Р Е Г Л А М Е Н Т Об отборе проб внешней среды

РЕГЛАМЕНТ
Об отборе проб внешней среды специалистами филиалов ФГУЗ «Центр гигиены
и эпидемиологии в Краснодарском крае» для исследования на
природно-очаговые особо-опасные инфекции
I ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Настоящий регламент составлен ФГУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Краснодарском крае» (далее – Центр) на основании:
- анитарно-эпидемиологических правил (СанПин) 1.3.1285-03
«Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности
(опасности)», утвержденных Главным государственным санитарным врачом
РФ 12 марта 2003 г.;
- санитарных правил (СП) 3.1.009-96 ГЛПС, СП 3.1.097-96 Туляремия;
- СП 3.1.091-96 Лептоспироз;
- методических рекомендаций (МР) 3.1.1029-01"Отлов, учет и прогноз
численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций",
утвержденных Главным государственным санитарным врачом РФ 6 апреля
2001 г.;
- методических указаний (МУ) 3.1.1027-01 "Сбор, учет и подготовка к
лабораторному исследованию кровососущих членистоногих - переносчиков
возбудителей природно-очаговых инфекций", утвержденных Главным
государственным санитарным врачом РФ 6 апреля 2001 г.;
- МУ 3.1.2007-05 "Эпидемиологический надзор за туляремией",
утвержденных Главным государственным санитарным врачом РФ 9
сентября 2005 г;
- МУ 3.1.1128-02 «Эпидемиология, диагностика и профилактика
заболевания людей лептоспирозами»;
- методических указаний по эпидемиологии, диагностике, клинике и
профилактике
болезни
Лайма,
утвержденных
Министерством
здравоохранения СССР 17.06.1991 № 10-11/64, №15-6/12;
- методических указаний по организации индивидуальной защиты
населения от нападения иксодовых клещей – переносчиков возбудителей
инфекций МУ-33-113, утвержденных департаментом Госсанэпиднадзора
Минздрава РФ от 27 апреля 1997 г.;
- МР «Организация и проведение мероприятий против Крымской
геморрагической лихорадки на территории природных очагов России, а
также в соответствии с постановлением главного государственного
санитарного врача Российской Федерации от 24.09.2007 № 73 «Об
организации
мероприятий
по
профилактике
лептоспирозов»,;
постановлением главного государственного санитарного врача по
Краснодарскому краю от 20.11.2007 № 15 «Об организации мероприятий по
профилактике лептоспирозов в Краснодарском крае», постановлением
главного государственного санитарного врача Российской Федерации от
20.12.2005 № 33 «Об усилению мероприятий по предупреждению
распространения туляремии в Российской Федерации», постановлением
главного государственного санитарного врача по Краснодарскому краю от
25.05.2007 № 7 «О мерах по совершенствованию профилактики Крымской
Геморрагической лихорадки (КГЛ) в Краснодарском крае», постановлением
главного государственного санитарного врача по Краснодарскому краю от
05.07.2007 № 11 «О мерах по предупреждению заболеваний людей
лихорадкой с почечным синдромом в Краснодарском крае», приказом
Управления Роспотребнадзора по Краснодарскому краю от 27.03.2007
№400/78 «О мерах по улучшению профилактики, диагностики лептоспироза
в Краснодарском крае», приказом Управления Роспотребнадзора по
Краснодарскому краю от 28.04.2006 № 245 ОД/131 «Об усилении
мероприятий по профилактике туляремии в Краснодарском крае».
В соответствии с «Положением об отделе особо-опасных инфекций
республиканской, краевой, городской санитарно-эпидемиологической
стации», утвержденной Министерством здравоохранения СССР 27.01.1981 в
задачи отдела особо-опасных инфекций входит работа «по профилактике и
борьбе с особо-опасными и другими природно-очаговыми инфекциями,
имеющими эпидемическое значение в краевой патологии». В Краснодарском
крае к ним отнесены: холера, сибирская язва, бруцеллез, бешенство,
орнитоз, геморрагические лихорадки – ГЛПС, КГЛ, лептоспироз,
псевдотуберкулез.
Работа
Центра
предполагает
мониторинг
распространения этих заболеваний, включающий: отлов мелким
млекопитающих: мышевидных грызунов семейств Microtus, Mus, Apodemus,
Cricetus и Cricetulus и насекомоядных, осуществляемых медицинским
зоологом, а также отбор проб внешней среды – сена, соломы, фуража;
подснежных гнезд грызунов, воды, погадок, иксодовых клещей.
Работа по отбору проб внешней среды не требует соблюдений правил
режима и сертификационной подготовки специалистов поэтому, учитывая
большую величину охватываемых площадей, проводится специалистами
филиалов Центра.
Настоящий регламент устанавливает порядок, методику, сроки и
правила отбора проб внешней среды специалистами филиалов Центра в
лабораторию. Сроки доставки проб согласовываются ежегодно.
II ОТБОР ПРОБ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ
Исследование объектов внешней среды является эффективным
способом поиска возбудителя туляремии, т.к. последний обнаруживает
значительную устойчивость во внешней среде, особенно при низкой
температуре.
Так, в замороженной воде при -5°С возбудитель сохраняется до 10,5
месяцев, во влажной почве при 4°С - до 4-х месяцев, в зерне, соломе при 5°С - до 6 месяцев, при 8-12°С - 2 месяца, в замороженных трупах мышей - 6
месяцев, зайцев - 112 дней.
На территории Краснодарского края, помимо туляремийных
функционируют очаги лептоспироза, ГЛПС, клещевого боррелиоза,
равнинно-степная зона края, пограничная с территорией Ростовской обрасти
и Ставропольского края является потенциально опасной по КГЛ.
Для предупреждения возникновения разлитых эпизоотий туляремии,
выявлению и локализации очагов лептоспироза, ГЛПС, предупреждения
возникновения очагов КГЛ ежегодно, согласно плана мониторинговых
исследований ведомственной целевой программы «Стоп-инфекция»,
утвержденному Управлением Роспотребнадзора по Краснодарскому краю,
следует проводить отбор проб: воды естественных водоемов, сена, соломы,
фуража (для бактериологического исследования на туляремию), иксодовых
клещей (для серологического исследования на КГЛ), погадок (для
серологического исследования на туляремию).
2.1 Сбор погадок
Для рекогносцировочного обследования значительных территорий
применяют серологическое исследование погадок на содержание
туляремийного антигена. Преимущество метода заключаются в малой
трудоемкости процесса сбора и быстроте исследования полевого материала,
в возможности за короткий срок обследовать значительные территории
открытых ландшафтов и быстро получить ответ о наличии или отсутствии
инфекции. Метод применим для раннего и ретроспективного выявления
эпизоотии, определения ее границ, установления видов животных,
вовлеченных в эпизоотический процесс, и оценки их численности. Поедая в
природе преимущественно ослабленных, больных зверьков или их трупы,
хищники осуществляют отбор из популяции именно того материала,
который желателен для лабораторного исследования.
Кроме того погадки хищных птиц могут служить ценным материалом
для серологических и молекулярно-биологического исследований по
обнаружению не только текущих эпизоотий, но и в целях ретроспективной
оценки состояния как очаговых, так и потенциально очаговых территорий. В
частности, исследование погадок, собранных в одних и тех же местах через
определенные промежутки времени и в разные сезоны, позволяет в
известной степени характеризовать различия в течении эпизоотий в разные
годы и сезонные особенности их развития.
Погадка представляет собой плотный, продолговатый комок
непереваренных птицей частей пищи (шерсть, кости, перья, хитин
насекомых и т.п.), выбрасываемый ею через рот по окончании процесса
предварительного пищеварения. Образование погадок отмечается у всех
хищных птиц, чаек, вороновых и некоторых других. Птицы выбрасывают
погадки во время отдыха через 10-20 ч после кормежки. Погадка может
содержать остатки одного зверька у мелких птиц и нескольких - у крупных
хищников. Установлено, что птицы избавляются от погадок недалеко от
мест кормежки, и можно считать, что исследование содержимого погадок
характеризует именно ту территорию, на которой они собраны (в пределах
2-3 км от точек сбора).
Длительность сохранения погадок в природе зависит от
климатических условий местности. В зоне достаточного увлажнения
разрушение их происходит в течение 4-5 месяцев под воздействием
гнилостных процессов, почвенных видов микро- и мезофауны и различных
насекомых. В засушливом климате степей и пустынь они могут сохраняться
более длительное время (в течение года и более). В бесснежное время года в
открытых ландшафтах в течение одного дня можно собрать материал,
содержащий остатки большого числа мелких млекопитающих с территории
в несколько сотен квадратных километров, если использовать автомашину
для передвижения.
Чем свежее погадки, тем они темнее окрашены. Гибель
туляремийного микроба в погадках и помете происходит быстро (в первые
сутки; при отрицательных температурах, возможно, дольше), в связи с чем
бактериологическое исследование этого материала нецелесообразно.
Туляремийный антиген сохраняется в погадках в течение всего периода их
существования. Для поиска туляремийного антигена в погадках отделения
особо-опасных инфекций микробиологической лаборатории Центра
используют наиболее простой и доступный способ - реакцию нейтрализации
антител (РНАт).
Погадки собирают вблизи гнездовий, мест кормежки, ночевок и
отдыха птиц. Обычно это возвышенные предметы, столбы линий
электропередач, одиноко стоящие деревья, стога сена и ометы соломы,
вышки и т.д. Погадки можно обнаружить около возвышающихся на
местности предметов, а также на охотничьих тропах хищников и на их
лежках. Наиболее массовые сборы погадок осуществляют рядом с гнездами
хищных птиц. Эффективен также сбор погадок в открытых ландшафтах у
различных возвышающихся над местностью объектов - триангуляционных
вышек и отдельных деревьев, на которые любят присаживаться разные виды
канюков и орлов; у могил и развалин (филин, домовый сыч, болотная сова,
степной орел и др.); по берегам дамб, ирригационных и других насыпей, где
птицы отдыхают (орлы, канюки, луни, совы); в зарослях кустарников по
балкам (филин, ушастая сова и др.); в нишах обрывов и чинков (филин,
домовый сыч) и т.д.
Погадки собирают ранней весной, сразу после схода снега и поздней
осенью. Это позволяет получить характеристику эпизоотийного состояния
популяции мелких млекопитающих на протяжении всего года, установить
начало и длительность эпизоотии. В пойменно-болотных очагах наиболее
удобное время сбора погадок - вторая половина лета, когда возникают
эпизоотии среди околоводных видов млекопитающих. В лесных ландшафтах
погадки собирают возле гнезд или по кромке леса и опушкам. Труднее, но
возможно, проводить сбор погадок зимой.
В любых ландшафтах перспективен сбор погадок у телеграфных
столбов и опор линий электропередач, особенно в тех случаях, когда эти
линии проходят через безлесные пространства. При этом сборы свежих
погадок под столбами бывают наиболее результативными осенью, во время
пролета хищных птиц, особенно в годы с высокой численностью грызунов.
Каждую найденную погадку заворачивают в отдельный лист бумаги
во избежание контаминации. Собранный с одного места материал помещают
в отдельные пакеты этикетируют. Быстрое отмирание туляремийного
микроба в кислой среде погадок позволяет проводить их сбор в природе и
дальнейшую обработку без специального режима, соблюдая лишь правила
обычной гигиены. При необходимости материал может храниться
длительное время, если его тщательно просушить.
Бланк этикетки и образец сопроводительного письма, для
направления погадок в лабораторию Центра приведены в к настоящему
регламенту.
2.2 Отбор проб воды естественных водоемов
Мышевидные грызуны, обитающие вблизи естественных водоемов,
тесно контактируют с водой. Выявление обсемененности возбудителями
туляремии водных источников является важной частью мониторинга очагов
этой инфекции.
Пробы воды природных открытых водоемов отбирают в весенний и
осенний период. Их берут из различных водоемов: речек, ручьев, прудов,
озер, болот, колодцев и т.п. Целесообразно проводить отбор воды лиманов и
рисовых чеков. Из каждой точки желательно брать 2 пробы. Пробы берутся
в затененном месте, на глубине 10-20 см от поверхности стоячей или слабо
проточной воды. Желательно отбирать пробы в местах обитания зверьков
(возле кормовых столиков, нор, хаток бобров или ондатр). Воду в
количестве 100-200 мл отбирают в стерильные бутылочки емкостью 200-250
мл, закрывают пробкой, бумажным колпачком и обвязывают шпагатом.
Бутылочки с водой помещают в клеенчатые или полиэтиленовые мешки,
упаковывают в металлический ящик и доставляют в лабораторию. В зимнее
время пробы берут в прорубях, в незамерзающих местах ручьев,
мелиоративных каналов, рыболовных лунках. При глубоком промерзании
водоема со дна берут лед или ил. После взятия каждой пробы руки
(перчатки) и инвентарь обрабатывают 70° спиртом. Бланк этикетки с образец
сопроводительного письма, для направления проб воды в лабораторию
Центра приведен в приложении к настоящему регламенту.
2.3 Отбор проб соломы
На территории Краснодарского края, энзоотичной по туляремии,
ГЛПС и ряду других инфекций, наличие скирд, ометов, а также разного рода
сенобаз повышает риск заражения человека, особенно в периоды развития
эпизоотии среди местных грызунов. В подобных объектах - "сезонных
стациях переживания" с осени формируются многовидовые сообщества
мелких млекопитающих (мышей, полевок, хомячков, землероек и др.)
зачастую с высокой концентрацией особей, длительно пребывающих в
тесном контакте. При этом некоторые из них (в первую очередь
обыкновенная полевка и домовая мышь), находя здесь благоприятные
кормовые, защитные и микроклиматические условия, активно размножаются
и в зимнее время.
При контакте грызунов друг с другом происходит обмен паразитами,
что является предпосылкой для возникновения так называемых «скирдовых
эпизоотий туляремии». Выявление и предупреждение таких эпизоотий
возможно, если проводить постоянный мониторинг обсемененности
мышиных гнезд, находящихся в скирдах соломы.
Отбор соломы можно производить в течение всего года, однако
предпочтительнее производить его ранней весной, когда следы пребывания
грызунов еще свежие. Обязательным условием является использование при
отборе проб ватно-марлевой повязки.
Пробы отбираются из старых (не свежих) скирд, ометов и стогов, при
этом местами взятия образцов выбираются нижние части скирды изнутри.
От одной скирды целесообразно отбирать 2-3 пробы соломы, величиной с
кулак. Солому упаковывают в пакеты и этикируют.
Бланк этикетки и образец сопроводительного письма, для
направления проб соломы в лабораторию Центра приведен в приложении к
настоящему регламенту.
2.4 Сбор имаго иксодовых клещей
Сбор и учет численности иксодовых клещей в природных биотопах
Целенаправленный сбор иксодовых клещей проводят в очагах
туляремии и вирусных инфекций в течении эпидемиологического сезона (с
мая по ноябрь в зависимости от уровня среднегодовых температур). При
этом целесообразно проводить сбор иксодовых клещей в периоды их
активности – весной в мае-апреле начале июня, осенью в сентябре-ноябре.
Пастбища обследуют ранней весной до начала выпаса скота. В природе
голодных иксодовых клещей во всех фазах развития можно обнаружить на
траве, ветках кустарников, поверхности почвы, где они сосредотачиваются в
ожидании прокормителя. Клещей собирают на маршрутах, закладываемых в
разных биотопах, чередуя редко и часто посещаемые людьми и скотом
участки. Сборы клещей в солнечную погоду проводят в утренние и вечерние
часы при отсутствии росы и при слабом ветре. В пасмурные дни хорошие
сборы дают дневные часы. Учеты на маршрутах проводят 1 - 3 раза в период
наибольшей активности клещей.
В зависимости от характера обследуемой территории и
экологических особенностей клещей применяют различные способы их
сбора и учета. На степных участках клещей собирают на "волокушу", т.е. на
отрез (1,5 - 2 м длины) однотонной светлой ворсистой ткани (фланель). В
швы противоположных узких сторон отреза вставляют по рейке. К верхней
рейке прикрепляется шнур, за который сборщик медленно протягивает
"волокушу" (сбоку от себя) по участку. Клещи цепляются за ткань, с которой
их снимают мягким пинцетом и помещают в пробирку.
На луговых и лесных участках с высокой травой и кустарниками
клещей собирают на флаг из такой же ткани. Кусок материи длиной 1 м и
шириной 60 см прикрепляют узкой стороной к палке. Развернутый флаг
сборщик протаскивает сбоку, подсчитывая пары шагов (по левой или правой
ноге), размер которых заранее выверен на известных по длине участках
(между километровыми столбами на дорогах и пр.) Подсчет шагов ведут по
25-метровым отрезкам (обычно 16 - 18 пар шагов), в промежутках между
которыми осматривают флаг и одежду сборщика. Обычно на каждом
маршруте при учетах должно быть набрано не менее 1000 м расстояния и 2 ч
времени. Обилие клещей выражают числом особей, собранных с флага
(волокуши) и одежды учетчика на 1 км маршрута. В качестве единицы учета
можно использовать время движения по маршруту - 1 ч (среднее число
клещей, собранных с учетчика и ловчего приспособления за 1 ч учета).
Для транспортирования пробирки или флаконы с клещами
обертывают мягким материалом и плотно упаковывают. Сборы
сопровождают этикеткой и сопроводительным письмом (приложение).
Сбор и учет численности иксодовых клещей с крупных млекопитающих
Большинство иксодовых клещей в процессе своего развития меняет
хозяев. Прокормителями для личинок и нимф обычно служат мелкие
позвоночные животные, включая птиц, рептилий, для половозрелых особей крупные млекопитающие. По возможности осмотру на наличие клещей
следует подвергать все виды крупных млекопитающих данной территории.
В период максимальной активности клещей одновременно со
сбором их для лабораторного исследования проводят учеты численности.
Клещей с сельскохозяйственных животных собирают в населенных пунктах,
на фермах, пастбищах в присутствии хозяина или ответственного лица. В
каждом из пунктов сбора осматривают не менее 10 голов, отдавая
предпочтение систематически выпасаемым животным. Особое внимание при
сборе клещей уделяют местам их концентрации на прокормителе: шея,
подгрудок, ушные раковины, веки, подмышечные впадины, вымя, основание
и конец хвоста. Присосавшихся иксодовых клещей снимают жестким
пинцетом с узкими длинными браншами, ухватив за основание хоботка.
Можно снимать руками в тонких резиновых перчатках. Отрывают клещей
при любом способе не резко, а осторожно, расшатывающими движениями
или вращая клеща вокруг продольной оси тела, чтобы не оторвать хоботок,
который является
важным
систематическим
признаком.
Место
прикрепления клеща можно смазать маслом, вазелином, это способствует
его отпадению. Клещей, собранных с разных видов животных (овца, корова,
лошадь, собака и т.д.), помещают в отдельные флаконы без шерсти
животных. В этикетке, кроме обычных данных, указывают выпасается ли
животное или находится на стойловом содержании. Сборы клещей только с
животных существенно уменьшают их видовой состав и снижают
вероятность положительных результатов при исследовании, поэтому их
обязательно чередуют сборами на флаг и волокушу.
Собранных разными методами (на флаг, волокушу, с КРС) клещей
упаковывают в пенициллиновые флаконы или другую стеклянную посуду
такого же объема в количестве от 5 (крупных) до 15 (мелких) шт. Для
сохранения образцов в каждый флакон следует положить 2-3 зеленых
травинки. До отправки в лабораторию хранить клещей следует в
холодильной камере (не морозилке!). Никакие посторонние объекты
(частички кожи, клочки шерсти осмотренных животных) в пробах клещей
присутствовать не должны.
Бланк этикетки и образец сопроводительного письма, для
направления проб иксодовых клещей в лабораторию Центра приведен в
приложении настоящему регламенту.
III ТРЕБОВАНИЯ К ОФОРМЛЕНИЮ ПРОБ И СРОКИ
ДОСТАВКИ ИХ В ЛАБОРАТОРИЮ
Перед доставкой проб внешней среды в лабораторию Центра каждую
пробу (группу проб) следует этикировать и снабжать сопроводительным
письмом, образец которого приведен в приложении к настоящему
регламенту. Единый бланк сопроводительного письма облегчает обобщение
и анализ большого количества информации, обеспечивает порядок и
сохранность сопроводительных документов.
Для каждого класса проб, в связи со спецификой отбираемого
объекта, в отношении оформления сопроводительного письма применяются
отдельные требования.
Доставку проб в лабораторию центра следует осуществлять в
соответствии с графиком доставки проб, утверждаемым ежегодно.
Доставлять пробы следует в отделение особо-опасных инфекций
микробиологической лаборатории Центра по адресу: г. Краснодар, ул.
Рашпилевская 61. Пробы принимаются с понедельника по пятницу с 9 до 16
часов.
Приложение 1
к регламенту ФГУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Краснодарском крае»
Этикетка сбора погадок
Объекты сбора __________________________________________________________
Ландшафтный район ______________________________________________________
Адрес___________________________________________________________________
Затрачено:
часов _____________________________________________________________
км маршрута _______________________________________________________
Осмотрено мест нахождения птиц:
Телеграфных столбов________________________________________________
Других возвышеностей_______________________________________________
Собрано погадок ________________________________________________________
Дата _______________
Подпись _________________
Приложение 2
к регламенту ФГУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Краснодарском крае»
Этикетка отбора воды
Объект отбора__________________________________________________________
Район___________________________________________________________________
Место расположения точки отбора_________________________________________
Наименование водного объекта
Способ отбора___________________________________________________________
(у дна, с поверхности)
Дата _______________
Подпись _________________
Приложение 3
к регламенту ФГУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Краснодарском крае»
Этикетка отбора соломы
Объект сбора ___________________________________________________________
(сено, солома, фураж)
Района__________________________________________________________________
Адрес___________________________________________________________________
Следы пребывания грызунов_______________________________________________
(отмечены, не отмечены)
Осмотрено скирд:_______________________________________________________
Отобрано проб__________________________________________________________
Дата _______________
Подпись ________________
Приложение 4
к регламенту ФГУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Краснодарском крае»
Этикетка сбора иксодовых клещей
Объекты сбора __________________________________________________________
(животное, биотоп)
Ландшафтный район ______________________________________________________
Адрес___________________________________________________________________
Метод учета
на флаг, волокушу, с КРС
(на флаг, волокушу, с КРС)
Затрачено:
Чел./часов ________________________________________________________
км маршрута _______________________________________________________
Осмотрено животных:
на выпасе _________________________________________________________
на стойловом содержании ___________________________________________
Из них с клещами _______________________________________________________
Собрано клещей _________________________________________________________
Дата _______________
Подпись _________________
Примечание: все поля в данной этикетке являются обязательными для заполнения. В строке
«объекты сбора» указываются на каком животном был произведен сбор клещей или, если сбор
клещей был произведен в природных биотопах, в каком биотопе он проводился (пастбище,
лесной массив, опушка леса, бросовые земли, и пр.). В строке «ландшафтный район следует
указывать название административной территории края (район) в котором производится сбор
иксодовых клещей и в скобочках название филиала Центра. Обязательным является заполнение
строки «затрачено» и «осмотрено», поскольку при составлении прогноза эпизоотической
ситуации по основным видам нозологических форм на основании данных, отображенных в этих
строках, рассчитываются индекс обилия и индекс доминирования иксодовых клещей. Графа «из
них с клещами» также обязательна для заполнения. В графе собрано клещей указывается сколько
всего клещей собрано в данном биотопе или на данных животных.
ОБРАЗЕЦ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
«Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае»
В отделение особо опасных
инфекций микробиологической
лаборатории
Направление
и исследование материала внешней среды
Наименование материала
КЛЕЩИ
150
Количество
Район отбора:
Наименование филиала
Дата отбора материала:
Дата отправки материала на исследование:
Количество проб доставляемого материала:
Биотоп, стация, где проводился отбор:
Адрес
Количество прилагаемых сопроводительных этикеток
Должность лица, проводившего отбор
Ф.И.О лица, проводившего отбор
Дополнительная информация:
УСПЕНСКИЙ
Армавирский
2 мая 2009 года
7 мая 2009 года
15
Выгон скота
5 км. восточнее поселка …
5
Помощник врача эпидемиолога
Полностью
Главный врач______________________________________________________
(Ф.И.О, подпись)