376 кб - Волгоградский государственный медицинский

На правах рукописи
САЛМАН
Расем
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИТЕЛ К КАТАЛАЗЕ
У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ
ГРАНУЛИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ
С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ
14.00.39 – ревматология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Волгоград – 2008
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный
медицинский университет» и ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
ЗБОРОВСКАЯ Ирина Александровна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук,
профессор Чижов Петр Александрович
доктор медицинских наук,
профессор Заводовский Борис Валерьевич
Ведущая организация:
ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет
Росздрава»
Защита состоится «__» __________ 2008 г. в ___ часов на заседании
Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский
государственный медицинский университет Росздрава» по адресу:
400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава».
Автореферат разослан «___» ___________ 2008 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета Д 208.008.02
доктор медицинских наук, профессор
А.Р. Бабаева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
2
Актуальность проблемы
Системная красная волчанка (СКВ) является аутоиммунным воспалительным заболеванием, имеющим различные клинические проявления и
может протекать как относительно благоприятно, поражая преимущественно кожные покровы и суставы, так и фатально с быстрым развитием
терминальной почечной недостаточности и тяжелых нарушений со стороны нервной системы.
СКВ является относительно редким заболеванием с распространенностью около 1 случая на 1000 населения (Lawrence RC, 2008), но эта патология имеет большое социальное и медицинское значение (Uramoto K.M.,
2005). Высокая социально-экономическая значимость СКВ обусловлена
преимущественным поражением лиц трудоспособного периода жизни,
преобладанием женщин детородного возраста, что ведет к большим прямым и косвенным затратам на лечение (Фоломеева О.М., 2001). Среди популяции всех лиц, страдающих ревматическими болезнями взрослых, пациенты с СКВ заболевают в более раннем возрасте и имеют меньшую длительность болезни до выхода на инвалидность. Больные СКВ в 4 раза чаще
госпитализируются, и, по меньшей мере, в два раза чаще обращаются за
амбулаторной помощью, чем проживающие на той же территории лица
(Clarke A.E., 2003). Особенно тревожной тенденцией является трехкратный
рост заболеваемости СКВ за последние сорок лет.
Несмотря на успехи, достигнутые в диагностике и лечении СКВ, задача своевременной постановки диагноза, назначения адекватной терапии
и контроля за ее эффективностью часто бывает осложнена вариабельностью клинической картины и полиморфизмом проявлений, недостаточностью знаний об этиологии и патогенезе заболевания.
Изучение патогенеза СКВ привело к раскрытию важной роли активных форм кислорода и антиоксидантной системы в повреждении тканей
при этом заболевании (Лисицина Т.А.,2001; Зборовская И.А., 1995, 2006).
Известно, что свободнорадикальные реакции приводят к повреждению
белков, липидов, нуклеиновых кислот, придавая им свойства аутоантигенов. Образование аутоантител к таким аутоантигенам структурам является
ключевым звеном патогенеза СКВ и происходит задолго до развития клинических проявлений заболевания. При СКВ обнаружено накопление вторичных токсичных продуктов свободнорадикальных реакций, что указывает на недостаточной антиоксидантной системы (Ames P., 1999). Аутоантитела к ферментам, в том числе и к одному из основных внутриклеточных
антиоксидантов – каталазе (Кат), могут являться причиной их функциональной недостаточности.
Представляется актуальным у больных СКВ исследовать иммунный
ответ к каталазе – одному из ключевых антиоксидантных ферментов, что
3
позволит выявить некоторые детали патогенеза данного заболевания, будет
способствовать выработке усовершенствованных способов диагностики
СКВ. Результаты исследования могут дать дополнительные критерии оценки активности СКВ и эффективности проводимой терапии, что, в конечном
итоге, поможет своевременно установить диагноз и назначить адекватное
лечение СКВ, а, значит, облегчить состояние больных и уменьшить затраты, связанные с этим страданием.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Целью исследования является усовершенствование диагностики,
оценки активности СКВ и контроля эффективности проводимой терапии с
помощью иммобилизированных гранулированных препаратов каталазы с
магнитными свойствами.
Основные задачи исследования:
 Получить иммобилизированную форму каталазы, изучить ее физикохимические свойства.
 Адаптировать иммуноферментный метод выявления аутоантител к ферменту с использованием иммобилизированной каталазы, оценить диагностическую ценность данного метода при СКВ.
 Изучить содержание антител к каталазе, а также активность фермента у
больных СКВ в зависимости от активности, повреждения, характера течения, клинических особенностей заболевания и показателей качества
жизни, связанного со здоровьем.
 Оценить значение исследования аутоантител к каталазе и ферментативной активности каталазы для контроля эффективности терапии у больных СКВ.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ
Впервые для иммунодиагностики СКВ были созданы и применены в
иммуноферментном методе анализа иммобилизированные гранулированные антигенные препараты (ИГАП) каталазы с магнитными свойствами.
Были подобраны оптимальные условия иммобилизации фермента, позволяющие сохранять его энзимные функции и антигенные свойства. Полученная иммобилизированная форма Кат отличается высокой устойчивостью и может быть использована как модель для изучения взаимодействия
антиген-антитело. Установлено, что при СКВ вырабатываются аутоантитела к каталазе. Показано, что уровень аутоантител к Кат коррелируют с активностью патологического процесса и повреждением при СКВ. Выявлено,
что аутоантитела к каталазе чаще выявляются у больных СКВ с высокой
активностью болезни, при наличии поражения кожи, нервной системы и
желудочно-кишечного тракта. Показана возможность оценки активности
СКВ с использованием показателей уровня антител к Кат и ферментатив-
4
ной активности каталазы. Установлена способность исследованных показателей к изменению под влиянием лечения, что обеспечивает возможность
оценки эффективности проводимой терапии.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ
Использование иммобилизированных гранулированных антигенных
препаратов с магнитными свойствами на основе каталазы позволит повысить качество иммунологической диагностики СКВ и улучшить выделение
степени активности патологического процесса. Определение антител к каталазе и ферментативной активности каталазы может быть использовано
для характеристики активности СКВ, клинических вариантов заболевания,
а также как критерий эффективности лечения СКВ.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
Возможность использования выявления аутоантител к каталазе с помощью метода иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами в качестве дополнительного теста для выделения степени активности, клинических вариантов
СКВ, оценки эффективности проводимой терапии, а также для изучения
биологических свойств ферментов, аутоантигенов и механизмов взаимодействия антиген-антитело.
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ
Методы определения антител к каталазе с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в МУЗ
«Городская клиническая больница №25» г. Волгограда и МУЗ «Городская
больница №1 имени С.З.Фишера» г. Волжского.
ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ
По теме диссертации опубликована 21 печатная работа, из которых 10
– в центральной и 11 – в местной печати.
Основные положения диссертации были представлены на итоговых
научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградской медицинской академии (2003 – 2007 гг.), научных конференциях ГУ НИИ КиЭР
РАМН (2002, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.), II Всероссийской Школе
молодых ревматологов (Москва, 2004), ежегодных Европейских ревматологических конгрессах EULAR (Берлин, Германия, 2004; Вена, Австрия,
2005; Амстердам, Голландия, 2006), XI и XII Российском национальном
конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004, 2005), V национальной
научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека»
(Смоленск, 2007).
Результаты диссертации были апробированы на совместном заседании
ученого совета ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии
5
РАМН и кафедры госпитальной терапии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» 17 июня 2008 года (Протокол № 4).
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, части I – обзора литературы, части II – собственных исследований, состоящей из 6 глав, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и приложений. Работа иллюстрирована 22 рисунками, содержит 24 таблицы и 3 выписки из историй болезни. Библиографический указатель включает 449 источников, в том числе 38 на русском языке и 411 на иностранных языках.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В качестве антигена использовался препарат каталазы производства
НПО "РЕАХИМ" серия 186-68 с активностью 380 Ед/мг и концентрацией
белка в 94,5 мг/мл. Для получения иммобилизированной формы фермента
использовали раствор с концентрацией 1,4 мг/мл по белку. Иммобилизацию проводили методом эмульсионной полимеризации по И.П. Гонтарю с
соавт. (Гонтарь И.П., 2001) в потоке газообразного азота с включением
магнитного материала. Полученные ИГАП на основе каталазы имели правильную сферическую форму с размером частиц от 10 до 100 мкм (контроль осуществлялся с помощью микроскопа).
Антитела к каталазе определяли иммунофлюоресцентным и иммуноферментным методами.
В первом случае анализ проводился в полистироловых планшетах
Immulon 2 (Dynatech Labs, Германия), в качестве субстрата использовали 20
мкл 10% взвеси ИГАП в забуференом физиологическом растворе. Свечение гранул выявляли с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМР3, снабженного фотометрической приставкой ФМЭЛ-1А с цифровым
вольтметром Щ-4300 и выражали в относительных единицах флюоресценции (мВ). Положительной считали люминесценцию гранул, превышающих
средние значения специфической флуоресценции контрольных препаратов
на 2 стандартных отклонения.
Иммуноферментный анализ основан на использовании специфических иммуноглобулиновых препаратов, меченных ферментом, позволяющих по интенсивности окраски субстрата судить о количестве антител в
сыворотке больных. Анализ проводился в полистироловых планшетах
Immulon 2 (Dynatech Labs, Германия). Антитела выявляли с помощью моноклональных диагностических антител против иммуноглобулинов человека, конъюгированных со щелочной фосфатазой производства ЗАО «Биосан» (Новосибирск, Россия). В качестве хромогена использовался раствор
6
нитрофенилового-пара эфира фосфорной кислоты динатриевой соли (ч.д.а.,
Германия) в концентрации 1 мг/мл в субстратном буфере (1М диэтаноламин, 0,5 мМ MgCl2, рН=9,8).
Результаты учитывали на многоканальном микропланшетном спектрофотометре при длине волны 405 нм, полученные значения выражали в
единицах оптической плотности (е.о.п.). Наличие антител считалось положительным при превышении значений оптической плотности на 2 стандартных отклонения от средних значений контрольной группы.
Определение активности каталазы сыворотки крови основывалось на
способности молибдата аммония в присутствии перекиси водорода трансформироваться в окрашенный продукт, определяемый при длине волны
410 нм (Королюк М.А., 1988).
Статистический анализ экспериментальных данных выполнялся с помощью программного пакета SPSS (SPSS for Windows, Release 12.0, SPSS
Inc., Chicago, IL, США). Представление описательных статистик и выбор статистических критериев производились нами исходя из цели исследования,
решаемых при этом задач и рекомендаций руководств по биостатистике.
Под наблюдением находилось 60 больных СКВ (см. табл. 1). Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации Международной медицинской ассоциации и рекомендациями по этике
биомедицинских исследований (1997 г.). Диагноз СКВ верифицировался по
критериям американской коллегии ревматологов 1997 года. В качестве
контрольной группы служили 30 здоровых лиц – доноров станции переливания крови, прошедших обычное обследование.
Таблица 1. Основные демографические показатели больных СКВ и контрольной группы.
Показатель
Больные СКВ
Контрольная группа
n
%
n
%
Пол:
Мужчин
5
8,3
10
33,3
женщин
55
91,7
20
66,7
Возраст:
до 20 лет
13
21,7
8
26,7
21-30 лет
12
20
13
43,3
31-40 лет
11
18,3
9
30
41-50 лет
12
20
51-60 лет
6
10
старше 60 лет
6
10
Наличие инвалидности
41
68,3
0
Средний возраст больных СКВ составил 36,32±15,27 лет, средний
возраст лиц контрольной группы – 26,0±5,56 лет. Среди больных СКВ пре7
обладали женщины (91,7%), абсолютное большинство составляли лица
трудоспособного возраста (90%), вместе с тем 41 пациент (68,3%) имел ту
или иную степень стойкой утраты трудоспособности.
Активность СКВ оценивалась с помощью индексов Systemic Lupus
Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) и European Consensus Lupus
Activity Measure (ECLAM), а также по критериям, предложенных В.А.
Насоновой (1985 г.). Повреждение (необратимые изменения в состоянии
здоровья) измерялось с помощью индекса Systemic Lupus International
Collaborating Clinics / American College of Rheumatology (SLICC/ACR)
Damage Index (DI). Для выделения вариантов течения СКВ применялись
подходы, предложенные В.А. Насоновой, рассматривались «острое», «подострое» и «хроническое» течение заболевания. Качество жизни, связанное
со здоровьем, определялось по опроснику EQ-5D. Дескриптивные статистики исходных клинических показателей больных СКВ представлены в
таблице 2.
Таблица 2. Исходные показатели больных СКВ
Показатель
M
SD 95% ДИ для М Me IQR
Продолжительность болезни
7,967 7,354 6,067…9,866 5,5 6,8
(лет)
Возраст дебюта болезни (лет)
28,6 13,18 25,19…32,01 25,5 19
Активность: SLEDAI
8,93 5,74
7,45…10,42
8,0 10
Активность: ECLAM
5,30 2,79
4,59…6,01
5,0
5
Повреждение: SLICC/ACR DI
1,95 1,71
1,51…2,39
2,0
3
Качество жизни: ВАШ EQ-5D 46,65 17,01 42,26…51,04 45,0 30
Примечания: М – среднее значение, SD – стандартное отклонение, ДИ –
доверительные интервалы, Ме – медиана, IQR – межквартильный размах
Большинство больных имели продолжительность заболевания менее
10 лет, максимальная продолжительность болезни составила 27 лет.
Показатели активности СКВ, выраженные в виде индексов SLEDAI и
ECLAM, продемонстрировали небольшое число больных с неактивной фазой заболевания. Несмотря на то, что тип распределения оценок по разным
шкалам не совпадал, отмечена статистически значимая корреляция при
разных способах оценки активности СКВ (r=0,496; p<0,001). Анализ клинических и лабораторных данных больных с разной активностью заболевания (см. табл. 3) показывает, что изолированные лабораторные показатели
не могут быть использованы как индикаторы активности СКВ, следовательно, требуется привлечение всего комплекса диагностических тестов
для дифференциации активности заболевания.
Таблица 3. Сравнение показателей больных СКВ с различной
активностью болезни, M (SD)
8
Показатель
Возраст
Продолжительность
болезни
Возраст начала болезни
Количество классификацион. критериев
(медиана)
Активность СКВ:
SLEDAI
Активность СКВ:
ECLAM
Повреждение
Продолжительность
госпитализации
Число эритроцитов
Гемоглобин
Число тромбоцитов
Число лейкоцитов
Число лимфоцитов
СОЭ
Протеинурия
Лейкоцитов в моче
Эритроцитов в моче
Билирубин
Мочевина крови
Общий белок крови
Креатинин крови
Уровень антител к
нативной ДНК
Уровень антител к
кардиолипину
ЦИК
IgG
IgM
IgA
Активность
МинимальУмеренная
ная
24,88 (9,9)
39,02(14,9)
4,5
8,646
(2,619)
(7,868)
20,63
30,65
(10,967)
(12,92)
Высокая
p
26,75(17,6)
6,75
(6,035)
20,0
(13,76)
0,08
0,323
0,053
4
5
6
0,023
1,75
(1,282)
1,63
(1,302)
0,63 (0,518)
27,0
(14,223)
3,9175
(0,6189)
121,88 (20,73)
233,98 (71,09)
7,513 (4,436)
1918,4 (625,4)
15,63 (9,79)
0,010 (0,021)
6,63 (13,53)
0,38 (0,744)
9,13 (2,81)
5,342 (1,311)
75,97 (7,606)
87,75 (13,386)
0,107
(0,015)
0,080
(0,056)
4,528 (1,155)
10,65 (0,212)
0,800 (0,001)
2,050 (0,012)
9,27
(4,551)
5,63
(2,349)
2,10 (1,77)
33,44
(22,191)
3,6679
(0,5269)
112,98(16,1)
227,24(75,6)
6,219 (2,32)
1542 (642,6)
25,45 (16,2)
0,150 (0,35)
8,31 (9,74)
2,0 (7,989)
10,19 (4,78)
6,464 (2,87)
71,62 (10,4)
162,96 (20,9)
0,103
(0,024)
0,106
(0,038)
3,971(2,574)
11,85 (1,4)
1,378 (0,29)
1,850 (0,41)
19,25
(6,182)
8,75
(1,893)
2,75 (1,5)
46,0
(36,341)
2,79
(1,0113)
85,0 (30,5)
124,9(70,9)
6,325 (1,9)
1117(480)
23,25(11,1)
0,712(0,86)
16,5 (29,0)
15,5 (29,7)
10,7 (1,83)
11,0 (6,29)
53,65(10,3)
124,6(26,0)
0,11
(0,100)
0,120
(0,108)
4,3 (4,26)
12,7 (2,21)
1,25 (0,19)
2,55(0,243)
<0,001
9
<0,001
0,046
0,388
0,007
0,005
0,043
0,448
0,112
0,251
0,010
0,381
0,032
0,814
0,025
0,002
0,814
0,809
0,662
0,853
0,417
0,105
0,311
При оценке течения СКВ по критериям В.А. Насоновой были получены следующие результаты: у 2 пациентов имело место острое течение СКВ,
у 44 – подострое, у 14 – хроническое.
Среди основных клинических проявлений в исследуемой группе больных СКВ часто имел место суставной синдром, проявлявшийся артралгиями
или артритами без деформаций суставов. Кожные проявления отмечены у
большинства больных СКВ. Типичные изменения в виде «бабочки» отмечались у 60% больных либо при осмотре, либо имели место в анамнезе, характерным было отсутствие рецидивирования данного симптома, частота дискоидных очагов составила 52%. Типичным было сочетание различных кожных проявлений у одного и того же больного. Редким симптомом было
наличие афт на слизистых. Поражение сердца проявлялось, как правило, явлениями экссудативного перикардита, в типичных случаях незначительного.
Относительно часто отмечались кардиалгии, нарушения ритма и проводимости без признаков недостаточности кровообращения. Поражение легких
отмечалось при высокой активности СКВ и проявлялись экссудативным
плевритом и/или пневмонитом.
Самыми частыми проявлениями СКВ в дебюте были кожные изменения (49%) и суставной синдром (47%). В 25% случаев СКВ дебютировала
изолированным лихорадочным синдромом, в 12% наиболее ранним проявлением СКВ была протеинурия.
Все находившиеся под наблюдением больные получали индивидуализированную комплексную терапию, в спектр назначений входили глюкокортикостероиды, нестероидные противовоспалительные средства, иммуносупрессивные препараты, экстракорпоральные методы лечения, а также
антигипертензивные, анальгетические средства, препараты, улучшающие
микроциркуляцию.
Абсолютное большинство больных получали кортикостероиды, медиана дозы (в пересчете на преднизолон) составляла 20 мг/сут. Семь больных (12%) получили «пульс-терапию» метилпреднизолоном (внутривенное
введение в дозах от 250 до 1000 мг болюсно в течение 3-5 дней). Плазмаферез выполнялся у 15 (25%) больных СКВ.
Активность каталазы и уровень антител к ферменту
в контрольной группе
Активность каталазы изучалась в сыворотке крови 30 практически
здоровых лиц в возрасте от 19 до 40 лет – доноров станции переливания
крови. Уровень антител к каталазе в сыворотке крови здоровых лиц определялся иммунофлуоресцентным и иммуноферментным методами с использованием ИГАП. Зависимости уровня антител и активности каталазы
от пола и возраста выявлено не было (см. табл. 4).
1
0
Таблица 4. Активность каталазы и уровень антител к каталазе
в сыворотке крови здоровых лиц, M (SD).
Активность ка- Уровень АТ к каУровень АТ к
Контингент
n
талазы,
талазе (ИФА),
каталазе (ИФЛ),
мкКАТ/мл
е.о.п.
Ед
Вся группа
30
23,59 (3,55)
0,0698 (0,0213)
9,22 (3,15)
Мужчины
10
23,61 (3,45)
0,0728 (0,0196)
10,78 (3,72)
Женщины
20
23,59 (3,68)
0,0683 (0,0225)
8,44 (2,58)
Установив среднюю концентрацию Ат к каталазе в донорских сыворотках, вычислили уровень нормальных показателей оптической плотности
и флюоресценции, определяемый как M2•SD. Таким образом, значения оптической плотности 0,115 е.о.п. в ELISA-тесте и уровня флуоресценции
15,52 ЕД были приняты за границу нормы (показатели, превышающие эти
значения, считались положительными по Ат к каталазе).
Показатели активности каталазы и уровня антител к
ферменту у больных системной красной волчанкой
В работе исследовались изменения активности каталазы и закономерности образования антител к ферменту в зависимости от активности, длительности патологического процесса, варианта течения СКВ, а также оценивали взаимосвязь этих аутоантител с клиническими проявлениями заболевания. Исходные дескриптивные статистики изучаемых показателей у
больных СКВ представлены в таблице 5.
Таблица 5. Уровни активности каталазы и антител к ферменту
у больных СКВ.
Показатель
M
SD 95% ДИ для М Me IQR
Активность каталазы
20,399 5,079 19,08…21,71 20,40 7,93
(мкКАТ/мл)
Уровень антител к каталазе
иммуноферментным мето- 0,133 0,083 0,112…0,154 0,130 0,140
дом (е.о.п.)
Уровень антител к каталазе
иммунофлуоресцентным
16,29 8,39
14,12…18,45 13,63 13,12
методом (Ед)
Примечания: М – среднее значение, SD – стандартное отклонение, ДИ –
доверительные интервалы, Ме – медиана, IQR – межквартильный размах
У больных СКВ отмечены статистически значимые различия в исследуемых показателях по сравнению с контрольной группой. Так, при СКВ
уровень активности каталазы был значимо ниже, а уровни антител значимо
выше, чем у здоровых лиц (см. табл. 6).
1
1
Таблица 6. Сравнение активности каталазы и уровней антител
к ферменту у больных СКВ с контрольной группой.
Контрольная группа Больные СКВ
Показатель
M (SD)
M (SD)
p
Активность каталазы,
23,59
20,399
0,003
мкКАТ/мл
(3,457)
(5,079)
Уровень антител к ка0,069
0,132
0,005
талазе (ИФА), е.о.п.
(0,021)
(0,089)
Уровень антител к ка9,22
16,29
<0,001
талазе (ИФЛ), Ед
(3,15)
(8,39)
Примечания: ИФА – методом иммуноферментного анализа с использованием ИГАП, ИФЛ – иммунофлуоресцентным методом с использованием
ИГАП.
Антитела к каталазе были обнаружены у 32 больных СКВ (53,33%)
(иммуноферментным методом) и не были выявлены ни у одного обследованного в контрольной группе.
Был выявлен ряд статистически значимых корреляций активности каталазы и уровней аутоантител к каталазе с клиническими и лабораторными
показателями (см. табл. 7).
Таблица 7. Корреляции активности каталазы и уровней антител к ферменту с клиническими и лабораторными показателями
Активность
Уровень антител
Показатель
каталазы
к каталазе
r
p
r
p
Активность СКВ: индекс SLEDAI
-0,386
0,002 0,314 0,015
Активность СКВ: индекс ECLAM
-0,385
0,002 0,331 0,010
Повреждение: индекс SLICC/ACR
-0,389
0,002 0,286 0,027
Уровень гемоглобина крови
0,201
0,123 -0,265 0,041
Число лимфоцитов
0,042
0,747 -0,292 0,023
Уровень билирубина сыворотки
-0,307
0,023 0,345 0,010
Если для активности каталазы наблюдалась обратная корреляция с
показателями активности СКВ и повреждения, то для уровня Ат к Кат корреляция была прямая, что говорит о тесной связи активности СКВ с процессами образования аутоантител. Интересна обратная корреляция уровня
Ат к Кат с уровнем гемоглобина и числом лимфоцитов крови, что может
свидетельствовать о непосредственном повреждающем воздействии аутоантител к каталазе на клетки крови. Косвенное подтверждение этой гипотезы находим в прямой корреляции уровня билирубина и Ат к Кат (следует
обратить внимание и на обратную корреляцию активности каталазы с
уровнем билирубина), при том, что связи с печеночными ферментами не
1
2
выявляется: по-видимому, повышенное содержание билирубина у этих пациентов связано с процессами аутоиммунного гемолиза, каталаза может
служить ферментом, препятствующим разрушению эритроцитов, а антитела к каталазе, блокирующие ферментативную активность, усиливают повреждение клеток крови. Влияние Ат на ферментативную активность каталазы показывает обратная корреляция высокой силы (r= -0,613; p<0,0005)
между активностью фермента и уровнем аутоантител.
Показатели активности каталазы и уровня антител к
ферменту у больных СКВ с различной активностью патологического процесса
При анализе зависимостей уровня антител к каталазе была выявлена
тесная связь с активностью СКВ. Так, коэффициенты корреляции уровня
антител к каталазе с индексами активности SLEDA и ECLAM составил
0,314 (р=0,015) и 0,331 (р=0,01), соответственно. Уровень антител к каталазе у больных с умеренной и высокой активностью был значимо выше, чем
у больных с низкой активностью СКВ (см. рис. 1).
Уровень антител к каталазе, е.о.п.
0,300
0,200
*
**
Умеренная
Высокая
* p=0,009 по
отношению к низкой
активности СКВ
** p=0,005 по
отношению к низкой
активности СКВ
0,100
0,000
Низкая
СКВ
Рисунок 1. Уровень Ат к КатАктивность
в зависимости
от активности СКВ.
У больных с низкой активностью СКВ Ат к Кат не выявлялись, в то
время как у больных с умеренной активностью антитела определялись у
58,8% пациентов, а при высокой активности – у 70,6% больных СКВ.
Статистически значимые различия в уровнях активности каталазы
были выявлены у больных с умеренной и высокой активностью заболевания по сравнению с низкой активностью СКВ (р<0,001), а значимых разли1
3
чий между группами больных с умеренной и высокой активностью СКВ
обнаружено не было (р=0,566) (см. табл. 8).
Таблица 8. Активность каталазы и антитела к каталазе у больных СКВ в
зависимости от активности патологического процесса (MSD)
Активность СКВ
Доноры
Параметр
Низкая
Умеренная
Высокая
(n=30)
(n=9)
(n=34)
(n=17)
Активность
23,59
25,79
20,06
18,22
каталазы,
(3,55)
(2,68)
(4,25)
(5,71)
мкКАТ/мл
Уровень антител к 0,0698
0,053
0,142
0,157
каталазе (е.о.п.)
(0,0213)
(0,021)
(0,086)
(0,073)
Позитивны по ан20
12
тителам к каталазе
0
0
(58,82%)
(70,59%)
(n, %)
Снижение активности каталазы, зависящее от активности СКВ, проявилось в обратной корреляции средней силы со значениями индексов активности болезни (индекс SLEDAI: r=-0,386; p=0,002; индекс ECLAM: r=0,385; p=0,002). Полученные данные заставляют предположить, что при
наличии эндогенных ингибиторов каталазы (аутоантител к ферменту) недостаточная активность фермента не может предотвратить свободнорадикальное повреждение тканей, усиливающееся с ростом активности воспалительного процесса.
Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования показателей уровня антител к каталазе в качестве дополнительного
маркера активности СКВ. Однако следует учитывать, что только для больных с низкой активностью СКВ были получены статистически значимые
различия в уровнях аутоантител по отношению к высокой и умеренной активности заболевания; различия между больными с умеренной и высокой
активностью были статистически не значимыми.
Показатели активности каталазы и уровня антител к
ферменту у больных СКВ с различным течением и
продолжительностью патологического процесса
Под нашим наблюдением находилось 2 больных с острым течение
СКВ, 44 – с подострым и 14 – с хроническим течением болезни. При анализе изучаемых показателей статистически значимых различий в зависимости
от варианта течения СКВ выявлено не было (см. табл. 9), хотя отмечена
тенденция к более высоким уровням антител к каталазе при остром течении
СКВ.
1
4
Таблица 9. Активность каталазы и антитела к каталазе у больных СКВ в
зависимости от варианта течения болезни
Течение СКВ
Показатель
p
Острое Подострое
Хрониче(n=2)
(n=44)
ское (n=14)
Активность каталаM
19,61
20,42
20,45
0,976
зы, мкКАТ/мл
(SD)
(3,55)
(4,86)
(6,15)
Уровень антител к
M
0,196
0,137
0,112
0,352
каталазе, е.о.п.
(SD) (0,016)
(0,085)
(0,078)
Позитивны по
n
2
24
6
0,302
Ат к каталазе
(%)
(100%)
(54,5%)
(42,9%)
Корреляционный анализ не выявил статистически значимых связей
между уровнем Ат к Кат или активностью каталазы с продолжительностью
болезни. При оценке изучаемых показателей у больных с ранней СКВ (продолжительность болезни менее 2 лет) также не удалось выявить статистически значимых различий с длительно текущим заболеванием (см. табл. 10).
Таблица 10. Активность каталазы и антитела к каталазе у больных СКВ
в зависимости от продолжительности болезни.
Длительность СКВ
Показатель
p
Ранняя
Длительно те(n=12)
кущая (n=48)
Активность каталазы, M
21,04 (3,82)
20,24 (5,37)
0,631
мкКАТ/мл
(SD)
Уровень антител к
M
0,132 (0,080)
0,133 (0,084)
0,963
каталазе, е.о.п.
(SD)
Позитивны по анти- n (%)
7 (58,3%)
25 (52,1%)
0,756
телам к каталазе
Отсутствие связи уровня Ат к Кат с продолжительностью болезни
или вариантом течения СКВ вполне объяснимы, так как СКВ характеризуется волнообразным течением, когда периоды высокой активности сменяются эпизодами относительного благополучия в клиническом статусе. Поскольку основным параметром, определяющим образование аутоантител
является активность заболевания, следует ожидать постепенного снижения
титра аутоантител в неактивные периоды, по-видимому, уровни Ат к Кат
меняются также волнообразно согласно активности процесса, как, например, это было описано для антител к ДНК.
Следует отметить, что обследование больных с недавним клиническим
дебютом СКВ (продолжительность болезни менее 2 лет) выявило наличие
Ат к Кат у 58,3%. Эта находка может свидетельствовать о том, что Ат к Кат
могут появляться до развития клинических симптомов, а также является
1
5
определенным маркером СКВ. Следовательно, определение Ат к Кат у
больных с ранней СКВ, учитывая трудность ранней диагностики СКВ, может быть использовано для уточнения диагноза в сомнительных случаях.
Показатели активности каталазы и уровня антител к
ферменту у различных клинических групп больных СКВ
Корреляционный анализ выявил связь уровней Ат к Кат с тяжестью
поражения кожи (r=0,364; p=0,004) и поражения нервной системы (r=0,273;
p=0,035). Сравнение между собой групп больных СКВ, позитивных и негативных по антителам к каталазе, продемонстрировало большую тяжесть
поражения кожи (р=0,017), ЖКТ (р=0,022) и нервной системы (р=0,027) у
больных, имевших аутоантитела к каталазе (см. рис. 2). Связи уровня активности каталазы с клиническими проявлениями СКВ выявлено не было.
Поражение кожи
Нефропатия
Поражение глаз
Артропатия
Поражение дыхательной системы
Поражение нервной системы
Поражение сердца и сосудов
Поражение ЖКТ
С наличием АТ к КАТ
Без наличия АТ к КАТ
Рисунок 2. Тяжесть клинических проявлений СКВ в зависимости от
наличия антител к каталазе.
Определенный интерес представляет изучение взаимосвязей лабораторных параметров больных СКВ. Корреляционный анализ продемонстрировал
статистически значимую связь средней силы уровня Ат к Кат с уровнем гемоглобина (r= -0,265; p=0,041) и уровнем билирубина крови (r=0,345; p=0,01).
Важная повреждающая роль АФК при анемиях признается в течение
многих лет, как и защитные эффекты каталазы в предупреждении ПОЛ
1
6
мембран эритроцитов с их последующим разрушением. Известно, что гемолитические анемии сопровождаются повышением прямого билирубина
при понижении гемоглобина и числа эритроцитов, а выявленная связь с
концентрацией Ат к Кат может свидетельствовать в пользу участия этих
аутоантител в патогенезе гемолиза. По-видимому, антитела опосредованно
участвуют в разрушении эритроцитов, ингибируя протективные функции
каталазы в отношении гемолиза, индуцированного АФК (Mavelli I., 1982).
Антитела к каталазе у больных системной красной волчанкой с
поражением кожи
При обследовании поражение кожи имелось у 31 (51,7%) больных
СКВ. Среди различных вариантов вовлечения кожных покровов наиболее
часто наблюдались эритема лица и верхней части туловища (87,1% больных), дискоидные очаги (70,9%), и их комбинация (58,1%); реже отмечались
фоточувствительность (38,7%), уртикарные (12,9%) и другие высыпания.
У больных с кожными проявлениями СКВ чаще выявлялись Ат к Кат,
выше был уровень данных антител, а активность каталазы значимо не различалась (см. табл. 11).
Таблица 11. Активность каталазы и антитела к каталазе у больных СКВ
в зависимости от поражения кожи.
Поражение кожи
Показатель
р
Имеется
Отсутствует
(n=31)
(n=29)
Активность каталазы,
M (SD)
19,22 (4,61)
21,66 (5,33)
0,068
мкКАТ/мл
Уровень антител к каM (SD) 0,163 (0,076)
0,101 (0,079)
0,001
талазе, е.о.п.
Позитивны по антитеn (%)
22 (70,9%)
10 (34,5%)
0,009
лам к каталазе
Очевидно, повреждение кожи тесно связано с гиперпродукцией АФК
(Sanders C.J., 2003). В экспериментальных моделях была убедительно продемонстрирована роль перекиси водорода в развитии повреждения под
действием ультрафиолетовых лучей, а каталаза эффективно предотвращает
такие повреждения (Sander C.S., 2002; Rhie G.E., 2001). Однако при повышении дозы ультрафиолета каталаза перестает справляться с детоксикацией АФК и происходит оксидативный стресс в облученной коже, который
должен компенсироваться активностью других антиоксидантных ферментов. Состояние хронического оксидативного стресса при СКВ также может
приводить к истощению компенсаторных емкостей АОС. Поскольку фотосенсибилизация является одной из отличительных черт СКВ (Sanders C.J.,
2003), можно предположить, что Ат к Кат, снижая функциональную актив-
1
7
ность фермента, приводят к более выраженным воспалительным изменениям кожи даже при незначительных провоцирующих стимулах.
Антитела к каталазе у больных системной красной волчанкой с
поражением нервной системы
Поражение нервной системы имело место у 41 (68,3%) больного СКВ.
Анализ частоты различных нейропсихических проявлений (по рекомендациями Американской коллегии ревматологов 1999 г.) приведен в таблице 12.
Таблица 12. Частота проявлений поражений нервно-психической сферы у
больных СКВ.
Симптомы (синдромы)
Центральная нервная система
Цереброваскулярное поражение
Головные боли (включая мигрень и доброкачественную
внутричерепную гипертензию)
Судорожные расстройства
Невротические расстройства
Расстройства настроения (аффективные расстройства)
Психоз
Периферическая нервная система
Поражение вегетативной нервной системы
Мононейропатия (единичная/множественная)
Нейропатия черепных нервов
Плексопатия (поражение нервных сплетений)
Полинейропатия
n
%
11
40
26,8
97,5
2
6
18
1
4,8
14,6
43,9
2,4
32
3
7
1
3
78,0
7,3
17,1
2,4
7,3
Поражение нервной системы при СКВ характеризовалось более высокими уровнями антител к каталазе и более частым выявлением данных
аутоантител, также отмечена тенденция к снижению активности фермента
(см. табл. 13).
Таблица 13. Активность каталазы и антитела к каталазе у
больных СКВ в зависимости от поражения нервной системы.
Поражение нервной системы
Показатель
p
Имеется
Отсутствует
(n=41)
(n=19)
Активность каталазы,
M (SD)
19,52 (5,31)
22,29 (4,04)
0,061
мкКАТ/мл
Уровень антител к
M (SD) 0,150 (0,083)
0,096 (0,071)
0,019
каталазе, е.о.п.
Позитивны по антиn (%)
26 (63,4%)
6 (31,6%)
0,028
1
8
телам к каталазе
Роль Ат к Кат в поражении нервной системы может быть связана с
несколькими механизмами. Принято считать, что АФК играют основную
роль в повреждении мембран нервных клеток, вызывая ПОЛ (Balu M.,
2005). Несмотря на то, что каталаза содержится в нервных тканях в меньших концентрациях, она играет важную защитную роль (Sheikh F.G., 1998),
в том числе в моделях аутоиммунной патологии. Не исключается и возможность того, что антитела к каталазе могут перекрестно реагировать с
рецепторами нейронов, изменяя их функциональную активность, как это
было продемонстрировано для анти-ДНК аутоантител и NMDA-рецепторов
(Kowal C., 2001; Kotzin B.L., 2001).
Кроме того, глюкокортикоидные гормоны, составляющие основу терапии большинства больных СКВ, могут вызывать снижение выработки
каталазы в нервных клетках (Schmidt A.J., 2005), а в этих условиях даже незначительное уменьшение функциональной активности каталазы под влиянием аутоантител может приводить к накоплению АФК в нейронах и
нарушению их функции.
Показатели активности каталазы и уровня антител к
ферменту у больных СКВ в зависимости от выраженности
повреждения
Корреляционный анализ позволил выявить связь уровня Ат к Кат и
активности каталазы с повреждением, определяемым с помощью индекса
SLICC/ACR. Коэффициенты корреляции составили 0,286 (р=0,027) для
уровня Ат к Кат и -0,389 (р=0,002) для активности каталазы. Отрицательная
корреляционная связь активности каталазы с повреждением может указывать на протективный характер антиоксидантного фермента в отношении
развития необратимых изменений в состоянии здоровья больных СКВ.
Было выполнено сравнение пациентов СКВ, не имевших повреждения (значения индекса равны 0), с больными, имевшую любую степень повреждения. Оказалось, что у 15 (25%) больных на момент включения в исследование повреждения не отмечалось. Активность каталазы, у больных,
не имевших повреждения, оказалась несколько выше (21,72±4,24 мКАТ/л
по сравнению с 19,96±5,29 мКАТ/л), но эти различия были статистически
не значимыми (р=0,287). Также статистически значимо не различались
уровни Ат к Кат (0,122±0,071 против 0,137±0,087; р=0,591) и доля лиц, позитивных по антителам к каталазе (8 из 15 (53,3%) против 24 из 45 (53,3%).
Антитела к каталазе и оценка качества жизни,
связанного со здоровьем у больных СКВ
Основным показателем качества жизни, связанным со здоровьем, в
нашем исследовании являлись значения «термометра здоровья» (ВАШ)
1
9
опросника EQ-5D. У больных СКВ выявлено снижение показателей ВАШ
EQ-5D (46,65±17,01 мм) по сравнению с популяционными данными. В то
же время, корреляционный анализ не выявил ассоциаций показателя качества жизни с уровнями Ат к Кат (r=-0,168; p=0,201) или активностью фермента (r=0,188; p=0,151). Интересно, что также не было выявлено связи качества жизни с показателями активности патологического процесса, но обнаружена статистически значимая обратная связь с показателями повреждения (r=-0,498; p<0,001).
Сравнение между собой групп больных СКВ, имевших и не имевших
Ат к Кат, показал несколько более высокие значения качества жизни, если
такие аутоантитела не выявлялись (50,04±19,22 мм по сравнению с
43,69±14,47 мм), но эта разница была статистически не значимой (р=0,187).
Выявленные связи заставляют предположить, что качество жизни при
СКВ определяется, в основном, функциональным статусом больных. Очевидно, при нарастании повреждения следует ожидать нарастание ограничения функционального статуса, с увеличением продолжительности болезни происходит накопление необратимых изменений в состоянии здоровья,
возраст часто сопряжен с большей продолжительностью СКВ (большинство заболевают в среднем возрасте) и сопутствующими коморбидными
состояниями. Связь поражения нервной системы с ограничениями в качестве жизни объясняется, по-видимому, аффективными расстройствами, сопровождающими вовлечение нервно-психической сферы при СКВ.
Влияние терапии на уровень антител к каталазе
у больных СКВ
Динамика изучаемых показателей в процессе стационарного лечения
представлена в таблице 14. Отмечено статистически значимое повышение
активности фермента к концу пребывания больных в стационаре, в то время как уровень Ат к Кат снизился, хотя и не достиг показателей, характерных для здоровых лиц. Доля лиц, позитивных по Ат к Кат к окончанию
пребывания пациентов в стационаре сократилась с 32 (53,3%) до 29
(48,3%).
Различия в динамике изучаемых показателей для разных видов лечения были незначительными и тесно коррелировали со снижением активности патологического процесса.
Отмеченое снижение уровня антител к каталазе, которое, хотя и было
статистически значимым, не привело к исчезновению этих аутоантител из
крови обследованных. Только у трех больных СКВ мы наблюдали исчезновение аутоантител из циркуляции, это случилось у молодых пациентов с недавним дебютом болезни, которым проводилась активная противовоспалительная терапии, приведшая к быстрой нормализации клинического состояния.
2
0
Таблица 14. Динамика активности каталазы и антител к каталазе в процессе лечения.
Категория
Показатель
При поПри
p
больных
ступлении выписке
Активность
M
20,39
22,34
каталазы,
<0,001
(SD)
(5,08)
(3,48)
Все больные
мкКАТ/мл
СКВ (n=60)
Лечение цитотоксическими
препаратами в
комбинации с
кортикостероидами (n=12)
Комплексная терапия с включением плазмафереза (n=15)
Уровень антител к каталазе, е.о.п.
Активность
каталазы,
мкКАТ/мл
Уровень антител к каталазе, е.о.п.
Активность
каталазы,
мкКАТ/мл
Уровень антител к каталазе, е.о.п.
M
(SD)
0,133
(0,083)
0,113
(0,068)
<0,001
M
(SD)
20,80
(3,64)
22,55
(2,69)
0,007
M
(SD)
0,130
(0,066)
0,110
(0,052)
0,028
M
(SD)
21,17
(4,57)
22,63
(4,03)
0,005
M
(SD)
0,126
(0,078)
0,114
(0,075)
0,016
Тот факт, что различия в динамике уровней аутоантител к каталазе
для разных видов лечения были статистически незначимыми, может отражать, с одной стороны, тесную зависимость аутоантителогенеза от общей
активности СКВ, и хороший контроль активности приводит к благоприятным иммунологическим сдвигам. С другой стороны, отсутствие различий
может быть связано с тем обстоятельством, что более тяжелые больные получали более агрессивную терапию, и даже при тяжелом течении СКВ активные вмешательства способны привести к благоприятной динамике клинических и иммунологических показателей.
Таким образом, исследование антител к каталазе в иммуноферментном анализе с использованием иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами способствует улучшению
диагностики СКВ, установлению активности патологического процесса и
указывает на наличие определенных клинических форм болезни. Применение этих показателей для мониторинга проводимой терапии позволяет более точно оценить ее эффективность.
ВЫВОДЫ
1. В сыворотке крови значительной части больных СКВ методом иммуноферментного анализа выявлены антитела к ферменту антиоксидантной
2
1
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
защиты каталазе (КФ 1.11.1.6). Иммуноферментный метод определения
антител к каталазе с применением иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами является более
чувствительным и менее трудоемким по сравнению с иммунофлуоресцентным методом.
Уровень антител к каталазе у больных СКВ зависит от активности заболевания и не зависит от варианта течения и продолжительности болезни,
что может быть использовано в качестве дополнительного индикатора
активности СКВ.
Высокие уровни антител к каталазе определяются у больных СКВ с поражением кожи и нейропсихическими проявлениями, уровень аутоантител к каталазе связан с интенсивностью гемолитической анемии при
СКВ, аутоантитела к каталазе чаще выявляются у больных СКВ с поражением желудочно-кишечного тракта.
Антитела к каталазе появляются у больных СКВ в дебюте болезни, и их
обнаружение может быть использовано для своевременной диагностики
системного заболевания.
У больных СКВ наблюдается снижение ферментативной активности каталазы, которое обратно коррелирует с уровнем аутоантител к энзиму,
таким образом, антитела к каталазе способны вызывать частичное инактивирование фермента.
Необратимые изменения в состоянии здоровья при СКВ сопряжены со
снижением ферментативной активности каталазы и повышением уровня
аутоантител к каталазе.
Динамика ферментативной активности каталазы и уровня антител к энзиму, наблюдаемая на фоне проводимой терапии, позволяет использовать их в качестве дополнительных критериев эффективности лечения
больных СКВ.
Иммобилизованная форма каталазы может быть использована как модель для изучения взаимодействия аутоантител с ферментами антиоксидантной системы.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Полученные иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами на основе каталазы рекомендуется использовать для выявления аутоантител к энзиму у больных СКВ в иммуноферментном методе анализа с использованием вторичных антител,
меченных щелочной фосфатазой.
2. У больных СКВ следует одновременно исследовать ферментативную
активность каталазы и определять уровень антител к каталазе в иммуноферментном анализе с использованием полученных иммобилизиро2
2
3.
4.
5.
6.
ванных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами.
При исследовании аутоантител к каталазе иммуноферментным методом
за норму следует считать показатели оптической плотности проб, составляющие 0,0698±0,0213 е.о.п.; положительным в отношении аутоантител следует считать значение оптической плотности проб, превышающее 0,115 е.о.п.
При определении ферментативной активности каталазы следует считать
нормальными значения, составляющие 23,59±3,55 мкКАТ/мл. Для СКВ
характерно снижение активности каталазы до 20,39±5,08 мкКАТ/мл.
При минимальной активности СКВ значения активности каталазы соответствуют показателям здоровых лиц, для умеренной активности СКВ
характерны значения активности каталазы от 24,31 до 15,81 мкКАТ/мл,
для высокой активности СКВ – 23,93 до 12,51 мкКАТ/мл.
При наличии у больных СКВ поражения кожи и нейропсихических проявлений показано исследование сывороток крови на наличие аутоантител к каталазе. Обнаружение таких аутоантител служит индикатором
необходимости включения в комплексную терапию препаратов, нормализующих антиоксидантный статус.
В процессе лечения рекомендуется исследовать показатели ферментативной активности каталазы и уровня антител к каталазе, рассматривая
повышение активности фермента и снижение уровня аутоантител к каталазе как признак эффективности проводимой терапии.
ПУБЛИКАЦИИ
1. Новые возможности контроля эффективности терапии ревматоидного
артрита и системной склеродермии с помощью магнитоуправляемых
сорбентов на основе каталазы // Сб. научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии» - Волгоград. – 2002 г. – С. 15-16. Соавт.: Александров А.В., Зотина М.В., Маслакова Л.А., Гонтарь И.И., Никитин М.В., Шилова Л.Н., Зборовская И.А.
2. Метод объективизации оценки активности системной красной волчанки
при динамическом наблюдении за больными // Сб. научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии» - Волгоград. – 2002 г. –
С. 123-124. Соавт.: Сущук Е.А., Степанова Н.Н., Гонтарь И.П., Емельянова О.И., Красильников А.Н., Трубенко Ю.А., Зборовская И.А.
3. Исследование церулоплазмина и антител к нему у больных системной
красной волчанкой // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета №9: Сборник научных трудов. Т.59. Вып.9. –
2
3
Волгоград: ГУ «Издатель», 2003. – С.127-128. (216с). Соавт.: Сущук
Е.А., Гонтарь И.П., Александров А.В., Зборовская И.А.
4. Клинико-лабораторные ассоциации аутоантител к энзимам антиоксидантной системы при системной красной волчанке // Сборник научных работ
«Актуальные проблемы современной ревматологии и кардиологии», г.
Волгоград. – 2004, выпуск 21. – С.98-99. Соавт.: Сущук Е.А., Маслакова
Л.А., Шипаева А.Л., Наджиб И.В., Гонтарь И.П., Зборовский А.Б.
5. Аутоантитела к ферментам-антиоксидантам при системных заболеваниях соединительной ткани // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии и кардиологии», г. Волгоград. – 2004,
выпуск 21. – С.118-119. Соавт.: Сущук Е.А., Наджиб И.В., Шипаева
А.Л., Александров А.В., Сычева Г.Ф., Сизова М.В., Зборовская И.А.,
Гонтарь И.П.
6. Аутоантителогенез к ферментам антиоксидантной системы при системной красной волчанке // Тезисы докладов. ХI Российский национальный
конгресс «Человек и лекарство», г. Москва, 19-23 апреля 2004. – С. 125126. Соавт.: Гонтарь И.П., Сущук Е.А., Наджиб И.В., Александров А.В.,
Сычева Г.Ф., Зборовский А.Б.
7. Исследование аутоантител к глутатионпероксидазе при системной красной волчанке // Научно-практическая ревматология. – 2004. – №2. –
С. 135. Соавт.: Наджиб И.В., Шипаева А.Л., Александров А.В., Сущук
Е.А., Гонтарь И.П.
8. Autoantibodies to antioxidant enzymes in systemic lupus erythematosus //
Annual European Congress of REUMATOLOGY, EULAR 2004, Berlin, 912 June 2004. Absracts. «Annals of the Rheumatic Diseases». - Juli 2004.,
Vol 63., Supplement 1. – P. 110. Соавт.: E.A. Sushchuk, I.P. Gontar, I.V.
Nadjib, L.A. Maslakova, I.A. Zborovskaya, A.B. Zborovsky.
9. Immunological testing for connective tissue diseases // Annual European
Congress of REUMATOLOGY, EULAR 2004, Berlin, 9-12 June 2004. Absracts. «Annals of the Rheumatic Diseases». - Juli 2004., Vol 63., Supplement 1. – P. 473. Соавт.: E.A. Sushchuk, I.P. Gontar, A.V. Alexandrov, A.L.
Shipaeva, A.B. Zborovsky.
10. Определение аутоантител к ферментам – антиоксидантам при системной красной волчанке //Материалы 62-й итоговой научной конференции
студентов и молодых ученых ВолГМУ «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», г. Волгоград, 19-23 апреля
2004 г. – С. 65. Соавт.: Наджиб И.В., Шипаева А.Л.
11. Аутоантитела к каталазе при системной красной волчанке: клинические и иммунологические ассоциации // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии», выпуск 22. – Волгоград,
2
4
2005 г. – С. 122-123. Соавт.: Сущук Е.А., Маслакова Л.А., Сычева Г.Ф.,
Шипаева А.Л., Гонтарь И.П.
12. Аутоантитела к церулоплазмину являются эндогенными регуляторами
оксидазной активности фермента // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии», выпуск 22. – Волгоград.,
2005 г. – С. 143-144. Соавт.: Сущук Е.А., Гонтарь И.П., Александров
А.В., Красильников А.Н., Наджиб И.В., Трубенко Ю.А., Зборовский А.Б.
13. Исследование применимости индексов активности системной красной
волчанки в клинической практике // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии», выпуск 22. – Волгоград,
2005 г. – С. 144-145. Соавт.: Сущук Е.А., Гонтарь И.П., Наджиб И.В.,
Шилова Л.Н., Емельянов Н.И., Зборовская И.А.
14. Клинико-лабораторные ассоциации аутоантител к антиоксидантным
ферментам при системных заболеваниях соединительной ткани // Тезисы докладов. ХII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», г. Москва, 18-22 апреля 2005. – С. 91. Соавт.: Гонтарь И.П.,
Наджиб И.В., Шипаева А.Л., Сущук Е.А., Зборовская И.А.
15. Иммобилизированные магнитосорбенты – новое направление в создании иммуносорбентов для лечения аутоиммунных заболеваний // Тезисы
докладов. ХII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», г. Москва, 18-22 апреля 2005. – С.653. Соавт.: Гонтарь И.П.,
Александров А.В., Красильников А.Н., Трубенко Ю.А., Емельянов Н.И.,
Наджиб И.В., Никитин М.В., Зборовский А.Б.
16. Аутоантитела к ферментам-антиоксидантам при аутоиммунных заболеваниях // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии», выпуск 23. – Волгоград, 2006 г. – С. 135-136. Соавт.:
Сущук Е.А., Гонтарь И.П., Наджиб И.В., Шипаева А.Л., Зборовский А.Б.
17. Autoantibodies to antioxidant enzymes in autoimmune diseases // Annual
European Congress of REUMATOLOGY, EULAR 2006, Amsterdam, 21-24
June 2006. Absracts. «Annals of the Rheumatic Diseases». - Juli 2006, Vol.
65, Supplement II. – P.302-303. Соавт.: A.B. Zborovsky, E.A. Sushchuk, I.P.
Gontar, I.V. Nadjib.
18. Роль аутоантител к каталазе в патогенезе системной красной волчанки
// Материалы V национальной научно-практической конференции с
международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота,
антиоксиданты и здоровье человека», 18-22 сентября 2007 г. – Смоленск,
ФГУ «Смоленский ЦНТИ», 2007. – С. 157-158. Соавт.: Алехина И.Ю.,
Грехов Р.А., Сущук Е.А., Махачев М.А., Александров А.В., Зборовская
И.А.
19. Иммобилизированные сорбенты на основе каталазы в диагностике
воспалительных аутоиммунных заболеваний // Кремлевская медицина.
2
5
Клинический вестник. – 2007, №4. – С.51-54. Соавт.: Александров
А.В., Алехина И.Ю., Ненашева Н.В., Романов А.И.
20. Применение новых методов восстановительной терапии в комплексном лечении больных среднего и пожилого возраста с дегенеративнодистрофическими заболеваниями суставов // Вестник СанктПетербургской государственной медицинской академии им.
И.И.Мечникова. – 2008, №1. – С.178-182. Соавт.: Грехов Р.А., Александров А.В., Алехина И.Ю., Кедрова В.Л., Бай С.А., Молчанова О.А.,
Папков А.Ю., Зборовский А.Б.
21. Возможность определения антител к каталазе в сыворотке крови
больных с воспалительными ревматическими заболеваниями с помощью
иммобилизированных магнитосорбентов // Клиническая лабораторная
диагностика. – 2008, №7. – С.39-42. Соавт.: Александров А.В., Алехина
И.Ю., Гонтарь И.П.
САЛМАН
Расем
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИТЕЛ К КАТАЛАЗЕ
У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ
С ПОМОЩЬЮ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ
ГРАНУЛИРОВАННЫХ АНТИГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ
С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
2
6
Формат 60х84/16. Тираж 100 экз.
Бумага офс. Уч.-печ. л.
Заказ №
Отпечатано в типографии
2
7