Федеральное агентство по образованию Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего
реклама
Федеральное агентство по образованию Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановский государственный университет" Кафедра физиологии человека и животных ДИПЛОМНАЯ РАБОТА Никулиной Екатерины Викторовны ВЛИЯНИЕ ОКСИТОЦИНА НА БОЛЕВУЮ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БЕЛЫХ КРЫС Научный руководитель: к.б.н., доц. Горбачева Любовь Руфэльвна, к.б.н., доц. Лукьянов Игорь Юрьевич Допущена к защите Заведующий кафедрой: к.б.н., доц. Зарипов Владимир Николаевич "___" ___________2005 год Иваново 2005 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ .......................................................................................................... 4 ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...................................................................... 6 1. Ноцицепция и антиноцицепция .............................................................. 6 1.1 Типы боли ................................................................................................ 6 1.2 Проведение болевой импульсации ....................................................... 7 1.3 Боль как системная интегративная реакция организма .................... 11 1.4 Антиноцицептивная система ............................................................... 12 1.5 Влияние стрессовых состояний на болевую чувствительность....... 15 1.6 Методы экзогенного снижения болевой чувствительности ............. 16 1.7 Вещества эндогенного происхождения обладающие анальгетическим эффектом........................................................................ 16 2. Гормон задней доли нейрогшюфиза – окситоцин и его роль в организме. ...................................................................................................... 18 2.1 Общие сведения о гормоне .................................................................. 18 2.2 Химическая структура и синтез окситоцина ..................................... 19 2.3 Механизм действия окситоцина .......................................................... 24 2.4 Внегонадные эффекты окситоцина. Взаимодействие окситоцина с другими гормональными системами. ....................................................... 27 2.4.1 Окситоцин и опиоидные пептиды ............................................ 29 2.4.2 Роль окситоцина в терморегуляции ......................................... 30 2.4.3 Иммуномодулирующее влияние окситоцина ........................... 30 2.4.4 Влияние окситоцина на поведенческие реакции животных. ................................................................................................................... 30 2.4.5 Влияние окситоцина на стресс. ................................................ 31 2.4.6 Влияние окстиоцина на болевую чувствительность. ........... 31 2.4.7 Гемодинамические эффекты окситоцина. .............................. 32 ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ........................ 35 1. Объект исследования............................................................................... 35 2. Тест – "tail flick" ....................................................................................... 35 3. Фармакологическое воэдействие .......................................................... 36 4. Характеристика используемых фармокологических препаратов . 39 ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЯ................................................ 40 1. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс при 5-ти дневном введении препарата в дозе 0,001 мг/кг .................... 40 2. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс после 5-ти дневного введении препарата в дозе 0,001 мг/кг................ 42 3. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс при однократном введении препарата в дозе 0,05 мг/кг ...................... 42 4. Определение возможного механизма анальгетического действия окситоцина ..................................................................................................... 46 ГЛАВА III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ................................................ 47 ВЫВОДЫ............................................................................................................ 49 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК .............................................................. 50 ВВЕДЕНИЕ Последнее время ученые многих стран изучают роль различных регуляторных пептидов. Было выяснено, что эти вещества участвуют в контроле практически всех физиологических реакций организма. В том числе и в генерализации ноцицептивного сигнального каскада важное место принадлежит регуляторрым пептидам. В целом современные представления о регуляторных пептидах образовали большой междисциплинарный раздел биологии, в котором тесно переплетены интересы биохимии, физиологии, патофизиологии, нейробиологии, эндокринологии и многих других биологических наук. Несмотря на активное исследование это области, каждый год открывают все новые факты о роли нейропептидов, которые позволяют уточнить, а иногда и пересмотреть процессы функционирования биологических систем. В связи с этим работы по изучению роли нейропептидов в организме до сих пор являются актуальными. Среди известных нейропептидов важное место принадлежит нейрогипофизарному гормону - окситоцину (ОТ). В начале 80-х годов двадцатого века выяснилось, что содержание окситоцина не ограничивается только гипоталамо-гипофизарной системой, этот пептид встречается также в других отделах головного мозга, в спинном мозге, в периферической вегетативной нервной системе (Hawthorn J., et al., 1984, Kiraly M., et al., 1986). Окситоцин оказывает влияние на нейронную активность в различных отделах ЦНС млекопитающих и моллюсков, известны и другие эффекты этого пептида.. Окситоцин – многофункциональный пептид, известно, что он влияет на поведенческие реакции, процессы запоминания (Ашмарин, 1988, Petersson, 1996). В последние годы получено доказательство того, что окситоцин участвует в модуляции поведенческих и физиологических реакций организма в ответ на действие стресса (R.J. Windle, 1997). В связи с этим открываются новые пути использования окситоцина или его аналогов в медицине. Поэтому в настоящее время многие лаборатории активно исследуют влияние этого нейропептида на организм. Но его участие в механизмах регулирования болевой чувствительности, на наш взгляд, изучено недостаточно. Поэтому цель нашего исследования – выявление анальгетического эффекта окситоцина при внутрибрюшинном введении. В связи с данной целью мы поставили перед собой следующие задачи: 1. Выявить анальгетический эффект окситоцина 2. Определить зависимость анальгетического эффекта окситоцина от длительности введения 3. Выявить динамику анальгетического эффекта окситоцина при однократном введении. 4. Определить окситоцина возможный механизм анальгетического эффекта ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Ноцицепция и антиноцицепция Боль – сложная интегративная реакция организма на повреждающий стимул, включает в себя перцептуальный, двигательный, эмоциональный и др. компоненты. Именно перцептуальный компонент отражает собственно болевое специфическое возбуждение, остальные формируются на его основе и являются неспецифическими (Калюжный Л.В. 1984). Боль формируется как ответная реакция организма на разрушающие его раздражители. Формирование чувства боли является приспособительным свойством, содействующим выживанию и выработанным в процессе эволюции живых существ. Болевое возбуждение имеет прежде всего сигнальное значение, предупреждающие о нарушении двух жизненно важных констант организма: целостности защитных покровных оболочек, обеспечивающих постоянство внутренней среды, и определённого уровня окислительных процессов тканей, обеспечивающих их нормальную жизнедеятельность(Кукушкин М.Л., Решетник В.К. 1997). Защитное свойство боли как сигнала опасности может проявляться только тогда, когда она возникает в ответ на действие именно вредоносного раздражителя. По-видимому, именно поэтому в эволюции был выработан и генетически закреплён определённый биологически целесообразный порог болевой чувствительности, обеспечивающий возникновение болевого ощущения в ответ только на вредоносные раздражители (Калюжный Л.В. 1984). 1.1 Типы боли 1. Острая эпикрическая боль возникает при разрушающих воздействиях на защитные оболочки организма (Bowsher D. 1978); она сигнализирует не только о возможном или уже происшедшем нарушение её целостности, но и дифференцирует место нарушения, что даёт возможность организму принять соответствующие меры. Она обычно ограничена повреждённой областью, её сила зависит от интенсивности стимуляции, после устранения повреждения она быстро проходит (Шмидт Р., Тевс Г. 1996). 2. Хроническая протопатическая боль возникает как при нарушении целостности кожных покровов (Bowsher D. 1978), так и без того (висцеральная боль). Она связана с изменением уровня кислородного дыхания тканей. Данная боль плохо дифференцируется и долго сохраняется. Это устойчивые и рецидивирующие формы боли. 1.2 Проведение болевой импульсации Рецепторы боли - ноцицепторы. По механизму возбуждения ноцицепторы можно выделить два типа . Первый - это механорецепторы, их деполяризация происходит в результате механического смещения мембраны. К ним относятся следующие: 1. Ноцицепторы кожи с афферентами А-волокон. 2. Ноцицепторы эпидермиса с афферентами С- волокон. 3. Ноцицепторы мышц с афферентами А-волокон. 4. Ноцицепторы суставов с афферентами А-волокон. 5. Тепловые ноцицепторы с афферентами А-волокон, которые возбуждаются на механические раздражения и нагревание 36 - 43 С и не реагируют на охлаждение. Второй тип ноцицепторов - это хеморецепторы. Деполяризация их мембраны возникает при воздействии химических веществ, которые в подавляющем большинстве нарушают окислительные процессы в тканях. К хемоноцицепторам относятся следующие: 1. Подкожные ноцицепторы с афферентами С- волокон. 2. Ноцицепторы кожи с афферентами С- волокон, активирующиеся механическими стимулами и сильным нагреванием от 41 до 53 С 3. Ноцицепторы кожи с афферентами С- волокон, активирующиеся механическими стимулами и охлаждением до 15 С 4. Ноцицепторы мышц с афферентами С- волокон. 5. Ноцицепторы внутренних паренхиматозных органов, локализующиеся, вероятно, главным образом в стенках артериол. Большинство механоноцицепторов имеют афференты А-волокон, и они расположены так, что обеспечивают контроль целостности кожных покровов организма, суставных сумок, поверхности мышц. Хемоноцицепторы расположены в более глубоких слоях кожи и передают импульсацию преимущественно через афференты С-волокон. Афферентные волокна передающие ноцицептивную информацию. Передача ноцицептивной информации от ноцицепторов в ЦНС осуществляется через систему первичных афферентов по А- и С-волокнам, согласно классификации Гассера: А-волокна - толстые миелинизированные волокна со скоростью проведения импульсации 4 - 30 м/с; С волокна немиелинизированные тонкие волокна со скоростью проведения импульсации 0,4 - 2 м/с. С волокон в ноцицептивной системе гораздо больше чем А-волокон. Болевая импульсация идущая по А- и С-волокнам через задние корешки вступают в спинной мозг и образуют два пучка: медиальный, входящий в состав задних восходящих столбов спинного мозга (СМ), и латеральный, переключающийся на нейронах расположенных задних рогах СМ. В передаче болевой импульсации на нейроны СМ принимают участие рецепторы NMDA, активация которых потенцирует передачу болевой импульсации в СМ (Dickenson A.H. et al.,1997), а также рецепторы mGluR1/5, т.к. их активация играет роль в развитии гиперальгезии (Kim F., Terens C.,1998). Проводящие пути болевой импульсации. Лемнисковая система. Медиальный пучок, идущий от задних корешков входит в состав задних восходящих столбов СМ и собирая импульсацию от кожи, сухожилий и висцеральных афферентов, без перерыва восходит до тонких и клиновидных ядер продолговатого мозга (ПМ). Коллатерали аксонов идущих по задним столбам, оканчиваются на нейронах заднего рога СМ и тем самым могут оказывать влияние на болевой поток, идущий через эти нейроны. Вторичные восходящие проекции через медиальную петлю достигают задних вентральных ядер таламуса, а оттуда проецируются в соматосенсорные зоны коры больших полушарий (КБП) (Вальдман А.В., Игнатов Ю.Д.,1977).Аксоны задних столбов способны передавать болевую информацию, и некоторые из них исключительно ноцицептивны (Dennis S. G., Melzack R.,1977) Спино-цервикальный тракт в дорсолатеральной зоне СМ восходит до нейронов латерального цервикального ядра на уровне С - С далее идёт через латеральную часть медиальной петли и переключается на нейронах контрлатеральных задних вентральных ядер таламуса, аксоны которых следуют в соматосенсорные зоны коры больших полушарий (КБП). Спиноцервикальный путь передаёт ноцицептивную при воспалении тканей (Смолин Л. Н., 1981) и от мышц (Kniffke K. et al., 1977) Прямой спино-таламический путь хорошо выявляется у высших млекопитающих и человека, то у птиц, крыс, кроликов и кошек он выражен слабее и называется неоспино-таламический. Он проходит без перерыва и переключается на нейронах базальной части заднего вентрального ядра таламуса. По этому пути проводятся сигналы хорошо локализованной детерминированной боли и им обеспечивается информация о её локализации (Вальдман А.В., Игнатов Ю.Д.,1976). Экстралемнисковая система. Для Экстралемнисковых афферентных путей характерна диффузная организация, поэтому нет чётких критериев их дифференцирования (Вальдман А.В., Игнатов Ю.Д.,1976).Считается, что экстралемнисковая ощущения без система тонкого модальности и локализации. обеспечивает генерализованные дифференцирования раздражителей формы по их Начало вентролатеральных проекций идет с нейронов заднего рога СМ. На бульбарном уровне происходит частичное переключение данной афферентной импульсации на нейронах гигантоклеточного ядра(ГКЯ). Восходящие проекции от бульбарных ретикулярных нейронов достигают медиальных таламических ядер (бульбарно-таламический тракт), а часть волокон, минуя ГКЯ, проходит через ретикулярную формацию (РФ) среднего мозга (СрМ) к ядрам таламуса. Совместно с проекциями, берущими начало от бульбарного уровня, эта сложная система получила название "диффузный покрышковый путь", который не имеет строго очерченных границ. На уровне промежуточного мозга (ПрМ) диффузный путь разделяется на два: первый достигает интераламинарных ядер таламуса (ЯТ), второй проходит через структуры субталамуса, гипоталамуса и неопределённой зоны. Данный комплекс ядер осуществляет интеграцию болевого потока, в частности неспецифической болевой импульсации, и её модуляцию. Так облегчение боли, вызываемое стимуляцией вентробазального таламуса обусловлено активацией мультисинаптического пути, оказывающего тормозное действие на ноцицептивные нейроны медиальных ядер таламуса (Vilela F.O.,1994).Неспецифические ядра таламуса имеют прямые связи с соматосенсорной (сенсомоторной) зоной КБП, парафасцикулярный комплекс ядер проецируется на все области КБП, в том числе верхнею лобную извилину и теменную область, а также премоторную кору и соматосенсорную зону коры. Таламус является конечной собирательной станцией переключения болевой импульсации как от лемнисковых, так и экстралемнисковых путей, формирующий ощущения, связанные по характеру, тяжести и локализации с эпикритической и протопатической болью. На клеточном уровне в облегчении передачи ноцицептивной информации принимают участие вольт-чувствительные кальциевые каналы (ВСКК) типов N и Р, ВСКК типа L в передаче ноцицептивной информации не участвуют (Malmbery, Yaksh, 1994). 1.3 Боль как системная интегративная реакция организма Болевая реакция является интегративной функцией организма, которая мобилизует самые разнообразные функциональные системы для защиты организма от воздействующих вредящих факторов и включает такие компоненты, как сознание, ощущения, память, мотивация, вегетативные, соматические и поведенческие реакции, эмоции В общей системной болевой реакции выделяют несколько её относительно самостоятельных компонентов: 1. Перцептуальный компонент собственно - ощущение боли, возникающие на основе возбуждения механо- и хемоноцицепторов. Это формирует ноцицептивную импульсацию, которая через афферентные пути активизирует лемнисковые и экстралемнисковые системы СМ и ГМ (вплоть до КБП), создавая ощущение боли. 2. Рефлекторная вредоносного защитная фактора, двигательная реакция формирующаяся на устранения основе от активации мотонейронов СМ через конвергенцию на них ноцицептивной импульсации. 3. Болевое бодрствование , связанное с активацией ретикулярной формации, с активирующими последующими влияниями восходящими на другие и нисходящими структуры мозга и функциональные системы организма. 4. Отрицательная эмоция, формирующаяся на основе возбуждения отрицательных эмоциогенных зон гипоталамуса, РФ, и лимбических структур, имеющая преимущественно адренергическую природу, и вызывающая совместно с ноцицептивной импульсацией изменения вегетативных реакций организма, гормональных и метаболических процессов. 5. Мотивация устранения болевых ощущений, формирующаяся на основе активации лобных и теменных областей коры и приводящая к формированию поведения , направленного на лечение ран и выключения перцептуального компонента. 6. Активация механизмов памяти, связанная с извлечением опыта по устранению болевых ощущений, т. е. избегания вредоносного фактора или сведения до минимума его действия, и опыта лечения ран. 1.4 Антиноцицептивная система В организме существует не только болевая (ноцицептивная), но также эндогенная антиноцицептивная морфофункциональная система, поддерживающая и регулирующая порог болевой чувствительности на необходимом функциональном уровне. Данная система имеет сложное строение и гетерогенна по своим механизмам. Наиболее изучены три её механизма: опиоидный, серотонинэргический и адренэргический, каждый из которых имеет свои морфологические и физиологические особенности. По мимо этих существуют и другие механизмы регуляции, связанные с пептидами (соматостатин нейротензин и др.) или с другими эндогенными веществами, которые ещё недостаточно изучены. Порог болевой чувствительности коррелирует с интегративным возбуждением, идущим по А - и С-волокнам, что связано с возбуждением не только механо-, но и хемоноцицепторов. В свою очередь порог возбуждения хемоноцицепторов зависит от воздействующих на них химических веществ, постоянно присутствующих в организме, в частности в плазме крови и спинномозговой жидкости. К ним относятся, с одной стороны, алгогенные вещества типа простагландинов, кининов, гистамина, субстанции Р и др., повышающие чувствительность хемоноцицепторов, с другой - вещества, понижающие их чувствительность, в первую очередь - опиоидные пептиды, которые могут угнетать образование брадикардина (Inoki R. et al.,1978). первых веществ, например, Предполагается, что алгогенные вещества и опиоидные пептиды воздействуют на один и тот же рецептор, что, в частности, постулируется для опиоидов и простогландинов (Ehrenpreis S.,1978). Уровень соотношения этих веществ, который в нормальном организме относительно постоянен, повидимому, и определяет порог возбуждения ноцицепторов и тем самым порог болевой чувствительности. Смещение соотношения эндогенных веществ в ту или иную сторону приводит к изменению порога боли. Опиоидный механизм. Опиоиды (эндорфины, энкефалины)- это вещества, которые подавляют болевое ощущение, практически не затрагивая другие сенсорные модальности. Их действие высоко специфично благодаря наличию особых опиоидных рецепторов на нейронах ноцицептивной системы (Шмидт Р., Тевс Г. 1996). Известны по меньшей мере 4 их подтипа, различающихся своей чувствительностью к опиоидам и другим эндогенным веществам. Содержание опиоидных пептидов в организме генетически заданной величиной (Tageshigi Ch et al., 1979). В тоже время установлено, что порог боли не является абсолютно стабильной величиной, а подвержен функциональным колебаниям, в частности суточным, это также коррелирует с изменениями содержания опиоидных пептидов (Domzal T. et al.,1980). Порог боли, связанный с содержанием опиоидных пептидов, регулируется центральными механизмами, так как разрушение структур, в которых синтезируются опиоиды, ведёт к гиперальгезии ,а их активация - к анальгезии. Это свидетельствует о том, что в организме человека и животных существует определённая функциональная система, регулирующая уровень содержания опиоидных пептидов. Основной функцией опиоидного механизма эндогенной антиноцицептивной системы является поддержание и функциональное регулирование генетически заданного порога болевой чувствительности. Опиоидная система оказывает также нарастающие тормозное влияние на проведение ноцицептивной импульсации на уровне интернейронов в ответ на нарастающий по интенсивности стимул для ограничения уровня возбуждения ноцицептивной афферентной системы, что не допускает её перегрузки. Примечательно, что энкефалины блокируют проведение не только ноцицептивной, но и сенсорной импульсации. Это указывает на то, что опиоидная система выполняет роль "ограничителя" возбуждения по отношению к любой афферентации. Серотонинергический механизм эндогенной антиноцицептивной системы связан с активностью нейров ядер шва и центрального серого околоводопроводного вещества (ЦСОВ). В организме существует определенный уровень серотонина и понижение этого уровня, вызванное, например, введением деплеторов его синтеза, или разрушение серотонинергических структур ведёт к гипералгезии. Между опиоидным и серотонинергическим механизмами антиноцицептивной системы существует определённый синергизм действия, что указывает на сходство их функций в регуляции болевого порога. Однако (в отличие от энкефалических нейронов) серотонинергические нервные клетки тормозятся в ответ на ноцицептивный раздражитель, что показано на нейронах ядер шва (Chiang C.Y. et al.1994). Следовательно серотонинергическая антиноцицептивная система не может выполнять функции "ограничителя" возбуждения афферентных систем, в частности для ноцицептивной импульсации. Опиоидная и серотонинергическая антиноцицептивные системы выполняют ещё одну функцию - информативную. Через эти системы формируется информация о биологически неопасном для организма значения воздействующего раздражителя. Адренергический механизм регуляции болевой чувствительности связан с активацией эмоциогенных зон ствола мозга и гипоталамуса. Фазический фактор данного механизма позволяет организму более быстро изменять пороги болевой чувствительности, как в сторону её снижения, так и повышения, что имеет важное приспособительное значение: организм либо более успешно выделяет опасные для него раздражители, либо пренебрегает ими ради удовлетворения других, более важных в тот или иной момент его биологических потребностей. Адренергическая и серотонинергическая системы находятся в тесном взаимодействии друг с другом. Так имплантация кортикостерона в ЦСОВ вызывала снижение болевой чувствительности у крыс, снижение которой наблюдалось и при стимуляции ЦСОВ. Адренэктомия блокировала анальгетический эффект электрической стимуляции ЦСОВ, что свидетельствует о взаимодействии адренергической и серотонинергической систем (Якушкина Н.И., Богданов А.М.,1998). Болевая чувствительность организма зависит от взаимодействия всех функционирующих механизмов, как ноцицептивных, так и антиноцицептивных, которые могут ослаблять или усиливать друг друга. 1.5 Влияние стрессовых состояний на болевую чувствительность При состоянии стресса наблюдаются различные изменения болевой чувствительности, которые зависят от характера стресса. Так хронический стресс, связанный с воспалительным заболеванием наблюдается снижение болевой чувствительности, связанное, возможно, с экскрецией Т- лимфоцитами - эндорфинов в зону воспаления (Jessop D.S., 1998). А при стрессе, вызванном депривацией и состоянием постоянной обороны наблюдается повышение болевой чувствительности. Возможно, что хронический психоэмоциональный стресс приводит к ослаблению контроля со стороны антиноцицептивной системы, а наличие очага хронической висцеральной ирритации является фактором сенсибилизации периферических (а возможно и висцеральных) ноцицепторов. Что приводит ноцицептивную систему на новый уровень функционирования, в следствие чего подпороговые алгогенные стимулы обретают значимость пороговых болевых (Кудряшова М.Ф., 1998). 1.6 Методы экзогенного снижения болевой чувствительности Облегчение боли - одна из основных задач медицины. Чтобы избавиться от боли, лучше всего устранить её причину, но когда это неосуществимо показано симптоматическое лечение. 1. Фармакологические препятствующие воздействия. восприятию Применяются (ненаркотические препараты, анальгетики) и проведению (локальные анестетики) вредных сигналов, тормозящие их центральную обработку (наркотические анальгетики) и уменьшающие эмоциональный компонент боли (психотропные препараты). 2. Физическое облегчение боли. Применяются приёмы самого различного характера. Это покой и неподвижность, прикладывание горячего и холодного, массаж и гимнастика, акупунктура, электрическая стимуляция и нейрохирургия (перерезка переднебокового канатика спинного мозга - хордотомия - прерывает проведение ноцицептивных сигналов от контролатеральной половины тела) 3. Психологические методы облегчения боли. Включают в себя психологические приёмы, позволяющие справиться с болью, которые в целом можно назвать "стратегиями приспособления" (расслабление, медитация, аутотренинг, гипноз). С точки зрения информационной концепции боли действие медикаментозных и немедикаментозных методов обезболивания можно интерпретировать как нарушение нормального процесса распознавания "образа боли" (Петров О.В. и др.,1999). 1.7 Вещества эндогенного происхождения обладающие анальгетическим эффектом Помимо классических фармакологических препаратов, применяемых с целью обезболивания, существуют и другие вещества обладающие анальгетическим эффектом, действие которых в настоящие время широко исследуется. Кальциотонин повышает болевой порог у различных видов животных (мышей, крыс, кроликов и др.). Анальгетическое действие кальциотонина осуществляется через серотонинергический механизм и для его проявления необходима целостность серотонинергической системы (Colorado M.I., Ormazabal M.I. et al.,1994). Вещество Р Как уже известно введение вещества Р вызывает болевую реакцию у лабораторных мышей, но введение его в малых дозах (1наномоль) вызывает анальгетический эффект. Антинорцицептивное действие вещества Р осуществляется на спинальном уровне (Takashi, Tako, 1997). Орфанин FQ2 - нейропептид выделенный из гипоталамуса свиньи. Он обладает выраженными обезболивающими свойствами при супроспинальном и интертекальном введении лабораторным мышам (Rossi, Matis, Pasternak,1998). Окситацин также обладает анальгетическим действием. Так как этот нейропептид был использован в нашем эксперименте, то рассмотрим его действие и свойства более подробно. 2. Гормон задней доли нейрогшюфиза – окситоцин и его роль в организме. 2.1 Общие сведения о гормоне Впервые сообщение о способности экстракта из гипофиза повышать артериальное давление было сделано G. Oliver, E.A. Shaffer в 1894 году. В 1897 году Howell установил локализацию прессорного вещества в задней доле гипофиза. Влияние вытяжки из нейрогшюфиза на матку было обнаружено Н. Dale (1906). I. Ott и J.C. Scott в 1910 году открыли влияние этой вытяжки на молочные железы. В 1928 г. О. Kamm с соавторами разделили экстракт нейрогшюфиза на два родственных вещества - гормоны вазопрессин и окситоцин. E.Verney, работавший вместе с Е. Starling, в 1925 году присоединил к его "сердечно-легочному препарату" почку и обнаружил, что при введении экстракта из нейрогшюфиза в систему циркуляции уменьшается количество отделяемой мочи и повышается ее концентрация. Спустя 10 лет Е. Verney публикует другой исторический доклад о том, что инъекция солевого раствора в каротидную зону у бодрствующих собак, находящихся в условиях водного диуреза, снижает количество отделяемой мочи, что не наблюдается у гипофизэктомированных животных. А в 1954 г. V. du Vigneud с соавторами выделили окситоцин (это был первый пептидный гормон, полученный в чистом виде) и установили его химическую молекулярную структуру. Вскоре им удалось осуществить синтез этого октапептида, который был также и первым синтезированным гормоном. Это и послужило исходным пунктом для получения нашедших широкое применение синтетических препаратов окситоцина, у которых в отличие от экстрактов из нейрогшюфиза практически отсутствует вазопрессиновая активность. Окситоцин считается специфическим для самок млекопитающих гормоном, так как основные его эффекты - стимуляция миометрия матки и гладкомышечных элементов молочных желез проявляются на уровне соответствующих органов - эффекторов. Но окситоцин вырабатывается не только у самок, но и у самцов млекопитающих, хотя у последних матка и молочные железы отсутствуют, т.е. окситоцин в данном случае воздействует на какие-то иные органы - мишени, имеет иное физиологическое значение. По данным клинических исследований концентрация окситоцина в плазме крови составляет 3,2 мкЕ/мл (Лифшинц В.М., 2002) или 6,4 пг/мл, а в гипоталамусе количество окситоцина одинаково как у самок, так и у самцов (Soloff М.,1996). Роль окситоцина не ограничивается его влиянием на матку и молочные железы, о чем свидетельствует его наличие не только у представителей класса млекопитающих, но и у других позвоночных. Кроме того, окситоцин существенно изменяет водно - солевой гомеостаз, проявляя антагонистические по отношению к родственному гормону - вазопрессину свойства, фактически являясь диуретиком. Многочисленны и противоречивы данные о влиянии окситоцина на артериальное давление. Ряд авторов указывает на способность окситоцина повышать артериальное давление. В то же время некоторые исследователи наблюдали гипотензивное действие окситоцина (Petersson M. et al., 1997). 2.2 Химическая структура и синтез окситоцина Окситоцин не является собственным гормоном нейропшофиза, а лишь накапливается в нем, перемещаясь по аксонам гипоталамо- гипофизарного пучка из ядер переднего гипоталамуса - супраоптического и паравентрикулярного, в нейронах которых он и синтезируется. В настоящее время установлено, что окситоцинергические нейроны в большей степени сосредоточены в паравентрикулярном ядре, нежели в супраоптическом (Теппермен Д., Теппермен X., 1994). Основной особенностью этих нейросекреторных клеток является наличие специфических гранул, интенсивно окрашивающихся по методу Гомори (Гомори - положительных) и содержащихся в разном количестве как в нейроплазме, так и в отростках аксонах и дендритах, а также заполняющие расширения этих отростков - так называемые тельца Херринга. Основой Гомори-положительных гранул являются прогормон - предшественник окситоцина прооксифизин (более крупный, нежели сам окситоцин, с молекулярной массой 15 000) (Теппермен Дж., Теппермен X., 1989). Кроме того, гранулы содержат ферменты, расщепляющие прогормон на соответствующий октапептид окситоцин и белок нейрофизин I типа или протеин Аше I типа. Комплекс окситоцина с нейрофизином получил название присоединяет полисахарид. протеин Снаружи Ван этот Дейка, нередко комплекс он покрывает фосфолипидная мембрана. Связь окситоцина и нейрофизина в гранулах нейросекрета более лабильна, чем у антидиуретического гормона .Биологическая роль нейрофизинов остается пока неизвестной, но их уровень в сыворотке крови служит интегральным показателем секреции пептидов задней доли гипофиза Кроме того, нейрофизины, по данным S. Shin et al. (1993), способны стимулировать выброс пролактина. Гранулы с нейросекретом перемещаются по нервным волокнам в нейрогипофиз, где частично накапливаются в виде телец Херринга, а главным образом в вазонейральных синапсах, которыми заканчиваются эти аксоны на капиллярах нейрогипофиза, и поступают с током крови на периферию. Нейросекрет выделяется не только в кровь, но и в полость Ш желудочка или в воронкообразное углубление благодаря тому, что некоторые дендриты нейросекреторных клеток внедряются между клетками эпендимы и достигают своими окончаниями полостей желудочковой системы. Парвоцеллюлярные нейроны, продуцирующие окситоцин, встречаются не только в супраоптических и паравентрикулярных ядрах, но и в других областях гипоталамуса и мозга в целом, таких, как срединное возвышение, миндалина, блуждающего гшшокамп, нерва и стриатум, в ядрах дорсальные одиночного двигательные пучка. Кроме ядра того, окситоцинергические волокна опускаются вниз к позвоночному столбу, где они заканчиваются на пресинаптических нейронах симпатической цепочки в интермедиолатеральных столбах и также в задних рогах (Sofroniew M. et al., 1983). Выделение нейросекрета происходит путем экзоцитоза через слияние нейросекреторных гранул с плазматической мембраной с последующим выходом их содержимого во внеклеточное пространство. Мембрана нейросекреторных гранул в последующем возвращается путем микропиноцитоза и поглощается лизосомальными тельцами, где она деградирует и утилизируется. В нейрогипофизе аксоны заканчиваются в непосредственной близости от кровеносных сосудов и выброс окситоцина происходит во внеклеточное или периваскулярное пространство. Часть нейросекрета поглощается питуицитами, остаток гормона проходит через экстрацеллюлярные аблюминальную синусы, базальную контролирующие мембрану, и движение сквозь сквозь фенестрированный капиллярный эндотелий проникает в кровоток (Stopa E. et al., 1993). Скорость миграции гранул составляет около 3 мм в сутки. При стимуляции выброса окситоцина.(введением гипертонического раствора, некоторых анестетиков, никотина и т.д.) количество гранул в задней доле гипофиза резко уменьшается (Теппермен Дж., Теппермен X., 1994). Предположительно питуициты участвуют в мобилизации, а возможно, и активации нейросекрета из гипоталамуса, вырабатывая свой нейросекрет, который стимулирует выделение гормонов из терминалей аксонов в ток крови. Синтез окситоцина осуществляется по классической схеме, характерной для синтеза веществ пептидной природы: ДНК - РНК - белок. Синтезируемый прогор-мон накапливается внутри клетки и высвобождается путем экзоцитоза под воздействием различных стимулов. Регуляция синтеза окситоцина осуществляется По принципу "обратной связи " - при выделении окситоцина в кровь он воздействует на клетки эндотелия капилляров мозга таким образом, что увеличивается или уменьшается способность специфического усвоения нейронами предшественников РНК, необходимых для пептидного синтеза. Ранее многими авторами выдвигалась концепция единых стимулов для высвобождения окситоцина и вазопрессина, благодаря близости их химической формулы. К ним относили - стрессовые ситуации, кровопотерю, курение табака, различные осмотические стимулы, электрическую стимуляцию афферентных почечных нервов, окклюзию почечных артерий и вен (Verbalis J. et al., 1991; McCabe J. et al., 1990; Ciriello J., 1998). В настоящее время имеются также убедительные данные о независимости регуляции секреции этих нейропептидов - выделение одного из них может происходить под действием стимулов, не влияющих на секрецию другого. Так, например, введение никотина и некоторых анестетиков в большей степени стимулирует, синтез и секрецию окситоцина (Теппермен Дж., Теппермен X., 1994). При длительной стимуляции супраоптического и паравентрикулярного ядер гипоталамуса уровень секреции вазопрессина начинает преобладать над уровнем секреции окситоцина (Гроллман А., 1969). Некоторые исследования свидетельствуют о раздельном выбросе этих гормонов в кровь. Однако, V.Abrahams и М. Picford (1964) наблюдали у собак одновременное увеличение возбудимости матки (эффект окситоцина) и снижение диуреза (эффект вазопрессина) после инъекции гипертонического раствора в область каротидного синуса. Снижение мочеотделения было выявлено также во время лактации и вскармливания. Синтез и секреция окситоцина может регулироваться рефлекторно при раздражении рецепторов растяжения шейки матки, рецепторов сосков молочных желез. Синтез и секреция окситоцина прямо зависят от уровня эстрогенов в крови (Wallace J. et al., 1991). Сведения о связывании и транспорте окситоцина белковыми молекулами - переносчиками в биологических жидкостях крайне противоречивы. Так, ряд исследователей полагает, что у человека и животных экзогенный окситоцин слабо связан с белками плазмы. Предполагается существование специфической для окситоцина системы связывания с белками плазмы. Кроме того, высказывается мнение о том, что эта система в крови является общей для окситоцина и вазопрессина, а на уровне органов эффекторов - специфической. Некоторые ученые полагают, что эндогенный окситоцин находится в лазме как в свободном, так и в связанном с белками состоянии, при этом освобождение плазменного окситоцина идет быстрее вазопрессина. Инактивация окситоцина, по мнению многих авторов, осуществляется посредством специфического фермента -окситоциназы (Nagasaka Т. et al., 1997). Принято считать, что наличие окситоциназы в сыворотке крови характерно для состояния беременности. Кроме того, этот фермент появляется также и в плаценте. Однако Т. Nagasaka (1997), исследуя экспрессию мРНК для окситоциназы на других видах человеческих тканей, обнаружил этот фермент также у плода и у взрослого человека. Экспрессия окситоциназной мРНК была определена в сосудистых эндотелиальных клетках, клетках слизистой желудочно-кишечного тракта, эпителии гепатобилиарной и панкреато-билиариой системы, эпителии бронхо-альвеолярного и почечного тубулярного аппарата, в нейронах центральной нервной системы, в простате, адипоцитах и клетках скелетной мускулатуры. Одной из возможных причин падения активности экзогеннопк окситоцина в плазме в условиях in vivo считают гидролитическое разрушение его лейцинглицинамидных связей и сопутствующее этому высвобождение глицинамида. Не отрицая присутствия в крови окситоциназы, максимальная активность которой обнаруживается к концу родов, J. Sjoholm (1969) считает, что этот фермент малоспецифичен, малоактивен и вряд ли имеет существенное значение кроме того, некоторые авторы в своих исследованиях приводят данные о включении неспецифических для окситоцина ферментных систем таких, как постпролиновый расщепляющий фермент типа сериновой протеазы, обнаруживающий свое действие в тканях матки человека. В плазме крови окситоцин инактивируется намного медленнее вазопрессина. Таким образом, если механизмы секреции и выброса окситоцина достаточно подробно изучены, то сведений о связывании и инактивации этого гормона значительно меньше. Важную роль в постсекреторной судьбе окситоцина играют почечный и внутриорганный (спланхниальный) клиренс (Share L. et al., 1993;). Однако эксперименты на изолированно перфузируемой печени показали лишь частичный вклад этого органа в инактивацию нейрогипофизеальных гормонов. Было также отвергнуто; предположение о возможной роли селезенки в клиренсе окситоцина, так как спленэктомия не вызывала изменений в элиминации этих гормонов (Matsui et al., 1983). T.F. Janaky и соавт. (1982) показали, что нейрогипофизеальные гормоны более быстро накапливаются и инактивируются в тонком кишечнике, чем в других внутренних органах. Как уже ранее упоминалось, окситоцин по своей химической структуре представляет собой октапептид, т.е. состоит из 9 аминокислот, молекула его имеет циклический характер благодаря наличию дисульфидной связи. От молекулы вазопрессина окситоцин отличается лишь аминокислотами в 3, 4 и 8 положениях. Поэтому данные соединения обладают одновременно прессорным, антидиуретическим и окситоциче-ским действием, хотя и в разной степени. Если в 8 положении находится основная аминокислота — аргинин или лизин, то соединение приобретает вазопрессорное или антидиуретическое действие. Если 8 положение занято нейтральной аминокислотой (лейцином), то соединение проявляет окситоцические свойства. 2.3 Механизм действия окситоцина Клеточный механизм действия окситоцина изучен достаточно полно только на уровне его основных эффекторов - матки и молочных желез. Современные представления о функционировании рецепторов белковопептидных гормонов, в частности окситоцина, основаны на жидкостно- мозаичной модели плазматических мембран, которая в настоящее время является общепринятой. Поскольку многими авторами была выявлена зависимость активации гормонами биомолекул - эффекторов (аденилатциклазы) от вязкости мембран, была предложена теория подвижных рецепторов, способных латерально диффундировать в плоскости мембраны (Cuatrecasas P., 1974), согласно которой гормональный рецептор и эффектор как интегральные белки могут свободно плавать в мембране. При активации гормоном рецептора происходит изменение его конформации, в результате чего ' у него появляется возможность взаимодействовать с рецепторами. Связывание окситоцина со специфическим рецептором оказывает активирующее действие на аденилатциклазу опосредовано через особый сопрягающий белок -ГТФ-связывающий или регулируемый нуклеотидами белок (обозначаемый О или N) (Beleslin G.M., Jankovi D.B.,1998; Tribonnier M. et al., 1998). Комплекс G-белка с ГТФ активирует аденилатциклазу, тогда как комплекс G-белок -ГДФ такого действия не оказывает. G-белок превращается из неактивной ГДФ - формы в активную ГТФ - форму в результате обмена связанного ГДФ на ГТФ. Этот обмен и катализируется гормон-рецепторным комплексом. Кроме того, G-белок является и ГТФ-азой, т.е. происходит гидролиз ГТФ до ГДФ и приводит к инактивации аденилатциклазы. Таким образом, G-белок играет решающую роль как в активации, так и в инактивации аденилатциклазы. В итоге связывание гормона с рецептором приведет к повышению содержания внутриклеточного цАМФ; который является вторичным мессенджером окситоцина. Важно подчеркнуть, что большинство эффектов окситоцина, осуществляющихся за счет прироста цАМФ, реализуется лишь в присутствии кальция. Согласно современным представлениям, окситоцин вызывает повышение внутриклеточного содержания кальция посредством усиленного его притока из внеклеточного пространства фосфотидилинозитола. в, результате изменения обмена Осуществление внутриклеточных эффектов кальция тесно связано с функционированием специфического кальмодулина, одной из калыщйсвязывающего белка - функций которого является активирование фосфодиэстеразы, расщепляющей цАМФр (Теппермен Д., Теппермен X., 1989). Возрастание внутриклеточной концентрации кальция также сопровождается увеличением внутриклеточного содержания цГМФ: В свою очередь цГМФ тормозит поступление кальция в клетку. Ионы кальция активируют фосфолипазу А, что приводит к индукции образования простагландинов, оказывающих влияние на окситоцин. Во фракции плазматических мембран клеток миометрия и эндометрия матки и миоэпителии молочной железы найдены участки, способные эффективно, с высоким сродством связывать окситоцин и его синтетические аналоги. Сродство этих рецепторов, как правило, соответствует уровню биологической активности последних. Количество рецепторов окситоцина в гладкой мускулатуре матки значительно увеличивается у беременных женщин и достигает максимума на ранних стадиях родового акта. В эндометрии число рецепторов аналогично увеличивается, достигая максимума при родах. Окситоцин стимулирует продукцию простагландинов в эндометрии, а не в гладкой мускулатуре матки. Гормон может участвовать в начале родов как прямо, вызывая сокращения мьшщ маткн, так и опосредованно, стимулируя эндометрий к продукции простагландинов, которые являются сильными активаторами сокращения гладких мышц и могут оказывать эффект паракринным путем. Окситоцин способен также стимулировать продукцию простагландинов в амнионе посредством активации системы инозитолфосфолипид-протеинкиназа С. Возможно, начало родов может быть следствием совместного действия окситоцина и местно продуцируемых простагландинов (Теппермен Д., 1989; Beleslin G.M., Jankovi D.B.,1998). Известно, что плод сигнализирует о своей готовности к родам. Высказано предположение, что одним из компонентов подобной сигнализации является окситоцин, который вызывает синтез простагландинов в эндометрии. Тот факт, что простагландины играют важную роль в начале родов, доказывается задержкой родов у женщин, получавших ингибиторы синтеза этих соединений. Сокращение миоэпителиальных клеток молочной железы под действием окситоцина обусловлено фосфорилированием миозина. Эффект гормона сопровождается и увеличением уровня цАМФ в этих клетках, но фосфорилирование миозина не связано с действием цАМФ - зависимой протеинкиназы. Как фосфорилирование миозина, так и сокращение блокируется ингибиторами притока кальция в клетку. Следовательно, этот эффект окситоцина опосредован комплексом Са - кальмодулин (Olins G., Bremel R.,1984). 2.4 Внегонадные эффекты окситоцина. Взаимодействие окситоцина с другими гормональными системами. Зависимость синтеза и секреции окситоцина от полового гормонального фона широко известна (Sheldrick E., Flint A., 1990; Ayad V. et al., 1990; Gilbert С et al., 1991; Wathes D. et al., 1992; Wathes D., DenningKandall P., 1993). В меньшей степени представлены сведения о взаимодействии окситоцина с другими гормонами. Исследованиями M.Forsling (1993) было установлено, что секреция нейроги-пофизарных гормонов окситоцина и вазопрессина подчиняется пиркадианным ритмам - у мужчин резкое нарастание и пик концентраций плазменного окситоцина приходится на период с 24 до 4 часов, затем концентрация плавно снижается и минимум приходится на 22 часа. Установив такую зависимость, автор предположила, что секреция нейрогипофизарных гормонов должна контролироваться мелатонином j гормоном шишковидной железы. В экспериментах на интактных и пинеалэктомиро-ваных крысах было показано, что суточный ритм плазменных концентраций окситоцина не является истинным циркадианным ритмом, так как претерпевает существенные изменения в различные периоды эстрального цикла у самок и зависит от степени гидратации организма. Мелатонин и циркулирующие его аналоги метаболиты ингибируют мелатонина выброс эффектов окситоцина, не но производят, пинеалэктомия устраняла "ингибирующий эффект мелатонина. Так как окситоцинергические нейроны находятся в непосредственной близости к срединному возвышению, окситоцин может проникать в гипоталамо-гипофизарную портальную систему циркуляции и влиять на гормональную продукцию аденогипофиза - окситоцин, вводимый интрацеребровентрикулярно, стимулирует выброс пролактина. Кроме того, окситоцин способен как стимулировать, так и ингибировать синтез и секрецию гормона роста (Beleslin G.M., Jankovi D.B.,1998). У крыс окситоцин стимулирует кратковременный выброс адренокортикотропного гормона и кортикостерона, нр. у человека и приматов этот эффект сменяется ингибирующим влиянием (Richard P. et al., 1991). Окситоцин стимулирует выброс некоторых гастроинтестинальных гормонов таких, как холецистокинин, соматостатин, гастрин, влияя на активацию ядер блуждающего нерва (Palkovits M. et al., 1984; Leng G. et al., 1991). Гормон, также способствует секреции инсулина. Эти эффекты индуцируются при блокируются интрацеребровентрикулярном атропином и, введении предположительно, окситоцина, опосредуются холинергическими влияниями. Более того, инсулин и глюкагон могут секретироваться активацией окситоциновых рецепторов в поджелудочной железе. Плазменный окситоцин, способствуя выбросу глюкагона, может повышать уровень глюкозы в крови. С другой стороны, стимулируя центральные структуры, он может усиливать секрецию инсулина и снижать уровень глюкозы, тем самым проявляя двоякие сахаррегулирующие качества (Richard P. et al., 1991; Bjorkstrand E. et al., 1996). Принимая во внимание тот факт, что окситоцин также стимулирует секрецию соляной кислоты, может формировать пищевое поведение, регулировать аппетит, ингибируя принятие пищи у самцов и небеременных самок крыс ,и, наоборот, индуцируя пшерфагию у самок преимущественно в период лактации, можно сделать вывод о том, что этот нейропептид регулирует функции пищеварительной системы (Bjorkstrand E. et al.,1996). 2.4.1 Окситоцин и опиоидные пептиды По данным литературы известно, что опиодные пептиды играют важную роль в модуляции выброса окситоцина и вазопрессина посредством прямого влияния на перикарий крупноклеточных нейронов в супраоптическом и паравентрикулярном ядрах или в нервных терминалях нейропшофиза (Chowdrey H.S., Lightman S.L., 1993). Электрофизиологические исследования in vivo показали ингибиторное влияние опи-, одных пептидов на функцию окситоциновых нейронбв (Pumford K.M. et al., 1993). Блокада опиодных рецепторов налоксоном и налтрексоном усиливала выброс окситоцина при электрической стимуляции (Bicknell R.J. et al., 1985). Различные агонисты опиодных рецепторов, включая такие эндогенные опиодные пептиды, как мет-энкефалин и Рэндорфин, демонстрируют подавление выброса окситоцина при состояниях, когда секреция окситоцина должна быть усилена - при лактации и дегидратации. Применение антагониста опиодных рецепторов налоксона потенцирует выброс окситоцина при состояниях дегидратации, геморрагии (I.J. Summy-Long et al.,1987), интраперитонеальной инъекции гипертонического раствора, иммобилизационном стрессе (Carter D.A. et al., 1986), хроническом пероральном введении солевого раствора, инсулинзависимой гипогликемии у мужчин и у крыс во время таких физиологических состояний, как беременность, роды и лактация. Кроме опиоидных пептидов на синтез и секрецию окситоцина влияют и другие биоактивные вещества, вырабатывающиеся в магноцеллюлярных нейронах супраоптического и паравентрикулярного ядер. Предполагается участие нейропептида Y в реализации выброса вазопрессина и окситоцина в ответ на изменение осмолярности плазмы. Во время лактации у крыс введение кортикотропин-релизинг фактора-41 вызывает повышение плазменных уровней окситоцина (Lightman, S.L., Young W. Ш, 1987). Холецистокинин, синтезирующийся многими паравентрикулярными ядрами и некоторыми супраоптическими ядрами, повышает уровень базальной секреции окситоцина. 2.4.2 Роль окситоцина в терморегуляции Известным эффектом окситоцина является его способность индуцировать гипертермию; Инъекция небольших количеств гормона непосредственно в область переднего гипоталамуса, преоптическую область или желудочки мозга вызывала подьем температуры (Richard P. et al., 1991). Окситоцин также способен снижать температуру кожи, вызывая сосудистый спазм, тем самым принимая участие в энергосберегающей системе организма (Agren G. et al., 1995). Напротив, циркулирующий окситоцин может также вызывать дилатацию кожных сосудов, особенно заметно в областях, окружающих молочные железы лактирующих крыс, возможно для передачи тепла от матери к новорожденным (Uvnas-Moberg К., Ericsson M., 1996). 2.4.3 Иммуномодулирующее влияние окситоцина Сравнительно недавно открыто новое свойство окситоцина - его иммуномодулирующее влияние на организм. Окситоцин значительно сокращает сроки излечения септических процессов, усиливает эпителизацию и заживление ран, потенцирует действие антибиотических средств (Бухарин О.В и соавт., 1982; Курлаев П.П., 1983; Михайлова Е. А. и соавт., 1987). 2.4.4 Влияние окситоцина на поведенческие реакции животных. В эксперименте с внутримозговым введением ОТ кастрированным мышам было выяснено, что этот гормон участвует в формировании моногамного поведения у самок (Insel, Lihahan, 1995). Известно, что состояние испуга, вызванное воздействием на крыс электрошока, сопровождалось повышением концентрации ОТ (Zou Chang-Ian, 1998). ОТ увеличивает скорость социального распознавания. Молодые крысы при вторичном контакте со старыми крысами начинают искать "знакомых" им по первой встрече. Внутрижелудочковое введение ОТ сокращало продолжительность упомянутого поиска (Van Wimersma Eredanus Tj. B., Magret C., 1996). Внутривенное введение ОТ человеку может опосредованно влиять на восприятие сенсорной информации через изменение настроение и уровня бодрствования (Pietrowsky R., 1991) 2.4.5 Влияние окситоцина на стресс. В последние годы было выявлено, что ОТ облагает стресс лимитирующими свойствами у крыс. (PeterssonM, 1998, JorgensenH, 2002). Установлено, что ОТ, при введении крысам после действия на них стресса, снимал послестрессовый синдром. Он способствовал уменьшению уровня кор-тикостерона, адренокортикотропного гормона, температуры тела, при этом также не наблюдалось снижение массы тела (Agren G, 2002). Подобные опыты были проведены и на лошадях. Внутривенное введение ОТ так же приводила к быстрой реабилитации животного после действия стрессовых факторов (Alexander SL, 2002). Установлено, что центральное введение этого нейропептида способствуют снижению температуры, ЧСС у крыс после воздействия болевого стресса (Groger, 2003). Есть сведения о том, что стресс-лимитирующей эффект ОТ реализуется через взаимодействия ОТ с серотонинергической системой (Jorgensen H, 2002). 2.4.6 Влияние окстиоцина на болевую чувствительность. Влияние ОТ на болевую чувствительность изучено недостаточно и литературные данные носят противоречивый характер. Так некоторые исследователи считают, что антиноцицептивный эффект ОТ связан с запуском антиноцицептивной реакции через медиаторные структуры (например, серотонинергические), не связанные с опиоидной системой. Так антиноцицептивный эффект может быть полностью изменён антогонистом ОТ, но не антогонистом опиоидов (налоксоном). Они полагают, что окситоцинергическая система является модулятором ноцицепции (Lundeberg T. et al.,1994). Другие считают, что антиноцицептивное действие ОТ опосредуется опиоидным механизмом (Petersson, Alster, 1996). Часть учёных полагает, что ОТ не оказывает анальгетического эффекта, а снижение болевой чувствительности, проявляемое в увеличении латентного периода в тесте hot-plate связано с седативным и сосудосуживающим эффектами данного пептида. Кроме того они считают, так как антогонист ОТ значительно не изменял латентный период в тесте hot-plate, маловероятным то, что эндогенный ОТ проявляет тонизирующий эффект на формирование болевого порога у крыс (Xu XJ., Wiesenfeid-Halin Z.,1994). Имеются также данные о том, что ОТ может вызывать как антиноцицептивный, так и ноцицептивный эффекты, которые зависят от модели введения и используемой дозировки (Agren G. et al. 1997). Имеются данные о влиянии сверхмалых (наномолярных) доз ОТ, используемого как одоген, на перцепцию боли у здоровых молодых мужчин. Так 30-40 секундное вдыхание через нос паров стандартного раствора окситоцина, создающие ощущение запаха, снижало ощущение боли на 56,6%. Меньшую гипоалгезию вызывало вдыхание неосознаваемых концентраций паров ОТ. Снижение болевой чувствительности под влиянием микродоз паров ОТ обусловлено скорее всего таким перераспределением активности структур ЦНС, которое сопровождается снижением тонуса симпатической и повышением парасимпатической нервной системы в результате возбуждения обонятельных рецепторов (Урываев Ю.В., Петров Г.А., 1996). 2.4.7 Гемодинамические эффекты окситоцина. Давно известно, что окситоцин значительно изменяет показатели системной гемодинамики, но до сих пор не существует единого мнения как именно реализует свои эффекты этот гормон. Из акушерско-гинекологической практики известно, что окситоцин способен вызывать снижение артериального давления и этот эффект окситоцина носит транзи-торный характер (Hendricks С, Brenner W., 1970; Liou S.C. et al.,1998). Однако в экспериментах на животных и в клинических наблюдениях не всегда отмечалось подобное действие гормона. М. Tumbarello et al.(1989) наблюдали несколько случаев стойкого подъема артериального давления у рожениц под влиянием вводимого окситоцина. Имеются сообщения о нескольких случаях смерти рожениц вследствие резкого повышения артериального давления при использовании окситоцина Снижение уровня артериального давления как систолического, так и диастоли-ческого у самцов крыс со спонтанной гипертензией наблюдали М. Petersson et al. (1997). При этом изменение частоты сердечных сокращений не наблюдалось, а падение артериального давления было преходящим. Гипотензивный эффект окситоцина не был отмечен у самок этой линии. Транзиторный характер артериальной гипотензии, вызываемой введением окситоцина известен. При этом временной интервал действия гормона и глубина гипотензивной реакции варьируют в зависимости от пола исследуемых животных, исходного гормонального статуса и реактивности сердечно-сосудистой системы, а также от метода применения и дозировки препарата (Hendricks С, Brenner W., 1970; Peters-son М., Lundeberg Т., UvnasMoberg К., 1997; Liou S.C. et al.1996). В исследовании М. Petersson et al. (1999) было показано, что одномоментное введение окситоцина самкам крыс может вызывать кратковременное повышение артериального давления. Длительное введение гормона оказывает гипотензивное действие, при этом снижается частота сердечных сокращений. Кроме того, степень снижения артериального давления зависит от исходного гормонального фона, так как у овариоэктомированных крыс гипотензивная реакция была выражена сильнее, нежели у овулирующих интактных животных. Как известно, артериальное давление является интегральным показателем и его уровень определяется сосудистым сопротивлением, оказываемым кровотоку, а также реологическими свойствами крови и сердечной деятельностью. Из литературных источников известно, что в основном влияние окситоцина на уровень среднего артериального давления реализуется через изменение сосудистого тонуса. Исследователи предполагают, что падение или увеличение сосудистого тонуса при введении окситоцина может быть связано с адренергической стимуляцией. Предположительно более высокие концентрации окситоцина в большей степени способствуют стимуляции а-адренорецепторов, вызывая вазоконстрикцию, а низкяе инициируют вазорелаксацию. дозы посредством Р-адренорецепторов ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Объект исследования Объектом для проведения исследования была выбрана белая лабораторная крыса (Rattus norvegicus), как наиболее распространенная модель для экспериментальных исследлваний. Исследования проводились на белых беспородных крысах - самцах массой 180 - 200г. Животные в достатке обеспечивались пищей и водой и содержались в стандартных условиях вивария, с естественным световым режимом, при температуре 18 - 200С. 2. Тест – "tail flick" Для определения болевого порога применяли тест - tail-flick. (D Amour and Smith, 1941; Никольская и Кандашевская, 2003; Осмакова,2003). Одновременно в опыте находилось 10 - 15 животных. Болевое раздражение наносили погружением хвоста в горячую воду температурой 56 0С на глубину 6 см. В данном тесте показателем болевой чувствительности животных служило изменение латентного периода (ЛП) реакции избавления от болевого раздражителя - ЛП одёргивания хвоста Реакцию считали выполненной в том случае, когда животное полностью выдёргивало хвост из сосуда с горячей водой. ЛП одёргивания хвоста - это временной показатель, измеряемый в секундах с помощью секундомера. Животных перед началом эксперимента предварительно адаптировали к условиям эксперимента, помещая их в индивидуальные иммобилизационные клетки, в которых онисохраняли естественную для них позу, каждый день на 3часа в течении двух недель. Так же непосредственно в день проведения эксперимента за 30 минут до его начала животных вновь помещали в индивидуальные иммобилизационные клетки, с целью их адаптации. Затем до введения препаратов определяли исходный уровень болевой чувствительности (ЛП0), которое вычисляли как среднее из 4-х измерений ЛП реакции одёргивания хвоста, зафиксированных с интервалом в 10 минут. Введение препарата осуществляли, не вынимая животных из индивидуальных иммобилизационных клетк. Далее в течение 1,5 - 2 часов после инъекции с интервалами в 10 минут вновь фиксировали ЛП реакции избавления от болевого раздражителя. При обработке полученных результатов использовали показатель изменение ЛП реакции одёргивания хвоста, свидетельствующие об изменении болевой чувствительности животных. Это показатель оценивали по формуле: ЛП=ЛПi - ЛП0 (ЛПi - латентный период реакции одёргивания хвоста в каждый момент измерения. ЛП0 - среднее фоновое значение латентного периода одёргивания хвоста до инъекции). Оценку достоверности различий осуществляли по критерию Ван-дерВардена. 3. Фармакологическое воэдействие Исследования проводились в три этапа. На первом этапе животных делили на две группы: контрольную и опытную. Опытной группе животных внутрибрюшинно вводили окситоцин в дозе 0,001мг/кг, а контрольной – воду для инъекций. Измерения проводили как в период 5-ти дневного введения, так и в течение 10-ти дней по окончанию фармакологического воздействия. На втором этапе использовали однократное введение окситоцина в дозах 0,05 мг/кг. Животных также делили на две группы: контрольную и опытную. Опытной группе животных внутрибрюшинно вводили окситоцин в дозе 0,05 мг/кг, а контрольной – воду для инъекций. На третьем этапе использовалось 4 группы животных: первой группе вводились вода для инъекций и окситоцин, второй – налоксон и окситоцин, третей – налоксон и вода для инъекций, четвёртой – контрольной двукратно вводилась вода для инъекций. Налоксон и вода вводились за 15 минут до инъекции пептида. Окситоцин вводили в дозе 0,05 мг/кг, налоксон в дозе 1 мг/кг (см. схему экспиремента). Препараты вводили после определения исходного времени ЛП реакции одёргивания хвоста. Схема эксперимента Белые беспородные крысы I Этап Контрол ьная группа N=10 (пятидне вное введени е воды для инъекци й) Опытная группа N=10 (пятидне вное введение окситоци на в дозе 0,001 мг/ кг) II Этап Контрол ьная группа N=15 (введени е воды для инъекци й) Опытная группа N=15 (введени е окситоци на в дозе 0,05 мг/ кг) III Этап Контрол ьная группа №1 N=11 (двукрат ное введени е воды для инъекци й) Опытная группа №1 N=11 (введени е воды для инъекций и окситоци на в дозе 0,05 мг/ кг) Тест “Tail-flick” (реакция отдергивания хвоста) Опытная группа №2 N=11 (введени е налоксо на в дозе 1 мг/кг и окситоци на в дозе 0,05 мг/ кг) Контрол ьная группа №2 N=11 (введени е налоксо на в дозе 1 мг/кг и воды для инъекци й 4. Характеристика используемых фармокологических препаратов Окситоцин. Производитель "Гедеон Рихтер" Германия. Ампулы с прозрачной безцветной житкостью с концентрацией раствора 5 МЕ/мл. Растворителем для сухого вещества является вода для инъекций. Применяют для вызывания и стимулирования родовой деятельности. Препарат наиболее эффективен при преждевременном отхождении околоплодных вод. Его назначают также при слабости родовой деятельности, связанной с атонией матки, и гипотонических маточных кровотечениях. Может применяться для искусственного вызывания родов (при осложнениях беременности). Форма выпуска: в ампулах по 1 мл, содержащих по 5 МЕ окситоцина. Налоксон Производитель Варшавский фармацевтический завод "Польфа" Польша. Ампулы с прозрачной безцветной житкостью с концентрацией раствора 0,4 мг/мл. Растворителем для сухого вещества является физиологический раствор. Применяют налоксон главным образом при острой интоксикации наркотическими аналгетиками. Он эффективен также при алкогольной коме и различных видах шока, что связано, по-видимому, с активацией при шоке и некоторых формах стресса эндогенной опиодной системы, а также со способностью налоксона уменьшать гипотензию. Форма выпуска: в ампулах по 1 мл, содержащих 0,4 мг налоксона гидро-хлорида. ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСЛЕДОВАНИЯ 1. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс при 5-ти дневном введении препарата в дозе 0,001 мг/кг В ходе проведённого исследования на первом этапе эксперимента было обнаружено изменение болевой чувствительности под действием окситоцина. В результате 5-ти дневного системного введения окситоцина в дозе 0,001 мг/кг выявлен двухфазный характер ответной реакции белых беспородных крыс. Впервые два дня наблюдалось повышение болевой чувствительности, характеризующиеся снижением латентного периода (ЛП) реакции одёргивания хвоста. Так в первый день наблюдается снижение эффекта на 1,2 сек по сравнению с контролем на 40-й минуте. На 2-й день достоверные отличия наблюдались уже на 20-й минуте после введения и были более выражены (рис.№1) .Далее полученные данные указывают на то, что начиная с 3-го дня инъекций окситоцина меняется ответная реакция организма белых крыс на болевой стимул. На 4-й день инъекций наблюдается достоверное увеличение ЛП реакции одёргивания хвоста на 30й минуте после введения пептида на 1,5; а на 5-й день с 20 по 50 минуты и максимуме составило 2 секунды (рис. №1). 2,5 Изменение времени (сек) 2 1,5 1 0,5 0 10 20 30 40 50 60 10 20 30 40 50 60 10 20 30 40 50 60 10 20 30 40 50 60 10 20 30 40 50 60 -0,5 -1 Время (мин) -1,5 -2 Рисунок 1. Динамика изменения латентного периода в тесте "tail-flick" при хроническом введении окситоцина в дозе 0,001мг/кг (*- различия достоверны при р<0,05) 2. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс после 5-ти дневного введении препарата в дозе 0,001 мг/кг Исследование динамики болевой чувствительности в последующий период, т.е. на 6-й день после 1-й инъекции и на 1-й после прекращения фармакологического воздействия показал, что эффект сохранился и после окончания инъецирования крыс окситоцинjv в течении одного дня.(рис №2), в этот день наблюдается достоверное увеличение латентного периода реакции отдергивания хвоста на 30 и 60 минуте и в максимуме составило 3,7 секунды на 30 минуте. В последующие дни достоверных изменений болевой чувствительности не обнаружено. 3. Влияние окситоцина на болевую чувствительность белых крыс при однократном введении препарата в дозе 0,05 мг/кг В следующей серии экспериментов было исследовано 50-ти кратное увеличение дозы при однократном введении. Как видно из рисунка №3 окситоцинв дозе 0,05 мг/кг приводит к достоверному пролонгированному анальгетическому эффекту. Достоверное увеличение латентного периода реакции отдергивания хвоста по сравнении с контролем при этом наблюдается с 20 по 90 мин эксперимента и в максимуме ЛП реакции одёргивания хвоста увеличился на 5,2 сек по сравнению с контролем на 20 минуте (рис. №3). Анальгетический эффект ОТ при однократном введении препарата в дозе 0,05 мг/кг на 60% выше чем при хроническом введении ОТ в дозе 0,001 мг/кг 4 3,5 Изменение времени (сек) 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 10 20 30 40 50 60 -0,5 -1 Время (мин) Окситоцин Вода для инъекций Рисунок 2. Изменение латентного периода реакции в тесте tail-flick на 5 день хронического введения окситоцина в дозе 0,001 мг/кг (* - различия достоверны при р < 0,05). 6 Изменение времени (сек) 5 4 3 2 1 0 10 20 30 40 50 60 70 80 -1 90 100 110 120 Время (мин) Окситоцин Вода для инъекций Рисунок 3. Изменение латентного периода реакции в тесте tail-flick под влиянием однократного введения окситоцина в дозе 0,05 мг/кг (*- различия достоверны при р<0,05) 6,00 5,00 Изменение времени (сек) 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 -1,00 Время (мин) -2,00 -3,00 Налоксон + вода дляинъекций Окситоцин + вода для инъекций Налоксон + окситоцин Вода для инъекций + водадляинъекций Рисунок 4. Изменение латентного периода реакции в тесте tail-flick (*- различия достоверны при р<0,05) 4. Определение возможного механизма анальгетического действия окситоцина В ходе третьего этапа эксперимента выявлено увеличение латентного периода реакции отдёргивания хвоста на 25 – 39 % с 20 по 90 минуту под воздействием инъекций окситоцина в дозе 0,05 мг/кг Данный эффект полностью блокировался предварительной инъекцией налоксона. О чем свидетельствует отсутствие достоверных отличий измеряемого показателя по отношению к контролю у второй группы животных, которым осуществляли совместные инъекции налоксона и окситоцина (рис. 4.). Среди групп животных, которым вводили налоксон и окситоцин, налоксон и воду для инъекций, двукратно воду для инъекций достверных отличий не обнаружено. Из этого следует, что налоксон блокирует анальгетический эффект окситоцина. ГЛАВА III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Возможно, что усиление эффекта при 5-ти дневном введении (I этап эксперимента) в первые 2 дня введения связанно с повышением чувствительности рецепторных структур, с которыми связывается ОТ. Известно, что характер влияния на болевую чувствительность может зависеть от способа введения и дозировки вводимого пептида (Agren G. et al. 1997). Таким образом можно предположить, что используемая доза ОТ 0,001мг/кг вызывает ноцицептивный эффект. Дальнейшие введение ОТ вызывает аккомуляцию и активацию окситоциновых структур. Подобный антиноцицептивный эффект отмечен и в литературе при однократном введении, однако доза вводимого вещества составляла 0,1 и 1,0 мг/кг(Xu XJ., Wiesenfeid-Halin Z.,1994; Agren G. et al. 1997). Можно предположить, что изменение эффекта на третий и последующие дни связано либо с увеличением количества активных рецепторов, чувствительных к ОТ, либо развитием сенсибилизации в уже имеющихся окситоциновых структурах. Не предоставляется возможным связать наблюдаемый эффект с повышением концентрации ОТ в организме, т.к. период его полураспада составляет 30 - 60 мин(Машковский М.Д.,2004). Сохранение анальгетического эффекта в течение суток после прекращения инъекций можно объяснить возможной опосредованной активацией окситоцином эндогенной опиоидной системы организма, которая обладает способностью внутренней регуляции болевой чувствительности (Petersson, Alster, 1996). Возможно усиление анальгетического эффекта окситоцина на II этапе эксперимента зависит от увеличения дозы препарата, что может указывать на его дозозависимость, дополнительных но потлвержление исследований. Длительность данного факта требует наблюдаемого эффекта, возможно, связана с запуском сложного каскада реакций, определяющих уровень активности как медиаторных (например серотонинергических) (Lundeberg T. et al.,1994), так и опиоидных структур(Petersson, Alster, 1996). В ходе третьего этапа исследования выявлено увеличение латентного периода реакции отдёргивания хвоста на 25 – 39 % с 20 по 90 минуту под воздействием инъекций окситоцина. Данный эффект полностью блокировался предварительной инъекцией налоксона. О чем свидетельствует отсутствие достоверных отличий измеряемого показателя по отношению к контролю у второй группы животных, которым осуществляли совместные инъекции налоксона и окситоцина. Известно, что налоксон используется при реанимации больных в случае передозировки наркотических средств, как антагонист опиатных рецепторов. Таким образом, можно предположить, что обнаруженный анальгетический эффект окситоцина опосредуется через опиатные рецепторы. Этот факт подтверждается результатами исследований Galina Z. и Kastin A.(1988) по данным которых фрагмент окситоцина выступает компонентом эндогенной антиопиоидной системы. Имеются также литературные данные о том, что окситоцин и опиаты вступают в конкурентные взаимоотношения друг с другом (Ибрагимов Р.Ш. 1990, You ea 2000), так опиоидные пептиды оказывают ингибиторное влияние на функцию окситоциновых нейронов (Басиева О.З. 1999) ВЫВОДЫ. 1. Окситоцин при внутрибрюшинном введении вызывает анальгетический эффект у белых беспородных крыс. 2. Анальгетический эффект окситоцина носит пролонгированный характер, что особенно выражено в период после многократного введения пептида. 3. Анальгетическое действие окситоцина при однократном введении продолжается в течении 1,5 часов. 4. Возможно анальгетическое действие окситоцина опосредуется через опиоидный механизм антиноцицептивной системы. БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 1. Авакян A.M. Симпато-адреналовая система // Авакян A.M. Методы исследования высвобождения, рецепции и захвата катехоламинов. - Л.: Наука, -1977. -Глава 6. -С. 181 2. Ашмарин И.П. Нейропептиды в синаптической передаче .-ВИНИТИ: Итоги науки и техники, серия Физиология человека и животных. Т 46, Москва, 1988. С. 4-7, 86-87. 3. Басиева О.З. Почечные и гемодинамические эффекты окситоцина и кальцийрегулирующих гормонов у крыс со спонтанной гипертензией и наследственным не сахарным диабетом. Авт. Реф. к.м.н. Владикавказ 1999. 4. Вальдман А.В., Игнатов Ю.Д. Центральные механизмы боли. //Л., Наука. 1976. 5. Галоян А.А. Некоторые проблемы современной биохимии гипоталамической регуляции. - Ереван. - Кудесник, 1965. - 204 с. 6. Глазова М.В., Красновская И.А., Черниговская А.И., Поленов А.Л. Влияние тиреоидных гормонов на нейросекреторные клетки СОЯ и ПВЯ гипоталамуса крыс в условиях in vitro .//Бюлл. эксп. биол. и мед. 1997. Т 123. №5. С.528-530. 7. Гомазков О.А. Нейропсптиды и ростовые факторы мозга. - М.: Просвещение, 2002. - 304 с. 8. Гурин В.Н. Механизмы лихорадки. /Минск: "Наука и техника", 1993.С.35-36,50-76. 9. Дорсон Р., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. - М: "Мир", 1991. -430 с. 10.Дорохова Л.Н. Влияние обзидана на мозговой кровоток в условиях острой церебральной ишемии // Фармакология и токсикология. - 1982. Т.45, №1. -С. 39-42. 11.Екимова И.В. Изменение метаболической активности нейронов ядер переднего гипоталамуса крыс при гипертермии, лихорадке и гипотермии // Рос.физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2002. - Т 88. №1. - С. 63-70. 12.Ерошенко Т.М., Лукьянова Л.Л. Физиологические свойства регуляторных пептидов // Физиология человека и животных. - 1989. № 51. - С. 1-18. 13.Ерошенко Т.М., Титов С.А., Лукьянова Л.Л. Каскадные эффекты регуляторных пептидов // Физиология человека и животных. - 1991. № 46 - С. 21-28. 14.Ибрагимов Р.Ш. Гипоталомо-гипофизарные нейропептиды (ОТ, ВП) и механизмы опиатной зависимости. Авт. реф. д.б.н. Баку 1990. 15.Иванов К.П. Основы энергетики организма. Т 1, Общая энергетика: теплообмен и терморегуляция. - Л.: - Наука, 1990. - С. 168. 16.Итоги науки и техники. Физиология человека и животных. // под ред. Аш-марин И.П. - М., 1988- Т 46: Нейропептиды в синаптической передаче. - С. 86-87. 17.Калюжный Л.В. Физиологические механизмы регуляции болевой чувствительности. /М. Медицина. 1984. 18.Кауров О.А., Мартынов В.Ф. Аминокислоты и пептиды. Зависимость биологической активности аналогов окситоцина от их строения. Вестник ЛГУ, 1970. №16. С. 137-144. 19.Климов П.К. Физиологическое значение пептидов мозга для деятельности пищеварительной системы. /Москва: "Наука",1986. С.114. 20.Комиссаров И.В. Лекарственная регуляция адренергических процессов. -Киев.: - Здоровье, 1976. - 123 с. 21.Константинова М.С. Эффекты адренолина и ацетилхолина в гипоталамо-гипофизарной нейросекреции у крыс // Z. Zellforsch. - 1967. - Bol. 83. -С. 549-567. 22.Косицкий Г.И. (под ред.) Физиология человека. /М. Медицина. 1985. С471-472. 23.Крендаль Ф.П. О возможности изучения поведенческих реакций крыс при непосредственном введении биологически активных веществ в желудочки мозга// Фармакология и токсикология. - 1982. - Т. 45.№ 5. С. 194-196. 24.Крендаль Ф.П., Кудрин А.Н. О некоторых особенностях модельного психоза [у крыс при интрацеребральном введении идиэтиламида лизергиновой кислоты // Фармакология и токсикология. - 1982. Т.45.№ 5. - С. 16-19. 25.Кубынин А.Н., Катинас Г.С. Анализ биологических ритмов болевой чувствительности мышей при термической стимуляции. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1997. Т.83 №7 С.50-56. 26.Кудрявцева М.Ф. Изменение болевой чувствительности у крыс при невротизируещем воздействии. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1998. Т.84 №8 С 821-823. 27.Кукушкин М.Л., Решетник В.К. Механизмы возникновения острой боли и хронических болевых синдромов. //Materia med. 1997. №3 С. 521. 28.Ланге С.З. Современные концепции адренергической передачи - М.: Медицина, 1982. - 258с. 29.Леви Дж. Взаимодействие гормонов с рецепторами. - М.: - Мир, 1991. 281с. 30.Лелекова Т.В. Участие пептидов в регуляции сократительной деятельности лимфатических сосудов // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 200 Г. Т.87.№11.-С. 1502-1510. 31.Лифшинц В.М. Сидельников Н.И. Биохимический анализ в клинике. М.: -Триадох, 2002.-215 с. 32.Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Голдуэлл В. Биохимия человека. М.:-Мир, 1993. -233 с. 33.Манухин В.Н. Адренорецепторы эффекторной клетки - локальные регуляторы интенсивности адренергической реакции // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. - 1984. - Т.70. №5. - С. 609 - 616. 34.Машковский М.Д. Лекарственные средства в 2-х томах. /М. Медицина 2004. Т.1 С. 539. 35.0сипенкО О.Н. Влияние окситоцина на идентифицированные нейроны мозга виноградной улитки Helix pomatial.// Журнал высшей нервной деятельности. -1992.-№6.-С. 1287-1292. 36.Осипенко О.Н. Транспорт ионов и механизмы его регуляции: // Тез. докл. междунар симп. - Тбилиси. - 1989. - С. 58. 37.Петров О.В., Лихванцев В.В., Субботин В.В., Журавель С.В., Виноградова В.Л., Ситников А.В. Информационная концепция боли. //Международ. мед. жур. 1998. №9-10 С.795-799, 801-803. 38.Рыбальченко В.К., Островская Г.В., Кучеренко Н.Е. Взаимодействие окситоцина с липидами искусственных и биологических мембран. .//Бюлл. эксп. биол. и мед. 1989. №12. С.681-683. 39.Смолин Л.Н. Центральные механизмы боли (обзор). //Пат. Физиол.,1982. №1 С 76-82. 40.Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы.- М.:-Мир, 1989.-С. 166-168. 41.Тринус Ф.П. Фармотерапевтический справочник. - Киев - 1972. -С. 6673. 42.Урываев Ю.В., Петров Г.А. Снижение болевой чувствительности у человека под влиянием сверхмалых доз окситоцина. // Бюлл. эксп. биол. и мед 1997. Т.122 №11 С,487-489. 43.Чипенс Г.И., Папсуевич О.С. Применение лигатур в разработке модели гормон-рецепторного взаимодействия / Химия и биология пептидов. Рига. 1971. С.5-22. 44.Шмидт Р., Тевс Г. (под ред.). Физиология человека в 3-х томах. /Т.1 С 222-234 //М. Мир 1996. 45.Щербакова В.И., Любимова З.В. Роль окситоцина в регуляции пищевого поведения детенышей млекопитающих в лакотрофный период. //Бюлл. эксп. биол. и мед. 1994. №4. С.425-429. 46.Щербакова В.И., Любимова З.В., Никитина А.А., Васильев С.А. Влияние экзогенного окситоцина на моторную функцию тонкого кишечника млекопитающих в лактотрофный период. //Бюлл. эксп. биол. и мед. 1994. №9. С.230-233. 47.Якушкина Н.И., Богданов А.М. Роль кортикостероидов в обеспечении анальгетического эффекта, вызванного стимуляцией центрального серого вещества среднего мозга у крыс. // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова 1998 Т.84 №7. С 642-650. 48.Яниг В. Вегетативная нервная система - М.: - Мир, 1985. - Т. 1. - 420 с. 49.Янский Л., Выбирал С, Романовский А.А., Гурин В.Н. Механизм влияния нейропептидов на терморегуляцию. — Минск.- Навука i тэхнжа, 1990. -125с. 50.Acher R. Chemistry of the neurohypophsiel hormones an example of molecular evolution // In: Handb. Phisiol. Sectr "Endocrinology. Washington. - 1974. -Vol. 4.-P. 119- 130. 51.Ahlquist R. A study of the adrenotropic receptors // Amer. J. Physiol. - 1948. -Vol. 153.-P.586. 52.Agen G, Lundeberg T. Energy conservation in stressed rats exposed to an oxyto-cin-injected cage mate // Neuroreport. - 2002. - № 13. - P. 1453-7. 53.Agren G., Uvnas-Moberg K., Lundeberg T. Olfaktory cues from an oxytocin-injected male rat can induce anti-nociception in its cagemates. //Neuroreport 1997 Sep 29; 8(14) P. 3073-3076. 54.Alexander SL, Irvine CH. The effect of endotoxin administration on the secretory dynamics of oxytocin in follicular phase mares: relationship to stress axis hormones // J Neuroendocrinol. - 2002. - №14. - P. 540-8. 55.Arletti R. Oxytocin acts as an antidepressant in two animal model of depression II "Life Sci."- 1987. -Vol. 14,№12-P. 1725-1730. 56.Barer R., Lederis K.. Ultrastructure of the rabbit neurohypophysis with special reference to the release of hormones.// Z. Zellfousch. - 1966. - Bd. 75. - s. 201-239. 57.Bergmann W., Scharrer E. The site of origin of the hormones of the posterior pituitary.// Am.; - Sci. - 1951. - v. 39. - p.255-259. 58.Blatteis С. М. Effect of propranolol on endotoxin-induced pyrogenesis in newborn and adult guinea pigs // Journal of Applied Physiology. - 1976. Vol 40. -- P. 35-39. 59.Bolton ТВ, Lang RJ, Ottesen B. Mechanism of action of vasoactive intestinal polypeptide on myometrial smooth muscle of rabbit and guineapig // J Physiol. -1981.-Ж318.-Р. 41-55. 60.Brown CH, Murphy NP, Munro G, Ludwig M, Bull PM, Leng G, Russell JA. Interruption of central noradrenergic pathways and morphine withdrawal excitation of oxytocin neurones in the rat//J Physiol. - 1998. -№15. -P. 831 61.Bruckmaier R, Blum J. B-mode ultrasonography of mammary glands of cows, goats and sheep during alpha-and beta-adrenergic agonist and oxytocin administration // J Dairy Res. - 1992. - №59 (2). - P. 151-9. 62.Bruckmaier R, Mayer H, Schams D. Effects of alpha- and beta-adrenergic agonists on intramammary pressure and milk flow in dairy cows. // J Dairy Res. -1991.-№58(4).-P. 411-9. 63.Busija D., Khreis I. Prostanoids promote pial arteriolar dilation and masc constrictions to oxytocin in piglets // Am. J. Physiol. - 1993. - Vol. 264 (4). P.1023-1027. 64.Colorado M.Isabel, Ormazabal M.Jesus, Goicoechea Carlos, Lopes Fernando, Alfaro M.Jose, Martin M.Isabel . Involvement of central serotonergic pathways in analgesia elicited by salmon calcitonin in the mause. //Eur.J. Pharmacol 1994-252 №3 p.291-297 65.Constantine J. W., Gunnel D., Weeks R. A. Alpha 1 and alpha 2 vascular adre-noreceptor in the dog // Eur. J. Pharmacol. - 1980. - Vol. 66. - P. 281286. 66.Day ТА, Randle JC, Renaud LP. Opposing alpha- and beta-adrenergic mechanisms mediate dose-dependent actions of noradrenaline on supraoptic vasopressin neurones in vivo//Brain Res. - 1985.-№358 (1).-P. 171-9. 67.Dennedy MC, Friel AM, Gardeil F, Morrison JJ. Beta-3 versus beta-2 adrenergic agonists and preterm labour: in vitro uterine relaxation effects // В JOG. - 2001.-№108.-P. 605-9. 68.De Robertis E. Histophisiology of synapses and neurosecretion. - Oxford. _1964. -179p. 69.Diaz-Cabiale Z, Narvaez JA, Garrido R, Petersson M, Uvnas-Moberg K, Fuxe K. Antagonistic oxytocin/alpha2-adrenoreceptor interactions in the nucleus tractus-solitarii: relevance for central cardiovascular control.J // Neuroendocrinol. -2000.-№12.-P. 1167-73. 70.Dreifuss J.J., Nordmann J.J., Akert K., Saudri C, Moor H. Exo-endocitosis in the neurohypophysis as revealed by freeze - fracturing // Neurosecretion the final neiroendocrine pathway. — 1974. - №21 - P. 31-37. 71.Ehrenpreis S. Mechnism of analgetic drug action: evidence for involvment of prostaglandins. //Acup. a. Electro-therap. Res.,1978, V. 3, P. 203-218. 72.Exon J.H, Oxytocin // Trends pharmacol. Sci. - 1982. - Vol. 3. - P.I11-115. 73.Filho Osvaldo Vilela .Thalamic ventrobasal stimulation for pain relief.Probale mechanisms pathwais and neurotransmitters. //Arg neuropsiquiat 1994-52 №4 P 578-584 74.Fuch A., Fuch F. Peripheral and central thermosensivite // Pflugers. Arch. 1998. -№1. -P. 52. 75.Gimpl G., Fahrenholz F. The Oxytocin Receptor System: Structure, Function, and Regulation // Physiol. Rev. - 2001. -Vol/81. №44 - P. 629628. 76.Groger A. Oxytocin reduces stress reaction in the rat // Brain Res Bull. 2003. -№68.-P. 304-11. 77.Heller H., Ginsburg M. Secretion, metabolism and fete of the posterior pituitary hormones //The pituitary gland. - Vol. 3. №41. - 1966. - P. 330373. 78.Hesse R. Tiergeographic auf der о Kolagischer Grundlage // Jenc. - 1924. №51.-P. 613. 79.Hollander E, Novotny S, Hanratty M, Yaffe R, DeCaria CM, Aronowitz BR, Mo-sovich S. Oxytocin infusion reduces repetitive behaviors in adults with autistic and Asperger's disorders II Neuropsychopharmacology. - 2003. №28 (I). -P. 193-8. 80.Inoki R., Hayashi T., Kudo T., Malsumoto K. Effects of aspirin and morphine on the release of bradykinin like substance into the subcutaneous perfusate of the rat paw. //Pain. 1978 V. 5 P. 53-63. 81.1nsel Т., Hulihan T. A gender - specific mechanism for pair bonding: Oxytocin and partner preference formation in monogamous voles // Behav. Neurosci. -1995.-№4.-P. 782-789. 82.Johnstone LE, Brown CH, Meeren HK, Vuijst CL, Brooks PJ, LengG, Russell JA. Local morphine withdrawal increases c-fos gene, Fos protein, and oxytocin geneexpression in hypothalamic magnocellular neurosecretory cells // J Neurosci. - 2000. - №20 (3). - P. 1272-80 83.. Jorgensen H, Knigge U, Kjaer A, Warberg J. Serotonergic involvement in stress-induced vasopressin and oxytocin secretion // Eur J Endocrinol. 2002. - №147. -P. 815-24. 84.Kasting N.W. Characteristics of body temperature, vasopressin, and oxytocin responses to endotoxin in the rat // Can J Physiol Pharmacol. 1986. - №12. - P. 1575-8. 85.Kennet A. Morphological and functional aspects of the hypothalamus in the rat // Eur.J. Morphol. - 1998. -Vol.30. №1. -P. 53-66 86.Kirischuk S, Tuschick S, Verkhratsky A, Kettenmann H. Calcium signalling in mouse Bergmann glial cells mediated by alpha 1-adrenoreceptors and HI hista-mine receptors // Eur J Neurosci. - 1996. - №8 (6). - P. 1198-208. 87.Korkh.ov VV, Sulukhiia RV, Makusheva VP, and Mats MN. The effect of oxytocin, prostenon and obzidan on uterine contractile activity in pregnant rats // Far-makol Toksikol. - 1990. - №53(1). - P. 50-1. 88.Kuz'min OB, Kriukova RA Role of prostaglandin, the kallikrein-kinin system and renal dopamine receptors in the mechanism of the natriuretic action of the beta-adrenoblockcr obzidan // Farmakol Toksikol. - 1983. №46 (5). - P. 56-9. LandgrafR, MalkinsonTJ. Veale WL, Lederis K, Pittman QJ. Vasopressin and oxytocin in rat brain in response to prostaglandin fever // Am J Physiol. - 1990. -№25 (11).-P. 1056-62. 89.Langer D. The role of oxytocin in the rat // Am J Physiol. - 2000. - №81 (11). - P. 2061-44. 90.Landgraf R., Malkinson T.J., Veale W.L., Lederis K., PittmanQ.J. Vasopressin and oxitocin in rat brain in response to proostoglandin fever. Am. J. Phisiol. 1990. V. 259(5) Pt 2. P. 1056-1062. 91.Livington A., Walks P.N. Perivascular regnion of the rat neural lobe - cell.// Tiss. res. - 1976. - v. 174. -p. 273-280. 92.Lopes P, Couture R. Localization of bradykinin like immunoreactivity in the rat spinal cord: effects of capsaicin, melittin, dorsal rhizotomy and peripheral axotomy. NEURUSCIENCE 1997;78(2):481-497. 93.Lundeberg T., Uvnas-Moberg K., Agren G. Anti-nociceptive effects of oxytocin in rats and mice. //Neurosci Lett. 1994 Mar 28; 170(1) P.153-157. 94.Malmberg Annika B., Yaksh Tony L. Voltya-sensitive calcium channels in spinal nociceptive processing;blockade of N-and P-type channels inhabits formalin-indused nociception. //J.Neurosci 1994-14 №8 p.4882-4890 95.Markov AG, Mielke H. The role of alpha- and beta-adrenoreceptors in the regulation of lactation in cows // Arch Exp Veterinarmed. - 1988. - №42 (5). -P. 660-8. 96.Mason G.A., Caldwell J.D., Stanley D.A. Interactive effects of intracis ternal oxi-tocin and other centrally active substances on colonic temperature of mice // Regul peptides. - 1986. - Vol. 14. №3. - P.253-260. 97.Masuyama Takashi, Shimizu Takao. Antinociceptive Involvement of substance p in the spinal cord mince;Dose effects of substance P on the behavior elicited by intrathecally administered NMDA //Brain Res-1997759 №2-p.241-246 98.McKitrick DJ. Expression of fos in the hypothalamus of rats exposed to wann and cold temperatures // Brain Res Bull. - 2000. - № 53. - P. 307-15. 99.Miller K, Lupica Cr. Neuropeptide FF inhibition of morphine effects in the rat hippocampus. BRAIN RESEARCH 1997;750(1-2):81-86. 100. Mineev VN, Shpetnaia EA, Shadrin EB. Membrane receptor disorders in bronchial asthma // Tcr Arkh. - 1999. - №71 (3). - P. 9-13. 101. Munglani R, Harrison S, Smith G, Bountra C, Birch P, Elliot P, Hunt S. Neuropeptide changes persist in spinal cord despite resolving hyperalgesia in a rat model of mononeuropathy. BRAIN RESEARCH 1996;743(1-2):102-108. 102. Norstrom A. The heterogeneity of neurohypophyseal pool of neurophysin.// neurosecretion - final neuroendocrine pathway. - Berlin. 1974. - p. 86 - 93. 103. Olins G.M.,Bremel R.D. Hyperthermia: a hyperadrenergic state.// Hyperyension. - 1984. - 15, №5 - Р.505-507. 104. Onodera Kenji, Sakurada Shinobu, Furuta Seiishi, Yonezawa Akihiko, Araic Kinne, Hayashi Takafumi, Katzuyama Sou, Sato Takumi, Mijasaki Shuichi, Kisara Kensuke. Differential involvement of opioid receptors in stress-induced antinociception caused by repeated exposure to forced walking stress in mice. //Pharmacology 2000-61, №2 p. 96100 105. Onaka T, Palmer JR, Yagi KA. Selective role of brainstem noradrenergic neu rons in oxytocin release from the neurohypophysis following noxious stimuli in the rat // Neurosci Res. - 1996. - №25 (5). - P. 67-75. 106. 0sada H, Fujii TK, Tsunoda I, Takagi K, Satoh K, Kanayama K, Endo T. Fim-brial capture of the ovum and tubal transport of the ovum in the rabbit,with emphasis on the effects of beta 2-adrenoreceptor stimulant andprostaglandin F2 alpha on the intraluminal pressures of the tubal ampullae // Assist Reprod Genet. -1999.-№16 (7).-P. 373-9. 107. Parker SL, Crowley WR. Central stimulation of oxytocin release in the lactating rat: interaction of neuropeptide Y with alpha-1-adrenergic mechanisms // Endocrinology. - 1993. - 132(2).-P. 658-66. 108. Parker SL, Crowley WR. Stimulation of oxytocin release in the lactating rat by a central interaction of alpha 1-adrenergic and alpha-amino3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid-sensitive excitatory amino acid mechanisms //Endocrinology. - 1993. - №133 (6). - P. 2855-60. 109. Persaud A., Coen C. Effect of bombesin on core temperature in rat //Can. J. Physiol. Pharmacol. - 1994. - Vol 5. №7. -P. 841-843. 110. Pescatello L. S., Mack G. W., Leach Jr С N. Effect of beta-adrenergic blockade on thermoregulation during exercise // Journal of Applied Physiology. - 1987. -' Vol 62. №29. - P. 1448-1452. 111. Petersson M., Alster P., Lundeberg T. Oxytocin increases nociceptive thresholds " in a long - term perspective in female and male rat // Neurosci. Lett. - 1996. -№2. - P. 87-90. 112. Petersson M, Hulting A, Andersson R, Uvnas-Moberg K. Long-term changes in gastrin, cholecystokinin and insulin in response tooxytocin treatment // Neuroen-docrinology. - 1999. - №69 (3). - P. 202-8. 113. Petersson M, Lundeberg T, Uvna's-Moberg K. Oxytocin enhances the effects of cionidine on blood pressure and locomotor activity in rats // J Auton Nerv Syst. — 1999.-№78.-P. 49-56. 114. Petersson M, Uvnas-Moberg K, Erhardt S, Engberg G. Oxytocin increases locus coeruleus alpha 2-adrenoreceptor responsiveness in rats // Neurosci Lett. - 1998. -№255.-P. 115-8. 115. Pietrowskiy R., Braun D. Vasopressin and oxytocin do not influence early sensory processing but affect mood and activation in man // Peptides. 1991. - № 12. -P. 1386-1391. 116. Poulin P., Pittman Q.J. Oxytocin pretreatment enhances arginine vasopressin - induced motor disturbances and arginine vasopressin - induced phosphoinositol hydrolysis in rat septum // J. Neuroendocrinol. - 1993. №1. - P. 33-39. 117. Poulin Pv, Pittman Q.J. Similar regulation of several vasopressin - mediated effects in rat brain // Physiol. and Pharmacol. - 1990. - №14. - P. 27. 118. Rady JJ, Campbell WB, Fujimoto JM. Antianalgesic action of nociceptin originating in the brain is mediated by spinal prostaglandin E-2 in mice. J PHARMACOL EXP THER 2001;296(1):7-14. 119. Rossi Grace C, Mathis John P., Pasternak gavril W. FQ141-157 Analgesic activiti of orphanin,FQ141-157 in mice. //Neuroreport-1998-9 №6-p.1165-1168 120. Sachs H. Biosynthesis and release of vasopressin // Am. J. Med. - 1967. - Vol. 42. №25.-P. 687-700. 121. Smith M . Expression of oxytocin the hypothalamus of rats // Biochem. J. - 1998. - Vol. 53. №74. -P. 325-401. 122. Solo.ff M.S. Properties of temperature neurons // Neurosci. Res. - 1996. - Vol. 74. №11. P. 131. 123. Song SL, Crowley WR, Grosvenor CE. Evidence for involvement of an adrenal catecholamine in the beta-adrenergic. inhibition of oxytocin release in lactating rats // Brain Res. - 1988. - №457 (2). - P. 303-9. 124. SweitzerRA, Ghneim GS, Gardner IA, Van VurenD, GonzalesBJ, Boyce WM Immobilization and physiological parameters associated with chemical restraint of wild pigs with Telazol and xylazine hydrochloride // J Wildl Dis. - 1997. -№33.-P. 198-205. 125. Tan Suon, Curtis-Prior P.B. Characterization of the beta- adrenoreceptor of the adipose cell of the rat//Int. J. Obesity. - 1983. - Vol. 7, №5. - P.409-414. 126. Thorn N.A. Mechanism of release of neurohypophyseal hormones.// Aspects neurpendocrinology. - Berlin. - 1970. - p. 140-152. 127. Uttenthal L.O., Hope D.B. The isolation of three neurophysins from porcine posterior pituitary lobes.// Biochem. J. - 1970. - v. 116. - p. 899909. 128. Valtin H., Stewart J., Socol H.W. Genetic control of the production of posterior pituitary principles.// Handb. Physiol. - sect. 7. - v. 4. Washington. - 1974. - p. 131-171. 129. Van W., Gredanus Tj. B. The role of limbic vasopressin and oxytocin in social recognition.// Brain. Re. - 1996. - 1-2. - p. 153-159. 130. Vellucci SV, ParrottRF Hyperthermia-associated changes in Fos protein in the median preoptic and other hypothalamic nuclei of the pig following intravenous administration of prostaglandin E2 // Brain Res. 1994. - №87. - P. 165-9 131. Vibrial S., Jansky L. Neuropeptides and body temperature control // Arh. Int. Physiok.-1991.-Vol.99, №5.-P 166-171 132. Vigneud V., Riessler C., Swan J.M., Roberts C.W. The synthesis of an octapeptide amide with the hormonal activity of oxytocin.// J. Am. Chem. Soc. - 1953. - v. 25. - p. 4879-4880. 133. Wang JZ, Lundederg T, Yu LC. Anti-nociceptive effect of neuropeptide Y in periaqueductal grey in rats with inflammation. BRAIN RES 2001;893(1-2):264-267. 134. Whishaw IQ, Flannigan KP, BarnsleyRH. Development of tonic immobility in the rabbit: relation to body temperature // Dev Psychobiol. 1979. - №12. -P. 595-605. 135. You ZD, Li JH, Song CY, Wang CH, Lu CL. Chronic morphine treatment inhibits oxytocin synthesis in rats. NEURUREPORT 2000;11(14):3113-3116. 136. Xin L, Geller EB, Liuchen LY, Chen CG, Adler MW. Substance P release in the rat periaqueductal gray and preoptic anterior hypothalamus after noxious cold stimulation: effect of selec-tive mu and kappa opioid agonists. J pharmacol exp ther 1997;282(2):1055-1063. 137. Xu XJ., Wiesenfeld-Hallin Z. Is systemically oxytocin an analgesic in rats? //Pain. 1994 May; 57(2) P. 193-196. 138. Zou Chang -Yian. Effects of suramin on neuroendocrine and behavioral responses to conditioned fear stimuli.// Neuroreport. - 1998. - 6. p. 997-999.