О Т Ч Е Т

УТВЕРЖДАЮ
Директор УНИИ ФиФ, доктор мед. наук
Член-корр. АТН РФ, профессор
_................................ Л. П.
ЛАРИОНОВ
ОТЧЕТ
ОБ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
ОБЩЕЙ ТОКСИЧНОСТИ, СПЕЦИФИЧЕСКОГО
И АЛЛЕРГИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО СПРЕЯ "МОРФЕЙ'
ЕКАТЕРИНБУРГ
1998
ОГЛАВЛЕНИЕ.
№№
п/п
Наименование разделов
Страницы
Оглавление ...................................................................................
Введение ........................................................................
Глава 1. Экспериментальное исследование специфической и
общей фармакологической активности биологически
активного спрея "Морфей"..............................................
1.1. Задачи исследования ....................................................
1.2. Материалы и методы ....................................................
1.2.1. Характеристика животных ...........................................
1.2.2. Методы исследования ...................................................
1.2.2.1. Специфическое действие при лечении термических
ожогов ...........................................................................
1.2.2.2. Влияние спрея "Морфей" на состояние животных при
выполнении физической нагрузки .............................
1.2.2.3. Определение жизнеспособности моноцитов .................
1.2.2.4. Определение транскутанной активности спрея "Морфей"
(кожно - резорбтивное действие) .................................
1.2.2.5. Экспериментальное изучение токсичности препаратов
1.2.2.5.1. Определение острой токсичности............................
1.2.2.5.2. Определение хронической токсичности ..................
1.2.2.6. Оценка местного действия спрея "Морфей" ...................
1.2.2.7. Оценка кумулятивных свойств спрея ..........................
1.2.2.8. Статистическая обработка результатов исследований
1.2.2.9. Изучение аллергизирующего действия спрея "Морфей"
1.2.2.9.1 .Метод накожных аппликаций ....................................
1.2.2.9.2. Конъюнктивальная проба ..........................................
1.2.2.9.3. Реакция общей анафилаксии (анафилактический
шок) ...........................................................................
Глава 2. Результаты экспериментальных исследований ............
2.1.
Специфическое действие
на модели термических ожогов...................................
2.2.
Действие спрея при выполнении физической нагрузки
2.3.
Изучение жизнеспособности моноцитов .....................
2.4.
Результаты изучения транскутанной активности (кожнорезорбтивное действие) спрея "Морфей" ....................
2.5. Результаты изучения токсического действия спрея
"Морфей" ........................................................................
2
4
5
5
5
5
5
5
5
5
6
6
7
7
7
7
7
7
7
8
8
9
9
11
11
11
13
2.5.1. Острая токсичность ......................................................
2.5.2. Хроническая токсичность ............................................
2.5.2.1. Влияние спрея на общее состояние животных.............
2.5.2.2. Влияние спрея на кроветворение.................................
2.5.2.3. Влияние спрея на функцию печени и почек.................
2.5.3. Результаты изучения аллергизирующего действия
спрея ..............................................................................
2.5.3.1. Метод накожных аппликаций ......................................
2.5.3.2. Конъюнктивальная проба.............................................
2.5.3.3. Реакция общей анафилаксии .......................................
2.6. Местное действие спрея "Морфей"....................................
2.7. Кумулятивные свойства спрея "Морфей" ............................
2.8. Тератогенная и канцерогенная активность спрея "Морфей"
13
13
13
13
14
Заключение ................................................................................
24
Литература ..................................................................................
25
20
20
20
20
21
21
21
ВВЕДЕНИЕ.
На рубеже XX и XXI столетий экологическая обстановка во всём мире становится
всё более напряжённой: увеличивается количество токсических веществ в воздухе и
почве, ухудшается качество питьевой воды, уменьшается лесной массив. В то же
время возрастает число стрессовых ситуаций как в глобальном масштабе, так и индивидуальных. На этом фоне возрастает опасность возникновения различных
заболеваний, особенно болезней сердечно-сосудистой системы, туберкулёза , онкологического профиля и т.д.. Уступит организм болезни или будет устойчив к потенциально патогенным факторам ? Болезнь возникает в результате недостаточности адаптивных механизмов, их истощения и срыва. Отсюда становится очевидной необходимость своевременной помощи, которая может быть оказана не только с помощью огромного арсенала лекарственных средств, но и при помощи адаптогенов, витаминов,
антигипоксантов растительного происхождения и т.д.
В 1985-1986 г.г. сотрудниками СГМИ г. Екатеринбурга были разработаны методические рекомендации для работников тяжёлого и транспортного машиностроения[10], связанных с профессиональными вредностями. Был разработан кислородный
коктейль , позволивший сократить общую заболеваемость на 25-30%, повысить резистентность организма к гипоксии, к токсическим веществам и т.д.
В 1993 г. Разрешён к промышленному выпуску и применению в медицинской
практике чрезкожный проводник биологически активных веществ - эфтидерм [5, 19].
Он не только проводит через кожу и слизистые оболочки эти вещества, но усиливает
и пролонгирует их действие, снижает число осложнений, повышает жизнеспособность клеточных мембран, является сильным антиоксидантом. При добавлении 5 10% эфтидерма в коктейли - их действие значительно возрастает.
С целью профилактики и коррекции ряда заболеваний, повышения устойчивости
организма к экстремальным факторам, профилактики неврозов и нарушений сна был
разработан биологически активный спрей "Морфей". Он может быть использован
населением, особенно в экологически неблагоприятных районах, а также лицами,
работа которых связана с нервными перегрузками: работникам дошкольных учреждений, учителям, людям, работающим в сфере бытового обслуживания и т.д.. Спрей
"Морфей" предназначен для нормализации обмена веществ, дезинтоксикации, повышения сопротивляемости организма к факторам внешней среды.
Исследование спрея "Морфей" на экспериментальных животных было проведено
по требованиям Фармакологического комитета МЗ РФ.
Глава 1. Экспериментальное исследование специфической и общей фармакологической активности биологически активного спрея "Морфей"
1.1. Задачи исследования.
С целью выявления фармакологической активности, специфического действия
и возможных осложнений было проведено изучение биологически активного спрея
"Морфей ", в дальнейшем "Спрей" в сравнении с эфтидермом и кислородным
коктейлем ( в дальнейшем - "Коктейль ") идентичного состава, но без эфтидерма.
1.2. Материалы и методы.
Исследования проведены Уральским НИИ фармакологии и фармации ( кафедра фармакологии Уральской медицинской Академии) и ЛДФ "Медик" г. Екатеринбурга.
1.2.1. Характеристика животных
В экспериментах использовали нелинейных белых крыс, мышей, морских свинок-альбиносов, кроликов породы «шиншилла». Животных содержали при
температуре 18-20,5° С в условиях естественного светового цикла на стандартной
диете, при свободном доступе к воде и пище. В эксперимент отбирали только здоровых животных, прошедших двухнедельную адаптацию к условиям вивария [ 8 ].
1.2.2. Методы исследования
1.2.2.1.
Специфическое действие при лечении термических ожогов
Кроликам-самцам породы «Шиншилла» массой 1550 - 1650 г и кры
сам-самцам линии Вистар стадного разведения массой 140 - 160 г под общим обезбо
ливанием наносили термический ожог термокаутером соответственно группе живот
ных на участке 10 см2 - кроликам и 4 см2 -крысам в области спины справа, где за су
тки до этого была удалена шерсть.
Сразу после операции и затем ежедневно в 11 часов дня до наступления полной
эпителизации - на ожоговые поверхности шпателем наносили препараты, соответственно группе животных. Дополнительного лечения не применяли. При кровотечении
накладывали давящую повязку с испытуемым средством.
На 5 сутки после полной эпителизации изучали периферическую кровь, проводили биохимические исследования. Животных взвешивали один раз в неделю, постоянно вели наблюдение за общим состоянием, поведением, размером ран. Каждые 3 дня
проводили микроскопию мазков-отпечатков.
1.2.2.2. Влияние спрея "Морфей" на состояние животных при
выполнении физической нагрузки
Животным один раз в день трижды вводили в желудок испытуемые препараты. Через 24 часа давали физическую нагрузку - плавание. Фиксировали время, в течение
которого мыши свободно плавали, не погружаясь в воду. (Контрольные животные
получали дистиллированную воду).
1.2.2.3. Определение жизнеспособности моноцитов
Для определения жизнеспособности моноцитов (мембраностимулирующее действие) применяли методику определения функциональной активности
макрофага [14,16]. Эксперимент проводили на мышах весом 19 - 20 г. Животные
(кроме контрольных) получали препарат соответственно группе из расчёта 0,5 г/кг
веса один раз в сутки 3 дня подряд. Затем у всех животных была взята кровь (от каждой мыши отдельно), выделены моноциты Суспензию полученных моноцитов разво-
дили в среде 199 до содержания клеток 107/мл, затем разливали в 10 стерильных чашек Петри (от каждой мыши) из расчёта 2-3 миллиона клеток на одну, ставили на час
в термостат при температуре 37° С, отмывали чашки раствором 199, причём моноциты оставались прикреплёнными ко дну чашек, 5 из них (в т.ч. одна контрольная) заливали на три минуты 1% раствором трепанового синего, затем смывали краску физиологическим раствором хлорида натрия и считали под микроскопом непосредственно в чашках Петри количество живых моноцитов на 100 клеток. 4 из оставшихся
чашек Петри были подвергнуты воздействию экстремальных факторов соответственно группе и изучаемым препаратам, 1 - контрольная. После этого вновь проводили
часовую инкубацию в термостате с последующей отмывкой средой 199, окраской 1%
раствором трепанового синего. Отмывали чашки изотоническим раствором хлорида
натрия и считали под микроскопом количество живых клеток.
1.2.2.4. Определение транскутанной активности спрея "Морфей" ( кожнорезорбтивное действие)
Для проведения эксперимента использовали полярографическую ячейку, герметично
разделённую на две части кожей новорожденного крысёнка. Обе части заполняли
стерильным 0,89% раствором хлорида натрия. В часть ячейки, прилегающую к
поверхности кожи, вносили биологически активные вещества в количестве 0,01 г, получали 1% раствор. Непрерывно вели полярографическую запись, на которой регистрировалось время появления исследуемого вещества во второй части ячейки, где находился рабочий платиновый электрод. [4]. В качестве электрода сравнения применяли хлорсеребряный электрод. После каждого исследования ячейки промывали изотоническим раствором хлорида натрия. Следующие исследования проводили, заполняя
ячейки 20% растворами изучаемых чрезкожных проводников. Во всех случаях изучали скорость проведения через кожу аскорбиновой и салициловой кислоты, йодистого
калия, тетрациклина. Время в минутах учитывали по полярограмме.. 1.2.2.5.
Экспериментальное изучение токсичности препаратов.
Исследования проведены согласно методическим рекомендациям:
«Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ» [9, 11, 13, 17]. При определении накожного действия все изучаемые вещества наносили на участок кожи с выстриженной шерстью размером 2x2
см -для мышей; 4x4 см - для крыс; 7x8 см - для кроликов. Стрижку шерсти производили каждые 7 дней.. Исследуемые вещества наносили один раз в сутки в 11 часов
дня стеклянной палочкой или пипеткой и равномерно распределяли по всей поверхности При необходимости нанесения большой дозы манипуляцию повторяли через
2-3 минуты после «впитывания» предыдущей порции. Густые формы смешивали с
водой в соотношении 1 : 4 (везде указывали применяемую дозу в пересчёте на 100%
препарата). После нанесения на кожу исследуемых веществ - всех животных фиксировали общепринятыми способами на 4 часа, кроме мышей, которых фиксировали на
2 часа. В желудок препараты вводили эластическим зондом. За животными вели наблюдение по общепринятой схеме. Перед экспериментом, каждые 10 дней в период
исследований и через 2 недели после последнего применения препарата - изучали показатели периферической крови, мочи, общий белок, остаточный азот, сахар крови,
резистентность эритроцитов, ЭКГ, определяли число дыхательных движений в одну
минуту. Затем проводили эвтаназию, взвешивали и брали на гистологическое исследование печень, почки, селезёнку, сердце, лёгкие, желудок, кожу на месте нанесения
мази, щитовидную и поджелудочную железы, надпочечники. Окраску препаратов
осуществляли гематоксилином и эозином, микрофото готовили с увеличением в 140
или 200 раз.
1.2.2.5.1. Определение острой токсичности
Эксперимент проводили на мышах весом 19 - 20 г, крысах - самцах
массой 140 - 160 г и морских свинках-альбиносах массой 320 - 370 г. Изучаемые препараты вводили однократно.
1.2.2.5.2. Определение хронической токсичности
Эксперимент проводили на белых мышах массой 19 - 20 г, крысах самцах массой 140 - 160 г и морских свинках-альбиносах массой 320 - 370 г . Препараты вводили ежедневно в течение 30 дней.
1.2.2.6. Оценка местного действия спрея "Морфей"
Эксперимент проводили на крысах обоего пола массой 140 - 160 г. У
всех животных была выстрижена шерсть на участках 4x4 см с двух сторон от поясничного отдела позвоночника. На правый бок однократно наносили 200 мг/см испытуемого препарата соответственно группе. На левый бок, который служил контролем,
наносили дистиллированную воду. Животных на 4 часа помещали в индивидуальные
домики. Оценку результатов проводили через 4, 5 и 20 часов после нанесения препаратов по Алексеевой О.Г., Петкевич А.И. [ 1, 2, 3, 15 ].
1.2.2.7. Оценка кумулятивных свойств спрея
Кумулятивные свойства вещества характеризуются коэффициентом кумуляции, который равен отношению ЛД50 при однократном введении к ЛД5о
при кратном введении. Учитывая невозможность определения ЛД5о спрея из-за его
малой токсичности - за ЛД50 принят максимально вводимый объём. При пероральном
введении эта доза составляет 25 г/кг, при накожном применении - 15 г/кг, как при однократном, так и при многократном приёме.
Следовательно, индекс кумуляции при пероральном приёме равен 25 г/кг: 25 г/кг = 1, при накожном - 15
г/кг : 15 г/кг = 1, а спрей "Морфей" не обладает
кумулятивной способностью.
1.2.2.8. Статистическая обработка результатов исследований Анализ результатов
исследований проводился на персональной IBM-486 с помощью пакета прикладных
программ: Microsoft Word, Microsoft Access, Microsoft Exsel при использовании
традиционных методов вариационных отклонений. Показатель достоверности
различий определяли по t - критерию Стьюдента, различия считали достоверными
при р < 0,05. Единицы измерений приведены в системе СИ [6, 18]. 1.2.2.9. Изучение
аллергизирующего действия препаратов 1.2.2.9.1. Метод накожных аппликаций
Эксперимент проведен на крысах линии Вистар стадного разведения массой 200 - 220 г (поровну самцов и самок). На спинке слева была выстрижена
шерсть на участке 4x4 см. Проводили эпикутанную сенсебилизацию путём нанесения
трёх капель изучаемого раствора или 0,5 г препарата один раз в день 5 раз в неделю в
течение 20 суток. За животными вели наблюдение по общепринятой схеме, особое
внимание уделяли состоянию кожи на месте нанесения испытуемых веществ. Первое
тестирование проводили через 24 часа после десяти нанесений препаратов на кожу,
второе - через 24 часа после 20. Оценка была проведена по пятибальной системе [2,
-
3, 12].
1.2.2.9.2. Конъюнктивальная проба.
Эксперимент проводили на крысах массой 140 - 160 г и морских
свинках массой 320 - 370 г. На участок кожи на спине размером 4x4 см с выстриженной шерстью ежедневно в течение 20 дней наносили испытуемые препараты соответственно группе. Через 24 часа после двадцатой аппликации всем животным была
проведена конъюнктивальная проба. Для этого под верхнее веко правого глаза вводили по одной капле препарата, смешанного с дистиллированной водой в соотношении 1:10. Левый глаз служил контролем, под верхнее веко была введена одна капля
дистиллированной воды. Оценку результатов проводили трижды: через 15 минут, 24
и 48 часов после проведения конъюнктивальной пробы.
1.2.2.9.3. Реакция общей анафилаксии (анафилактический шок)
Эксперимент проведен на морских свинках. Все животные были
сенсибилизированы путём трёхкратного введения препарата, соответствующего
группе, через день: первый день - подкожно, третий и пятый день - внутримышечно
из расчёта 1г/кг массы, животным одной из групп бьш введен эфтидерм из расчёта 0,1
г/кг веса внутрисердечно. Оценка степени анафилактического шока была проведена
по Weigle [1,2,3, 12].
Глава 2. Результаты экспериментальных исследований
2.1. Специфическое действие на модели термических ожогов
Результаты исследований представлены в таблицах 1 - 3 .
Заживление очагов у крыс произошло по разному. Самая быстрая эпителизация
была отмечена у животных, получавших лечение эфтидермом, - на 37,7 % скорее, чем у
контроля, и у животных, получавших лечение спреем "Морфей" - на 42,4 % скорее,
чем в контроле. У животных, получавших лечение коктейлем, заживление про изошло
лишь на 11,4 % быстрее, чем у животных контрольной группы. Необходимо отметить,
что у всех животных 3 - 4 групп со 2-3 дня лечения резко уменьшились явления
воспаления в очагах: отёк и инфильтрация тканей, гиперемия, началась крае вая
эпителизация. Их поведение практически не отличалось от поведения интактных
животных. При взвешивании крыс через 7 и 14 дней после нанесения ожогов они
прибыли в весе на 82 - 90%, контрольные практически не прибыли в весе, а крысы 5
руппы прибыли в весе только на 70 - 74 % (прирост веса интактных животных был
принят за 100 %).
Наибольшие изменения периферической крови были в контрольной группе. Здесь
произошло снижение числа эритроцитов на 20,9 %, повышение количества ретикулоцитов составило 82,8%, что свидетельствовало об анемизации животных, а повышение лейкоцитов на 76,9% - соответствовало выраженной воспалительной реакции в
области ожоговых ран.
Таблица 1
Распределение крыс по группам, осложнения, сроки заживления
экспериментальных ожогов
№№
группы
Применяемые ле- Крово
карственные средства течение
Заживление в сутках
5-10
1
1.
2.
3.
4.
5.
2
Интактные
Контроль (без лечения)
Эфтидерм
Спрей "Морфей"
Коктейль
Средние
сроки
заживления
3
4
11-15
5
16-20
Свыше
20
6
7
8
6
21,0±1,86
Ожоги не вызывали
3
-
-
4
-
4
5
1
-
13,2+0,84
-
7
-
3
2
5
3
12,1+0,41
18,6+0,98*
2
Примечание: Недостоверные величины при р > 0,05 отмечены *.
Сравнение проведено с контрольной группой, п = 10.
10
Минимальные изменения крови при благоприятном течении процесса бьши
отмечены у крыс, получавших эфтидерм и спрей "Морфей". Изменения биохимических показателей крови во всех группах были недостоверными, хотя во 2-ой и 5ой группах наметилась тенденция к снижению общего белка, повьппению содержания
холестерина и мочевины.
Таблица 2
Показатели периферической крови крыс-самцов после
эпителизации ожогов
груп
пы
Эритроциты
1012/л
Тромбоциты
109/л
Лейкоциты
109/л
Лейкоцитарная
формула, %
Эозинофилы
Моноциты
Лимфоциты
Ретикулоциты
%
Резистентность эритроцитов, %
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1.
4,3
+0,08
392,8
0,4
+0,03
3,6
±0,18
69,8
±1,84
2,9
±8,17
3,9
+0,11
0,36
±0,02
2.
3,4 +
0,09
432,4 +
9,54
6,9
+0,52
0,9
+0,04
8,4
±0,39
74,8
±2,12
5,3
±0,23
0,30
±0,02
3.
4Д
+0,18
408,6
+5,43
5,6
±0,36
0,5
+0,01
4,3
±0,11
71,6
±1,96
3,8
±0,13
0,32
±0,01
4.
4,2 +
0,21
398,5*
+9,65
4,6
+0,31
0,3
±0,01
4,7
±0,14
71,0*
±4,25
3,5
±0,11
0,34
±0,02
5.
3,8
+0,10
400,3
+6,14
5,9
+0,41
0,7
±0,03
5,5
±0,12
72,6*
±2,34
4,1
±0,24
0,31
±0,02
±0,09
Примечание: Недостоверные величины при р > 0,05 отмечены *.
Сравнение проведено с контрольной группой, п = 10.
11
Таблица 3
Биохимические показатели крови крыс-самцов после
эпителизации ожогов
№№
группы
1
1.
2.
3.
4.
5.
Метод лечения
2
Общий белок, г/л
Глюкоза
ммоль / л
3
72,1+2,16
70,9+2,28*
4
5,9+0,36
6,4+0,21*
Мочевина
сыворотки
ммоль / л
5
7,9±0,42
8,3±0,58*
Холестерин
ммоль/л
6
1,8+0,09
1,9+0,14*
Интактные
Контроль (без
лечения)
Эфтидерм
71,9+2,46* 6,0+0,18*
8,0+0,34*
1,8+0,11*
Спрей
71,9+2,13* 6,1+0,24*
7,9+0,38*
1,8+0,12*
"Морфей"
Коктейль
71,6+2,46* 6,2+0,28*
8,2+0,41*
1,8+0,15*
Примечание: сравнение проведено с контрольной группой, п = 10.
Недостоверные величины при р > 0,05 отмечены *.
Резюме. Таким образом, лучший эффект был получен при лечении ожогов спреем
"Морфей" и эфтидермом.
2.2. Действие спрея при выполнении физической нагрузки
Время выполнения физической нагрузки (плавание) у животных, в течение
трёх дней получавших спрей "Морфей", возростало на 38,2 + 2,5 % по сравнению с
контрольными животными.
2.3. Изучение жизнеспособности моноцитов.
Результаты эксперимента представлены в таблице 4.
Был выявлен цитопротекторный эффект у всех применяемых препаратов при
сравнении с контролем. Однако наиболее высоким он был в группах, получавших эфтидерм и спрей "Морфей". Так, при воздействии циклофосфана, жизнеспособность
моноцитов у мышей 3-4 групп возрастала в 8-9 раз, у животных, получавших коктейль, - в 6 раз, а получавших димексид - только на 20%.
Резюме. Эфтидерм и спрей "Морфей" обладают выраженным цитопротекторным
действием, повышают жизнеспособность клеток, усиливают их резистентность к экстремальным воздействиям.
2.4. Результаты изучения транскутанной активности (кожно-резорбтивное
действие) спрея "Морфей"
Результаты представлены в таблице 5.
При сравнении с изотоническим раствором все препараты обладали выраженной
транскутанной (чрезкожной) активностью: у ДМСО она была выше примерно в два
раза, у эфтидерма - в 7-13 раз. По сравнению с эфтидермом - проводниковая активность ДМСО была ниже в 4-6 раз, а у спрея "Морфей" - практически не отличалась от
эфтидерма. При повышении концентрации испытуемых препаратов достоверного
увеличения транскутанной активности не происходило.
Таблица 4
12
№№
группы
Распределение мышей по группам при определении
жизнеспособности моноцитов
Вводимые перКонтроль
Экстремальные воздействия
орально препараты, (изотоничес0,5 г/кг
кий раствор)
УФО 5
ТетраЦиклофоПениминут
циклин
сфан
циллин
1
1.
2
3
4
5
6
7
98,1+3,25 46,8±2,58
8,5±0,21 39,6+1,28 32,4+0,96
Дистиллированная
вода (контроль)
2.
Димексид - ДМСО 98,7 + 4,14* 53,6±1,16 10,2+0,32 45,3+0,94 38,2+1,14
3.
Эфтидерм
99,1 + 3,82* 88,4+2,14 69,1+0,89 86,4+2,35 79,4+2,53
4.
Спрей "Морфей"
98,7 + 5,14* 90,3±4,18 71,3±3,16 80,3±3,36 75,7±2,26
5.
Коктейль
98,9 + 4,46* 69,8+2,43 52,3+2,21
61,6+1,92 59,9+1,63
Примечание: сравнение проведено с животными контрольной группы, п = 10.
Недостоверные величины при р > 0,05 отмечены *.
Таблица 5
Сравнительная оценка транскутанной (чрезкожной) активности спрея "Морфей'
ДМСО
Спрей
Эфтидерм
№№ 1% растворы Единицы Изотоничес
20%
кий
раствор
"Морфей",
изучаемых
из20%
п/п
20%
препаратов мерения
1
2
3
4
5
6
7
1. Салициловая минуты
26,2+1,18
12,1+0,68
1,9+0,18
2,0+0,09
кислота
% (ф.р.)
100
46,20
7,25
7,63
% (эф.)
1310
605
95
100
Аскорбино- минуты
2.
23,5+0,56
13,2+0,18
2,6+0,02
2,7+0,02
вая кислота
% (ф.р.)
100
56,17
11,06
11,49
СО
%(эф.)
870,0
488,9
96,3
100
Йодистый ка- минуты
18,4±0,58
10,1+0,21
2,0+0,06
1,9+0,08
лий
%(из.р.)
100
54,89
10,7
10,3
% (эф)
968
532
105,3
100
4. Тетрациклин минуты
32,5±1,34
18,6+0,95
4,6+0,21
4,5±0,19
%(из.р.)
100
57,23
14,2
13,85
% (эф.)
722
413
102,2
100
Примечание: сравнение в минутах проведено с изотоническим раствором
хлорида натрия,
% (из.р.) - с изотоническим раствором, % (эф.) - с эфтидермом. Резюме. Таким
образом, эфтидерм и спрей "Морфей" являются чрезкожными
13
проводниками биологически активных веществ. Они значительно превосходят по активности димексид..
2.5. Результаты изучения токсического действия спрея "Морфей"
2.5.1. Острая токсичность.
Результаты исследований представлены в таблицах 6-9.
При однократном введении спрея "Морфей" существенных изменений со стороны
исследуемых параметров крови не произошло, хотя имелась тенденция к повышению
количества эритроцитов. Состояние всех животных не отличалось от такового у интактных, за исключением мышей, которым спрей вводился в желудок: в 3-х случаях
возросла частота сердечных сокращений (ЧСС) на 25 - 30 %, в 1-ом случае появилось
двигательное беспокойство, учащенное дыхание, лёгкий цианоз слизистых оболочек
и хвоста. Все эти явления самостоятельно исчезли в течение часа и были расценены
как реакция на переполнение желудка. Учитывая малую токсичность препарата, он
вводился в желудок в максимально допустимых объёмах по Сидорову К.К. (1972).
Весовые коэффициенты основных органов опытных животных не отличались от интактных. Осложнений, гибели животных не было. Показатели крови самок и самцов
существенно не отличались друг от друга, поэтому в таблицах представлены данные
самцов, полученные на 14 сутки после введения препарата. LD5o при однократном
введении определить не удалось из-за малой токсичности спрея "Морфей", поэтому
для изучения хронической токсичности за высшую дозу была принята максимально
допустимая для введения по объёму доза по К.К.Сидорову (1972) [1, 2, 3]. 2.5.2.
Хроническая токсичность
Результаты представлены в таблицах 13 - 19.
2.5.2.1. Влияние спрея на общее состояние животных
У крыс, получавших спрей в максимальной дозе в желудок, наблюдали
повышенную активность, повышение ЧСС на 24 + 0,54 % и учащение числа дыхательных движений на 14 + 3,24 %. У всех животных, получавших дистиллированную воду в максимальных дозах в желудок, с 12-15 дней введения отмечали кашицеобразный стул. Общее состояние животных не отличалось от такового у интактных и
получавших дистиллированную воду. Крысы и мыши были подвижны, охотно поедали корм, шерсть у них была блестящей и гладкой.. Прирост массы тела был обычным и не отличался от прироста интактных особей. При накожном нанесении препарата визуально никаких изменений выявлено не было. 2.5.2.2. Влияние спрея на
кроветворение
При изучении хронической токсичности была выявлена стимуляция
эритропоэза, причём увеличение числа эритроцитов произошло на 10-31% при недостоверном снижении числа ретикулоцитов. Одновременно произошло незначительное
увеличение резистентности эритроцитов (до 9,2%) и гематокрита (до 9% ). Стимуляция лейкоцитарного ростка была менее выражена и составила от 7 до 22%, в то же
время существенных изменений в лейкоцитарной формуле не произошло. Отмечена
тенденция к снижению числа эозинофилов и повышению количества лимфоцитов.
14
Таблица 6
Показатели периферической крови мышей-самцов при определении
острой токсичности спрея "Морфей"
№№
груп
пы
1
Применяемое воздействие
Метод введения, доза, г
5
6,9
±0,35
6,7*
±0,28
7,2*
±0,34
В желудок 1,0
8,3*
±0,41
7,2*
±0,34
1,8
±0,02
2,5*
±0,12
69,2*
±3,87
Тоже
Внутрибрюшинно 1,0
8,2*
±0,36
7,1*
±0,42
1,9
±0,04
2,6*
±0,13
69,5*
±3,36
Тоже
Накожно 0,5
8,3*
±0,31
7,2*
±0,28
1,8
±0,03
2,5*
±0,11
68,9*
±3,26
Дистил.вода
(контроль)
Тоже
В желудок 1,0
4.
Спрей
"Морфей"
5.
6.
3.
Лейкоцитарная формула,
%
4
8,1
±0,58
8,0*
±0,62
7,9*
±0,58
3
Нет
2.
Лейко
циты,
109/л
Эозинофилы
6
1,9
±0,02
1,8
±0,03
1,0*
±0,04
2
Интактные
1.
Эритроциты
1012/л
Внутрибрюшинно 1,0
Моноциты
7
2,6
+0,18
2,7*
±0,21
2,8*
±0,18
Лимфоциты
8
68,7
±4,28
69,1*
±3,92
70,8*
±4,83
Примечание: недостоверные величины при р >0,05 отмечены звездочкой *.
Сравнение проведено с интактными животными.
2.5.2.3. Влияние спрея на функцию печени и почек.
При всех способах введения спрея у животных не произошло существенных изменений биохимических показателей крови, хотя необходимо отметить
тенденцию к повышению содержания белка крови и калия, снижению холестерина,
мочевины, глюкозы и натрия. Количество мочи, выделяемой животными, получавшими спрей "Морфей", не отличалось от интактных. Изменений со стороны остальных органов и систем не отмечено. Весовые коэффициенты органов у всех животных
были сохранены и не отличались от таковых у интактных животных.
15
№№
груп
пы
1
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Таблица 7
Биохимические показатели крови мышей- самцов при определении
острой токсичности спрея "Морфей"
Применя- Метод вве- Общий
Глюкоза Мочеви- Холесте
ЩелочНатрий
Калий
емое воз- дения доза, г белок,
ммоль/л на сыво- рин
ная фос- ммоль/л ммоль/л
действие
г/л
ротки ммоль/л
фатаза
ммоль/л
ед/л
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Интактная
Нет
14,8
8,8
54,2
7,69
153,6
3,2
96,6
±0,72
±0,43
±4,32
±0,21
±4,88
±0,18
±6,84
8,9*
150,4*
Дистил.
53,8*
14,9*
3,4*
7,68*
98,9*
В желудок,
±0,32
±3,72
вода
±3,36
±0,65
±0,11
±0,19
±5,46
1,0
(контроль)
Тоже
101,3*
Внутрибрю
15,1*
149,3*
54,6*
9,0*
3,3*
7,67*
±7,22
шинно, 1,0
±0,58
±5,49
±2,98
±0,48
±0,09
±0,21
14,2*
Спрей
54,6*
8,8*
94,7*
В желудок,
3,2*
7,69*
152,1*
±0,64
"Морфей"
±4,16
±0,19
±5,13
1,0
±0,18
±0,42
±8,13
Тоже
8,9*
96,2*
Внутрибрю
53,9*
14,3*
3,1*
7,72*
152,4*
±0,24
±6,24
шинно, 1,0
±3,16
±0,83
±0,14
±0,35
±6,29
Тоже
54,9*
14,2
94,9*
7,73*
Накожно,
3,2*
8,9*
150,4*
±3,25
±0,52
±6,85
±0,49
0,5
±0,15
±0,34
±5,64
Примечание, недостоверные величины при р >0,05 отмечены звездочкой
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
16
№№
груп
пы
Применяемое
воздействие
1
1.
2
Интактные
2.
Дистил.вода
(контроль)
Тоже
3.
5.
Спрей
"Морфей"
Тоже
6.
То же
4.
Таблица 8
Показатели периферической крови крыс-самцов при определении
острой токсичности спрея "Морфей"
ТромбоМетод вве-Эритро
Лейко- Лейкоцитарная формула, %
циты,
дения, доза, циты
циты,
12
10%
г
10 /л
109/л
Эози
МоноЛимфоноциты
циты
филы
3
4
5
6
7
8
9
Нет
516,8
12,8
70,3
3,2
1,8
8,2
±21,27
±0,74
+4,35
±0,18
+0,12
±0,31
В желудок
8,1*
518,2*
12,6*
3,1*
1,9*
69,4*
2,5
±0,34
±18,43
±0,62
±0,11
+0,11
±5,18
1,9
Внутрибрю
7,9*
532,0*
13,4*
3,4*
67,3*
+0,09
шинно 3,0
±0,28
±16,35
±0,80
±,09
±4,82
В желудок
71,2*
8,3*
518,2*
13,9*
2,0*
3,3*
2,5
±5,58
±0,38
±17,14
±0,67
+0,07
±0,13
2Д
14,2*
Внутрибрю
3,2*
8,3*
518,5*
71,9*
+0,16
±0,71
шинно 3,0
±21
±0,32
±19,49
±6,31
1,8*
Накожно
3,2*
8,4*
519,1*
13,6*
70,7*
+0,11
1,0
±0,12
±0,46
±19,58
±0,45
±4,89
Примечание: недостоверные величины при р>0,05 отмечены звездочкой *.
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
17
Таблица 9
Биохимические показатели крови крыс - самцов при определении
острой токсичности спрея "Морфей"
№№
груп
пы
Применяв
мое воздействие
1
1.
2
Интактная
3
Нет
2.
Дистил.
вода
(контроль)
Тоже
В желудок
2,5
4
72,6
±2,84
71,4*
±3,17
Внутрибрю
шинно 3,0
В желудок
2,5
Внутрибрю
шинно 3,0
Накожно
1,0
70,8*
±3,26
72,9*
±4,12
72,8*
±2,78
74,9*
±3,18
3.
5.
Спрей
"Морфей"
Тоже
6.
Тоже
4.
Метод вве- Общий
дения, доза, белок
г
г/л
Глюко Мочевина Холеза
сыворотки стерин
ммоль ммоль/л ммоль/
/л
л
5
6
7
1,7
6,2
8,3
±0,11
±0,26
±0,19
1,8*
8,4*
6,4*
±0,14
±0,17
±0,34
6,6*
±0,29
6,1*
±0,26
6,3*
±0,41
6,1*
±0,28
8,6*
±0,21
8,2*
±0,38
8,1*
±0,29
8,0*
±0,31
1,9*
±0,12
1,6*
±0,11
1,7*
±0,13
1,6*
±0,09
Примечание: недостоверные величины при р>0,05 отмечены звездочкой *.
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
Щелоч
ная
фосфата
заед/л
8
382,6
±16,52
376,4*
±29,44
372,3*
±23,56
384,1*
±19,85
383,5*
±21,49
383,2*
±18,12
Калий Натрий Желчные
ммоль ммоль/ л кислоты
/л
плазмы
ммоль/л
9
10
11
151,6
73,6
5,19
±4,86
±1,82
±0,21
5,21*
149,2*
73,4*
±0,16
±6,31
±2,64
5,24
±0,23
5,20*
±0,24
5,19*
±0,21
5,24*
±0,31
146,8*
±7,28
149,8*
±6,72
149,9*
±6,89
147,6*
±7,43
73,2*
±3,42
74,2*
±2,51
73,3*
±4,60
72,7*
±4,76
18
Таблица 10
Показатели периферической крови мышей-самцов при определении
хронической токсичности спрея "Морфей"
№№
груп
пы
Применяемое воздействие
Метод
введения,
доза, г
Эритроциты
1012/л
Лейкоциты,
109/л
Лейкоцитарная формула, %
Эозино
филы
Моноциты
Лимфоциты
1
2
3
4
5
6
7
8
1.
Интактные
Нет
8Д
±0,58
6,9
±0,35
1,9
±0,02
2,6
±0,18
68,7
±4,26
2.
Дистил.вода
(контроль)
Спрей
"Морфей"
Тоже
В желудок 0,5
В желудок 0,1
В желудок 0,25
В желудок 0,5
Накожно
0,5
7,9*
±0,36
8,4*
±0,32
8,3*
±0,29
8,8*
±0,41
9,2*
±0,44
6,7*
±0,29
7,6*
±0,26
7,4*
±0,25
7,8*
±0,34
7,8*
±0,27
2,4
±0,01
1,9
±0,02
1,8
±0,02
2,0
±0,02
1,7
±0,03
2,9*
±0,12
2,7*
±0,12
2,9*
61,8*
69,2*
±3,64
70,9*
±0,14
±4,92
2,6*
±0,13
2,5*
±0,12
71,8*
+4,39
72,6*
±5,21
3.
4.
5.
Тоже
6.
Тоже
±3,82
Примечание: недостоверные величины при р >0,05 отмечены звездочкой *
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
19
Таблица 11
Биохимические показатели крови мышей- самцов при
определении хронической токсичности спрея "Морфей"
№№
груп
пы
1
1.
Применяемое воздействие
2
Интактная
Метод введения, доза,
г
3
Нет
Общий
Глюкоза
Мочевина
Холестебелок
ммоль/л
сыворотки
рин
г/л
ммоль/л
ммоль/л
4
5
6
7
54,2
14,8
3,2
8,8
±4,32
±0,72
±0,18
±0,43
2.
Дистил.вода В желудок
52,6*
9,2*
15,6*
3,0*
(контроль)
±6,18
0,5
±0,39
±0,68
±0,19
3.
В желудок
Спрей
8,8*
3,2*
54,7*
14,7*
од
"Морфей"
±0,46
±0,14
±4,62
±0,71
4.
Тоже
3,1*
14,6*
В желудок
54,9*
8,9*
±0,12
±0,69
0,25
±4,31
±0,38
5.
Тоже
9,0*
В желудок
55,2*
14,2*
3,0*
±0,47
0,5
±4,28
±0,54
±0,13
6.
Тоже
Накожно
3,0*
14,0*
55,3*
8,9*
0,5
±0,11
±0,60
±3,21
±0,44
Примечание, недостоверные величины при р >0,05 отмечены звездочкой *.
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
Щелочная
фосфатаза
ед/л
8
96,6
±6,84
98,4*
±6,24
96,4*
±8,32
96,7*
±8,28
97,1*
±6,47
97,4*
±6,11
Калий
ммоль/л
Натрий
ммоль/л
9
7,69
±0,21
7,41*
±0,34
7,71*
±0,45
7,75*
±0,32
7,76*
±0,49
7,77*
±0,38
10
153,6
±4,88
162,4*
±8,26
152,0*
±8,75
151,6*
±7,36
150,9*
±6,33
150,4*
±7,94
20
Таблица 12
Показатели периферической крови крыс- самцов при
определении хронической токсичности спрея "Морфей"
№№
группы
Применяемое воздействие
Метод
введения,
доза, г
Лейкоциты,
109/л
Лейкоцитарная
формула, %
В желудок 3,0
4
8,2
±0,31
7,4
±0,26
7
12,8
±0,74
11,1
±0,52
Эозинофилы
8
3,2
±0,18
3,8
±0,11
В желудок 0,5
В желудок 1,5
В желудок 3,0
Накожно
1,0
8,8*
±0,42
8,9*
±0,41
9,0*
±0,51
9,2
±0,45
13,0*
±0,65
13,2*
±0,70
13,4*
±0,49
14,3
±0,51
3,1*
±0,15
3,4*
±0,16
3,3*
±0,12
3,1*
±0,12
1
7.
2
Интактные
3
Нет
8.
4.
Дистил.вода
(контроль)
Спрей
"Морфей"
Тоже
5.
Тоже
6.
Тоже
9.
Эритроциты
1012/л
Полинуклеары
10
70,3
±4,35
64,5*
±0,12
71,9*
±5,24
72,6*
±6,72
73,0*
±5,51
72,4*
±4,63
Примечание, недостоверные величины при р>0,05 отмечены *.
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
2.5.3. Результаты изучения аллергизирующего действия спрея
2.5.3.1. Метод накожных аппликаций
У всех животных не было отмечено видимых изменений в области
воздействия: ноль баллов - «0».
Таким образом, опасность сенсибилизации спреем через неповреждённую кожу
мало вероятна.
2.5.3.2. Конъюнктивальная проба.
При оценке результатов конъюнктивальной пробы ни в одном случае не
было отмечено изменений склеры, конъюнктивы, слёзного протока. Вероятность
аллергизации спреем ничтожна.
2.5.3.3. Реакция общей анафилаксии.
Результаты эксперимента представлены в таблице 14.
21
Оценка анафилактического шока проведена в индексах по Weigle. У двух морских свинок развился анафилактический шок лёгкой степени. Двигательное беспокойство продолжалось не более 30 минут и прошло самостоятельно. К группе аллергенов относятся вещества, вызывающие анафилактический шок у 50 и более процентов сенсибилизированных животных. В данном эксперименте процент сенсибилизированных животных по группам не превышает 20. Следовательно, спрей "Морфей"
не является потенциальным аллергеном.
2.6. Местное действие спрея "Морфей"
Учитывая многочисленные экспериментальные исследования, выявлено, что
эфтидерм и спрей "Морфей" не оказывают местного раздражающего действия на кожу.
2.7. Кумулятивное действие спрея "Морфей"
Кумулятивные свойства вещества характеризуются коэффициентом кумуляции, который равен отношению LD5o при однократном введении к LD5o при кратном
введении. Учитывая невозможность определения LD5o спрея "Морфей" из-за его малой токсичности - за LD50 принят максимально вводимый объём. Таковым для спрея
является - 25 г/кг при пероральном приёме и 15 г/кг при накожном применении, как
Однократном , так и многократном.
Следовательно, индекс кумуляции при пероральном приёме равен
25 г/кг : 25 г/кг = 1
при накожном
15 г/кг : 15 г/кг =■ 1 , т.е. спрей "Морфей"
не обладает кумулятивной способностью.
2.8. Тератогенная и канцерогенная активность спрея "Морфей"
Тератогенная и канцерогенная активность у спрея "Морфей" не определялась,
т.к. все компоненты спрея таковыми свойствами не обладают, согласно ФС или ВФС
на каждый ингридиент.
22
Таблица 13
Биохимические показатели крови крыс - самцов при
определении хронической токсичности спрея "Морфей"
№№
группы
1
1.
2.
3.
Применяемое воздействие
2
Интактна
я
Дистил.
Вода
(контроль
)
Спрей
4.
"Морфей"
Тоже
5.
Тоже
6.
Тоже
Метод
введения
доза, г
3
Нет
Мочевина Холесте
сыворот ки рин
ммоль/л ммоль/л
6
7
1,7
8,3
±0,11
±0,19
1,8*
8,5*
±0,09
±0,24
Глюкоза
ммоль/л
В желудок 3,0
Общий
белок
г/л
4
72,6
±2,84
70,8*
±3,86
В желудок 0,5
73,1*
±5,91
6,2*
±0,35
8,2*
±0,28
1,6*
±0,04
В желудок 1,5
В желудок 3,0
Накожно
1,0
73,2*
±4,47
73,7*
±3,98
73,4*
±4,38
6,3*
±0,40
6,3*
±0,28
6,5*
±0,33
8,1*
±0,41
8,0*
±0,36
8,0*
±0,29
1,7*
±0,06
1,6*
±0,07
1,5
±0,14
5
6,2
±0,26
6,8
±0,18
Щелочная Калий
фосфатаза ммоль/
ед/л
л
8
9
5Д
382,6
±0,21
±6,52
396,4*
5,2*
±19,35
±0,26
Натрий
ммоль/
л
10
151,6
±4,86
156,4*
±9,45
381,4*
±22,72
5,1*
±0,19
149,1*
±8,21
72,9*
±2,51
379,9*
±19,25
380,5*
±20,16
379,4*
±16,91
5,2*
±0,20
5,3*
±0,22
5,3*
±0,24
150,6*
±7,69
149,4*
±8,41
147,9*
±7,76
72,4*
±3,25
72,1*
±3,84
72,0*
±3,67
Примечание, недостоверные величины при р >0,05 отмечены звездочкой *.
Сравнение проведено с интактными животными, п = 10.
Желчные
кислоты
ммоль/л
И
73,6
±1,82
75,4*
±2,16
23
Таблица 14
Распределение животных и оценка выраженности
анафилактического шока у морских свинок
№№
группы
№№
живота
ых
Предпола
гаемый
аллерген
Характеристика поведения животных
Оценка анафилактического шока
2
3
4
5
1.
2.
3.
Контроль
(дистилл.
вода)
Изменений в поведении не было.
0
0
0
2.
4.
5.
6.
Динитрохлорбензол
+++
+-Н+++
3.
7. 8.
9.
10.
11.
Спрей
"Морфей"
0, 1 г/кг
Двигательное беспокойство, непроизвольное мочеиспускание, дефекация, животное упало на бок, общие
судороги, явления асфиксии, почти
не реагирует на окружающее.
Изменений в поведении нет.
4.
12.
13.
16.
14.
15.
Спрей
"Морфей"
1,0 г/кг
Изменений в поведении нет.
Двигательное беспокойство, перебегает с места на место, почёсывает
мордочку.
00
0
+
+
1
1.
0
0
0
0
0
Резюме. Таким образом, спрей "Морфей" не является потенциальным аллергеном.
24
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Результаты исследований спрея "Морфей" показали, что он обладает:
1) выраженной транскутанной (чрезкожной) активностью,
2) цитопротекторным действием, повышает жизнеспособность клеток,
3) не обладает токсическим и аллергизирующим действием - относится к IV классу
веществ - "вещества мало опасные",
4) быстро выводится из организма, не кумулирует, не обладает выраженным
раздражающим действием, мутагенной и канцерогенной активностью,
5) повышает адаптивные возможности организма, снижает утомляемость, повышает
работоспособность, ускоряет репаративные процессы, благоприятно действует на
кроветворение и обменные процессы, снижает токсическое действие биологически
активных веществ [1, 2, 3, 9, 13, 17 ].
Биологически активный спрей "Морфей" может быть рекомендован для приёма
населением, особенно работающим или проживающим в экологически неблагополучных районах, а также работающих в условиях нервного напряжения (работники
дошкольных учреждений, учителя, врачи, работающие в сфере обслуживания и др.)
Он предназначен для повышения защитных сил организма, нормализации обмена
веществ и сна, в качестве профилактического и корригирующего средства заболеваний печени и желчевыводящих путей, гипертонической болезни, невротических состояний, снижения алкогольной и наркотической зависимости и т.д.
Ответственный исполнитель
Баранов Д.Н.
Директор, к.м.н.
Киллер С.Н.
Директор УНИИ ФиФ, д. м.
н. Член корр. АТН РФ,
профессор
Ларионов Л. П.
25
ЛИТЕРАТУРА
1. Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии. Ташкент. 1978, с.79-83.
2. Алексеева О.Г., Дуева Л.А. Аллергия к промышленным химическим соедине
ниям. М., Медицина, 1978, 272 с.
3. Алексеева О.Г., Петкевич А.И. К методике определения аллергенных свойств
химических веществ.//Гигиена и санитария, 1972, с. 64 - 67.
4. Бруякина Н.А., Винницкая Р.С., Эпштейн И.М. Константа скорости потребле
ния кислорода в коже при гипоксических состоянияхУ/Патологич. физиол. и
экспер. терапия, 1972, № 1, с. 58 - 61.
5. ВФС - 42 - 2287 - 93 и изменения № 1 к ВФС 42 - 2287 - 93.
6. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непарометрических критериев статисти
ки в медико-биологических исследованиях. М.: Медицина, 1973,141с.
7. Государственная Фармакопея СССР, М.: Медицина, X, XI выпуск.
8. Западнюк И.П.,Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.В. Лабораторные жи
вотные. Киев.: Вища школа, 1983, 384 с.
9. Измеров Н.Ф., Саноцкий М.В., Сидоров Н.К. Параметры токсичности промыш
ленных ядов при однократном воздействии. М.: Медицина, 1977,197с.
10. Методические рекомендации по внедрению диагностических и лечебнопрофилактических мероприятий на предприятиях отрасли в цехах металлурги
ческого производства. М.: 1986, с. 14.
11. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изуче
нию нестероидных противовоспалительных веществ. Издание официальное. М.:
1983.
12. Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологиче
ских средств. М.: Медицина, 1988,19 с.
13. Методические рекомендации по оценке иммуннотоксических свойств фармако
логических средств. М.: МГТУ, 1992, 39 с.
14. Привалова Л.И. О связи показателей жизнеспособности различных клеток сис
темы фагоцитирующих (макрофагов) мононуклеаров при воздействии кварце
вых частиц.//В сб.: Проф. болезни пылевой этиологии, 1984, с. 40-45.
15. Рабен А.С., Алексеева О.Г., Дуева Л.А. Экспериментальный аллергодерматит.
М.: Медицина, 1970,192 с.
16. Стрижкова Л.П. Кооперативная клеточная реакция в очаге асептического вос
паления, полученного методом "кожного окна" у здоровых людей. //В сб.: Фи
зиология и патология соединительной ткани, Новосибирск, 1980, с. 21 - 22.
17. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых
фармакологических веществ. М.: 1985,с. 18.
18. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследова
ниях. М.: Медицина, 1975, 290 с.
19. ФС 42-3372-97.