Молек. биол._ Практикум (0.3Mб, doc)

Министерство образования и науки Российской Федерации
Сибирский федеральный университет
Молекулярная биология
Методические указания к семинарским занятиям студентов
Специальность 020208.65 - Биохимия
Красноярск
СФУ
2012
УДК 575.173(07)
ББК 28.070.я73
Составитель: Т.Н. Субботина
Молекулярная биология: методические указания к семинарским занятиям
[Текст] / cост.: Т.Н. Субботина. – Красноярск: Сибирский федеральный
университет, 2009. –24 с.
В пособии представлены методические указания к семинарским
занятиям для работы студентов по разделу «Методы ДНК-диагностики»;
Предназначено для студентов специальности 020208.65 – «Биохимия».
Предложенные методические указания могут быть использованы
преподавателями высшей школы при обучении студентов дисциплине
«Молекулярная биология».
УДК 575.173(07)
ББК 28.070.я73
© Сибирский
федеральный университет, 2009
ВВЕДЕНИЕ
Семинарские занятия для студентов по курсу «Молекулярная
биология» включают вопросы для обсуждения на занятии и литературу,
рекомендуемую к занятию. Учебное пособие предназначено для студентов,
обучающихся по специальности «Биохимия».
Цель изучения дисциплины: формирование у студентов знаний об
особенностях строения и свойств макромолекул, входящих в состав живой
клетки, структурно-функциональной организации генетического аппарата
клеток и механизма реализации наследственной информации.
В задачи изучения дисциплины входит:
● ознакомление студентов с современными представлениями о
структурной организации нуклеиновых кислот, механизмами реализации
наследственной информации, регуляцией экспрессии генов и основными
методами молекулярной биологии;
● формирование представлений о принципах использования знаний и
достижений молекулярной биологии для решения задач в области медицины
и клинической лабораторной диагностики, основанных на использовании
методов прямой и непрямой ДНК-диагностики.
Семинарские занятия направлены на изучение ключевых принципов
генодиагностики – совокупности современных методов ДНК-анализа,
которые в настоящее время находят всё более широкое применение в
различных областях клинической медицины.
В результате изучения дисциплины студент должен:
знать: теоретические основы, достижения и проблемы современной
биохимии и молекулярной биологии;
уметь: использовать знание фундаментальных основ и методических
подходов
клеточной
биологии
для
решения
медицинских,
сельскохозяйственных проблем, решения задач медицинской биохимии,
диагностики состояния и охраны природной среды.
владеть: широким спектром аналитических методов и подходов
биоорганической и биологической химии, молекулярной биологии.
Разделы дисциплины и виды занятий в часах
Семинарские занятия по курсу «Молекулярная биология» включает
изучение теоретического материала. Трудоемкость семинарских занятий – 16
часов. Семинарские занятия планируются по каждому разделу дисциплины.
Тематический план занятий
№
Разделы дисциплины
п/п
1
1
2
3
2
Синтез
ДНК
и
теломераза
Экспрессия генов и
транскрипционные
факторы
Синтез белков, их
фолдинг
и
модификации
Лекции,
Часов
СЗ,
Часов
ЛР
часов
Самостоятельная
работа, часов
3
4
5
6
10ч
10ч
-
8ч
16ч
2ч
-
4ч
6ч
4ч
-
4ч
ПЕРЕЧЕНЬ ТЕМ ДЛЯ СЕМИНАРСКИХ ЗАНЯТИЙ
Темы для семинарских занятий курса «Молекулярная биология»
сгруппированы
по
разделам
дисциплины
вместе
с
перечнем
рекомендованных источников информации.
Семинарские занятия по курсу «Молекулярная биология» включает
изучение теоретического материала. Трудоемкость семинарских занятий – 16
часов. Семинарские занятия планируются по каждому разделу дисциплины.
№
п/
п
1
1
2
3
Модули
Дисциплины
2
Синтез
ДНК
теломераза
Темы семинарских занятий
3
и Тема 1.1. Типы мутаций при наследственных
заболеваниях;
Тема 1.2. Методы прямой ДНК-диагностики;
Тема 1.3. Количественная ПЦР;
Тема 1.4. Методы секвенирования;
Тема 1.5. Косвенная ДНК-диагностика;
Экспрессия генов и Тема 2.1. Метод биочипирования;
транскрипционные
факторы
Синтез белков, их Тема 3.1. Уровни структурной организации
фолдинг
и белков;
модификации
Тема
3.2.
Генетическая
классификаия
наследственных заболеваний;
Тема
3.3.
Медико-генетическое
консультирование;
Трудоемкость
, часов
10ч
2ч
4ч
РАЗДЕЛ 1. СИНТЕЗ ДНК И ТЕЛОМЕРАЗА
ТЕМА 1.1. Типы мутаций при наследственных заболеваниях – 2ч
Цель занятия (семинара): Разобрать все основные типы мутаций,
способных привести к развитию наследственных заболеваний, а также
заболеваний, обусловленных возникновением соматических мутаций.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Типы
генетической изменчивости.
Классификация мутаций.
Мутационная теория. Этапы мутагенеза. Генные мутации. Международная
система обозначения генных мутаций. Хромосомные мутации: внутри- и
межхромосомные мутации. Геномные мутации. Механизмы действия
мутагенов. Механизмы репарации. Модификационная изменчивость. Типы
модификаций. Фенокопии и морфозы. Точковые мутации. Структурные
мутации. Патогенетические эффекты генных мутаций. Современная
номенклатура мутаций. Разновидность структурных мутаций: экспансия
тринуклеотидных повторов. Механизм происхождения динамических
мутаций; Заболевания, обусловленные динамическими мутациями;
Негативно-позиционный эффект, или эффект положения (variegationэффект). Соматические мутации и заболевания, обусловленные
возникновением таких мутаций (на примере мутации JAK2 в гене янускиназы).
Основная литература:
1.
Генетика. Учебник для вузов/ Под ред. В.И. Иванова.- М.: ИКЦ
«Академкнига», 2006.- 638с. (библиотека СФУ – 6шт.).
2.
Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика.- Изд. 4-е, Новосибирск, 2007. - 478 с. (библиотека СФУ – 30шт.).
3.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
4.
Шевченко В.А., Топорнина Н.А., Стволинская Н.С. Генетика
человека.- Москва, 2004. - 239 с. (библиотека СФУ – 3шт.).
5.
Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия.- Новосибирск:
Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с. (библиотека СФУ – 5шт.).
Дополнительная литература:
1.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
2.
Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Маркова Е.Д.
Новый механизм мутации у человека: экспансия тринуклеотидных повторов
(обзор) // Генетика. - 1995. - №31. - с. 1478-1489.
3.
Медицинские лабораторные технологии: Справочник/ под ред.
А.И. Карпищенко. – СПб: Интермедика, 1999. – 656с.
4.
Наглядная медицинская генетика: учебное пособие. Притчард
Д.Дж., Корф Б.Р. Перевод с англ. / Под ред. Н.П. Бочкова. 2009. - 200 с.
5.
Antonarakis S.E., and the Nomenclature Working Group.
Recommendations for a nomenclature system for human gene mutations // Hum.
Mutat. – 1998. – № 11. – P. 1-3.
6.
Richards R.I., Sutherland G.R. Dynamic mutations: a new class of
mutations causing human disease // Cell. - 1992. - № 70. - P.709-712.
7.
Shoffner J.M., Wallace D.C. Mitochondrial genetics: principles and
practice // Am. J. Hum. Genet. - 1992. - № 51. - P.1179-1186.
ТЕМА 1.2. Методы прямой ДНК-диагностики – 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить ключевые вопросы ПЦР – как
основного метод прямой ДНК-диагностики.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Понятие прямой ДНК-диагностики. Материал для проведения ДНКдиагностики. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Общая схема
проведения ПЦР. Использование электрофореза как метода детекции
продуктов ПЦР-анализа. Конструирование праймеров. Термостабильные
ДНК-зависимые ДНК-полимеразы. Использование рестрикционного анализа
для выявления точковых мутаций. Критические компоненты реакции ПЦР:
специфичность реакции, точность синтеза ДНК и его эффективность.
Основные компоненты реакционной смеси при проведении ПЦР: праймеры,
термостабильные
ДНК-зависимые
ДНК-полимеразы,
матричные
нуклеиновые кислоты, ионы двухвалентных металлов, свободные
дезоксирибонуклеотидтрифосфаты
(dNTPs).
Характеристики
ПЦР:
температурный режим, время элонгации праймеров, количество циклов,
необходимое для проведения амплификации, объем реакционной смеси.
Проблемы, возникающие при постановке ПЦР. Появление
неспецифических продуктов ПЦР. Дополнительные неспецифические
продукты. Димеры праймеров. Появление продуктов ПЦР, не
соответствующих по размерам ожидаемым. Дискретные "неспецифические"
продукты. Высокомолекулярный "шмир" на фоне дискретных продуктов
ПЦР или при полном их отсутствии. Низкий выход или полное отсутствие
продуктов ПЦР.
Основная литература:
1.
Волова Т.Г., Зобова Н.В., Франк Л.А. и др. Современные
аппаратура и методы исследования биологических объектов систем / под ред.
Э.Дж. Синкси и Т.Г. Воловой. Красноярск: Сибирский федеральный ун-т,
Институт биофизики СО РАН 2011. – 480 с. (библиотека СФУ – 178 шт.).
2.
Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология: принципы и
применение/ под ред. Н.К. Янковский.- Москва: Мир, 2002.- 589 с.
(библиотека СФУ – 21 шт.).
3.
Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Молекулярное клонирование.
М.: Мир, 1986 (библиотека СФУ – 1шт.).
4.
Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л. Молекулярная биология. - М.:
ООО «Медицинское информационное агентство», 2003. (библиотека СФУ –
5шт.).
5.
ПЦР «в реальном времени» / Под ред. Д.В. Ребрикова: 2-е изд.М. БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009.- 223с. (библиотека СФУ – 1шт.).
Дополнительная литература:
1.
Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция (обзор).
Молекулярная биология, 1991.- Т.25, вып.4.- С. 926-936.
2.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
3.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
4.
Коничев А.С., Севастьянова Г.А. Молекулярная биология. - М.:
Издательский центр «Академия», 2008. (библиотека СФУ – 71шт.).
5.
Маркова Е.В. Молекулярно-генетические методы: метод.
Указания/ Красноярск. Гос. Ун-т.- Красноярск, 2006.- 31с.
6.
Медицинские лабораторные технологии: Справочник/ под ред.
А.И. Карпищенко. – СПб: Интермедика, 1999. – 656с.
7.
Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы.- Т. 1:
Генная и белковая инженерия.- М.: Наука.- 2004.- 526с.
8.
Патрушев Л.И. Экспрессия генов. – М.: Наука, 2000. – 830 с.
9.
Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия: Учеб.-справ,
пособие. - 2-е изд., - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.
(библиотека СФУ – 5шт.).
10. Erlich H.A. PCR technology. - Perkin-Elmer Cetus, 1993.- 247 p.
11. Grompe M. The rapid detection of unknown mutations in nucleic
acids // Nat. Genet. - 1993. - №5. - P. 111-117.
12. Orita M., Suzuki Y., Sekiya Т., Hayashi K. Rapid and sensitive
detection of point mutations and DNA polymorphisms using polymerase chain
reaction // Genomics. - 1989.- № 5. - P. 874-879.
ТЕМА 1.3. Количественная ПЦР – 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить основные разновидности ПЦР и
особенности количественной ПЦР (ПЦР в реальном времени), а также
системы обнаружения продуктов ПЦР в реальном времени.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Стандартная ПЦР. Множественная ПЦР. Асимметричная ПЦР.
Гнездовая ПЦР. ПЦР с "горячим стартом". ПЦР, сопряженная с обратной
транскрипцией. Амплификация больших участков ДНК с высокой
точностью. ПЦР in situ. Аллель-специфическая ПЦР. Зонды типа "висячий
замок" (padlock probes). ПЦР, чувствительная к метилированию матрицы.
Иммуно-ПЦР. Количественная ПЦР (ПЦР в реальном времени). Системы
обнаружения продуктов ПЦР в реальном времени: Система TaqMan; Система
FRET; «Молекулярные маяки»; Флуоресцентные красители, связывающиеся
с ДНК на примере SYBR Green. Праймеры типа «Скорпион».
Амплификация последовательностей с неизвестной первичной
структурой с помощью методов методов, объединенных под общим
названием односторонней ПЦР (single-sided PCR). Использование ПЦР для
продвижения вдоль ДНК от участка с известной первичной структурой в
сторону
неизвестной
последовательности.
Понижение
сложности
амплифицируемой ДНК с помощью ПЦР (метод RAPD). Одновременная
амплификация последовательностей целого генома. Альтернативные
способы амплификации нуклеиновых кислот in vitro. Лигазная цепная
реакция. Изотермические системы амплификации нуклеиновых кислот,
основанные на транскрипции. Изотермическая самоподдерживающаяся
репликация последовательностей (isothermal self-sustained sequence replication
3SR). Амплификация с замещением цепи ДНК (strand displacement
amplification - SDA). Использование Qp-репликазы для амплификации
нуклеотидных последовательностей. Амплификация по типу катящегося
кольца.
Основная литература:
1.
Волова Т.Г., Зобова Н.В., Франк Л.А. и др. Современные
аппаратура и методы исследования биологических объектов систем / под ред.
Э.Дж. Синкси и Т.Г. Воловой. Красноярск: Сибирский федеральный ун-т,
Институт биофизики СО РАН 2011 – 480 с. (библиотека СФУ – 178 шт.).
2.
Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология: принципы и
применение / под ред. Н. К. Янковский. - Москва: Мир, 2002. - 589 с.
(библиотека СФУ – 21 шт.).
3.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
4.
Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л. Молекулярная биология. - М.:
ООО «Медицинское информационное агентство», 2003. (библиотека СФУ –
5шт.).
5.
ПЦР «в реальном времени» / Под ред. Д.В. Ребрикова: 2-е изд.М. БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009.- 223с. (библиотека СФУ – 1шт.).
Дополнительная литература:
1.
Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция (обзор).
Молекулярная биология, 1991.- Т.25, вып.4.- С. 926-936.
2.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
3.
Коничев А.С., Севастьянова Г.А. Молекулярная биология. - М.:
Издательский центр «Академия», 2008. (библиотека СФУ – 71шт.).
4.
Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Молекулярное клонирование.
М.: Мир, 1986 (библиотека СФУ – 1шт.).
5.
Маркова Е.В. Молекулярно-генетические методы: метод.
Указания/ Красноярск. Гос. Ун-т.- Красноярск, 2006.- 31с.
6.
Медицинские лабораторные технологии: Справочник/ под ред.
А.И. Карпищенко. – СПб: Интермедика, 1999. – 656с.
7.
Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы.- Т. 1:
Генная и белковая инженерия.- М.: Наука.- 2004.- 526с.
8.
Патрушев Л.И. Экспрессия генов. – М.: Наука, 2000. – 830 с.
9.
Erlich H.A. PCR technology. - Perkin-Elmer Cetus, 1993.- 247 p.
10. Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M./Real time
quantitative PCR // Genome Res.- 1996. - № 6. - P.986-994.
11. Orita M., Suzuki Y., Sekiya Т., Hayashi K. Rapid and sensitive
detection of point mutations and DNA polymorphisms using polymerase chain
reaction // Genomics. - 1989.- № 5. - P. 874-879.
ТЕМА 1.4. Методы секвенирования – 2ч.
Цель занятия (семинара): Обсудить использование секвенирования
ДНК по методу Сэнгера, а также метод пиросеквенирования для проведения
мутационного скрининг гена.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Методы расшифровки нуклеотидной последовательности фрагментов
ДНК. Секвенирование ДНК по Сэнгеру: «плюс-минус» метод.
Секвенирование ДНК по Сэнгеру: метод "терминаторов".Секвенирование
ДНК по Максаму и Гилберту: метод химической деградации.
Автоматическое секвенирование ДНК. Флуоресцентные красители.
Полимеразы, используемые при секвенировании ДНК. Секвенирующий гель
и электрофорез. Современные секвенаторы.
Cеквенирование ДНК по методу Сэнгера, суть метода. Терминация
синтеза ДНК под действием ddNTP. Область применения секвенирования
ДНК по методу Сэнгера. Использование метода Сэнгера для анализа SNP.
Вид авторадиограммы в случае гетерозиготной мутации (например,
нуклеотидной замены).
Прибор для генетического анализа PyroMark Q24 - секвенатор нового
поколения. Схема проведения исследования с помощью прибора для
генетического анализа PyroMark Q24: Выделение ДНК; Постановка ПЦР;
Получение одноцепочечной ДНК; Проведение секвенирования; Анализ
результатов исследования. Принцип генетического анализа на основе
реакции пиросеквенирования: Необходимые реактивы и расходные
материалы для пиросеквенирования с помощью прибора для генетического
анализа PyroMark Q24. Уникальная станция вакуумной пробоподготовки
PyroMark Q24 Vacuum Workstation для получения очищенной
одноцепочечной ДНК. Анализ результатов исследования c использованием
программного обеспечения PyroMark Q24 Software. Уникальные
возможности генетической системы PyroMark Q24: Возможность
исследования частоты аллельной встречаемости; Возможность определения
процента метилированной ДНК на заданном участке; Возможность
обнаружения единичных однонуклеотидных замен (SNP), вставок и делеций;
Анализ метилирования может быть совмещен с типированием
однонуклеотидных замен в течение одного исследования; От 1 до 24
образцов могут быть проанализированы меньше чем за 15 минут. Детекция
генетических полиморфизмов с помощью систем генетического анализа на
основе пиросеквенирования. Преимущества пиросеквенирования над
секвенированием по методу Сэнгера. Сравнительный анализ времени
исследования, используя технологию пиросеквенирования и классические
методы секвенирования. Ограничения пиросеквенирования.
Основная литература:
1.
Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология: принципы и
применение / под ред. Н. К. Янковский. - Москва : Мир, 2002. - 589 с.
(библиотека СФУ – 21 шт.).
2.
Секвенирование ДНК: монография / Российская академия наук.
Уфимский научный центр. - Москва: Наука, 1999. - 429 с. (библиотека СФУ –
1 шт.).
3.
Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия: Учеб.-справ,
пособие. - 2-е изд., - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.
(библиотека СФУ – 5шт.).
Дополнительная литература:
1.
Горбунова В. Н., Баранов В. С. Введение в молекулярную
диагностику и генотерапию наследственных заболеваний // СПб.: Спец.Лит.
1997. 287с.
2.
Миронов К. О., Дунаева Е. А., Дрибноходова О. П., Дедков В. Г.,
Шипулин Г. А. Детекция генетических полиморфизмов с использованием
системы генетического анализа на основе пиросеквенирования PyroMark Q24
// Справочник заведующего КДЛ . № 4. 2011. С. 39-48.
3.
Nyren P., Lundin A. Enzymatic method for continuous monitoring of
inorganic pyrophosphate synthesis / Anal. Biochem. - 1985. - Vol.151, №2. –
P.504-509.
4.
Nyren P. Enzymatic method for continuous monitoring of DNA
polymerase activity / Anal. Biochem. – 1987. – Vol.167, №2. – P.235-238.
5.
Hyman E.D. A new method of sequencing DNA / Anal. Biochem. –
1988. – Vol.174, №2. – P.423-436.
6.
Sanger F., Coulson A.R. A rapid method for determining sequences in
DNA by primed syntesis with DNA polymerase, J. Mol. Biol., 1975, v. 94, p. 444448.
7.
Sanger F., Niclein S., Coulson A.R. DNA sequencing with chainterminating inhibitors, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v. 74, p. 5463-5467.
8.
Maxam A.M., Gilbert W. A new method of sequencing DNA, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v. 74, p. 560-564.
9.
Tabor S., Richardson C.C. A single residue in DNA polymerases of
the Escherichia coli DNA polymerase I family is critical for distinguishing
between deoxy- and dideoxyribonucleotides. (1995) PNAS USA, 92(14), 63396343.
10. Ahmadian A, Ehn M, Hober S. Pyrosequencing: History, biochemistry
and future. Clin Chim Acta, Sep 2005.
11. Ahmadian, A., Lundeberg, J. Review - A Brief History of Genetic
Variation Analysis. BioTechniques, May 2002; 32: 1122-1137.
12. Daly AK. Development of analytical technology in pharmacogenetic
research. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. Jan 2004; 369(1):
133.
13. Ekström, B., Alderborn, A., Hammerling, U. Pyrosequencing for
SNPs. Proc. SPIE, Mar 2000; 3926: 134-139.
14. Fakhrai-Rad, H.., Pourmand, N., Ronaghi, M. Pyrosequencing: An
accurate detection platform for single nucleotide polymorphisms. Human
Mutation, 2002; 19(5).
15. Gut IG. Automation in genotyping of single nucleotide
polymorphisms. Hum Mutat. Jun 2001; 17(6): 475-92. Review.
16. Kling J. The search for a sequencing thoroughbred. Nat Biotechnol.
2005 Nov;23(11):1333-5.
17. Langaee T, Ronaghi M. Genetic variation analyses by
Pyrosequencing. Mutat Res, Jun 2005; 573(1-2): 96-102.
18. Marsh S, King CR, Garsa AA, and McLeod HLPyrosequencing of
clinically relevant polymorphisms.Methods Mol Biol, Jan 2005; 311: 97-114.
19. Marziali, A., Akeson, M.,New DNA Sequencing Methods. Annual
Rev. Biomed. Eng. 2001; 3: 195-223.
20. Murrell A, Rakyan VK, Beck S. From genome to epigenome. Hum.
Mol. Genet., Apr 2005; 14: 3 - 10.
21. Ronaghi, M. Pyrosequencing sheds light on DNA sequencing,
Genome Research, 2001; 11: 3-11.
22. Ronagi M, Elahi E. Discovery of Single Nucleotide Polymorphisms
and mutations by Pyrosequencing. Comp Funct Gemon. 2002; 3: 51-56.
23. Rose CM, Marsh S, Ameyaw MM, McLeod HL. Pharmacogenetic
analysis of clinically relevant genetic polymorphisms. Methods Mol Med.
2003;85:225-37. Review.
24. Sauer S, Lange BM, Gobom J, Nyarsik L, Seitz H, Lehrach H.
Miniaturization in functional genomics and proteomics. Nat Rev Genet. Jun 2005;
6(6): 465-76.
25. Shendure J, Mitra RD, Varma C, Church GM. Advanced sequencing
technologies: methods and goals. Nature Reviews Genetics, May 2004; 5(5), 335 344.
26. Smith C. Genomics: Getting down to details. Nature. Jun 2005; 435:
991-994. Advertising Feature.
27. Sylvan, A. A new light on DNA. American Biotechnology
Laboratory; Aug 2000.
28. Syvanen AC. Accessing genetic variation: genotyping single
nucleotide polymorphisms. Nat Rev Genet. Dec 2001; 2(12): 930-42.
29. Tooke N and Pettersson M. CpG methylation in clinical studies:
utility, methods, and quality assurance. IVDT. Nov 2004; 41.
30. Winge, M. Pyrosequencing - a new approach to DNA analysis.
Innovations in Pharmaceutical Technology, 2000; vol 00, 4: 18-24.
ТЕМА 1.5. Косвенная ДНК-диагностика – 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить основные вопросы, касающиеся
косвенной ДНК-диагностики и анализа генетического сцепления.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Принципы косвенной ДНК-диагностики.
Показания к проведению косвенной ДНК-диагностики. Суть косвенной
ДНК-диагностики – анализ полиморфных (гипервариабельных) генетических
маркеров. Термин «сцепление» - один из ключевых терминов клинической
генетики. Различная степень сцепления исследуемых хромосомных локусов и
их рекомбинация при кроссинговере. Пример косвенной ДНК-диагностики
аутосомно-доминантного заболевания с помощью полиморфного (СА)nмаркера. Недостатки косвенной ДНК-диагностики: необходимость
проведения анализа ДНК нескольких членов семей; неприменимость для
диагностики спорадических случаев; вероятность ошибки, связанная с
возможностью рекомбинации в мейозе между геном болезни и исследуемым
маркером. Случаи, когда проведение косвенной ДНК-диагностики
невозможно. Использование нескольких маркеров для повышения точности и
информативности косвенной ДНК-диагностики. Понятие гаплотипа. Случаи,
когда анализ с помощью гаплотипирования по своей точности приближается
к результату, полученному при прямой ДНК-диагностике. Использование
косвенной
ДНК-диагностики
при
заболеваниях,
гены
которых
идентифицированы, но имеют большой размер и сложную молекулярную
организацию. Применение косвенной ДНК-диагностики в качестве
дополнительного диагностического метода у лиц из группы риска при
отрицательных результатах традиционного мутационного скрининга.
Анализ сцепления и картирования генов наследственных заболеваний.
Изучение генетического сцепления для определения точной
локализации генов наследственных заболеваний на определённой хромосоме
– генетического картирования. Методы, позволяющие картировать
неизвестный ген в конкретном хромосомном локусе: клиникогенеалогический, цитогенетический, гибридизация in situ (флюоресентная
гибридизация in situ, FISH), метод гибридных клеток и др.; ограничения этих
методов. Метод картирования генов наследственных болезней человека –
linkage-анализ – анализ сцепления искомого гена с набором точно
локализованных генетических маркеров.
Основная литература:
1.
Генетика. Учебник для вузов/ Под ред. В.И. Иванова.- М.: ИКЦ
«Академкнига», 2006.- 638с. (библиотека СФУ – 6шт.).
2.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
3.
Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Молекулярное клонирование.
М.: Мир, 1986 (библиотека СФУ – 1шт.).
4.
Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. М.: Мир, 1999.
(библиотека СФУ – 13шт.).
5.
Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. Т.1.- М.: Мир, 1998.373с. (библиотека СФУ – 13шт.).
Дополнительная литература:
1.
Бочков Н.П. Клиническая генетика. - М.: Медицина, 1997.- 288 с.
2.
Горбунова В.Н. Молекулярные основы медицинской генетики. —
СПб.: Интермедика, 1999. - 212 с.
3.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
4.
Наглядная медицинская генетика: учебное пособие. Притчард
Д.Дж., Корф Б.Р. Перевод с англ. / Под ред. Н.П. Бочкова. 2009. – 200 с.
5.
Grompe M. The rapid detection of unknown mutations in nucleic
acids // Nat. Genet.-1993.- №5.-р. 11-117.
6.
Modern Genetic Analysis / Griffiths A., Gelbart W.M., Miller J.H.NY.: Freeman, 1999.
РАЗДЕЛ 2. ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ И ТРАНСКРИПЦИОННЫЕ
ФАКТОРЫ
ТЕМА 2.1. Метод биочипирования – 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить методы параллельного
молекулярно-генетического анализа; в частности метод использования ДНКбиочипов для определения SNP и выявления и идентификации хромосомных
транслокаций при острых и хронических лейкозах методом гибридизации на
биологических микрочипах.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Основные элементы технологии и принцип работы биочипов.
Сравнение технологий поверхностных и гелевых микрочипов. Биочипы для
анализа возбудителей инфекционных заболеваний. Биочипы для анализа
генома человека. Белковые биочипы. Биочипы для медицинской
диагностики. Обработка данных, полученных с помощью молекулярных
биочипов. Основные типы олигонуклеотидных биочипов и их приложения.
Экспрессионные олигонуклеотидные биочипы. Специализированные
олигонуклеотидные биочипы для изучения полиморфизма в геномных
последовательностях ДНК. Применение олигонуклеотидных биочипов для
детекции ОНП в медицине. Биочипы с полным комбинаторным перебором lмерных олигонуклеотидов (или универсальные олигонуклеотидные чипы;
англоязычный термин «generic microchips»).
Принцип работы биочипов, разработанных в Институте молекулярной
биологии им. В.А. Энгельгардта РАН (ИМБ РАН) на примере наборов
реагентов «Фибр-биочип» (для выявления и диагностики генетической
предрасположенности к развитию нарушений системы свертывания крови
методом гибридизации на биологическом микрочипе), а также «ЛКбиочип» (для выявления и идентификации хромосомных транслокаций при острых
и хронических лейкозах методом гибридизации на биологических микрочипах).
Набор реагентов «ФИБР-биочип» предназначен для выявления
генетической предрасположенности к развитию нарушений системы
свертывания крови в образцах крови человека методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) с последующей гибридизацией на биологическом микрочипе.
Анализ генетического полиморфизма ДНК является одной из наиболее
актуальных проблем современной медицинской генетики. В значительной
мере повышенный интерес к данной проблеме обусловлен выявлением
четких
ассоциаций определенной наследственной вариабельности
(полиморфизма) генома с различными, в том числе и с наиболее частыми
тяжелыми
хроническими
заболеваниями
(сердечно-сосудистые,
онкологические, психические и др.). Самое большое значение изучение
полиморфизма генов системы фибринолиза (гемостаза) представляет для
предупреждения патологии беременности, инфаркта миокарда, атеросклероза
и других сердечно-сосудистых заболеваний. Причиной наследственной
тромбофлибии (одного из вариантов патологии беременности) является
полиморфизм генов системы свертывания крови. Анализ полиморфизма этих
генов особенно актуален при проведении обследований риска тромбофилии у
беременных или у женщин, планирующих беременность. В настоящее время
при диагностике наследственных форм тромбофлибии основное внимание
уделяется анализу полиморфизма в генах PAI-1, GPIIIa/b, FV, FII, FGB,
MTHFR.
Набор реагентов «ЛК-Биочип» предназначен для выявления
и
идентификации основных хромосомных транслокаций при острых и хронических
лейкозах в образцах костного мозга или периферической крови человека
методом мультиплексной полимеразной цепной реакции - обратной
транскрипции (ОТ-ПЦР) с последующей гибридизацией на биологическом
микрочипе. При постановке диагноза и лечении лейкозов большое значение
имеют не только клинические данные, но и результаты молекулярногенетического анализа. В настоящее время известно более 50 различных
транслокаций, характерных для определенных типов лейкозов. Многие из
этих транслокаций приводят к аномальной экспрессии соответствующих
белков, в том числе транскрипционных факторов. При этом, помимо
гиперэкспрессии белка, может наблюдаться экспрессия химерного белка,
обладающего онкогенным потенциалом. В этом случае, удобным объектом
для молекулярно-биологических скрининговых исследований является
химерная ДНК или РНК. С помощью ОТ-ПЦР химерные молекулы РНК
могут быть обнаружены в опухолевых клетках даже после окончания
лечения, при минимальной остаточной болезни.
Основная литература:
1. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Молекулярное клонирование. М.:
Мир, 1986 (библиотека СФУ – 1шт.).
2. Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. М.: Мир, 1999. (библиотека
СФУ – 13шт.).
3. Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. Т.1.- М.: Мир, 1998.- 373с.
(библиотека СФУ – 13шт.).
Дополнительная литература:
1.
Грядунов Д.А., Зименков Д.В., Михайлович В.М., Наседкина
Т.В., Дементьева Е.И., Рубина А.Ю., Паньков С.В., Барский В.Е., Заседателев
А.С. / Технология гидрогелевых биочипов и ее применение в медицинской
лабораторной диагностике. (2009) Лаборатория. т.3 (11). стр. 10-14.
2.
Гусина А.А., Гусина Н.Б. / Генетические дефекты про- и
антикоагулянтных белков как факторы риска венозных тромбозов.Медицинские новости. – 2006. – №9. – С. 10-14.
3.
Калашникова
Е.А.,
Кокаровцева
С.Н.
/
Ассоциация
наследственных факторов тромбофилии с невынашиванием беременности у
женщин в русской популяции.- Медицинская генетика, 2005.- Т4.- №8.С.386-390.
4.
Колчинский А.М., Грядунов Д.А., Лысов Ю.П., Михайлович
В.М.,. Наседкина Т.В., Турыгин А.Ю., Рубина А.Ю., Барский В.Е.,
Заседателев А.С. / Микрочипы на основе трехмерных ячеек геля: история и
перспективы. Молекулярная биология. 2004. Т. 38. №1. С. 5.
5.
Лысов Ю.П., Флорентьев В.Л., Хорлин А.А., Храпко К.Р., Шик
В.В., Мирзабеков А.Д. / Определение нуклеотидной последовательности
ДНК гибридизацией с олигонуклеотидами. Новый метод. ДАН СССР. 1988.
Т. 303. №6. С. 1508.
6.
Мирзабеков А.Д. / Биочипы в биологии и медицине XXI века.
Вестник российской академии наук. 2003.- Т. 73.- № 5.- с. 412.
7.
Наседкина Т.В., Гусева Н.А., Митяева О.Н., Гра О.А., Федорова
О.Е., Кожекбаева Ж.М., Глотов А.С., Паньков С.В., Юрасов Р.А., Чудинов
А.В., Заседателев А.С. Микрочипы в диагностике лимфопролиферативных
заболеваний. Молекулярная медицина 2007, 3: 54-60.
8.
Озолинян Л.А., Патрушев Л.И., Шполянская Н.Ю и др. /
Распространенность мутаций в генах фактора V (G1691A, Leiden),
протромбина (G20210А) и метелентетрагидрофолатредуктазы среди
беременных московской популяции (С677Т) и их связь с патогенезом.Тромбоз, гемостаз, реология. - 2001.- N 1 (5) - C. 47-53.
9.
Субботина Т.Н., Горбенко А.С. Опыт использования технологии
«БИОЧИП» в генетической диагностике тромбогенных полиморфизмов //
«Бюллетень Лабораторной Службы» Сборник публикаций, издаваемый
Красноярской
Краевой
Ассоциацией
МЛД,
2011,
стр.29-35,
[http://www.labmedica.ru]
10. Чечеткин В.Р., Прокопенко Д.В., Макаров А.А., Заседателев А.С.
Биочипы для медицинской диагностики. Российские нанотехнологии, 2006,
том 1, № 1,2.
11. Brown P.O., Botstein D. Exploring the new world of the genome with
DNA microarrays // Nat. Genet. – 1999. .- № 21 (Suppl.). - P. 33-37.
12. Cheung V.G., Morley M., Aguilar F. et al. Making and reading
microarrays // Nat. Genet.- 1999.- 21 (Suppl.).- P. 15-19.
13. Khrapko K., Lysov Yu., Khorlin A., Shick V., Florentiev V.,
Mirzabekov, A. / Anoligonucleotide hybridization approach to DNA sequencing.
FEBS Letters. 1989. V.256. №1-2. P. 118.
14. McKenzie S.E., Mansfield E., Rappaport E. et al. Parallel molecular
genetic analysis // Eur. J. Hum. Genet. - 1998. - №6. - P.417-429.
15. Yershov G., Barsky V., Belgovskiy A. et al. DNA analysis and
diagnostics on oligonucleotide microchips // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1996. № 93. - P. 4913-4918.
16. http://www.biochip.ru/lab/apps/pf-biochip.html
17. http://www.biochip.ru/lab/research.html
РАЗДЕЛ
3.
МОДИФИКАЦИИ
СИНТЕЗ
БЕЛКОВ,
ИХ
ФОЛДИНГ
И
ТЕМА 3.1. Уровни структурной организации белков – 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить уровни структурной организации
белков и посттрансляционные модификации белков.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Многостадийный процесс образования пространственной структуры
белка. Стадии сворачивания полипептидной цепи в нативную конформацию.
Переход
от
состояния
«расплавленной
глобулы»
к
нативной
пространвтвенной структуре белка. Неспецифическая агрегация белка.
Лимитирующая стадия процесса сворачивания. Условия эффективного
спонтанного сворачивания полипептидной цепи in vitro. Механизмы
регуляции процесса сворачивания полипептидной цепи внутри клетки.
Ферменты, участвующие в фолдинге белка: протеиндисульфидизомераза и
пептидил-пролил-цис/транс-изомераза;
функии
данных
ферментов.
Специальные белки, увеличивающие эффективность сворачивания
полипептидной цепи в нативную конформацию. Молекулярные шапероны
(белки теплового шока). Классы шаперонов. Шаперонины, их отличие от
шаперонов. Посттрансляционная модификация белка, отличия от
процессинга. Посттрансляционная модификация на примере присоединения
глюкозы к аминогруппам некоторых белков, в частности гемоглобина, при ее
повышенном содержании в крови при диабете. Множественные формы
белка. Функциональный смысл реакций посттрансляционной модификации.
Индивидуальные реакции посттрансляционной модификации на примере
гидроксилирования остатков пролина в коллагене и иодирования
тиреоглобулина. Роль доменов в пространственной организации молекул
белков.
Основная литература:
1.
Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.:
Медицина, 2007.- 704 с. (библиотека СФУ – 30шт.).
2.
Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. М.: Мир, 1999.
(библиотека СФУ – 13шт.).
3.
Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. Т.1.- М.: Мир, 1998.373с. (библиотека СФУ – 13шт.).
4.
Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия: Учеб.-справ,
пособие. - 2-е изд., - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.
(библиотека СФУ – 5шт.).
Дополнительная литература:
1.
Мюльберг А.А. Фолдинг белка: Учебное пособие.- СПб.: Изд-во
С-Петерб. ун-та, 2004. – 156 с.
2.
Наградова Н.К. Внутриклеточная регуляция формирования
нативной
пространственной
структуры
белков/
Соросовский
образовательный журнал.- 1996.- №7.- С. 10-18.
3.
Проблема белка. Т. 1: Химическое строение белка / Е.М. Попов,
П.Д. Решетов, В.М. Липкин и др. – М.: Наука, 1995. – 496 с.
4.
Проблема белка. Т. 2: Пространственное строение белка / Е.М.
Попов, В.В. Демин, Е.Д. Шибанова. – М.: Наука, 1996. – 480 с.
5.
Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции
белков: Учеб. для биол. спец. вузов / Под ред. А.С. Спирина. – М.: Высш.
шк., 1996. – 335 с.
6.
Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функция
белков./ Под ред. Спирина А.С.- М.: Высш. шк., 1996.- 335 с.
7.
Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. Пер. с
англ./ Под ред. Арчакова А.И. и др.- М.: МАИК «Наука.Интерпериодика»,
2002.- 446 с.
ТЕМА 3.2.
заболеваний – 2ч
Генетическая
классификация
наследственных
Цель занятия (семинара): Обсудить основные вопросы, касающиеся
проблем классификации наследственных заболеваний.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Разработка рациональной классификации наследственных болезней –
ключевая проблема клинической генетики. Факторы, определяющие
трудности в систематизации наследственных болезней: Выраженный меж- и
внутрисемейный фенотипический полиморфизм; Многие наследственные
болезни характеризуются полисистемным и полиорганным поражением;
Отсутствие
биохимических
и
других
рутинных
лабораторноинструментальных маркеров, позволяющих провести чёткие нозологические
границы среди совокупности сходных клинических синдромов.
Классификация наследственных болезней на основе клинического подхода
(систематизация существующего разнообразия фенотипических признаков
по органно-тканевому принципу) и учёте основных типов наследования
(аутосомно-доминантный
аутосомно-рецессивный,
Х-сцепленный
доминантный и рецессивный, митохондриальный или материнский).
Генетическая гетерогенность наследственных болезней. Патогенетическая
взаимосвязь различных по своим проявлениям наследственных болезней,
обусловленных блоком соседних и взаимосвязанных этапов биосинтеза
субстратов (на примере различных нозологических форм, имеющих
отношение к фенилаланиновому метаболическому каскаду). Геномная
(генетическая) классификация, основанная на установлении прямой
взаимосвязи между изучаемой нозологической формой и повреждением
определенного гена и его белкового продукта, лежащим в основе болезни.
Первичный молекулярный дефект – ведущий систематизирующий признак в
геномной классификации. Генетическая гетерогенность наследственных
болезней на примере локусной гетерогенности (существование различных
генетических локусов на хромосомах, т. е. различных генов, мутации в
которых могут приводить к развитию сходных синдромов). Генетическая
гетерогенность наследственных болезней на примере аллельной
гетерогенности, при которой определенное наследственное заболевание
может вызываться различными мутациями одного и того же гена.
Разновидность структурных мутаций – экспансия тринуклеотидных повторов
– как разновидность аллельной гетерогенности. Состояние компаундгетерозиготности при наличии аллельной гетерогенности. Аллельные
заболевания – когда различные мутации в одном гене могут приводить к
развитию различных клинических фенотипов, квалифицируемых, как
отдельные нозологические формы. «Аллельная серия» - совокупность
аллельных заболеваний, различающихся по своим базовым фенотипическим
проявлениям, но связанных с повреждением одного гена. Подразделение
заболеваний на группы болезней , характеризующихся определенным типом
мутаций (динамические мутации, нарушение дозы гена, протяжённые
делеции митохондриальной ДНК и др.). Функциональный подход к
классификации наследственных болезней. Разделение болезней на группы в
зависимости от функции мутантного белка: Энзимопатии и патогенетически
близкие к ним заболевания с повреждением транспортных белков;
Заболевания, обусловленные повреждением структурных белков клетки.
Основная литература:
1.
Генетика. Учебник для вузов/ Под ред. В.И. Иванова.- М.: ИКЦ
«Академкнига», 2006.- 638с. (библиотека СФУ – 6шт.).
2.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
3.
OMIM (Online Mendelian Inheritance in Man: a catalog of human
genes and genetic disorders). www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim.
Дополнительная литература:
1.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
2.
Медицинские лабораторные технологии: Справочник/ под ред.
А.И. Карпищенко. – СПб: Интермедика, 1999. – 656с.
3.
Наглядная медицинская генетика: учебное пособие. Притчард
Д.Дж., Корф Б.Р. Перевод с англ. / Под ред. Н.П. Бочкова. 2009. – 200 с.
4.
Shoffner J.M., Wallace D.C. Mitochondrial genetics: principles and
practice // Am. J. Hum. Genet. - 1992. - № 51. - P.1179-1186.
ТЕМА 3.3. Медико-генетическое консультирование - 2ч
Цель занятия (семинара): Обсудить принципы медико-генетического
консультирования,
основанного
на
методах
ДНК-диагностики.
Генеалогический метод. Определение генетического риска. Этические и
организационные аспекты медико-генетического консультирования.
Вопросы для обсуждения на занятии:
Первичная и вторичная профилактика наследственных заболеваний
человека. Медико-генетическое консультирование – как основа первичной
профилактики наследственных заболеваний. Задачи медико-генетического
консультирования. Проведение геналогического анализа. Генеалогический
анамнез. Этапы генеалогического анализа: 1. Установление наследственной
природы болезни; 2. Составление родословной; 3. Определение типа
наследования; 4. Определение группы риска, а также расчёт конкретной
величины генетического риска. Расчётные значения вероятностей фенотипов
потомства при известных типах брака (для менделирующих заболеваний).
Расчёт генетического риска при неизвестных генотипах родителей.
Генетический риск при мультифакториальных заболеваниях. Использование
методов
ДНК-диагностики
в
практике
медико-генетического
консультирования для пренатальной, преимплантационной и ранней
доклинической диагностики носительства мутации. Методы получения
образцов ДНК для проведения пренатальной диагностики: хорионобиопсия,
плацентобиопсия, амниоентез, кордоцентез. Новый неинвазивный метод
установления генотипа плода – анализ ядросодержащих клеток плода,
присутствующих в крови матери. Развитие методов обогащения популяции
плодных клеток. Явление соматического мозаицизма – мутация возникшая de
novo на одной из хромосом в соматической клетке. Гонадный мозаицизм –
мутация, возникшая de novo на одной из хромосом в первичной половой
клетке. Этические и организационные аспекты медико-генетического
консультирования.
Основная литература:
1.
Генетика. Учебник для вузов/ Под ред. В.И. Иванова.- М.: ИКЦ
«Академкнига», 2006.- 638с. (библиотека СФУ – 6шт.).
2.
Клиническая биохимия/ Под ред. В.А. Ткачука. – М.: ГЭОТАРМедиа, 2004. – 512 с. (библ. СФУ – 3 шт.).
3.
Медицинская генетика/ Е. К. Тимолянова. - Ростов-на-Дону :
Феникс, 2003. - 303 с. (библ. СФУ – 3 шт.).
4.
Проблемы и перспективы молекулярной генетики. - Москва:
Наука, 2003 - .Том 2. - 2004. - 330 с. (библиотека СФУ – 13шт.).
5.
Шевченко В.А., Топорнина Н.А., Стволинская Н.С. Генетика
человека.- Москва, 2004. - 239 с. (библиотека СФУ – 3шт.).
Дополнительная литература:
1.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции.- М., 2010.
718с. (библиотека СФУ – 15шт.).
2.
Бочков Н.П. Клиническая генетика. - М.: Медицина, 1997.- 288 с.
3.
Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.:
Медицина, 2007.- 704 с. (библиотека СФУ – 30шт.).
4.
Горбунова В.Н. Молекулярные основы медицинской генетики. —
СПб.: Интермедика, 1999. - 212 с.
5.
Золотухина Т.В., Шилова Н.В. Клетки плода в крови матери:
новый неинвазивныи подход в пренатальнои диагностике наследственных
болезней // Вестник РАМН. - 1999. - № 12. - с. 45-48.
6.
Иллариошкин С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое
консультирование.- М.: Медицинское информационное агенство, 2004.- 207с.
7.
Медицинские лабораторные технологии: Справочник/ под ред.
А.И. Карпищенко. – СПб: Интермедика, 1999. – 656с.
8.
Молекулярная клиническая диагностика. Методы. / Под ред.
С.Херрингтона, Дж.Макги - М.: Мир, 1999.- 558 с.
9.
Наглядная медицинская генетика: учебное пособие. Притчард
Д.Дж., Корф Б.Р. Перевод с англ. / Под ред. Н.П. Бочкова. 2009. – 200 с.
10. Наследственные
синдромы
и
медико-генетическое
консультирование / СИ. Козлова, Н.С. Демикова, Е. Семанова, О.Е.
Блинникова. - М.: Практика, 1996.- 416 с.
11. Antonarakis S.E., and the Nomenclature Working Group.
Recommendations for a nomenclature system for human gene mutations // Hum.
Mutat. – 1998. – № 11. – P. 1-3.
12. Beaudet A.L. Making genomic medicine a reality // Am. J. Hum.
Genet. – 1999. – № 64. – P. 1-13.
13. Beaudet A.L., Tsui L.-C. A suggested nomenclature for designating
mutations // Hum. Mutat. – 1993. – № 2. – P.245-248.
14. Bennett R.L., Steinhaus K.A., Uhrich S.B. et al. Recommendations for
standardized human pedigree nomenclature // Am. J. Hum. Genet. Beaudet A.L.,
Tsui L.-C. A suggested nomenclature for designating mutations // Hum. Mutat. –
1993. – № 2. – P.245-248. 1995. – № 56. – P. 745-752.
15. Brice A. Unstable mutations and neurodegenerative disorders // J.
Neurol. — 1998.— № 245. — P. 505-510.
16. Grompe M. The rapid detection of unknown mutations in nucleic
acids // Nat. Genet. - 1993. - №5. - P. 111-117.
17. Huggins M., Block M., Karani S. et al. Ethical and legal dilemmas
arising during predictive testing for adult onset disease: the experience of
Huntington's disease // Am. J. Hum. Genet. - 1990. - № 47. - P. 4-12.
18. Natowicz M., Alper J.K., Alper J.S. Genetic discrimination and the
law // Am. J. Hum. Genet. - 1992. - № 50.- P. 465-475.
19. OMIM (Online Mendelian Inheritance in Man: a catalog of human genes
and genetic disorders). www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim.
Оглавление
Введение
3
ТЕМА 1.1. Типы мутаций при наследственных заболеваниях
5
ТЕМА 1.2. Методы прямой ДНК-диагностики
6
ТЕМА 1.3. Количественная ПЦР
7
ТЕМА 1.4. Методы секвенирования
9
ТЕМА 1.5. Косвенная ДНК-диагностика
12
ТЕМА 2.1. Метод биочипирования
13
ТЕМА 3.1. Уровни структурной организации белков
16
ТЕМА
18
3.2.
Генетическая
классификация
наследственных
заболеваний
ТЕМА 3.3. Медико-генетическое консультирование
19
Учебное издание
Молекулярная биология
Методические указания к семинарским занятиям
Составитель: Субботина Татьяна Николаевна
Подготовлено к публикации редакционно-издательским
отделом БИК СФУ
Подписано в печать 20 мая 2012 г. Формат 60х84/16.
Бумага офсетная. Печать плоская.
Усл. печ. л. (3).
Тираж 100 экз. Заказ 6531
Редакционно-издательский отдел
Библиотечно-издательского комплекса
Сибирского федерального университета
660041, г. Красноярск, пр. Свободный, 79
Тел/факс (391) 206-21-49. E-mail rio@sfu-kras.ru
http://rio.sfu-kras.ru
Отпечатано Полиграфическим центром
Библиотечно-издательского комплекса
Сибирского федерального университета
660041, г. Красноярск, пр. Свободный, 82а