Разработка и апробация лечебно-профилактического средства при развитии инфекционного пальцевого
реклама
На правах рукописи Писаренко Виктор Федорович Разработка и апробация лечебно-профилактического средства при развитии инфекционного пальцевого дерматита у крупного рогатого скота 06.02.02 – Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук Белгород – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования (ФГБОУ ВПО) "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина" Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Коваленко Анатолий Михайлович Официальные оппоненты: Кузьмин Владимир Александрович, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», заведующий кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных Шевцов Илларион Андреевич кандидат ветеринарных наук, ОБУ «Курская городская станция по борьбе с болезнями животных», руководитель Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии фармакологии и терапии Россельхозакадемии» Защита диссертации состоится 25 декабря 2014 года в 1500 часов на заседании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70; тел. (4712) 5313-30, факс (4712) 58-50-49. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» и на сайте www.kgsha.ru Автореферат разослан: «_24__» октября 2014 года Ученый секретарь диссертационного совета 2 Рыжкова Галина Федоровна 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Повышение молочной продуктивности отечественных молочных пород крупного рогатого скота требует длительных временных затрат, поэтому многие хозяйства стали все чаще прибегать к закупке импортного высокопродуктивного скота, завоз которого в РФ в последние годы существенно возрос. Завоз племенного высокопродуктивного поголовья крупного рогатого скота в Российскую Федерацию из стран Европы, США, Австралии, где инфекционный пальцевый дерматит не входит в список карантинных заболеваний, способствует беспрепятственному попаданию возбудителей этой инфекции на территорию РФ с завозимыми животными. По данным H. Brentrup and W. Adams (1990), V. Ledecky et al. (1997) инфекционный пальцевый дерматит распространен во многих странах Европы и США. Инфекционный пальцевый дерматит способен поражать до 70% животных дойного стада (Cheli R. and Mortellaro C.M., 1974) нанося экономический ущерб всему мировому молочному животноводству, который исчисляется сотнями миллионов долларов ежегодно (Losinger W.C., 2006). Попытки разработать высокоэффективное средство для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита предпринимали H. Brentrup and W. Adams, (1990); Hernandez et al., (1999); В.І. Козій (2005); M. Holzhauer et. al. (2008); B. Toholj et al. (2012). По мнению R.A. Laven (2006) большинство существующих средств профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита имеют существенные недостатки. Ограниченность сведений о регистрации инфекционного пальцевого дерматита на территории РФ и способах его профилактики и лечения натолкнула нас на проведение исследований в данном направлении. Исходя из выше изложенного, возникла необходимость проведения мониторинговых исследований распространенности инфекционного пальцевого дерматит в животноводческих хозяйствах Белгородской области РФ и разработки средств профилактики и лечения больных животных. Степень разработанности темы исследования. С момента первого описания инфекционного пальцевого дерматита R. Cheli and C.M. Mortellaro в 1974 году, данное заболевание изучали многие ученые в различных странах. Вопросы этиологической роли различных возбудителей, вызывающих развитие инфекционного пальцевого дерматита изучали B. Choi et al. (1997), которыми были изолированы из пораженных участков дистального отдела конечностей Porphyromonas levii, Fusobacterium necrophorum, Prevotella bivia, Prevotella oralis, Prevotella denticola. T. Santos et al. (2012) обнаружили в пораженных местах 166 специфических филотипов бактерий, относящихся к 7-ми 3 основным видам, большинство из них были отнесены к спирохетам (трепонемы). По данным N. Evans et. al. (2009) при изучении 51 биоптата установлено, что большое разнообразие микроорганизмов принимающих участие в развитии локального инфекционного процесса в дистальном отделе конечностей, а так же высокая генетическая вариабельность внутри видов, приводят к изменчивости патогенов. Так, были выявлены трепонемы филогруппы 1 (Treponema medium/Treponema vincentiiподобные) - 96,1 %, трепонемы филогруппы 2 (Treponema phagedenisподобные) - 98 %, трепонемы филогруппы 3 (Treponema putidum/Treponema denticola-подобные) - 76,5 % случаев. Попытки создания специфических средств профилактики инфекционного пальцевого дерматита в связи с видовой и генетической вариабельностью возбудителей не увенчались успехом (Schütz W. 2001; Fidler A. et al. 2012), хотя незначительного эффекта при внедрении добился B. Oelkers (1996). Поскольку для профилактики и терапии инфекционного пальцевого дерматита используют водные растворы сульфата меди, эффективность которых по данным B. Toholj et. al. (2012), В. І. Козій (2005) колеблется от 32 до 72 %, нами была предпринята попытка разработки более эффективного препарата для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита. Цель и задачи. Целью работы является разработка и апробация лечебно-профилактического средства для борьбы с инфекционным пальцевым дерматитом крупного рогатого скота, для достижения которой были поставлены следующие задачи: 1. Изучить распространенность инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Белгородской области. 2. Установить сезонную динамику развития инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота на примере МК "Маячки 1" Прохоровского района, Белгородской области. 3. Разработать препарат и способ его применения для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота. 4. Изучить сравнительную эффективность препаратов для лечения и профилактики инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота. 5. Изучить иммунологические, биохимические и гематологические показатели сыворотки крови коров при развитии инфекционного пальцевого дерматита и при проведении лечебно-профилактических мероприятий с использованием разработанного нами препарата. Научная новизна. Впервые проведены мониторинговые исследования по изучению распространенности возбудителей вызывающих развитие инфекционного пальцевого дерматита в животноводческих хозяйствах Белгородской области, изучена сезонная динамика развития, 4 разработан препарат на основе сульфата меди для профилактики и лечения. Показана более высокая эффективность разработанного препарата для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита в сравнении с аналогом, изучены иммунобиохимические и гематологические показатели сыворотки крови больных и подвергшихся лечению животных. Теоритическая и практическая значимость работы. В результате проведенных исследований установлена распространенность инфекционного пальцевого дерматита в животноводческих хозяйствах Белгородской области, разработан препарат для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита, изучены иммунобиохимические и гематологические показатели у больных и подвергшихся лечению животных, разработаны рекомендации по диагностике, лечению и профилактике пальцевого дерматита и препарат для профилактики и лечения. Методология и методы исследования. Диссертационная работа выполнена на базе кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Я. Горина в соответствии с планами научно-исследовательских работ. Научно-производственные опыты проведены на базе животноводческого хозяйства МК "Маячки 1" ООО "Нива" Прохоровского района Белгородской области, поголовье которого сформировано нетелями голштинской породы отечественной и европейской селекции (Дания, Голландия) в 2005 году. Объект исследования: поголовье коров, у которых наблюдался инфекционный пальцевый дерматит. Предмет исследования: проспективные и ретроспективные эпизоотологические исследования по распространенности инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота МК "Маячки 1", Прохоровского района, Белгородской области, сыворотка крови и цельная кровь от больных коров, биоптаты из пораженных мест. Методы исследования. Изучение инфекционного пальцевого дерматита у коров проводили, используя эпизоотологические, клинические методы. Иммунный статус животных оценивали по результатам биохимических, иммунологических и гематологических исследований, используя общепринятые методики (Асатилни В.С., 1957; Кленина Н.В., 1989; Красников Г.А. и др., 1985; Меньшиков В.В., 1987; Метельская В.А. и др., 2005; Покровский А.А. др., 1969; Чеботкевич В.Н., 1998). Клиническую оценку интенсивности поражений при ИПД проводили по классификации предложенной D. Döpfer et al. (1997). Для выявления возбудителей ИПД использовали общепринятые методики, описанные в пособиях Т.С. Костенко (2001), М.А. Сидоров (1995). Подсчет животных с нарушением двигательной активности (хромотой), проводили по методике D.J. Sprecher et al. (1997). Для оценки эффективности разработанного нами препарата было сформировано 4 5 группы коров (n = 31): 1 - контрольная группа (n=7), в которой не применялось какого-либо лечения; 2 - контрольная группа с применением 10% р-ра медного купороса (n=9), которая обрабатывалась 2 раза в неделю (вторник, пятница) путем прохождения через ванны с 10% водным раствором медного купороса; 3 - опытная группа с применением геля для копыт "Солка" (n=7); 4 - опытная группа (n=8) с применением препарата для лечения пальцевого дерматита. Контроль состояния конечностей у каждой группы проводили 3 раза с интервалом 2 недели. Для оценки состояния дистального одела конечности и его изменения в процессе проведения опытов, использовали методику разработанную D. Döpfer (1994), которая заключается в количественной оценке изменений, вызванных развитием ИПД. Полученные данные в ходе исследований подвергали статистической обработке, используя программу Microsoft Excel. Основные положения, выносимые на защиту. 1. Материалы изучения распространенности и сезонной динамики развития инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Белгородской области. 2. Препарат для лечения инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота и способ его применения. 3. Данные по изучению сравнительной эффективности препарата для лечения инфекционного пальцевого дерматита и существующих аналогов. 4. Иммунологические, биохимические и гематологические показатели крови при развитии инфекционного пальцевого дерматита и при проведении лечебно-профилактических мероприятий. Степень достоверности и апробация результатов. Исследования были проведены на достаточном по объему материале, следуя утвержденному плану исследований, в соответствии с поставленными целями и задачами. В работе представлен статистический анализ, использовались современные методы исследований, что позволило: определить распространенность и сезонную динамику инфекционного пальцевого дерматита на МК "Маячки 1" ООО "Нива", изучить иммунологические, биохимические и гематологические показатели крови больных коров, разработать препарат для профилактики и лечения и сравнить его действие с аналогом. Достоверность полученных данных не вызывает сомнений, сделанные выводы логичны. Основные положения диссертационной работы были представлены на заседании кафедры инфекционной и инвазионной патологии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Я. Горина, ежегодных научно-практических конференциях профессорскопреподавательского состава БелГСХА им. В.Я. Горина (2010 - 2013), XII международной научно-практической конференции "Естественные и математические науки в современном мире" (Новосибирск, 2013), XVIII 6 международной научно - производственной конференции "Проблемы и перспективы инновационного развития агроинженерии, энергоэффективности и IT-технологий" Белгородской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Я. Горина (Белгород, 2014). По теме работы опубликовано 4 научные статьи, получены два патента. Структура и объём диссертации. Работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, список использованной литературы. Работа содержит 18 рисунков, 17 таблиц. Список литературы состоит из 159 источников, в том числе 146 зарубежных авторов. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Изучение распространенности инфекционного пальцевого дерматита у крупного рогатого скота молочного комплекса ООО "Нива" "Маячки 1" Прохоровского р-на, Белгородской области Клиническими исследованиями было выявлено 104 коровы с различными формами поражения пальцевым дерматитом, что составило 11,7% от фуражного поголовья или 11,2% от дойных коров и 18,2% от общего поголовья сухостойных коров. Среди них с поражениями на обеих задних конечностях 2 животных (1,9% от пораженных). Среди всех пораженных ИПД, наибольшее количество животных приходилось на стадию М3 - 52 коровы (50%), а наименьшее - на стадию М2 - 9 коров (8,6%). Поражение ИПД наблюдалось у коров в сухостойном периоде: стадия М1 - 7 коров (58,3%), М2 - отсутствовали, М3 - 3 коровы (25%), М4 - 2 коровы (16,7%). Количество пораженных ИПД коров в зависимости от количества лактаций распределилось следующим образом: на первой лактации 28,8% от всех пораженных, на второй лактации - 40,4%, на третьей - 18,3%, на четвертой и последующих - 12,5%. Таким образом, наметилась тенденция к снижению доли пораженных коров с возрастанием количества лактаций. Анализ пораженности животных ИПД в зависимости от стадии лактации показал возрастание количества коров с поражениями с увеличением стадии лактации с максимальным показателем на стадии превышающей 300 дней (36 коров, 34,6%). Минимальное же количество животных наблюдалось в сухостойной фазе (12 коров, 11,5%). Анализ пораженности животных ИПД в зависимости от среднесуточной молочной продуктивности показал прямо пропорциональную зависимость доли пораженных коров от их продуктивности, за исключением самой высокопродуктивной группы, где показатель был минимальным (15 коров, 16,3%). При исследовании 9 биоптатов из пораженных мест у животных со стадиями ИПД М1, М2 и М4 были выявлены микроорганизмы, относящиеся к родам Treponema, Borrelia, Pasteurella, Bacteroides, 7 Clostridium и Fusobacterium necrophorum. Сводные данные по этиологии возбудителей ИПД приведены в таблице 1. Таблица 1 – Результаты проведения микробиологических исследований пунктатов от пораженных ИПД коров Количество Удельный вес, Название возбудителя выявленных проб % род Treponema 7 77,8 род Borrelia 5 55,6 Fusobacterium necrophorum 4 44,5 род Pasteurella 3 33,4 род Bacteroides 3 33,4 род Clostridium 3 33,4 Во время заключительного исследования было выявлено 171 пораженных ИПД коров, что составило 21,3% от дойного поголовья. Среди них с поражениями на обеих задних конечностях 37 коров (21,6% от пораженных). Среди всех пораженных животных на стадию М1 приходилось 32 коровы (18,7%), М2 – 42 коровы (24,6%), М3 - 25 коровы (14,6%), М4 - 72 коровы (42,1%). Наибольшее количество пораженных животных наблюдалась во второй лактации - 69 коров (38,0%), а наименьшая - в четверной и последующих лактациях - 18 коров (10,5%), что повторяет тенденцию предыдущего исследования. Пораженность животных ИПД в зависимости от стадии лактации возрастала с увеличением стадии лактации с минимальным показателем 14,7% (25 коров) в первой трети и максимальным на стадии превышающей 300 дней (39,2%, 67 коров). Количество пораженных животных ИПД в зависимости от среднесуточной молочной продуктивности было минимальным в группе с максимальной продуктивностью (9,9%, 17 коров). 2.2 Изучение сезонной динамики возникновения инфекционного пальцевого дерматита За время проведения исследований, с зимнего по летний период года, количество пораженных коров выросло со 104 до 171, что свидетельствует об увеличении на 64,4%. Доля пораженных коров выросла с 11,7% (зимне-весенний период) до 21,3% (летний период). Так же резко увеличилось количество животных с обеими задними пораженными конечностями 21,6% против 1,9%. Рассматривая изменения количества пораженных животных с учетом стадии ИПД необходимо отметить, что коров с начальной стадией М1 прибавилось на 26 (12,2%,), с выраженной стадией М2 - на 33 (14,8%), с хронической стадией М4 - на 44 (11,7%), в то время как количество коров с заживающей стадией М3 сократилось на 24 (-37,7%). 8 Проведенный анализ сезонного изменения количества пораженных коров ИПД в зависимости от количества лактаций показал незначительное увеличение таковых на первой (с 28,8% до 32,7%) и третей (с 18,3% до 18,7%) лактациях и незначительное снижение на второй (с 40,4% до 38,0%), четвертой и последующих (с 12,5% до 10,5%). Анализируя данные сезонного изменения количества пораженных животных в зависимости от стадии лактации, можно отметить незначительное снижение их доли в первой трети лактации (с 18,3% до 14,7%) и увеличение во всех последующих: во вторую - с 12,5% до 16,3%, в третью – с 23,1% до 29,8%, на стадии более 300 дней – с 34,6% до 39,2%. Изучая данные по сезонному изменению количества животных, пораженных ИПД, в зависимости от среднесуточной продуктивности можно отметить незначительное повышение в группах 0 - 10 литров (с 22,9% до 25,7%) и 10 - 20 литров (с 28,2% до 33,3%), и снижение в более высокопродуктивных группах: 20 – 30 литров – с 32,6% до 31,0%, более 30 литров – с 16,3% до 9,9%. Во время летнего обследования поголовья было выявлено 25 коров ИПД у которых наблюдался еще во время начала исследований, что значит, что инфекционный процесс, присущий для ИПД, у них, возможно, длился 6 месяцев. При этом у большинства животных наблюдалось специфическое развитие инфекционного процесса, которое сопровождалось переходом с одной стадии ИПД в другую. Так, из 25 коров, у одного животного наблюдался переход со стадии М1 в М2 и у одного – со стадии М2 в М4. Наиболее частой стадией, которая встречалась у данной группы, являлась стадия М3 (15 коров, 60,0%), среди которых у 4-х коров (26,7%) стадия заболевания осталась на том же уровне, у 2-х животных (13,3%) стадия изменилась на М1, у 4-х (26,7%) на М2 и у 5 коров (33,3%) - на М4. Из 9-ти животных со стадией ИПД М4, у 6-ти коров (66,7%) стадия осталась неизменной и у 3-х коров (33,3%) стадия изменилась на М3. Кроме того, у 6-ти коров, у которых во время первого обследования была поражена одна конечность, во время второго обследования наблюдалось поражение обеих задних конечностей, среди которых у 5-ти животных наблюдалась стадия ИПД М4. Таким образом необходимо отметить, что не смотря на существенное сезонное увеличение (+64,4%) количества пораженных животных на конечных стадиях исследования, все же процентное соотношение пораженных коров в зависимости от количества лактаций, ее стадий и среднесуточной молочной продуктивности отличалось в пределах 5 - 6%, т. е. увеличение количества пораженных ИПД животных происходило равномерно. Кроме того, произошло резкое увеличение количества животных с пораженными обеими задними конечностями (с 1,9% до 21,6% от общего числа пораженных), что так же свидетельствует об увеличении заболеваемости ИПД и усугублении развития инфекционного процесса. 9 2.3 Разработка и апробация препарата для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита Сульфат меди оказывает бактерицидное воздействие на возбудителей инфекционного пальцевого дерматита, но эффективность зависит от множества факторов, среди которых одним из важнейших, по нашему мнению, является время адгезии раствора на пораженном месте (Speijers et al., 2010). Для того, что бы увеличить время адгезии сульфата меди на ткани с существующим локальным развитием инфекционного процесса был использован препарат в виде мази. При создании лекарственной формы (мазь) нами учитывалось возможность использования компонентов, которые способствуют заживлению поверхности поражения эпидермиса, дермы, для чего был избран оксид цинка. Согласно данным В.Н. Жуленко и др. (2000) использование оксида цинка с 10% концентрацией в составе ранозаживляющих мазей способствует быстрой регенерации тканей. Поэтому, в разрабатываемый препарат для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита был включен оксид цинка (10%). Для опыта было сформировано несколько групп пораженных ИПД коров, которым применяли разработанный нами препарат с разной концентрацией сульфата меди. Максимально эффективным вариантом оказался препарат с 40%-ной концентрацией сульфата меди. В данном случае достаточно было одно- или двукратного применения препарата для образования устойчивого струпа на поверхности поражения. При этом у 9-ти коров препарат применяли однократно, у 5-ти – двукратно. Для подтверждения антисептического действия разработанного препарата были отобраны пунктаты из регенерировавших участков после слущивания с них струпа. В результате проведенных микробиологических исследований не отмечался рост колоний возбудителей ИПД на питательных средах (КиттаТароцци, сывороточный агар, кровяной агар, МПА, МПБ). Таким образом, опираясь на данные ведущих ученых научных ветеринарных центров (Kofler J. e. a., 2004; Relun A. e. a., 2012) была предпринята попытка разработки препарата для профилактики и лечения ИПД, увенчавшаяся созданием "препарата для лечения пальцевого дерматита", обладающего вяжущим, подсушивающим, противовоспалительным и антисептическим действием. Это было достигнуто приготовлением препарата в виде мази, содержащего в своем составе следующие компоненты в таких пропорциях, мас.%: оксид цинка – 10, мелкодисперсный сульфат меди – 40, мазевая основа (вазелин) остальное. В составе этого препарата сульфат меди оказывал бактерицидное воздействие на возбудителей пальцевого дерматита, а оксид цинка – ранозаживляющее. Подтверждением антисептических свойств препарата были отрицательные результаты по выделению возбудителей (род Treponema, Borrelia, Fusobacterium necrophorum, род Pasteurella, Bacteroides, 10 Clostridium) проведенного на питательных средах (Китта-Тароцци, сывороточный агар, кровяной агар, МПА, МПБ) в течение от 1 до 15 дней. 2.4 Изучение эффективности препаратов для лечения крупного рогатого скота, пораженного инфекционным пальцевым дерматитом В результате проведенных исследований были изучены изменения состояния конечностей четырех групп коров (контрольной, группы с применением 10% раствора сульфата меди, группы с применением геля "Солка" (состав: цинк (3,27 %), медь (3,3 %) в виде хелатных соединений, муравьиная кислота (1,4%), молочная кислота (1,3%), уксусная кислота (0,7%), адгезивные компоненты, формообразующие вещества), группы с применением препарата для лечения ИПД) до начала лечения, через 14 дней после начала лечения, и после окончания лечения. В контрольной группе (n=7) произошло общее ухудшение течения ИПД, что выражалось в резком увеличении суммарных показателей состояния конечностей в баллах с 222 до 398 (+79,3%) и степени хромоты с 13 до 23 (+76,9%), увеличении суммарного диаметра поражений с 200 до 215 мм (+7,5%). У одного животного со стадией ПД М3 произошла окончательная регенерация пораженного участка (- 8 баллов). В группе, которой применяли копытные ванны с 10% раствором сульфата меди (n=9) (принятая в хозяйстве схема лечения ИПД) так же наблюдалось общее ухудшение течения ИПД, хотя менее интенсивное, что выражалось в увеличении суммарных показателей состояния конечностей в баллах с 315 до 428 (+35,9%), степени хромоты с 23 до 27 (+17,4%) и увеличении общего диаметра поражений с 235 до 240 мм (+2,1%). У одного животного со стадией ИПД М3 произошла окончательная регенерация пораженного участка. В группе с использованием геля для копыт "Солка" (n=7) наблюдалась положительная динамика течения ИПД, которая проявлялась в уменьшении суммарного показателя состояния конечностей в баллах с 408 до 150 (-63,2%), суммарного балла хромоты с 24 до 16 (-33,3%) и суммарного диаметра ИПД поражений с 270 до 180 мм (-33,3%). При этом необходимо отметить, что полноценный струп, что является признаком и необходимым условием заживления, на 3-й день образовался у 2-х коров, однако через 2 недели, когда струп отпал, на коже наблюдались повторные признаки поражения ИПД стадий М1 и М2. У 3-х коров струп образовался частично, т. е. не покрыл всю площадь поражения, что стало причиной не полной регенерации у 2-х коров (стадии М1) и персистенции изначальной стадии поражения (М4) до конца исследования у одной коровы. В группе с использованием разработанного препарата для профилактики и лечения ИПД (n=8) положительная динамика течения заболевания была более выраженной, что подтверждалось снижением показателя состояния конечностей в баллах с 419 до 80 (-80,9%), суммарного балла хромоты с 27 до 14 (-48,1%) и суммарного диаметра 11 ИПД поражений с 300 до 210 мм (-30,0%). При этом у 7-ми коров наблюдалось образование полноценного струпа (переход в стадию М3) и у одной коровы переход стадии М2 в М1 к средине опыта. Данную группу животных мы обследовали 4-й раз на 26-й день и установили, что у 5-ти коров произошла полная регенерация пораженного участка, а у 3-х коров на пораженном месте персистировал струп. 2.5 Изучение иммунологических, биохимических и гематологических показателей сыворотки крови коров пораженных инфекционным пальцевым дерматитом При первом исследовании наблюдалось снижение уровня ɤглобулинов в сыворотке крови опытной группы на 41,2%, контрольной – на 45,8%, снижение концентрации IgM на 8,0% и 16,0%, снижение активности лизоцима 27,0% и 29,0% соответственно. Кислотная емкость сыворотки крови была понижена на 10,5% в опытной и на 19,0% в контрольной группе. Фагоцитарное число было понижено в обеих группах. Полученные данные свидетельствуют об определенном напряжении в системе ПОЛ-АОЗ. Так, уровень МДА был выше нормы на 30,7% у животных опытной группы и на 17,6% у контрольной, общая антиокислительная активность (АОА) липидов была снижена на 12,0% и 14,2% соответственно, в то время как концентрация витамина Е и активность каталазы были в пределах физиологической нормы. При исследовании гематологических показателей в обеих группах был установлен сдвиг лейкоцитарной формулы влево – количество палочкоядерных нейтрофилов было выше верхней границы нормы в среднем на 126% (в 2,26 раза), а уровень сегментоядерных нейтрофилов был снижен на 22,0% относительно нижней границы нормы. Процент моноцитов у животных опытной группы был повышен на 31,4%, а контрольной – на 37,1% относительно верхней границы физиологической нормы. При взятии крови после начала лечения у животных опытной группы установлено статистически достоверное повышение уровня ɤ-глобулинов на 66,6% относительно показателей контрольной группы и на 31,9% по сравнению с предыдущими показателями в этой группе, концентрация иммуноглобулинов у коров этой группы также возрастала: IgG на 13,0% и 20,3% – IgM на 17,7% соответственно. Незначительно повысилась активность каталазы – на 14,6% и АОА – на 15,8% относительно предыдущих показателей. Наблюдалось снижение концентрации продуктов ПОЛ – ДК и МДА (на 7,5% и 10,0% относительно контроля) и нормализация кислотно-основного равновесия. Увеличилась концентрация оксида азота на 23,4% относительно предыдущих показателей и на 31,8% по сравнению с контролем. Фагоцитарное число повысилось на 16,6%, активность лизоцима – на 11, 6% относительно предыдущих показателей и на 6,6 % относительно контроля. Изменения коснулись лейкоцитарной 12 формулы – у коров снизился процент палочкоядерных нейтрофилов (на 29,8%) и моноцитов (на 21,7%) (р≤0,05). После проведения лечебных мероприятий при изучении показателей крови зафиксирована некоторая стабилизация ряда иммунобиохимических показателей крови у коров опытной группы на фоне их ухудшения у животных контрольной группы. У животных опытной группы была выше контроля активность каталазы на 25,0%, а также АОА липидов сыворотки – на 29,1%. Продолжилась тенденция к снижению интенсивности ПОЛ, зафиксированная на предыдущем сроке исследования: разница между средними показателями уровня ДК и МДА у коров обеих групп составила 14,7% и 15,8% соответственно. Продолжалось снижение доли палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов (51,5% 25,7% и 38,5% соответственно), а количество сегментоядерных нейтрофилов возросло на 70,7% по сравнению с контролем. Повысился ФИ (на 9,8% по сравнению с предыдущим исследованием и на 26,4% относительно контроля), ФЧ (на 6,1% и 28,1% соответственно) и КЗФ (на 11,9 и 18,5% соответственно). Активность лизоцима у животных опытной группы по сравнению с предыдущим исследованием крови повысилась на 10,8%, а относительно контрольных показателей зафиксировано статистически достоверное повышение – разница составила 66,7%. Таким образом можно отметить рост иммунобиохимичесиких и гематологических показателей у животных опытной группы в результате применения разработанного нами препарата для профилактики и лечения пальцевого дерматита. 3. ВЫВОДЫ 1. Распространенность инфекционного пальцевого дерматита у крупного рогатого скота молочного комплекса ООО "Нива" МК "Маячки 1" Прохоровского р-на, Белгородской области составила 11,2% (104 коровы), от которых были выделены микроорганизмы рода Treponema в 77,8 % случаев, рода Borrelia – 55,6%, Fusobacterium necrophorum – 44,5%, рода Pasteurella – 33,3%, рода Bacteroides – 33,3%, рода Clostridium - 33,3%. 2. Сезонная динамика развития инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота в МК «Маячки 1» Прохоровского района, Белгородской области проявлялась увеличением количества пораженных животных до 171 особей (на 64%) под действием сезонных факторов. Максимальное увеличение пораженных инфекционным пальцевым дерматитом животных наблюдалось среди коров со стадиями М2 (14,8%) и М1 (12,2%). 3. Разработан новый препарат и способ его применения для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита крупного рогатого скота, содержащий следующие компоненты в таких пропорциях, мас. %: оксид цинка – 10, мелкодисперсный сульфат меди – 40, мазевая 13 основа (вазелин) остальное, способ применения которого заключается в 1 – 2-кратоном нанесении на пораженный участок с интервалом 3 дня (патент RU 2521242, опубликовано 27.06.2014; патент RU 2521247, опубликовано 27.06.2014). 4. Изучена сравнительная эффективность препарата для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита и прототипа (гель для копыт "Солка"), которая выявила более выраженный лечебный эффект у разработанного нами препарата при лечении коров, обеспечивающего бактерицидное действие на возбудителей инфекционного пальцевого дерматита, выражающийся в уменьшении суммарной групповой оценки состояния конечностей на 17,7%, суммарного балла хромоты на 14,8%, суммарного диаметра поражений на 9,5%. 5. Иммунологические, биохимические и гематологические показатели у больного инфекционным пальцевым дерматитом крупного рогатого скота после проведения лечебно-профилактических мероприятий с использованием разработанного нами препарата, выявили повышение концентрации γ-глобулинов до 18,8±1,0 г/л, IgM до 2,3±0,2 мг/мл, лизоцимной активности до 53,2±1,4 мкг/мл, фагоцитарного индекса до 60,2±2,8% и фагоцитарного числа до 4,5±0,12 ед., антиоксидантной активности липидов сыворотки крови до 37,3±1,46 % ингибиции, снижение концентрации МДА до 1,6±0,06 ∆/Д, усиление продукции оксида азота до 12,4±0,48 мкмоль/л, снижение доли палочкоядерных нейтрофилов до 7,4±0,6, эозинофилов до 5,2±0,7 и моноцитов до 6,4±0,6 (р≤0,05). 4. РЕКОМЕНДАЦИИ, ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. Использовать усовершенствованную нами методику оценки состояния конечностей для изучения распространенности инфекционного пальцевого дерматита в животноводческих хозяйствах. 2. Использовать разработанный нами препарат для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита, в состав которого входят оксид цинка, мелкодисперсный сульфат меди, и мазевая основа, который позволяет достичь первичного терапевтического эффекта в течение трех дней. 3. Применять для изучения профилактической и лечебной эффективности препаратов, обладающих бактерицидным действием на возбудителей инфекционного пальцевого дерматита, иммунобиохимические исследования, характеризующие процессы регенерации и восстановления иммунной системы и обменных процессов. 14 ЗАКЛЮЧЕНИЕ В результате выполнения данной работы в условиях животноводческого хозяйства ООО «Нива», МК «Маячки 1» Прохоровского района, Белгородской области, состоящего из крупного рогатого скота голштино-фризской породы установлена пораженность стада инфекционным пальцевым дерматитом на уровне 11,7% (104 коровы), которая в летний период возрастала до 21,3% (171 корова) от дойного поголовья. Среди пораженных ИПД, по классификации Döpfer D., (1997), составляли особи с заживающей стадией ПД М3 - 50% (52 коровы) и хронической стадией М4 - 28,8% (30 коров), что свидетельствовало о развитии инфекционного процесса у этих животных. При изучении распространенности инфекционного пальцевого дерматита установлено возрастание доли пораженных коров ко второй лактации до 40,4% (n = 42) и снижение на протяжении последующих до 12,5% (n = 13), что свидетельствовало о формировании возрастной невосприимчивости. Установлено достоверное снижение доли пораженных коров до 12,5% ко второй трети лактации. Минимальная заболеваемость инфекционным пальцевым дерматитом коров в ООО "Нива" МК "Маячки 1" составила 16,3% в группе коров с максимальной молочной продуктивностью (более 30 литров в сутки). В группе коров с максимальной молочной продуктивностью (более 30 литров в сутки) наблюдалась минимальная доля пораженных коров инфекционным пальцевым дерматитом на стадиях М1 и М2 (по 6,7%) и высокая доля коров с заживающей стадией М3 (53,3%). Изучен микробиологический состав возбудителей, принимающих участие в развитии инфекционного пальцевого дерматита, представленный спирохетами рода Treponema (77,8% случаев), Borrelia (55,6% случаев), а так же возбудители родов Pasteurella (33,3% случаев), Bacteroides (33,3% случаев), Clostridium (33,3% случаев) и Fusobacterium necrophorum (44,5% случаев). Нами был разработан препарат и способ его применения для профилактики и лечения ИПД, в состав которого входят следующие компоненты в таких пропорциях, мас.%: оксид цинка 9-11, мелкодисперсный медный купорос 35-45, мазевая основа остальное. Установлена более высокая эффективность разработанного препарата в сравнении с аналогом (препарат «Солка»). Биохимическими показателями, изученными до и после применения препарата для профилактики и лечения ИПД, установлено сначала снижение у больных ИПД животных концентрации IgM до 2,3±0,2 мг/мл, а затем повышение до 2,7+0,04 мг/мл (р≤0,05). Происходило увеличение МДА до 2,0+0,04 ∆/Д, а затем его снижение до 1,6+0,06 ∆/Д, а так же снижение антиокислительной активности липидов сыворотки крови до 31,6+1,3 % ингибиции, с последующим ее повышением до 37,3+1,46 % 15 ингибиции, снижение продукции оксида азота до 9,4+0,5 мкмоль/л, с последующим ее повышением до 12,4+0,48 мкмоль/л (р≤0,05). Полученные положительные результаты профилактики и лечения ИПД подтверждались иммунобиохимическими исследованиями, которые показали повышение уровня ɤ-глобулинов до 18,8+1,0 г/л, IgG – до 14,7+0,76 мг/мл, IgМ – до 2,7+0,04 мг/мл, активизацию ферментативного звена антиоксидантной защиты (повышение до 37,3+1,46 % ингибиции), снижение процента палочкоядерных нейтрофилов до 7,4±0,6 и моноцитов – до 6,4±0,6, увеличение продукции оксида азота до 12,4+0,48 мкмоль/л, что свидетельствовало об интенсивном восстановлении иммунологической защиты (р≤0,05). Повышение кислотной емкости крови наблюдалось из-за снижения болезненных ощущений, что привело к улучшению двигательной активности и, как следствие, увеличению потребления энергии корма. Высокая эффективность профилактических и лечебных мероприятий при развитии ИПД подтверждалась отрицательными результатами микробиологических исследований, проведенных с использованием анализа пунктатов из регенерировавших мест, при котором не было выявлено возбудителей, вызывающих данную инфекцию. Применение препарата для профилактики и лечения инфекционного пальцевого дерматита в ограниченном опыте позволило у 100% особей перевести в менее интенсивную стадию течения инфекционного процесса (из М2 в М3 у 4-х коров, из М4 в М3 - у 2-х коров, из М1 в М3 - у 1-й коровы), что, в конечном счете обеспечило 87,5% терапевтическую эффективность. Предлагаемый нами комплекс мероприятий по профилактике и лечению ИПД заключается в первую очередь, в быстрейшем, раннем выявлении инфицированных животных, эффективной профилактике и лечении с использованием разработанного нами препарата. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах, из списка рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ 1. Писаренко В.Ф., Тагирмирзоев Б.М. Иммунобиологические показатели у коров с синдромом пальцевый дерматит до и после лечения / В.Ф. Писаренко, Б.М. Тагирмирзоев // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1. - С. 60–61. 2. Писаренко В.Ф. Изучение распространенности Treponema-, Borrelia- инфекций, сопровождающихся развитием пальцевого дерматита в хозяйствах Белгородской области / В.Ф. Писаренко // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1. - С. 71–72. 3. Писаренко В.Ф. Сравнительная эффективность препаратов для лечения коров с синдромом инфекционного пальцевого дерматита / В.Ф. 16 Писаренко, А.М. Коваленко, А.Я. Бахтурин // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2014. - №5. - С. 70–71. 4. Писаренко В.Ф. Разработка препарата для профилактики и лечения крупного рогатого скота при развитии инфекционного пальцевого дерматита / В.Ф. Писаренко, А.М. Коваленко, В.Н. Суворова // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2014. - №6. С. 79–80. 5. Писаренко В.Ф. Изучение распространенности Treponema-, Borrelia- инфекций, сопровождающихся развитием пальцевого дерматита в хозяйствах Белгородской области / В.Ф. Писаренко // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1. - С. 71–72. Патенты 5. Патент РФ на изобретение № 2521247 С2 «Препарат для лечения пальцевого дерматита крупного рогатого скота (Dermatitis digitalis)” опубликован 27.06.2014, срок действия до 27.06.2032. Авторы: Писаренко В.Ф., Коваленко А.М., Левицкая И.Л. 6. Патент РФ на изобретение № 2521242 С2 «Способ лечения пальцевого дерматита крупного рогатого скота» опубликован 27.06.2014, срок действия до 27.06.2032. Авторы: Писаренко В.Ф., Коваленко А.М., Левицкая И.Л. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Список литературы, использованной в автореферате Асатилни В.С. Биохимическая фотометрия / В.С. Асатилни. - М.: Академия Наук СССР, 1957. – 836 с. Жуленко В.Н., Волкова О.И., Уша Б.В. Общая и клиническая ветеринарная рецептура: справочник / Под ред. Проф. В.Н. Жуленко – 2-е изд. – М.: Колос, 2000. – с. 161. Кленина Н.В., Герман В.В., Антонов В.С. Методические рекомендации по определению иммунорезистентного статуса бройлеров. – Харьков, 1989. - с. 13. Козій В.І. Етіологія та перебіг масових папіломатозних пальцевих дерматитів у високопродуктивних корів / В.І. Козій // Вет. медицина України. – 2005. - №1 - с. 26-28. Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной иммунологии и микробиологии / Т.С. Костенко, В.Б. Родионова, Д.И. Скородумов. – М.: Колос, 2001. – 344 с. Красников Г.А. Методические рекомендации по применению иммунохимических, цито и гистоморфологических тестов для оценки иммунобиологического статуса крупного рогатого скота Г.А. Красников, Н.А. Наумова, Н.В. Кленина. – Харьков. – 1985. - с. 6–7. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследований в клинике В.В. Меньшиков. - М.: Медицина, - 1987. - с. 365 17 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 18 Метельская В.А. Скрининг-метод определения уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови / В.А. Метельская, Гуманова Н.Г. – М.: Клиническая лабораторная диагностика № 6. – 2005. - с. 15-16. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике: Справочник / А. А. Покровский. - М.: Медицина, - 1969. - с. 61 Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. – М.: Колос, 1995. – 319 с. Чеботкевич В.Н. Методы оценки состояния иммунной системы и факторов неспецифической резистентности в ветеринарии / В.Н. Чеботкевич, С.И. Лютинский. - С.Пб., - 1998. - с. 21–22. Brentrup H. Klinische Aspekte der Dermatitis digitalis beim Rind / H. Brentrup, W. Adams // Tierärztl. Umschau. – V. 45. S. 311-316. Cheli R. La dermatite digitale del bovino / R. Cheli, C.M. Mortellaro // Proc. 8th International Conference on Diseases of Cattle. – P. 208-213. Choi B.K. Spirochetes from digital dermatitis lesions in cattle are closely related to treponemes associated with human periodontitis / B. Choi, K.H. Nattermann, S. Grund, W. Haider, U.B. Göbel // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1997. – V. 47. – P. 175-181. Döpfer D. Histological and bacteriological evaluation of digital dermatitis in cattle, with special reference to spirochaetes and Campylobacter faecalis / D. Döpfer, A. Koopmans, F.A. Meijer, I. Szakall, Y.H. Schukken, W. Klee, R.B. Bosma, J.L. Cornelisse, A.M. van Asten, H.M. // Vet. Rec. – 1997. – V. 140. – P. 620-623. Evans N.J. In vitro susceptibility of bovine digital dermatitis associated spirochaetes to antimicrobial agents / Evans N.J., J.M. Brown, I. Demirkan, R. Birtles, C.A. Hart, S.D. // Carter Veterinary Microbiology. – 2009. – V. 136. – P. 115–120. Fidler A. Evaluation of a Serpens species bacterin for treatment of digital dermatitis in dairy cattle / A. Fidler, M.L. Alley, G.W. // Smith Research in Veterinary Science. – 2012. – V. 93. – P. 1258–1260. Hernandez J. Comparison of topical application of oxytetracycline and four nonantibiotic solutions for treatment of papillomatous digital dermatitis in dairy cows / J. Hernandez, J.K. Shearer, J.B. Elliot // J. Am. Vet. Med. Assoc.. – 1999. – V. 214. – P. 688-690. Holzhauer M. Clinical course of digital dermatitis lesions in an endemically infected herd without preventive herd strategies / M. Holzhauer, C.J.M. Bartels, D. Döpfer, G. van Schaik // The Veterinary Journal. – 2008. – V. 177. – P. 222–230. Kofler J. Efficacy of the Non-antibiotic Paste Protexin Hoof-Care for Topical Treatment of Digital Dermatitis in Dairy Cows / J. Kofler, M. Pospichal, M. Hofmann-Parisot // J. Vet. Med.. – 2004. V. – 51. – P. 447– 452. Laven R.A. Treatment strategies for digital dermatitis for the UK / R.A. Laven, D.N. Logue // The Veterinary Journal. – 2006. – V. 171. – P. 79–88. 22. Ledecky V. Dermatitis digitalis in cattle / V. Ledecky, A. Orsag, J. Veghova // Fol. Vet.. – 1997. – V. 41. – P. 51-53. 23. Losinger W.C. Economic impacts of reduced milk production associated with papillomatous digital dermatitis in dairy cows in the USA / W.C. Losinger // Journal of Dairy Research. – 2006. – V. 73. – P. 244–256. 24. Oelkers B. Untersuchungen zur Wirksamkeit bestandsspezifischer Vakzinen gegen Dermatitis digitalis des Rindes in zwei Milchviehbetrieben : diss. : Bernd Oelkers. - Hannover, 1996. – P. 91. 25. Santos T.M.A. Microbial diversity in bovine papillomatous digital dermatitis in Holstein dairy cows from upstate New York / T.M.A. Santos, R.V. Pereira, L.S. Caixeta, C.L. Guard R.C. Bicalho // FEMS Microbiol. Ecol.. – 2012. – V. 79. – P. 518–529. 26. Schütz W. Überprüfung der Wirksamkeit stallspezifischer Vakzinen zur Bekämpfung der Dermatitis digitalis bei Milchkühen : Diss. : Werner Schütz. – München, 2001. – 103 S. 27. Speijers M.H.M. Effectiveness of different footbathing frequencies using copper sulfate in the control of digital dermatitis in dairy cows / M.H.M. Speijers, G.A. Finney, J. McBride, S. Watson, D.N. Logue, N. E. O’Connell // J. Dairy Sci.. – 2012. V. 95. – P. 2955–2964. 28. Sprecher D.J. Locomotion Scoring of Dairy Cattle / D.J. Sprecher, D.E. Hostetler, J.B. Kaneene // Theriogenology. – 1997. – V. 47. – P. 11781187. 29. Toholj B. Efficiency investigation into different therapeutic protocols in treating digital dermatitis in dairy cows / B. Toholj, M. Stevančević, J. Kos, O. Smolec, A. Potkonjak, M. Cincović, B. Belić, V. Ivetić, J. Spasojević, O. Stevančević // Vet. arhiv. – 2012. – V. 82. – P. 133-142. 30. Toholj B. Efficiency investigation into different therapeutic protocols in treating digital dermatitis in dairy cows / B. Toholj, M. Stevančević, J. Kos, O. Smolec, A. Potkonjak, M. Cincović, B. Belić, V. Ivetić, J. Spasojević, O. Stevančević // Vet. arhiv. – 2012. – V. 82. – P. 133-142. Формат 60х84 1/16. Бумага для множительных аппаратов. Печать на копировальном аппарате КГСХА. Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 217. 19 20