открыть тезисы с иллюстрациями
реклама
СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ МОРФОЛОГИИ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ Д.Э.Коржевский (Тезисы доклада на заседании Ученого Совета 28.03.2013) Функциональная морфология, в отличие от микроскопической анатомии, изучает структурную организацию клеток и тканей с точки зрения их функционального состояния. В связи с тем, что основные объекты, которые позволяют получить наибольший объем информации об изменениях структурной организации нервной ткани, статичны (фиксированный материал), возникают определенные трудности в анализе и интерпретации получаемых данных. Для того чтобы морфологическая оценка функционального статуса нервных и глиальных клеток была адекватной реальности, необходимо соблюдение нескольких важных требований. 1. Используемые методы подготовки материала для исследования должны хорошо сохранять выявляемые в ходе работы клеточные структуры, антигены и вещества. 2. Для того чтобы избежать артефактов, все используемые методы должны быть стандартизированы и хорошо воспроизводимы. 3. Применяемое при работе оборудование должно соответствовать современному уровню развития гистотехнологии, а фотодокументация наблюдений должна быть достаточной для проведения независимой экспертной оценки результатов исследования. 4. Каждый новый метод должен быть тщательно отработан непосредственными исполнителями, а рекомендуемые производителями и другими исследователями протоколы должны быть адаптированы для конкретного материала (с учетом анализа внутреннего контроля). 5. Интерпретация наблюдаемых фактов должна базироваться не только на всестороннем анализе современных данных об изучаемых процессах, но и на достаточном собственном опыте исследователей применяющих конкретную методологию. Современные подходы к изучению функциональных характеристик элементов нервной ткани и отдельных нервных центров основываются на широком использовании методов иммуноцитохимии в сочетании с классической световой микроскопией и конфокальной лазерной микроскопией. Благодаря достижениям биохимии, генетики иммунологии и разработке современных биотехнологий, в настоящее время доступен широкий спектр функциональных иммуноцитохимических маркеров, которые могут быть использованы для оценки состояния нервных и глиальных клеток: их пролиферации, дифференцировки, повреждения и гибели. Определение химического состава клеточных структур и активности различных ферментов обеспечивают многообразные методы гистохимии. Особо следует остановиться на использовании методов флуоресцентной визуализации и конфокальной микроскопии в нейроморфологии. Эти методы обладают двумя достоинствами, которые их делают незаменимыми в современных нейроморфологических исследованиях. Первое из них – возможность одномоментного раздельного выявления нескольких маркеров, локализованных в одной точке изучаемого объекта. При колокализации маркеров возможна оценка близости расположения отдельных молекул исследуемых веществ. Второе – возможность создания трехмерных реконструкций изучаемых объектов по zсериям оптических срезов. С учетом сложной формы различных нервных и глиальных клеток, этот подход открывает широкие перспективы выработки новых критериев оценки состояния нервных центров. В докладе анализируются результаты использования новых методических подходов, разрабатываемых сотрудниками лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы отдела общей и частной морфологии ИЭМ. 1 Результаты использования стандартизированных методов иммуноцитохимии и конфокальной микроскопии при анализе структур головного мозга и периферической нервной системы Дофаминергические нейроны черного вещества (человек) Симпатический ганглий человека 2 Холинергический нейрон стриатума 3 Нервные аппараты поджелудочной железы (синаптофизин) Панкреатический островок PGP 9.5 4 Астроциты и липофусцин (головной мозг человека) Субвентрикулярная пролиферативная зона 5
