. - 147 с. 50. Лысов, В. Ф. Гормональный статус сельскохозяйственных животных. / В. Ф. Лысов - Казань: КВИ, 1982. 51. Макрушин, П. В. Физиология и продуктивность сельскохозяйственных животных: учеб. пособие для с.-х. вузов в 2 ч. / П. В. Макрушин, В. М. Лазарев. - Сарат. с.-х. ин-т им. Н.И.Вавилова. Саратов: ССХИ, 1990. 52. Мамонтов, Н. Динамика живой массы и напряженности роста подсвинков / Н. Мамонтов // Свиноводство, 2004. - №4. - С. 10-11. 53. Муруев, А. В. Перспективы использования биотехнологического метода трансплантации эмбрионов овец в профилактике инфекционных заболеваний / А. В. Муруев // Сб. науч. трудов Оренбургского анатомов, отделения гистологов и Всероссийского эмбриологов. научного Академия общества ветеринарной медицины. Морфология и хирургия в практической ветеринарии и медицине. - Оренбург, 1999 - С. 20-26. 54. Муруев, А. В. Биотехнология в животноводстве и ветеринарии / А. В. Муруев, Ю. К. Хоженоев // Тезисы докл. к конф. «По вопросам 107 ветеринарии и животноводства, посвященную 70-летию зооинженерного факультета». - Казань, 2000 - С. 56-59. 55. Муруев, А. В. «Стимуляция гипоталамо-гипофизарной системы телят на ранней стадии их постнатального онтогенеза» / А. В. Муруев, Ж. Н. Жапов // Сб. науч. трудов Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии», ГНУ «ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко». - М., 2006. 56. Мустафин, Р. Х. Морфология яичников при их дисфункциях / Р. Х. Мустафин, E. H. Сковородин // Морфология, 2008. - № 4. - С. 84. 57. Мягкова, М. А. Выявление естественных антител против вазопрессина при системной красной волчанке иммуноферментным методом / М. А. Мягкова, С. О. Багурин, А. А. Савицкий // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №4. - С. 3-6. 58. Мысик, А. Т. Развитие отрасли свиноводства в странах мира / А. Т. Мысик // Свиноферма. - 2006. - №5. - С.34-37. 59. Мысик, А. Т. Современные тенденции развития животноводства в странах мира / А. Т. Мысик // Зоотехния. - 2010. - №2. - С.2-8. 60. Негреева, А. Н. Развитие половых органов у свинок / А. Н. Негреева, Ш. С. Бабушкин, В. А Аскеров // Зоотехния. - 2009. - №9. - С.29. 61. Нежданов, А. Г. Ветеринарный контроль за воспроизводством крупного рогатого скота и свиней / А. Г. Нежданов, В. Д. Михайлов, A. M. Вислогузов // Ветеринария. - 2003. - №12. - С. 3-8. 62. Нежданов, А. Г. Гормональный контроль воспроизводительной функции свиней / А.Г. Нежданов, В.Н. Коцарев // Ветеринария. - 2009. -№9. - С. 38-40. 63. Нежданов, А. Г.Современное представление о половом цикле самок животных // Ветеринария. -2003. - №11. - С.32-36. 64. Никитин, В. Я. Функциональная связь между яичникам и слизистой оболочкой матки коров / В.Я. Никитин, Э.Н. Григ // Диагностика, 108 лечение и профилактика заболеваний с.-х. животных. - Ставрополь: Ставропольский СХИ, 1975. - С.25-34. 65. Никульников, В. С. Биотехнология продукции животноводства / В. С. Никульников, В. К. Кретинин. - М.: Колос, 2007. - 544 с. 66. Овсянников, А. И. Породы свиней в СССР / А. И. Овсянников ВАСХНИЛ. - М., 1970. 67. Основы биотехнологических процессов. Ч.1. «Асептика в биотехнологии» / И. В.Тихонов, Е. С.Воронин, С. В.Ковалев и др. М.: МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 2000. 68. Особенности гипофизарно-гонадных взаимоотношений у крупного рогатого скота в онтогенезе / Степанов Г. С., Дмитриев В. Б., Дяконов Е. Ф. и др. // Гормоны в животноводстве. - М.: Колос, 1997. - С. 58-66. 69. Павлов, В. А. Физиология воспроизводства крупного рогатого скота. / В. А. Павлов - М.: Россельхозиздат, 1984. - 208с. 70. Плохинский, H.A. Алгоритмы биометрии. / Н. А. Плохинский - М.: МГУ, 1980. - 165с. 71. Понкратов, В. Биотехнологический метод контроля наступления опоросов / В. Понкратов // Ветеринария с.-х.животных. - 2009. - №3. С. 36-37. 72. Пономарѐв, Н. П. Влияние подсосного периода на свиноматок / Н. П. Пономарев // Свиноводство.-2001. -№1. - С.24-25. 73. Почерняев, Ф.К. Селекция и продуктивность свиней. / Ф. К. Почерняев - М.: Колос, 1979. - 223с. 74. Развитие биотехнологии на современном этапе жизнеобеспечения общества / И. Л. Беро // Ветеринарный врач, 2010. - №3. - С.3-5. 75. Регуляция физиологических функций продуктивных животных: межвуз.сб.науч.тр. / под ред. А. Д. Белова. – М.: МВА им. К.И.Скрябина, 1993. 76. Рыбчин, В. Н. Основы генетической инженерии. / В. Н. Рыбчин. СПб.: СпбГТУ, 1999. 109 77. Савченко, О. Н. Гормональная регуляция функции половых желез / О. Н. Савченко, Г. С. Степанов // Гормоны в животноводстве. - М., 1997. - С.34-51. 78. Самуйленко, А. Я. Задачи биотехнологии в реализации Доктрины продовольственной безопасности РФ / А.Я. Самуйленко // Ветеринария и кормление. - 2011. - №2. - С.22-24. 79. Сахарова, Е. Д. Биотехнология. Вопросы, проблемы, перспективы / Е. Д. Сахарова // Практик, 2002. - №2. - С.44-47. 80. Сеин, О. Б. Половая цикличность, морфолого-биохимические особенности становления половой функции у свиней / О. Б. Сеин, В. Е. Косарев // Сельскохозяйственная биология. - 1988. - №1. - С.88-92. 81. Сеин, О. Б. Становление генеративной функции у свиней / О. Б. Сеин // Зоотехния. - 1994. - №5. - С.27-29. 82. Сельскохозяйственная биотехнология: сб. работ / под ред. В. С. Шевелухи. - М.: Воскресенье, 2000. - Т.1. 83. Сельскохозяйственная биотехнология: сб. работ / под ред. В. С. Шевелухи. - М.: Воскресенье, 2000. - Т.2. 84. Сиразиев, Р. З. Морфофункциональные изменения в матке свиней при различном физиологическом состоянии: автореф. дис. ...докт.биол.наук / Сиразиев Рамазан Закарьянович - Улан-Удэ, 1999. 35с. 85. Спирин, С. Биотехнология - фундамент ветеринарной медицины третьего тысячелетия / С. Спирин // Ветеринарная клиника. - 2008. №12. - С.20. 86. Стрекозов, Н. И. Пути интенсификации производства говядины / Н. И. Стрекозов // Зоотехния. - 2003. - №1. - С.2-6. 87. Стрекозов, Н. И. Молочное скотоводство России: настоящее и будущее / Н. И. Стрекозов // Зоотехния. - 2008. - №1. - С.18-21. 88. Студенцов, А. П. Ветеринарное акушерство и гинекология. / А. П. Студенцов - М.: Сельхозиздат, 2000. 110 89. Тельцов, Л. П. Механизмы и закономерности индивидуального развития / Л. П. Тельцов, В. А. Здоровинин, И. Р. Шашанов, В. Н. Родин / Достижения зоотехнической науки и практики - основа развития производства продукции животноводства. - Волгоград, 2005. - С.106-109. 90. Тельцов, Л. П. Периодизация развития крупного рогатого скота в онтогенезе / Л. П. Тельцов // Сельскохозяйственная биология. - М., 2000. - № 4. - С. 13-19. 91. Тельцов, Л. П. Смена генераций дефинитивных органов пищеварительной системы в онтогенезе / Л. П. Тельцов // 3-я междунар. конф. Актуальные проблемы биологии в животноводстве. Докл. ВНИИФБ и П с/х ж-х. - Боровск, 2000. - С. 220-222. 92. Тельцов, Л. П. Этапность развития органов человека и животных и наследственность в онтогенезе / Л. П. Тельцов // Матер. междунар. конф. «Естествознание на рубеже столетий». - М.: Дагомыс, 2001. Т.2. - С. 135-140. 93. Тельцов, Л. П. Выращивание животных в онтогенезе для получения наивысшей генетической продуктивности / Л. П. Тельцов // Соврем. пробл. и достижения аграрной науки в животн. и растениеводстве: сб. статей. - Барнаул, 2003. - № 4. - С. 206-211. 94. Тельцов, Л. П. Концепция выращивания животных и увеличения продукции животноводства в 2-3 раза / Л. П. Тельцов // Современные наукоемкие технологии. - М., 2004. - № 2. - С. 27-32. 95. Тельцов, Л. П. Механизмы и закономерности индивидуального развития крупного рогатого скота / Л. П. Тельцов // Животновьдни науки. Болгария - София, 2004. - Т.41. - № 6. - С. 56-59. 96. Тельцов, Л. П. О выращивании высокопродуктивного крупного рогатого скота / Л. П. Тельцов // Вестник Российской академии сельскохоз. наук. - М., 2005. - С. 82-84. 111 97. Тельцов, Л. П. Выращивание животных в онтогенезе для получения наивысшей генетической продуктивности / Л. П. Тельцов, Т. А. Романова, Н. А. Кудаков // Естественно-науч. исслед.: теория, методы, практика. - Саранск, 2003. - Вып.3. - С. 212-217. 98. Турков, В. Г. Динамика лютропина под влиянием сурфагона / В. Г. Турков // Матер.Всерос.науч. и учеб.-метод.конф. по акушерству, гинекологии и биотехнологии размножения животных. - Воронеж, 1994. - С. 197. 99. Турков, В. Г. воспроизводства Эндокринные крупного аспекты рогатого скота программированного с использованием гонадолиберина и простагландина F2α : автореф. дис. … док.вет.наук. / Турков Владимир Георгиевич - Воронеж, 1996. - 36с. 100. Тутов, И. К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов. / И. К. Тутов, В. И. Ситьков - Ставрополь, 1997. 101. Хватов, Б. П. О строении и функциональных изменениях яичников домашних млекопитающих и человека / Б. П. Хватов // Тр. 1-го Крымского мед. ин-та. - Симферополь, 1970. - Т. 44. - Вып. 3. - С. 5560. 102. Хонина, Г. В. Морфология и гистохимия яичников крупного рогатого скота в онтогенезе: автореф.дис. … канд. вет. наук. / Хонина Галина Васильевна - Омск, 1984. - 18 с. 103. Хоженоев, Ю. К. Экзогенная гормональная стимуляция коровреципиентов для повышения приживляемости эмбрионов / Ю. К. Хоженоев, А. В. Муруев // Проблемы нейрогуморальной регуляции физиологических функций висцеральных систем. - Омск: ИВМ ОмГАУ, 2000. - С. 97-98. 104. Черемисинов, А. Г. Структурно-функциональные особенности яичников животных в норме и патологии / А. Г. Черемисинов // Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.х. животных. - Воронеж, 1993. - С.96. 112 105. Черемисинов, А. Г. Морфофункциональные изменения в яичниках животных под влиянием отечественных простагландинов / А. Г. Черемисинов // Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.-х. животных. - Воронеж, 1993. - С. 120-121. 106. Черемисинов, Т. А. Совершенствование биотехнологии интенсивного воспроизводства животных / Т. А. Черемисинов. - Институт орган. химии. - Уфа, 1992. - 275с. 107. Шейко, И. П. Свиноводство. / И. П. Шейко, В. С. Смирнов - Минск: Новое Знание, 2005. 108. Шипилов, В. С. Ветеринарное акушерство и гинекология. / В. С. Шипилов - М.: Агропромиздат, 1986. - 480с. 109. Шипилов, В. С. Основы повышения плодовитости животных. / В. С. Шипилов - Смоленск: "Веlо", 1994. - 159с. 110. Щелкунов, С. Н. Генетическая инженерия. / С. Н. Щелкунов. Новосибирск: Новосибирский университет, 1994. - ч.1. 111. Эрнст, JI. K. Биологические проблемы животноводства в XXI веке. / Л. К. Эрнст, Н. А. Зиновьева - М.: РАСХН, 2008. - 508 с. 112. Юров, И. И. Биотехнический контроль за воспроизводством крупного рогатого скота с использованием магэстрофана, супергестрана и ГСЖК: автореф. дис. … канд. вет. наук / Юров Иван Иванович. Воронеж.гос.аграр.ун-т. им. К.Д.Глинки, 2001. - 22с. 113. Adeyemo, O. Control of in bos indicus and bos Taurus heifers with prostaglandin F2L / O. Adeyemo, U. U. Akpokodje P. I. Odili // Theriogenology. - 1997. - 12. -№ 5. - P.255-260. 114. Baird, D. T. Prostaglandin F2α on Luteai regression in the ewe a comparison with 6 ryloxyprostaglandin / D. T. Baird, R. J. Scaramuzzi // Ann.boil.anim.Biochem.biophys. -1975. - 15, № 2. - P.161-174. 115. Blake, C. A. A medical basal hypothalamis site of syhezgistic action of estzogen and progesterone on inhibition of pituitary luteinising hormone release / C. A. Blake // Endocrinology. - 1977. - 101. - P. 1130-1134. 113 116. Cheminean, P. Neuroensocrinologie de la reprodaction chez les caprins / P. Cheminean,J. A. Delgadillo // Prod.anim. - 1994. - № 5. - P.315-326. 117. Crighton, D. B. Localization of LH-releasing factor in the hypothalamus and neurohypohysis as determined by an vitro method / D. B. Crighton, H. Scheider, S. M. McCann // Endocrinology. - 1970. - 87. - P.323-324. 118. Downey, B. Regulation of the oestrus cycle in domestic animals: a review. / B. Downey // Canad.Veter.J. - 1980. - 21, JVal 1. - P.301-305. 119. Ellendorff, F. Neural control of cyclic reproductive function in the mammal: a review / F. Ellendorff, D. Smidt // J. of interdis cinlinary cycle research (Amsterdam). - 1970. - 1, JfeS. - P.201-208. 120. Everett, J. W. The quantitative relationship between electrochemical preoptic stimulation and LH release in proestrus versus latediestrous rats / J. W. Everett, J. C. Krey, L. Tyrey // Endocrinology. - 1973. - 93. - P.947953. 121. Ford, S. Bovine ovarian and pituitary responses to PMS and Gn RH administered during metestrus / S. Ford, F. Stosmshak // K. Anim. Sci. 1978. - 46. - № 6 - P.1701-1706. 122. Fox, D. I. The crossbreeding of beef cattle / D. I. Fox // Canad, Cattleman. - 1972. - 29. - P.3. 123. Gallo, R. V. The effect of blockade of dopamine receptors on the inhibition of episodic luteinizing hormone release during electrical stimulation of the arcuate nuclease in ovariestomized rats / R. V. Gallo // Endocrinology. 1978.-102. - P.1026-1035. 124. Gumming, J. A. Prostaglandins a world spelling revolution animal breeding / J. A. Gumming, R. A. S. Lawsoh // J.Agr. (Victoria). - 1973. - 71 JSfelO. - P.348-352. 125. Guthrie, H. D. Progesterone secretion and prostaglandin F release in vitro by endometrial and luteal tissue of cyclic pigs / H. D. Guthrie, Jr. C. E Rexoad // J.Reprod. Fert. - 1980. - 60. - № l. - P.157-163. 114 126. Hobson, W. C. Plasms LH bevels after ovariectomy corpus luteum removal and estradiol administration in cattle / W. C. Hobson, W. Hansel // Endocrinology. - 1972. - 91. - P.185-190. 127. Hoffman, B. Luteotrophic factors in the cow: evidence for LH rather that prolactin / B. Hoffman, D. Schams D., R.Bopp // J.Reprod.Fert. - 1974. 40, JVbl. - P.77-85. 128. Hofliger, H. Das ovar des Rindes in den verschiedenen lebensperioden unter besonderer Berucksichtigung seiner funktionellen Feinstruktur / H. Hofliger // Verl.S.Karder. - Basel, 1988. - P.4 129. Holler, W. Die ovulafion beim Rind - klinische and laboratorium sdiagnesen Maglich-Keiten der Einflussnahme / W. Holler // Wein. Tierarzte. Mschr. - 1982. - 69, № 9. - P.245-250. 130. Immunological methods in steroid determinationans / B. V. Caldwel, R. J. Scaramuzzi, J. H. Fhorneycroff, S. A. Tillson. - New York: AppletonCentury-Crofts, 1996. - P.331. 131. Janina, H. Extraction and partial Purification of tuteolytic Activity from Bovine Endometrical Tissue /H. Janina, J. Lukaszewska, W Hansell // Endocrinology. - 1970 - 86, № l. - P.261-270. 132. Kaltenbach, C. C. Release of FSH and KH in beef heifers by synthetic gonadotropin releasing hormane / C. C. Kaltenbach, T. G. Dunn, I. E. Kiser // J.Anim. Sci. - 1974. - 38, № 2. - P.357-362. 133. Khurana, N. Note on the use of prostaglandin F21 for mduction of oestrus in buffalo heifers / N. Khurana, R. Gupta // Indian J.Anim. Sci. - 1982. -52, № 9. - P.806-808. 134. Lindell, J. O. Post-partum release of prostaglandin F2 alpha and uterine involution in the cow / J. O. Lindell // Theriogenology. - 1982. - 17, JVb3. P.337-245. 135. Lovis, T. M. Intrauterine administration of prostaglandin F2 alpha in cow: progesterone, estrogen, LH, estrous and ovulation / T. M. Lovis, H. D. Hafs, D. A. Morrow // J.Anim.Sci. - 1974. - 38, № 2. - P.347-353. 115 136. Lzzymowski, T. Luteal Function in cows after inlateral infusion of PGF2 alpha in to the arterior uterine cycle / T. Lzzymowski, J. O. Kotwica, S. Krasa // J.Reprod. Fert. - 1980. - 54. - P.21-27. 137. Martini, L. Gonadotropin releasing factors: recent physiological findings. / L. Martini, Ed. P. G. Crosingnani, V. N. T. James // Recent progress in reproductive endocrinology - London, New York, 1974. - P.295-321. 138. Menget, H. Die Anwendung biotechnischer Ver-fahren in der Schafzucht der DDR. / H. Die Menget // Tierzucht. - 1986. - 40, № 3. - P.136-138. 139. Milval, R. A. Concurrent atesine venous and ovarian arterial prostaglandin F2 alpha concentrations in heifers treated with oxytocin. / R. A. Milval, W. Hansell // J.Retrod. Pert. - 1980. - 60. - P.7-15. 140. Nett, T. M. Luteal blood flood flow and Receptors for LH during PG F2 alpha - induced luteolysis: production of PGE 2 and alpha during Early Pregnancy / T. M. Nett, G. D. Niswerider // Ata ver. Scand. - 1981. - 77. P.117-130. 141. Pichova, M. D. Endokrinni profil po aplikaci prostaglandinu a jeho anabogu / M. D. Pichova, J. Picha, B. Sevcik // Biol.chem.Ver. - 1981. - 17 (23), № 2. - P.157-169. 142. Reimers, N. F. Nature management Glossary. / N. F. Reimers - M “Mysl”, 1990. 143. Sevcik, B. Terapeuticke vynziti pripravku ostrophan inj. (cloprostenoe) pri anestru a endometritive krav / B. Sevcik, J. Krae, J. Strakova // Biol.Chem.Livocisne vyroby Veter. - 1982. - 18, JST4. - P.349-355. 144. Scott, F., Gilbert F. Developmetal biology / F. Scott, F. Gilbert. - Sinauer Associates Inc. Publishers. - Sunderland, Massachusetts, 2000. 145. Shemesh, M. Levels of prostaglandin F in bovine endometrium, uterine, veous, ovarian and jngular plasma during the estrous cycle / M. Shemesh, W. Hansel // Proc. Soc. Exp .Biol. Med. - 1975. -148, JVb 1 - P. 123-126. 116 146. Singh, G. B. Treatment of suboestrous buffaloes with prostaglandin F2 alpha / G. B. Singh, V. G. Dugwekar, R. D. Sharma // Veter. Res. - 1979. 104 - P.412-413. 147. Singh, R. A. Hormonal induction of ovulation in prepubertal ewe lamds / R. A. Singh, M. N. Razdan, M. L. Madan // Indian Vet. J. - 1987. - 64, № 4. - P.350-352. 148. Swanson, L. V. LH and prolactin in blood serum from estrum to ovulation in Holstein heifers / L. V. Swanson, H. D. Hafs // J.Anim.Sci. - 1971. -33. P.1038-1041. 149. Terday, J. S., Jefcost C.R., First N.L. Effect of prostaglandin F2 alpha on steroidogonesis by porcine corpora lutea / J. S. Terday, C. R. Jefcost, N. L. First // J.Reprod.Fert. - 1980. - 58. - P.301-310. 150. Terdlanche, H. M. Plasma progesterone in cattle. II. Levels during the oestrous cycle, pregnancy and parturition / H. M. Terdlanche, J. M. Labuschagne // J. South African Veterinary Association. - 1981. - 52, JVb3. - P.187-189. 151. Weir, B. J. Ovulation and atresia / B.J. Weir, W. Rowlands // The ovary. N.-Y., 1977. - P.265-284. 117 ПРИЛОЖЕНИЯ к диссертационной работе по теме «Биотехнологические способы интенсификации свиноводства» Буянтуевой Даримы Тумэновны 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128