Горшкова Ю.В. Анализ интенсивности экспрессии р

АНАЛИЗ ИНТЕНСИВНОСТИ ЭКСПРЕССИИ Р-ГЛИКОПРОТЕИНА В ПЛАЗМЕ
КРОВИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ФЕНОТИПА РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА
ПАЦИЕНТА К КАРБАМАЗЕПИНУ
Горшкова Ю.В., Сарвилина И.В., Гордиенко Д.Ю., Сергань В.А.
Южный научный центр Российской академии наук, г. Ростов-на-Дону, Россия
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика
И.П.Павлова, г. Санкт-Петербург, Россия
В настоящее время в медицинской литературе появляются сообщения о
том, что карбамазепин регулирует активность мембранного белка Pгликопротеина,
являющегося членом суперсемейства АТФ-связанных
переносчиков (АВС, АТP-binding carries), работающего как АТФ-связанный
эффлюксный насос для ксенобиотиков и являющегося продуктом
гена
множественной лекарственной устойчивости (MDR1).
В связи с этим целью настоящей работы явился анализ интенсивности
экспрессии Р-гликопротеина в плазме крови взрослых пациентов с эпилепсией
для перспективной оценки фенотипа резистентности организма пациента к
карбамазепину.
В популяционное исследование включено 45 пациентов различного пола
(32 мужчины, 13 женщин) в возрасте 32-39 лет. Парциальные вторично
генерализованные припадки были диагностированы у 20 пациентов,
миоклоническая эпилепсия - у 10 пациентов, абсанс-эпилепсия - у 15 человек.
Пациенты включались в исследование в соответствии с показаниями к
проведению
терапевтического
лекарственного
мониторинга
(ТЛМ)
карбамазепина: труднокурабельные формы эпилепсии с целью подбора
индивидуальной терапии; в условиях достижения ремиссии; при отсутствии
положительного эффекта и появлении побочных эффектов (ПЭ) на фоне
высоких значений концентраций препарата в крови; появление припадков или
ПЭ в определенные моменты времени в течение суток с целью определения
возможной связи диапазона концентраций в данный период времени с
клиническими данными и последующей коррекции терапии; рутинное
исследование после достижения положительных результатов от проводимой
терапии для мониторинга изменений значений фармакокинетических (ФК)
параметров во времени. Контрольная группа представлена здоровыми лицами
(10 человек). Сравнение значений показателей ФК карбамазепина проводилось
с ФК параметрами, представленными в исследованиях биоэквивалентности его
оригинальной и генерических форм у здоровых добровольцев.
На основе данных ТЛМ и пакета прикладных программ USC*PACK (CША)
была оценена ФК карбамазепина (Тегретол фирмы «Novartis», суточная доза
800 мг, 23 человека; Финлепсин фирмы «Asta medica», суточная доза 800 мг, 22
человека) у пациентов с эпилепсией. Все
пациенты, принимавшие
карбамазепин, находились в постиндукционном состоянии. Концентрации
карбамазепина были получены с помощью ВЭЖХ Surveyor LC System / Массспектрометра Surveyor MSQ (Thermo Finnigan, США). В исследовании
использовался внутренний стандарт карбамазепина «Carbamazepine USP»
(Merck, США). Анализ концентрации Р-гликопротеина в плазме крови взрослых
пациентов с эпилепсией производился на основе выделения его из плазмы
крови с помощью стандартного набора для гликопротеинов (Glyco Kit MB,
Bruker, США). Идентификация его экспрессии выполнена на основе времяпролетной масс-спектрометрии с лазерной десорбционной ионизацией (MALDITOF), программного обеспечения для протеомики и масс-спектрометрии в
интегрированной базе данных Mascot Search (США).
Результаты исследования представлены в виде MALDI-TOF-массспектрограмм P-гликопротеина плазмы крови, средних значений интенсивности
Р-гликопротеина (M), стандартного отклонения от средних значений
интенсивности (SD), молекулярной массы белка (Mr, Да), а также показателя
корреляции (r) между интенсивностью экспрессии P-гликопротеина, с одной
стороны, и показателями максимальной концентрации (Сmax), константы
абсорбции (Kabs), объема распределения (Vd) и константы элиминации (Kel)
карбамазепина, с другой стороны.
Показано, что по ФК показателям все пациенты были разделены на 2
группы: I группа пациентов (17 пациентов, из них 6 женщин, 11 мужчин) с
достоверным снижением средних значений показателей Cmax (p<0,05),
Kabs(p<0,05), Vd (p<0,05) карбамазепина относительно оптимального уровня по
данным медицинской литературы при увеличении средних значений показателя
Kel (p<0,05) препарата; II группа пациентов (28 пациентов, из них 7 женщин, 21
мужчина) с оптимальным уровнем средних значений всех вышеперечисленных
ФК параметров.
В I группе взрослых пациентов с эпилепсией отмечен высокий уровень
интенсивности экспрессии P-гликопротеина (Mr = 141463 Да) в плазме крови по
сравнению с аналогичным показателем в плазме крови пациентов II группы
(р<0,01). Зарегистрирована достоверная сильная обратная корреляционная
зависимость между интенсивностью экспрессии P-гликопротеина в плазме
крови и показателями Сmax (r= -0,78, p<0,05), Kabs (r= -0,81, p<0,01), Vd (r= -0,88,
p<0,05), Kel (r= -0,75, p<0,01) в I группе взрослых пациентов с эпилепсией. Во II
группе пациентов обнаружен низкий уровень интенсивности экспрессии Pгликопротеина в плазме крови (р<0,05) при отсутствии достоверной
корреляционной зависимости между этим показателем и параметрами ФК
карбамазепина.
Полученные нами результаты могут быть связаны с регуляцией
карбамазепином дуоденальной экспрессии гена MDR1 и матричной РНК
(мРНК), регулирующих синтез P-гликопротеина. Представляется возможным,
что длительное назначение карбамазепина (постиндукционный период)
приводит к увеличенной экспрессии (up-regulation) P-гликопротеина в нижних
отделах 12-перстной кишки. В ходе длительного назначения препарата
возможно происходит увеличение клиренса карбамазепина, что может быть
связано с экспрессией синтеза P-гликопротеина в клетках почечных канальцев.
Представляется возможным ингибирование Р-гликопротеина карбамазепином в
капиллярах головного мозга, что приводит к снижению показателя Vd и
биодоступности препарата.
Таким образом, полученные результаты исследования показали, что
уровень экспрессии P-гликопротеина в плазме крови пациентов с эпилепсией
является чувствительным тестом для определения фенотипа резистентности к
карбамазепину в данной популяции пациентов, что является показанием к
оптимизации терапии этого заболевания. Перспективным также представляется
исследование экспрессии P-гликопротеина в биоптате ткани нижних отделов
12-перстной кишки в популяции пациентов с эпилепсией.