ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ИРКУТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ
advertisement
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ИРКУТСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ОБЛАСТНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ИРКУТСКАЯ ГОРОДСКАЯ СТАНЦИЯ ПО БОРЬБЕ С БОЛЕЗНЯМИ ЖИВОТНЫХ На правах рукописи Карлова Елена Александровна КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ГОРМОНАЛЬНОГО СТАТУСА ПРИ ГЕПАТИТЕ У СОБАК НА ФОНЕ ЙОДДЕФИЦИТА И ПУТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор О. П. Ильина г. Улан-Удэ 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………… 3 ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………… 9 1.1. Особенности тиреоидной регуляции организма………………… 9 1.1.1. Применение в ветеринарной практике фумаровой кислоты……… 19 1.2. Патоморфологические изменения и особенности патологических 27 процессов в печени и пути ее коррекции ………………………………… 1.2.1. Применение пробиотиков в ветеринарии…………………………. 31 ГЛАВА II. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ... 36 2.1. Материалы и методы исследований…………………………………. 36 2.1.1. Применение фумаровой кислоты и карсила при гепатите печени 42 на фоне йоддефицита……………………………………………………… 2.1.2 Применение фумаровой кислоты при гепатите печени на фоне 49 йоддефицита……………………………………………………………….. 2.1.3 Применение фумаровой кислоты и интестевита при гепатите на 56 фоне йоддефицита………………………………………………………… ГЛАВА III. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 67 ГЛАВА IV. ВЫВОДЫ…………………………………………….. 80 ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ……… 81 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………. 82 ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………… 97 3 ВВЕДЕНИЕ Актуальность работы Йоддефицит относится к распространенным неинфекционным заболеваниям. Недостаток йода в организме провоцирует серьезные патологические изменения и отрицательно влияет на состояние здоровья, вызывая целый ряд недугов эндокринного характера. Часто выступает в качестве заболевания-провокатора (Оножеев А.А. Обмен веществ у животных при различных состояниях щитовидной железы // Ветеринания. 1984. №3. С. 58-59.). Иркутская область характеризуется недостаточностью йода в почве, растениях, воде и относится к зоне йодного дефицита средней тяжести, что, несомненно, вызывает заболевания щитовидной железы у животных, как в латентной, так и клинически выраженной форме болезни (Ильина О.П., Власов Б.Я., Тарнуев Ю.А. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота: Кн. 1: ИрГСХА. 2000. 102 с.; Йод и здоровье населения России: монография / Савченков М.Ф. и др., Новосибирск: ГУП «Наука». 2002. 287 с.). Учитывая то, что щитовидная железа регулирует обмен веществ и ее патология обуславливает переориентацию обменных процессов (Патент № 2450810 Устойчивая пероральная фармацевтическая композиция, содержащая агонисты рецепторов тиреоидных гормонов / Н. Гарг, РАО Венкатрамана М. Р. Гандхи, У. Вошберн, К. Келер, Й. Мальм; заявитель и патентообладаетль Каро БИО АБ, Бристоль-Мейерз Сквибб Компани. – № 2008142524/15; заявл 27.03.2007; опубл. 20.05.2012), полагаем, что неинфекционная патология печени у животных может быть связана с этим явлением. Заболевания печени составляют значительный процент незаразных болезней у домашних животных. В патологии обмена веществ у животных, важная роль принадлежит печени - самой крупной пищеварительной железе – функции которой сложны и многообразны, ее деятельность направлена на поддержание гомеостаза 4 организма, участие в распаде белков до аминокислот, в регуляции содержания сахара в крови (Денисенко В.Н. Диагностика и лечение болезней печени у собак /В.Н. Денисенко, Е.А. Кесарева. М.: Колос С, 2006. - 63с.; Балакирев H.A. Аминокислотный обмен в печени / H.A. Балакирев, O.E. Сидоров. М.: ИРИУС, 1998. – 146 с.; Кондрахин И.П. Алиментарные и эндогенные болезни животных // М.: Агропромиздат, 1989. – 256 с). Необходимо выделить также барьерную функцию печени – с желчью выделяются различные токсические вещества. Многочисленные функции печени могут нарушаться и проявляться в виде самостоятельных или в виде сопутствующих нарушений функций данного органа. Очень часто патологии печени сопровождаются расстройствами желудочно-кишечного тракта, а применение различных антибактериальных препаратов не всегда дает положительный эффект (Лисицина A.A. Биохимия печени / A.A. Лисицина: учебное пособие. М.: Наука, 1999. – 18 с.; Зайцев С.Ю. Биохимия животных / С.Ю, Зайцев: учебник. М.: Лань, 2004. – 340 с.) В последние годы широкое применение получили пробиотики, которые попадая в желудочно-кишечный тракт больных животных, подавляют (вытесняют) патогенную микрофлору, тем самым обеспечивая заселение ее нормальной микрофлорой и нормализацию обменных процессов (Скрыпник И.Н. Функциональная роль микробиоты кишечника и дифференцированные подходы к коррекции нарушений микробиоциноза // V Международный медицинский форум. 2009. №6/1. С. 51-53). Действие пробиотиков вызывает возрастающий интерес и активно изучается (Кухаренко Н.С. Коррекция хронического холодового стресса у крыс пробиотическим препаратом // Вестник КрасГАУ. 2009. №9. С. 129-131). Основу жизнедеятельности всех представителей животного мира составляет энергетический обмен. Распад веществ, поступающих в организм, сопровождается выделением энергии, которая используется для собственных нужд. Энергия освобождается в процессе гидролитического расщепления углеводов, жиров, белков в желудочно-кишечном тракте и образования 5 промежуточных и конечных продуктов обмена веществ (Лютинский С.И. Патологическая физиология животных. М.: ГЭОТАР – Медиа, 2011. 560 с.), однако при нарушении кормления животных, а также при заболеваниях пищеварительного аппарата этой энергии становится недостаточно для нормальной работы организма. В качестве энергетического субстрата предложено использовать фумаровую кислоту (Фисинин В.И., Околелова Т.М. Применение фумаровой кислоты в животноводстве // Зоотехния. - 1989. - № 11. - с. 35-38). Энергетическая емкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, но, учитывая более оперативные энергетические свойства фумарата, её можно использовать для энергетической поддержки критического состояния при стрессовых воздействиях и при патологиях обмена веществ. Полезная и адекватная метаболическая активность пробиотиков (продукция витаминов К, биотина, пиридоксина, цианокобаламина, тиамина и фолиевой кислоты, ниацина, гидролиз желчных солей и холестерина и регуляция его уровня, синтез аминокислот) в сочетании с фумаровой кислотой (Власов Б.Я. Малонатподобный эффект фумаровой кислоты при темновом стрессе у цыплят-бройлеров // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2009. №6. С. 100-102), очень важна при лечении патологии обмена веществ, и в частности при заболеваниях печени, особенно на фоне дефицита йода. Цель и задачи исследования Учитывая все стороны взаимосвязи состояния йоддефицита и обменных процессов в организме животных, была поставлена цель: изучить влияние различных препаратов при лечении патологии печени у собак на фоне йоддефицита. В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи: 1. Изучить клинический статус у больных животных при гепатите на фоне йоддефицита. 6 2. Выявить динамику биохимических показателей крови и гормонального статуса у больных животных при гепатите на фоне йоддефицита. 3. Оценить протективную эффективность фумаровой кислоты и пробиотического препарата интестевит в сравнении со стандартной терапией при гепатите на фоне йоддефицита у собак. Научная новизна Определены закономерности изменения гормонального статуса у собак при заболеваниях печени на фоне йоддефицита. Выявленные закономерности положены в основу алгоритма коррекции печеночной недостаточности на фоне йоддефицита, а также разработана концепция саногенеза гепатита под воздействием пробиотика интестевита в сочетании с фумаровой кислотой. Теоретическая и практическая значимость работы Выявлен положительный эффект пробиотика интестевит в сочетании с фумаровой кислотой при лечении гепатита на фоне йоддефицита у собак. Установленные параметры клинических, лабораторных, ультразвуковых исследований позволят улучшить диагностику и терапию при заболеваниях печени в условиях йоддефицита. Применение пробиотического препарата интестевит в сочетании с фумаровой кислотой способны повысить профилактическое и лечебное действие. Внедрение полученных результатов в практическую деятельность врачей-гепатологов и эндокринологов позволит сократить сроки течения у пациентов патологических процессов в печени. Апробация полученных результатов Результаты научных исследований были доложены на Международной Байкальской научно - практической конференции по проблемам ветеринарной медицины «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» Иркутск, 15-16 марта 2011 г.; на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Научные исследования и разработки к внедрению в АПК» 17-18 апреля 2013 г ; доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора 7 Василия Родионовича Филиппова (27-29 июня 2013 г., г. Улан-Удэ); Байкальской научно-практической ветеринарной конференции (Иркутск, 2013). Внедрение результатов научных исследований Результаты исследований используются в учебном процессе при чтении лекций по курсу внутренние незаразные болезни мелких домашних животных, патологической физиологии в ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия»; ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет»; ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет». А также результаты исследований легли в основу: 1. Акт внедрения методов диагностики и терапии при гепатите у собак на фоне йоддефицита в лечебные учреждения (ветеринарные клиники) Службы ветеринарии Иркутской области от 3 февраля 2014. 2. Написания методического указания для студентов и ветеринарных врачей «Методическое указание по лечению собак при заболеваниях печени», Иркутск, 2011. Публикации по результатам исследований По материалам диссертационной работы опубликовано 8 работ, 3 из них в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций, опубликованы рекомендации «Методическое указание по лечению собак при заболеваниях печени». Рекомендации рассмотрены и одобрены на заседании научно-технического совета Службы ветеринарии Иркутской области (Протокол № 3 от 1 ноября 2011 г.). Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 116 страницах компьютерного текста и состоит из введения и трех глав, включающих обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводов, 8 предложений и рекомендаций, и списка литературы; иллюстрирована 6 таблицами и 8 рисунками. Указатель литературы включает 120 работ отечественных и 38 зарубежных авторов. Основные положения, выносимые на защиту 1. Комплекс различных методов исследования позволяет выявить динамику показателей клинико-биохимического и гормонального статуса у больных собак при заболеваниях печени неинфекционной природы на фоне йоддефицита. 2. Применение фумаровой кислоты в сочетании с интестевитом при гепатите на фоне йоддефицита способствовало получению стойкого терапевтического эффекта. Учитывая то, что щитовидная железа является одной из главных желез в регуляции обмена веществ, ее патология обуславливает переориентацию обменных процессов, и мы полагаем, что и патология печени может быть связана с этим явлением (Ильина О.П., и др., 2000; Смирнов А.М. и др. 2011; Ковальский В.В. Биологическая роль йода // Биологическая роль йода. - М.: Колос, 1972. - с. 3-32.). Для коррекции обмена веществ при патологии печени на фоне йоддефицита мы использовали фумаровую кислоту, которая нашла широкое применение в птицеводстве (Фисинин В.И., 1989). 9 ГЛАВА I (Обзор литературы) 1.1. Особенности тиреоидной регуляции организма. Создание в процессе эволюции многостадийного, многофакторного механизма биосинтеза гормонов щитовидной железы и реализации эффектов на периферические органы и по механизму отрицательной обратной связи на щитовидную железу предполагает возможность тонкой координации и регуляции их образования в зависимости от воздействия параметров окружающей среды и физиологических потребностей животного. Разработки в области кибернетики показали, что даже при наличии огромного числа структурно-функциональных блоков любая биологическая система в определенном диапазоне изменения показателей экзогенных и эндогенных условий обладает высокой надежностью, поскольку она неравновесна, открыта и гетерогенна (Брайнес С.Н., Свечинский В.Б. Проблемы нейрокибернетики и нейробионики. М.: Медицина. 1968. 232 с.). Надежность биологических систем, в том числе и системы биосинтеза тиреоидных гормонов, обеспечивается рядом фундаментальных свойств, из которых применительно к обсуждаемому нами вопросу можно выделить следующие: 1. Избыточность в функциональных возможностях факторов, принимающих участие в биосинтезе гормонов. Ферментативные и другие процессы, включая транспорт йодидов и последующие этапы метаболизма микроэлемента, обладают большой мощностью, позволяющей поддерживать эутиреоидный статус животного даже при длительном дефиците главного участника гормонального синтеза (Degroot L.J. Thyroid hormone nuclear receptors and their role in the metabolic action of the hormone // Biochimie. 1989. P.71-269). регуляции Поддержанию тканей-мишеней оптимального способствуют и уровня гормональной значительные запасы коллоидного тиреоглобулина, который к тому же очень плотно упакован за 10 счет формирования межмолекулярных дисульфидных связей. Это обстоятельство позволяет животным длительное время обходиться без поступления йодидов извне, что можно наблюдать у зимнеспящих животных с физиологическим гипотиреозом, а также у лососевых при их миграции из богатых йодом морей в бедные этим микроэлементом реки (Baqqerman B. Salinity preference, thyroid activity and seaward migration of four species of Pacific salmon (Oncorhynchus gorbuscha) // J.Fish res.Board Can. 1960. V. 17. №3. P.295-322.). Сходный феномен, но количественно менее выраженный, отмечается в корковом слое надпочечников, в клетках которых происходит накопление эфиров холестерола, используемых интеренальной тканью для экстренного биосинтеза кортикостероидов при стрессовых ситуациях (Берзин Т. Биохимия гормонов. М.: Мир. 1964. 398 с.; Тепперман Д., Тепперман Х. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М.: Мир. 1989. 656 С.; Basic and clinical endocrinology / Ed.Greenspan F.S. and Baxter J.D. -Norwalk, 1994. 769p). 2. Функциональная гибкость в реализации синтетических способностей щитовидной железы. 3. Иерархичность в строении подсистем управления биосинтезом, сочетание автономности с централизацией и обеспечение на этой основе устойчивости интегрального эффекта. 4. Наличие прямых и обратных связей как факторов регуляции метаболизма йода в организме; 5. Способность к самовосстановлению при докритических повреждениях. Тем не менее, при длительном воздействии альтернирующего фактора или влиянии агента чрезвычайной силы функциональное состояние ЩЖ нарушается, наблюдается снижение биосинтеза тиреоидных гормонов или они не оказывают эффекта на клетки органов-мишеней. Такие состояния, квалифицируемые как гипотиреоз (Аметов А.С., Грановская-Цветкова А.М. Гипотиреоз // Клиническая фармакология, терапия. – 1997. №6. С. 65-68; 11 Мельниченко Г.А. Гипотиреоз // Русский мед. журнал. 1999. №7. С. 302308.), обусловлены разнообразными биохимическими дефектами и их условно можно разделить на внутритиреоидные (более многочисленные) и внетиреоидные. Необходимо подчеркнуть, что термин «гипотиреоз» и приведенная классификация в большей степени дефиниции морфологические и метаболические, а не клинические. Так, происхождение гипотиреоза при эндемическом зобе и болезни Хашимото у людей будет иметь различное происхождение: соответственно дефицит йода и аутоиммунная агрессия, хотя не исключено, что недостаток микроэлемента в итоге может привести к появлению аутоантигенов. В регионах по йодной недостаточности у животных в организме повышается выработка ТТГ (тиреотропный гормон) и нарушается синтез тиреоидных гормонов. Добавление йода в рацион способствует повышению концентрации Т4, на фоне значительного снижения уровня ТТГ, при этом одновременно ингибируются процессы ПОЛ в печени, почках и селезенке, увеличивается среднесуточный прирост у животных. (Габитова З.С. Физиологические процессы в организме свиней при коррекции йодной недостаточности: автореф. к.б.н. 03.03.01 / Зульфия Саяховна Габитова. М., 2012). К внутритиреоидным дефектам метаболизма, приводящим к гипотиреозу, относят: 1. снижение чувствительности рецепторов на плазматической мембране фолликулярных клеток к тиреотропному гормону (ТТГ); 2. нарушение транспорта в тиреоциты или «утечка» микроэлемента; 3. снижение активности тиреоидной пероксидазы, приводящее к замедлению превращения йода в активную форму и торможению конденсации; 4. нарушение образования пероксида водорода; 5. аномалии тиреоглобулина, связанные с нарушением синтеза этого белка, уменьшение скорости секреции в фолликулы, а также снижение уровня резорбции за счет развития резистентности к действию протеаз; 6. недостаточность внутритиреоидной дейодиназы. 12 Среди внетиреоидных нарушений необходимо отметить: 1. торможение биосинтеза гипоталамического ТРГ (тиреод-рилизинг гормона); 2. снижение секреции и неэффективности ТТГ; 3. нарушение транспорта низкомолекулярных гормонов специфическими белками; 4. сниженная чувствительность тканей-мишеней к тироксину (Т4) и/ или трийодтиронину (Т3); 5. избыточная потеря Т4 и Т3 из-за повышения скорости их метаболизма и экскреции, а также выделение дийодтиронина (ДИТ) и монойодтиронина (МИТ) с мочой; 6. дефицит диетарного йода или нарушение процессов его всасывания. Приведенные здесь формы гипотиреоза, обусловленные дефектами метаболизма, встречаются крайне редко, но некоторые из них, например, нарушение органификации и конденсации (напоминающие эффекты антитиреоидных веществ), уже не считаются редкими. В целом эти дефекты аналогичны таким феноменам, как мутации клеток вне организма, сопровождаемые изменением ответа на катехоламины и глюкокортикоиды, или нарушения синтеза стероидных гормонов. К сожалению, представленные здесь материалы получены в основном при исследовании людей и экспериментальных животных, однако с определенной долей вероятности можно утверждать, что частота встречаемости метаболических дефектов йодного цикла у сельскохозяйственных животных может быть существенно выше, особенно если это маскируется геохимической ситуацией в регионах, эндемичных по зобу, или влиянием антитиреоидных соединений. Подводя итог теоретическому рассмотрению тиреоидного блока гормональной регуляции организма животного с акцентом на детальный анализ отдельных стадий биосинтеза гормональных факторов, мы предположили, что этиопатогенез заболеваний в дефицитных по йоду регионах может быть обусловлен таким явлением, как альтерация транспорта йодидов в фолликулярные клетки. Этот дефект может быть вторичным по отношению недостаточности микроэлемента, и его последующая ликвидация из-за глубоких морфологических и метаболических повреждений железы не 13 окажет позитивного эффекта на функциональное состояние эндокринного органа. Кроме того, литературный анализ йодного цикла показал, что многие его этапы, включая активный транспорт йодидов в тиреоциты, являются энергозависимыми процессами, которые также ингибируются при эндемическом гипотиреозе. В настоящее время считается хрестоматийным и не подвергается ревизии тот факт, что эндокринные органы с определенными структурами нервной системы образуют единый механизм нейроэндокринной регуляции (Cardinali D.P., Stern J.E. – Peripheral neuroendocrinoloqy of the cervical autonomic nervous system // Braz J Med Res. – 1994. - Mar; 27(3): 573-99; Акмаев Г.И. Нейроиммуноэндокринология: факты и гипотезы // Проблемы эндокринологии. – 1997. - № 4 – с. 3-7). Более того, в последние годы наметилась тенденция к объединению указанного комплекса с иммунной системой, что ведет к постулированию существования в животном организме универсального морфологически скоординированного органа, неоднородного, ответственного за но функционально адаптацию особи к изменению факторов внутренней и внешней среды (Антипенко Е.Н., Антипенко А.Е., Кавешникова И.В. и др. Участие тиреоидных гормонов в системах клеточной защиты // Успехи современной биологии. -1994. - Вып. 5. - с. 558-572). Об этом, в частности, свидетельствует тот факт, что клетки иммунной системы содержат рецепторы для нейроэндокринных гормонов и могут также рассматриваться как дополнительный источник гипоталамических и гипофизарных факторов (Тепперман Д., Тепперман Х. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / М.: Мир, 1989. – 656 с). Эти и некоторые другие результаты исследований привели к разработке гипотезы, согласно которой перенос информации в нейроэндокринную систему представляет собой сенсорную функцию для иммунной системы, позволяющей лейкоцитам распознавать стимулы, не распознаваемые центральными и периферическими отделами нервной системы. Распознавание иммуноцитами 14 таких нераспознаваемых стимулов затем превращается в информационный сигнал с функций, реализацией причем изменения иммунной соответствующих системе физиологических приписывается способность экспрессировать рецепторы ко всем сигнальным молекулам, опосредующих воздействия нейроэндокринной системы: нейротрансмиттерам, нейропептидам, пептидным и стероидным гормонам, факторам роста и цитокинам. Установлено, что только на ростовую активность тиреоидного фолликулярного эпителия оказывает влияние более 10 сигнальных молекул различных функциональных систем. Так, вызванная пусковым воздействием тиреотропного гормона пролиферация тиреоцитов может превратиться в стойкую гиперплазию, развивающуюся по аутокринному типу в связи с тем, что сами фолликулярные клетки начинают активно синтезировать и выделять факторы роста, наиболее активным из которых является инсулиноподобный фактор роста – ИФР-1 (Кузьменко А.П., Шорин Ю.П. Иммуногенетические факторы в патогенезе аутоиммунных заболеваний эндокринных желез: (обзор) // Пробл. эндокринологии. - 1991. - № 1. - с. 59-63; Зимина С.А. Морфофункциональные особенности щитовидной железы при экспериментальном гипоселенозе // Автореф. канд. дис. мед. н. - Иркутск. 2000. – 20 с.). Кроме того, стимуляция пролиферации тиреоидного эпителия поддерживается еще двумя ростовыми факторами: эпидермальным – ЭФР и фактором роста фибробластов – ФРФ (Герасимов Г.А., Смирнов Н.Н., Зобина М.Н. Структурно-функциональное состояние щитовидной железы после тимэктомии//Бюлл. экспер. биол. и медицины. - 1992. - № 3.- с. 329-331). Участие в ростовом контроле щитовидной железы принимают и цитокины: интерлейкин-1, росттрансформирующий фактор В (РТФ-1) и интерлейкины-6 и 8 (ИЛ-6, ИЛ-8), которые вырабатываются фолликулярными клетками. Эти цитокины усиливают эффект всех ростовых 15 факторов (Chatterjee VK. Resistance to thyroid hormone // Horm Res 1997; 48 Suppl 4: 43-6). Установлено, что на биосинтез ТТГ влияет температура окружающей cреды, стрессовые ситуации (Стресс и его роль в патологии / Г. Е. Григорьев // Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию образования ИрГСХА, 3-6 февр. 2004 г. Зооветеринарный факультет. 2004. С. 48–54; состояния сна и бодрствования (Тепперман, Тепперман, 1989), характер кормления и циркадный ритм (Decuypere E., Kuhn E.R., Chadwick A. Rhythms in circulatinq prolactin and thyroid hormones in the early postnatal life of the domestic fowl : influence of fastinq and feedinq on thyroid rhythmicity // Endocrine Syst. and Environ. Berlin et al. – Tokyo. – 1985. – P. 189-200), некоторые периферические гормоны (Kahl S., Capuco A.V., Binelli M. et al. Comparison of qrowth hormone-releasinq factor and somatotropin: thyroid status of lactatinq, primiparous cows // J Dairy Sci. - 1995 Oct; 78 (10). - 2150-8). Механизм влияния ТТГ на функционирование ЩЖ, включая глубокие морфологические изменения, обусловлен фосфорилированием белков с изменением их активности, располагающихся мембранах, микрофиламентах, ферментных системах и рибосомах. Установлена также важная роль циклической аденозинмонофосфорной кислоты (цАМФ), кальмодулина, Са2+ и некоторых фосфолипидов в реализации описанных эффектов ТТГ (Biswas SC., Pal U., Sarkar PK. Requlation of cytoskeletal proteins by thyroid hormone durinq neuronal maturation and differentiation // Brain Res 1997 May 23; 757 (2): 245-53). После того, как соответствующая протеаза тиреоглобулина высвобождает запасенные в фолликулярном коллоиде Т4 и Т3, они выходят из железы и попадают в кровоток, где избирательно или неспецифически комплексируются с белками-переносчиками, к которым можно отнести преальбумины, тироксин-связывающие альфа-глобулины и некоторые другие (Тепперман, Тепперман, 1989). Была установлена роль легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов в связывании тиреоидных гормонов (Бударков 16 В.А., Зенкин А.С., Карпов А.Н. Иммунологический статус жвачных животных при поражении щитовидной железы радиактивным йодом // С.-х. биология. Серия «Биология». - 1993. - № 4. - с. 81-87), найдено что наряду с ранее известными транспортными белками в переносе тироксина участвует белок транстиретин (Lanqsteqer W. Diaqnosis of thyroid hormone transport protein anomalies: an overview // Acta Med Austriaca 1996; 23 (1-2). - P. 31-40). Особенно интересные данные были получены при изучении взаимосвязи липопротеидов и тиреоидных гормонов (Дядик В. П. Перекисное окисление липидов и их обмен при вирусном гепатите / В. П. Дядик, В. И. Бычкова // Врачебное дело. – 1986. – № 11. – С. 114–117). В этом исследовании было показано, что тиреоидные гормоны специфическим образом связываются с аполипопротеидами плазмы. Важно отметить, что результаты цитированного исследования прокладывают мост между функциональным состоянием ЩЖ, иммунным статусом и атерогенными свойствами отдельных классов липопротеидов, т.е. явлениями, связь между которыми хорошо известна из клинических наблюдений (Davies R., Lawry J., Bhatia V. et al. Growth stimulatinq antibodies in endemic qoitre: a reappraisal // Clin Endocrinol (Oxf) 1995 Auq; 43(2) : 189-95.). Тиронины, высвободившиеся в процессе протеолиза тиреоглобулина, в основном (85%) представлены в виде Т4. Остальное количество (около 15%) приходится на Т3 и обратный Т3 (обТ3), или реверсивный Т3. Несмотря на то, что основное количество тиреоидных гормонов поступает из ЩЖ в виде Т 4, их биологическое действие на периферии осуществляется за счет Т3, который рассматривается как истинный регуляторный фактор ЩЖ (Тепперман, Тепперман, 1989). Из общего количества ежедневно образующегося Т3 в организме лишь небольшая часть (около 10%) - интратиреоидального происхождения, тогда как основная его масса происходит экстратиреоидальным путем в процессе дейодирования Т4 с участием селенсодержащих дейодиназ, обнаруженных в печени, почках, бурой жировой ткани, гипофизе (Navarro L., Landa A., Valverde- R.C. et al. 17 Mammary qland tyre I iodothyronine deoodinase is encoded by a short messenqer ribonucleic acid // Endocrinoloqy, 1997. Oct.: 138 (10) : 4248-54). Образование обТ3 повышается при состояниях, когда необходимо сберечь энергию или предохранить организм от перегревания (голодание, высокая температура окружающей среды, патология печени и почек (Гарбузенко Д. В. Механизмы компенсации структуры и функции печени при ее повреждении и их практическое значение / Д. В. Гарбузенко // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2008. – Т. 18, № 6. – С. 14–21). Определение концентрации сывороточного обТ3 дает дополнительную ценную информацию для диагностики гипотиреоза, так как в клетках-мишенях эта форма гормона ингибирует реакцию частичного дейодирования Т4 и превращения его в Т3 (Larsen P.R. Update on the human iodothyronine selenodeiodinases, the enzymes requlatinq the activation and inactivation of thyroid hormone // Biochem Soc Trans 1997 May; 25 (2) : 588-92). Секретируемые ЩЖ Т4 и Т3, а также Т3 , образующийся экстратиреоидально, вступают во взаимодействие с высокоаффинными ганглиозидными рецепторами плазматических мембран клеток-мишеней (Leonard J.L., Farwell A.P. Thyroid hormone-requlated actin polymerization in brain // Thyroid 1997 Feb; 7 (1) : 147-51), что сопровождается стимуляцией транспорта аминокислот и глюкозы; этот ответ возникает быстро и не требует синтеза РНК или белка (Pillar T.M., Seitz H.J. Thyroid hormone and qene expression in the requlation of mitochondrial respiratory function // Eur J Endocrinol 1997 Mar; 136 (3) : 231-9). Гормоны щитовидной железы связываются с цитоплазматическими белковыми факторами, которые условно названы модуляторами действия тироксина, поскольку они способны воспроизводить гормональные эффекты (Туракулов Я.Х., Далимова С.Н., Камалиева И.Р. Сравнительное изучение действия тироксина и цитоплазматического тироксин -связывающего белка на синтез митохондриевых белков печени и головного мозга крыс разного 18 возраста // Проблемы эндокринологии - 1995. - № 3. - с. 36-38), особенно в клетках головного мозга. Последние данные имеют принципиальное значение в связи с тем обстоятельством, что в онтогенезе имеется период, когда тиреоидные гормоны абсолютно необходимы для развития мозга. Этот, так называемый фенокритический период (Розен В.Б., Шаляпина В.Г., Жуков Д.А. и др., Физиология гормональной рецепции / Наука, 1986. - 229 с.; Enzymes of energy metabolism in brain and chronic stress / N. I. Koshoridze [et al.] // Journal of stress Phisiology & Biochemistry. – 2009. – Vol. 5. – № 1-2. – Р. 32–37), охватывает поздний эмбриональный и неонатальный период жизни у людей и первые 1-2 сельскохозяйственных месяца животных. постнатальной жизни Клинические у многих наблюдения и экспериментальные данные указывают, что недостаток тиреоидных гормонов в этот промежуток времени может привести к необратимым структурным изменениям ЦНС и других органов (Thrun L.A., Dahl G.E., Evans N.P. et al. A critical period for thyroid hormone action on seasonal chanqes in reproductive neuroendocrine function in the ewe // Endocrinoloqy 1997 Auq; 138 (8) : 3402-9). Тем не менее, детальный анализ современной литературы, касающийся вопросов этиопатогенеза зобатости в дефицитных по йоду регионах, однозначно свидетельствует о том, что подавляющее число случаев развития гипертрофии и гиперплазии ЩЖ у человека, сельскохозяйственных и домашних животных связано с нарушением многостадийного механизма биосинтеза тиреоидных гормонов (Балаболкин М.И. Состояние и перспективы изучения проблемы физиологии и патологии щитовидной железы// Терап. архив. – 1997 .- № 10. -с. 5 - 11. ; Талантов В.В. Эндемический зоб. Сущность. Экология и генетика в этиологии. Дефинация // Пробл. эндокринологии. - 1989. - № 4. - с. 43-46, подчеркивал, что главным проявлением этой геохимической патологии является гипотиреоз, обусловленный повреждением тиреоидного синтеза. Гипотериоз – состояние недостаточной активности воздействия гормонов щитовидной железы на определенные органы. В зависимости от 19 интенсивности проявления клинических нарушений выделяют гипотериоз субклинический и клинический. Субклинический гипотериоз проявляется в 25% случаев в начальной стадии заболевания. (Sneder P.J. The pituitary in Hypothyroidiam. In: Braverman LE, Utiger RD, eds. The Thyroid. A Fundamental and Clinical Text. 8th ed. Fhiladelphia; Lippincott, Willians Wilkins A, Wolter Kluver Compani, 2000; 811-814). Он характеризуется повышением в крови концентрации тиреотропного гормона (ТТГ). (Ильина О.П. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота: Кн. 1. Иркутск: ИрГСХА. 2000. 68 с). Клинический гипотериоз проявляется более характерными нарушениями. Суточная секреция тироксина на этой стадии заболевания значительно отклоняется от нормы. У некоторых животных отмечается избыточная масса тела, но в большинстве случаев они сохраняют нормальную упитанность и даже худеют, что обусловлено плохим пищеварением и нарушением усвоения питательных веществ, вследствие изменения перистальтики тонкого отдела кишечника. (Виктор Кастилио. Гипотериоз собак //Veterinary Focus. 2011, №1. С 2-8; Окороков А.Н. Лечение болезней внутренних органов. Лечение органов дыхания. Лечение болезней органов пищеварения: руководство. М.: Мед. лит-ра. 2001. 533 с.). 1.1.1 Применение в ветеринарной практике фумаровой кислоты Энергообеспечение живой клетки состоит в получении энергии за счет внешних энергетических ресурсов и последующем использовании ее при реализации жизненных функций. Основными внешними энергетическими источниками животного является энергия, заключенная в химических связях главных компонентов кормов – белков, липидов и углеводов. Эти биомолекулы отличаются большим разнообразием, и живая клетка, согласно первому закону биоэнергетики, «избегает прямого использования энергии внешних ресурсов для совершения полезной работы» (Кулинский В.И. 20 Передача и трансдукция гормонального сигнала в разные части клетки // Сорос. обр. журнал. 1997. № 8 С. 14-19). В желудочно-кишечном тракте животных в результате действия пищеварительных ферментов происходит расщепление компонентов корма с образованием мономеров, число которых значительно меньше, чем количество типов биомолекул в корме. Так, огромное множество кормовых белков (по крайней мере, несколько тысяч), полисахаридов и липидов расщепляются на небольшое число соединений, включающих 20 аминокислот, десятки жирных кислот, глицерин и десятки моносахаридов. Таким образом, на этом этапе происходит первичная обработка энергетического материала, его упрощение и перевод в форму, удобную для всасывания в сосудистое русло и доставки к тканям. Этот процесс лидером отечественной школы биоэнергетиков В.П. Скулачевым очень удачно назван «унификацией», которая имеет несколько этапов (Скулачев В.П. Законы биоэнергетики // Соровский образов. Журнал 1997. - № 1. - с. 9-14). 58. На следующем этапе унификации энергетического топлива мономеры при участии ферментов цитозоля (расщепление аминокислот, глицерина, моносахаридов) или митохондрий (окисление жирных кислот) превращаются в небольшое число моно-, ди- и трикарбоновых кислот (пируват, лактат, активный ацетат, лимонная, изолимонная, альфа- кетоглутаровая, янтарная, фумаровая, щавелевоуксусная кислоты), в которых полностью отсутствует специфика исходных соединений. Ди- и трикарбоновые кислоты в идеале образуют замкнутый цикл, трикарбоновый цикл (Кребса), главной функцией которого кроме анаплеротической (возмещающей) является поставка для последующих аэробных процессов атомов водорода (протонов и электронов). Поскольку первичными акцепторами водорода (в зависимости от величины редокс-потенциала) служит флавин, пиридиновые нуклеотиды и липоевая кислота, то все многообразие энергетических компонентов корма сводится к этим трем 21 относительно простым соединениям (Хазипов Н.З., Аскарова А.Н. Биохимия животных / Казань, 1999. – 291 С). На дальнейших этапах функционирования механизма аккумуляции энергии при участии компонентов дыхательной цепи и АТФ-синтетаз, встроенных во восстановленных внутреннюю форм мембрану указанных митохондрий, трех акцепторов энергия по схеме электрохимического сопряжения трансформируется в макроэргические связи АТФ. Кроме высокоэффективного аэробного пути генерации энергии, пригодной для выполнения полезной работы, клетки располагают и менее продуктивным анаэробным механизмом (гликолиз), который не требует для своего протекания сложной молекулярной машины, и может функционировать в практически бесструктурной среде. Гликолиз генерирует АТФ (Зайцев С. Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты : учеб. / С. Ю. Зайцев Ю. В. Конопатов. – СПб. : Лань, 2004. – 271– 272 с.), которая может использоваться для совершения работы, а также для создания натриевого потенциала, поддерживающего осмотическую активность клетки. В модельных опытах и в экспериментах на животных было установлено существование множества факторов, модулирующих эффективность биоэнергетических механизмов (к ним, в частности, относятся и тиреоидные гормоны), в зоотехнической практике нашли применение только некоторые производные цикла Кребса. Так, в отечественной и зарубежной литературе описано применение у животных янтарной, лимонной, глутаминовой кислот, а также фумаровой кислоты, которая особенно широко используется в различных отраслях животноводства в таких развитых странах, как Германия, Бельгия и Нидерланды (Фисинин В.И., Околелова Т.М. Применение фумаровой кислоты в животноводстве // Зоотехния. 1989. № 11. С. 35-38). Фумаровая (транс-бутендиовая) кислота представляет собой белый кристаллический порошок без запаха, кислого вкуса, плохо растворимый в 22 воде (22,5 г в 1 л воды при 25С), негигроскопичный, устойчивый к окислению и колебаниям температуры. Кислота хорошо смешивается с кормами и совместима с другими биологически активными веществами, что позволяет включать ее в состав премикса. Фумаровая кислота практически не токсична. При однократном введении внутрь цыплятам LD50 составляет 10 г на 1 кг живой массы. Кислота участвует в ряде ключевых реакций энергетического, структурного и ферментного обеспечения. Прежде всего, она является незаменимой частью цикла трикарбоновых кислот – универсального звена в аэробном обеспечении клетки ранее указанными тремя формами энергетической «валюты». Энергетическая емкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, но учитывая более оперативные энергетические свойства фумарата, ее можно использовать для энергетической поддержки критических состояний, главным образом при различного вида стрессовых воздействиях (транспортировка, вакцинация, перегруппировка животных). Развивая представления о ведущей роли энергетического метаболизма в формировании тиреоидного статуса в функционировании щитовидной железы, который может обеспечить эутиреоидное состояние животного даже при среднестатистическом дефиците йода в дефицитном по йоду регионе, авторами (Ильина О.П., Власов Б.Я., Тарнуев Ю.А. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота : Кн. 1. Иркутск: ИрГСХА. 2000. 68 с), был проведен поиск, чтобы выяснить возможность использования фумаровой кислоты в условиях клинически выраженного зоба, чтобы обеспечить полноценную гормональную регуляцию. Ранее ими было показано, что клинически выраженный йоддефицит у телят характеризуется очень высоким уровнем концентрации ТТГ, который превышает соответствующий показатель у здоровых в 4,66 раза (Р < 0,05). Добавление фумаровой кислоты в молозиво вызывало достоверное снижение уровня ТТГ, который хотя и превышает контрольный показатель на 70,1%, но это увеличение статистически недостоверно. 23 Что касается изменения содержания тиреоидных гормонов в условиях стимуляции энергетического метаболизма, то в этих опытах отмечается более чем двухкратное увеличение уровня Т4 (2,23 раза) в сравнении с контролем (эндемический зоб), от здоровых животных уровень отличался лишь на 20,8%. Добавление в корм взрослых животных фумаровой кислоты из расчета 50 мг/кг в сутки приводило к резкому снижению тиреотропной функции аденогипофиза. В этих опытах содержание ТТГ в 14 раз снижается у животных получавших метаболит, и даже достоверно отличается от группы здоровых особей. Изменения тиреотропной функции передней доли гипофиза при стимуляции биоэнергетики приводит почти к 2-х кратному увеличению Т4 (Р < 0,05) по сравнению со здоровыми животными, приближаясь к уровню животных без признаков зобатости. Но наиболее значительные изменения авторы наблюдали в отношении Т3, уровень которого многократно превышал содержание этого параметра не только у больных с эндемическим зобом, но и у здоровых особей. Эти данные представляют особый интерес для дальнейшего обсуждения, поскольку именно с Т3 многие исследователи связывают гормональную активность щитовидной железы. Изменение содержания энергетических субстратов и холестерола у животных, получавших дополнительно фумаровую кислоту, видно, что эти показатели приближаются к уровню таковых у интактных (здоровых) коров, а в некоторых случаях даже превышают этот уровень (Ильина О.П. и др., 2000). В целом оценивая характер воздействия фумаровой кислоты на тиреоидный статус телят и коров черно-пестрой породы, можно заключить, что этот энергетический метаболит вызывает нормализацию функционального состояния щитовидной железы, даже с проявлением определенной «суперкомпенсации», которая наиболее четко проявляется у взрослых особей, в отношении высокого уровня Т3. 24 Анализируя механизм наблюдаемого позитивного эффекта фумаровой кислоты при региональной тиреоидной патологии можно полагать, что ее эффект направлен на активацию энергетического метаболизма системы активного транспорта микроэлемента, которая располагается в рубце и частично в тонком отделе кишечника (Щитовидная железа. Физиология и клиника / Под. ред. С. Вернера. - М.: Госуд. изд-во мед. лит-ры, 1963. - 312 с.; Кондрахин И.П. Алиментарные и эндогенные болезни животных // М.: Агропромиздат, 1989. – 256 С). Структура желудочно-кишечного тракта, вероятно, не лимитирует процесс всасывания йода, однако при нарушении системы функционирования тканей при гипотиреозе этот процесс может быть заторможен. Такая возможность подтверждается результатами исследования (Самборская Е.П., Медведев Б.М. О влиянии антитиреоидных веществ на всасывание // Физиол. журн. - 1956. - № 5. - с. 116-118), согласно которым при попадании в организм животного антитиреоидных соединений происходит нарушение всасывания йодидов. Другой точкой приложения фумаровой кислоты при йоддефиците, может являться захват микроэлемента щитовидной железой, поскольку йодный насос обладает всеми свойствами системы активного транспорта и ингибируется при торможении биоэнергетических механизмов (Тепперман, Тепперман, 1989; Basic and clinical endocrinology / Ed.Greenspan F.S. and Baxter J.D. -Norwalk,1994. - 769 p). Важным аспектом стимулирующего влияния фумарата на функцию щитовидной железы может служить активация этим метаболитом цикла Кребса, белок-синтезирующей функции печени, в частности, белков участвующих в транспорте Т3 и Т4 к органам - мишеням (Тепперман, Тепперман, 1989; Свиридов О.В. Белки связывающие тиреоидные гормоны и их биологическая роль // Пробл. эндокринологии. - 1994. - б.- № 6. - с. 57-63). В переносе тиреоидных гормонов участвуют не только преальбумины и неспецифические белки, но и такие энергоемкие биополимеры (в смысле их 25 биосинтеза), как легкие и тяжелые цепи иммуноглобулинов, транстиретин, а также аполипротеины плазмы. Неспецифическое позитивное влияние на тиреоидный статус животных, получавших фумаровую кислоту, может быть обусловлено ее влиянием на цепочку последовательных событий, которые включают в себя взаимодействие с рецепторным аппаратом клетки (плазматическая мембрана, цитоплазматические белки, регуляторное участие генов, биосинтез проматричной РНК, трансляция, посттрансляционные изменения), которое нуждается в притоке свободной энергии в форме АТФ или других макроэргов. Что касается возможного механизма, описанного стимулирующим эффектом фумарата, он, вероятно, заключается в активации цикла трикарбоновых кислот через образование щавелевоуксусной кислоты, которая является одним из субстратов для образования лимонной кислоты. Кроме того, образование оксалацетата из фумаровой кислоты может способствовать, по механизму обратной связи, некоторому накоплению в тканях янтарной кислоты, которая оказывает благоприятный эффект при сдвиге метаболизма к гипоксическим условиям (Поборский А.Н., Зимина Т.А. Влияние некоторых экстрем. воздействий на окисление едицината митохондриями мозга крыс // Патол. физиол. и экспер. терапия. - 1996. - № 1.- с. 19-20), что как мы выяснили, наблюдается при гипотиреоиозе. Особое значение добавки фумаровой кислоты в корм взрослых коров может быть связано с тем обстоятельством, что особенность пищеварения жвачных животных заключается в том, что существенная доля азота у жвачных поступает в рубец за счет мочевины. Как известно (Хазипов Н.З., Аскарова А.Н. Биохимия животных. Казань. 291с.), образование мочевины происходит в печени, и на одном из этапов этого процесса происходит выделение фумаровой кислоты, которая с участием цикла Кребса и ферментов трансаминирования превращается в аспарагиновую кислоту. Последняя необходима для образования аргинин- янтарной кислоты, которая 26 является компонентом цикла биосинтеза мочевины. Таким образом, участие эндогенной мочевины как источника азота для биосинтеза микробиальных белков в рубце, а также связь фумарата с процессом образования этого азотистого вещества с большой долей вероятности позволяет предположить, что экзогенная фумаровая кислота может стимулировать биосинтез конечного продукта катаболизма аминокислот, и тем самым косвенно повышать снабжение организма жвачных животных биологически полноценными белками, входящими в состав микрофлоры рубца. Улучшение снабжения организма полноценными белками, которые содержат незаменимые аминокислоты в оптимальных соотношениях, как известно (Carew L.B., Alster F.A. Dietary carbohydrate and fat do not alter the thyroid response to protein deficiency in chicks // Proc Soc Exp Biol Med, 1997, May; 215 (1) : 82 - 6.), является фактором, предохраняющим организм животного от развития клинически выраженного гипотериоза. Позитивный эффект фумаровой кислоты при гипотериозе можно рассматривать также в аспекте ее хорошо известной антистрессовой активности (Фисинин, Околелова, 1989). Реализация антистрессовой активности сопровождается повышением неспецифической резистентности, устойчивостью животных к инфекционным заболеваниям, что в результате проявляется как выраженный анаболический эффект. Так, при использовании фумаровой кислоты в качестве кормовой добавки при кормлении молодняка стандартной норки подопытные животные отличались на 300-400 г от контрольных животных (Ивонина О.Ю., Носырева Ю.Н., Власов Б.Я. Фумаровая кислота в кормлении молодняка норок // Вестник Иркутской ГСХА, Иркутск. - 1997. - Вып. 5. – с. 16-17). При использовании фумаровой кислоты для профилактики транспортного стресса у кур было также показано (Симонян А.Б., Носырева Ю.Н., Власов Б.Я. Защитное действие глутаминовой кислоты при гемической гипоксии у кур-молодок // Ветеринария - 1999. - № 3. - с. 52-54), что относительная масса надпочечников у цыплят контрольной группы была 27 выше на 36,7%, чем у птиц, получавших исследуемый метаболит цикла трикарбоновых кислот. Такие изменения надпочечников и тимуса однозначно свидетельствуют о том, что испытуемая кислота снижает напряжение организма и нормализует деятельность органов и систем. Важно также отметить, что в только что цитируемой работе приводятся результаты определения содержания холестерола в сыворотке крови при использовании фумаровой кислоты в качестве кормовой добавки. Таким образом показано, что фумаровая кислота вызывает снижение концентрации холестерола, который является важнейшим неспецифическим маркером йоддефицита и содержание которого при этой патологии закономерно увеличивается и обладает выраженными протекторными свойствами. 1.2. Патоморфологические изменения и особенности патологических процессов в печени и пути ее коррекции Внутренние незаразные болезни у собак и кошек составляют 40 %, из них на болезни печени приходится 25 %. Наиболее часто у собак встречается острый гепатит, хронический гепатит и множественные новообразования печени, у кошек - острый гепатит, липидоз и метаплазия (Денисенко В.Н. Диагностика и лечение болезней печени у собак: учебное пособие для студентов вузов. М.: Колосс, 2006. 61 с.; Шавырин Д.И. Функциональноморфологические изменения в печени плотоядных при нарушении обмена веществ: автореф. кан.вет.н. 16.00.02. Москва, 2009. 30 с.). Частота встречаемости связана, в первую очередь, с «одомашниванием» животных, с изменением их кормления, со снижением физической нагрузки животных (Ozturk Y, Soylu OB. Fatty liver in childhood // World J Hepatol. 2014. P. 33-40). Добавление в рацион животных эссенциальных микроэлементов (йод, селен и др.) оказывало протективное действие на гепатоциты. Характерно, что в дефицитном по микроэлементам организме, после добавления этих микроэлементов, в печени достоверно 28 увеличивается количество двуядерных гепатоцитов (Лебедев С.В., Сизова Е.А. Морфофункциональное состояние печени животных при разной обеспеченности рациона микроэлементами / С.В. Лебедев, Е.А. Сизова // Сельскохозяйственная биология. 2008. №2. С. 115-119). Печень является центральным органом химического гомеостаза организма, поскольку в ней создается единый обменный и энергетический пул для метаболизма белков, жиров и углеводов (Фельдман, Г.Л. Биоритмология / Г.Л. Фельдман. Ростов-на-Дону: Изд-во Рост, ин-та, 1982. 80 с.). Гепатит – воспаление печени, выражающееся комплексом альтернативных, экссудативных и пролиферативных изменений, возникающих в органе вторично при разных заболеваниях (Жаров А. В. Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных/ под ред. Шишкова В.П. и Жарова А.В. учебник для вузов. М. : Колос, 2001г. с 247.). Патологические процессы в печени, вызванные химическими веществами эндо- и экзогенного происхождения, вызывают токсические поражения, сопровождающиеся различными нарушениями ферментативного равновесия в ней и изменением активности ферментов печеночного происхождения (Подымова С. Д. Болезни печени. М.: Медицина, 1993. - 544 с.). Снижение синтетической способности печени при различных патологических состояниях характеризуется уменьшением концентрации в крови как свободного холестерола, так и особенно его эфиров. Не только холестерол, но и другие стероидные соединения подвергаются превращениям в печени. Так, стероидные гормоны (половые гормоны и кортикостероиды) в печени переходят в кетостероиды, которые затем выделяются с мочой. Нарушение синтеза фосфолипидов приводит к отложению триглицеридов в гепатоцитах и, в конечном итоге, к жировой инфильтрации в печени (гепатозу). В биогеохимических регионах по йодной недостаточности в организме повышается выработка ТТГ (тиреотропный гормон) и нарушается синтез тиреоидных гормонов. Добавление йода в рацион способствует 29 повышению концентрации Т4, на фоне значительного снижения уровня ТТГ и оТ3, при этом одновременно ингибируются процессы ПОЛ в печени, почках и селезенке, увеличивается среднесуточный прирост у животных. (Габитова З.С. М., 2012.) При наличии в организме избытка источников энергии жирные кислоты кормов или кислоты, синтезируемые в печени, затем переходят в состав эфиров и выделяются в кровь в виде липопротеинов очень низкой плотности. Эти липопротеины плазмы крови являются основным источником жирных кислот для синтеза триглицеридов в жировой ткани. При голодании животного печень превращает жирные кислоты в кетоновые тела. Сама печень не использует ацетоуксусную кислоту. Обеспечивая свои энергетические потребности за счет α-кетокислот, образующихся при распаде аминокислот (Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. / С. Ю. Зайцев, Ю. В. Конопатов. – СПб.: Лань, 2004. – 271–272 с.) Стрессовая ситуация в организме требует повышенного энергетического обеспечения (Григорьев Г.Е. Стресс и его роль в патологии / Григорьев Г.Е, Ильина О. П.// Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию образования ИрГСХА, 3-6 февр. 2004 г. Зооветеринарный факультет. – 2004. – С. 48–54). Сигнал о потребности в энергии реализуется через гормон адреналин. Действие адреналина на распад гликогена печени обусловлено α- адренэргическими рецепторами и включает цАМФ-независимый механизм, а также β-адренэргические рецепторы, обеспечивающие продукцию цАМФ (циклический аденозин-3’,5’ – монофосфат.). Эффект глюкагона на распад гликогена печени связан с β-адренэргическими рецепторами и вовлекает цАМФ-зависимый механизм. Стимуляция адреналином α-адренэргических рецепторов определяет мобилизацию внутриклеточного кальция, когда активирует фосфорилазу гликогена, что приводит к распаду его с образованием глюкозо-1-фосфата. Далее глюкозо-1-фосфат переходит в 30 глюкозо-6-фосфат. Эта часть процесса протекает одинаково в печени и в мышцах (Gardiner T. Biological activity of eight known dietary monosaccharids required for glycoprotein synthesis and cellular recognition processes: summary // GlycoScience & Nutrition. – 2000. – № 1. – P. 1- 4). Однако в дальнейшем в печени глюкозо-6-фосфат под действием фосфотазы дефосфорилируется с образованием свободной глюкозы. В мышцах же глюкозо-6-фосфат по пути гликолиза транфсформируется в молочную кислоту. Таким образом, печень путем распада гликогена обеспечивает другие органы свободной глюкозой. (Меньщикова, Е.Б. Свободнорадикальное окисление как универсальный компенсаторно-приспособительный механизм / Е.Б. Меньщикова, Н.К. Зенков // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты: материалы Всерос. конф., 4–6 нояб. 2002 г. – Новосибирск, 2002. – С. 304–305); Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты : учеб. / С.Ю. Зайцев, Ю.В. Конопатов. – СПб.: Лань, 2004. – 271–272 с.) В печени около 15% глюкозы окисляется по пентозному пути с целью образования восстанавливающих эквивалентов (НАДФН + Н+) для синтеза холестерина и жирных кислот. По гликолитическому пути распадается и фруктоза, которая здесь превращается во фруктозо-1-фосфат. Последний распадается на альдегид и фосфодиоксиацетон. (Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. / С.Ю. Зайцев, Ю.В. Конопатов, 2004). При сахарном диабете инсулинозависимого типа в печени уменьшается содержание гликогена. Мышечная ткань при этом утрачивает способность утилизировать глюкозу крови. А в печени при общем снижении интенсивности биосинтеза жирных кислот из продуктов распада глюкозы. Наблюдается усиленный синтез ферментов глюконеогенеза. Индуктором синтеза ферментов глюконеогена служат глюкокортикоиды. В патогенезе развития гипергликемии большую роль играет ЦНС посредством импульсов с хеморецепторов клеток в связи с недостаточным поступлением глюкозы в 31 клетки тканей (Балаболкин, М. И. Роль окислительного стресса в патогенезе диабетической нейропатии и возможность его коррекции препаратами альфалипоевой кислоты / М.И. Балаболкин, В.М. Креминская, Е.М. Клебанова // Проблемы эндокринологии. – 2005. – Т. 51, № 3. – С. 22–33). 32 1.2.1 Применение пробиотиков в ветеринарии. В последнее время при лечении заболеваний различной этиологии у животных изыскивают все новые и новые вещества для получения терапевтического эффекта. Традиционно применяли антибиотики, но в последние годы применение их подвергается критике, так в силу разных причин они не всегда дают терапевтический эффект (Окороков А.Н. Лечение болезней внутренних органов. Лечение болезней органов дыхания. Лечение болезней органов пищеварения : руководство. Т1. 2-е изд., перераб. и доп. М. 533 с.). Так особый интерес направлен на применение пробиотиков. Они содержат нормальные кишечные бактерии и их производные в качестве полезного компонента функционального питания для лечения и профилактики различных болезней животных и человека (Овсяников Ю.С. Тихонов Г.И., Голунова О.В. Пробиотики в ветеринарии // Ветеринарная медицина, №1-2. 2009. С.66-68). Пробиотики являются экологически чистыми препаратами и не оказывают поборчных действий при длительном и регулярном применении. Также пробиотики вполне могут заменить антибиотики в общей схеме неспецифической профилактики желудочнокишечных болезней (Биотехнология: учебник / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнрева и др.; под ред. Акад. РАСХН Е. С. Воронина. Спб.: ГИОРД, 2008. С. 322-355.). К числу наиболее распространенных пробиотических микроорганизмов относят молочнокислые бактерии, бифидобактерии, стрептококки, бактерии рода Bacillus, а также грибы Saccaharomyces cerevisiae, Candida pintolopesii, Aspergillus niger и Aspergillus orysae. Они обладают антагонистическими, способностью к выработке протеолитическими широко спектора свойствами и антибиотикоподобных субстанций, подавляющие вредную микрофлору кишечника, в том числе и возбудителя туберкулеза, и биологически-активных веществ (Биотехнология: 33 учебник / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнрева и др.; под ред. Акад. РАСХН Е. С. Воронина. Спб.: ГИОРД, 2008. С. 322-355). При заболеваниях печени многие авторы указывают на снижение естественной резистентности организма и снижение симбиотической микрофлоры (Ленец И.А. Эталонные формы клинической картины основных внутренних болезней животных / Улан-Удэ, 1989. - 70 С.). Тесная взаимосвязь печени и кишечника опосредует прямой каскад воспалительных реакций в печени при поступлении токсических веществ. Известно, что кишечный микробиоциноз представляет собой эволюцию сложившийся с макроорганизмом взаимозависимый биокомплекс, участники которого в равной степени влияют друг на друга и неспособны нормально существовать отдельно в искусственных условиях (Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: учеб. для ВУЗов. – Сергиев Посад: ООО «Все для Вас-Подмосковье», 1999. 415с.) Основным терапевтическим подходом при патологии печени должно стать применение препаратов модуляторов- липополисахаридов и пробиотиков. (Park BJ, Lee YJ, Lee HR. Chronic liver inflammation: Clinical implications beyond alcoholicliver disease // World J Gastroenterol. 2014. Р. 2168-2175). Изменения микробиологического обсеменения кишечника при заболеваниях печени может стать причиной развития цирроза печени в связи с нарушением пищеварения и накоплением токсических продуктов в кишечнике. При этом увеличение количества Streptococcus salivarius связано с количеством аммиака. (Bajaj J. The role of microbiota in hepatic encephalopathy /Bajaj J // Gut Microbes. 2014. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24690956). Введение культур молочнокислых бактерий L.salivarius LI01 и P.pentosaceus LI05 перед моделированием острой печеночной недостаточности у крыс значительно снижали повышенные показатели АлАТ и АсАТ, сохраняли количество общего билирубина на прежнем уровне (интактном), гистологически отмечалось снижение повреждений в печени, 34 терминальном отделе подвздошной кишки, увеличивался уровень сывороточного интерлейкина. Таким образом, применение пробиотиков при острой печеночной недостаточности оказывают протекторное действие на печень (Lv LX, Hu XJ, Qian GR, Zhang H, Lu HF, Zheng BW, Jiang L, Li LJ. / Administration of Lactobacillus salivarius LI01 or Pediococcus pentosaceus LI05 improves acute liver injury induced by D-galactosamine in rats // Appl Microbiol Biotechnol. 2014. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24639205). Бактериальный сепсис и раневые инфекции после трансплантации печени – частое осложнение, которое лечится препаратами антимикробного действия. Однако, рядом авторов (Gurusamy KS, Nagendran M, Davidson BR. Methods of preventing after liver transplantation bacterial // sepsis Cochrane and wound Database complications Syst Rev. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24599680) показано, что 2014. применение пробиотиков и пребиотиков оказывает защитное действие на организм и препятствуют размножению патогенных микроорганизмов. При этом обсеменение патогенной микрофлорой будет выше при применении антибиотиков, чем про- пребиотиков, что с вязано с антагонистической активностью микроорганизмов. В исследованиях (Kumar R. Molecular cloning, characterization and heterologous expression of bile salt hydrolase (Bsh) from Lactobacillus fermentum NCDO394./ Rajkumar H, Kumar M, Varikuti SR, Athimamula R, Shujauddin M, Ramagoni R, Kondapalli N// Mol Biol Rep. 2013. Р. 5057-5066) показано, что активные пробиотические штаммы Lactobacillus fermentum NCDO394 конъюгируют аминокислоты в естественных условиях, что способствует потреблению печенью холестерина, т.е. косвенному снижению холестерина. Таким образом, пробиотиком, выбранный который штамм способен должен улучшать являться обмен перпективным холестерина в естественных условиях и особенно, при патологиях. Образовавшийся в печеночных клетках прямой билирубин в составе желчи, которую он окрашивает, поступает в тонкий кишечник, где под 35 влиянием бактериальных ферментов подвергается частичному восстановлению с образованием уробилиногена и стеркобилиногена. При поражении паренхимы печени содержащийся в печеночных клетках прямой билирубин поступает в кровь, где его концентрация значительно возрастает. Ослабленные патологическим процессом клетки печени не способны расщеплять уробилиноген, и он появляется в моче, так же, как и прямой билирубин (при патологиях печени, прямой билирубин проходит через печеночный фильтр и обнаруживается в моче). (Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов.- М.: Медицина, 1985. - 432 С.). Применение пробиотиков в ветеринарной практике при лечении патологий пищеварения нашло широкое применение. В крови и моче значительно увеличивается количество свободных аминокислот при нарушении функции печени. При гепатозах у КРС увеличивается количество общего белка (на 8%), соотношение белковых фракций в сторону снижения альбуминов (на 14%). Уменьшение содержания глюкозы (на 24%), общих липидов (на 8%) и мочевины (на 20%) с одновременным возрастанием уровня трансфераз: АсАТ (на 25%) и АлАТ (на 34%). В моче обнаруживают желчные пигменты и уробилин. (Мерзленко Р.А. Клинико-гематологические показатели и морфофункциональное состояние печени коров при гепатозе // Вестник НГАУ. 2013. №2(27). С.104-109.). Уже через 5 дней после применения пробиотиков состояние организма улучшается. Клинически это выражено увеличением концентрации гемоглобина, глюкозы, уменьшение содержания общего белка, повышенеи количества альбуминов, общих липидов и мочевины. Терапевтическая активность пробиотика подтверждена через 10 дней после применения: произошло значительное улучшение клинического состояния и исчезновение общей симптоматики, характерной для гепатоза. Восстановились пищеварение, границы и чувствительность печени. Нормализовалось содержание гемоглобина (111,1 ± 2,5 г/л), палочкоядерных лейкоцитов (4,9 ± 0,23 %), эозинофилов (5,1 ± 0,6 %), общего белка (83,37 ± 0,59 г/л), 36 альбуминов (41,08 ± 1,13 %), глюкозы (2,42 ± 0,04 ммоль/л), общих липидов (4,58 ± 0,08 г/л), мочевины (3,56 ± 0,15 ммоль/л), АсАТ (0,5 ± 0,02 мкмоль) и АлАТ (0,36 ± 0,01 мкмоль). (Мерзленко Р.А. Клинико-гематологические показатели и морфофункциональное состояние печени коров при гепатозе // Вестник НГАУ. 2013. №2(27). С.104-109.). Как мы указывали выше, недостаток йода в организме провоцирует серьезные патологические изменения и отрицательно влияет на состояние здоровья, вызывая целый ряд недугов эндокринного характера. Часто выступает в качестве заболевания-провокатора. Иркутская область характеризуется недостаточностью йода в почве, растениях, воде и относится к зоне йодного дефицита средней тяжести, что, несомненно, вызывает заболевания щитовидной железы у животных, как в латентной, так и и клинически выраженной форме. А также учитывая то, что щитовидная железа регулирует обмен веществ и ее патология обуславливает переориентацию этих процессов в организме, мы обратили внимание на функциональное состояние печени, которая оперативно реагирует на любые нарушения питания, различные заболевания, стрессы и.т.д. В связи с этим очевидна актуальность данных исследований и это определило цель наших исследований. Таким образом, сегодня метод лечения и профилактики с использованием пробиотиков получил широкое развитие в нашей стране и за рубежом, и относятся к «заместительной терапии». 37 ГЛАВА II РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Материалы и методы исследований Работа выполнялась на кафедре анатомии, физиологии и микробиологии ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия», в рамках научных исследований, в соответствии с планом научноисследовательской работы, проводимой сотрудниками ФГОУ ВПО ИрГСХА (номер государственной регистрации 01200602837), и Иркутской городской станции по борьбе с болезнями животных с 2009 по 2014 годы. Объектом исследования были собаки породы немецкая овчарка в количестве 54, средняя живая масса была от 18 до 20 кг. Группы животных подбирались по мере поступления в клинику. Основной моделью эксперимента была выбрана патология печени (гепатит) с признаками диареи, на фоне йоддефицита, и ее коррекция лекарственными препаратами у собак. С целью коррекции патологии печени – гепатит на фоне йоддефицита нами были выбраны препараты стандартной терапии – карсил с комплексом витаминов. Карсил – экстракт плодов расторопши пятнистой (эквивалент силимарина). Относится к группе гепатопротекторных препаратов. Механизм действия препарата все еще недостаточно выяснен. Установлено, что гепатопротекторное действие силимарина обусловлено мембраностабилизирующим действием. Препарат хорошо переносится и в тоже время может обладать побочным действием со стороны желудочнокишечного тракта: тошнота, рвота, диарея. Побочные действия могут быть обусловлены рядом причин, прежде всего, когда препарат применяется на фоне различных сопутствующих заболеваний. Фумаровую энергетического кислоту баланса мы в применяли организме. с целью Фумаровая поддержания кислота является 38 энергетическим субстратом, который обеспечивает нормализацию обмена веществ, стимулирует работу щитовидной железы, снижает гипоксию тканей, тем самым ликвидируется синдром интоксикации и корректируется обмен веществ в организме. С целью выяснения эффекта при лечении заболеваний печени на фоне йоддефицита мы применяли фумаровую кислоту. Пробиотический препарат «Интестевит» содержит в своем составе комплекс бактерий, относящихся к нормальной кишечной микрофлоре, выделенных от здоровых животных. Представляет собой порошок от белого до светло-коричневого цвета или таблетки беловато-серого цвета, хорошо размешиваемые и распадаемые в воде. Интестевит обладает способностью стимулировать ферментативные процессы в кишечнике, контролирует кислотный баланс, повышает естесвенную резистентность организма животных и способствует восстановлению кишечной микрофлоры за счет специфической предназначен деятельности для содержащихся профилактики и в лечения нем бактерий. Он желудочно-кишечных заболеваний (с симтомом диареи), предупреждения различных стрессовых воздействий, коррегирования микробного пейзажа при терапии антибиотиками и химикотерапевтическими препаратами (Наставления по применению препарата «Интестевит» в ветеринарии/Минсельхозпрод России, №13-8-2/719 от 29.07.96). В связи с этим нами были проведены три серии опытов (таблица 1). Первая серия опытов проводилась на 16 животных: группа 1 (7 голов): карсил (стандартная терапия) + фумаровая кислота; группа 2 (9 голов): карсил (стандартная терапия). Стандартная терапия включала – карсил 35 мг 2 раза в день, витамины: В1 10 мг/кг; В6 50 мг/кг; С 10 мг/кг чередуя 1 раз в 3 дня. В первой группе было 7 собак, помимо лечения им скармливали фумаровую кислоту из расчета 50 мг/кг живой массы (растворяли в воде и выпаивали или задавали с фаршем); во второй – 9 голов, лечение было назначено, как и в 39 первой группе – стандартная терапия, но без добавления фумаровой кислоты. Животных лечили в течение 15 дней. Определяли температуру тела, пульс и частоту дыхания, кровь для исследования брали натощак из подкожной вены предплечья до опыта и во время опыта на 3, 9, 12, 15 и через 30 дней с начала лечения. В крови исследовали количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, в сыворотке определяли содержание белка, гормонов Т4, Т3 и кортизола. Проводили ультразвуковое исследование (УЗИ) печени и щитовидной железы на аппарате ультразвуковой диагностики MindrауDS-3 c микроконвексным датчиком 6С2 (5,0/6.5/8.0 МГц) Вторая серия опытов проводилась на 12 животных и включала одну группу 3, животные этой группы получали фумаровую кислоту в расчете 50 мг/голову, доза составила 1,0 г. Третья серия опытов проводилась на 26 животных и включала следующие группы: группа 4 (13 голов) получала интестевит в дозе 2 г на одну голову; группа 5 (13 голов) - интестевит + фумаровая кислота (2,0 г интестевита +1,0 г ф/к). Интестевит применяли в дозе 2,0 г на голову, фумаровую кислоту скармливали из расчета 50 мг/кг живой массы (растворяли в воде и выпаивали или задавали с фаршем). Исследовались те же параметры, что и в первой серии опытов на 3, 9, 12, 15 и через 30 дней с начала лечения. Таблица 1 - Дизайн эксперимента Кол-во Экспериментальные группы Виды воздействий Сроки живот контроля ных, n Контроль животные, больные гепатитом на фоне йоддефицита до лечения 54 40 1 этап Группа 1 Стандартная терапия (карсил 35 мг 2 3, 9, 12, 15 раза в день, витамины 1 раз в три дня: и 30 дней В1 10 мг/кг, В6 50 мг/кг, С 10 мг/кг) + после фумаровая кислота лечения Стандартная терапия (карсил 35 мг 2 Группа 2 раза в день, витамины 1 раз в три дня: В1 10 мг/кг, В6 50 мг/кг, С 10 мг/кг) 7 3, 9, 12, 15 и 30 дней после 9 лечения 2 этап 3, 9, 12, 15 Группа 3 Фумаровая кислота (50 мг/кг) и 30 дней с начала 12 лечения 3 этап 3, 9, 12, 15 Группа 4 Интестевит и 30 дней после 13 лечения 3, 9, 12, 15 Группа 5 Интестевит + фумаровая кислота и 30 дней после 13 лечения Интестевит применяли в дозе 2,0 г на голову, фумаровую кислоту скармливали из расчета 50 мг/кг живой массы (растворяли в воде и выпаивали или задавали с фаршем). Пробиотик интестевит включает культуру бифидобактерий Bifidobacteriumitm globosum, стрептококков Enierococcus faechim и Bacillus sitbtilis. Исследовались те же параметры, что и в первой серии опытов на 3, 9, 12, 15 и через 30 дней с начала лечения (15 дней после лечения). 41 При сборе анамнеза выясняли рацион кормления и условия содержания животного, возраст, пол, сведения о более ранних заболеваниях, время появления первых признаков заболевания. При клиническом исследовании животных определяли общее состояние, температуру тела, проводили пальпацию брюшной полости в области печени. Щитовидную железу пальпировали в области первых трех трахеальных колец с обеих сторон в виде мягких тонких листочков, соединенных узким мостиком. Для постановки точного диагноза данные анамнеза и клинического осмотра недостаточны, поэтому мы использовали ультразвуковое исследование печени и щитовидной железы на аппарате ультразвуковой диагностики MindrауDS-3 c микроконвексным датчиком 6С2 (5,0/6.5/8. 0 МГц). УЗИ печени проводили после 12-ти часовой голодной выдержки животных, в положении лёжа на боку или на спине в дорсальной проекции, шерсть с живота выбривали от мечевидного отростка в каудальном направлении, печень полностью сканировали в поперечной и продольной проекциях (Маннион П. Ультразвуковая диагностика заболеваний мелких домашних животных. М.: Аквариум. 2008. 320 с.). При УЗИ обращали внимание на эхогенность органа, контуры долей, наполнение желчного пузыря и наличия в нем различных включений. УЗИ щитовидной железы проводили у животных в положении на спине, а шею вытягивали кзади. В норме продольные и поперечные размеры щитовидной железы составляют около 5×1,5×0,5 см (Маннион П. 2008). Каждую долю сканировали отдельно. Участки с выбритой шерстью обрабатывали спиртом с последующим нанесением геля «Акугель». Лабораторные методы исследования: кровь для исследования брали натощак из вены сафена (v.saphena) и подкожной вены предплечья (v.cephalika), набирали в пробирку в объеме 2-3 мл. В крови исследовали 42 количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов на гематологическом анализаторе VetABC (производство Франции); в сыворотке крови этих животных определяли общий белок, общий билирубин, холестерол на анализаторе VetSckan VS2 (производство USA) (Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П.Кондрахин, Н.П. Курилов, А.Г.Малахов и др.- М.: Агропромиздат, 1985. - 287 с; Лабораторные исследования в ветеринарии / Под ред. Б.И. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1991. – 287 С.). Определение тиреотропного гормона (ТТГ) и Т3,Т4 в сыворотке крови – набором «Тироид ИФА-ТТГ». Определение «Тироид ИФА-трийодтиронин» методом твердофазного иммуноферментного анализа (Иммунологические методы исследования, под ред. И. Леорковита, Б. Перниса. М.: Мир, 1995; Ильина О.П. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота: кн. 2. Иркутск: ИрГСХА, 2000. 72 с.; Кириллов В.А., Чумаченко А.П., Аристархов В.Г. и др., морфометрический метод определения функциональной Ускоренный активности щитовидной железы//Пробл.эндокр.-1994. № 4.с.19-23.). Обработка результатов исследований. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью лицензионного пакета прикладных программ Statistica 6.1. (StatsoftIhc., США). Статистическую обработку проводили параметрически с учетом t-критерия Стьюдента, причем разность различий средних арифметических признавали значимой при Р ≤ 0,05. 43 2.2. Результаты собственных исследований 2.2.1 Применение фумаровой кислоты и карсила при гепатите на фоне йоддефицита. Для лечения было подобрано 16 собак в возрасте от 2 до 4 лет, были сформированы 2 группы животных. При первичном клиническом осмотре у животных были выявлены признаки диареи различной степени тяжести, животные в основном имели плохую упитанность, были худыми, вялыми, шерсть взъерошена, поверхностные при шейные пальпации лимфатические околоушные, узлы и подчелюстные, щитовидная железа безболезненны, отмечалась незначительная желтушность склеры глаз. При пальпации брюшной стенки животное остро реагировало, проявляя агрессию. Температура тела у всех была в нижних пределах физиологической нормы от 37,8 до 38,4 С0 , пульс был ниже нормы (70-100) в пределах 60-70 ударов в минуту, число дыхательных движений в минуту составляло в среднем 16. У собак до начала лечения было выявлено низкое содержание в крови количества эритроцитов 3,4±0,02×106/mm3 (норма 5,5-8,5×106/mm3); гемоглобина 11±0,2 g/dl (норма 15,0-20,0 g/dl); лейкоцитов 4,0±0,08×10 3/ mm3 (норма 6-12×10 3/ mm3). На УЗИ отмечали увеличение щитовидной железы (рисунок 1), эхогенность этого органа снижена, при пальпации, не во всех случаях, отметили увеличение железы и ее болезненность. 44 Рисунок 1 - Увеличение контура щитовидной железы (правая доля) Первичное ультразвуковое исследование печени (рисунок 2). Акустический доступ не изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцируются отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов хорошо дифференцируются. Желчевыводящая система. Желчный пузырь и протоки: акустический доступ удовлетворительный. Расположение без особенностей, форма «овал». Размеры и контуры: длинник – 30 мм, поперечник в теле – 28 мм, стенка – 1 мм. Желчный пузырь увеличен. Структура стенок и полости: контуры стенок четкие, эхогенность высокая, структура стенок однородная, линейная. Просвет заполнен анэхогенным содержимым в малом количестве, конкременты не выявляются. Внепеченочные протоки не дифференцируются. Внутрипеченочные 45 центральные протоки не расширены, стенки не изменены, эхогенность повышена, структура линейная, однородная, плотная. Рисунок 2 – УЗИ печени до лечения. Гепатит. Собака, немецкая овчарка, 3 года. 1. При исследовании сыворотки крови содержание гормонов щитовидной железы Т3 нами св выявлено низкое - 2,3±0,05- нМ/л; Т4 св - 13±0,4, и высокое содержание кортизола 320±2,0 нМ/л. Выработка гормонов щитовидной железы компенсируется прежде всего ее увеличением (гипертрофией) и на фоне этого увеличена выработка кортизола, как одного из стресс-лимитирующих факторов организма (Архипенко В.И., Федченко Н.И. Некоторые особенности структурной организации щитовидной железы//Архив АГ и Э.-1986. - №6. - с.82-89). На основании клинических данных (недомогания, болевая реакция при пальпации в области печени), результатов УЗИ и по исследованию гормонов в сыворотке крови у животных был диагностирован гепатит с явлениями йоддефицита. Животным 1 группы дополнительно к стандартной терапии назначили фумаровую кислоту из расчета 50 мг/кг живой массы. 46 При получении результатов исследования на 3 и 9 день нами не выявлено достоверных различий. Хотя отмечено снижение содержания кортизола 123-211±3,0 нМ/л и незначительное увеличение содержания Т4 св до 22-28±0,2 нМ/л, что несомненно показывает положительную динамику при применении фумаровой кислоты, как одного из энергетических субстратов в регуляции обменных процессов. На 12 день наблюдений нами выявлены изменения клинических показателей: у животных в первой группе отмечено повышение температуры тела до нормы 37-380С; при пальпации печени отсутствует болезненность, достоверно повысилось содержание эритроцитов 9,3±0,08×106/mm3. В группе животных, получавших стандартную терапию, такое повышение (было недостоверно с исследованием на 3 и 9 день опыта) было ниже по сравнению с показателями 1 группы; содержание гемоглобина повысилось, но различия между группами недостоверны. Нами выявлены значительные отличия в группах по содержанию гормонов щитовидной железы Т3 св - 6,3 ± 0,08 (1 группа) и 3,9±0,03 (2 группа) нМ/л; Т4 св – 32,6± 0,7 (1 группа) и 20,4± 0,5 (2 группа) и низкое содержание кортизола 55±0,9 (1 группа) и 134± 3,2 (2 группа) нМ/л. УЗИ печени на 12 день лечения (рисунок 3). Размеры долей печени не изменены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. На УЗИ выявлено снижение эхогенности печени у животных в первой группе. При клиническом осмотре на 12 день у животных каких-либо явлений недомогания не отмечены, при пальпации в области печени болевой реакции у животных не было. 47 При исследовании на 12 день опыта содержание гормонов щитовидной железы и кортизола в первой группе опыта достоверно не изменилось; а содержание кортизола во второй группе животных незначительно повысилось до 176 нМ/л. Рисунок 3 – УЗИ печени после лечения. Собака, немецкая овчарка, 3 года Анализируя данные таблицы 2 «Показатели гормонов щитовидной железы и кортизола», видно, что у животных в 1 группе произошло достоверное увеличение гормонов щитовидной железы, это, несомненно, указывает на нормализацию ее функции. Снижение кортизола, который является одним из стресс-лимитирующих факторов, указывает на улучшение регуляции обменных процессов у данных животных. При исследовании сыворотки крови нами выявлено низкое содержание гормонов щитовидной железы Т3 св - 2,3±0,05- нМ/л; Т4 св - 13±0,4 - и высокое содержание кортизола 320±2,0 нМ/л. Выработка гормонов щитовидной железы компенсируется, прежде всего, ее увеличением (гипертрофией) и на фоне этого увеличена выработка кортизола, как одного из стресслимитирующих факторов организма. При получении результатов исследования на 3 и 9 день нами не выявлено достоверных различий. Хотя 48 отмечено снижение содержания кортизола 123-211±3,0 незначительное увеличение содержания Т4 св несомненно динамику показывает положительную нМ/л и до 22-28± 0,2 нМ/л, что при применении фумаровой кислоты, как одного из энергетических субстратов в регуляции обменных процессов. Таблица 2 - Показатели гормонов щитовидной железы и кортизола у собак при применении фумаровой кислоты + карсила (1 группа), карсила (2 группа) Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л 1 группа n=7 2,3± 0,05 13,0 ± 0,4 4,2 ± 0,3 320,0±2,0 2 группа n=9 2,9± 0,03 12,0 ± 0,6 3,9 ± 0,2 281±3,1 1 группа n=7 7,3± 0,02 28,3± 0,2 0,21± 0,8 210±4,5 2 группа n=9 5,9 ± 0,02 9,2± 0,1 2,6±0,2 187± 1,2 № до лечения после лечения (через 30 дней после лечения) Примечание: показания считали достоверными при Р≤0,05 После лечения увеличен коэффициент положительной корреляции между кортизолом и Т3, кортизолом и Т4, а также между ТТГ и Т3. В результате наших исследований выявлено, что применение фумаровой кислоты и карсила уже на 12 день лечения стабилизировало состояние здоровья животных, вызвало повышение содержания гормонов щитовидной железы и снижение кортизола в сыворотке крови животных 1 группы, эти изменения сохранились и через 30 дней с момента лечения. Для оценки функционального состояния печени в сыворотке крови определяли содержание холестерола, поскольку снижение синтетической 49 способности печени при различных патологических состояниях характеризуется уменьшением концентраации в крови как свободного холестерола, так и особенно его эфиров. Билирубина, так как он образуется в печеночных клетках, но при патологиях печени, когда его количество возрастает, он оказывается токсичным для ослабленного организма. Общего белка, поскольку в патогенезе развития печеночного отека важную роль играет гипопротеинемия, обусловленная нарушением синтеза белков в печени. Таблица 3 – Биохимические показатели сыворотки крови у собак в опытах (результаты после лечения на 15 день) Группы животных Холестерол Билирубин Общий белок (mmol/ l) (vmol/ l) (g/ l) До После До После До После лечения лечения* лечения лечения* лечения лечения* 1 8,1±0,2 7,4±0,3 14,0±0,3 13,1±0,8 52±2,9 61±3,1 2 7,6±0,8 6,6±0,4 15,2±0,5 14,1±0,4 60±3,0 64±2,8 Из данных таблицы видно, что уровень холестерина в сыворотке крови снижается после лечения. Известно, что около 15% глюкозы окисляется по пентозному пути с образованием энергии НАДФН+Н+, необходимой для синтеза холестерина и жирных кислот (Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. СПб.: Лань, 2004. 271–272 с.). Клетками здоровой печени вновь используется холестерин и его количество в сыворотке крови косвенно снижается. Полученные данные схожи с результатами ученых (Kumar R. Molecular cloning, characterization and heterologous expression of bile salt hydrolase (Bsh) from Lactobacillus fermentum NCDO394./ Rajkumar H., Kumar M., Varikuti S.R., Athimamula R., Shujauddin M., Ramagoni R., Kondapalli N.// Mol Biol Rep. 2013. Р. 5057-5066), в опытах которых уровень холестерина в крови снижался после использования активных пробиотических штаммов Lactobacillus 50 fermentum NCDO394. При заболеваниях печени происходит нарушение регенераторных процессов. В такой ситуации в составе липидных фракций снижается доля фосфолипидов, а уровень холестерина и его эфиров – выше нормальных значений. (Ермолаева Л.А. Токсическое действие этопозида на морфофункциональное состояние печени крыс // Сибирский онкологический журнал. 2007. №2. С. 47). Известно, что образовавшийся в печеночных клетках прямой билирубин в составе желчи, которую он окрашивает, поступает в тонкий кишечник, где под влиянием бактериальных ферментов подвергается частичному восстановлению с образованием уробилиногена и стеркобилиногена. При поражении паренхимы печени содержащийся в печеночных клетках прямой билирубин поступает в кровь, где его концентрация значительно возрастает (Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. СПб.: Лань, 2004. 384 с.). В наших же опытах снижение билирубина к сыворотке крови животных после лечения достоверно ниже, чем до лечения. Такой результат получен благодаря применению пробиотического препарата интестевит. Повышение общего белка в группах животных после лечения свидетельствует о восстановлении белковообразующей функции печени. 2.2.2 Применение фумаровой кислоты при гепатите на фоне йоддефицита. Для коррекции обмена веществ при заболеваниях печени на фоне йоддефицита мы использовали фумаровую кислоту, которая нашла широкое применение в птицеводстве (Фисинин В.И., Околелова Т.М. Применение фумаровой кислоты в животноводстве // Зоотехния. 1989. № 11. С. 35-38; Бузлама В.С., Агеева Т.И., Рецкий М.И. и др. Фармакотоксикологическая характеристика фумаровой кислоты // Ветеринария. - 1986. - №6.- с. 49-53). Энергетическая ёмкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, но, учитывая более оперативные энергетические свойства фумарата, ее можно 51 использовать для энергетической поддержки критического состояния, главным образом при различного рода стрессовых воздействий и при различных формах патологии обмена веществ. Фумаровая кислота является энергетическим субстратом, который обеспечивает нормализацию обмена веществ, стимулирует работу щитовидной железы, снижает гипоксию тканей, тем самым ликвидируется синдром интоксикации и корректируется функция печени. С целью выяснения, эффекта при лечении заболеваний печени на фоне йоддефицита мы применяли фумаровую кислоту. Как уже говорилось выше, энергетическая ёмкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, поэтому для коррекции обмена веществ, при заболеваниях печени на фоне йоддефицита мы использовали фумаровую кислоту, нашедшую широкое применение в птицеводстве (Фисинин В.И., Околелова Т.М. 1989). Изучали влияние фумаровой кислоты на функциональное состояние гипофизарно-тиреоидной системы у собак с поражением печени на фоне йоддефицита. Одной из важных характеристик функционального состояния печени является содержание в крови холестерина. В наших исследованиях было выявлено достоверное снижение содержания концентрации холестерина в сыворотке крови после применения фумаровой кислоты (таблица 4). Для изучения влияния фумаровой кислоты на функциональное состояние гипофизарно-тиреоидной системы у собак с поражением печени на фоне йоддефицита, было подобрано 12 собак. У этих собак, так же, как и у животных 1 и 2 групп был диагностирован гепатит с явлениями йоддефицита, по клиническим данным (недомогания, болевая реакция при пальпации в области печени), показаниям УЗИ и по исследованию гормонов в сыворотке крови. У собак до начала лечения было выявлено низкое содержание количества эритроцитов 3,4±0,02×10 6/mm3; гемоглобина 11±0,2 g/dl; лейкоцитов 4,0±0,08×103/mm3. При проведении УЗИ выявлено увеличение границ печени, ее высокая эхогенность, при пальпации 52 отмечена болезненность этого участка; в щитовидной железе отмечено также увеличения контура, но эхогенность этого органа снижена, при пальпации, не во всех случаях отметили увеличение железы и болезненность. При исследовании сыворотки крови нами выявлено низкое содержание гормонов щитовидной железы Т3 св - 2,4±0,01 нМ/л; Т4 св - 11±0,4, и высокое содержание кортизола 180±4,0 нМ/л, выработка гормонов щитовидной железы компенсируется прежде всего ее увеличением (гипертрофией). При получении результатов исследования на 3 и 9 день не выявлено достоверных различий. Хотя отмечено снижение содержания кортизола 123211±3,0 нМ/л и незначительное увеличение содержания Т4 св нМ/л, динамику что, несомненно, показывает положительную до 22-28±0,2 при применении фумаровой кислоты, как одного из энергетических субстратов в регуляции обменных процессов. Исследовалась также сыворотка крови на холестерол, билирубин и общий белок (таблица 4) Таблица 4 – Биохимические показатели сыворотки крови у собак в опытах (результаты после лечения на 15 день) Группы животных Холестерол Билирубин Общий белок (mmol/ l) (vmol/ l) (g/ l) До После До После До После лечения лечения* лечения лечения* лечения лечения* 3 7,9±0,4 6,1±0,7 16,1±0,5 13,8±0,6 54±3,2 62±1,9 Из данных таблицы видно, что уровень холестерина в сыворотке крови снижается после лечения. Известно, что около 15% глюкозы окисляется по пентозному пути с образованием энергии НАДФН+Н+, необходимой для синтеза холестерина и жирных кислот (Зайцев, С. Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. СПб. : Лань, 2004. 384 с.). Клетками здоровой печени вновь используется холестерин и его количество в сыворотке крови косвенно снижается. 53 Полученные данные схожи с результатами ученых (Kumar R. Molecular cloning, characterization and heterologous expression of bile salt hydrolase (Bsh) from Lactobacillus fermentum NCDO394 // Mol Biol Rep. 2013. Р. 5057-5066), в опытах которых уровень холестерина в крови снижался после использования активных пробиотических штаммов Lactobacillus fermentum NCDO394. При заболеваниях печени происходит нарушение регенераторных процессов. В такой ситуации в составе липидных фракций снижается доля фосфолипидов, а уровень холестерина и его эфиров – выше нормальных значений. (Ермолаева Л.А. Токсическое действие этопозида на морфофункциональное состояние печени крыс // Сибирский онкологический журнал. - 2007. - №S2. С. 47). Известно, что образовавшийся в печеночных клетках прямой билирубин в составе желчи, которую он окрашивает, поступает в тонкий кишечник, где под влиянием бактериальных ферментов подвергается частичному восстановлению с образованием уробилиногена и стеркобилиногена. При поражении паренхимы печени содержащийся в печеночных клетках прямой билирубин поступает в кровь, где его концентрация значительно возрастает (Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учеб. СПб.: Лань, 2004. 384 с.). В наших же опытах снижение билирубина к сыворотке крови животных после лечения достоверно ниже, чем до лечения. Такой результат получен благодаря применению пробиотического препарата интестевит. Повышение общего белка в группах животных после лечения свидетельствует о восстановлении белковообразующей функции печени. У собак до начала лечения было выявлено низкое содержание количества эритроцитов 3,4±0,02 × 10 6/mm3 ; гемоглобина 11±0,2 g/dl; лейкоцитов 4,0±0,08 × 10 3/mm 3. 54 Рисунок 4 - УЗИ печени до лечения фумаровой кислотой УЗИ печени после лечения. Акустический доступ не изменен. Печень не увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость разная. Рисунок паренхимы неоднородный. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Подвижность печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, четкие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы не отчетливо, сосуды не расширены, рисунок сосудистого русла обеднен. Стенки сосудов не дифференцируются. Желчевыводящая система. Желчный пузырь и протоки: акустический доступ удовлетворительный. Расположение без особенностей, форма «овал». Размеры и контуры: длинник – 29 мм, поперечник в теле – 25 мм, стенка – 1 мм. Желчный пузырь не увеличен. Структура стенок и полости: контуры стенок нечеткие, эхогенность средняя, сопоставима с эхогенностью паренхимы печени, структура стенок однородная, линейная. Просвет заполнен анэхогенным содержимым, Внепеченочные малое количество, протоки не конкременты дифференцируются. не выявляются. Внутрипеченочные 55 центральные протоки – не дифференцируются, стенки не изменены, эхогенность повышена, структура линейная, однородная, плотная. Норма. При анализе таблицы 4, видно, что у животных в 3 группе произошло достоверное увеличение гормонов щитовидной железы, что, несомненно, указывает на нормализацию ее функции. Таблица 4 - Показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак при применении фумаровой кислоты № Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л 4,0 ± 0,13 180,0 ± 2,0 до лечения 3 группа n=12 2,4± 0,01 11,0 ± 0,4 после лечения (через 30 дней после лечения) 3 группа n=12 4,6± 0,32 16± 0,71 1,9 ± 0,91 177± 27,0 При применении фумаровой кислоты в данном исследовании выявлена высокая степень корреляции между ТТГ и Т3, ТТГ и Т4, что несомненно указывает на повышенную выработку гормонов щитовидной железы и угнетение ТТГ. Для этого необходима энергия, которая в данном случае обеспечена наличием фумаровой кислоты. В результате наших исследований, выявлено, что применение фумаровой кислоты, начиная с 12 дня лечения стабилизировало состояние здоровья животных, достоверно повысилось содержание эритроцитов до 9,3±0,08х10 6/mm 3. Содержание гемоглобина повысилось, что несомненно, указывает на снижение в тканях гипоксии. Кроме этого отмечено повышение содержания гормонов щитовидной железы Т4 и угнетение ТТГ, и снижение кортизола, в сыворотке крови, эти изменения сохранились и на 30 день с момента лечения. Фумаровая кислота вызывает достоверное повышение концентрации лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина, что указывает на уменьшение гипоксии тканей, способствуя снижению интоксикации. Также 56 произошло достоверное сниженеие уровней холестерина, билирубина в сыворотке крови, и повышение общего белка (таблица 4). При применении фумаровой кислоты в данном исследовании выявлена высокая степень корреляции между ТТГ и Т3, ТТГ и Т4, что несомненно указывает на повышенную выработку гормонов щитовидной железы и угнетение ТТГ. Для этого необходима энергия, которая в данном случае обеспечена наличием фумаровой кислоты. В результате наших исследований выявлено, что применение фумаровой кислоты, начиная с 12 дня лечения стабилизировало состояние здоровья животных, достоверно повысилось содержание эритроцитов 9,3±0,08×106/mm3. Содержание гемоглобина повысилось, что, несомненно, указывает на снижение в тканях гипоксии. Кроме этого отмечено повышение содержания гормонов щитовидной железы Т4 и угнетение ТТГ, и снижение кортизола, в сыворотке крови, эти изменения сохранились и на 30 день с момента лечения. Фумаровая кислота вызывает достоверное повышение концентрации лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина, что указывает на уменьшение гипоксии тканей, способствуя снижению интоксикации. 2.2.3 Применение фумаровой кислоты и интестевита при лечении гепатита на фоне йоддефицита у собак. Традиционные методы лечения животных с применением различных антибактериальных препаратов не всегда дает положительный эффект, способствует угнетению нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), развитию иммунодефицитных состояний, дестабилизации обменных процессов в организме. Все большее распространение получают пробиотики, которые, попадая в ЖКТ больных животных, подавляют (вытесняют) патогенную микрофлору, тем самым обеспечивая заселение полезной микрофлорой и стабилизацией обменных процессов. 57 Нами использовался «Интестевит» - пробиотик, содержащий в своем составе комплекс бактерий, относящихся к нормальной кишечной микрофлоре, выделенной от здоровых животных. Представляет собой сыпучий порошок от белого до светло - коричневого цвета, или таблетки. Рекомендовано его использование, с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний различной этиологии, способностью стимулировать естественной ферментативные резистентности процессы организма в кишечнике, животных и повышению восстановления кишечной микрофлоры за счет специфической деятельности содержащих в нем бактерий (Курятова Е.В. Изменения биохимических показателей крови поросят-отъемышей при неспецифическом гастроэнтерите до и после лечения // Вестник ИрГСХА. – Выпуск 57. Ч. 3. С. 66-71). Учитывая то, что печень является ключевым звеном во всех обменных процессах, была поставлена цель изучить клинико-биохимические показатели и гормональный статус собак до и после лечения пробиотическим препаратом интестевит и интестевитом в сочетании с фумаровой кислотой. Для данного исследования было подобрано 26 собак породы немецкая овчарка, средний вес животных составил 18-20 кг. При сборе анамнеза выясняли рацион кормления и условия содержания животного, возраст, пол, сведения о более ранних заболеваниях, время появления первых признаков заболевания. Первичные признаки заболевания характеризовались частичным отказом от корма (смешанный корм), вялостью, тусклым цветом и взъерошенностью шерстного покрова, диареей. При клиническом исследовании животного определяли общее состояние, оно было угнетенным, температура тела была в пределах нижней нормы 37,7- 38,4 0С, пульс был ниже нормы (70-100) в пределах 67-74 ударов в минуту, число дыхательных движений в минуту составляло в среднем 15. Отмечалась болезненность при пальпации брюшной стенки, увеличение 58 границ печени из-под реберной дуги (справа в боковой проекции), наблюдается незначительная желтушность склеры глаз, признаки диареи. Для более точного диагноза, данные анамнеза и клинического осмотра недостаточны, поэтому мы использовали ультразвуковое исследование (УЗИ) щитовидной железы, печени и органов брюшной полости и лабораторные исследование крови и ее сыворотки. Для подтверждения диагноза проводили УЗИ исследование всех животных в опыте, у них отмечается справа увеличение печени за границу реберной дуги и незначительная ее эхогенность. При клиническом исследовании животных на 4 день лечения мы наблюдали отсутствие признаков диареи в группе, где использовали интестевит в сочетании с фумаровой кислотой, у этих животных при пальпации области печени не выявлено болезненной реакции, в другой группе, где использовался только интестевит, признаки диарее исчезли на 8 день лечения. УЗИ щитовидной железы у животных которым давали интестевит и фумаровую кислоту (рисунок 5), до лечения нами выявлено как и в предыдущих случаях острое воспаление паренхимы самой железы, повышена ее эхогенность. При повторном исследовании на 30 день после начала исследования нами отмечается снижение эхогенности, контуры четко обозначены (рис 6). 59 Острое воспаление Рисунок 5 - УЗИ щитовидной железы до лечения интестевитом и фумаровой кислотой 60 Рисунок 6 - УЗИ щитовидной железы после лечения интестевитом и фумаровой кислотой 61 УЗИ печени в группе, где применялся только интестевит, показало до лечения (рисунок 7). Акустический доступ изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются очень ясно. Рисунок 7 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (до лечения). После лечения (рисунок 8). Акустический доступ изменён незначительно. Печень незначительно увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени 62 соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются очень ясно. Рисунок 8 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (после лечения). УЗИ печени при применении интестевита в сочетании с фумаровой кислотой показало: до лечения (рисунок 9). Акустический доступ не изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, 63 сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются очень ясно. Рисунок 9 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (до лечения). После лечения группа, в которой применили интестевит и фумаровую кислоту (рисунок 10). Размеры долей печени не изменены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. 64 Рисунок 10 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (лечение интестевит +фумаровая кислота, 30 день). Дополнительно оценивали морфологические показатели крови собак (таблица 5) и показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак (таблица 6) Таблица 5 - Морфологические показатели крови собак (M+m) Лейкоциты Эритроциты Гемоглобин 103mm3 106mm3 g/dl 4 группа 4,3±0,25 4,0±0,31 7,1± 0,41 5 группа 4,7± 0,11 3,9±0,04 6,2± 0,11 7,0±0,33 6,1±0,25 8,1± 0,21 8,6±0,53 7,7±0,21 8,4±0,39 До лечения После лечения 4 группа (интестевит) 5 группа * 65 (интестевит+ ф/к) Примечание: * Р ≤ 0,05 Нами выявлено, что у собак до лечения морфологические показатели крови достоверно ниже, чем через 4, 12 и 30 день с момента лечения. Для определения взаимосвязи работы печени и её гормональной регуляции определяли гормоны щитовидной железы (таблица 7). В работе (Kim S.R., Tull E.S., Talbott E.O., et al. A hypothesis of synergism: the interrelationship of T3 and insulin to disturbances in metabolic homeostasis // Med. Hypothesis. 2002. Vol.59. №6. Р.660-666) показано, что при снижении уровня гормона Т3 изменяется содержание регуляторных белков, влияющих на метаболизм глюкозы и липидов. На этом основана гипотеза о синергетическом действии гормона Т3 и инсулина в нарушении метаболического гомеостаза. Важно отметить, что в биогеохимических регионах по йодной недостаточности в организме повышается выработка ТТГ (тиреотропный гормон) и нарушается синтез тиреоидных гормонов. Добавление йода в рацион способствует повышению концентрации Т4, на фоне значительного снижения уровня ТТГ и оТ3, при этом одновременно ингибируются процессы ПОЛ в печени, почках и селезенке, увеличивается среднесуточный прирост у животных (Габитова З.С. 2012; Величковский Б. Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды // Вестн. РАМН. 2001. № 6. С. 45–52.). Так же, как и в предыдущих опытных группах, было определено количественное содержание билирубина, холестерина и общего белка (таблица 6). 66 Таблица 6 – Биохимические показатели сыворотки крови у собак в опытах (результаты после лечения на 15 день) Группы животных Холестерол Билирубин Общий белок (mmol/ l) (vmol/ l) (g/ l) До После До После До После лечения лечения* лечения лечения* лечения лечения* 4 8,2±0,5 6,0±0,2 17,4±0,3 15,2±0,3 54±4,1 59±3,0 5 7,8±0,3 5,8±0,3 16,8±0,8 13,9±0,8 58±1,9 60±2,1 Примечание: * Р ≤ 0,05 Повышение билирубина в сыворотке крови происходит и вследствие холестаза. При этом также отмечают угнетение, анорексию, синдромы токсикоза, энтериты и диареи с признаками стеркобилиновой недостаточности, желтушность видимых слизистых оболочек (Уша Б.В., Беляков И.М. Ветеринарная пропедевтика. – М. : КолосС. 2008. 527 с.). Таблица 7 - Показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л До лечения 4 группа 2,8± 0,21 11,5± 0,42 4,1± 0,10 230± 5 2,3 ± 0,14 13 ± 0,01 3,7 ± 0,2 260 ± 7,0 (интестевит) 5 группа (интестевит+ ф/к) После лечения 67 4 группа 6,9 ± 0,25 15,0 ± 0,21 1,1± 0,0 160 ± 3,5 7,1 ± 0,81 19,0± 0,04 0,85± 0,06 160 ± 3,5± (интестевит) * 5 группа (интестевит+ ф/к) * Примечание: * Р ≤ 0,05 В результате проведенного лечения коэффициент положительной корреляции выявлен между кортизолом и Т3 (0,601), кортизолом и Т4 (0,463), а также между ТТГ и Т3 (0,403). При этом корреляция между ТТГ и Т4 (-596) стала отрицательной и уменьшился коэффициент корреляции между ТТГ и кортизолом (0,794). Учитывая положительную корреляцию при применении интестевита в сочетании с фумаровой кислотой, уровень гормонального статуса животных и достоверные различия показателей крови, использование этих препаратов наиболее благоприятно отразилось на здоровье животных. 68 ГЛАВА III. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Клинические и биохимические исследования животного позволяют поставить точный диагноз и назначить правильное лечение. Биохимические показатели сыворотки крови объективно отражают состояние обмена веществ у животных. Они характеризуют функциональную активность отдельных органов и систем. Однако без клинических исследований довольно сложно определить путь исследования сыворотки крови. Изучая заболевания животных, особое внимание должно уделяться этиологическим факторам, которые в дальнейшем определяют тактику и стратегию лечения. При проведении наших исследований мы исходили из той позиции, что территория региона эндемически неблагополучна по содержанию йода в атмосфере (почва, вода, воздух). исследователями (Кудрявцев А.П. Профилактика Предыдущими минеральной недостаточности у животных // Иркутск, 1993. - 64 с.; Алябьев Г.А. Содержание йода в водных источниках Восточной Сибири (в районах распространения эндемического зоба) // Лекарственные сырьевые ресурсы Иркут. обл. - 1961.- Вып. 3. - с. 210-212.;Ильина О. П. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота: в 2 кн. / О. П. Ильина, Б.Я. Власов, Ю.А. Тарнуев. – Иркутск: ИрГСХА, 2000), было доказано, что у животных, находящихся на такой территории, отмечаются нарушения обмена веществ в той или иной степени. Симптомы не всегда выражены, часто протекают в латентной форме, такие животные угнетены, малоподвижны, шерсть взъерошена, волосы тусклые, не редки случаи снижения веса, кожа чаще становится сухой. Температура тела может находиться в пределах нижней физиологической нормы (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. // И. Г. Шарабрин, В. А. Аликаев, Л. К. Замарин и др. - М.: Агропром-издат, 1986. - 527 C.; Ленец И.А. Эталонные формы клинической картины основных внутренних болезней животных / Улан-Удэ, 1989. - 70 С.). Хотя ряд авторов считают, что 69 при гепатите температура тела может повышаться, но в наших исследованиях мы этот феномен не наблюдали, и считаем, что на фоне йоддефицитного состояния происходит угнетение процессов теплорегуляции (Аухатова С.Н. Функциональное состояние щитовидной железы при разном уровне йода и гойтрогенных веществ в рационе поросят // Бюл. ВНИИФБП. - 1993.- №1 - с. 65-69). При пальпации щитовидной железы в области верхней трети шеи, не всегда можем прощупать ее увеличение, она безболезненна, иногда могут наблюдаться незначительные утолщения. При УЗИ диагностики мы наблюдали двухдольчатое строение, соединённое перешейком, нами также выявлено увеличение одной из долей железы, выявить, какая из них чаще увеличивается, нами никакой закономерности не выявлено. неравномерная эхогенность, она повышена на Отмечается небольших участках уплотнения (Маннион П. Ультразвуковая диагностика заболеваний мелких домашних животных / пер. с англ. Под общ. Ред. Пэдди Маннона. - М.: Аквариум. - 2008. - 320с). Принципиальный подход в изучении клинико-биохимических показателей гормонального статуса при гепатите у собак на фоне йоддефицита и пути ее коррекции, который заключается в необходимости изучения этой геохимической патологии молекулярных механизмов йодного цикла, поломка которых может быть следствием, а затем причиной нарушения процесса использования этого микроэлемента организмом животных. Поэтому настоящее исследование направлено на доказательство возможности получения позитивного эффекта при йоддефиците у животных, путем воздействия на указанные выше звенья, без дополнительного введения препаратов йода. Вместе с тем для получения цельной картины йоддефицита, как геохимической патологии, диагностические значения отдельных симптомов, выявлено, что у животных отмечается небольшое (незначительное) 70 увеличение щитовидной железы, расстройства желудочно-кишечного тракта, и т.д.; чаще отмечается латентная форма, и только при пальпации в области глотки можно обнаружить незначительное увеличение железы. В своих исследованиях мы установили, что клинически выраженный зоб характеризуется достоверным снижением концентрации в сыворотке крови Т4 и Т3 (тироксин и трийодтиронин), а главное - повышением содержания тиреотропного гормона передней доли гипофиза тиреотропного гормона, который является самым важным маркером функционального состояния щитовидной железы. При клиническом осмотре у животных выявлена желтушность слизистых оболочек, болезненность области печени. И действительно, как указывают Кесарева Е.А., Денисенко В.Н. (Кесарева Е.А., Денисенко В.Н. Клиническая интерпретация биохимических показателей сыворотки крови собак и кошек М.: КолосС, 2011 28с.), при гепатитах различной степени тяжести у собак отмечают болезненность печени в 100% случаев, увеличение ее размеров – у 79,7%, угнетение общего состояния и диарею – у 40,5%, рвоту - у 52,7%. Глазные болезни выявляют у 12,2% собак с хроническим гепатитом. Для диагностики нарушений пигментообразовательной функции печени определяют содержание билирубина в сыворотке крови. Непрямой билирубин, попадая в печень, связывается с клюкуроновой кислотой и обезвреживается. При поражениях этого органа в крови и моче повышается содержание прямого билирубина (Уша Б.В., Беляков И.М. Ветеринарная пропедевтика. – М.: КолосС. 2008. 527 с.; Кесарева Е.А., Денисенко В.Н. Клиническая интерпретация биохимических показателей сыворотки крови собак и кошек. М.: КолосС, 2011. 28с.). Так и в сыворотке крови обследованных собак было обнаружено повышение билирубина. В норме билирубин составляет 3,5-13,0 vmol/l, у опытных животных билирубин был повышен и достигал 16,1±0,5 vmol/l. После лечения во всех группах билирубин снижался. Накопление в крови билирубина и продуктов его 71 обмена способствует возникновению желтухи – клиническому признаку, который был визуализирован сразу, после осмотра пациентов. Для выяснения функции печени в липидном обмене в крови определяют уровень холестерина. Известно, что концентрация холестерина также повышается при заболеваниях поджелудочной железы, снижении функции щитовидной железы (Кесарева Е.А., Денисенко В.Н. Клиническая интерпретация биохимических показателей сыворотки крови собак и кошек. М.: КолосС, 2011. 28 с.) Понижение эстерификации холестерина служит одним из ранних признаков нарушения функции печени. Что наглядно у исследуемых собак. При первичном биохимическом анализе крови было выявлено достоверное повышение холестерина: 1 группа – 8,1±0,2 mmol/l; 2 группа - 7,6±0,8 mmol/l; 3 группа - 7,9±0,4 mmol/l; 4 группа - 8,2±0,5 mmol/l; 5 группа - 7,8±0,3 mmol/l; Норма – 2,9 – 6,0 mmol/l. Даже после лечения в группах уровень холестерина не приходит в норму, что говорит о неполном восстановлении физиологии печеночной ткани (Brix K., Wirtz R., Herzoq V - Paracrine interaction between hepatocytes and macrophaqes affer extrathyroidal proteolysis of thyroqlobulin // Hepatoloqy 1997 Nov; 26 (5): 1232-40). Печень в зависимости от своего функционального уровня оказывает активное воздействие на морфофункциональное состояние как отдельных органов и систем, так и всего организма. С другой стороны, как было выяснено в наших экспериментах, состояние прочих органов и систем тоже накладывает отпечаток на морфофункциональное состояние печени, особенно ярко это влияние при гастроэнтеритах. Патогенез острого гепатита следует рассматривать как проявление общепатологического состояния организма, связанного с перегрузкой 72 печени, и как следствие, её функциональным ослаблением. Вследствие отёка органа его объем и перкуссионные границы интенсивно увеличиваются в каудовентральном направлении, вызывая болезненность при проникающей и глубокой пальпации из-за перерастяжения глиссоновой капсулы (Уша Б.В., Беляков И.М. Ветеринарная пропедевтика. – М.: КолосС. 2008. 527 с.). Что мы и наблюдали у собак на приеме. Снижение белка, обнаруженное при биохимическом исследовании крови, незначительно. Но изменяется протеинограмма: количество альбуминов снижается на 28-30%, а глобулинов увеличивается на 70-72% (Уша Б.В., Беляков И.М. Ветеринарная пропедевтика. – М. : КолосС. 2008. 527 с.). Каждый фолликул щитовидной железы окружен густой сетью капилляров и по кровоснабжению она занимает первое место в организме, что еще раз подтверждает регуляцию всего организма щитовидной железой. В соответствии с литературными данными, мы оценили совокупность изменений концентраций гемоглобина и эритроцитов. Для коррекции тиреоидного статуса и энергетического метаболизма, которые определяют нарушения многих функций целостного организма, и, исходя из полученных нами данных в нарушении энергетического метаболизма у животных при йоддефиците, а также принимая во внимание исследования отечественных и зарубежных ученых по применению рост-стимулирующих веществ, мы сделали попытку оптимизировать тиреоидный статус у животных путем введения в рацион фумаровой кислоты. Важно подчеркнуть, что в этих наших исследованиях животные не получали дополнительной подкормки йодистых препаратов. В результате проведенных исследований было показано, что фумаровая кислота достоверно повышает содержание трийодтиронина, приводит к снижению концентрации тиреотропного гормона, нормализует биоэнергетический статус у животных. Мы полагаем, что описанные эффекты связаны с позитивным действием повышения биоэнергетики всех органов и тканей, а также ЩЖ, что активизирует 73 многостадийный механизм утилизации йода, многие этапы которого являются энергозависимыми. Учитывая, что фумаровая кислота уже в течение последних 2-х десятилетий применяется как добавка при кормлении свиней и кур, её использование для профилактики и лечении нарушений обмена веществ не будет иметь никаких принципиальных ограничений, тем более что это соединение, проявляя анаболический и антистрессовый эффект, приводит к повышению живой массы животного (Ильина О.П. и др. 2000; Григорьев Г. Е. и др. 2004 г.). Энергообеспечение живой клетки состоит в получении энергии за счет внешних энергетических ресурсов и последующем использовании ее при реализации жизненных функций. Основными внешними энергетическими источниками животного является энергия, заключенная в химических связях главных компонентов кормов – белков, липидов и углеводов. Эти биомолекулы отличаются большим разнообразием, и живая клетка, согласно первому закону биоэнергетики, «избегает прямого использования энергии внешних ресурсов для совершения полезной работы» (Кулинский В.И. Передача и трансдукция гормонального сигнала в разные части клетки // Сорос. обр. журнал. С.14-19). В желудочно-кишечном тракте животных в результате действия пищеварительных ферментов, а отчасти и микрофлоры (жвачные), происходит деградация компонентов корма с образованием мономеров, число которых значительно меньше, чем количество типов биомолекул в корме. Так, огромное множество кормовых белков (по крайней мере, несколько тысяч), полисахаридов и липидов расщепляются на небольшое число соединений, включающих 20 аминокислот, десятки жирных кислот, глицерин и десятки моносахаридов. Фумаровая (транс-бутендиовая) кислота представляет собой белый кристаллический порошок без запаха, кислого вкуса, плохо растворимый в воде (22,5 г в 1 л воды при 25С), негигроскопичный, устойчивый к окислению и колебаниям температуры. Кислота хорошо смешивается с 74 кормами и совместима с другими биологически активными веществами, что позволяет включать ее в состав премикса. Фумаровая кислота практически не токсична. При однократном введении внутрь цыплятам LD50 составляет 10 г на 1 кг живой массы. Кислота участвует в ряде ключевых реакций энергетического, структурного и ферментного обеспечения. Прежде всего, она является незаменимой частью цикла трикарбоновых кислот - универсального звена в аэробном обеспечении клетки ранее указанными тремя формами энергетической «валюты». Энергетическая емкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, но учитывая более оперативные энергетические свойства фумарата, ее можно использовать для энергетической поддержки критических состояний, главным образом, при различного вида стрессовых воздействиях (транспортировка, вакцинация, перегруппировка животных и др.). Развивая представления о ведущей роли энергетического метаболизма в формировании тиреоидного статуса в функционировании щитовидной железы, который может обеспечить эутиреоидное состояние животного даже при среднестатистическом дефиците йода в данном регионе, мы провели специальное исследование с целью выяснить возможности фумаровой кислоты в условиях йоддефицита с целью обеспечения полноценной гормональной регуляции. О нормализации гормональной функции щитовидной железы в результате добавки фумаровой кислоты говорит также достоверное снижение более чем в три раза уровня ТТГ по сравнению с этой величиной у животных, не получавших энергетический метаболит, через 30 дней после окончания эксперимента (0,7450,233 и 0,2060,066). В целом оценивая характер воздействия фумаровой кислоты на тиреоидный статус, можно заключить, что этот энергетический метаболит вызывает нормализацию функционального состояния щитовидной железы. 75 Анализируя механизм наблюдаемого позитивного эффекта фумаровой кислоты при региональной тиреоидной патологии можно полагать, что ее эффект направлен на активацию энергетического метаболизма системы активного транспорта микроэлемента, которая располагается в рубце и частично в тонком отделе кишечника (Хеннинг А. Минеральные вещества, витамины и биостимуляторы в кормлении с.-х. животных / М.: Колос, 1976. 559 С.; Токбергенов А.Б. Обмен йода и фтора в жел.-киш. тракте лактирующих коров // Вестн. с.-х. науки Казахстана.-1985. -10. - С. 58-60). В обычных условиях структуры желудочно-кишечного тракта, вероятно, не лимитируют процесс всасывания йода, однако при системном нарушении функционирования тканей при гепатите этот процесс может быть заторможен. Такая возможность подтверждается результатами исследования (Самборская Е.П., Медведев Б.М. О влиянии антитиреоидных веществ на всасывание // Физиол. журн. - 1956. №5. С. 116-118), согласно которым при попадании в организм животного антитиреоидных соединений происходит нарушение всасывания йодидов. Другой точкой приложения фумаровой кислоты при йоддефиците может являться захват микроэлемента щитовидной железой, поскольку йодный насос обладает всеми свойствами системы активного транспорта и ингибируется при торможении биоэнергетических механизмов (Тепперман, Тепперман, 1989; Basic and clinical..., 1994). Не исключено также, что транспорт йодида через мембрану тиреоцита осуществляется специфическим белком (Benvenqa S., Bartolone L., Trimarchi F. Thyroid iodide transporter: local sequence homoloqies with thyroid autoantiqens // J Endocrinol Invest 1997 Oct; 20 (9) : 508-12.), биосинтез которого также энергозависим. Возможность участия такого белка подтверждается и тем обстоятельством, что процесс ионного обмена и транспорт микроэлемента находится под генетическим контролем, а также тем фактом, что повышение поглощения йода под влиянием ТТГ происходит лишь через несколько часов, а не сразу после воздействия гормона (Saqartz J.E., Ozaki A., Capen C.C. et al. Phaqocytosis of 76 fluorescent beads by rat thyroid follicular cells (FRTL-5) : comparison with iodide trappinq as an index of functional activity of thyrocytes in vitro // Toxicol Pathol. 1995 Nov-Dec; 23 (6). – P. 635-643.). Важным аспектом стимулирующего влияния фумарата на функцию ЩЖ может служить активация этим метаболитом цикла Кребса, белоксинтезирующей функции печени, в частности, белков участвующих в транспорте Т3 и Т4 к органам - мишеням (Иванов, 1982; Тепперман, Тепперман, 1989; Свиридов О.В. Новое свойство известных белков: специфическое связывание тиреоидных гормонов плазмы человека // Биохимия. - 1994. Т. 59. Вып. 5. С. 625-638; Свиридов О.В. Структурные и функциональные аспекты многокомпонентной системы белков, связывающих тиреоидные гормоны в плазме крови человека // Успехи в соврем. биологии. - 1994.-а. № 4. С. 492-512.). Неспецифическое позитивное влияние на тиреоидный статус животных, получавших фумаровую кислоту, может быть обусловлено её влиянием на цепочку последовательных событий, которые включают в себя взаимодействие с рецепторным аппаратом клетки (плазматическая мембрана, цитоплазматические белки, регуляторное участие генов, биосинтез проматричной РНК, трансляция, посттрансляционные изменения), которое нуждается в притоке свободной энергии в форме АТФ или других макроэргов. Что касается возможного механизма описанного стимулирующим эффекта фумарата, он, вероятно, заключается в активации цикла трикарбоновых кислот через образование щавелевоуксусной кислоты, которая является одним из субстратов для образования лимонной кислоты. Мы уже не раз отмечали, что повышение биосинтеза лимонной кислоты отражает аэробную направленность функционирования органов и тканей. Кроме того, образование оксалацетата из фумаровой кислоты может способствовать, по механизму обратной связи, некоторому накоплению в тканях янтарной кислоты, которая оказывает благоприятный эффект при сдвиге метаболизма 77 к гипоксическим условиям (Поборский, Зимина, 1996), что как мы выяснили, наблюдается при гипотериозе. Как известно (Хазипов Н.З., Аскарова А.Н. Биохимия животных. Казань. 291с.), образование мочевины происходит в печени, и на одном из этапов этого процесса происходит выделение фумаровой кислоты, которая с участием цикла Кребса и ферментов трансаминирования превращается в аспарагиновую кислоту. Позитивный эффект фумаровой кислоты при ЭЗ можно рассматривать также в аспекте её хорошо известной антистрессовой активности (Фисинин, Околелова, 1989). Реализация антистрессовой активности сопровождается повышением неспецифической резистентности, устойчивостью животных к инфекционным заболеваниям, что в результате проявляется как выраженный анаболический эффект. Так, при использовании фумаровой кислоты в качестве кормовой добавки при кормлении молодняка стандартной норки подопытные животные отличались на 300-400 г от контрольных животных (Ивонина и др., 1999). При использовании фумаровой кислоты для профилактики транспортного стресса у кур было также показано (Симонян А.Б., Носырева Ю.Н., Власов Б.Я. Защитное действие глутаминовой кислоты при гемической гипоксии у кур-молодок // Ветеринария - 1999. № 3. С. 52-54), что относительная масса надпочечников у цыплят контрольной группы была выше на 36,7%, чем у птиц, получавших исследуемый метаболит цикла трикарбоновых кислот. Через 21 сутки после начала эксперимента относительная масса надпочечников птиц обеих групп была в соответствии с возрастными изменениями организма, а относительная масса тимуса кур подопытной группы была ниже исходных данных на 2%, тогда как у птиц контрольной группы на 24,8%. Такие изменения надпочечников и тимуса однозначно свидетельствуют о том, что испытуемая кислота снижает напряжение организма и нормализует деятельность органов и систем. Важно также отметить, что в только что цитируемой работе приводятся результаты определения содержания холестерола в сыворотке крови при использовании 78 фумаровой кислоты в качестве кормовой добавки. Как и в наших экспериментах, фумаровая кислота вызывает снижение концентрации холестерола, который является важнейшим неспециефическим маркером ЭЗ и содержание которого при этой патологии закономерно увеличивается. Учитывая, что фумаровая кислота уже в течение последних 2-х десятилетий применяется как добавка при кормлении свиней и кур, её использование для профилактики и лечения ЭЗ не будет иметь никаких принципиальных ограничений, тем более что это соединение, проявляя анаболический и антистрессовый эффект, приводит к повышению живой массы животного. Анализируя эффекты фумаровой кислоты и интестевита на функцию печени, нами выявлено, что контуры долей печени восстановлены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. Применение пробиотиков в терапии болезней ЖКТ является неотъемлемой частью для создания синергетического действия бактерии – макроорганизм. При этом выделяемая бактериями молочная кислота является антагонистом для развития патогенной микрофлоры, и, как следствие, выделение патогенными микробными клетками таких ядовитых веществ, как индол, скатол, уксусная кислота, масляная и др. снижается, за счет значительного снижения популяции самих бактерий. Положительное влияние оказывается и на мембранные структуры органов пищеварения в каскаде взаимодействия «полезные бактерии-макроорганизм» (Mykhal'chyshyn HP, Bodnar PM, Kobyliak NM. Effect of probiotics on proinflammatory cytokines level in patients with type 2 diabetes and nonalcoholic fatty liver disease // Lik Sprava. 2013. р. 56-62; Xu Jia, Zhang Haitao, Li Ji and Li 79 Ning. Research on liver regeneration driven by the amniotic membrane. // Chinese Medical Journal 2014. P. 1382-1384.) Выявлен симптомокомплекс при гепатите на фоне йоддефицита у собак, который проявляется угнетением, болезненностью в области брюшной стенки справа, температура тела находится в пределах нижней границы нормы, признаки диареи, незначительная желтушность склеры глаз. Считаем, что главным этиологическим фактором в данном случае является скармливание смешанного корма собакам (преобладает сухой корм), несбалансированное кормление. Применение фумаровой кислоты и интестевита в сравнении с другими препаратами при гепатите печени на фоне йоддефицита уже на 4 день лечения нормализовало состояние здоровья животного. Не исключено, что выявленное положительное действие применяемой терапии связано с тем, что фумаровая кислота благотворно влияет на развитие полезной микрофлоры организма животных, то есть является пребиотиком. Таким образом, используя фумаровую кислоту и интестевит можно регулировать микрообиоциноз кишечника. Подобные комплексные препараты носят названия «синбиотики». И действие их основано на синергизме пробиотиков за счет пребиотиков. При этом, стимулируется и собственная микрофлора хозяина. Микроорганизмы способны синтезировать аминокислоты, такие как валин, лейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан, фенилаланин из углекислоты, воды и минеральных солей (Сельскохозяйственная биотехнология: учеб. / под ред. В.С. Шевелухи – 2-е изд., перераб. и доп. М.: Высшая школа., 2003. – 469с.). Таким образом происходит косвенное повышение белка в организме, что тграет решающую роль на состояние организма при патологии печени, когда её белковообразующая функция снижена. Ещё более разительное изменение наблюдается в условиях добавления фумарата в содержании Т3, уровень которого более чем в 11 раз превышает 80 этот показатель у больных и даже составляет 361,8% по отношению к уровню интактных животных. В связи с высоким вкладом в общий пул тиреоидных гормонов Т3, соотношение Т3 к Т4 более чем в пять раз под влиянием фумарата превышает аналогичный показатель группы здоровых и больных телят. Кроме того, о положительном влиянии кормовой фумаровой кислоты свидетельствовало и достоверное снижение содержания концентрации холестерола, который рассматривается как наиболее важный неспецифический маркер гипотиреоза. О нормализации гормональной функции щитовидной железы, в результате добавки фумаровой кислоты, говорило также достоверное снижение более чем в три раза уровня ТТГ по сравнению с этой величиной у животных, не получавших энергетический метаболит, через 30 дней от начала лечения (15 дней после окончания эксперимента) (0,7450,233 и 0,2060,066) (Ивонина О.Ю. 1997.; Фисинин В.И., Околелова Т.М., 1989). Учитывая положительную корреляцию при применении интестевита в сочетании с фумаровой кислотой, по уровню гормонального статуса животных и достоверное увеличение показателей крови, использование этих препаратов наиболее благоприятно отразилось на здоровье животных. 81 ГЛАВА IV. ВЫВОДЫ 1. Выявлен симптомокомплекс при гепатите на фоне йоддефицина у породы немецкая овчарка, который проявляется угнетением, желтушностью склеры глаз, сухостью кожи, диареей. 2. При исследовании крови при гепатите на фоне йоддефицина установлено низкое содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, высокое содерджание гормона ТТГ и низкое Т3 и Т4 3. Применение препарата интестевит в сочетание с фумаровой кислотой дало наилучший (достоверный) эффект при лечении гепатита на фоне йоддефицина, на 4 день лечения нормализовало состояние здоровья животного. 82 ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ 1. Результаты наших исследований можно использовать в учебных целях и при проведении терапии у животных. 2. Издано «Методическое указание по лечению собак при заболеваниях печени». Рекомендации рассмотрены и одобрены на заседании научно-технического совета Службы ветеринарии Иркутской области (Протокол № 3 от 1 ноября 2011 г.). 3. Методы лечения гепатита у собак на фоне йоддефицита внедрены в лечебную практику Службы ветеринарии Иркутской области. Акт от 03 .02.2014 83 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Акмаев Г.И. Нейроиммуноэндокринология: факты и гипотезы // Проблемы эндокринологии. – 1997. №4. С. 3-7 2. Алябьев Г.А. Содержание йода в водных источниках Восточной Сибири (в районах распространения эндемического зоба) // Лекарственные сырьевые ресурсы Иркут. обл. -1961.- Вып. 3. -с. 210-212. 3. Аметов А.С., Грановская-Цветкова А.М. Гипотиреоз // Клиническая фармакология, терапия. - 1997. - № 6. - с.65-68. 4. Антипенко Е.Н. Участие тиреоидных гормонов в системах клеточной защиты / Е.Н. Антипенко, А.Е. Антипенко, И.В. Кавешникова и др. // Успехи современной биологии. -1994. - Вып. 5. - с. 558-572. 5. Архипенко В.И., ФедченкоН.И. Некоторые особенности структурной организации щитовидной железы //Архив АГ и Э.-1986. № 6. - С.82-89. 6. Аухатова С.Н. Функциональное состояние щитовидной железы при разном уровне йода и гойтрогенных веществ в рационе поросят // Бюл. ВНИИФБП. - 1993.- №1 - с. 65-69 7. Балаболкин М.И. Состояние и перспективы изучения проблемы физиологии и патологии щитовидной железы// Терап. архив.-1997.-№ 10.С. 5-11. 8. Балаболкин М.И. Эндокринология // М.: Медицина, 1989.- 416 С. 9. Балакирев H.A. Аминокислотный обмен в печени / H.A. Балакирев, O.E. Сидоров. М.: ИРИУС, 1998. – 146 с. 10.Биотехнология: учебник / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнрева и др.; под ред. Акад. РАСХН Е. С. Воронина. – Спб.: ГИОРД, 2008. – С. 322-355. 11.Брайнес С.Н., Свечинский В.Б. Проблемы нейрокибернетики и нейробионики // М.: Медицина, 1968. - 232 с. 84 12.Бударков В.А., Зенкин А.С., Карпов А.Н. Иммунологический статус жвачных животных при поражении щитовидной железы радиактивным йодом // С.-х. биология. Серия «Биология». -1993.-№ 4.-С. 81-87. 13.Бузлама В.С., Агеева Т.И., Рецкий М.И., и др. Фармакотоксикологическая характеристика фумаровой кислоты // Ветеринария.-1986.- № 6.- с. 49-53 14.Васильева Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных // М.: Россельхозиздат, 1982. - 254 С. 15.Власов Б.Я. Малонатподобный эффект фумаровой кислоты при темновом стрессе у цыплят-бройлеров / Б.Я. Власов, Л.Н, Карелина // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2009.- №6. - С. 100-102. 16.Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных // И. Г. Шарабрин, В. А. Аликаев, Л. К. Замарин и др. - М.: Агропром-издат, 1986. - 527 с. 17.Габитова З.С. 2012.; Величковский, Б. Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды // Вестн. РАМН. 2001. № 6. С. 45–52. 18.Габитова, З.С. Физиологические процессы в организме свиней при коррекции йодной недостаточности : автореф. к.б.н. 03.03.01 / Зульфия Саяховна Габитова. М., 2012. - 18 с. 19.Гарбузенко, Д. В. Механизмы компенсации структуры и функции печени при ее повреждении и их практическое значение / Д. В. Гарбузенко // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2008. – Т. 18, № 6. – С. 14–21. 20.Георгиевский В. И. Физиология сельскохозяйственных животных. // М.: Агропроиздат, 1990.- 511 C. 21.Герасимов Г.А., Смирнов Н.Н., Зобина М.Н. Структурно-функциональное состояние щитовидной железы после тимэктомии//Бюлл.экспер. биол.и медицины.-1992.-№ 3.-с.329-331. 22.Григорьев Г. Е. Стресс и его роль в патологии / Григорьев Г. Е , Ильина О.П.// Материалы научно-практической конференции, посвященной 70- 85 летию образования ИрГСХА, 3-6 февр. 2004 г. Зооветеринарный факультет. – 2004. – С. 48–54. 23.Дезлова Л.В., Красовская И.Е., Дизие Г.И. Антиоксидантный эффект тиреоидных гормонов и мелатонина//2-ой съезд биохим. общества РАН:Пущино,1997.-ч 1.-с.450-451. 24.Денисенко В.Н. Диагностика и лечение болезней печени у собак: учебное пособие для студентов вузов / В. Н. Денисенко, Е. А. Кесарева — М.: Колосс, 2006.-61с. 25.Ермолаева Л.А. Токсическое действие этопозида на морфофункциональное состояние печени крыс / Л.А. Ермолаева // Сибирский онкологический журнал. - 2007. - №S2. - С. 47. 26.Зайцев, С. Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты : учеб. / С. Ю. Зайцев, Ю. В. Конопатов. – СПб. : Лань, 2004. – 384 с. 27.Зимина С.А. Морфофункциональные особенности щитовидной железы при экспериментальном гипоселенозе // Автореф. канд. дис. мед. н. Иркутск. - 2000. – 20 С. 28.Иванов В.И. Профилактика зоба у овец // Ветеринария. - 1982. -№ 4.-с. 5859. 29.Ивонина О.Ю., Носырева Ю.Н., Власов Б.Я. Фумаровая кислота в кормлении молодняка норок // Вестник Иркутской ГСХА, Иркутск.1997.- Вып. 5. – с. 16-17. 30.Ильина, О. П. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота : в 2 кн. / О. П. Ильина, Б. Я. Власов, Ю. А. Тарнуев. – Иркутск : ИрГСХА, 2000. – Кн. 1. –102 с. 31.Ильина, О. П. Этиопатогенетические аспекты течения эндемического зоба у крупного рогатого скота : в 2 кн. / О. П. Ильина, Б. Я. Власов, Ю. А. Тарнуев. – Иркутск : ИрГСХА, 2000. – Кн. 2. – 72 с. 32. Йод и здоровье населения России: монография / Савченков М.Ф. и др. Новосибирск. : ГУП «Наука». - 2002. - 287 с. 86 33.Иммунологические методы исследования / под ред. И. Леорковита, Б. Перниса. М.: Мир, - 1995. 34.Кастилио В. Гипотериоз собак / В. Ксатилио // Veterinary Focus. 2011. №1. – С. 2-8. 35.Кесарева Е.А., Денисенко В.Н. Клиническая интерпритация биохимических показателей сыворотки крови союак и кошек – М. : КолосС, 2011. – 28с. 36.Кириллов В.А., Чумаченко А.П., Аристархов В.Г. и др., Ускоренный морфометрический метод определения функциональной активности щитовидной железы//Пробл.эндокр.-1994.-№ 4.-с.19-23. 37.Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П.Кондрахин, Н.П. Курилов, А.Г.Малахов и др.- М.: Агропромиздат, 1985. - 287 С. 38.Коваев М.М., Рой В.И., Малюк В.И. и др. Нарушение энергетического обмена печени при остром холецистите и их метаболическая коррекция сукцинатом натрия // Физиологический журнал. - 1980. - № 2. - с. 228-234. 39.Ковальский В.В. Биологическая роль йода // Биологическая роль йода. М.: Колос, 1972. - с. 3-32. 40.Кондрахин И.П. Алиментарные и эндогенные болезни животных // М.: Агропромиздат, 1989. - 256С. 41.Косенко, А.С., Белов А.Д. Влияние транспортного стресса на функц. активность щитовидной железы и белковый состав сыворотки крови цыплят // Этиол. диагност. и профилактика патол. обмена веществ высокопродуктивных животных. - М.:, 1982. - с. 86-88. 42.Кудрявцев, А.П. Профилактика минеральной недостаточности у животных // Иркутск, 1993. - 64 С. 43.Кузьменко А.П., Шорин Ю.П. Иммуногенетические факторы в патогенезе аутоиммунных заболеваний эндокринных желез: (обзор) // Пробл. эндокринологии. - 1991. - № 1. - с. 59-63. 87 44.Кулинский В.И. Передача и трансдукция гормонального сигнала в разные части клетки / В. И. Кулинский // Сорос. обр. журнал. -1997.- № 8- с. 1419. 45.Курятова Е.В. Изменения биохимических показателей крови поросятотъемышей при неспецифическом гастроэнтерите до и после лечения / Е.В. Курятова, Е.А. Карлова, О.П, Ильина // Вестник ИрГСХА. – Выпуск 57. Ч. 3. - С. 66 – 71. 46.Кухаренко, Н.С. Коррекция хронического холодового стресса у крыс пробиотическим препаратом / Н.С. Кухаренко, А.А. Новоселова // Вестник КрасГАУ. - 2009. - №9. - С. 129-131. 47.Лебедев С.В., Сизова Е.А. Морфофункциональное состояние печени животных при разной обеспеченности рациона микроэлементами / С.В. Лебедев, Е.А. Сизова // Сельскохозяйственная биология. 2008. №2. С. 115119. 48.Ленец И.А. Эталонные формы клинической картины основных внутренних болезней животных / Улан-Удэ, 1989. - 70 С. 49.Лисицина A.A. Биохимия печени / A.A. Лисицина: учебное пособие. М.: Наука, 1999. - 18с. 50.Лютинский С.И. Патологическая физиология животных : учеб. для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 310800 «Ветеринария» / С. И. Лютинский. – 3-е изд.. испр. И доп. М.: ГЭОТАР – Медиа, 2011. – 560 с. 51.Маннион П. Ультразвуковая диагностика заболеваний мелких домашних животных / пер. с англ. Под общ. Ред. Пэдди Маннона. - М. : Аквариум. 2008. - 320 с. 52.Мельниченко Г.А. Гипотиреоз / Г.А. Мельниченко // Русский мед.журнал. - 1999. - № 7. - С.302-308. 53. Мерзленко Р.А. Клинико-гематологические показатели и морфофункциональное состояние печени коров при гепатозе / Р.А. 88 Мерзленко, Р.А. Добрунов, Н.П. Зуев, В.Н. Позднякова // Вестник НГАУ. – 2013. – №2(27). – стр.104-109. 54.Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов.- М.: Медицина, 1985. - 432 С. 55.Овсяников Ю.С. Тихонов Г.И., Голунова О.В. Пробиотики в ветеринарии / Ю. С. Овсянников, Г.И. Тихонов, О.В. Голунова // Ветеринарная медицина. 2009. - №1-2. - С.66-68 56. Окороков А.Н. Лечение болезней внутренних органов. Лечение болезней органов дыхания. Лечение болезней органов пищеварения : руководство. Т1. / А.Н. Окороков; 2-е изд., перераб. и доп. М.: Мед. лит-ра, 2006. – 533 с. 57.Оножеев А.А. Обмен веществ у животных при различных состояниях щитовидной железы // Ветеринания. - 1984. - № 3. - с. 58-59. 58.Патент № 2450810 Устойчивая пероральная фармацевтическая композиция, содержащая агонисты рецепторов тиреоидных гормонов / Н. Гарг, РАО Венкатрамана М, Р. Гандхи, У. Вошберн, К. Келер, Й. Мальм ; заявитель и патентообладаетль Каро БИО АБ, Бристоль-Мейерз Сквибб Компани. – № 2008142524/15; заявл 27.03.2007; опубл. 20.05.2012 59.Патологическая анатомия с.-х. животных / Под ред. Шишкова В.П., Жарова А.В. - М.: Колос, 1999. - 568 С. 60.Подымова, С.Д. Болезни печени / С.Д. Подымова. – 3-е изд., руководство для врачей. – М.: Медицина, 1998. – 703 с. 61.Поборский А.Н., Зимина Т.А. Влияние некоторых экстремальных воздействий на окисление едицината михохондриями мозга крыс // Патол. физиол. и экспер. терапия. - 1996. - № 1.- С. 19-20. 62.Розен В.Б., Шаляпина В.Г., Жуков Д.А. и др., Физиология гормональной рецепции / Наука, 1986. - 229 С. 63.Самборская Е.П., Медведев Б.М. О влиянии антитиреоидных веществ на всасывание // Физиол. журн. - 1956. - № 5. - с. 116-118. 89 64.Свиридов О.В. Белки связывающие тиреоидные гормоны и их биологическая роль // Пробл. эндокринологии. - 1994. - б.- № 6. - с. 57-63. 65.Свиридов О.В. Новое свойство известных белков: специфическое связывание тиреоидных гормонов плазмы человека // Биохимия. - 1994. Т. 59. -Вып. 5. - с. 625-638. 66.Свиридов О.В. Структурные и функциональные аспекты многокомпонентной системы белков, связывающих тиреоидные гормоны в плазме крови человека // Успехи в соврем. биологии. - 1994.-а.- -№ 4. - с. - 492-512. 67.Седов С.П., Юсин Г.А. логической реактивности Коррекция обмена веществ и иммунобиоу коров при тиреоидной патологии / Ветеринария, 1989. - №11. - с. 62-63. 68.Сельскохозяйственная биотехнология: учеб. / под ред В.С. Шевелухи – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: Высшая школа., 2003. – 469с. 69.Симонян А.Б., Носырева Ю.Н., Власов Б.Я. Защитное действие глутаминовой кислоты при гемической гипоксии у кур-молодок // Ветеринария - 1999. - № 3. - с. 52-54. 70. Скрыпник, И.Н. Функциональная роль микробиоты кишечника и дифференцированные подходы к коррекции нарушений микробиоциноза / И. Н. Скрыпник // V Международный медицинский форум. 2009. - №6/1. С. 51-53. 71.Скулачев В.П. Законы биоэнергетики / В.П. Скулачев // Соровский образовательный журнал. - 1997. - № 1. - С. 9-14. 72. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: учеб. для ВУЗов. – Сергиев Посад: ООО «Все для Вас-Подмосковье», 1999. – 415 с. 73.Талантов В.В. Эндемический зоб. Сущность. Экология и генетика в этиологии. Дефинация // Пробл. эндокринологии. - 1989. - № 4. - с. 43-46. 74.Тепперман Д., Тепперман Х. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Д. Тепперман, Х. Тепперман. - М. : Мир. - 1989. - 656 с. 90 75.Токбергенов А.Б. Обмен йода и фтора в жел.-киш. тракте лактирующих коров // Вестн. с.-х. науки Казахстана.-1985. -10. - с. 58-60. 76.Туракулов Я.Х., Далимова С.Н., Камалиева И.Р. Сравнительное изучение действия тироксина и цитоплазматического тироксин связывающего белка на синтез митохондр. белков печени и головного мозга крыс разного возраста // Проблемы эндокрин. - 1995. - № 3. - с. 36-38. 77.Уша Б.В., Беляков И.М. Ветеринарная пропедевтика. – М. : КолосС. 2008. - 527 с. 78.Фисинин В.И., Околелова Т.М. Применение фумаровой кислоты в животноводстве / В. И. Фисинин, Т.М. Околелова // Зоотехния. - 1989. № 11. - С. 35-38. 79.Ханс Г., Нимад Петер Ф., Cутер Р. Болезни собак / Практическое руководство для ветеринарных врачей. - М.: Аквариум, 1998. - 806 С. 80.Хеннинг, А. Минеральные вещества, витамины, биостимуляторы в кормлении сельскохозяйственных животных / А. Хеннинг ; пер. с нем. Н. С. Гельман ; под ред. А. Л. Падучевой, Ю. И. Раецкой. – М. : Колос 81.Шавырин Д.И. Функционально-морфологические изменения в печени плотоядных при нарушении обмена веществ: автореф. кан.вет.н. 16.00.02. Москва, 2009. 30 с. 82.Bajaj J. The role of microbiota in hepatic encephalopathy /Bajaj J // Gut Microbes. 2014. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24690956. 83.Baqqerman B. Salinity preference, thyroid activity and seaward migration of four species of Pacific salmon (Oncorhynchus gorbuscha) // J.Fish res.Board Can. -1960. - V. 17. - № 3. -P. 295-322. 84.Basic and clinical endocrinology / Ed.Greenspan F.S. and Baxter J.D. Norwalk, 1994. - 769 p. 85.Benvenqa S., Bartolone L., Trimarchi F. Thyroid iodide transporter: local sequence homoloqies with thyroid autoantiqens // J Endocrinol Invest 1997 Oct; 20 (9) : 508-512. 91 86.Biswas SC., Pal U., Sarkar PK. Requlation of cytoskeletal proteins by thyroid hormone durinq neuronal maturation and differentiation // Brain Res 1997 May 23; 757 (2): 245-253 87.Brix K., Wirtz R., Herzoq V - Paracrine interaction between hepatocytes and macrophaqes affer extrathyroidal proteolysis of thyroqlobulin // Hepatoloqy 1997 Nov; 26 (5) : 1232-1240. 88.Carew LB., Alster FA. Dietary carbohydrate and fat do not alter the thyroid response to protein deficiency in chicks // Proc Soc Exp Biol Med 1997 May; 215 (1) : 82-86. 89.Cardinali D.P., Stern J.E. - Peripheral neuroendocrinoloqy of the cervical autonomic nervous system // Braz J Med Res. – 1994. - Mar; 27(3) : 573-99. 90.Chatterjee VK. Resistance to thyroid hormone. // Horm Res 1997; 48 Suppl 4: 43-46 91.Chemical kinetics: Fundamentals and new developments / E.T. Denisov et al. – Elsevier, 2003. – 547 p. 92.Davies R., Lawry J., Bhatia V. et al. Growth stimulatinq antibodies in endemic qoitre: a reappraisal // Clin Endocrinol (Oxf) 1995 Auq; 43(2) : 189-95. 93.Decuypere E., Kuhn E.R., Chadwick A. Rhythms in circulatinq prolactin and thyroid hormones in the early postnatal life of the domestic fowl : influence of fastinq and feedinq on thyroid rhythmicity // Endocrine Syst. and Environ. Berlin et al. – Tokyo. – 1985. – P. 189-200. 94.Degroot L.J. Thyroid hormone nuclear receptors and their role in the metabolic action of the hormone // Biochimie. - 1989. - P. 71-269. 95.Dremier S., Golstein J., Mosselmans R. et al. Apoptosis in doq thyroid cells // Biochem Biophys Res Commun. - 1994 Apr 15; 200 (1). - 52-58. 96.Enzymes of energy metabolism in brain and chronic stress / N. I. Koshoridze [et al.] // Journal of stress Phisiology & Biochemistry. – 2009. – Vol. 5. – № 12. – Р. 32–37. 92 97.Gardiner T. Biological activity of eight known dietary monosaccharids required for glycoprotein synthesis and cellular recognition processes: summary / T. Gardiner // GlycoScience & Nutrition. – 2000. – № 1. – P. 1- 4 98.Gurusamy KS, Nagendran M, Davidson BR. Methods of preventing bacterial sepsis and wound complications after liver transplantation.// Cochrane Database Syst Rev. 2014. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24599680 99.Kahl S., Capuco A.V., Binelli M. et al. Comparison of qrowth hormonereleasinq factor and somatotropin: thyroid status of lactatinq, primiparous cows // J Dairy Sci. - 1995 Oct; 78 (10). - 2150-2158. 100. Kim S.R., Tull E.S., Talbott E.O., et al. A hypothesis of synergism: the interrelationship of T3 and insulin to disturbances in metabolic homeostasis // Med. Hypothesis – 2002. – Vol.59., №6. – Р.660-666. 101. Kumar R. Molecular cloning, characterization and heterologous expression of bile salt hydrolase (Bsh) from Lactobacillus fermentum NCDO394./ Rajkumar H, Kumar M, Varikuti SR, Athimamula R, Shujauddin M, Ramagoni R, Kondapalli N// Mol Biol Rep. 2013. Р. 5057-5066. 102. Lanqsteqer W. Diaqnosis of thyroid hormone transport protein anomalies: an overview // Acta Med Austriaca 1996; 23 (1-2). - P. 31-40. 103. Larsen P.R. Update on the human iodothyronine selenodeiodinases, the enzymes requlatinq the activation and inactivation of thyroid hormone // Biochem Soc Trans 1997 May; 25 (2) : 588-592 104. Leonard J.L., Farwell A.P. Thyroid hormone-requlated actin polymerization in brain // Thyroid 1997 Feb; 7 (1) : 147-151 105. Lv LX, Hu XJ, Qian GR, Zhang H, Lu HF, Zheng BW, Jiang L, Li LJ. / Administration of Lactobacillus salivarius LI01 or Pediococcus pentosaceus LI05 improves acute liver injury induced by D-galactosamine in rats.// Appl Microbiol Biotechnol. 2014. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24639205. 106. Mykhal'chyshyn HP, Bodnar PM, Kobyliak NM. Effect of probiotics on proinflammatory cytokines level in patients with type 2 diabetes and nonalcoholic fatty liverdisease // Lik Sprava. 2013. – р. 56-62 93 107. Navarro L., Landa A., Valverde- R.C. et al. Mammary qland tyre I iodothyronine deoodinase is encoded by a short messenqer ribonucleic acid // Endocrinoloqy 1997 Oct; 138 (10) : 4248-4254 108. Ozturk Y, Soylu OB. Fatty liver in childhood // World J Hepatol. 2014. P. 33-40. 109. Park BJ, Lee YJ, Lee HR. Chronic liver inflammation: Clinical implications beyond alcoholicliver disease.// World J Gastroenterol. 2014. Р. 2168-2175 110. Pillar T.M., Seitz H.J. Thyroid hormone and qene expression in the requlation of mitochondrial respiratory function // Eur J Endocrinol 1997 Mar; 136 (3) : 231-239 111. Sneder P.J. The pituitary in Hypothyroidiam. In: Braverman LE, Utiger RD, eds. The Thyroid. A Fundamental and Clinical Text. 8th ed. Fhiladelphia; Lippincott, Willians Wilkins A, Wolter Kluver Compani, 2000; 811-814. 112. Saqartz J.E., Ozaki A., Capen C.C. et al. Phaqocytosis of fluorescent beads by rat thyroid follicular cells (FRTL-5) : comparison with iodide trappinq as an index of functional activity of thyrocytes in vitro // Toxicol Pathol. - 1995 NovDec; 23 (6). – P. 635-643. 113. Thrun L.A., Dahl G.E., Evans N.P. et al. A critical period for thyroid hormone action on seasonal chanqes in reproductive neuroendocrine function in the ewe // Endocrinoloqy 1997 Auq; 138 (8) : 3402-3409. 114. Xu Jia, Zhang Haitao, Li Ji and Li Ning. Research on liver regeneration driven by the amniotic membrane. // Chinese Medical Journal 2014. P. 13821384. 94 ПРИЛОЖЕНИЯ 95 96 97 О внедрении результатов работы Карловой Елены Александровны в лечебную деятельность Службы ветеринарии Иркутской области диагностика и лечение: « ГОРМОНАЛЬНОГО СТАТУСА ПРИ ГЕПАТИТЕ У СОБАК НА ФОНЕ ЙОДДЕФИЦИТА И ПУТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ» Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и микробиологии ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия»; и в клинике ОГБУ «Иркутская городская станция по борьбе с болезнями животных» Йоддефицит относится к распространенным неинфекционным заболеваниям. Недостаток йода в организме провоцирует серьезные патологические изменения и отрицательно влияет на состояние здоровья, способен вызывать целый ряд недугов эндокринного характера и часто выступает в качестве заболевания-провокатора. Учитывая то, что щитовидная железа является одной из главных желез в регуляции обмена веществ, ее патология обуславливает переориентацию обменных процессов, и мы полагаем, что и патология печени может быть связана с этим явлением (Адылова А.Т., 1986; Ильина О.П., и др. 2000; Лебедев СВ., 2008; Смирнов A.M. и др. 2011). Для коррекции обмена веществ, при патологии печени на фоне йоддефицита мы предлагаем использовать фумаровую кислоту, которая нашла широкое применение в птицеводстве и звероводстве (Фисинин В.И., 1989; Ивонина О.Ю. и др., 1997). Энергетическая емкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, но учитывая более оперативные энергетические свойства фумарата, ее можно использовать для энергетической поддержки критического состояния, главным образом, при различного рода стрессовых воздействий и при патологии обмена веществ. При исследовании патологии обмена веществ у животных, было установлено, что важная роль в этом процессе, также принадлежит печени - самой крупной пищеварительной железе, функции которой сложны и многообразны, ее деятельность направлена на поддержание гомеостаза, участие в синтезе и распаде белков до аминокислот, регуляции содержания сахара в крови, в детоксикации ядовитых веществ эндо- и экзогенного происхождения (Фельдман Г.Л., 1982; Рядинская Н.И., 1998; Зайцев С.Ю., 2004; Мерзленко Р.А., 2013). Многочисленные функции печени могут нарушаться и проявляться в виде самостоятельных или в виде сопутствующих нарушений в данном 98 органе. Очень часто патологии печени сопровождаются расстройствами желудочнокишечного тракта и применение различных антибактериальных препаратов не всегда дает положительный эффект (Мерзленко Р.А., 2013). В последние годы широкое применение получили пробиотики, которые, попадая в желудочно-кишечный тракт больных животных, подавляют (вытесняют) патогенную микрофлору, тем самым обеспечивая заселение ее нормальной микрофлорой и нормализацию обменных процессов. Учитывая все стороны взаимосвязи состояния йоддефицита и обменных процессов в организме животных, была поставлена цель: изучить влияние различных препаратов при лечении патологии печени у собак на фоне йоддефицита. В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи: 1. Изучить клинический статус у больных животных при гепатите на фоне йоддефицита. 2. Выявить динамику биохимических показателей крови и гормонального статуса у больных животных при гепатите на фоне йоддефицита. 3. Оценить протективную эффективность фумаровой кислоты и пробиотического препарата интестевит в сравнении со стандартной терапией при гепатите на фоне йоддефицита у собак. Определены закономерности изменения гормонального статуса у собак при заболеваниях печени на фоне йоддефицита. Выявленные закономерности положены в основу алгоритма коррекции печеночной недостаточности на фоне йоддефицита, а также разработана концепция саногенеза гепатита под воздействием пробиотика интестивита в сочетании с фумаровой кислотой. Выявлен положительный эффект пробиотикаинтестевин в сочетании с фумаровой кислотой при лечении гепатита на фоне йоддефицита у собак. Установленные параметры клинических, лабораторных, ультрозвуковых исследований позволят улучшить диагностику и терапию при заболеваниях печени в условиях йоддефицита. Применение пробиотического препарата интестевит в сочетании с фумаровой кислотой способно повысить профилактическое и лечебное действие. Внедрение полученных результатов в практическую деятельность врачей-гепатологов и эндокринологов позволит сократить сроки течения у пациентов патологических процессов в печени. Работа выполнялась на кафедре анатомии, физиологии и микробиологии ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственной академия» и на ОГБУ «Иркутская городская станция по борьбе с болезнями животных». Работа выполнена в рамках научных исследований, в соответствии с планом научно-исследовательской работы, проводимойсотрудниками ФГБОУ ВПО ИрГСХА (номер государственной регистрации 01200602837), с 2009 по 2014 годы. Объектом исследованиябыл: 1 - препарат «Интестевит» - пробиотик, содержащий в своем составе комплекс бактерий, относящихся к нормальной кишечной микрофлоре, выделенной от здоровых животных(культурабифидобактерийBifidobacteriumitmglobosum,стрептококков Enierococcus faechimи Bacillus sutbtilis). Представляет собой сыпучий порошок от белого до светло-коричневого цвета, или таблетки. Рекомендовано его использование с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний различной этиологии, способностью стимулировать ферментативные процессы в кишечнике, повышения 99 естественной резистентности организма животных и восстановления кишечной микрофлоры за счет специфической деятельности содержащих в нем бактерий (Курятова Е.В., и др. 2013); 2 - собаки породы немецкая овчарка в количестве 54, средняя живая масса которых составляла от 18-20 кг. Группы животных подбирались по мере поступления животных в клинику. Основной моделью эксперимента была выбрана патология печени (неинфекционный гепатит) с признаками диареи, на фоне йоддефицита. С целью коррекции патологии печени - гепатит на фоне йоддефицита - нами были выбраны препараты стандартной терапии – карсил с комплексом витаминов, и мы испытали фумаровую кислоту и интестевит. Фумаровую кислоту применяли с целью поддержания энергетического баланса в организме при различного рода стрессах и патологиях; с целью нормализации работы желудочно-кишечного тракта и функции печени использовали пробиотик интестевит. В связи этим были проведены три серии опытов (таблица 1). Таблица 1 - Дизайн эксперимента Кол-во Экспериментальные Сроки Виды воздействий живот группы контроля ных, n Контроль Животные, больные гепатитом на фоне 54 йоддефицита до лечения 1 этап Группа 1 Стандартная терапия (карсил 35 мг 2 3, 9, 12, 15 раза в день, витамины 1 раз в три дня: и 30 дней 7 В1 10 мг/кг, В6 50 мг/кг, С 10 мг/кг) + после фумаровая кислота лечения 3, 9, 12, 15 Стандартная терапия (карсил 35 мг 2 и 30 дней Группа 2 раза в день, витамины 1 раз в три дня: 9 после В1 10 мг/кг, В6 50 мг/кг, С 10 мг/кг) лечения 2 этап 3, 9, 12, 15 и 30 дней с Группа 3 Фумаровая кислота (50 мг/кг) 12 начала лечения 3 этап Группа 4 3, 9, 12, 15 и 30 дней Интестевит 13 после лечения 3, 9, 12, 15 Группа 5 Интестевит + фумаровая кислота 13 и 30 дней 100 после лечения Первая серия опытов проводилась на 16 животных: группа 1 (7 голов): карсил (стандартная терапия) + фумаровая кислота; группа 2 (9 голов): карсил (стандартная терапия). Стандартная терапия включала – карсил 35 мг 2 раза в день, витамины: В1 10 мг/кг; В-6 50 мг/кг; С 10 мг/кг чередуя 1 раз в 3 дня. В первой группе было 7 собак, помимо лечения им скармливали фумаровую кислоту из расчета 50 мг/кг живой массы (растворяли в воде и выпаивали или задавали с фаршем); во второй – 9 голов, лечение было назначено, как и в первой группе – стандартная терапия, но без добавления фумаровой кислоты. Животных лечили в течение 15 дней. Определяли температуру тела, пульс и частоту дыхания, кровь для исследования брали натощак из подкожной вены предплечья до опыта, и во время опыта на 3, 9, 12, 15 и через 30 дней с начала лечения. В крови исследовали количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, в сыворотке определяли содержание белка, гормонов Т4, Т3 и кортизола. Проводили ультразвуковое исследование (УЗИ) печени и щитовидной железы на аппарате ультразвуковой диагностики MindrауDS-3 c микроконвексным датчиком 6С2 (5,0/6.5/8.0 МГц) Вторая серия опытов проводилась на 12 животных и включала одну группу 3, животные этой группы получали фумаровую кислоту в расчете 50 мг/голову, доза составила 1,0 г; Третья серия опытов проводилась на 26 животных и включала следующие группы: группа 4 (13 голов) получала интестевит в дозе 2 г на одну голову; группа 5 (13 голов) – интестевит + фумаровая кислота (2,0 г интестевит + 1,0 г ф/к). Интестевит применяли в дозе 2,0 г на голову, фумаровую кислоту скармливали из расчета 50 мг/кг живой массы (растворяли в воде и выпаивали или задавали с фаршем). Исследовались те же параметры, что и в первой серии опытов на 3, 9, 12, 15 и через 30 дней с начала лечения. При сборе анамнеза выясняли рацион кормления и условия содержания животного, возраст, пол, сведения о более ранних заболеваниях, время появления первых признаков заболевания. При клиническом исследовании животных определяли общее состояние, температуру тела, проводили пальпацию брюшной полости в области печени. Для постановки точного диагноза данные анамнеза и клинического осмотра недостаточны, поэтому мы использовали ультразвуковое исследование печени и щитовидной железы. УЗИ печени проводили после 12-ти часовой голодной выдержки животных, в положении лёжа на боку или на спине в дорсальной проекции, шерсть с живота выбривали от мечевидного отростка в каудальном направлении, печень полностью сканировали в поперечной и продольной проекциях (Маннион П., 2008). При УЗИ обращали внимание на эхогенность органа, контуры долей, наполнение желчного пузыря и наличия в нем различных включений. 101 УЗИ щитовидной железы проводили у животных в положении на спине, а шею вытягивали кзади. Каждую долю сканировали отдельно. Участки с выбритой шерстью обрабатывали спиртом с последующим нанесением геля «Акугель». Лабораторные методы: кровь для исследования брали натощак из вены сафена (v.saphena) и подкожной вены предплечья (v.cephalika), набирали в пробирку в объеме 2-3 мл. В крови исследовали количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов на гематологическом анализаторе VetABC (производство Франции); в сыворотке крови этих животных определяли общий белок, общий билирубин, холестеролна анализаторе VetSckan VS2 (производство USA). Определение тиреотропного гормона (ТТГ) и Т3,Т4 в сыворотке крови – набором «Тироид ИФА-ТТГ». Определение «Тироид ИФА-трийодтиронин» методом твердофазного иммуноферментного анализа (Иммунологические методы исследования, под ред. И. Леорковита, Б. Перниса. М.: Мир, 1995; Ильина О.П. и др.,2000). Обработка результатов исследований. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью лицензионного пакета прикладных программ Statistica 6.1. (StatsoftIhc., США). Статистическую обработку проводили параметрически с учетом tкритерия Стьюдента, причем разность различий средних арифметических признавали значимой при Р ≤ 0,05. Применение фумаровой кислоты и карсила при гепатите на фоне йоддефицита. Для лечения было подобрано 16 собак в возрасте от 2 до 4 лет, было сформировано 2 группы животных. При клиническом осмотре у животных были выявлены признаки диареи различной степени тяжести, животные в основном имели плохую упитанность, были худыми, вялыми, шерсть взъерошена, при пальпации лимфатические узлы и щитовидная железа безболезненны, отмечалась незначительная желтушность склеры глаз. На пальпацию брюшной стенки животное остро реагировало, проявляя агрессию. Температура тела у всех собак была в нижних пределах физиологической нормы от 37,8 до 38,4 С0, пульс был ниже нормы (70-100) в пределах 60-70 ударов в минуту, число дыхательных движений в минуту составляло в среднем 16. У собак до начала лечения было выявлено низкое содержание количества эритроцитов 3,4±0,02 × 106/mm 3(норма 5,5-8,5); гемоглобина 11±0,2 g/dl (норма 15,0-20,0); лейкоцитов 4,0±0,08 × 10 3/mm 3 (норма 6-12). На УЗИ отмечали увеличение щитовидной железы (рисунок 1). 102 Рисунок 1 - Увеличение контура щитовидной железы (правая доля) Первичное ультразвуковое исследование печени (рисунок 2) Акустический доступ не изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцируются отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов хорошо дифференцируются. При исследовании сыворотки крови нами выявлено низкое содержание гормонов щитовидной железы Т3 св - 2,3±0,05- нМ/л; Т4 св - 13±0,4 - и высокое содержание кортизола 320±2,0 нМ/л. Выработка гормонов щитовидной железы компенсируется прежде всего ее увеличением (гипертрофией), и на фоне этого увеличена выработка кортизола, как одного из стресс-лимитирующих факторов организма (Архипенко В.И., 1986). На основании клинических данных (недомогания, болевая реакция при пальпации в области печени), результатов УЗИ и по исследованию гормонов в сыворотке крови у животных был диагностирован гепатит печени с явлениями йоддефицита. Животным 1 группы назначили фумаровую кислоту из расчета 50 мг/кг живой массы. При получении результатов исследования на 3 и 9 дней нами не выявлено достоверных различий. Хотя отмечено снижение содержания кортизола 123-211±3,0 нМ/л и незначительное увеличение содержания Т4 св до 22-28±0,2 нМ/л, что несомненно показывает положительную динамику при применении фумаровой кислоты, как одного из энергетических субстратов в регуляции обменных процессов. На 12 день наблюдений нами выявлены изменения клинических показателей: у животных в первой группе отмечено повышение температуры тела до нормы 0 37-38 С; при пальпации печени отсутствует болезненность, достоверно повысилось содержание эритроцитов 9,3±0,08 x 10 6/mm 3. В группе животных, получавших стандартную терапию, такое повышение (было недостоверно с исследованием на 3 и 9 день опыта) было ниже по сравнению с показателями 1 группы; содержание гемоглобина повысилось, но различия между группами недостоверны. Нами выявлены значительные отличия в группах по содержанию гормонов щитовидной железы Т3 св - 6,3 ± 0,08 (1 группа) и 3,9±0,03 (2 группа) нМ/л; Т4 св - 32,6± 0,7 (1группа) и 20,4± 0.5 (2группа) и низкое содержание кортизола 55±0,9 (1 группа) и 134± 3,2 (2 группа) нМ/л. На 12 день лечения После лечения: печень (рисунок 3). Размеры долей печени не изменены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. При клиническом осмотре у животных каких либо явлений недомогания не отмечено, при пальпации в области печени болевой реакции у животных не было. На УЗИ выявлено снижение эхогенности печени у животных в первой группе. При исследовании на 12 день опыта содержание гормонов щитовидной железы и 103 кортизола в первой группе опыта достоверно не изменилось; а содержание кортизола во второй группе животных незначительно повысилось до 176 нМ/л. Рисунок 2 – УЗИ печени до лечения. Гепатит. Собака, немецкая овчарка, 3 года Рисунок 3 – УЗИ печени после лечения. Собака, немецкая овчарка, 3 года Анализируя данные таблицы 2, видно, что у животных в 1 группе произошло достоверное увеличение гормонов щитовидной железы, это, несомненно, указывает на нормализацию ее функции. Снижение кортизола, который является одним из стресслимитирующих факторов, указывает на улучшение регуляции обменных процессов у данных животных. Таблица 2 - Показатели гормонов щитовидной железы и кортизола у собак при применении фумаровой кислоты +карсила (1 группа), карсила (2 группа) № Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л до лечения 1 группа n=7 2,3 ± 0,05 13,0 ± 0,4 4,2 ± 0,3 320,0 ± 2,0 2 группаn=9 2,9 ± 0,03 12,0 ± 0,6 3,9 ± 0,2 281 ± 3,1 после лечения (через 30 дней после лечения) 1 группа n=7 7,3 ± 0,02 28,3 ± 0,2 0,21 ± 0,8 210 ± 4,5 2 группа n=9 5,9 ± 0,02 9,2 ± 0,1 2,6 ± 0,2 187 ± 1,2 Примечание: показания считали достоверными при Р≤0,05 После лечения увеличен коэффициент положительной корреляции между кортизолом и Т3, кортизолом и Т4 , а также между ТТГ и Т3 . В результате наших исследований выявлено, что применение фумаровой кислоты и карсила уже на 12 день лечения стабилизировало состояние здоровья животных, вызвало повышение содержания гормонов щитовидной железы и снижение кортизола, в сыворотке крови животных 1 группы эти изменения сохранились и через 30 дней с момента лечения. Применение фумаровой кислоты при гепатите на фоне йоддефицита. 104 Как уже говорилось выше, энергетическая емкость фумаровой кислоты и глюкозы равны, поэтому для коррекции обмена веществ, при заболеваниях печени на фоне йоддефицита мы использовали фумаровую кислоту, нашедшую широкое применение в птицеводстве (Фисинин В.И., 1989). Изучали влияние фумаровой кислоты на функциональное состояние гипофизарно-тиреоидной системы у собак с поражением печени на фоне йоддефицита. Одной из важных характеристик функционального состояния печени является содержание в крови холестерина. В наших исследованиях было выявлено достоверное снижение содержания концентрации холестерина в сыворотке крови после применения фумаровой кислоты (таблица 3). Таблица 3 – Биохимические показатели сыворотки крови у собак в опытах (результаты после лечения на 15 день) Группы Холестерол Билирубин Общий белок животных (mmol/ l) (vmol/ l) (g/ l) До После До После До После лечения лечения* лечения лечения* лечения лечения* 1 8,1±0,2 7,4±0,3 14,0±0,3 13,1±0,8 52±2,9 61±3,1 2 3 4 5 7,6±0,8 7,9±0,4 8,2±0,5 7,8±0,3 6,6±0,4 6,1±0,7 6,0±0,2 5,8±0,3 15,2±0,5 16,1±0,5 17,4±0,3 16,8±0,8 14,1±0,4 13,8±0,6 15,2±0,3 13,9±0,8 60±3,0 54±3,2 54±4,1 58±1,9 64±2,8 62±1,9 59±3,0 60±2,1 Из данных таблицы видно, что уровень холестерина в сыворотке крови снижается после лечения. Известно, что около 15% глюкозы окисляется по пентозному пути с образованием энергии НАДФН+Н+, необходимой для синтеза холестерина и жирных кислот (Зайцев С.Ю., 2004). Клетками здоровой печени вновь используется холестерин и его количество в сыворотке крови косвенно снижается. Полученные данные схожи с результатами ученых (Rajkumar H, Kumar M., 2013), в опытах которых уровень холестерина в крови снижался после использования активных пробиотических штаммов Lactobacillus fermentum NCDO394. При заболеваниях печени происходит нарушение регенераторных процессов. В такой ситуации в составе липидных фракций снижается доля фосфолипидов, а уровень холестерина и его эфиров – выше нормальных значений (Ермолаева Л.А., 2007). Известно, что образовавшийся в печеночных клетках прямой билирубин в составе желчи, которую он окрашивает, поступает в тонкий кишечник, где под влиянием бактериальных ферментов подвергается частичному восстановлению с образованием уробилиногена и стеркобилиногена. При поражении паренхимы печени содержащийся в печеночных клетках прямой билирубин поступает в кровь, где его концентрация значительно возрастает (Зайцев С.Ю., 2004). В наших же опытах снижение билирубина к сыворотке крови животных после лечения достоверно ниже, чем до лечения. Такой результат получен благодаря применению пробиотического препарата интестевит. Повышение общего белка в группах животных после лечения свидетельствует о восстановлении белковообразующей функции печени. 105 У собак до начала лечения было выявлено низкое содержание количества эритроцитов 3,4± 0,02 × 10 6/mm 3 ; гемоглобина 11±0,2 g/dl; лейкоцитов 4,0±0,08 × 10 3 /mm 3. УЗИ печени до лечения представлены на рисунке 4. Рисунок 4 - УЗИ печени до лечения фумаровой кислотой УЗИ печени после лечения. Акустический доступ не изменен. Печень не увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость разная. Рисунок паренхимы неоднородный. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Подвижность печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, четкие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы не отчетливо, сосуды не расширены, рисунок сосудистого русла обеднен. Стенки сосудов не дифференцируются. При анализе таблицы 4 видно, что у животных в группе произошло достоверное увеличение гормонов щитовидной железы, что, несомненно, указывает на нормализацию ее функции. Таблица 4 - Показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак при применении фумаровой кислоты № Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л до лечения 2,4± 0,01 11,0 ± 0,4 4,0 – 0,13 после лечения (через 30 дней после лечения) 3 группа n=12 4,6± 0,32 16± 0,71 1,9 ± 0,91 3 группа n=12 180,0 ± 2,0 177± 27,0 При применении фумаровой кислоты в данном исследовании выявлена высокая степень корреляции между ТТГ и Т3 , ТТГ и Т4, что, несомненно, указывает на повышенную выработку гормонов щитовидной железы и угнетение ТТГ. Для этого необходима энергия, которая в данном случае обеспечена наличием фумаровой кислоты. В результате наших исследований выявлено, что применение фумаровой кислоты, начиная с 12 дня лечения, стабилизировало состояние здоровья животных, достоверно повысилось содержание эритроцитов до 9,3±0,08 х 106/mm 3. Содержание гемоглобина 106 повысилось, что, несомненно, указывает на снижение в тканях гипоксии. Кроме этого отмечено повышение содержания гормонов щитовидной железы Т4 и угнетение ТТГ,и снижение кортизола в сыворотке крови, эти изменения сохранились и на 30 день с момента лечения. Она вызывает достоверное повышение концентрации лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина, что указывает на уменьшение гипоксии тканей, способствуя снижению интоксикации. Также произошло достоверное снижение уровней холестерина, билирубина в сыворотке крови и повышение общего белка (таблица 3). Применение и интестевита и фумаровой кислоты при лечении гепатита на фоне йоддефицита у собак. Традиционные методы лечения животных с применением различных антибактериальных препаратов не всегда даёт положительный эффект, способствует угнетению нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), развитию иммунодефицитных состояний, дестабилизации обменных процессов в организме. Все большее распространение получаю пробиотики, которые, попадая в ЖКТ больных животных, подавляют (вытесняют) патогенную микрофлору, тем самым обеспечивая заселение полезной микрофлорой и стабилизацией обменных процессов. Учитывая то, что печень является ключевым звеном во всех обменных процессах, была поставлена цель - изучить клинико-биохимические показатели и гормональный статус собак до и после лечения пробиотическим препаратом интестевит и интестевитом в сочетании с фумаровой кислотой. Для данного исследования было подобрано 26 собак породы немецкая овчарка, средний вес животных составил 18-20 кг. При клиническом исследовании животного определяли общее состояние, оно было угнетенным, температура тела была в пределах нижней нормы 37,7- 38,4 0С, пульс был ниже нормы (70-100) в пределах 67-74 ударов в минуту, число дыхательных движений в минуту составляло в среднем 15. Отмечалась болезненность при пальпации брюшной стенки, увеличение границ печени из-под реберной дуги (справа в боковой проекции), наблюдается незначительная желтушность склеры глаз, признаки диареи. Для более точного диагноза, данные анамнеза и клинического осмотра не достаточны, поэтому мы использовали ультразвуковое исследование (УЗИ) печени и органов брюшной полости и лабораторные исследование крови и ее сыворотки. Для подтверждения диагноза проводили УЗИ исследование всех животных в опыте, у них отмечается справа увеличение печени за границу реберной дуги и незначительная ее эхогенность. При клиническом исследовании животных на 4 день лечения мы наблюдали отсутствие признаков диареи в группе, где использовали интестевит в сочетании с фумаровой кислотой, у этих животных при пальпации области печени не выявлено болезненной реакции, в другой группе, где использовался только интестевит, признаки диареи исчезли на 8 день лечения. УЗИ печени в группе, где применялся только интестевит, показало до лечения (рисунок 5). Акустический доступ изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. 107 Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются очень ясно. Рисунок 5 - УЗИ печени и Рисунок 6 - УЗИ печени и желчевыводящей желчевыводящей системы. Собака, системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит энтерит, гепатит (после лечения). (до лечения). После лечения (рисунок 6). Акустический доступ изменен незначительно. Печень незначительно увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются очень ясно. УЗИ печени при применении интестевита с фумаровой кислотой показало: до лечения (рисунок 7). Акустический доступ не изменен. Печень увеличена, эхогенность смешанная, структура неоднородная, зернистость крупная. Визуализация удовлетворительная. Топография печени не изменена. Форма печени соответствует варианту развития. Контуры печени ровные, нечеткие. Капсула печени хорошо дифференцирована, без нарушения целостности контуров. Гиперэхогенна. Не утолщена. Интраорганные структуры паренхимы печени дифференцированы отчетливо, сосуды расширены, рисунок сосудистого русла обогащен. Стенки сосудов дифференцируются, очень ясно. После лечения группа, в которой применили интестевит и фумаровую кислоту (рисунок 8). Размеры долей печени не изменены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. Дополнительно оценивали морфологические показатели крови собак (таблица 5) и показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак (таблица 6) 108 Рисунок 7 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (до лечения). Рисунок 8 - УЗИ печени и желчевыводящей системы. Собака, немецкая овчарка 4 года, энтерит, гепатит (лечение фумаровой кислотой, 30 день). Таблица 5 - Морфологические показатели крови собак (M+m) Лейкоциты Эритроциты Гемоглобин 3 3 6 3 10 mm 10 mm g/dl До лечения 4 группа 5 группа 4,3 ± 0,25 4,7 ± 0,11 4,0 ± 0,31 3,9 ± 0,04 7,1 ± 0,41 6,2 ± 0,11 После лечения 4 группа 7,0 ± 0,33 6,1 ± 0,25 8,1 ± 0,21 (интестевит) 5 группа * 8,6 ± 0,53 7,7 ± 0,21 8,4 ± 0,39 (интестевит+ ф/к) Примечание: * Р ≤ 0,05 Нами выявлено, что у собак до лечения морфологические показатели крови достоверно ниже, чем через 4, 12 и 30 дней с момента лечения. Таблица 6 - Показатели уровня гормонов щитовидной железы и кортизола у собак Т3 св Т4 св ТТГ Кортизол нМ/л нМ/л нМ/л нМ/л До лечения 1 группа (интестевит) 2,8 ± 0,21 11,5 ± 0,42 4,1 ± 0,10 230 ± 5 2 группа (интестевит+ ф/к) 2,3 ± 0,14 13 ± 0,01 3,7 ± 0,2 260 ± 7,0 109 После лечения 1 группа (интестевит) * 6,9 ± 0,25 15,0 ± 0,21 1,1 ± 0,0 160 ± 3,5 2 группа (интестевит+ ф/к) * 7,1 ± 0,81 19,0 ± 0,04 0,85 ± 0,06 160 ± 3,5 Примечание: * Р ≤ 0,05 В результате проведенного лечения коэффициент положительной корреляции выявлен между кортизолом и Т3 (0,601), кортизолом и Т4 (0,463), а также между ТТГ и Т3 (0,403). При этом корреляция между ТТГ и Т4 ( -596) стала отрицательной иуменьшился коэффициенткорреляции между ТТГ и кортизолом (0,794). Учитывая положительную корреляцию при применении интестевинт в сочетании с фумаровой кислотой, уровень гормонального статуса животных и достоверные различия показателей крови, использование этих препаратов наиболее благоприятно отразилось на здоровье животных. 110 ЗАКЛЮЧЕНИЕ При лечении заболеваний печени фумаровой кислоты и интестевита выявлено, что контуры долей печени восстановлены, физиологическая подвижность сохранена в полном объеме. Капсула на визуализируемых участках без особенностей. Внутрипеченочные структуры хорошо дифференцированы. Паренхима однородная, без признаков очаговых и диффузных изменений. Дополнительных организованных включений в проекции печени не выявляется. Выявлен симптомокомлекс при гепатите печени на фоне йоддефицита у собак, который проявляется угнетением, болезненностью в области брюшной стенки справа, температура тела находится в пределах нижней границы нормы, признаки диареи, незначительная желтушность склеры глаз. Считаем, что главным этиологическим фактором в данном случае является скармливание смешанного корма собакам (преобладает сухой корм), несбалансированное кормление. 111